CN106167531A - 一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，采用加入α‑L‑鼠李糖苷酶酶制剂与桂圆和水混合进行酶解，并进行水提和过滤，将上清液进行旋转蒸发浓缩及醇沉之后得到桂圆多糖。本发明的技术效果是：加入α‑L‑鼠李糖苷酶酶制剂可以提高桂圆多糖的提取率，可使加酶处理的提取率与不加酶处理的提取率相比提高至24.66%；与其他方法相比，酶法辅助提取多糖条件温和，操作方便，经济节约，效果明显，为桂圆多糖的商品化应用提供了基础。

Description

一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法

技术领域

本发明涉及生物制剂的技术领域，尤其涉及一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法。

背景技术

桂圆，又称龙眼，主要分布于东南亚地区，桂圆营养价值高，富含糖类、蛋白质、维生素、氨基酸等人体所需的营养元素，性温味甘，益心脾，补气血，可用于治疗心血不足、体虚力弱等，是一种药膳两用的原料；合理食用桂圆也可以预防疾病，起到食疗同步的效果。有研究表明桂圆果肉的多糖类物质可能是桂圆一种重要的生物活性成分，具有清除自由基和抗氧化的能力等。目前香菇多糖、木耳多糖等多种多糖的生物活性均已被报道，但桂圆多糖的活性研究较少，其多糖提取率在一定程度上制约了对桂圆多糖活性研究和应用。

多糖是一类天然高分子化合物，它是醛糖或酮糖通过甙键连接在一起的多聚物，与生物体维持自身机能有密切的联系，因而具有丰富的生物活性。多糖的提取方法有水提法、酸碱提法、微波提取、超声提取、生物酶法等；与其他方法相比，酶法辅助提取多糖具有条件温和，操作方便，经济节约等优点，因此其在工业中的应用越来越广泛。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法。

发明内容

本发明涉及一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，即通过α-L-鼠李糖苷酶辅助提取桂圆多糖。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：

一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，包括以下步骤：

步骤一、酶液发酵：将含有α-L-鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD ₆₀₀为2.0-3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液；

步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα-L-鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α-L-鼠李糖苷酶酶制剂；

步骤三、酶处理：将桂圆浸泡于2-5倍水中，再添加0.5%-2%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C-60°C中温浴0.5 h-1.5 h；

步骤四、水提：将步骤三得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为桂圆质量的1-8倍，水提时间为0.5 h-2.5 h；第二次加水量为桂圆质量的1-5倍，水提时间为0.5 h-1.5 h；

步骤五、浓缩及醇沉：将步骤四得到的桂圆多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到桂圆多糖。

优选地，步骤三中，水与桂圆的质量比为2：1。

优选地，步骤三中，酶制剂的添加量为1%。

优选地，步骤三中，酶解温度为50°C，酶解时间为1.5 h。

优选地，步骤四中，水提两次，第一次加水量为桂圆质量的8倍，水提时间为0.5 h；第二次加水量为桂圆质量的5倍，水提时间为0.5 h。

本发明的技术效果是：加入α-L-鼠李糖苷酶酶制剂可以提高桂圆多糖的提取率，可使多糖的提取率与不加酶处理的最高提高24.66%；与其他方法相比，酶法辅助提取多糖条件温和，操作方便，经济节约，效果明显，为桂圆多糖的商品化应用提供一定的基础。

具体实施方式

本发明的实施例以酶法辅助提高桂圆多糖的提取率的方法说明本发明的工艺，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

步骤一、酶液发酵：将含有α-L-鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD ₆₀₀为2.0-3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液。所述YPD培养基、BMGY培养基及BMMY培养基均为培养酵母菌的常规培养基。

步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα-L-鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α-L-鼠李糖苷酶酶制剂。

实施例2：

步骤一、酶处理：将桂圆浸泡于2倍水中，再添加1%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C中温浴1.5 h；

步骤二、水提：将步骤一得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为桂圆质量的8倍，水提时间为0.5 h；第二次加水量为桂圆质量的5倍，水提时间为0.5 h；

步骤三、浓缩及醇沉：将步骤二得到的桂圆多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到桂圆多糖，多糖含量为2.78%。

步骤四、对照组：将桂圆浸泡于2倍水中并在50°C中温浴1.5 h，再进行同步骤二、步骤三的水提、浓缩及醇沉处理，得到桂圆多糖，测定多糖含量为2.23%。

可见，加酶处理的多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比提高24.66%。

实施例3：

步骤一、酶处理：将桂圆浸泡于4倍水中，再添加2%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在60°C中温浴0.5 h；

步骤二、水提：将步骤一得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为桂圆质量的5倍，水提时间为1 h；第二次加水量为桂圆质量的1倍，水提时间为1 h；

步骤三、浓缩及醇沉：将步骤二得到的桂圆多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到桂圆多糖，多糖含量为3.07%。

步骤四、对照组：将桂圆浸泡于4倍水中并在60°C中温浴0.5 h，再进行同步骤二、步骤三的水提、浓缩及醇沉处理，得到桂圆多糖，测定多糖含量为2.62%。

可见，加酶处理的多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比提高17.17%。

实施例4：

步骤一、酶处理：将桂圆浸泡于5倍水中，再添加0.5%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C中温浴1.5 h；

步骤二、水提：将步骤一得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为桂圆质量的1倍，水提时间为2.5 h；第二次加水量为桂圆质量的4倍，水提时间为1.5 h；

步骤三、浓缩及醇沉：将步骤二得到的桂圆多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到桂圆多糖，多糖含量为45.97%。

步骤四、对照组：将桂圆浸泡于5倍水中并在50°C中温浴1.5 h，再进行同步骤二、步骤三的水提、浓缩及醇沉处理，得到桂圆多糖，测定多糖含量为44.28%。

可见，加酶处理的多糖的提取率与不加酶处理的提取率相比提高3.82%。

本发明采用加入α-L-鼠李糖苷酶酶制剂提高桂圆多糖的提取率，可使多糖的提取率与不加酶处理的最高提高24.66%，且酶法提取条件温和，操作方便，经济节约，为桂圆多糖的广泛应用提供基础。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (5)

1.一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、酶液发酵：将含有α-L-鼠李糖苷酶基因的毕赤酵母GS115接种到YPD培养基中进行活化后，转入BMGY培养基中继续活化，收集OD ₆₀₀为2.0-3.0的菌体，并转入到BMMY培养基中，置于30°C诱导表达；每隔24 h加无菌甲醇诱导表达7天，离心收集酶液；

步骤二、酶制剂制备：设定喷雾压力为0.2 Mpa，进风温度为135°C，进风速度为4 m³/min，进料速率为800 ml/h，100 mLα-L-鼠李糖苷酶酶液加入15 g的麦芽糊精，进行喷雾干燥制备α-L-鼠李糖苷酶酶制剂；

步骤三、酶处理：将桂圆浸泡于2-5倍水中，再添加0.5%-2%的α-L-鼠李糖苷酶酶制剂，并在50°C-60°C中温浴0.5 h-1.5 h；

步骤四、水提：将步骤三得到的溶液进行两次水提，第一次加水量为桂圆质量的1-8倍，水提时间为0.5 h-2.5 h；第二次加水量为桂圆质量的1-5倍，水提时间为0.5 h-1.5 h；

步骤五、浓缩及醇沉：将步骤四得到的桂圆多糖水提液通过旋转蒸发浓缩，然后加入3倍浓缩液体积的无水乙醇，静置15 h，然后过滤得到不溶物，将不溶物干燥后即可得到桂圆多糖。

2.如权利要求1所述的一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，其特征在于所述步骤三中，水与桂圆的质量比为2：1。

3.如权利要求1所述的一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，其特征在于所述步骤三中，酶制剂的添加量为1%。

4.如权利要求1所述的一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，其特征在于所述步骤三中，酶解温度为50°C，酶解时间为1.5 h。

5.如权利要求1所述的一种酶法辅助提取桂圆多糖的方法，其特征在于所述步骤四中，水提两次，第一次加水量为桂圆质量的8倍，水提时间为0.5 h；第二次加水量为桂圆质量的5倍，水提时间为0.5 h。