CN105866226A - 一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备及使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备及使用方法，碳毡电极检测端表面固定葡萄糖氧化酶与有机染料的混合物，制成葡萄糖氧化酶生物传感器；将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银电极作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，并将三电极系统与电化学工作站连接；将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。本发明采用碳毡为基体电极，采用有机染料修饰葡萄糖氧化酶生物传感器，用于对葡萄糖进行定量分析；其制备简单、成本低廉、响应速度快、检测范围宽、抗干扰性强、环境友好。

Description

一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备及使用方法

技术领域

[0001]本发明涉及酶生物传感器技术领域，尤其涉及一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备及使用方法。

背景技术

[0002]生物传感器是一种以生物活性单元为敏感元件，结合化学、物理转换元件，对被分析物具有高度选择性的装置，它具有灵敏度高、检测速度快、操作简便、成本低、可进行连续动态监测等优点。生物传感器技术已经成为一个非常活跃的工程技术研究领域，它与生物控制论、仿生学、生物计算机等学科一起处在生命科学和信息科学的交叉领域，是发展生物技术必不可少的一种先进的检测与监控装置。

[0003]葡萄糖氧化酶(GOD)具有高转化率、高选择性及高稳定性，是商业用途中重要的酶。它能够将葡萄糖转化为葡萄糖酸，应用于医疗领域检测糖尿病患者的血糖情况。GOD存在于动植物及微生物体内，能够在氧气的存在下催化氧化β-D-葡萄糖，释放过氧化氢，过氧化氢是一种抗菌剂，因此GOD成为了一种天然的食品保鲜剂。此外，由于GOD的活性中心具有氧化还原性质，能够传递电子，并且具备体内可用性及可植入性，正在作为生物燃料电池以及生物传感器的目标酶引起研究人员极大的兴趣。而开发用于检测体内葡萄糖浓度微小变化的高灵敏度的葡萄糖氧化酶生物传感器具有重要的理论意义及应用价值。

[0004]专利号为CN105301086A的中国专利公开了“一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法及其应用”，其制备葡萄糖氧化酶生物传感器采用电聚合方法在玻碳电极上覆盖孔雀石绿膜，然后再用滴涂的方法将葡萄糖氧化酶滴在孔雀石绿膜修饰后的电极上。此种方法首先需要将玻碳电极抛光打磨，用超纯水清洗后，再用硝酸与乙醇的混合溶液清洗，之后再用超纯水清洗。清洗后的玻碳电极进行循环伏安扫描，用电化学方法去除玻碳表面的基团。然后在玻碳表面电化学聚合孔雀石绿膜、在绿膜表面滴加戊二醛与葡萄糖氧化酶的混合溶液，制备电极。其采用的玻碳电极使用前需要抛光、活化，且表面性质不稳定、易引入氮、氧基团，电化学催化性质也会随之改变，使用时要进行功能化。

发明内容

[0005]本发明提供了一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备及使用方法，采用碳毡为基体电极，采用有机染料修饰葡萄糖氧化酶生物传感器，用于对葡萄糖进行定量分析;其制备简单、成本低廉、响应速度快、检测范围宽、抗干扰性强、环境友好。

[0006]为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案实现:

[0007] —种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法，包括如下步骤:

[0008] I)将作为电极的小块碳毡在去离子水中超声清洗3次以上，每次至少5分钟；

[0009] 2)清洗后的碳毡电极检测端表面固定葡萄糖氧化酶与有机染料的混合物，具体操作方法为:葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的混合质量比为0.05〜1:1000，有机染料与溶剂的混合质量比为0.5〜5:1OOOO;将碳毡电极的检测端浸入混合液中，室温放置15分钟〜I小时，使混合液吸附在碳毡电极检测端表面；

[0010] 3)吸附修饰后的碳毡电极在溶剂中清洗3次以上，每次至少5分钟，去除表面吸附性弱的酶分子，即制成葡萄糖氧化酶生物传感器，在4°C条件下保存备用。

[00Ί1 ]所述葡萄糖氧化酶浓度为0.1〜lmg/mL。

[0012]所述有机染料为吖啶类染料或吩噻嗪类染料中的一种，有机染料的浓度为0.1〜

1.0mmol /L

[0013] 所述溶剂为磷酸缓冲溶液或Britton-Robinson缓冲溶液，其中Britton-Robinson缓冲溶液含硼酸、醋酸、磷酸和氢氧化钠;溶剂浓度为I〜100mmol/L，pH值为3.5〜9.5。

[0014] —种葡萄糖氧化酶生物传感器的使用方法，包括如下步骤:

[0015] I)制备电解液；将0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液与浓度为0.1〜0.5mol/L的对苯二酚按800〜1200:1的体积比混合后制成电解液，对苯二酚作为电子传递介体;测定葡萄糖氧化酶生物传感器的循环伏安曲线；

[0016] 2)将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银电极作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，并将三电极系统与电化学工作站连接；

[0017] 3)在pH = 3.5〜9.5范围内测定葡萄糖氧化酶生物传感器对同一浓度葡萄糖的电流响应值，优化结果，选定测定时的最佳pH值，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。

[0018] 4)将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。

[0019]与现有技术相比，本发明的有益效果是:

[0020] I)采用碳毡为基体电极，其成本低廉、性质稳定、清洗容易、不需要进行前期处理、制备方法简单、易于实现电极微型化，适用于工业生产；

[0021] 2)采用有机染料修饰的葡萄糖氧化酶生物传感器，制备简单、选择性好、催化活性高、反应速度快、检测范围宽，将为生物传感器的发展带来更大的进步；

[0022] 3)不使用污染性溶剂、环境友好，适用于在线检测，适于在实际工业及医疗检测中推广应用。

附图说明

[0023]图1是本发明所述葡萄糖氧化酶生物传感器制备过程示意图。

[0024]图2是本发明所述葡萄糖氧化酶生物传感器检测溶液中葡萄糖的反应原理图。

[0025]图3是本发明实施例1中采用葡萄糖氧化酶修饰的碳毡电极对空白溶液和葡萄糖溶液的响应图。

[0026]图4是本发明实施例1中采用葡萄糖氧化酶及吖啶橙修饰的碳毡电极对空白溶液和葡萄糖溶液的响应图。

[0027]图5是本发明实施例1中所述葡萄糖氧化酶生物传感器在不同浓度葡萄糖体系下与峰电流的关系图。

[0028]图6是本发明实施例1中采用裸电极、葡萄糖氧化酶修饰电极、葡萄糖氧化酶及吖啶橙修饰电极的电化学交流阻抗谱图。

[0029]图7是本发明实施例1中采用裸电极、葡萄糖氧化酶修饰电极、葡萄糖氧化酶及吖啶橙修饰电极的循环伏安曲线。

[0030]图8是本发明实施例1中葡萄糖氧化酶与吖啶橙混合溶液的紫外吸收光谱。

[0031 ]图9是本发明实施例1中葡萄糖氧化酶与吖啶橙混合溶液的荧光吸收光谱。

具体实施方式

[0032]下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步说明:

[0033]如图1所示，本发明所述一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法，包括如下步骤:

[0034] I)将作为电极的小块碳毡在去离子水中超声清洗3次以上，每次至少5分钟；

[0035] 2)清洗后的碳毡电极检测端表面固定葡萄糖氧化酶与有机染料的混合物，具体操作方法为:葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的混合质量比为0.05〜1:1000，有机染料与溶剂的混合质量比为

0.5〜5:10000;将碳毡电极的检测端浸入混合液中，室温放置15分钟〜I小时，使混合液吸附在碳毡电极检测端表面；

[0036] 3)吸附修饰后的碳毡电极在溶剂中清洗3次以上，每次至少5分钟，去除表面吸附性弱的酶分子，即制成葡萄糖氧化酶生物传感器，在4°C条件下保存备用。

[0037]所述葡萄糖氧化酶浓度为0.1〜lmg/mL。

[0038]所述有机染料为吖啶类染料或吩噻嗪类染料中的一种，有机染料的浓度为0.1〜

1.0mmol /L

[0039] 所述溶剂为磷酸缓冲溶液或Britton-Robinson缓冲溶液，其中Britton-Robinson缓冲溶液含硼酸、醋酸、磷酸和氢氧化钠;溶剂浓度为I〜100mmol/L，pH值为3.5〜9.5。

[0040] 一种葡萄糖氧化酶生物传感器的使用方法，包括如下步骤:

[0041 ] I)制备电解液；将0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液与浓度为0.1〜0.5mol/L的对苯二酚按800〜1200:1的体积比混合后制成电解液，对苯二酚作为电子传递介体;测定葡萄糖氧化酶生物传感器的循环伏安曲线；

[0042] 2)将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银电极作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，并将三电极系统与电化学工作站连接；

[0043] 3)在pH = 3.5〜9.5范围内测定葡萄糖氧化酶生物传感器对同一浓度葡萄糖的电流响应值，优化结果，选定测定时的最佳pH值，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。

[0044] 4)将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。

[0045]在生物电子器件应用中，生物酶需要被固定在一个基板上以实现直接电子传递或者增大表面积以达到效率放大作用。基板的种类繁多且具备不同的物理及化学性质，包括碳电极、平的或结构化的金属表面、聚合物、玻璃矩阵以及纳米材料等。碳材料是工业生产中广泛使用的材料之一。它有很多种类，包括碳纤维、天然石墨、玻璃碳、多孔活性炭、金刚石、碳纳米管、富勒烯以及目前很热的石墨烯等材料。碳是化学元素周期表的第6位，其外层电子结构为2s22p2，在不同的条件下，会产生不同形式的杂化，因此会提供不同性质的表面结构。基板表面的性质如何影响酶的固定是非常复杂的课题，通常酶与表面之间非共价键作用会导致酶活性丧失的不可逆性。

[0046]本发明采用碳毡为基体电极，碳毡是由碳纤维组成的微电极系统，其纤维直径大约为7微米，易于实现电极的微型化。它具有自由的三维结构，特点是高表面积、高导电性以及高电子效率，适合应用于流动注射系统，可作为生物传感器或生物燃料电池的电极应用在医疗、环境、工业生产等领域。与碳纳米管相比，碳毡的价格非常低廉，固定时无需任何的前处理过程，且具备物理及化学稳定性，为生物传感器实现产业化降低了成本。

[0047]葡萄糖氧化酶因为具有非常重要的催化活性而被广泛研究。而且价格低廉、性质稳定、实用性强，常被人们用作制备生物传感器的模型分子。

[0048]有机染料，通常应用在纺织业或者医药业。本发明中主要使用吖啶类染料及吩噻嗪类染料两种有机染料，如吖啶橙:3，6_( 二甲胺基)吖啶盐酸盐，属于吖啶类染料，是一种荧光色素。通常用于细胞中DNA和RNA的染色。本发明将吖啶橙应用于电化学生物传感器上能显著提高对检测物质的响应程度。与其他修饰的葡萄糖氧化酶的生物传感器相比，吖啶橙吸附的葡萄糖氧化酶生物传感器制备简单、反应速度快、检测范围宽，将为生物传感器的发展带来更大的进步。吩噻嗪类染料具有氧化还原性，被广泛的应用于生物电子器件的制备研究中，通常被用作电子传递介体而使用。本发明将其应用于葡萄糖氧化酶传感器的制备，制备过程简单，使用材料成本低廉、检测葡萄糖效果显著。

[0049]如图2所示，本发明所述葡萄糖氧化酶生物传感器检测葡萄糖浓度的工作原理是:对苯二酸Hydroquinone在碳租电极作用下被氧化成对苯醌p-quinone，其反应式如下:

[0050] hydroquinone(HQ)—p-quinone+2H++2e— (I)

[0051 ] 葡萄糖氧化酶将葡萄糖D-glucose氧化成葡萄糖酸内酯D-glucono_5-lactone，同时葡萄糖氧化酶的活性中心由黄素二核苷酸(FAD)变成还原型黄素二核苷酸(FADH2),其反应式如下:

[0052] GOx (FAD )+D-glucose^GOx(FADH2)+D-glucono-5-lac tone (2)

[0053]还原型黄素二核苷酸进一步与对苯醌反应，被对苯醌氧化为黄素二核苷酸，而对苯醌则被还原成对苯二酚，其主要反应式如下:

[0054] GOx (FADH2 )+p-quinone^G0x (FAD )+hydroquinone (HQ) (3)

[0055]以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

[0056]【实施例1】

[0057] 1、葡萄糖氧化酶生物传感器的制备步骤:

[0058] I)切割一块重量为12〜13mg、尺寸为IcmX 0.3cmX 0.3cm的碳毡，在去离子水中超声清洗3次，每次5分钟；

[0059] 2)在清洗好的碳毡电极的检测端表面固定吖啶橙与葡萄糖氧化酶，具体操作方法是:将该碳毡电极检测端浸入浓度为0.lmg/mL葡萄糖氧化酶与浓度为0.3mmol/L吖啶橙的混合溶液中室温放置I小时，本实施例中，溶剂采用浓度为0.lmol/L、pH值为5.5的磷酸缓冲溶液(PBS)，葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的质量比为I: 10000，有机染料与溶剂的质量比为1.3:10000。

[0060] 3)将修饰后的碳毡电极放入0.1mo I/LPBS溶液中搅拌清洗3次，每次5分钟，去除表面吸附弱的酶分子，将该葡萄糖氧化酶生物传感器保存于4°C条件下备用。

[0061 ] 2、对本实施例所制备的葡萄糖氧化酶生物传感器的性能进行测试。

[0062]测试结果如图3-图9所示，可以看出，与其他修饰的葡萄糖氧化酶的生物传感器相比，吖啶橙吸附的葡萄糖氧化酶生物传感器具有反应速度快、检测范围宽且抗干扰性强的优点。

[0063] 3、采用葡萄糖氧化酶生物传感器检测葡萄糖浓度。

[0064]将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，将三电极系统与电化学工作站连接，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。

[0065] 工作条件:所用的电解液为0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液(BRS)，15mL缓冲溶液中含有0.25mmol/L对苯二酚。电解质溶液的pH为5.5。

[0066]将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。

[0067 ]本实施例中对葡萄糖检测的灵敏度为I δμΑ/mmo I /L，检测下限为2mmo I /L，线性范围为I X 10—4〜5 X 10—2mol/L。

[0068]【实施例2】

[0069] 1、葡萄糖氧化酶生物传感器的制备步骤:

[0070] I)切割一块重量为12〜13mg、尺寸为IcmX 0.3cmX 0.3cm的碳毡，在去离子水中超声清洗3次，每次5分钟；

[0071] 2)在清洗好的碳毡电极的检测端表面固定硫堇蓝与葡萄糖氧化酶，具体操作方法是:将该碳毡电极检测端浸入浓度为0.5mg/mL葡萄糖氧化酶与浓度为0.5mmol/L硫堇蓝的混合溶液中室温放置I小时，本实施例中，溶剂采用浓度为0.lmol/L、pH值为5.5的磷酸缓冲溶液(PBS)，葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的质量比为5:10000，有机染料与溶剂的质量比为1.7:10000。

[0072] 3)将修饰后的碳毡电极放入0.lmol/L PBS溶液中搅拌清洗3次，每次5分钟，去除表面吸附弱的酶分子，将该葡萄糖氧化酶生物传感器保存于4°C条件下备用。

[0073] 2、采用葡萄糖氧化酶生物传感器检测葡萄糖浓度。

[0074]将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，将三电极系统与电化学工作站连接，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。

[0075] 工作条件:所用的电解液为0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液(BRS)，15mL缓冲溶液中含有0.25mmol/L对苯二酚。电解质溶液的pH为5.5。

[0076]将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。

[0077]本实施例中对葡萄糖检测的灵敏度为ΙΟμΑ/mmol/L，检测下限为1.5mmol/L，测定的线性范围为5 X 10—3〜5 X 10—2mol/L。

[0078]【实施例3】

[0079] 1、葡萄糖氧化酶生物传感器的制备步骤:

[0080] I)切割一块重量为12〜13mg、尺寸为IcmX 0.3cmX 0.3cm的碳毡，在去离子水中超声清洗3次，每次5分钟；

[0081] 2)在清洗好的碳毡电极的检测端表面固定亚甲基绿与葡萄糖氧化酶，具体操作方法是:将该碳租电极检测端浸入浓度为0.05mg/mL葡萄糖氧化酶与浓度为0.5mmol/L亚甲基绿的混合溶液中室温放置I小时，本实施例中，溶剂采用浓度为0.lmol/L、pH值为5.5的磷酸缓冲溶液(PBS)，葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的质量比为5: 100000，有机染料与溶剂的质量比为2.2:

10000ο

[0082 ] 3)将修饰后的碳毡电极放入0.1mo I/LPBS溶液中搅拌清洗3次，每次5分钟，去除表面吸附弱的酶分子，将该葡萄糖氧化酶生物传感器保存于4°C条件下备用。

[0083] 2、采用葡萄糖氧化酶生物传感器检测葡萄糖浓度。

[0084]将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，将三电极系统与电化学工作站连接，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。

[0085] 工作条件:所用的电解液为0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液(BRS)，15mL缓冲溶液中含有0.25mmol/L对苯二酚。电解质溶液的pH为6.0。

[0086]将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。

[0087]本实施例中对葡萄糖检测的灵敏度为ΙΟμΑ/mmol/L，检测下限为1.2mmol/L，测定的线性范围为5 X 10—3〜I X 10—2mol/L。

[0088]【实施例4】

[0089] 1、葡萄糖氧化酶生物传感器的制备步骤:

[0090] I)切割一块重量为12〜13mg、尺寸为IcmX 0.3cmX 0.3cm的碳毡，在去离子水中超声清洗3次，每次5分钟；

[0091] 2)在清洗好的碳毡电极的检测端表面固定亚甲基蓝与葡萄糖氧化酶，具体操作方法是:将该碳租电极检测端浸入浓度为0.5mg/mL葡萄糖氧化酶与浓度为0.5mmol/L亚甲基蓝的混合溶液中室温放置I小时，本实施例中，溶剂采用浓度为0.lmol/L、pH值为5.5的磷酸缓冲溶液(PBS)，葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的质量比例为5:10000，有机染料与溶剂的质量比为1.6:

10000ο

[0092 ] 3)将修饰后的碳毡电极放入0.1mo I/LPBS溶液中搅拌清洗3次，每次5分钟，去除表面吸附弱的酶分子，将该葡萄糖氧化酶生物传感器保存于4°C条件下备用。

[0093] 2、采用葡萄糖氧化酶生物传感器检测葡萄糖浓度。

[0094]将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，将三电极系统与电化学工作站连接，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。

[0095] 工作条件:所用的电解液为0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液(BRS)，15mL缓冲溶液中含有0.25mmol/L对苯二酚。电解质溶液的pH为5.5。

[0096]将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。

[0097]本实施例中对葡萄糖检测的灵敏度为20yA/mmol/L，检测下限为1.8mmol/L，对葡萄糖测定的线性范围为I X 10—4〜I X 10—2mol/L。

[0098]以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)将作为电极的小块碳毡在去离子水中超声清洗3次以上，每次至少5分钟； 2)清洗后的碳毡电极检测端表面固定葡萄糖氧化酶与有机染料的混合物，具体操作方法为:葡葡萄糖氧化酶与有机染料分别加入溶剂中配制相应溶液，然后将两种溶液混合，葡萄糖氧化酶与溶剂的混合质量比为0.05〜1:1000，有机染料与溶剂的混合质量比为0.5〜5:10000;将碳毡电极的检测端浸入混合液中，室温放置15分钟〜I小时，使混合液吸附在碳毡电极检测端表面； 3)吸附修饰后的碳毡电极在溶剂中清洗3次以上，每次至少5分钟，去除表面吸附性弱的酶分子，即制成葡萄糖氧化酶生物传感器，在4°C条件下保存备用。

2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶浓度为0.1〜lmg/mL。

3.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法，其特征在于，所述有机染料为吖啶类染料或吩噻嗪类染料中的一种，有机染料的浓度为0.1〜1.0mmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种葡萄糖氧化酶生物传感器的制备方法，其特征在于，所述溶剂为磷酸缓冲溶液或Britton-Robinson缓冲溶液，其中Britton-Robinson缓冲溶液含硼酸、醋酸、磷酸和氢氧化钠;溶剂浓度为I〜100mmol/L，pH值为3.5〜9.5。

5.—种葡萄糖氧化酶生物传感器的使用方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)制备电解液;将0.lmol/L的Britton-Robinson缓冲溶液与浓度为0.1〜0.5mol/L的对苯二酚按800〜1200: I的体积比混合后制成电解液，对苯二酚作为电子传递介体;测定葡萄糖氧化酶生物传感器的循环伏安曲线； 2)将葡萄糖氧化酶生物传感器作为工作电极，银/氯化银电极作为参比电极，铂电极作为对电极，建立三电极系统，并将三电极系统与电化学工作站连接； 3)在pH=3.5〜9.5范围内测定葡萄糖氧化酶生物传感器对同一浓度葡萄糖的电流响应值，优化结果，选定测定时的最佳PH值，对待测溶液中的葡萄糖浓度进行检测。 4)将工作电极的检测端置于待测溶液中，通过电化学工作站检测出待测溶液中电子传递介体的氧化电流的大小，然后根据底物浓度与检测电流的校正曲线，测定待测溶液中的葡萄糖的含量。