CN106062271A - 用于改进具有木葡聚糖内糖基转移酶的纤维素纺织材料的性质的组合物和方法 - Google Patents

用于改进具有木葡聚糖内糖基转移酶的纤维素纺织材料的性质的组合物和方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于改性纤维素纺织材料的方法，这些方法包括用包括如下的组合物处理纤维素纺织材料：一种木葡聚糖内糖基转移酶和(a)一种聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；该方法在导致改性纤维素纺织材料的条件下进行，其中与未改性纤维素纺织材料相比，该改性纤维素纺织材料具有纺织品改进。本发明还涉及具有纺织品改进的改性纤维素纺织材料。

Description

用于改进具有木葡聚糖内糖基转移酶的纤维素纺织材料的性 质的组合物和方法
序列表的引用
本申请包括计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。
发明背景
发明领域
本发明涉及用于改进具有木葡聚糖内糖基转移酶的纤维素纺织材料的性质的组合物和方法。
相关技术描述
木葡聚糖内糖基转移酶(XET)是一种催化木葡聚糖(植物细胞壁的结构多糖)的内切-转糖基作用的酶。该酶存在于大多数植物中，并且具体地是陆生植物。已经从双子叶植物和单子叶植物中提取出XET。
木葡聚糖存在于棉布、纸、或木纤维中(哈亚西(Hayashi)，等人，1988，碳水化合物研究(Carbohydrate Research)181:273-277)使得牢固氢键合到纤维素(卡皮塔(Carpita)和吉比特(Gibeaut)，1993，植物杂志(The Plant Journal)3:1-30)。向包含木葡聚糖的各种纤维素材料添加木葡聚糖内糖基转移酶改变了在纤维素纤维之间的木葡聚糖介导的相互连接，改进纤维素材料的强度和/或形状保持和/或抗皱性质，并且维持纤维素结构，同时允许该纤维素纤维在力的作用下相对于彼此运动。
WO 97/23683披露了一种通过使用木葡聚糖内糖基转移酶，赋予纤维素材料(如织物或纸和纸浆产品)改进的强度和/或形状保持和/或抗皱性质的方法。WO 01/07556披露了洗衣和/或织物和/或颜色护理组合物，该组合物包含与多糖和/或寡糖组合的木葡聚糖内糖基转移酶，用于针对纤维素纤维来刷新和/或恢复改进的拉伸强度、提高的抗皱，抗起球和抗缩水性质。
本领域中对改进纤维素纺织材料的性质存在需求。这种性质的非限制性实例包括抗起球，抗缩水，抗磨损，抗皱，颜色外观，织物柔软性，形状保持，静电控制，阻燃性和耐化学性，气味控制或防臭，防紫外线，防水，抗菌性，和/或拉伸强度性质。
本发明提供用于改进纤维素纺织材料的性质的组合物和方法。
发明概述
本发明涉及用于改性纤维素纺织材料的方法，这些方法包括用选自下组的组合物处理该纤维素纺织材料，该组由以下各项组成：(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；和(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；该方法在导致改性纤维素纺织材料的条件下进行，其中与未改性纤维素纺织材料相比，该改性纤维素纺织材料具有纺织品改进。
本发明还涉及通过此类方法获得的改性纤维素纺织材料。
本发明还涉及修饰的纤维素纺织材料，这些材料包括(a)一种聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及选自下组的组合物，该组由以下各项组成：(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；和(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的洗涤剂或织物护理组合物，其包括表面活性剂和(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的洗涤剂添加剂，其包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的纺织品涂层或后处理，其包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
附图简述
图1示出了pDLHD0012的限制性图谱。
图2示出了pMMar27的限制性图谱。
图3示出了pEvFz1的限制性图谱。
图4示出了pDLHD0006的限制性图谱。
图5示出了pDLHD0039的限制性图谱。
图6示出了用滤纸孵育的、在红豆木葡聚糖内糖基转移酶16(VaXET16)的存在下用滤纸孵育的或没有用滤纸孵育的荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)的液相的荧光强度。
图7示出了在各种pH值下，在VaXET16存在和不存在下，纤维素针对FITC-XG的结合能力。
图8示出了在各种温度下，在VaXET16存在和不存在下，纤维素针对FITC-XG的结合能力。
图9示出了在0.88μM VaXET16(图B)或1.9μM VaXET16(图C)的不存在(图A)或存在(图B)下，用10X气隙物镜成像的结合到纤维素的FITC-XG的共聚焦显微图像。
图10示出了在4.4μM的VaXET16的不存在(图A)或存在(图B)下，用40X油浸物镜和3X变焦成像的结合到纤维素的FITC-XG的共聚焦显微图像。
图11示出了各种预期分子量的FITC-XG的荧光强度和荧光偏振，说明产生了不同分子量。
图12示出了各种预期平均分子量FITC-XG的色谱图。
图13示出了针对汇集的色谱级分，减少的糖与荧光团的摩尔比。
图14示出了在有或没有VaXET16的情况下，在实验结合条件下，结合到纤维素的每个理论FITC-XG的级分。
图15示出在VaXET16的存在或不存在下，用荧光标记的二氧化硅(FITC-硅石)处理的各种测试织物的荧光图像。
图16示出在于洗涤剂中洗涤之前，在VaXET16存在或不存在下，用荧光标记的二氧化硅(FITC-硅石)处理的各种测试织物的平均强度。
图17示出在用标准洗衣洗涤剂洗涤后，在VaXET16的存在或不存在下，用荧光标记的二氧化硅(FITC-硅石)处理的各种测试织物的荧光图像。
图18示出在用标准洗衣洗涤剂洗涤后，在VaXET16的存在或不存在下，用荧光标记的硅石(FITC-二氧化硅)处理的各种测试织物的平均强度。
图19示出在VaXET16的存在或不存在下，用FITC-XG孵育的各种多织物条的荧光图像。
定义
如在此使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”旨在也包括复数形式，除非上下文清楚地另外指明。
纤维素纺织材料：术语“纤维素纺织材料”意指任何纤维素纺织材料，包括纱线、纱线中间体、纤维、缝线、非织物材料、天然材料、合成材料、和任何其他纺织材料、由这些材料制成的织物、和由这些织物制成的产品(例如，服装及其他物品)。该纺织材料可以处于针织品、机织物、牛仔布、非织造物、毡、纱线以及毛巾布的形式。这些纺织材料是基于纤维素的，如天然纤维素材料，包括棉布、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素材料(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。该纤维素纺织材料还可以是基于纤维素和基于非纤维素纤维的共混物，其中该基于非纤维素的材料是天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物。共混物的实例是棉布和/或人造丝/粘胶与一种或多种伴随材料的共混物，伴随材料如羊毛、合成纤维(例如、聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳酰胺纤维)、和/或含有纤维素的纤维(例如、人造丝/粘胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如玷污的家居衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。
功能化的木葡聚糖低聚物：术语“功能化的木葡聚糖低聚物”意指短链木葡聚糖寡糖，包括单个或多个的重复单元的木葡聚糖，其已经通过掺入化学基团来修饰。该木葡聚糖低聚物分子量优选地是1至3kDa，对应于1至3个重复木葡聚糖单元。该化学基团可以是感兴趣的化合物或反应性基团，如乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。掺入的反应性基团可以用感兴趣的化合物进行衍生化，以直接提供纺织品改进或配合金属阳离子和/或结合与这些反应性基团相互作用(例如，共价地、疏水地、静电地等)的其他化学实体。该衍生化可以直接在包括反应性基团的功能化的木葡聚糖低聚物上进行，或者在将包括反应性基团的功能化木葡聚糖低聚物掺入聚合木葡聚糖后进行。可替代地，该木葡聚糖低聚物可以通过使用包含于该化合物中的反应性基团直接合并化合物来功能化，该反应性基团是，例如，乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。在此可互换使用术语“功能化的木葡聚糖低聚物”和“包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物”。
非纤维素纺织材料：术语“非纤维素纺织材料”意指任何纺织材料，纺织材料包括纱线、纱线中间体、缝线、纤维、非织物材料、天然材料、合成材料、和任何其他纺织材料、由这些材料制成的织物、和由这些织物制成的产品(例如，服装及其他物品)。该纺织品可以处于针织品、机织物、牛仔布、非织造物、毡、纱线以及毛巾布的形式。纺织品是不基于纤维素的，如天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维、或其共混物。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如玷污的家居衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。
聚合木葡聚糖：术语“聚合木葡聚糖”意指包含不止一个重复单元的木葡聚糖(例如，多个重复单元的木葡聚糖)的短、中或长链木葡聚糖寡糖或多糖。最优化地，聚合木葡聚糖包含50-200kDa数均分子量的木葡聚糖，对应于50-200个重复单元。木葡聚糖的重复基序由以下构成：四个β-(1-4)-D-吡喃葡萄糖残基的骨架，其中三个在O-6处具有单个α-D-吡喃木糖残基。这些木糖残基中的一些在O-2处是β-D-吡喃半乳糖基化的，并且这些半乳糖残基中的一些在O-2处是α-L-吡喃海藻糖基化的。术语“木葡聚糖”在此被理解为意指聚合木葡聚糖。
用化学基团功能化的聚合木葡聚糖：术语“用化学基团功能化的聚合木葡聚糖”意指通过合并化学基团修饰的聚合木葡聚糖。聚合木葡聚糖是包含不止一个重复单元的木葡聚糖(例如，多个重复单元的木葡聚糖)的短、中或长链木葡聚糖寡糖或多糖。聚合木葡聚糖包含50-200kDa数均分子量的木葡聚糖，对应于50-200个重复单元。木葡聚糖的重复基序由以下构成：四个β-(1-4)-D-吡喃葡萄糖残基的骨架，其中三个在O-6处具有单个α-D-吡喃木糖残基。该化学基团可以是感兴趣的化合物或反应性基团，如乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。可以通过在木葡聚糖内糖基转移酶的存在下，将聚合木葡聚糖与功能化的木葡聚糖低聚物反应，来将化学基团掺入聚合木葡聚糖。然后可以将掺入的化学性基团与感兴趣的化合物衍生化。该衍生化可以直接在包括反应性基团的功能化的聚合木葡聚糖上进行，或者在将包括反应性基团的功能化木葡聚糖低聚物掺入聚合木葡聚糖后进行。可替代地，该聚合木葡聚糖可以通过使用包含于该化合物中的反应性基团直接合并化合物来功能化，该反应性基团，例如，乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。
纺织品改进：术语“纺织品改进”意指不直接与催化去污或防止污垢再沉积相关的益处。此类益处的实例是抗返染，抗起球，抗缩水，抗磨损，抗皱，改进的颜色外观，织物柔软性，改进的形状保持性，阻燃或耐化学性，防臭，防紫外线，防水，抗微生物，改进的非纤维素和纤维素纺织品之间的结合，改进的静电控制，抗化学、生物、放射性或物理性危害，和/或改进的拉伸强度。防止或减少从一个纺织品到另一个纺织品或相同纺织品的另一个部分的染料转移称为抗返染(还称为染料转移抑制)。从纺织品表面去除突出或破裂的纤维来减少起球倾向或去除已经存在的球粒或细毛称为抗起球。突出或破裂纤维的涂层或再合并或抚平也称为抗起球。防止或减少三维尺寸的减小称为抗缩水。防止或修复磨损称为抗磨损。在家庭洗衣后防止起皱，纺织品从起皱中恢复，缝合处的抚平，和/或折痕保留称为抗皱。纺织品柔软度的改进或纺织品刚度的降低称为改进的织物柔软性。纺织品的颜色澄清，或提高的耐洗涤、汗、光、氯和无氯漂白、热、高温下光的色牢度称为改进的颜色外观。抗三维尺寸变化或抗家庭洗衣过程中三维尺寸变化称为改进的形状保持性。提高的燃烧温度或在高温下抗燃或抗熔化称为阻燃性。在化学溶剂、酸或碱的存在下，耐化学反应，溶解或降解称为耐化学性。气味化合物(具体地短链脂肪酸或低蒸汽压的有机化合物)的抗吸收或防止保留称为防臭。对紫外光照射的不透明度和防止或修复由紫外光照射引起的氧化性损伤称为防紫外线。降低水分保持、或抗润湿性称为防水。提高抑菌或杀菌性质称为抗微生物。增加抗纺织品的感应静电电荷、或增加纺织品中感应静电电荷的衰减率称为改进的静电控制。抗在力或破断拉力的增加下伸长称为改进的拉伸强度。
木葡聚糖内糖基转移酶：术语“木葡聚糖内糖基转移酶”意指木葡聚糖：木葡聚糖内糖基转移酶(EC 2.4.1.207)，该酶催化木葡聚糖骨架中β-(1→4)键的裂解，并且转移该木葡聚糖基区段到受体非还原末端葡萄糖残基的O-4上，该受体可以是木葡聚糖或木葡聚糖的寡糖。木葡聚糖内糖基转移酶又称木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶或内切木葡聚糖转移酶。一些木聚糖内糖基转移酶可以具有不同活性，这些活性包括木葡聚糖和甘露聚糖内糖基转移酶活性。例如，来自成熟的木瓜水果的木聚糖内糖基转移酶可以使用杂木聚糖，如小麦阿拉伯糖基木聚糖、桦木葡糖醛酸木聚糖、及其他作为供体分子。这些木聚糖可能与木葡聚糖发挥类似的作用，同时成本便宜很多，因为它们可以，例如，从纸浆厂废液和/或未来生物质生物炼制中提取。
通过本领域中的那些技术人员，使用任何以下方法，可以评估木葡聚糖内糖基转移酶活性。当在木葡聚糖内糖基转移酶的存在下用摩尔过量的木葡聚糖低聚物孵育时，木葡聚糖聚合物的平均分子量的减少可以通过液相层析(苏鲁瓦(Sulova)等人，2003，植物生理生化(Plant Physiol.Biochem.)41:431-437)或通过乙醇沉淀(山中(Yaanaka)等人，2000，食品胶体(Food Hydrocolloids)14:125-128)，随后通过重量或纤维素结合分析(弗里(Fry)等人，1992，生物化学杂志(Biochem.J.)282:821-828)来确定，或可以在碱性条件下通过与碘结合在比色上来进行评估(苏鲁瓦(Sulova)等人，1995，分析生物化学(Analytical Biochemistry)229:80-85)。在木葡聚糖内糖基转移酶的存在下，通过用木葡聚糖孵育功能化的低聚物，将功能化的木葡聚糖低聚物掺入到木葡聚糖聚合物中可以，例如，通过用木葡聚糖和木葡聚糖内糖基转移酶孵育放射性标记的木葡聚糖低聚物，随后进行滤纸结合和滤纸放射性的测量来评估，或者荧光或光功能化的木聚糖低聚物的掺入可以类似地，通过监测荧光或比色分析滤纸进行评估。
木葡聚糖低聚物：术语“木葡聚糖低聚物”意指短链木葡聚糖寡糖，包括单个或多个重复单元的木葡聚糖。最优化地，该木葡聚糖低聚物分子量将是1至3kDa，对应于1至3个重复木葡聚糖单元。
本发明详细说明
本发明涉及用于改性纤维素纺织材料的方法，这些方法包括用选自下组的组合物处理该纤维素纺织材料，该组由以下各项组成：(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；和(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；该方法在导致改性纤维素纺织材料的条件下进行，其中与未改性纤维素纺织材料相比，该改性纤维素纺织材料具有纺织品改进。
本发明还涉及通过此类方法获得的改性纤维素纺织材料。
本发明还涉及修饰的纤维素纺织材料，这些材料包括(a)一种聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及选自下组的组合物，该组由以下各项组成：(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；和(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
在一个实施例中，该组合物包括木葡聚糖内糖基转移酶，聚合木葡聚糖，和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。在另一个实施例中，该组合物包括木葡聚糖内糖基转移酶，用化学基团功能化的聚合木葡聚糖，和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。在另一个实施例中，该组合物包括木葡聚糖内糖基转移酶、用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和木葡聚糖低聚物。在另一个实施例中，该组合物包括木葡聚糖内糖基转移酶和用化学基团功能化的聚合木葡聚糖。在另一个实施例中，该组合物包括木葡聚糖内糖基转移酶和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明的方法提供用于通过以非共价但基本上是不可逆的方式将纤维素纺织材料与功能化的聚合木葡聚糖结合，来将功能递送至纤维素纺织材料。可以将聚合木葡聚糖用多种多样的化学基团进行功能化，允许结合的聚合木葡聚糖对纤维素纺织材料赋予改进的性质。这些性质包括，例如，化学反应性、结合或结合特异性、提高的防水、提高的防紫外线、提高的光或颜色属性、提高的或更天然的手感和质感、提高的与天然纤维混合能力、减少起球、和提高的抗皱性。本领域中熟知，这些性质在纺织品生产、纺织品护理、和纺织品涂层中是具有价值的。本发明的方法提供了通过木葡聚糖内糖基转移酶活性用于增加结合到纤维素纺织材料的用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和/或包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物的量的新颖方法。
此外，可以采用木葡聚糖酶、内切-β-1-4葡聚糖酶、纤维素酶、或其组合和木葡聚糖内糖基转移酶以便允许如所希望的酶促去除和重新引入功能化。将该随后非功能化的纤维素纺织材料通过添加用化学基团功能化的聚合木葡聚糖或功能化的木葡聚糖低聚物和木葡聚糖内糖基转移酶来进行再功能化。
在一方面，该功能化可以提供任何功能上有用的化学部分。
在组合物中，该木葡聚糖内糖基转移酶优选地以约0.1nM至约1mM，例如，约10nM至约100μM或约0.5μM至约5μM存在。
该聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖优选地是以约10mg至约1g/g组合物，例如，约100mg至约950mg或约500mg至约900mg/g组合物存在。
当在没有聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖的情况下，该木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物存在时，该木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物优选地以约10mg至约1g/g组合物，例如，约100mg至约950mg或约500mg至约900mg/g组合物存在。
当有聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖的情况下存在时，该木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物在有木葡聚糖低聚物的情况下优选地是以木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖约50:1至约0.5:1摩尔比，例如，木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖约10:1至约1:1或约5:1至约1:1摩尔比存在。
该聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖优选地是以约1mg至约1g/g纤维素纺织材料，例如，约10mg至约100mg或约20mg至约50mg/g纤维素纺织材料存在。
当在没有聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖的情况下，该木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物存在时，该木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物优选地以约1mg至约1g/g纤维素纺织材料，例如，约10mg至约100mg或约20mg至约50mg/g纤维素纺织材料存在。
当有聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖的情况下存在时，该木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物优选地是以约50:1至约0.5:1，例如，木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖约10:1至约1:1或约5:1至约1:1摩尔比存在。
在改性纤维素纺织材料过程中，该木葡聚糖内糖基转移酶优选地以约0.1nM至约1mM，例如，约10nM至约100μM或约0.5μM至约5μM存在。
掺入纤维素纺织材料中的聚合木葡聚糖、用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、木葡聚糖低聚物、或包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物的浓度为约0.01g至约500mg/g纤维素纺织材料，例如，约0.1g至约50mg或约1至约200mg/g纤维素纺织材料。
纤维素纺织材料
在本发明的方法中，该纤维素纺织材料可以是任何纤维素纺织材料。
该纤维素纺织材料可以是天然纤维素材料，包括棉布、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维或者人造纤维素材料(例如，来源于木浆)，包括纤维胶/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维或其共混物。
该纤维素纺织材料还可以是基于纤维素和基于非纤维素的材料的共混物。该非纤维素纺织材料可以是天然聚酰胺，包括羊毛、驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝或合成聚合物如尼龙、芳族聚酰胺、聚酯、丙烯酸、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)、或其共混物。该非纤维素纺织材料可以是由以下各项构成的材料：醋酸纤维、腈纶、尼龙、烯烃、涤纶、人造丝、氨纶、橡胶松紧线、或其混合物。共混物的实例是棉布和/或人造丝/粘胶与一种或多种伴随材料的共混物，伴随材料如羊毛、合成纤维(例如、聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚氨酯纤维、聚脲纤维、芳酰胺纤维)、和/或含有纤维素的纤维(例如、人造丝/粘胶、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。
纺织品改进
根据本发明的方法所述的纤维素纺织材料的处理对纤维素纺织材料的纺织品给予纺织品改进。
该纺织品改进可以是选自下组的一种或多种改进，该组由以下各项组成：抗返染，抗起球，抗缩水，抗磨损，抗皱，改进的颜色外观，织物柔软性，改进的形状保持，改进的静电控制，改进的气味控制或防臭，耐化学性或阻燃性，防紫外线，防水，抗微生物，在纺织品共混物中改进的与纤维素纺织品的结合，和改进的拉伸强度。在一方面，该纺织品改进是抗返染。在另一方面，该纺织品改进是抗起球。在另一方面，该纺织品改进是抗缩水。在另一方面，该纺织品改进是抗磨损。在另一方面，该纺织品改进是抗皱。在另一方面，该纺织品改进是改进的颜色外观。在另一方面，该纺织品改进是织物柔软性。在另一方面，该纺织品改进是改进的形状保持。在另一方面，该纺织品改进是改进的静电控制。在另一方面，该纺织品改进是改进的气味控制或防臭。在另一方面，该纺织品改进是耐化学性或阻燃性。在另一方面，该纺织品改进是防紫外线。在另一方面，该纺织品改进是防水。在另一方面，该纺织品改进是抗微生物。在另一方面，该纺织品改进是在纺织品共混物中与纤维素纺织品的结合的改进。在另一方面，该纺织品改进是改进的拉伸强度。
根据美国材料与试验协会(ASTM)方法D3511、D3512、D3514、或D4970测量抗起球性质。
根据ASTM方法D3181、D3884、D3885、或D3886或者美国纺织化学师与染料师协会(AATCC)方法93，织物的耐磨性：加速算法来测量抗磨损性质。
根据AATCC方法66来测量抗皱性质。
根据AATCC方法135、150、或187来测量抗缩水性质。
根据Hunter LabScan，AATCC方法8、16M、17、61、117、172、181、188、或190来测量改进的颜色外观性质。
根据ASTM方法D1388或D5732或川端织物评估系统(KES-F)来测量织物柔软性质。
根据ASTM方法D3786，或者AATCC方法135、150、187、或179来测量改进的形状保持性质。
根据AATCC方法135或115或者ANSI标准JIS L0217-103来测量改进的静电控制性质。
根据ASTM方法D5034、D5035、D5735、D4964、D6614、D6797、或D6775来测量改进的拉伸强度性质。
根据气相色谱-质谱或测试测试嗅觉小组评估来测试改进的防臭性质。
根据ASTM方法D2261、D1424、或D5734来测试改进撕裂强度性质。
根据ASTM方法E96、AATCC方法22或193来测量改进的防水。
根据AATCC方法169、186、或192来测量改进的耐气候性。
根据AATCC方法100-1993或ANSI标准JIS L 1902-1998来测量改进的抗微生物性质。
根据ASTM方法D6544来测量改进的防紫外线。
根据ASTM方法D7138、D1230、D4151、D5238、D6413、D6545、D7140、或D7571来测量阻燃性和耐热性。
根据ASTM测试方法F739、F903、F1001、F1359、F1383、F1407、或F2130来测量化学耐性。
聚合木葡聚糖
在本发明的方法中，该聚合木葡聚糖可以是任何木葡聚糖。在一方面，该聚合木葡聚糖获得自自然来源。在另一方面，该聚合木葡聚糖是通过由本领域技术人员所使用的任何手段从组分碳水化物、UDP-或GDP-碳水化合物、或卤化的碳水化合物来合成的。在另一方面，聚合木葡聚糖的自然来源是罗望子或罗望子内核粉末、旱金莲属、或旱金莲属植物具体地旱金莲。该聚合木葡聚糖的自然来源可以是各种双子叶植物的种子，这些双子叶植物如孪叶豆(Hymenaea courbaril)，豆科-云实亚科，其包括Cynometreae、Amherstieae、和Sclerolobieae属。该聚合木葡聚糖的自然来源还可以是报春花目、番荔枝科、沼花科、蜜花科、胡麻科、和旱金莲科或山牵牛亚科的植物的种子。该聚合木葡聚糖的自然来源还可以是风仙花科、爵床科、亚麻科、毛茛科、无患子科、和山榄科或豆科蝶形花亚科的非胚乳成员的植物的种子。在另一方面，该聚合木葡聚糖的自然来源是双子叶植物的初生细胞壁。在另一方面，该聚合木葡聚糖的自然来源可以是非禾本科的单子叶植物的初生细胞壁。
该自然来源聚合木葡聚糖可以通过大量的沸水或热水提取，或通过本领域技术人员已知的其他方法来提取。在一方面，可以随后将该聚合木葡聚糖进行纯化，例如，通过在80％乙醇中沉淀。在另一方面，该聚合木葡聚糖是一种粗的或富集制品，例如，罗望子内核粉末。在另一方面，该合成的木葡聚糖可以通过自动化碳水化物合成来产生(西贝格(Seeberger)，2003，化学通讯(Chem.Commun.)1115-1121)，或通过酶促聚合，例如，使用糖苷合成酶(斯派杜特(Spaduit)等人，2011，美国化学会志(J.Am.Chem.Soc.)133:10892-10900)。
在一方面，聚合木葡聚糖的平均分子量范围从约2kDa至约500kDa，例如，约2kDa至约400kDa、约3kDa至约300kDa、约3kDa至约200kDa、约5kDa至约100kDa、约5kDa至约75kDa、约7.5kDa至约50kDa、或约10kDa至约30kDa。在另一方面，重复单元的数量是约2至约500，例如，约2至约400、约3至约300、约3至约200、约5至约100、约7.5至约50、或约10至约30。在另一方面，重复单位是根据弗里(Fry)等人(植物生理学(Physiologia Plantarum)89:1-3,1993)的命名原则的G、X、L、F、S、T和J亚单元的任何组合。在另一方面，重复单元是为双子叶植物和非禾本的单子叶植物所共有的海藻糖化的或非海藻糖化的XXXG型聚合木葡聚糖。在另一方面，该聚合木葡聚糖是O-乙酰化的。在另一方面，该聚合木葡聚糖不是O-乙酰化的。在另一方面，该聚合木葡聚糖的侧链可以包含末端海藻糖基残基。在另一方面，该聚合木葡聚糖的侧链可以包含末端阿拉伯糖基残基。在另一方面，该聚合木葡聚糖的侧链可以包含末端木糖残基。
出于本发明的目的，在此引用的术语木葡聚糖是指聚合木葡聚糖。
木葡聚糖低聚物
在本发明的方法中，该木葡聚糖低聚物可以是任何木葡聚糖低聚物。该木葡聚糖低聚物可以通过将来自任何来源的聚合木葡聚糖降解或水解来获得。该木葡聚糖低聚物可以通过聚合木葡聚糖的酶促降解来获得，例如，通过用木葡聚糖酶或葡聚糖内切酶(内切-β-1-4-葡聚糖酶)定量或部分消化。该木葡聚糖低聚物可以从组分碳水化物、UDP-或GDP-碳水化合物、或卤化的碳水化合物通过本领域技术人员通常使用的任何手段来合成。
在一方面，木葡聚糖低聚物的平均分子量范围从0.5kDa至约500kDa，例如，约1kDa至约20kDa、约1kDa至约10kDa、或约1kDa至约3kDa。在另一方面，重复单元的数量是约1至约500，例如，约1至约20、约1至约10、或约1至约3。在本发明的方法中，该木葡聚糖低聚物最优地是尽可能短的(即，1个重复单位，或分子量约1kDa)来使每克的溶解的木葡聚糖低聚物的解度和溶液摩尔浓度最大化，同时针对木葡聚糖内糖基转移酶活性保持底物特异性。在另一方面，该木葡聚糖低聚物包括根据弗里(Fry)等人，(植物生理学(PhysiologiaPlantarum)89:1-3,1993)的命名原则的G(β-D吡喃葡萄糖基-)、X(α-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-)、L(β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-α-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-)、F(α-L-海藻糖-吡喃糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-α-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-)、S(α-L-海藻阿拉伯糖基-(1→2)-α-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-)、T(α-L-阿拉伯-海藻糖基-(1→3)-α-L-海藻阿拉伯糖基-(1→2)-α-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-)、和J(α-L-吡喃半乳糖基-(1→2)-β-D-吡喃半乳糖基-(1→2)-α-D-吡喃木糖基-(1→6)-β-D-葡萄-吡喃糖基-)亚单元的任何组合。在另一方面，该木葡聚糖低聚糖是为双子叶植物和非禾本的单子叶植物所共有的XXXG七糖。在另一方面，该木葡聚糖低聚物是O-乙酰化的。在另一方面，该木葡聚糖低聚物非是O-乙酰化的。在另一方面，该木葡聚糖低聚物的侧链可以包含末端海藻糖基残基。在另一方面，该木葡聚糖低聚物的侧链可以包含末端阿拉伯糖基残基。在另一方面，该木葡聚糖低聚物的侧链可以包含末端木糖残基。
木葡聚糖低聚物和聚合木葡聚糖的功能化
该木葡聚糖低聚物可以通过掺入本领域中技术人员已知的任何化学基团来进行功能化。该化学基团可以是感兴趣的化合物或反应性基团，如乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。
在一方面，该化学基团可以是醛基基团。
在另一方面，该化学基团是氨基基团。可以通过还原氨化，将该氨基基团掺入到聚合木葡聚糖中。可替代地，氨基基团可以是脂肪胺或芳香胺(例如，苯胺)。该脂肪胺可以是伯、仲、或叔胺。伯、仲、或叔胺分别是结合到一个、两个和三个碳的氮。在一方面，该伯胺是C1-C8，例如，乙胺。在另一方面，仲胺中的每个碳是C1-C8，例如，二乙胺。在另一方面，叔胺中的每个碳是C1-C8，例如，三乙胺。
在另一方面，该化学基团是芳香族基团。该芳香族基团可以是芳烃基团、芳基卤基团、酚基基团、苯胺基团、重氮基基团、或杂环基团。
在另一方面，该化学基团是羧基基团。该羧基基团可以是酰基卤、酰胺、羧酸、酯、或硫酯。
在另一方面，该化学基团是卤素基团。该卤素基团可以是氟、氯、溴、或碘。
在另一方面，该化学基团是羟基基团。
在另一方面，该化学基团是酮基基团。
在另一方面，该化学基团是腈基基团。
在另一方面，该化学基团是硝基基团。
在另一方面，该化学基团是巯基基团。
在另一方面，该化学基团是磺酸盐基团。
该化学反应性基团本身可以是向纤维素纺织材料给予纺织品改进的化学基团。
通过以此方式掺入化学反应性基团，本领域中的技术人员可以进一步用将向纤维素纺织材料给予纺织品改进的化合物(例如，高分子)使掺入的反应性基团衍生化。例如，掺入的化学基团可以与给予所希望性质的化合物反应来通过共价键将该基团掺入到木葡聚糖低聚物中。可替代地，该化学基团可以按可逆或不可逆方法结合到给予所希望性质的化合物上，并且通过非共价结合掺入该化合物。该衍生化可以直接在功能化的木葡聚糖低聚物上进行，或者在将功能化木葡聚糖低聚物掺入聚合木葡聚糖后进行。
可替代地，该木葡聚糖低聚物可以通过直接掺入向纤维素纺织材料给予纺织品改进的化合物来进行功能化，该掺入是通过使用包含于化合物中的反应性基团或被掺入到该化合物中的反应性基团，如以上描述的任何基团来进行。
另一方面，该聚合木葡聚糖可以通过掺入以上描述的反应性基团来直接功能化。通过将反应性基团直接掺入聚合木葡聚糖，本领域中技术人员可以进一步用将向纤维素纺织材料给予纺织品改进的化合物使掺入的反应性基团衍生化。通过直接将化合物掺入聚合木葡聚糖中，还可以将所希望的物理或化学性质直接给予到纤维素纺织材料中。
在一方面，该功能化是通过使木葡聚糖低聚物或聚合木葡聚糖的还原末端羟基反应来进行。在另一方面，除末端葡萄糖的位置4处的非还原羟基以外，可以使非还原羟基基团进行反应。在另一方面，除末端葡萄糖的位置4处的非还原羟基以外，可以使还原末端羟基和非还原羟基进行反应。
该化学官能团可以通过酶促修饰该木葡聚糖低聚物或聚合木葡聚糖，或通过非酶促化学反应来添加。在一方面，使用酶促修饰来添加化学官能团。在酶促修饰的一个实施例中，该酶促功能化是对酮或羧化物的氧化，例如，通过半乳糖氧化酶。在酶促修饰的另一个实施例中，酶促功能化是通过AA9家族氧化酶对酮或羧化物的氧化(前身为糖原水解酶家族61酶)。
在另一方面，该化学官能团是通过非酶促化学反应来添加的。在非酶促化学反应的一个实施例中，该反应是通过如通过罗伊(Roy)，等人，1984，加拿大化学杂志(Can.J.Chem.)62:270–275，或达尔帕萨多(Dalpathado)，等人，2005，分析和生物分析化学(Anal.Bioanal.Chem.)，381:1130-1137描述的碳水化合物的还原末端的还原氨化来掺入反应性氨基基团。在非酶促化学反应的另一个实施例中，该反应是通过将还原端羟基氧化成酮来掺入反应性酮基基团，例如，通过铜(II)。在非酶促化学反应的另一个实施例中，该反应是通过(2,2,6,6-四甲基-哌啶-1-基)氧基(TEMPO)、或其氧代铵盐，将非还原端羟基基团(例如，葡萄糖或半乳糖的非糖苷键位置6羟基)氧化，以产生如在(布拉吉(Bragd)等人，2002，碳水化合物聚合物(Carbohydrate Polymers)49:397-406，或布里顿(Breton)等人，2007，欧洲有机化学杂志(Eur.J.Org.Chem.)10:1567-1570)中所描述的醛或羧酸。
木葡聚糖低聚物或聚合木葡聚糖可以通过与包含不止一个(即，双功能的或多功能的)化学官能团的化合物化学反应来进行功能化，该化合物包括直接与木葡聚糖低聚物或聚合木葡聚糖反应的至少一个化学官能团。在一方面，该双功能化学基团是包含伯胺和第二化学官能团的烃。该第二官能团可以是任何以上描述的其他基团。在一些方面中，这两种官能团通过本领域中熟知的各种长度的烃链(接头)来分离。
木葡聚糖低聚物或聚合木葡聚糖可以用感兴趣的化合物通过逐步或协同反应来进行功能化，其中该木葡聚糖低聚物或聚合木葡聚糖是如以上所述进行功能化的，并且该化合物对其引入的功能具有反应性。在由功能化的木葡聚糖低聚物偶联的一方面中，通过还原氨化，将氨基基团首先掺入木葡聚糖低聚物中，并且随后将反应性羰基连接到所引入的氨基基团上。在由氨基修饰的木葡聚糖低聚物偶联的一方面中，该第二偶联步骤通过将N-羟基琥珀酰亚胺基(NHS)酯或亚氨酸酯偶联到引入的氨基基团，来掺入化学基团、化合物或高分子。在一个优选的实施例中，随后该偶联到氨基基团的NHS酯是单或双功能交联试剂的组分。在偶联到功能化的木葡聚糖或木葡聚糖低聚物上的另一方面，该第一反应步骤包括用巯基基团的功能化，通过在升高的温度下在还原剂的存在下用烷基硫代氨(NH2-(CH2)n-SH)的还原氨化(马吉德(Magid)等人，1996，有机化学杂志(J.Org.Chem.)61:3849-3862)，或通过自由基偶合(王(Wang)等人，2009，Arkivoc xiv:171-180)，随后通过将马来酰亚胺基团反应成巯基。在一些方面中，如本领域中充分描述的，将该给予所希望性质的化合物中的反应性基团通过适当长度的烃链从其余化合物中分离出来。
可以通过直接反应或通过与木葡聚糖反应的化合物反应用来功能化聚合木葡聚糖或木葡聚糖低聚物的感兴趣的化合物的非限制性实例包括肽、多肽、蛋白、疏水基团、亲水基团、阻燃剂、染料、修色剂、特异性亲和标记物、非特异性亲和标记物、金属、金属氧化物、金属硫化物、杀真菌剂、除草剂、杀微生物剂或抑菌剂、和非共价键分子。
在一方面，该化合物是肽。该肽可以是抗微生物肽，设计来降低过敏和免疫原性的“自体肽”、环肽、谷胱甘肽、或信号肽(如，速激肽、血管活性肠肽、胰多肽相关的肽、降钙素肽、脂肽、环脂肽、或其他肽)。
在另一方面，该化合物是多肽。该多肽可以是非催化活性的蛋白(即，结构或结合蛋白)、或催化活性的蛋白(即，酶)。该多肽可以是酶、抗体、或抗体酶。
在另一方面，该化合物是包括疏水基团的化合物。该疏水基团可以是聚氨酯、聚四氟乙烯、或聚偏氟乙烯。
在另一方面，该化合物是包括亲水基团的化合物。该亲水基团可以是甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酰胺、或聚丙烯酸酯。
在另一方面，该化合物是阻燃剂。该阻燃剂可以是氢氧化铝或氢氧化镁。该阻燃剂还可以是包括有机卤素基团或有机磷基团的化合物。
在另一方面，该化合物是染料或颜料。
在另一方面，该化合物是特异性亲和标记物。该特异性亲和标记物可以是生物素、阿维丁、螯合基团、冠醚、血红素基团、非反应性底物类似物、抗体、靶抗原、或凝集素。
在另一方面，该化合物是非特异性亲和标记物。该非特异性亲和标记物可以是聚阳离子基团、聚阴离子基团、磁性颗粒(例如，磁铁矿)、疏水基团、脂肪族基团、金属、金属氧化物、金属硫化物、或分子筛。
在另一方面，该化合物是杀真菌剂。该杀真菌剂可以是包括如下的化合物：二羧酰亚胺基团(如烯菌酮)、苯基吡咯基团(如咯菌腈)、氯苯基基团(如五氯硝苯)、氯硝基苯(如二氯硝基苯胺)、三二唑(triadiazole)基团(如土菌灵)、二硫代氨基甲酸酯基团(如代森锰锌或二甲基二硫代氨基甲酸酯)、或无机分子(如铜或硫)。在另一方面，该杀真菌剂是细菌或细菌孢子如芽胞杆菌属或芽胞杆菌属孢子。
在另一方面，该化合物是除草剂。该除草剂可以是草甘磷、合成的植物激素(如包括如下的化合物：2,4-二氯苯氧乙酸基团、2,4,5-三氯苯氧乙酸基团、2-甲基-4-氯苯氧乙酸基团、2-(2-甲基-4-氯苯氧基)丙酸基团、2-(2,4-二氯苯氧基)丙酸基团、或(2,4-二氯苯氧基)丁酸基团)、或包括三嗪基团的化合物(如莠去津(2-氯-4-(乙氨基)-6-异丙氨基)-s-三嗪)。
在另一方面，该化合物是杀菌或抑菌化合物。该杀菌或抑菌化合物可以是铜或铜合金(如黄铜、青铜、白铜、或铜镍锌合金)、磺酰胺基团(如磺胺甲噁唑、磺胺索嘧啶、磺胺醋酰或磺胺哒嗪)、银或有机银基团、TiO2、ZnO2、抗微生物肽、或壳聚糖。
在另一方面，该化合物是非共价接头分子。
在另一方面，该化合物是修色剂。该修色剂可以是染料、荧光增白剂、修色剂、或媒染剂(例如，矾、铬矾)。
通过利用引入的氨基基团，本领域中的技术人员可以确切地结合将给予纺织品改进的几乎任何化学品。在此列出了改进纺织品并且可以仲型或叔型合并的化学基团的非限制性实例。为了向纤维素纺织材料给予防水性或耐气候性，可以合并疏水基团(例如，聚氨酯、聚四氟乙烯、和聚偏氟乙烯)。为了改进纺织品的手感，可以合并亲水基团(例如，甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酰胺、和聚乙二醇)。为了改进纺织品的手感，可以合并纺织品软化基团(例如，烷基磺酸酯、甜菜碱、和氧化胺)。为了使纺织品更具有吸水性，可以合并吸湿基团(例如，聚丙烯酸酯)。为了改进纺织品的阻燃性或滞燃性，可以合并滞燃基团(例如，氢氧化铝、氢氧化镁、有机卤素、和有机磷)。为了改进纺织品的防臭性，或为了产生用来使用的抗微生物纺织品，例如，在医院服装、和绷带、和敷料中，可以合并抗微生物基团、抑微生物基团、杀真菌基团或除草基团(例如，银和有机银、TiO2、抗微生物肽、聚葡萄胺糖、铜和有机铜、和抗微生物肽)。为了改进纺织品的外观，可以合并染料、媒染剂、修色剂、和荧光增白剂。为了向纺织品给予特异性化学反应性和亲和性，例如，向环境毒素，可以合并分析物，生物、放射性、或化合物，特异性亲和标记物(例如，肽、多肽、酶、抗体或其他蛋白、生物素、阿维丁、血红素、碘、或指示剂染料)并且以此方式，本领域技术人员可以产生诊断、保护或耐化学性纺织品，例如，用以清洁抹布或衣物。为了给予提高的防紫外线或光或者为了给予提高的光学和导电性能，可以合并金属、金属氧化物、或金属硫化物(例如，TiO2、AlO2、或SiO2)。为了给予提高的手感、或针对于其他化学品或化学官能团提高的亲和性，可以合并非共价接头分子或非特异性亲和标记物(例如，聚阳离子、聚阴离子)。
在一方面，所希望的性质是化学反应性、或对特异性化学品、化学基团(即，防护工作服或设备、一次性的湿纸巾、用于过滤的功能化树脂/纸、分离介质、和用于测试或诊断的指示湿纸)、毒素、金属、盐、离子、多肽或所希望分析物(包括生物、放射性、或化学基团)的抗性或亲和力。在另一方面，所希望的性质是纺织品改进(例如，抗返染，抗起球，抗缩水，抗磨损，抗皱，改进的颜色外观，织物柔软性，改进的形状保持，阻燃性或耐化学性，改进的静电控制，改进的气味控制或防臭，防紫外线，防水，抗微生物，在纺织品共混物中改进的与非纤维素纺织品的结合，和/或改进的拉伸强度)。在另一方面，该所希望的性质是防水性或耐气候性。在另一方面，该所希望的性质是纺织品的改进的光学性质。在另一方面，该所希望的性质是纺织品的改进的导电性质。在另一方面，该所希望的性质是与非纤维素纺织品共混的提高，或非纤维素纺织品共混物的提高的性质。
改性纤维素纺织材料的制备
在本发明的方法中，修饰的或功能化的纤维素纺织材料可以从任何纤维素纺织材料来制备。该纤维素纺织材料可以通过用如下各项处理纤维纺织材料来改性：(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；其中与未改性纤维素纺织材料相比，该改性纤维素纺织材料具有纺织品改进。
这些方法是通过但不限于将蚕丝布用荧光染料功能化来示例的，从而向纤维素纺织材料给予所希望的光学性质。在本发明的方法中，可以将棉布薄片在pH控制溶液中孵育，即，缓冲溶液，(例如，柠檬酸钠)从pH 3至pH 9，例如，pH 4至pH 8或pH 5至pH 7，以从约1g/L至约1kg/L的浓度，例如，约20g/L至约50g/L或约30g/L至约40g/L包含木葡聚糖内糖基转移酶。该木葡聚糖内糖基转移酶可以是以约0.1nM至约1mM，例如，约10nM至约100μM或约0.5至约5μM存在。在一方面，该木葡聚糖内糖基转移酶是以3.2ng至约32g的酶/g纤维素纺织材料，例如，约320μg至约5.3mg的酶/g纤维素纺织材料的浓度存在。该功能化的木葡聚糖低聚物可以与聚合木葡聚糖以约50:1至约0.5:1摩尔比，例如，约10:1至约1:1或约5:1至约1:1摩尔比存在。该聚合木葡聚糖可以以约1mg/g纤维素纺织材料至约1g/g纤维素纺织材料，例如，约10mg至约100mg或约20mg至约50mg/g纺织材料存在。该孵育可以持续一个足够长的一段时间，以便实现功能化所希望的程度，例如，约瞬时至约72小时，例如，约15分钟至约48小时，例如，约30分钟至约24小时，例如，约1至约3小时。在本发明的一方面，该纤维素纺织材料从木葡聚糖内糖基转移酶和非结合的木葡聚糖或功能化的木葡聚糖低聚物，通过，例如，在水中洗涤来进行分离。
在本发明的一方面，在纤维素纺织材料的功能化之前将该木葡聚糖进行功能化。可以将该木葡聚糖在pH控制溶液中，例如，缓冲溶液，用木葡聚糖内糖基转移酶和功能化的木葡聚糖低聚物进行孵育，产生功能化木葡聚糖。然后可以将功能化的木葡聚糖从功能化的木葡聚糖低聚物中，通过本领域技术人员已知的任何方法，例如，乙醇沉淀法，来进行分离。例如，可以将该反应混合物在80％(v/v)乙醇中孵育约1分钟至约24小时，例如，30分钟至20小时或12至15小时，在适当的速度下离心适当的时间长度，以使沉淀的、功能化的木葡聚糖成球粒(例如，在适当的2000x g下30分钟)，并且倒出该上清液。然后可任选地干燥该功能化木葡聚糖。在本发明的这个方面，然后将功能化的木葡聚糖用木葡聚糖内糖基转移酶和纤维素纺织材料进行孵育。
木葡聚糖内糖基转移酶的来源
可以使用在适合于本发明方法的pH和温度下具有适合酶活性的任何木葡聚糖内糖基转移酶。优选的是，在广泛的pH和温度范围内，该木葡聚糖内糖基转移酶是有活性的。在实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶具有在约3至约10范围内的pH最佳值。在另一个实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶具有在约4.5至约8.5范围内的pH最佳值。在另一个实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶具有小于或等于约5℃的冷变性温度或约100℃或更高的熔解温度。在另一个实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶具有小于或等于20℃的冷变性温度或大于等于约75℃的熔解温度。
所使用的木葡聚糖内糖基转移酶的来源在本发明中并不是关键。因此，该木葡聚糖内糖基转移酶可以从任何来源，如植物、微生物、或动物来获得。
在一个实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶从植物来源中获得。木葡聚糖内糖基转移酶可以从豆科(同义词：豆科(Leguminosae和Papilionaceae))的子叶中获得，优选地菜豆属，具体地，绿豆。优选的单子叶植物是非禾本科的单子叶植物和百合的单子叶植物。木葡聚糖内糖基转移酶还可以从苔藓和苔类中来提取，如在弗里(Fry)等人，1992，生物化学杂志(Biochem.J.)282:821-828中所描述的。例如，该木葡聚糖内糖基转移酶可以从子叶中获得，即，双子叶植物或单子叶植物，具体地而言选自下组的双子叶植物，该组由以下各项组成：赤小豆、卡诺拉、花椰菜、棉、白杨或杂种白杨、马铃薯、油菜、大豆、向日葵、阿拉伯芥、烟草、和番茄，或选自下组的单子叶植物，该组由以下各项组成：小麦、水稻、玉米和甘蔗。参见，例如，WO 2003/033813和WO 97/23683。
在另一个实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶获得自拟南芥(GENESEQP:AOE11231、GENESEQP:AOE93420、GENESEQP:BAL03414、GENESEQP:BAL03622、或GENESEQP:AWK95154)；番木瓜(GENESEQP:AZR75725)；黄瓜(GENESEQP:AZV66490)；野胡萝卜(GENESEQP:AZV66139)；草地羊茅(GENESEQP:AZR80321)；大豆(GENESEQP:AWK95154或GENESEQP:AYF92062)；大麦(GENESEQP:AZR85056、GENESEQP:AQY12558、GENESEQP:AQY12559、或GENESEQP:AWK95180)；番茄(GENESEQP:ATZ45232)；蒺藜状苜蓿(GENESEQP:ATZ48025)；稻(GENESEQP:ATZ42485、GENESEQP:ATZ57524、或GENESEQP:AZR76430)；欧洲山杨(GENESEQP:AWK95036)；矮慈菇(GENESEQP:AZV66468)；双色高粱(GENESEQP:BAO79623或GENESEQP:BAO79007)；红豆(GENESEQP:ATZ61320)；或玉蜀黍(GENESEQP:AWK94916)。
在另一个实施例中，该木葡聚糖内糖基转移酶是具有水解和转糖基活性的木葡聚糖内糖基转移酶/水解酶(XTH)。在一个优选的实施例中，该转糖基作用与水解速率的比例是至少10-2至107，例如，10-1至106或10至1000。木葡聚糖内糖基转移酶的产生
木葡聚糖内糖基转移酶可以从植物中提取。用于从植物中提取木葡聚糖内糖基转移酶的适合的方法描述于弗雷(Fry)等人，1992，生物化学杂志(Biochem.J.)282:821-828；苏鲁瓦(Sulova)等人，1998，生物化学杂志(Biochem.J.)330:1475-1480；苏鲁瓦(Sulova)等人，1995，分析生物化学(Anal.Biochem.)229:80-85；WO 95/13384；WO 97/23683；或EP562 836中。
木葡聚糖内糖基转移酶还可以是通过培养包含来自植物、微生物、或动物的适当的遗传信息的经转化宿主生物体来生产。通过本领域中已知的方法制备并培养转化体。
用于分离或克隆基因的技术是本领域中已知的并且包括从基因组DNA或cDNA、或其组合进行分离。来自基因组DNA的基因的克隆可以例如通过使用聚合酶链反应(PCR)或用以对具有共有的结构特征的克隆的DNA片段进行检测的表达库抗体筛选来实现。参见例如，伊尼斯(Innis)等人，1990，PCR：方法和应用指南(PCR：A Guide to Methods andApplication)，学术出版社(Academic Press)，纽约。可以使用其他核酸扩增程序例如连接酶链式反应(LCR)、连接激活转录(LAT)和基于多核苷酸的扩增(NASBA)。
核酸构建体可以构成包括一种编码木葡聚糖内糖基转移酶、可操作地连接至一个或多个控制序列的基因，该一个或多个控制序列在与这些控制序列相容的条件下指导该编码序列在一种适合的宿主细胞中的表达。可以用许多方式操作所述基因以便于木葡聚糖内糖基转移酶的表达。取决于表达载体，在基因插入载体之前对其进行操纵可以是令人希望的或必需的。用于利用重组DNA方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
该控制序列可以是启动子，即，被宿主细胞识别以对编码木葡聚糖内糖基转移酶的多核苷酸进行表达的多核苷酸。启动子包含介导木葡聚糖内糖基转移酶的表达的转录控制序列。该启动子可以是在宿主细胞中显示出转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型及杂合型启动子，并且可以由编码与该宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因获得。
用于在细菌宿主细胞中指导核酸构建体的转录的合适启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyQ)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyL)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penP)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacB)、枯草芽孢杆菌xylA和xylB基因、苏云金杆菌cryIIIA基因(阿盖塞(Agaisse)和勒尔克吕(Lereclus)，1994，分子微生物学(MolecularMicrobiology)13:97-107)、大肠杆菌lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(埃贡(Egon)等人，1988，基因(Gene)69:301-315)、天蓝链霉菌琼脂水解酶基因(dagA)、以及原核β-内酰胺酶基因(维拉-卡马洛夫(Villa-Kamaroff)等人，1978，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)75:3727-3731)以及tac启动子(德波尔(DeBoer)等人，1983，美国国家科学院院刊80:21-25)。其他启动子描述在吉尔伯特(Gilbert)等人，1980，科学美国人(Scientific American)242:74-94的“来自重组细菌的有用蛋白质(Useful proteinsfrom recombinant bacteria)”；以及在萨姆布鲁克(Sambrook)等人，1989，同上。串联启动子的实例披露在WO 99/43835中。
在丝状真菌宿主细胞中，用于指导核酸构建体的转录的合适启动子的实例是获得自以下各项的基因的启动子：构巢曲霉乙酰胺酶、黑曲霉中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶(glaA)、米曲霉TAKA淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉丙糖磷酸异构酶、尖镰孢胰蛋白酶–样蛋白酶(WO 96/00787)、镶片镰孢菌淀粉葡糖苷酶(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Daria(达莉亚)(WO 00/56900)、镶片镰孢菌Quinn(奎恩)(WO 00/56900)、米黑根毛霉脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶，以及里氏木霉翻译延伸因子，连同NA2-tpi启动子(来自编码中性α-淀粉酶的曲霉属基因的修饰的启动子，其中已经用来自编码丙糖磷酸异构酶的曲霉属基因的未翻译的前导子替换未翻译的前导子；非限制性实例包括来自编码中性α-淀粉酶的黑曲霉基因的修饰的启动子，其中已经用来自编码丙糖磷酸异构酶的构巢曲霉或米曲霉基因的未翻译的前导子替换未翻译的前导子)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(GAL1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH1、ADH2/GAP)、酿酒酵母丙糖磷酸异构酶(TPI)、酿酒酵母金属硫蛋白(CUP1)、以及和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。罗马诺斯(Romanos)等人，1992，酵母(Yeast)8:423-488描述了酵母宿主细胞的其他有用的启动子。
控制序列还可以是由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码木葡聚糖内糖基转移酶的多核苷酸的3’-末端。在该宿主细胞中起作用的任何终止子都可以用于本发明中。
用于细菌宿主细胞的优选终止子是从克劳氏芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprH)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyL)以及大肠杆菌核糖体RNA(rrnB)的基因获得。
用于丝状真菌宿主细胞的优选终止子是从以下各项的基因获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶、尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶I、里氏木霉纤维二糖水解酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶I、里氏木霉内切葡聚糖酶II、里氏木霉内切葡聚糖酶III、里氏木霉内切葡聚糖酶V、里氏木霉木聚糖酶I、里氏木霉木聚糖酶II、里氏木霉木聚糖酶III、里氏木霉β-木糖苷酶以及里氏木霉翻译延长因子。
用于酵母宿主细胞的优选终止子是从以下各项的基因获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素C(CYC1)以及酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。用于酵母宿主细胞的其他有用的终止子由罗马诺斯(Romanos)等人，1992，同上。
该控制序列还可以是在启动子下游并且在基因编码序列上游的mRNA稳定子区域，它增加该基因的表达。
适合的mRNA稳定子区的实例是从以下获得的：苏云金杆菌cryIIIA基因(WO 94/25612)和枯草芽孢杆菌SP82基因(化(Hue)等人，1995，细菌学杂志(Journal ofBacteriology)177:3465-3471)。
该控制序列还可以是前导子，一种对宿主细胞翻译很重要的非翻译mRNA区域。该前导子可操作地连接至编码木葡聚糖内糖基转移酶的多核苷酸的5’-末端。可以使用在宿主细胞中起作用的任何前导序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选前导序列是从米曲霉TAKA淀粉酶和构巢曲霉丙糖磷酸异构酶的基因获得。
适用于酵母宿主细胞的前导序列从以下各项的基因获得：酿酒酵母烯醇酶(ENO-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α因子、以及酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(ADH2/GAP)。
控制序列还可以是一种聚腺苷酸化序列，可操作地连接至该多核苷酸的3’-末端并且当转录时由宿主细胞识别为将聚腺苷酸残基添加至所转录的mRNA的信号的序列。可以使用在宿主细胞中起作用的任何多腺苷酸化序列。
用于丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列是从以下各项的基因中获得的：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合成酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉TAKA淀粉酶以及尖镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的聚腺苷酸化序列在郭(Guo)和谢尔曼(Sherman)，1995，分子细胞生物学(Mol.Cellular Biol.)15:5983-5990中得以描述。
控制序列也可以是编码与木葡聚糖内糖基转移酶的N-末端连接并指导多肽进入细胞的分泌通路的信号肽的信号肽编码区。多核苷酸的编码序列的5’-端可以固有地包含在翻译阅读框中与编码多肽的编码序列的区段天然地连接的信号肽编码序列。可替代地，编码序列的5’-端可以包含对于该编码序列而言是外源的信号肽编码序列。在编码序列不天然地包含信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可简单地替换天然的信号肽编码序列以便增强该多肽的分泌。然而，可以使用指导所表达多肽进入宿主细胞的分泌通路的任何信号肽编码序列。
用于细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下各项的基因获得的信号肽编码序列：芽孢杆菌属NCIB 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT、nprS、nprM)以及枯草芽孢杆菌prsA。西蒙纳(Simonen)和帕尔瓦(Palva)，1993，微生物学评论(Microbiological Reviews)57:109-137描述了另外的信号肽。
用于丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是获得自以下各项的基因的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉TAKA淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶V、柔毛腐质霉脂肪酶以及米黑毛霉天冬氨酸蛋白酶。
对于酵母宿主细胞有用的信号肽获得自以下项的基因：酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶。罗马诺斯(Romanos)等人，1992，见上文，描述了其他有用的信号肽编码序列。
控制序列还可以是编码位于一个木葡聚糖内糖基转移酶的N-末端的前肽的一种前肽编码序列。生成的多肽被称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可以通过催化切割或自身催化切割来自多肽原的前肽而转化为活性多肽。前肽编码序列可以从以下各项的基因获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(aprE)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprT)、嗜热毁丝霉漆酶(WO 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、以及酿酒酵母α-因子。
在信号肽序列和前肽序列二者都存在的情况下，该前肽序列定位成紧邻木葡聚糖内糖基转移酶的N-末端并且该信号肽序列定位成紧邻该前肽序列的N-末端。
不同的核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个便利的限制酶切位点以允许在这些位点处插入或取代编码该木葡聚糖内糖基转移酶的多核苷酸。可替代地，该多核苷酸可以通过将该多核苷酸或包括该多核苷酸的核酸构建体插入供表达的适当载体中来进行表达。在产生该表达载体时，该编码序列是位于该载体中，这样使得该编码序列与该供表达的适当控制序列可操作地连接。
重组表达载体可以是任何载体(例如，质粒或病毒)，其能够方便地进行重组DNA程序，并且能够引起多核苷酸的表达。载体的选择将典型地取决于该载体与有待引入该载体的宿主细胞的相容性。该载体可以是线性的或闭合的环状质粒。
该载体可以是自主复制载体，即，作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如，质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。该载体可包含任何用以保证自我复制的要素。可替代地，该载体可以是这样载体，当它被引入该宿主细胞中时，被整合到基因组中并且与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单一载体或质粒或两个或更多个载体或质粒(这些载体或质粒共同含有待引入宿主细胞的基因组中的总DNA)或转座子。
该载体优选包含允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是这样一种基因，该基因的产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、重金属抗性、营养缺陷型的原养型等。
细菌性选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因，或赋予抗生素抗性(例如氨比西林、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素或四环素抗性)的标记。用于酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于ADE2、HIS3、LEU2、LYS2、MET3、TRP1、以及URA3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于，adeA(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeB(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amdS(乙酰胺酶)、argB(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niaD(硝酸还原酶)、pyrG(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sC(硫酸腺苷基转移酶)、以及trpC(邻氨基苯甲酸合酶)、连同其等效物。优选在曲霉属细胞中使用的是构巢曲霉或米曲霉amdS和pyrG基因以及吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选在木霉属细胞中使用的是adeA、adeB、amdS、hph以及pyrG基因。
选择性标记可以是如在WO 2010/039889中描述的双选择性标记系统。在一个方面中，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
载体优选含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
对于整合到该宿主细胞基因组中，该载体可以依靠编码该木葡聚糖内糖基转移酶的多核苷酸序列或用于通过同源或非同源重组整合到该基因组中的该载体的任何其他元件。可替代地，该载体可以包含用于指导通过同源重组而整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置的另外的多核苷酸。为了增加在精确位置整合的可能性，这些整合的元件应包含足够数量的核酸，例如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、以及800至10,000个碱基对，这些碱基对与对应的靶序列具有高度的序列一致性以提高同源重组的可能性。这些整合元件可以是与宿主细胞的基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，这些整合元件可以是非编码多核苷酸或编码多核苷酸。另一个方面，该载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。
对于自主复制，载体可以进一步包含使该载体能够在所讨论的宿主细胞中自主复制的复制起点。复制起点可以是在细胞中起作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点(origin of replication)”或“质粒复制子(plasmid replicator)”意指使得质粒或载体可在体内复制的多核苷酸。
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pBR322、pUC19、pACYC177、以及pACYC184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pUB110、pE194、pTA1060、以及pAMβ1的复制起点。
用于在酵母宿主细胞中使用的复制起点的实例是2微米复制起点ARS1、ARS4、ARS1与CEN3的组合以及ARS4与CEN6的组合。
在丝状真菌细胞内有用的复制起点的实例是AMA1和ANS1(格姆斯(Gems)等人，1991，基因(Gene)98:61-67；卡伦(Cullen)等人，1987，核酸研究(Nucleic Acids Res.)15:9163-9175；WO 00/24883)。AMA1基因的分离和包括该基因的质粒或载体的构建可以根据披露于WO 00/24883中的方法完成。
可以向宿主细胞中插入多于一个拷贝的多核苷酸，以增加木葡聚糖内糖基转移酶的产量。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的增加的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择包含选择性标记基因的经扩增的拷贝的细胞，以及由此该多核苷酸的另外的拷贝。
用于连接以上所描述的元件以构建重组表达载体的程序是本领域的普通技术人员熟知的(参见，例如，萨姆布鲁克(Sambrook)等人，1989，见上文)。
宿主细胞可以是在重组产生木葡聚糖内糖基转移酶中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、海洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属以及链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于：弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属、以及脲原体属。
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于：嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚硬芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及苏云金杆菌细胞。
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于：不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌、以及浅青紫链霉菌细胞。
将DNA引入芽孢杆菌属细胞中可通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，张(Chang)和科恩(Cohen)，1979，分子遗传学与基因组学(Mol.Gen.Genet.)168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，杨格(Young)和斯皮宰曾(Spizizen)，1961，细菌学杂志(J.Bacteriol.)81:823-829；或杜拜努(Dubnau)以及大卫杜夫-阿贝尔森(Davidoff-Abelson)，1971，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)56:209-221)、电穿孔(参见例如，茂川(Shigekawa)和道尔(Dower)，1988，生物技术(Biotechniques)6:742-751)、或者接合(参见例如，克勒(Koehler)和索恩(Thorne)，1987，细菌学杂志169:5271-5278)。将DNA引入大肠杆菌细胞中可通过以下来实现：原生质体转化(参见例如，哈纳汗(Hanahan)，1983，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)166:557-580)或电穿孔(参见例如，道尔(Dower)等人，1988，核酸研究(Nucleic Acids Res.)16:6127-6145)。将DNA引入链霉菌属细胞中可通过以下来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，贡(Gong)等人，2004，叶线形微生物学(FoliaMicrobiol.)(Praha(布拉格))49:399-405)、接合(参见例如，马佐迪耶(Mazodier)等人，1989，细菌学杂志(J.Bacteriol.)171:3583-3585)、或转导(参见例如，伯克(Burke)等人，2001，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)98:6289-6294)。将DNA引入假单孢菌属细胞中可通过以下来实现：电穿孔(参见例如，蔡(Choi)等人，2006，微生物学方法杂志(J.Microbiol.Methods)64:391-397)或接合(参见例如，皮内多(Pinedo)和斯梅茨(Smets)，2005，应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)71:51-57)。将DNA引入链球菌属细胞中可通过以下来实现：天然感受态(参见，例如，佩里(Perry)和藏满(Kuramitsu)，1981，感染与免疫(Infect.Immun.)32:1295-1297)、原生质体转化(参见，例如，凯特(Catt)和乔力克(Jollick)，1991，微生物学(Microbios)68:189-207)、电穿孔(参见，例如，巴克利(Buckley)等人，1999，应用与环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)65:3800-3804)、或者接合(参见，例如，克莱威尔(Clewell)，1981，微生物学评论(Microbiol.Rev.)45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的用于将DNA引入宿主细胞中的任何方法。
宿主细胞还可以是真核细胞，如哺乳动物、昆虫、植物、或真菌细胞。
宿主细胞可以是真菌细胞。如在此使用的“真菌”包括子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)、以及接合菌门(Zygomycota)、连同卵菌门(Oomycota)和全部有丝分裂孢子真菌(如由霍克斯沃思(Hawksworth)等人在安斯沃思和拜斯比真菌词典(Ainsworth and Bisby’s Dictionary of The Fungi)，第8版，1995，国际应用生物科学中心(CAB International)，大学出版社(University Press)，英国剑桥(Cambridge，UK)中进行定义的)。
该真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如在此使用的“酵母”包括产子嚢酵母(内孢霉目)、产担子酵母和属于半知菌类(芽孢纲)的酵母。由于酵母的分类在将来可能有变化，出于本发明的目的，酵母应如酵母生物学和活动性(Biology and Activities of Yeast)(斯金纳(Skinner)、帕斯莫尔(Passmore)、以及达文波特(Davenport)编辑，应用细菌学学会讨论会(Soc.App.Bacteriol.Symposium)系列第9期，1980)所述地进行定义。
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属、汉逊酵母属、克鲁弗酵母属、毕赤酵母属、酵母属、裂殖酵母属、或耶氏酵母属细胞，如乳酸克鲁弗酵母(Kluyveromyces lactis)、卡尔酵母、酿酒酵母、糖化酵母、道格拉氏酵母、克鲁弗酵母、诺地酵母、卵形酵母、或解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)细胞。
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(Eumycota)和卵菌门的亚门(如由霍克斯沃思(Hawksworth)等人，1995，见上文所定义)的所有丝状形式。丝状真菌通常的特征在于由壳多糖、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖、以及其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)，而碳分解代谢可以是发酵的。
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢霉属、曲霉属、短梗霉属、烟管霉属(Bjerkandera)、拟腊菌属、金孢子菌属、鬼伞属、革盖菌属(Coriolus)、隐球菌属、线黑粉菌科(Filibasidium)、镰孢属、腐质霉属、梨孢菌属(Magnaporthe)、毛霉属、毁丝霉属、新美鞭菌属、链孢菌属、拟青霉属、青霉属、平革菌属、射脉菌属(Phlebia)、瘤胃壶菌属、侧耳属(Pleurotus)、裂褶菌属、篮状菌属、嗜热子囊菌属、梭孢壳属、弯颈霉属、栓菌属(Trametes)或木霉属细胞。
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(Bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(Ceriporiopsisaneirina)、卡内基拟蜡菌(Ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(Ceriporiopsisgilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(Ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(Ceriporiopsisrivulosa)、微红拟蜡菌(Ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispora)、狭边金孢子菌(Chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(Chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(Chrysosporium merdarium)、租金孢子菌、昆士兰金孢子菌(Chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(Chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(Coprinus cinereus)、毛革盖菌(Coriolushirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、柔毛腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙链孢菌、产紫青霉、黄孢平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、射脉菌(Phlebia radiata)、刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(Trametes villosa)、变色栓菌(Trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
可以通过涉及原生质体形成、原生质体转化以及以本身已知的一种方式进行细胞壁再生的一个过程来转化真菌细胞。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合程序在EP238023和约尔顿(Yelton)等人，1984，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)81:1470-1474以及科里蒂森(Christensen)等人，1988，生物/技术(Bio/Technology)6:1419-1422中描述。用于转化镰刀菌属物种的适合方法由马拉迪尔(Malardier)等人，1989，基因(Gene)78:147-156、以及WO 96/00787描述。酵母可以使用以下各文献中所描述的程序转化：贝克尔(Becker)和古伦特(Guarente)，在艾本尔森，J.N.(Abelson,J.N.)和塞蒙，M.I.(Simon,M.I.)编辑，酵母遗传学与分子生物学指南(Guide to Yeast Genetics andMolecular Biology)，酶学方法(Methods in Enzymology)，第194卷，第182-187页，学术出版社有限公司(Academic Press,Inc.)，纽约；埃托(Ito)等人，1983，细菌学杂志(J.Bacteriol.)153:163；及辛伦(Hinnen)等人，1978，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)75:1920。
所述宿主细胞使用本领域已知的方法在适合于产生所述木葡聚糖内糖基转移酶的营养培养基中培养。例如，可以通过摇瓶培养，或者在适合的培养基中并在允许该木葡聚糖内糖基转移酶表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养该细胞。该培养是使用本领域中已知的程序，在适合的营养培养基中发生，该培养基包含碳源和氮源及无机盐。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果木葡聚糖内糖基转移酶分泌到该营养培养基中，那么可直接从培养基中回收多肽。如果该木葡聚糖内糖基转移酶不被分泌，则可以从细胞裂解物中回收该物质。
可以使用特异性针对这些多肽的本领域已知的方法来检测该木葡聚糖内糖基转移酶。这些检测方法包括但不限于特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定该多肽的活性。
可以使用本领域中已知的方法回收该木葡聚糖内糖基转移酶。例如，该多肽可以通过常规程序，包括但不限于，收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀，从该营养培养基回收。在一个方面，回收包含多肽的整个发酵液。在一个优选方面，木葡聚糖内糖基转移酶产率可以通过随后在缓冲液或在缓冲洗涤剂溶液中洗涤细胞碎片以提取生物质相关的多肽来改进。
可以通过本领域中已知的多种程序来纯化该木葡聚糖内糖基转移酶以获得基本上纯的多肽，这些程序包括但不限于：色谱法(例如，离子交换色谱、亲和色谱、疏水作用色谱、复合型色谱、反相色谱、层析聚焦色谱、以及尺寸排阻色谱)、电泳程序(例如，制备型等电点聚焦)、差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、PAGE、膜过滤或提取(参见例如，蛋白纯化(Protein Purification)，詹森(Janson)和赖登(Ryden)编辑，VCH出版社(VCHPublishers)，纽约，1989)。在一个优选方面，木葡聚糖内糖基转移酶可以通过用木葡聚糖形成共价酰基酶中间体，随后与微晶纤维素沉淀或吸附到纤维素膜上进行纯化。然后通过添加木葡聚糖低聚物来解析共价中间体来影响多肽的释放(苏鲁瓦(Sulova)和法卡斯(Farkas)，1999，蛋白表达与纯化(Protein Expression and Purification)16(2):231-235，和斯蒂尔(Steele)和弗里(Fry)，1999，生物化学杂志(Biochemical Journal)340:207-211)。
洗涤剂和织物护理组合物和添加剂
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的洗涤剂组合物，其包括表面活性剂和(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的织物护理组合物，其包括表面活性剂和(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的洗涤剂添加剂，其包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
在另一方面，该洗涤剂组合物或织物护理组合物进一步包括一种或多种另外的清洁组合物组分。另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。
组分的选择取决于如下：有待改进的纺织品的类型、污渍的类型和/或程度、进行改进时的温度、以及洗涤剂产品的配制。尽管根据具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包括另外的功能性。
洗涤剂组合物的实例披露在WO 97/07202中。
木葡聚糖内糖基转移酶。在本发明的一个实施例中，可以将木葡聚糖内糖基转移酶以对应于以下的量添加至一种洗涤剂组合物中：每升的洗涤液0.001-200mg的蛋白，例如0.005-100mg的蛋白，优选0.01-50mg的蛋白，更优选0.05-20mg的蛋白，甚至更优选0.1-10mg的蛋白。
可以使用常规稳定剂使洗涤剂组合物中的木葡聚糖内糖基转移酶稳定化，这些稳定剂例如为多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、硼酸、或硼酸衍生物(例如，芳族硼酸酯、或苯基硼酸衍生物(如4-甲酰苯基硼酸)、或非离子表面活性剂(如TRITON))，并且该组合物可以如(例如)WO 92/19709和WO 92/19708中所述进行配制。
在一方面，将木葡聚糖内糖基转移酶、聚合木葡聚糖、和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物掺入到洗涤剂组合物中。在另一方面，将木葡聚糖内糖基转移酶、用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物掺入到洗涤剂组合物中。在另一方面，将木葡聚糖内糖基转移酶、用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和木葡聚糖低聚物掺入到洗涤剂组合物中。在另一方面，将木葡聚糖内糖基转移酶和用化学基团功能化的聚合木葡聚糖掺入到洗涤剂组合物中。在另一方面，将木葡聚糖内糖基转移酶和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物掺入到洗涤剂组合物中。
表面活性剂。洗涤剂组合物可以包括一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的或其混合物。在一个具体实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。这种或这些表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％的水平存在，例如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％。基于所希望的清洁应用来选择这种或这些表面活性剂，并且这种或这些表面活性剂包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包括按重量计从约1％至约40％，例如从约5％至约30％(包括从约5％至约15％)、或从约20％至约25％的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地，直链烷基苯磺酸盐(LAS)，LAS的异构体，支链烷基苯磺酸盐(BABS)，苯基链烷磺酸盐，α-烯烃磺酸盐(AOS)，烯烃磺酸盐，链烯烃磺酸盐，链烷-2,3-二基双(硫酸盐)，羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐，烷基硫酸盐(AS)(例如十二烷基硫酸钠(SDS))，脂肪醇硫酸盐(FAS)，伯醇硫酸盐(PAS)，醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)，仲链烷磺酸盐(SAS)，石蜡烃磺酸盐(PS)，酯磺酸盐，磺化的脂肪酸甘油酯，α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))，烷基琥珀酸或烯基琥珀酸，十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)，氨基酸的脂肪酸衍生物，磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯，以及它们的组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约1％至约40％的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0.2％至约40％的非离子型表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、约8％至约12％，约3％至约10％、或约3％至约5％。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)，烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)，烷基酚乙氧基化物(APE)，壬基酚乙氧基化物(NPE)，烷基多糖苷(APG)，烷氧基化胺，脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)，脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)，乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)，丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)，多羟基烷基脂肪酸酰胺，或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)，或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))，连同在和商品名下可获得的产品及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约1％至约40％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，例如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约1％至约40％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。
助水溶物。助水溶物是溶解水溶液中的疏水化合物(或相反地，非极性环境中的极性物质)的化合物。一般地，助水溶物具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲性质，如由表面活性剂已知的)。然而，助水溶物的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如由霍奇登(Hodgdon)和卡勒(Kaler)，2007，胶体&界面科学新见(Current Opinion in Colloid&Interface Science)12:121-128的综述。助水溶物并不显示在形成胶束、薄层或其他明确界定的中间相(meso-phase)的表面活性剂和脂质中所见的临界浓度(高于此浓度则发生自身聚集)。相反，许多助水溶物显示连续类型的聚集过程，其中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，很多助水溶剂改变了包括极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。助水溶物在去污剂组合物中的使用允许例如更浓缩的表面活性剂制剂(如在通过去除水来压缩液体去污剂的工艺中)，而不诱发相分离或高粘度等不期望的现象。
去污剂可以含有按重量计0-5％、例如0.5％-约5％或约3％-约5％的助水溶物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂。该洗涤剂组合物可以包括按重量计0％-65％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂、或其混合物。在餐具洗涤去污剂中，增洁剂的水平一般为40％-65％，特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg的水溶性复合物的螯合剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共-助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氨基三乙醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)及其组合。
洗涤剂组合物还可以包括按重量计0-65％的洗涤剂共-助洗剂、或其混合物。洗涤剂组合物可以只包括共助洗剂，或结合助洗剂，例如沸石助洗剂。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐，螯合剂，例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐，以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四-(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)、磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。进一步的示例性增洁剂和/或共增洁剂在，例如，WO 2009/102854和美国专利号5,977,053中描述。
漂白系统。该洗涤剂可以包含按重量计0％-40％，例如约5％至约25％的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何漂白系统。合适的漂白体系组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢来源例如过碳酸钠和过硼酸钠、预形成的过酸及其混合物。合适的预形成的过酸包括但不限于过氧羧酸和盐、过碳酸和盐、过亚胺酸和盐、过一硫酸和盐例如臭氧(R)、及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括基于过氧化物的漂白系统，这些系统可以包括例如与过酸形成漂白活化剂组合的无机盐，包括碱金属盐，例如过硼酸盐(通常是单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐。术语漂白活化剂在此意指一种与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。可用于此处的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧月桂酸、4-(十二酰基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰基氧基)-苯磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且在那个家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。可替代地，漂白体系可以包含例如酰胺、亚胺或砜类型的过酸。漂白系统还可以包括过酸，例如6-(苯二甲酰亚氨基)过己酸(PAP)。漂白系统还可以包括一种漂白催化剂。示例性漂白系统描述于，例如，WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以，例如，是磺化的酞菁锌
聚合物。该洗涤剂可以包含按重量计0-10％，例如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水修饰CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于WO 2006/130575中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物固色剂。本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当该织物与一种洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包括该洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变该织物的色彩。荧光增白剂发出至少某些可见光。相比之下，因为它们吸收至少一部分可见光光谱，所以织物调色剂改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、及其混合物，例如描述于WO2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276以及EP 1876226中。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是特别优选的。适合的调色剂还披露于WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
另外的酶。洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包括一种或多种另外的酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、碳水化物酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶(例如，漆酶)和/或过氧化物酶。
一般而言，一种或多种酶的特性应与选定的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶和非酶成分的相容性，等等)，并且应以有效量存在。
纤维素酶：适合的纤维素酶以非限制性方式包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。适合的纤维素酶包括来自支顶孢属、芽胞杆菌属、镰孢霉属、腐质霉、假单胞菌属、和梭孢壳菌属的纤维素酶，例如，披露于美国专利号4,435,307、美国专利号5,648,263、美国专利号5,691,178、美国专利号5,776,757、和WO 89/09259中的产自特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰刀菌的真菌纤维素酶。
尤其适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、和WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例为纤维素酶变体，例如在WO 94/07998、EP 0 531 315、美国专利号5,457,046、美国专利号5,686,593、美国专利号5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307以及PCT/DK98/00299中描述的那些。
可商购的纤维素酶包括CelluzymeTM和CarezymeTM(诺维信公司(Novozymes A/S))、ClazinaseTM、和Puradax HATM(杰能科国际有限公司(Genencor InternationalInc.))、以及KAC-500(B)TM(花王株式会社(Kao Corporation))。
蛋白酶：适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源的。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。它们可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以是S1家族(如胰蛋白酶)或S8家族(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以是来自例如家族M4的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，例如来自M5、M7或M8家族的那些。
术语“枯草杆菌酶”是指根据斯艾森(Siezen)等人，1991，蛋白质工程学(ProteinEng.)4:719-737和斯艾森(Siezen)等人，1997，蛋白质科学(Protein Science)6:501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的一个亚组。枯草杆菌酶可以划分为6个亚部，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶(Thermitase)家族、蛋白酶K家族、羊毛硫抗生素肽酶家族、Kexin家族和Pyrolysin家族。
枯草杆菌酶的实例是来源于芽孢杆菌属的那些，例如描述于美国专利号7,262,042和WO 2009/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于WO 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶迟缓(lentus)、枯草杆菌蛋白酶诺和(Novo)、嘉士伯枯草杆菌蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于WO 93/18140中的蛋白酶PD138。其他有用的蛋白酶可以是描述于WO 01/16285、WO 02/26024以及WO 02/16547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如，猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于WO 89/06270、WO 94/25583和WO 2005/040372中)，以及来源于纤维单胞菌(Cellumonas)的糜蛋白酶(描述于WO 2005/052161和WO 2005/052146中)。
另外的优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌DSM 5483的碱性蛋白酶(如在WO 95/23221中所述)、以及其变体(在WO 92/21760、WO 95/23221、EP 1921147以及EP 1921148中描述的)。
金属蛋白酶的实例是描述于WO 2007/044993中的中性金属蛋白酶，例如来源于解淀粉芽孢杆菌的那些。
有用的蛋白酶的实例是于以下各项中的变体：WO 92/19729、WO 96/034946、WO98/20115、WO 98/20116、WO 99/011768、WO 01/44452、WO 2003/006602、WO 2004/03186、WO2004/041979、WO 2007/006305、WO 2011/036263、WO 2011/036264，尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN'进行编号。更优选地，这些枯草杆菌酶变体可以包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、和T274A(使用BPN’进行编号)。
适合的可商购蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：DuralaseTM、DurazymTM、Ultra、Ultra、 Ultra、Ultra、以及(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些： Purafect PreferenzTM、Purafect Purafect Purafect EffectenzTM、以及(Danisco/DuPont(丹尼斯克/杜邦公司))、AxapemTM(吉斯特布罗卡斯公司(Gist-BrocasesN.V.))、BLAP(序列示于美国专利号5,352,604的图29中)及其变体(汉高股份(Henkel AG))以及来自花王株式会社(Kao)的KAP(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
脂肪酶和角质酶：适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的或蛋白工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如，如描述于EP258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如特异腐质霉(WO 96/13580)；来自假单胞菌属的菌株的脂肪酶(这些中的一些现在改名为伯克霍尔氏菌属)，例如产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、假单胞菌属菌株SD705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 2010/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 2010/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(美国专利5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO 2011/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 2011/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO2011/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO 2011/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 2012/137147)。
其他实例是例如EP 407225、WO 92/05249、WO 94/01541、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/30744、WO 95/35381、WO 95/22615、WO 96/00292、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/34450、WO 00/60063、WO 01/92502、WO 2007/87508以及WO 2009/109500中所描述的那些脂肪酶变体。
优选的商业化脂肪酶产品包括LipolaseTM、LipexTM；LipolexTM和LipocleanTM(诺维信公司)，Lumafast(来自杰能科公司(Genencor))以及Lipomax(来自吉斯特布罗卡德斯公司(Gist-Brocades))。
其他实例是有时称为酰基转移酶或过水解酶的脂肪酶，例如与南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A具有同源性的酰基转移酶(WO 2010/111143)、来自耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(WO 2005/56782)、来自CE7家族的过水解酶(WO 2009/67279)以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体(特别是来自亨斯迈纺织品染化有限公司(Huntsman Textile Effects Pte.Ltd.)的商业产品Gentle Power Bleach中所用的S54V变体)(WO 2010/100028)。
淀粉酶：可以用于本发明中的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以具有细菌或真菌起源。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。淀粉酶包括例如获得自芽孢杆菌属的α-淀粉酶，例如GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌具体株系的α-淀粉酶。
适合的淀粉酶包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:3的淀粉酶或其与SEQ IDNO:3具有90％序列一致性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、和WO 97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，例如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
其他有用的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。
其他适合的淀粉酶是包含示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或具有90％序列一致性的其变体。这一杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些：M197T；H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
另外有用的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ IDNO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO：6的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。
另外有用的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304以及476中的一个或多个中具有取代的那些。
其他有用的淀粉酶是具有WO 2008/153815中的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 2008/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列一致性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列一致性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211以及264。
另外的有用的淀粉酶是具有WO 2009/061380中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQ ID NO:2具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端的截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K和/或位置R180和/或S181或T182和/或G183的缺失。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的并且任选地进一步在位置243处包括取代和/或在位置180和/或位置181处包括缺失。
另外有用的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28，R118，N174；R181，G182，D183，G184，G186，W189，N195，M202，Y298，N299，K302，S303，N306，R310，N314；R320，H324，E345，Y396，R400，W439，R444，N445，K446，Q449，R458，N471，N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有R118K、N195F、R320K及R458K的取代的变体，以及另外在选自下组的一个或多个位置中具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是例如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078及WO 2013/001087中的那些淀粉酶变体。
可商购的淀粉酶是DuramylTM、TermamylTM、FungamylTM、Stainzyme TM、StainzymePlusTM、NatalaseTM、Liquozyme X及BANTM(来自诺维信公司)，以及RapidaseTM、PurastarTM/EffectenzTM、Powerase及Preferenz S100(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司(GenencorInternational Inc./DuPont))。
过氧化物酶/氧化酶：适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属，例如来自灰盖鬼伞的过氧化物酶，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602、以及WO 98/15257中描述的。
可商购的过氧化物酶包括GuardzymeTM(诺维信公司)。
该一种或多种洗涤剂酶可以通过添加包含一种或多种酶的单独的添加剂，或通过添加包括所有这些酶的组合添加剂而被包括于洗涤剂组合物中。
本发明的洗涤剂添加剂，即单独添加剂或组合添加剂，可以被配制为，例如颗粒、液体、浆体等。优选的洗涤剂添加剂配制品是颗粒，尤其是非尘颗粒；液体，尤其是稳定化的液体；或浆体。
可以产生非粉尘颗粒，如美国专利号4,106,991以及4,661,452中所披露，并且这些颗粒可任选地通过在本领域中已知的方法来涂布。蜡状包衣材料的实例是平均分子量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，PEG)；具有16到50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚(ethoxylatednonylphenol)；具有15至80个环氧乙烷单位的乙氧基化脂肪族醇，其中醇含有12至20个碳原子；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的单-和双-和三甘油酯。适用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在GB 1483591中给出。例如，液体酶制品可以根据已有技术通过加入多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸来稳定。受保护的酶可以根据EP 238,216中披露的方法制备。
辅料。还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、羧甲纤维素(CMC)和/或多元醇如丙二醇)、织物整理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢助悬剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在普通技术人员的技术内。
分散剂。本发明的洗涤剂组合物还可以含有分散剂。具体地说，粉状洗涤剂可以包括分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包括至少两个羧基，这两个羧基被不超过两个碳原子彼此分开。适合的分散剂例如描述于粉状洗涤剂，表面活性剂科学系列(Surfactant Science Series)，第71卷中，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker)。
染料转移抑制剂。本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、和聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当存在于主题组合物中时，染料转移抑制剂可以按组合物重量计的以下水平存在：从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％。
荧光增白剂。本发明的洗涤剂组合物还可以包含另外的组分，这些组分可以给正在清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。其中增亮剂优选以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和双苯-二苯乙烯衍生物。二氨基芪-磺酸衍生物类型的荧光增白剂的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-均-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-均-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴–嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。另一个荧光增白剂是可商购的Parawhite KX，由派拉蒙矿物与化学(Paramount Minerals and Chemicals)，孟买，印度供应。适合用于在本发明中使用的其他荧光分子包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。
适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
污物释放聚合物。本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污物释放聚合物，这些聚合物帮助从织物(如棉布和基于聚酯的织物)移除污物，特别是从基于聚酯的织物移除疏水性污物。污物释放聚合物可以是，例如，非离子型或阴离子型对苯二甲酸基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、和聚酯聚酰胺。参见，例如，粉状洗涤剂中第7章，表面活性剂科学系列(Surfactant Science Series)，第71卷中，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker)。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和连接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包括如WO2009/087523中描述的一个聚烯属烃亚胺结构或一个聚烷醇胺结构。此外，随机接枝共聚物是适合的污物释放聚合物。适合的接枝共聚物描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO 2006/113314中。其他污物释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如EP 1867808或WO 2003/040279中描述的修饰纤维衍生物。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。其他适合的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、兼性离子改性的纤维素及其混合物。另外适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉淀剂。本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸和马来酸的共聚物、和乙氧基化的聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的基于纤维素的聚合物还可以用作抗再沉积剂。
其他适合的辅料。其他适合的辅料包括但不限于：防沫剂、防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填充剂、泡沫调节剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
该洗涤剂组合物可以处于任何常规形式，例如条、均匀的片剂、具有两个或更多个层的片剂、具有一个或多个室的袋、规则的或压缩的粉末、颗粒、膏、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体。
小袋可以被配置为单个或多个的室，其可以是适用于保存该组合物的任何形式、任何形状、和任何材料，例如不允许该组合物在与水接触之前从该小袋中释放出。袋由封装内体积的水溶性膜制成。该内部体积可以被分成小袋的区室。优选的薄膜是高分子材料，优选被制成薄膜或薄片的形式的聚合物。优选的聚合物和共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选的是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，薄膜中聚合物例如PVA的水平是至少约60％。优选的平均分子量典型地将是大约20,000至大约150,000。膜还可以是共混组合物，该共混组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSol LLC公司销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同。参考文献：(US 2009/0011970)。
可以由水可溶的袋中或片剂的不同层中的室来将洗涤剂成分物理地彼此分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个隔室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
非单位剂量的液体或凝胶洗涤剂可以是水性的，典型地包含按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达约70％的水、高达约65％的水、高达约55％的水、高达约45％的水、或高达约35％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体或凝胶中。含水液体或凝胶洗涤剂可以含有从0-30％的有机溶剂。液体或凝胶洗涤剂可以是非水性的。
可以如WO 2009/092699、EP 1705241、EP 1382668、WO 2007/001262、美国专利号6,472,364、WO 2004/074419或WO 2009/102854中所描述的制备颗粒洗涤剂。其他有用的洗涤剂配制品描述于WO 2009/124162、WO 2009/124163、WO 2009/117340、WO 2009/117341、WO 2009/117342、WO 2009/072069、WO 2009/063355、WO 2009/132870、WO 2009/121757、WO2009/112296、WO 2009/112298、WO 2009/103822、WO 2009/087033、WO 2009/050026、WO2009/047125、WO 2009/047126、WO 2009/047127、WO 2009/047128、WO 2009/021784、WO2009/010375、WO 2009/000605、WO 2009/122125、WO 2009/095645、WO 2009/040544、WO2009/040545、WO 2009/024780、WO 2009/004295、WO 2009/004294、WO 2009/121725、WO2009/115391、WO 2009/115392、WO 2009/074398、WO 2009/074403、WO 2009/068501、WO2009/065770、WO 2009/021813、WO 2009/030632、WO 2009/015951、WO 2011/025615、WO2011/016958、WO 2011/005803、WO 2011/005623、WO 2011/005730、WO 2011/005844、WO2011/005904、WO 2011/005630、WO 2011/005830、WO 2011/005912、WO 2011/005905、WO2011/005910、WO 2011/005813、WO 2010/135238、WO 2010/120863、WO 2010/108002、WO2010/111365、WO 2010/108000、WO 2010/107635、WO 2010/090915、WO 2010/033976、WO2010/033746、WO 2010/033747、WO 2010/033897、WO 2010/033979、WO 2010/030540、WO2010/030541、WO 2010/030539、WO 2010/024467、WO 2010/024469、WO 2010/024470、WO2010/025161、WO 2010/014395、WO 2010/044905、WO 2010/145887、WO 2010/142503、WO2010/122051、WO 2010/102861、WO 2010/099997、WO 2010/084039、WO 2010/076292、WO2010/069742、WO 2010/069718、WO 2010/069957、WO 2010/057784、WO 2010/054986、WO2010/018043、WO 2010/003783、WO 2010/003792、WO 2011/023716、WO 2010/142539、WO2010/118959、WO 2010/115813、WO 2010/105942、WO 2010/105961、WO 2010/105962、WO2010/094356、WO 2010/084203、WO 2010/078979、WO 2010/072456、WO 2010/069905、WO2010/076165、WO 2010/072603、WO 2010/066486、WO 2010/066631、WO 2010/066632、WO2010/063689、WO 2010/060821、WO 2010/049187、WO 2010/031607、和WO 2010/000636。
纺织品涂层和后处理组合物
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的纺织品涂层，其包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
本发明还涉及针对纤维素纺织材料的纺织品后处理，其包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
在纺织品生产期间或之后，在衣服、家具覆盖饰物或布匹生产期间，或者在衣服、家具覆盖饰物或布匹生产之后，该纺织品涂层和后处理组合物可以用于纺织品、织物、家具覆盖饰物、布匹和衣服。
在一个实施例中，该纺织品涂布和后处理组合物进一步包括一种或多种另外的纺织品涂布组合物分组。另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。
聚合物：本发明的纺织品涂覆组合物还可以包括一种或多种聚合物，包括但不限于：聚乙烯乙酸脂、聚氯乙烯、丙烯酸、非离子丙烯酸、聚氨酯、苯乙烯-丁二烯、聚合弹性体、聚四氟乙烯、液体硅橡胶、室温硫化。
其他组分：本发明的该纺织品涂覆组合物还可以包括但不限于：增塑剂(例如，磷酸酯类增塑剂、邻苯二甲酸酯类增塑剂、等等)、催化剂(例如，铂、锡)、锑、锡、卤素、甲醛、等等。
通过以下实例进一步描述本发明，但不应将其理解为对本发明范围的限制。
实例
培养基和溶液
COVE琼脂平板由以下各项构成：342.3g的蔗糖、252.54g的CsCl、59.1g的乙酰胺、520mg的KCl、520mg的MgSO4·7H2O、1.52g的KH2PO4、0.04mg的Na2B4O7·10H2O、0.4mg的CuSO4-5H2O、1.2mg的FeSO4·7H2O、0.7mg的MnSO4·2H2O、0.8mg的Na2MoO4·2H2O、10mg的ZnSO4·7H2O、25g的纯净琼脂、以及加至1升的去离子水。
LB培养基由以下各项构成：10g的胰蛋白胨、5g的酵母提取物、5g的NaCl、以及去离子水补足至1升。
LB板由以下各项构成：10g的胰蛋白胨、5g的酵母提取物、5g的NaCl、15g的细菌琼脂(bacteriological agar)、以及加至1升的去离子水。
基本培养基琼脂板由以下各项构成：342.3g的蔗糖、10g的葡萄糖、4g的MgSO4·7H20、6g的NaNO3、0.52g的KCl、1.52g的KH2PO4、0.04mg的Na2B4O7·10H2O、0.4mg的CuSO4·5H2O、1.2mg的FeSO4·7H2O、0.7mg的MnSO4·2H2O、0.8mg的Na2MoO4·2H2O、10mg的ZnSO4·7H2O、500mg的柠檬酸、4mg的D-生物素、20g的纯净琼脂、以及加至1升的去离子水。
合成的、缺少尿苷的确定成分培养基由18mg的腺嘌呤半硫酸盐、76mg的丙氨酸、76mg的精氨酸盐酸盐、76mg的天冬酰胺一水合物、76mg的天门冬氨酸、76mg的半胱氨酸盐酸盐一水合物、76mg的谷氨酸单钠盐、76mg的谷氨酰胺、76mg的甘氨酸、76mg的组氨酸、myo-76mg的肌醇、76mg的异亮氨酸、380mg的亮氨酸、76mg的赖氨酸单盐酸盐、76mg的蛋氨酸、8mg的对-氨基苯甲酸钾盐、76mg的苯丙氨酸、76mg的脯氨酸、76mg的丝氨酸、76mg的苏氨酸、76mg的色氨酸、76mg的酪氨酸二钠盐、76mg的缬氨酸、以及加至1升的去离子水。
TAE缓冲液由以下各项构成：4.84g的Tris碱、1.14ml的冰醋酸、2ml的0.5M EDTA(pH 8.0)、以及补足至1升的去离子水。
TBE缓冲液由以下各项构成：10.8g的Tris碱、5.5g的硼酸、4ml的0.5M EDTA(pH8.0)、以及补足至1升的去离子水。
2XYT加氨比西林板由以下构成：16g的胰蛋白胨、10g的酵母提取物、5g的氯化钠、15g的细菌琼脂(Bacto agar)、以及去离子水补足至1升。在高压蒸汽处理的培养基回火到55℃后，添加1ml的100mg/ml的氨比西林。
YP+2％葡萄糖培养基由10g的酵母提取物、20g的蛋白胨、20g的葡萄糖、以及补足至1升的去离子水构成。
YP+2％麦芽糊精培养基由10g的酵母提取物、20g的蛋白胨、20g的麦芽糊精、以及补足至1升的去离子水构成。
实例1：红豆木葡聚糖内糖基转移酶16的制备
根据以下描述的方案，红豆木葡聚糖内糖基转移酶16(VaXET16；SEQ ID NO:1[天然DNA序列]、SEQ ID NO:2[合成DNA序列]、和SEQ ID NO:3[推导的氨基酸序列]；还称为XTH1)重组产生于米曲霉MT3568中。米曲霉MT3568是米曲霉JaL355的amdS(乙酰胺酶)破坏的基因衍生物(WO 2002/40694)，其中通过用pyrG基因破坏米曲霉amdS基因恢复pyrG营养缺陷型。
构建载体pDLHD0012以在米曲霉中多拷贝表达VaXET16基因。使用大引物克隆，通过合并如下两种DNA片段来产生质粒pDLHD0012：包含VaXET16ORF和与载体pBM120具有同源性的侧翼序列(US 20090253171)的片段1，和由载体pBM120的反向PCR扩增子组成的片段2。
使用以下所示的引物613788(正义)和引物613983(反义)扩增片段1。这些引物被设计成包含与载体pBM120同源的序列的侧翼区(小写)，用于PCR片段之间的无连接克隆。
引物613788(正义)：
ttcctcaatcctctatatacacaactggccATGGGCTCGTCCCTCTGGAC(SEQ ID NO:7)
引物613983(反义)：
tgtcagtcacctctagttaattaGATGTCCCTATCGCGTGTACACTCG(SEQ ID NO:8)
片段1在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的包括在Sac I和Kpn I位点之间所克隆的VaXET16合成基因(SEQ ID NO:3[合成DNA序列])的载体pMA、0.5μl的DNA聚合酶(新英格兰生物实验室公司，伊普斯威奇，马萨诸塞州，美国)、20pmol的引物613788、20pmol的引物613983、1μl的10mM dNTP、10μl的5X HF缓冲液(新英格兰生物实验室公司，伊普斯威奇，马萨诸塞州，美国)、和35.5μl的水构成。在(Eppendorf AG公司，汉堡，德国)中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；以及30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续30秒。将得到的0.9kb PCR产物(片段1)用1μl的Dpn I(普洛麦格公司(Promega)，菲奇堡，威斯康辛州、美国)进行处理，以去除质粒模板DNA。将该Dpn I直接添加到PCR管中，良好混合，并且在37℃下孵育60分钟，并且然后根据制造商的说明，使用PCR纯化试剂盒(凯杰公司(QIAGEN Inc.)，巴伦西亚，加利福尼亚州，美国)进行柱纯化。
使用以下所示的引物613786(正义)和613787(反义)扩增片段2。
613786(正义)：
taattaactagaggtgactgacacctggc(SEQ ID NO:9)
613787(反义)：
catggccagttgtgtatatagaggattgagg(SEQ ID NO:10)
片段2在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的质粒pBM120、0.5μl的DNA聚合酶、20pmol的引物613786、20pmol的引物613787、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和35.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；以及30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续4分钟。将得到的6.9kb PCR产物(片段2)用1μl的Dpn I进行处理，以去除质粒模板DNA。将该Dpn I直接添加到PCR管中，良好混合，并且在37℃下孵育60分钟，并且然后根据制造商的说明，使用PCR纯化试剂盒进行柱纯化。
使用大引物克隆，使用以下程序来合并两个PCR片段。将片段1和2通过PCR在反应中合并，该反应由5μl的各自纯化的PCR产物、0.5μl的DNA聚合酶、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和28.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；以及40个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续4分钟。然后，根据制造商的说明，将2μl得到的PCR产物DNA转化到大肠杆菌ONETOP10电转化感受态细胞(生命技术公司，格兰德岛，纽约，美国)中。将5μl的转化细胞散布于每ml补充有100μg氨比西林的LB板上，并且在37℃下孵育过夜。将单个转化体挑入每ml补充有100μg的氨比西林的3ml的LB培养基中，并且在37℃下在250rpm的振荡下生长过夜。使用旋转迷你制备型试剂盒(凯杰公司(QIAGENInc.)，巴伦西亚，加利福尼亚州，美国)，将质粒DNA从菌落中进行纯化。将使用3130XL遗传分析仪(应用生物系统公司(Applied Biosystems)，福斯特城，加利福尼亚州，美国)的DNA测序用来确认最终质粒pDLHD0012中两种片段中的每种的存在(图1)。
根据以下方案，将米曲霉菌株MT3568用包括VaXET16基因的质粒pDLHD0012进行转化。将约2-5x 107孢子的米曲霉菌株MT3568接种于500ml摇瓶中的100ml的YP+2％葡萄糖培养基中，并且在28℃和110rpm下孵育过夜。将10ml的过夜培养物在125ml无菌真空滤器中过滤，并且将菌丝用50ml的0.7M KCl-20mM CaCl2洗涤两次。将剩余液体通过真空过滤去除，留下垫在滤器上。将菌丝体再悬浮于10ml的0.7M KCl-20mM CaCl2中，并且转移至无菌125ml摇瓶中，该摇瓶包含20mg的200G(诺维信瑞士股份公司(NovozymesSwitzerland AG)，Neumatt，瑞士)/ml和0.2mg的几丁质酶(西格玛奥德里奇，圣路易斯，密苏里州，美国)/ml(在10ml的0.7M KCl-20mM CaCl2中)。将该混合物在37℃和100rpm下孵育30-90分钟，直到从菌丝体中产生原生质体。将该原生质体混合物通过衬有(Calbiochem公司，圣迭哥，加利福尼亚州，美国)的无菌漏斗进行过滤，到无菌50毫升塑料离心管中，以除去菌丝体碎片。将在中的碎片彻底地用0.7M KCl-20mM CaCl2进行洗涤并且在2500rpm(537x g)下，在20℃-23℃下，离心10分钟。去除该上清液，并且将原生质体球粒再悬浮于20ml的1M山梨醇-10mM Tris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2中。将该步骤重复两次，并且将最终的原生质体球粒再悬浮于1M山梨醇-10mMTris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2中，以获得2x 107/ml的最终原生质体浓度。
将2微克的pDLHD0012添加至无菌的2ml塑料离心管的底部。然后将100μl的原生质体添加至管中，随后添加在10mM Tris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2中的300μl的60％PEG-4000。将该管手动地缓和地混合，并且在37℃下孵育30分钟。将添加2ml的1M山梨糖醇-10mMTris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2添加到每个转化中，并且将该混合物转染到150mm COVE琼脂板上。将转化板在34℃下孵育直到菌落出现。
挑选21个转化体菌落到新鲜的COVE琼脂平板，并且在34℃下培养4天，直到转化体形成孢子。新鲜孢子转染到48孔深孔板，这些板包含2ml的YP+2％麦芽糊精，覆盖有可透气密封件，并且在没有振荡下在34℃下生长4天。在4天生长后，将培养基的样品针对木葡聚糖内糖基转移酶活性使用碘染色测定并且针对木葡聚糖内糖基转移酶表达通过SDS-PAGE来测定。
根据以下方案，针对木葡聚糖内糖基转移酶活性进行碘染色测定。在96孔板中，将5μl培养液添加到5μl的木葡聚糖(麦格酶公司，布雷，英国)(5mg/ml在水中)、20μl的木葡聚糖低聚物(麦格酶公司，布雷，英国)(5mg/ml在水中)、和10μl的400mM柠檬酸钠pH 5.5的混合物中。将反应混合物在37℃下孵育30分钟，用包含14％(w/v)Na2SO4、0.2％KI、100mM HCl、和1％碘(I2)的200μl溶液进行淬灭，在黑暗中孵育30分钟，并且然后在620nm的酶标仪中测量吸光度。该测定证实了来自若干转化体的木葡聚糖内糖基转移酶的存在。
使用8％-16％无染色SDS-PAGE凝胶(伯乐实验室有限公司，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)进行SDS-PAGE，并且使用以下设置，将该凝胶用无染色成像仪(伯乐实验室有限公司，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)成像：5分钟活化，自动成像曝光(强条带)，高亮饱和像素＝ON，颜色＝考马斯酸性染料，和带检测、分子量分析和报告禁用。SDS-PAGE分析指示出若干转化体表达与VaXET16对应的约32kDa蛋白。
实例2：构建作为酵母表达质粒载体的质粒pMMar27
构建质粒pMMar27，用于表达酵母中的土生梭孢壳霉Cel6A纤维二糖水解酶II。该质粒产生自酵母表达载体的谱系：质粒pMMar27构建自质粒pBM175b；质粒pBM175b构建自质粒pBM143b(WO 2008/008950)和质粒pJLin201；并且质粒pJLin201构建自pBM143b。
除紧邻pBM143b中疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶变体基因的下游的Xba I位点突变为独特的NheI位点以外，质粒pJLin201与pBM143b相同。使用II XL定点诱变试剂盒(Stratagenee公司，拉荷亚，加州，美国)将pBM143b中的Xba I序列(TCTAGA)变为Nhe I序列(gCTAGc)。以下示出了用来突变该位点的引物。
引物999551(正义)：
5’-ACATGTCTTTGATAAgCTAGcGGGCCGCATCATGTA-3’(SEQ ID NO:11)
引物999552(反义)：
5’-TACATGATGCGGCCCgCTAGcTTATCAAAGACATGT-3’(SEQ ID NO:12)
小写代表突变的核苷酸。
最终体积为50μl的扩增反应由以下各项构成：125ng的以上每种引物、20ng的pBM143b、1X反应缓冲液(Stratagene公司，拉荷亚，加利福尼亚州，美国)、3μl的(Stratagene公司，拉荷亚，加利福尼亚州，美国)、1μl的dNTP混合物、以及1μl的2.5单元/ml Pfu Ultra HF DNA聚合酶。使用热循环程序进行该反应，程序为1个循环，在95℃下，持续1分钟；18个循环，每个循环在95℃下持续50秒，60℃持续50秒，和68℃持续6分钟6秒；以及1个循环，在68℃下，持续7分钟。在PCR后，将该管置于冰上2分钟。向扩增反应中直接添加一微升的Dpn I，并且在37℃下孵育1小时。根据制造商的说明，使用2μl体积的DpnI消化的反应来转化大肠杆菌高效感受态细胞(Stratagene公司，拉荷亚，加利福尼亚州，美国)。在2XYT加氨比西林板上对大肠杆菌转化体进行选择。使用9600，将质粒DNA从转化体中的若干分离。通过限制性酶切和测序分析来确认具有所希望的Nhe I变化的一个质粒，并且指定为质粒pJLin201。为了消除由定点突变引入的可能的PCR错误，通过将含Nhe I位点的片段克隆回质粒pBM143b中来构建质粒pBM175b。简言之，将质粒pJLin201用Nde I和Mlu I进行消化，并且将得到的片段克隆到之前用相同的酶使用快速连接试剂盒(罗氏诊断公司(Roche Diagnostics Corporation)，印第安纳波利斯，印第安纳州，美国)消化的pBM143b中。然后，将7μl的Nde I/Mlu I消化的pJLin201片段和1μl的消化的pBM143b与2μl的5X DNA稀释液(罗氏诊断公司，印第安纳波利斯，印第安纳州，美国)、10μl的2X T4DNA连接缓冲液(罗氏诊断公司，印第安纳波利斯，印第安纳州，美国)、和1μl的T4DNA连接酶(罗氏诊断公司，印第安纳波利斯，印第安纳州，美国)进行混合，并且在室温下孵育15分钟。将2微升的连接转化到XL1-蓝亚克隆-级感受态细胞(Stratagene公司，拉荷亚，加利福尼亚州，美国)细胞并且散布于2XYT加氨比西林板上。使用9600从若干转化体中纯化质粒DNA，并使用3130XL遗传分析仪通过DNA测序进行分析，以鉴定含有所希望的构巢曲菌pyrG插入物的质粒。将一个具有预期的DNA序列的质粒指定为pBM175b。
质粒pMMar27构建自pBM175b和具有设计用于插入所消化pBM175b的突出端的土生梭孢壳霉Cel6A纤维二糖水解酶II的扩增的基因。在CUP I启动子的控制下包含疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶变体基因的质粒pBM175b包含独特的Hind III和Nhe I位点，来去除脂肪酶基因。将质粒pBM175用这些限制性内切酶进行消化，以去除脂肪酶基因。在消化后，将空载体通过使用TBE缓冲液的1.0％琼脂糖凝胶电泳进行分离，其中将大约5,215bp的片段从凝胶切离，并且使用凝胶提取试剂盒进行提取。连接反应(20μl)由1X缓冲液(BD生物科学公司(BD Biosciences)，帕洛阿尔托(Palo Alto)，加州，美国)，1X BSA(BD生物科学公司，帕洛阿尔托(Palo Alto)，加州，美国)，1μl酶(1:10稀释)(BD生物科学公司，帕洛阿尔托(Palo Alto)，加州，美国)，用Hind III和Nhe I消化的99ng pBM175b，和36ng的纯化的土生梭孢壳霉Cel6A纤维二糖水解酶II PCR产物。将反应液于室温保温30分钟。将2μl体积的反应转化到大肠杆菌高效感受态细胞中。在补充有每ml 100μg的氨比西林的LB平板上选择转化体。挑选一种菌落，其包含插入pBM175b载体替代脂肪酶基因产生pMMar27的土生梭孢壳霉Cel6A(图2)。所选择的质粒在从起始密码子的位置228处包含PCR错误，TCT代替TCC，但是导致中的土生梭孢壳霉Cel6A纤维二糖水解酶II的沉默变化。
实例3：pEvFz1表达载体的构建
表达载体pEvFz1是通过修饰pBM120a(美国专利8,263,824)来进行构建，以包括NA2/NA2-tpi启动子、黑曲霉淀粉葡糖苷酶终止子序列(AMG终止子)、和作为选择性标志物的构巢曲霉乳清酸核苷-5’磷酸脱羧酶基因(pyrG)。
通过该将构巢曲霉pyrG基因从pAlLo2(WO 2004/099228)克隆到pBM120a中来产生质粒pEvFz1。将质粒pBM120a和pAlLo2用Nsi I在37℃下消化过夜。将所得4176bp线性pBM120a载体片段和来自pAlLo2的1479bp pyrG基因插入片段各自使用TAE缓冲液通过0.7％琼脂糖凝胶电泳纯化，从凝胶切离，并使用凝胶提取试剂盒进行提取。
使用QUICK LIGATIONTM试剂盒(新英格兰生物实验室，贝弗利，马萨诸塞州，美国)将1479bp pyrG基因插入片段连接至Nsi I消化的pBM120a片段。连接反应由以下构成：1XQUICK LIGATIONTM反应缓冲液(新英格兰生物实验室，贝弗利，马萨诸塞州，美国)、50ng的Nsi I消化的pBM120a载体、54ng的1479bp Nsi I消化的pyrG基因插入物、以及1μl的T4DNA连接酶，总体积为20μl。将连接混合物在37℃下孵育15分钟，随后在50℃下孵育15分钟，并且放置在冰上。
将1μl的连接混合物转化到ONETOP10化学感受大肠杆菌细胞中。在2XYT加氨比西林板上对转化体进行选择。使用9600从若干转化体中纯化质粒DNA，并使用3130XL遗传分析仪通过DNA测序进行分析，以鉴定含有所希望的构巢曲菌pyrG插入物的质粒。将一个具有预期的DNA序列的质粒指定为pEvFz1(图3)。
实例4：构建作为酵母/大肠杆菌/米曲霉穿梭载体的质粒pDLHD0006
使用酵母重组克隆，将质粒pDLHD0006构建为基本载体，以使得米曲霉表达盒文库建立。通过使用酵母重组克隆合并三种DNA片段来产生质粒pDLHD0006：包含大肠杆菌pUC复制起点、大肠杆菌β-内酰胺酶(ampR)选择性标志物、URA3酵母选择性标志物、和来自pMMar27(实例2)的酵母2微米复制起点的片段1；包含10amyR/NA2-tpi启动子(来自基因的启动子，这些基因编码黑曲霉中性α-淀粉酶和米曲霉丙糖磷酸异构酶并且包括针对米曲霉amyR转录因子的10个重复结合位点)、疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶开放阅读框(ORF)、和来自pJaL1262(WO 2013/178674)的黑曲霉葡糖糖化酶终止子的片段2；和来自pEvFz1(实例3)的包含构巢曲霉pyrG选择标志物的片段3。
pDLHD0006 PCR含量 PCR模板
片段1 大肠杆菌ori/AmpR/URA/2微米(4.1kb) pMMar27
片段2 10amyR/NA2-tpi PR/脂肪酶/Tamg(4.5kb) pJaL1262
片段3 来自pEvFz1的pyrG基因(1.7kb) pEvFz1
使用以下所示的引物613017(正义)和613018(反义)扩增片段1。设计引物613017包含与片段3(小写)具有序列同源性的侧翼区，并且设计引物613018包含与片段2(小写)具有序列同源性的侧翼区以使得酵母在这三个PCR片段之间重组克隆。
引物613017(正义)：
ttaatcgccttgcagcacaCCGCTTCCTCGCTCACTGACTC(SEQ ID NO:13)
613018(反义)：
acaataaccctgataaatgcGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTC(SEQ ID NO:14)
片段1在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的质粒pMMar27、0.5μl的DNA聚合酶(新英格兰生物实验室公司，伊普斯威奇，马萨诸塞州，美国)、20pmol的引物613017、20pmol的引物613018、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和35.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；以及30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续1.5分钟。将得到的4.1kb PCR产物(片段1)直接使用用于与以下片段2和3的酵母重组。
使用以下所示的引物613019(正义)和613020(反义)扩增片段2。设计引物613019包含与片段1(小写)具有序列同源性的侧翼区，并且设计引物613020包含与片段3(小写)具有序列同源性的侧翼区以使得酵母在这三个PCR片段之间重组克隆。
613019(正义)：
agatagggttgagtgttgttccGCATTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGG(SEQ ID NO:15)
613020(反义)：
ttctacacgaaggaaagagGAGGAGAGAGTTGAACCTGGACG(SEQ ID NO:16)
片段2在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的质粒pJaL1262、0.5μl的DNA聚合酶、20pmol的引物613019、20pmol的引物613020、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和35.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续2分钟；以及20℃保持。将得到的4.5kb PCR产物(片段2)直接使用用于与以上片段1和以下片段3的酵母重组。
使用以下所示的引物613022(正义)和613021(反义)扩增片段3。设计引物613021包含与片段2(小写)具有序列同源性的侧翼区，并且设计引物613022包含与片段1(小写)具有序列同源性的侧翼区以使得酵母在这三个PCR片段之间重组克隆。
613022(正义)：
aggttcaactctctcctcCTCTTTCCTTCGTGTAGAAGACCAGACAG(SEQ ID NO:17)
613021(反义)：
tcagtgagcgaggaagcggTGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGG(SEQ ID NO:18)
片段3在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的质粒pEvFz1(实例3)、0.5μl的DNA聚合酶、20pmol的引物613021、20pmol的引物613022、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和35.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续2分钟；以及20℃保持。将得到的1.7kb PCR产物(片段3)直接使用用于与以上片段1和2的酵母重组。
使用基于酵母同源性的重组克隆，使用以下程序来合并三个PCR片段。将三种PCR片段的每种的20μl等分试样与来自鲑鱼睾丸的100μg的单链脱氧核糖核酸(西格玛奥德里奇，圣路易斯，密苏里州，美国)、100μl的菌株YNG318的感受态酵母细胞(酿酒酵母ATCC208973)、和600μl的PLATE缓冲液(西格玛奥德里奇，圣路易斯，密苏里州，美国)合并，并且混合。将反应在30℃下以200rpm振荡孵育30分钟。然后将该反应在42℃下在没有振荡的情况下继续15分钟。将这些细胞通过在5,000x g下离心1分钟进行沉淀，并且弃去上清液。将细胞球粒悬浮于200μl的高压蒸汽处理的水中，并且分在两个包含合成的所定义的培养基缺少尿苷的琼脂平板，并且在30℃下孵育3天。将这些酵母菌落使用1ml的高压蒸汽处理的水从板中分离。将这些细胞通过在13,000x g下离心30秒进行沉淀，并且将100μl等分试样的玻璃珠添加到该管中。将细胞和珠混合物悬浮在250μl的P1缓冲液(凯杰公司，巴伦西亚，加利福尼亚州，美国)中，并且然后涡旋1分钟来裂解这些细胞。使用旋转迷你制备型试剂盒纯化质粒DNA。根据制造商的说明，然后将3μl等分试样的质粒DNA转化到大肠杆菌ONETOP10电转化感受态细胞中。将5μl的转化细胞散布于每ml补充有100μg氨比西林的LB板上，并且在37℃下孵育过夜。将转化体各自挑入每ml补充有100μg的氨比西林的3ml的LB培养基中，并且在37℃下在250rpm的振荡下生长过夜。使用旋转迷你制备型试剂盒从菌落中纯化质粒DNA。将使用3130XL遗传分析仪的DNA测序用来确认指定为pDLHD0006的最终质粒中三种片段中的每种的存在(图4)。
实例5：拟南芥木葡聚糖内糖基转移酶14的制备
根据以下描述的方案，拟南芥木葡聚糖内糖基转移酶(AtXET14；SEQ ID NO:4[天然DNA序列]、SEQ ID NO:5[合成DNA序列]、和SEQ ID NO:6[推导的氨基酸序列])重组产生于米曲霉JaL355(WO 2008/138835)。
构建载体pDLHD0039以在米曲霉中多拷贝表达AtXET14基因。使用无限制性克隆，通过合并两种DNA片段来产生质粒pDLHD0039：包含AtXET14 ORF和与载体pDLHD0006具有同源性的侧翼序列(实例4)的片段1，和由载体pDLHD0006的反向PCR扩增子组成的片段2。
使用以下所示引物AtXET14F(正义)和AtXET14R(反义)来扩增片段1，这些引物被设计包含与载体pDLHD0006(小写)具有序列同源性的侧翼区，用于在PCR片段之间的物连接克隆。
引物AtXET14F(正义)：
ttcctcaatcctctatatacacaactggccATGGCCTGTTTCGCAACCAAACAG(SEQ ID NO:19)
AtXET14R(反义)：
agctcgctagagtcgacctaGAGTTTACATTCCTTGGGGAGACCCTG(SEQ ID NO:20)
片段1在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的包括在Sac I和Kpn I位点之间所克隆的AtXET14合成DNA序列的载体pMA、0.5μl的DNA聚合酶(新英格兰生物实验室公司，伊普斯威奇，马萨诸塞州，美国)、20pmol的引物AtXET14F、20pmol的引物AtXET14R、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和35.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；以及30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续30秒。将得到的0.9kb PCR产物(片段1)用1μl的Dpn I进行处理，以去除质粒模板DNA。将该Dpn I直接添加到PCR管中，良好混合，并且在37℃下孵育60分钟，并且然后使用PCR纯化试剂盒进行柱纯化。
使用以下所示的引物614604(正义)和613247(反义)扩增片段2。
614604(正义)：
taggtcgactctagcgagctcgagatc(SEQ ID NO:21)
613247(反义)：
catggccagttgtgtatatagaggattgaggaaggaagag(SEQ ID NO:22)
片段2在反应中通过PCR来扩增，该反应由10ng的质粒pDLHD0006、0.5μl的DNA聚合酶、20pmol的引物614604、20pmol的引物613247、1μl的10mM dNTP、10μl的5XHF缓冲液、和35.5μl的水构成。在中孵育该反应，程序为1个循环，在98℃下，持续30秒；以及30个循环，每个循环在98℃持续10秒，60℃持续10秒，以及72℃持续4分钟。将得到的7.3kb PCR产物(片段2)用1μl的Dpn I进行处理，以去除质粒模板DNA。将该Dpn I直接添加到PCR管中，良好混合，并且在37℃下孵育60分钟，并且然后使用PCR纯化试剂盒进行柱纯化。
根据制造商的说明书，使用无缝克隆和装配套件(英杰公司(Invitrogen)，卡尔斯巴德，加利福尼亚州，美国)来合并两种PCR片段。然后将3μl得到的反应产物DNA转化到大肠杆菌ONETOP10电转化感受态细胞中。将5μl的转化细胞散布于每ml补充有100μg氨比西林的LB板上，并且在37℃下孵育过夜。将单个转化体菌落挑入每ml补充有100μg的氨比西林的3ml的LB培养基中，并且在37℃下在250rpm的振荡下生长过夜。根据制造商的说明，使用旋转迷你制备型试剂盒从菌落中纯化质粒DNA。将使用3130XL遗传分析仪的DNA测序用来确认最终质粒pDLHD0039中两种片段中的每种的存在(图5)。
根据以下方案，将米曲霉菌株JaL355用包括AtXET14基因的质粒pDLHD0039进行转化。将约2-5x107孢子的米曲霉JaL355接种于500ml摇瓶中的100ml的YP+2％葡萄糖+10mM尿苷中，并且在28℃和110rpm下孵育过夜。将10ml的过夜培养物在125ml无菌真空滤器中过滤，并且将菌丝用50ml的0.7M KCl-20mM CaCl2洗涤两次。将剩余液体通过真空过滤去除，留下垫在滤器上。将菌丝体再悬浮于10ml的0.7M KCl-20mM CaCl2中，并且转移至无菌125ml摇瓶中，该摇瓶包含20mg的200G/ml和0.2mg的几丁质酶在10ml的0.7M KCl-20mM CaCl2中。将该混合物在37℃和100rpm下孵育30-90分钟，直到从菌丝体中产生原生质体。将该原生质体混合物通过衬有的无菌漏斗进行过滤，到无菌50毫升塑料离心管中，以除去菌丝体碎片。将在中的碎片彻底地用0.7MKCl-20mM CaCl2进行洗涤并且在2500rpm(537x g)下，在20℃-23℃下，离心10分钟。去除该上清液，并且将原生质体球粒再悬浮于20ml的1M山梨醇-10mM Tris-HCl(pH 6.5)-10mMCaCl2中。将该步骤重复两次，并且将最终的原生质体球粒再悬浮于1M山梨醇-10mM Tris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2中，以获得2x 107/ml的最终原生质体浓度。
将2微克的pDLHD0039添加至无菌的2ml塑料离心管的底部。然后将100μl的原生质体添加至管中，随后添加在10mM Tris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2中的300μl的60％PEG-4000。将该管手动地缓和地混合，并且在37℃下孵育30分钟。将添加2ml的1M山梨糖醇-10mMTris-HCl(pH 6.5)-10mM CaCl2添加到每个转化中，并且将该混合物转染到150mm基本培养基琼脂板上。将转化板在34℃下孵育直到菌落出现。
挑选35个转化体菌落到新鲜的基本培养基琼脂平板，并且在34℃下培养4天，直到菌株形成孢子。新鲜孢子转染到48孔深孔板，这些板包含2ml的YP+2％麦芽糊精，覆盖有可透气密封件，并且在没有振荡下在28℃下生长4天。在4天生长后，将培养基针对木葡聚糖内糖基转移酶活性并且针对木葡聚糖内糖基转移酶表达通过SDS-PAGE来测定。
使用实例1中描述的碘染色测定，来测量木葡聚糖内糖基转移酶活性。该测定证实了若干转化体中木葡聚糖内糖基转移酶活性的存在。
按在实施例1中的描述进行SDS-PAGE。SDS-PAGE分析指示出若干转化体表达与AtXET14对应的约32kDa蛋白。
实例6：荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖的产生
根据由周(Zhou)等人，2006，生物催化与生物转化(Biocatalysis andBiotransformation)24:107-120所描述的程序，通过木葡聚糖低聚物(XGO)的还原端的还原氨化，随后在100mM碳酸氢钠(pH 9.0)在室温下将XGO的氨基基团结合到荧光素异硫氰酸酯异构体I(西格玛奥德里奇，圣路易斯，密苏里州，美国)24小时，来产生荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖低聚物(FITC-XGO)。将结合反应产物在真空中浓缩干燥，溶解于0.5ml的去离子水，并且通过硅胶层析进行纯化，该硅胶层析用从100:0:0.04至70:30:1梯度的乙腈:水:乙酸作为流动相进行洗脱。通过蒸发该缓冲液、溶解于D2O(西格玛奥德里奇，圣路易斯，密苏里州，美国)，并且使用Varian 400MHz MercuryVx(安捷伦(Agilent)，圣克拉拉，加利福尼亚州，美国)通过1H NMR分析来确认纯度和产物同一性。在-20℃下在黑暗中，储存干燥的FITC-XGO，并且在解冻过程中干燥。
彻底混合24ml的10mg的罗望子木葡聚糖(麦格酶公司，布雷，英国)/ml的去离子水、217μl的7.9mg的FITC-XGO/ml的去离子水、1.2ml的400mM柠檬酸钠(pH 5.5)、和600μl的1.4mg的VaXET16/ml的20mM柠檬酸钠(pH5.5)，并且在室温下孵育过夜。在过夜孵育后，通过添加冰冷的乙醇至终体积110ml来沉淀FITC-XG，彻底混合，并且在4℃下整夜孵育。用水洗涤沉淀的FITC-XG，并且然后转移到圆底烧瓶(Erlenmeyer bulb)中。通过使用EZ-2Elite蒸发器(SP Scientific/Genevac公司，斯通里奇，纽约，美国)蒸发4小时来去除残余的水和乙醇。将干燥的样品溶解于水中，并且用去离子水将体积调整到48ml，以产生，在所希望的100kDa的平均分子量下，5mg/ml的最终FITC-XG浓度。
实例7：针对木葡聚糖内糖基转移活性的荧光偏振测定
使用以下测定来评估木葡聚糖内糖基转移活性。如在实例6中所描述的制备200μl的反应，该反应包含1mg的罗望子木葡聚糖/ml、0.01mg/ml FITC-XGO，并且将10μl的适当稀释的XET在25℃下在不透明96孔微量滴定板中的20mM柠檬酸钠(pH 5.5)中孵育10分钟。在这个时间段，以顶级阅读方向，用490nm的激发波长、520nm的发射波长、激发路径中495截止滤波器、高精度(100次读取)、和中光电倍增管的灵敏度，使用M5酶标仪(分子器件公司(Molecular Devices)，森尼维耳市，加利福尼亚州，美国)连续监测荧光偏振。将荧光XGO以XET依赖性掺入非荧光木葡聚糖(XG)中导致随着时间增加荧光偏振。使用偏振时间进程曲线的线性区域的斜率来确定该活性。
实例8：红豆木葡聚糖内糖基转移酶16的纯化
使用0.22μm 滤器(密理博(Millipore)，贝德福德，马萨诸塞州，美国)过滤红豆的粗发酵液的1升溶液，并且在4℃下储存滤液。将细胞碎片在悬浮于1升的0.25％X-100(4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇；西格玛奥德里奇，圣路易斯，密苏里州，美国)-20mM柠檬酸钠(pH 5.5)中，在室温下孵育至少30分钟，并且然后使用0.22μm 滤器进行过滤。汇集包含红豆木葡聚糖内糖基转移酶16(VaXET16)的滤液，并且使用配备有10kDa的分子量截留膜的200切向流浓缩器(密理博，贝德福德，马萨诸塞州，美国)来浓缩至在500和1500ml之间的体积。
将浓缩的滤液装载到150ml Q大珠柱(GE医疗生命科学集团(GEHealthcare Lifesciences)，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)上，用20mM柠檬酸钠(pH 5.5)进行预平衡，并且用相同缓冲液等度洗脱。将洗脱液装载到75ml PhenylHP柱(GE医疗生命科学集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)上，该柱在20％乙二醇-20mM柠檬酸钠(pH 5.5)中进行预平衡。使用从20％至50％的70％乙二醇在20mM柠檬酸钠(pH 5.5)的线性梯度经4柱体积洗脱VaXET16。
使用BCA测定(皮尔斯，罗克福德，伊利诺伊，美国)以96孔板格式，以牛血清白蛋白(皮尔斯，罗克福德，伊利诺伊，美国)作为蛋白标准品，在0和2mg/ml之间的浓度下，量化纯化的VaXET16，并且确定为1.40mg/ml。通过约32kDa的单个条带的存在，使用8％-16％梯度无染色SDS-PAGE凝胶来确认VaXET16同质性，并且用无染色成像仪使用以下设置来将凝胶成像：5分钟活化，自动成像曝光(强条带)，高亮饱和像素＝ON，颜色＝考马斯酸性染料，和带检测、分子量分析和报告禁用。
通过荧光偏振测量荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖低聚物掺入到罗望子木葡聚糖(麦格酶公司，布雷，英国)中的比例来确定纯化的VaXET16的活性(如实例7中所描述的)。该表观活性为18.5±1.2P s-1mg-1。
针对背景酶活性，使用以下所示的标准测定测试纯化的VaXET16制品，这些背景酶活性包括木聚糖酶，淀粉酶，纤维素酶，β-葡糖苷酶，蛋白酶，淀粉葡糖苷酶，和脂肪酶。
使用小麦阿拉伯糖基木聚糖作为底物在pH 6.0和50℃下测定木聚糖酶活性。在405nm下通过添加包含PHBAH的碱性溶液来进行比色评估木聚糖水解。。一个FXU(S)定义为使用(诺维信公司)作为标准品的木聚糖内切酶活性。
使用淀粉作为底物在pH 2.5和37℃下测定淀粉酶活性。通过添加碘溶液在600nm下比色测量剩余淀粉来评估淀粉水解。一个FAU(A)定义为使用酸性真菌α-淀粉酶(可从诺维信公司获得)作为标准品的酸性α-淀粉酶活性。
使用(4,6-亚乙基(G7)-对硝基苯基(G1)-α,D-麦芽七糖苷(4,6-亚乙基-G7-pNP)作为底物，在pH 7和37℃下，测定淀粉酶活性。该底物水解产生对硝基酚，并且在405nm下进行比色评估。一个FAU(F)定义为使用(诺维信公司)作为标准品的真菌α-淀粉酶单位。
使用羧甲基纤维素(CMC)作为底物在pH 5.0和50℃下测定纤维素酶活性。在405nm下通过添加包含对羟基苯甲酸酰肼(PHBAH)的碱性溶液来进行比色评估CMC水解。一个CNU(B)定义为使用NS22084酶(诺维信公司)作为标准品的纤维素酶活性。
使用纤维二糖作为底物在pH 5.0和50℃下测定β-葡糖苷酶活性。使用偶联的酶测定，用己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖酸酯，随后在340nm下将NAD还原为NADH，评估从纤维二糖生产葡萄糖。一个CBU(B)定义为使用纤维二糖酶作为标准品每分钟释放2微摩尔葡萄糖的酶的量。
使用蛋白酶检测试剂盒(绿色荧光)(生命技术公司，格兰德岛，纽约，美国)，以酪蛋白为底物，在pH 6或9和环境温度下，进行蛋白酶测定。一个KMTU定义为关于每分钟产生1微摩尔的对硝基苯胺的酶的量的千微生物胰蛋白酶单位。
使用麦芽糖作为底物在pH 4.3和37℃下测定淀粉转葡糖苷酶活性。使用偶联的酶测定，用己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖酸酯，随后在340nm下将NAD还原为NADH，评估麦芽糖至葡萄糖的转化。一个AGU定义为使用(诺维信公司)作为标准品的淀粉转葡糖苷酶单位。
在pH 7和环境温度下进行4-甲基伞形酮β-D-乳糖苷(MUL)测定，并且在360nm激发和465nm发射下进行荧光测量。
使用4-硝基苯基丁酸酯(pNP-butyrate)作为底物，在pH 7.5和环境温度下，测定脂肪酶活性。在对硝基酚释放后，在405nm下测定pNP-丁酸酯水解。一个LU定义为使用(诺维信公司)作为标准品释放1微摩尔的可滴定的丁酸的酶的量。
实例9：拟南芥木葡聚糖内糖基转移酶14的纯化
除以下内容以外，如针对实例8中VaXET16所描述的进行拟南芥木葡聚糖内糖基转移酶14(AtXET14)的纯化和定量：使用从40％至90％的70％乙二醇在20mM柠檬酸钠(pH5.5)中的线性梯度经4个柱体积进行从苯基HP柱的洗脱。
通过约32kDa的单个条带的存在，使用8％-16％无染色SDS-PAGE凝胶来确认AtXET14同质性，并且用无染色成像仪使用以下设置来将凝胶成像：5分钟活化，自动成像曝光(强条带)，高亮饱和像素＝ON，颜色＝考马斯酸性染料，和带检测、分子量分析和报告禁用。
使用BCA测定以96孔板格式，以牛血清白蛋白作为蛋白标准品，在0和2mg/ml之间的浓度下，量化纯化的AtXET14，并且确定为1.49mg/ml。
如实例7中所述确定纯化的AtXET14的活性。该表观活性为34.7±0.9P s-1mg-1。
针对背景活性，使用以下所示的标准测定测试纯化的AtXET14制品，这些背景酶活性包括木聚糖酶，淀粉酶，纤维素酶，β-葡糖苷酶，蛋白酶，淀粉葡糖苷酶，和脂肪酶。标准测定描述于实例8中。
实例10：通过红豆木葡聚糖内糖基转移酶16，荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖与纤维素的结合的提高
根据以下方案，评估荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)与滤纸的结合。使用0.5英寸直径的圆形纸打洞器，产生华特门(Whatman)#1滤纸的圆形割屑。滤纸的六个重复割屑各自覆盖着2ml体积的317nM FITC-XG，如通过在488nm下，在Costar#3513，12孔细胞培养簇板(科宁，图克斯伯里，马萨诸塞州，美国)中有或没有2.2μM VaXET16的情况下的吸光度所评估的。通过在滤纸表面的上下移液来混合溶液，并且然后将这些板在室温下在3rpm的摇摆平台(VWR公司，拉德诺，宾夕法尼亚州，美国)上轻轻振荡下孵育长达3小时。在各板上的阴性对照孵育不包含纸。在图6中指示出的时间，去除液相的1ml等分试样，测量荧光强度，并且然后将这些等分试样返回至孵育孔。在1ml的一次性试管中，使用M5分光光度计(分子器件公司(Molecular Devices)，森尼维耳市，加利福尼亚州，美国)，在以下光参数下测量荧光强度：λex＝490nm，λem＝520nm，激发路径中使用495nm截止滤波器，光电倍增管的灵敏度高，并且精确样品读数的最大数(100)。将强度绘制成重复样品的平均和标准偏差。
图6示出了用滤纸孵育的、在VaXET16的存在下用滤纸孵育的或没有用滤纸孵育的FITC-XG的液相的荧光强度。所有样品溶液的荧光强度随着时间减弱。不包含滤纸的对照孵育显示出少量的荧光损失(<15％)，可能是由于FITC-XG吸附到培养板壁上和/或荧光素的光漂白。在没有VaXET16的情况下，FITC-XG和滤纸的孵育显示出3小时内强度损失38％。在有VaXET16的情况下，FITC-XG和滤纸的孵育显示出经过同样3小时孵育时间，强度损失55％。数据与单指数拟合。针对没有用滤纸、用滤纸、以及用滤纸和VaXET16所孵育的FITC-XG，从数据拟合确定的平衡的强度分别为547±18.9、380±25.5、和170±53。
实例11：通过红豆木葡聚糖内糖基转移酶16，荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖与纤维素的结合的提高的pH依赖性
根据以下方案，评估荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)与滤纸的结合的pH依赖性。使用直径约0.7cm的标准纸打洞器，将华特门#1滤纸切成圆片。在500μl NuncU96PP聚丙烯96孔板(赛默科技(Thermo Scientific)，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)中，进行结合反应，该结合反应为200μl，包含16mg的华特门#1滤纸/ml和各种浓度的FITC-XG(0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、2.5和4.5mg/ml)于50mM伯瑞坦-罗宾森缓冲液(1:1:1硼酸、磷酸、和乙酸)中。该结合反应包含1μM VaXET16或没有VaXET16。使用ALPS 3000封板机(赛默科技，沃尔瑟姆，马萨诸塞州，美国)将板密封，并且在25℃下在40摇床培养箱(新不伦瑞克科技(New Brunswick Scientific)，恩菲尔德，康涅狄格州，美国)中以150rpm振荡下垂直孵育。在孵育36小时后，如实例10中所描述的，测量悬浮液的残余荧光，除了将200μl等分试样在Costar 9017平底微量滴定板(科宁，图克斯伯里，马萨诸塞州，美国)中测量以外。相对于不包含滤纸的对照实验，报道残余荧光。
将数据拟合到朗缪尔等温线，并且确定表观结合能力。
图7示出了在各种pH值下，在VaXET16存在和不存在下，纤维素针对FITC-XG的结合能力。
在VaXET16是活性的pH值(pH 4-8)下，当VaXET16存在时纤维素针对FITC-XG的结合能力比当VaXET16不存在时大2-4倍。在低于VaXET16活性pH的pH值(pH 2-3)下，结合能力无明显差异，并且在VaXET16低活性的的pH值(pH 8-10)下，结合能力的提高减少了。这些数据指示出VaXET16的活性是结合提高的原因。
实例12：通过红豆木葡聚糖内糖基转移酶16，荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖与纤维素的结合的提高的温度依赖性
如实例10中所描述的，以下例外的情况下，评估荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)与滤纸的结合的温度依赖性：在1.1ml 96深孔板(爱思进公司(Axygen)，联合市，加利福尼亚州，美国)中，在4℃、25℃、37℃和50℃下，使用10mg的华特门#1滤纸/ml的50mM柠檬酸钠(pH 5.5)，有或没有1μM VaXET16，在50mM柠檬酸钠(pH 5.5)中，进行500μl结合反应。
使用ALPS 3000封板机，将板密封，通过振荡密封的板来彻底混合，并且然后在所指示的温度下，在150rpm的振荡下孵育38小时，如实例10中所描述。如实例10中所述测量上清液级分的荧光。
图8示出了在各种温度下，在VaXET16存在和不存在下，纤维素针对FITC-XG的结合能力。
在所有低于50℃的温度下，在VaXET16的存在下，更多FITC-XG结合到纤维素。在50℃下，接近酶的熔点，在VaXET16的存在下，观察到没有边缘性提高。
实例13：通过激光扫描共焦显微镜所观察到的，通过红豆木葡聚糖内糖基转移酶16，荧光异硫氰酸酯标记的木葡聚糖与纤维素的结合的提高
如实例10中所描述的，在以下例外的情况下，进行荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)与纤维素的结合反应：使用标准纸打洞器产生华特门#1滤纸片，并且孵育于1ml的50mM柠檬酸钠(pH 5.5)、1mg的FITC-XG/ml的50mM柠檬酸钠(pH 5.5)、和0、20、40或100μl的VaXET16中，分别给出0、0.88、1.8、或4.4μM VaXET16的终浓度。在显微镜检查前，将片用去离子水充分洗涤，并且储存在1ml的去离子水中持续1周。
以下面的方式进行激光扫描共聚焦显微镜检查。用刀片切割每个纸片的小部分，并且使用镊子施加到FisherFinest Premium 3”x 1”x 1mm显微镜载玻片(飞世尔科技公司(Fisher Scientific,Inc.)，匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国)上。施用约20μl的去离子水以覆盖每个样品，并且在用指甲油将盖玻片密封到载玻片前，将飞世尔品牌22x22-1.5显微镜盖玻片(飞世尔科技公司(Fisher Scientific,Inc.)，匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国)覆盖在每个样品上。
使用Olympus FV1000激光扫描共聚焦显微镜(奥林巴斯公司(Olympus)，森特瓦利，宾夕法尼亚州，美国)用10X气隙物镜或40X油浸镜，将从与纤维素结合的FITC-XG产生的荧光成像。使用氩离子激光的488nm线进行激发，并且通过整合入射在光电倍增管检测器上通过发射单色仪的从500到520nm的强度来测量发射强度。使用FIJI(国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州，美国)进行扫描后的图像分析。
在所检查的滤纸样品中的所有深度处，在所检查的VaXET16所有浓度下，纤维素纤维广泛地被FITC-XG涂布。在低倍放大下，没有观察到通过滤纸深度的荧光的量的本质的差异；这些纤维似乎是全部XG结合的。针对当量PMT电压，包含VaXET16的样品的平均像素强度更高，尽管针对给定的图像，像素强度变化很大。像素强度的较高变化是由于纤维素纤维之间的存在缝隙的事实引起的，因此，一些像素对应于非荧光区域，然而其他纤维在PMT检测器的饱和点处或附近产生了荧光。
图9示出了在0.88μM VaXET16(图B)或1.9μM VaXET16(图C)的不存在(图A)或存在(图B)下，用10X气隙物镜成像的结合到纤维素的FITC-XG的共聚焦显微图像。在增加的VaXET16浓度下，在低倍放大下，整体荧光是比较分散的。在VaXET16不存在下，在增加的VaXET16浓度下，观察到为了非常强的荧光焦点，这些焦点数量减少，并且荧光覆盖了更多的纤维。
图10示出了在4.4μM的VaXET16的不存在(图A)或存在(图B)下，用40X油浸物镜和3X变焦成像的结合到纤维素的FITC-XG的共聚焦显微图像。
在VaXET16存在或不存在下，来自FITC-XG的荧光覆盖了纤维素纤维。在VAXET16存在下，由荧光清楚地描绘了纤维素中的微结构：槽、纤维的边缘、以及微纤维，这些只能够在亮区仔细观察下看到或根本看不到。这些图像指示出VaXET16已经识别出与纤维素表面结合的木葡聚糖，并且将其更均匀地分布在表面上。
实例14：通过红豆木葡聚糖内糖基转移酶16，各种平均分子量的荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖与纤维素的结合的提高
针对结合到纤维素和通过VaXET16的结合增强，评估各种分子量的荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)。预期地分子量木葡聚糖寡糖(XGO)和高分子量聚合木葡聚糖(XG)之间的内糖基转移活性以减少聚合木葡聚糖的平均分子量到一定程度，这取决于两种组分浓度的初始比例。进行一系列VaXET16依赖性转糖基反应，其中该FITC-XG与FITC-XGO的摩尔比率是变化的；1:0、1:1、1:2、1:4、1:8和1:16。将固定体积的25μl的1.5mg的VaXET16/ml的40mM柠檬酸钠(pH 5.5)，在室温下，在25℃下，与固定体积(1ml)的5mg的FITC-XG/ml的50mM柠檬酸钠(pH 5.5)和从0–147μl的变化体积的7.9mg的FITC-XGO/ml的50mM柠檬酸钠(pH 5.5)孵育过夜，以产生具有在100和3.125kDa之间所希望分子量的FITC-XG。在转糖基反应后，将VaXET16通过在90℃下孵育30分钟来失活。
然后如实例10中所描述的，在以下例外的情况下，针对于纤维素的结合，评估各种分子量的FITC-XG：进行200μl的结合反应。将约25μM的每个基于预期分子量的FITC-XG制品在20mM柠檬酸钠(pH 5.5)中，在有或没有1μM VaXET16、和1片华特门#1滤纸(约3mg)的情况下，在25℃下，在150rpm的振荡下，在40摇床培养箱中进行孵育48小时。如实例10中所描述的，确定每个结合反应中的纤维素结合级分。
为了确认因为掺入FITC标记的低聚物，FITC-XG聚合物的平均分子量降低，测量荧光强度和荧光偏振。
图11示出了在所指示的预期平均分子量的聚合物的荧光强度和荧光偏振。针对用较高比率的XGO与XG产生的FITC-XG以及因此较小预期平均分子量，该偏振是较低的并且该荧光强度是较高的，然而针对用较低比率的XGO与XG产生的FITC-XG以及因此较大预期平均分子量，偏振是较高的并且强度是较低的。这些结果指示出，针对XGO与XG的较高比率，掺入更多FITC-XGO产生了较大量的较小FITC-XG分子。
为了进一步确认FITC-XGO掺入FITC-XG中，通过尺寸排阻色谱分析各种预期平均分子量。将每种FITC-XG制品的1至2ml的体积注射到在Akta Explorer FPLC(GE医疗生命科学集团，皮斯卡塔韦，新泽西州，美国)上的HiLoad 26/60制备型200尺寸排阻柱。如实例10中所描述的，使用490nm的激发波长、520nm的发射波长、和发射路径中的495nm截止滤波器，通过荧光强度收集并且评估4ml级分。
图12示出了各种预期平均分子量FITC-XG的色谱图。当所希望的分子量降低低于25kDa时，该保留时间大幅增加，指示出真实分子量降低。起始材料(FITC-XG)用VaXET16但不用FITC-XGO孵育还引起该材料的相当一部分尺寸减小。这是由于由转糖基作用活性引起的分子量分布宽度增加。
基于从尺寸排阻色谱柱的洗脱时间，将级分合并到4个池中：在40和60分钟之间收集池1；在61和80分钟之间收集池2；在81和100分钟之间收集池3；并且在101和120分钟之间收集池4。
作为来确认来自初始VaXET16依赖性反应的FITC-XG的平均分子量的减小的最终对照，将汇集的尺寸排阻色谱法级分水解并且确认还原端与荧光分子的表观摩尔比。将4个合并的尺寸排阻级分中的每个、或没有FITC-XG，用2.5μl的CTec3(诺维信公司，巴格斯瓦德，丹麦)，在40mM柠檬酸钠(pH 5.5)，在50℃下，在200μl水解反应中孵育24小时。在500μl Nunc U96PP聚丙烯96孔板中进行反应，这些板用ALPS 3000封板机密封，并且在Isotemp plus培养箱(飞世尔科技公司，匹兹堡，宾夕法尼亚州，美国)中进行孵育。
基于对羟基苯甲酸酰肼(PHBAH)测定，使用还原糖测定来确定各级分中的碳水化合物(利弗(Lever)，1972分析生物化学(Analytical Biochemistry)47(1):273-279)。简言之，将100μl等分试样的每个稀释的样品用50μl的1.5％(w/v)PHBAH在2％氢氧化钠中，在95℃下，孵育10分钟。将这些反应冷却至室温，适当地用去离子水稀释，并且在410nm下使用340PC酶标仪(分子器件公司，森尼维耳市，加利福尼亚州，美国)在Costar 9017平底微量滴定板中测量100μl等分试样的吸光度。通过与类似处理的已知的葡萄糖浓度的标准曲线相比，来确定葡萄糖等效物的浓度值。
通过与FITC-XGO的标准曲线比较荧光强度来评估每个池中的荧光团浓度。
图13示出了针对所指示的汇集的色谱级分，减少的糖与荧光团的摩尔比。摩尔比大幅下降，在池1和2之间约2.5倍，并且然后在池2和4之间下降约2倍。这些数据再次指示出，在FITC-XGO掺入增加的情况下，木葡聚糖的分子量下降了。
图14示出了在有或没有VaXET16的情况下，在实验结合条件下，结合到纤维素的每个理论FITC-XG的级分。针对每种平均分子量，在VaXET16的存在下，更多的FITC-XG被吸收到纤维素中。在较小平均分子量下，来自VaXET16的提高程度下降，这可能是由于减少了FITC-XG的饱和摩尔浓度的提高。因为在降低分子量的情况下，摩尔浓度增加，较低分子量的FITC-XG比较高低分子量FITC-XG以更高浓度存在。
实例15：木葡聚糖和木葡聚糖内糖基转移酶介导的二氧化硅与多纤维织物的结合
使用以下方案评估荧光标记的硅石(FITC-二氧化硅；Corpuscular公司，冷泉，纽约州，美国)与多纤维测试织物(金布尔大通生命科学和研究产品有限责任公司(KimbleChase Life Science and Research Products LLC))的结合。将多纤维织物切成约1厘米宽的条。在Costar#3524，48孔细胞培养板(科宁，图克斯伯里，马萨诸塞州，美国)中，卷起多织物条并且添加到1.5ml包含20mM磷酸盐缓冲液(pH 7)中，该缓冲液有或没有2.5％(w/v)荧光二氧化硅，有或没有1.25mg/ml罗望子木葡聚糖(麦格酶公司，爱尔兰)，有或没有6μg/ml木葡聚糖低聚物，有或没有0.3μM VaXET16。将这些板包裹在箔中，并且在25℃40摇床培养箱中，在220rpm振荡下孵育4小时。
在孵育后，从孔中去除多纤维条，并且用去离子水冲洗约30秒。然后将多织物条置于新Costar#3524，48孔细胞培养板中，并且在1.5ml的20mM磷酸盐缓冲液(pH 7)中孵育72小时。
针对荧光，使用Gel DocTM EZ图像仪(伯乐实验室有限公司，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)，用Image Lab3.0版软件(伯乐实验室有限公司，赫拉克勒斯，加利福尼亚州，美国)以绿色设置分析多织物条。将这些多纤维条暴露0.02秒，并且获得TIFF图像。使用ImageJ 1.47n软件(美国国家卫生研究院)确定各织物的强度直方图。
然后在15ml聚丙烯离心管(科宁，图克斯伯里，马萨诸塞州，美国)中，将多织物测试条在10ml包含针对敏感性皮肤的20μl(宝洁，美国)的去离子水中在37℃下洗涤30分钟。在洗涤后，将这些条用去离子水彻底冲洗。针对荧光分析这些条。
图15显示出排成一排的各种处理的测试织物的荧光图像；指示出了处理和织物组分。图16显示出在洗涤剂中洗涤之前，各织物处理的平均强度。在荧光二氧化硅不存在下，该测试织物几乎没有显示出强度，并且该测试织物在荧光图像中几乎看不到。在FITC-SiO2的存在下，在各种条件下所孵育的测试织物的横纤维上观察到了荧光强度。当将该SiO2用木葡聚糖或具体地木葡聚糖和VaXET16孵育时，若干织物还表现出强烈的荧光，其包括腈纶(克丽斯伦)、聚对苯二甲酸乙二酯(达克纶54和64)、尼龙6.6、蚕丝、粘胶人造丝、和羊毛。木葡聚糖低聚物的存在不利于结合，并且添加木葡聚糖低聚物到木葡聚糖和VaXET16，可能以VaXET16依赖性方式通过减少木葡聚糖的聚合度而减少了结合的量。
图17显示出，在用标准衣物洗涤剂另外洗涤后的各种处理的测试织物的荧光图像；指示出了处理和织物组分。图18显示出在洗涤剂中洗涤之后，各织物处理的平均强度。针对已经用FITC-SiO2孵育的大部分织物，在洗涤后平均荧光强度降低，这指示出该洗涤剂从测试织物中洗去了FITC-SiO2。针对棉布、腈纶(克丽斯伦)、聚对苯二甲酸乙二酯(达克纶54和64)、尼龙6.6、腈纶(奥纶75)、蚕丝、聚丙烯、粘胶人造丝、和羊毛，通过木葡聚糖或木葡聚糖和VaXET16来提高与织物结合的SiO2荧光的量。腈纶和聚对苯二甲酸乙二酯显示出结合的最大的VaXET16依赖性提高。这些数据指示出，木葡聚糖和具体地木葡聚糖与VaXET16可以功能化各种具有SiO2的非纤维素织物。
实例16：在多纤维测试织物中，荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖与各种纤维的结合
根据以下方案，评估荧光素异硫氰酸酯标记的木葡聚糖(FITC-XG)与多纤维植物(金布尔大通生命科学研究产品公司(Kimble Chase Life Science and ResearchProducts)，文兰，新泽西州，美国)的结合。将多纤维织物切成约1厘米宽的条。在Costar#3524，48孔细胞培养板中，多织物条卷起并且添加到1.5ml溶液中，该溶液包含20mM磷酸盐缓冲液(pH 7)有或没有1.25g/l FITC-XG，有或没有12mg/l FITC-XGO，有或没有0.4μMVaXET16。将这些板包裹在箔中，并且在25℃40摇床培养箱中以220rpm振荡下孵育72小时。
在孵育后，将多纤维条从孔中去除，并且用流动去离子水彻底冲洗。
针对荧光，使用Gel DocTM EZ图像仪，用Image Lab3.0版以绿色设置分析多织物条。将这些多织物条暴露0.5秒，并且获得TIFF图像。使用ImageJ 1.47n软件确定各织物的强度直方图。
图19显示出各种孵育的多织物条的荧光图像。比较棉布组，很明显，在VaXET16的存在下比不存在基本上更多的FITC-XG结合到棉布上。在VaXET16存在下，还观察到与粘胶人造丝和羊毛结合的FITC-XG的微量增加。将FITC-XG与FITC-XGO相比较，很显然，针对FITC-XG结合到的织物，短FITC-XGO结合比较长FITC-XG少得多。
本发明进一步由下述编号的段落描述：
[1]一种用于改性纤维素纺织材料的方法，该方法包括用选自下组的组合物处理纤维素纺织材料，该组由以下各项组成：
(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；
(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；
(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；
(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；及
(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；该方法在导致改性纤维素纺织材料的条件下进行，其中与未改性纤维素纺织材料相比，该改性纤维素纺织材料具有纺织品改进。
[2]如段落1所述的方法，其中该纤维素纺织材料是棉布、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻、椰壳纤维胶/人造丝、苎麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维、或其共混物。
[3]如段落1或2所述的方法，其中该纤维素纺织材料是基于纤维素的材料和基于非纤维素的材料的共混物。
[4]如段落1-3中任一项所述的方法，其中该纺织品改进是选自下组的一种或多种改进，该组由以下各项组成：抗返染，抗起球，抗缩水，抗磨损，抗皱，改进的颜色外观，织物柔软性，改进的形状保持，阻燃性和耐化学性，气味控制或防臭，防紫外线，防水，抗微生物性质，改进的静电控制，和改进的拉伸强度。
[5]如段落1-4中任一项所述的方法，其中该聚合木葡聚糖或该用化学基团功能化的聚合木葡聚糖的平均分子量范围从2kDa至约500kDa。
[6]如段落1-5中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖低聚物或该包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物的平均分子量范围从0.5kDa至约500kDa。
[7]如段落1-6中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖内糖基转移酶以约0.1nM至约1mM的浓度存在。
[8]如段落1-7中任一项所述的方法，其中该聚合木葡聚糖或该用化学基团功能化的聚合木葡聚糖以约1mg至约1g/g纤维素纺织材料存在。
[9]如段落1-8中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖低聚物或该功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖一起以木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖的约50:1摩尔比至约0.5:1摩尔比存在。
[10]如段落1-9中任一项所述的方法，其中掺入到材料中的该聚合木葡聚糖、该用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、该木葡聚糖低聚物、或该包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物的浓度是约0.01g至约500mg/g的纤维素纺织材料。
[11]如段落1-10中任一项所述的方法，其中该化学基团是感兴趣的化合物或反应性基团，如乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。
[12]如段落1-11中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖内糖基转移酶获得自植物或微生物。
[13]如段落12所述的方法，其中该植物选自下组，该组由以下各项组成：双子叶植物和单子叶植物。
[14]如段落13所述的方法，其中该双子叶植物选自下组，该组由以下各项组成：赤小豆、花椰菜、棉、白杨或杂种白杨、马铃薯、油菜、大豆、向日葵、阿拉伯芥、烟草、和番茄。
[15]如段落13所述的方法，其中该单子叶植物选自下组，该组由以下各项组成：小麦、水稻、玉米和甘蔗。
[16]如段落1-15中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖内糖基转移酶是通过有氧培养包含来自植物的适当的遗传信息的经转化宿主生物体来生产的。
[17]如段落1-16中任一项所述的方法，其中该组合物是一种洗涤剂组合物。
[18]如段落1-17中任一项所述的方法，其中该组合物是一种织物护理组合物。
[19]如段落1-17中任一项所述的方法，其中该纤维素纺织材料的处理是预洗涤步骤。
[20]如段落1-17中任一项所述的方法，其中该纤维素纺织材料的处理是洗涤步骤。
[21]如段落17-20中任一项所述的方法，其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种组分，该组由以下各项组成：表面活性剂、助洗剂、漂白剂、染料转移抑制剂、螯合剂、分散剂、多糖、软化剂、抑泡剂、载体、酶、酶稳定系统、多元酸、污垢去除剂、抗再沉淀剂、助水溶剂、遮光剂、抗氧化剂、杀菌剂、染料、香料、增亮剂及其混合物。
[22]如段落21所述的方法，其中该酶选自下组，该组由以下各项组成：淀粉酶、纤维素酶、角质酶、脂肪酶、氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、木葡聚糖酶、内切葡聚糖酶及其组合。
[23]一种通过段落1-22中任一项所述的方法制备的改性纤维素纺织材料。
[24]一种改性纤维素纺织材料，包括(a)一种聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
[25]一种选自下组的组合物，该组由以下各项组成：(a)一种组合物，包括木葡聚糖内糖基转移酶、聚合木葡聚糖、和包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；和(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
[26]一种针对纤维素纺织材料的洗涤剂或织物护理组合物，包括一种表面活性剂和(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
[27]一种针对纤维素纺织材料的洗涤剂添加剂，包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
[28]一种针对纤维素纺织材料的纺织品涂层或后处理组合物，包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
在此描述并且要求的这些发明不限于在此披露的具体方面的范围，因为这些方面旨在作为这些发明若干方面的说明。预期任何等效方面都处于这些发明的范围内。实际上，除在此所示和描述的那些之外，对于本领域普通技术人员而言这些发明的不同修改将从前述描述变得清楚。这类修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。在发生冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。

Claims (20)

1.一种用于改性纤维素纺织材料的方法，该方法包括用选自下组的组合物处理该纤维素纺织材料，该组由以下各项组成：
(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；
(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；
(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；
(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；及
(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；该方法在导致改性纤维素纺织材料的条件下进行，其中与未改性纤维素纺织材料相比，该改性纤维素纺织材料具有纺织品改进。
2.如权利要求1所述的方法，其中该纤维素纺织材料是棉布、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻、椰壳纤维胶/人造丝、苎麻、乙酸纤维素纤维、莱赛尔纤维、或其共混物。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中该纤维素纺织材料是基于纤维素的材料和基于非纤维素的材料的共混物。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中该纺织品改进是选自下组的一种或多种改进，该组由以下各项组成：抗返染，抗起球，抗缩水，抗磨损，抗皱，改进的颜色外观，织物柔软性，改进的形状保持，阻燃性和耐化学性，气味控制或防臭，防紫外线，防水，抗微生物性质，改进的静电控制，和改进的拉伸强度。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中该聚合木葡聚糖或该用化学基团功能化的聚合木葡聚糖的平均分子量范围是从2kDa至约500kDa。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖低聚物或该包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物的平均分子量范围是从0.5kDa至约500kDa。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖内糖基转移酶以约0.1nM至约1mM的浓度存在。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该聚合木葡聚糖或该用化学基团功能化的聚合木葡聚糖以约1mg至约1g/g纤维素纺织材料存在。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中该木葡聚糖低聚物或该功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖或用化学基团功能化的聚合木葡聚糖一起以木葡聚糖低聚物或功能化的木葡聚糖低聚物与聚合木葡聚糖的约50:1摩尔比至约0.5:1摩尔比存在。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中掺入到该材料中的该聚合木葡聚糖、该用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、该木葡聚糖低聚物、或该包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物的浓度是约0.01g至约500mg/g的纤维素纺织材料。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中该化学基团是感兴趣的化合物或反应性基团，如乙醛基团、氨基基团、芳香族基团、羧基基团、卤素基团、羟基基团、酮基团、腈基团、硝基基团、巯基基团、或磺酸盐基团。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中该组合物是洗涤剂组合物或织物护理组合物。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中该纤维素纺织材料的处理是预洗涤步骤或洗涤步骤。
14.如权利要求12或13所述的方法，其中该组合物进一步包括选自下组的一种或多种组分，该组由以下各项组成：表面活性剂、助洗剂、漂白剂、染料转移抑制剂、螯合剂、分散剂、多糖、软化剂、抑泡剂、载体、酶、酶稳定系统、多元酸、污垢去除剂、抗再沉淀剂、助水溶剂、遮光剂、抗氧化剂、杀菌剂、染料、香料、增亮剂及其混合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中该酶选自下组，该组由以下各项组成：淀粉酶、纤维素酶、角质酶、脂肪酶、氧化酶、过氧化物酶、蛋白酶、木葡聚糖酶、内切葡聚糖酶及其组合。
16.一种改性纤维素纺织材料，包括(a)一种聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
17.一种选自下组的组合物，该组由以下各项组成：(a)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；和(e)一种组合物，包括一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
18.一种针对纤维素纺织材料的洗涤剂或织物护理组合物，包括一种表面活性剂和(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
19.一种针对纤维素纺织材料的洗涤剂添加剂，包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
20.一种针对纤维素纺织材料的纺织品涂层或后处理组合物，包括(a)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(b)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物；(c)一种木葡聚糖内糖基转移酶、一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖、和一种木葡聚糖低聚物；(d)一种木葡聚糖内糖基转移酶、和一种用化学基团功能化的聚合木葡聚糖；或(e)一种木葡聚糖内糖基转移酶和一种包括化学基团的、功能化的木葡聚糖低聚物。
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