CN106198681B - 一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法。搭建检测装置,装置包括盛有清洗溶液的溶液箱和盛有被测生乳样品的溶液箱;控制第一微量泵间隔滴下清洗溶液,再控制第二微量泵间隔滴下已知氧氟沙星含量的生乳样本溶液,接着通过电化学工作站检测到电极芯片的电流密度信号,间隔采样获得采样值排列构成检测信号;输入到非线性双稳模型中,处理获得第一、第二模型参数计算获得模型相关系数,构建出谱图并选取谱图特征峰,线性拟合得到氧氟沙星定量检测模型;重复步骤获得被测溶液的检测信号输入到模型中获得含量。本发明在丝网印刷碳电极上修饰氧氟沙星特异性敏感物质,实现了氧氟沙星的定性和定量检测,克服了现有生乳中所含抗生素无法全定量测量的问题。
Description
技术领域
本发明涉及了一种抗生素检测装置,尤其是涉及了生乳中抗生素测量技术领域的一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测装置。
背景技术
电化学检测技术已广泛用于食品安全品质检测,有研究表明,该技术可用于生乳中污染物的检测。然而,受仪器条件以及传感器电极特异性和灵敏度等条件的影响,电化学检测技术在生乳污染物检测的应用未能得到发展。目前,在实际检测中,现有技术有采用非特异性传感器或者半定量式传感器的方法,很难能得到较为理想的结果,检测效率较低,不利于实际应用;虽然如电极表面特异性修饰等方法有利于增强检测信号,减小检测误差,然而这些方法仅仅考虑了电极表面修饰物对检测结果的影响,不能有效实现全定量检测的目标,所测得的实验结果并不能真实反映生乳中抗生素类污染物的定性定量信息。
发明内容
为了解决背景技术中存在的问题,本发明的目的在于提供了一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法。
本发明采用的技术方案:
方法包括以下步骤:搭建检测装置,装置包括电化学工作站、流通池、盛有清洗溶液的第一溶液箱和盛有被测生乳前处理样品的第二溶液箱,流通池内置有基板,基板上设有电极芯片,第一溶液箱、第二溶液箱分别经第一微量泵、第二微量泵与流通池相连,第一微量泵和第二微量泵分别位于流通池上表面两侧,第一溶液箱与第一微量泵之间以及第二溶液箱和第二微量泵之间均通过塑胶导液管相连,第一微量泵和第二微量泵出口连接导液管;电极芯片包括与电化学工作站连接的对电极、参比电极和工作电极,工作电极上修饰有氧氟沙星特异性敏感物质,第一溶液箱和第二溶液箱的外底面均设有带加热器的磁力搅拌器和温度传感器,带加热器的磁力搅拌器和导液管均位于工作电极的正上方,流通池下部设有出液口,电化学工作站、第一微量泵、第二微量泵、磁力搅拌器和温度传感器均与计算机电连接;
电化学工作站包括放大器、滤波器、电流检测器和信号调理电路,参比电极和工作电极连接到放大器,放大器经滤波器与电流检测器连接,电流检测器连接到计算机,对电极和工作电机经信号调理电路连接到计算机;
然后:
1)温度传感器检测两个溶液箱的温度,并设置有标准温度区间[TL,TH],当两个溶液箱的温度均≥TH时控制磁力搅拌器停止工作;当两个溶液箱的温度均≤TL时磁力搅拌器开始工作;
2)先控制第一微量泵以每间隔时间T1滴下0.05ml的清洗溶液,第一微量泵滴液5至15分钟后停止滴液;
3)接着控制第二微量泵以每间隔时间T2滴下0.05ml的已知氧氟沙星含量的生乳前处理样本溶液,第二微量泵滴液5至15分钟后,通过电化学工作站检测到电极芯片的电流密度信号S(t),在电流密度信号S(t)中以时间间隔为Δt进行间隔采样获得各个采样值,各个采样值按照时间先后顺序排列构成检测信号ES(t);
4)将样本溶液的检测信号ES(t)输入到非线性双稳模型中,通过非线性双稳模型处理获得第一模型参数a和第二模型参数b,再代入以下公式计算获得模型相关系数COE,用以表征生乳前处理样品中氧氟沙星的含量:
其中,COE表示模型相关系数,ΔU为诱发参数变化值,D表示诱发参数强度,a和b分别表示第一、第二模型参数;
5)构建出激励噪声信号的模型相关系数COE谱图,选取谱图特征峰的模型相关系数COE峰值,通过origin软件工具进行线性拟合得到氧氟沙星定量检测模型;
6)将生乳前处理被测溶液重复上述步骤1~3)获得被测溶液的检测信号ES(t),输入到氧氟沙星定量检测模型中,获得生乳前处理被测溶液中的氧氟沙星含量。
所述的清洗溶液采用去离子水。
所述电极芯片作为传感器的输出信号经前置放大器放大滤波后,进一步可通过锁相放大器的再次放大、低通滤波和相敏检测后,最后由电流检测器采集获得电流密度信号。
所述通过非线性双稳模型处理获得第一、第二模型系数具体采用以下过程:
所述的非线性双稳模型用布朗粒子描述,其动力学方程用以下公式表示的Langevin方程表示:
dx/dt=-U′(x)+ES(t)+Γ(t) (2)
式中,ES(t)为检测信号,U’(x)表示布朗粒子x轴运动的非线性势函数的一阶导数,Г(t)是诱发参数强度D的高斯白噪声,t表示时间,x表示非线性双稳模型中布朗粒子x轴的运动位置。
所述布朗粒子x轴运动的非线性势函数的一阶导数U’(x)表示通过求导布朗粒子x轴运动的非线性势函数U(x)求导获得,布朗粒子x轴运动的非线性势函数U(x)采用以下公式计算:
式中,μ为系统参数,x表示非线性双稳模型中布朗粒子x轴的运动位置。
作为优选,所述的氧氟沙星特异性敏感物质主要是在电极的碳材料表面形成一层对氧氟沙星分子敏感薄膜,作为氧氟沙星的选择性检测电极。
所述的温度控制传感器,其检测准确率至少为99%。
本发明具有的有益效果是:
本发明在丝网印刷碳电极上修饰氧氟沙星特异性敏感物质,实现了氧氟沙星的定性和定量检测。
本发明方法采用分子特异识别型传感器和电化学阻抗技术,通过采集电化学阻抗谱检测数据,克服背景技术中生乳所含抗生素无法全定量测量的问题。
附图说明
图1是本发明装置的结构示意图。
图2是本发明实施例样本溶液采用常规的归一化预处理获得电化学阻抗谱数据图。
图3是本发明实施例结果的氧氟沙星浓度和信噪比极大值之间的线性拟合曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
本发明的实施例如下:
搭建检测装置,装置包括电化学工作站、流通池、盛有清洗溶液的第一溶液箱和盛有被测牛奶样品的第二溶液箱,流通池内置有基板,基板上设有电极芯片,第一溶液箱、第二溶液箱分别经第一微量泵、第二微量泵与流通池相连,第一微量泵和第二微量泵分别位于流通池上表面两侧,第一溶液箱与第一微量泵之间以及第二溶液箱和第二微量泵之间均通过塑胶导液管相连,第一微量泵和第二微量泵出口连接导液管。
电极芯片包括与电化学工作站连接的对电极、参比电极和工作电极,工作电极上修饰有氧氟沙星特异性敏感物质,氧氟沙星特异性敏感物质主要是在电极的碳材料表面形成一层对氧氟沙星分子敏感薄膜,作为氧氟沙星的选择性检测电极。
第一溶液箱和第二溶液箱的外底面均设有带加热器的磁力搅拌器和温度传感器,带加热器的磁力搅拌器和导液管均位于工作电极的正上方,流通池下部设有出液口,电化学工作站、第一微量泵、第二微量泵、磁力搅拌器和温度传感器均与计算机电连接;电化学工作站包括放大器、滤波器、电流检测器和信号调理电路,参比电极和工作电极连接到放大器,放大器经滤波器与电流检测器连接,电流检测器连接到计算机,对电极和工作电机经信号调理电路连接到计算机。
1)温度传感器检测两个溶液箱的温度,并设置有标准温度区间[TL,TH],当两个溶液箱的温度均≥TH时控制磁力搅拌器停止工作;当两个溶液箱的温度均≤TL时磁力搅拌器开始工作;
2)先控制第一微量泵以每间隔时间T1滴下0.05ml的去离子水,第一微量泵滴液10分钟后停止滴液;
3)接着控制第二微量泵以每间隔时间T2滴下0.05ml的已知氧氟沙星含量的被测牛奶样本溶液,第二微量泵滴液10分钟后,将电极芯片作为传感器的输出信号依次经前置放大器、锁相放大器的再次放大、低通滤波和相敏检测后由电流检测器采集获得电流密度信号S(t),在电流密度信号S(t)中以时间间隔为Δt进行间隔采样获得各个采样值,各个采样值按照时间先后顺序排列构成检测信号ES(t);
已知氧氟沙星含量的被测牛奶样本溶液采用以下不同浓度的10组溶液:
表1被测牛奶样本溶液浓度
对于不同浓度的10组被测牛奶样本溶液,采用归一化的预处理,获得电化学阻抗谱数据如图2所示,电化学阻抗谱数据随着检测时间的增加而减小。氧氟沙星浓度并不能直接从电化学阻抗谱数据上进行判断,其原因是电化学检测特征性信号被噪声所湮灭,因此难以实现氧氟沙星定量检测的目标。
4)将样本溶液的检测信号ES(t)输入到非线性双稳模型中,所述的非线性双稳模型用布朗粒子描述,用以下公式2表示。初始设定第一模型参数a和第二模型参数b分别为a=9,b=2,调节强度D,诱发非线性双稳模型产生共振,在共振状态下获得的第一模型参数a和第二模型参数b再代入公式(1)计算获得模型相关系数COE,用以表征牛奶样品中氧氟沙星的含量。
本发明的非线性双稳模型具有两个势阱和一个势垒,势阱底部位于处,势垒位于x=0处,势垒高度ΔU=μ2/4,At为系统维持双稳态的阈值,
当电流密度信号S(t)>At时,输出将在与两个势阱之间周期变化,当电流密度信号S(t)<At时,系统输出将在单一势阱的±20%范围内变化,此时若系统在信号和噪声共同作用下,输出可能越过势垒在两势阱间周期变化,这一现象称为随机共振。
双稳系统与信号,噪声共同作用产生随机共振是有条件的,根据克莱默斯逃逸率理论,系统中的布朗粒子在两个势阱间跃迁的速率RK如以下公式4所示:
只有输入信号频率f小于RK时,粒子的跃迁速率才能够跟上信号频率产生共振,D表示诱发参数强度。
在频率一定的条件下,良好的共振状态还需要电流密度信号S(t)与系统阈值At之间满足一定匹配关系,根据输出共振状态不同可以分为欠共振,过共振及共振。
当电流密度信号S(t)>At时,输出能够直接在势阱间变化,但噪声也直接作用到输出端,易造成过共振。当电流密度信号S(t)<<At时,由于信号能量弱,输出无法越过势垒造成欠共振,两种情况都不能有效地检测到信号频率,只有信号幅值A<At,同时与At相差不大的情况下,信号、噪声及双稳系统才能更好地产生协同作用,产生随机共振。
5)构建出激励噪声信号的模型相关系数COE谱图,选取谱图特征峰的模型相关系数COE峰值,通过origin软件工具进行线性拟合得到氧氟沙星定量检测模型;
6)将生乳前处理被测溶液重复上述步骤1~3)获得被测溶液的检测信号ES(t),输入到氧氟沙星定量检测模型中,获得生乳前处理被测溶液中的氧氟沙星含量。
采用本发明电化学测量阻抗谱数据的随机共振信噪比谱如图3所示,图中可见随着激励噪声强度的增加,信噪比谱首先下降,然后出现一个快速的上升过程,在噪声强度208处达到极大值,之后信噪比谱逐渐下降。观察到包含不同浓度氧氟沙星物质的奶样品的信噪比极大值也是不同的。
因此,信噪比极大值可用用来表征氧氟沙星的浓度。图3所示为氧氟沙星浓度和信噪比极大值之间的线性拟合曲线。随着氧氟沙星浓度的增加,信噪比极大值同步的增加,线性拟合模型为其相关系数为R=0.99013,表明两类参量相关性较好。采用本发明的模型,测量得到奶样品的阻抗谱检测数据,然后氧氟沙星浓度即可被确定。
Claims (6)
1.一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法,包括以下步骤:
先搭建检测装置:装置包括电化学工作站、流通池、盛有清洗溶液的第一溶液箱和盛有被测生乳前处理样品的第二溶液箱,流通池内置有基板,基板上设有电极芯片,第一溶液箱、第二溶液箱分别经第一微量泵、第二微量泵与流通池相连,第一微量泵和第二微量泵分别位于流通池上表面两侧,第一溶液箱与第一微量泵之间以及第二溶液箱和第二微量泵之间均通过塑胶导液管相连,第一微量泵和第二微量泵出口连接导液管;电极芯片包括与电化学工作站连接的对电极、参比电极和工作电极,工作电极上修饰有氧氟沙星特异性敏感物质,第一溶液箱和第二溶液箱的外底面均设有带加热器的磁力搅拌器和温度传感器,带加热器的磁力搅拌器和导液管均位于工作电极的正上方,流通池下部设有出液口,电化学工作站、第一微量泵、第二微量泵、磁力搅拌器和温度传感器均与计算机电连接;电化学工作站包括放大器、滤波器、电流检测器和信号调理电路,参比电极和工作电极连接到放大器,放大器经滤波器与电流检测器连接,电流检测器连接到计算机,对电极和工作电极经信号调理电路连接到计算机;
然后:
1)温度传感器检测两个溶液箱的温度,并设置有标准温度区间[TL,TH],当两个溶液箱的温度均≥TH时控制磁力搅拌器停止工作;当两个溶液箱的温度均≤TL时磁力搅拌器开始工作;
2)先控制第一微量泵以每间隔时间T1滴下0.05ml的清洗溶液,第一微量泵滴液5至15分钟后停止滴液;
3)接着控制第二微量泵以每间隔时间T2滴下0.05ml的已知氧氟沙星含量的生乳前处理样本溶液,第二微量泵滴液5至15分钟后,通过电化学工作站检测到电极芯片的电流密度信号S(t),在电流密度信号S(t)中以时间间隔为Δt进行间隔采样获得各个采样值,各个采样值按照时间先后顺序排列构成检测信号ES(t);
4)将样本溶液的检测信号ES(t)输入到非线性双稳模型中,通过非线性双稳模型处理获得第一模型参数a和第二模型参数b,再代入以下公式计算获得模型相关系数COE,用以表征生乳前处理样品中氧氟沙星的含量:
其中,COE表示模型相关系数,ΔU为诱发参数变化值,D表示诱发参数强度,a和b分别表示第一、第二模型参数;
5)构建出激励噪声信号的模型相关系数COE谱图,选取谱图特征峰的模型相关系数COE峰值,进行线性拟合得到氧氟沙星定量检测模型;
6)将生乳前处理被测溶液重复上述步骤1~3)获得被测溶液的检测信号ES(t),输入到氧氟沙星定量检测模型中,获得生乳前处理被测溶液中的氧氟沙星含量。
2.根据权利要求1所述的一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法,其特征在于:所述的清洗溶液采用去离子水。
3.根据权利要求1所述的一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法,其特征在于:所述电极芯片作为传感器的输出信号经前置放大器放大滤波后,进一步可通过锁相放大器的再次放大、低通滤波和相敏检测后,最后由电流检测器采集获得电流密度信号。
4.根据权利要求1所述的一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法,其特征在于:所述通过非线性双稳模型处理获得第一、第二模型系数具体采用以下过程:
所述的非线性双稳模型用布朗粒子描述,其动力学方程用以下公式表示的Langevin方程表示:
dx/dt=-U′(x)+ES(t)+G(t) (2)
式中,ES(t)为检测信号,U′(x)表示布朗粒子x轴运动的非线性势函数的一阶导数,Г(t)是诱发参数强度D的高斯白噪声,t表示时间,x表示非线性双稳模型中布朗粒子x轴的运动位置。
5.根据权利要求4所述的一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法,其特征在于:所述布朗粒子x轴运动的非线性势函数的一阶导数U′(x)表示通过求导布朗粒子x轴运动的非线性势函数U(x)求导获得,布朗粒子x轴运动的非线性势函数U(x)采用以下公式计算:
式中,μ为系统参数,x表示非线性双稳模型中布朗粒子x轴的运动位置。
6.根据权利要求1所述的一种基于分子特异性识别的生乳中氧氟沙星快速检测方法,其特征在于:作为优选,所述的氧氟沙星特异性敏感物质主要是在电极的碳材料表面形成一层对氧氟沙星分子敏感薄膜,作为氧氟沙星的选择性检测电极。
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Patent Citations (4)
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Title |
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Gautam Bacher 等.A label-free silver wire based impedimetric immunosensor for detection of aflatoxin M1 in milk.《SENSORS AND ACTUATORS B-CHEMICAL》.2012,第168卷 * |
自适应随机共振技术在微弱信号测量中的应用;赵文礼 等;《仪器仪表学报》;20071015;第28卷(第10期);全文 * |
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