CN105547788A - 豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品及其制备方法。本发明根据串珠镰刀菌具有分类学意义的技术指标，解决了串珠镰刀菌实物标准样品溯源参照系与参照指标问题，并应用于本标准样品的定值分析中，在标准样品定性测试理论的研究成果基础上，在国家生物安全标准样品体系框架下，以来源明确的产毒真菌串珠镰刀菌模拟自然污染豆粉样品，采集对数生长期的串珠镰刀菌ACCC36127孢子污染无菌豆粉，混合仪拍打混合，分装，冻干制备出一种生物及产毒信息完整的串珠镰刀菌实物标准样品，获得具有真正溯源意义的串珠镰刀菌实物标准样品，是国内首次分类定级标准样品的研制，具有重要的意义。

Description

豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品及其制备方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品及其制备方法。

背景技术

世界粮农组织（FAO）报告，全球每年约有25％的农作物遭受真菌及其真菌毒素污染，约有2％的农作物因污染严重而失去营养价值和经济价值，由此估算，全球每年因真菌毒素污染而造成的直接及间接损失将可能达到数百亿美元。

在目前已知的真菌毒素中，串珠镰刀菌(Fusariummoniliforme)是一种重要的植物病原菌,危害小麦、玉米、水稻、蔬菜等农作物,造成严重的减产,所产生的真菌毒素玉米赤霉烯酮具有较强的生殖毒性和致崎作用。目前针对真菌毒素的检测，我国主要为理化方法，只能检测到已经产生的毒素，对于已被污染但尚未产生毒素的高风险食品却束手无策，更无法溯源，而且由于真菌的形态相似性及产毒真菌的产毒状况的复杂性，目前各菌种保藏中心提供的标准菌株基本信息不全，基本不涵盖产毒信息，使检验工作难以获得真正的阳性标准样品。

另一方面，目前已研制的分类定级国家标准样品多数溯源至相应的文字标准，生物类定性标准样品多数溯源至公认的测试方法，部分国家标准样品没有溯源性的描述。对2010年～2015年批准的146项分类定级国家标准样品溯源性描述的调查表明：无溯源性描述内容的35项，溯源至测试方法标准的102项，溯源至核酸序列的22项，溯源至产品标准的5项，溯源至计量基准的1项，溯源至权威专家的1项。分类定级国家标准样品溯源性描述的状况说明人们对这类标准样品的溯源性认识和理解上处于比较混乱的阶段，还没有一个统一的规范。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足问题，提供一种豆粉中生物和产毒信息明确的串珠镰刀菌实物定性标准样品，同时采用标准物质分类定级理论，建立对豆粉中串珠镰刀菌实物定性标准样品的定值溯源参照系与参照指标。本发明的另一目的是提供一种豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的制备方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品，其特征在于：所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品包含的序列为：

内转录间隔区基因（ITS）序列：TCCGTAGGTGAACCTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGTTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGCCCTTGCGGCAAGCCGGCCCCGAAATCTAGTGGCGGTCTCGCTGCAGCTTCCATTGCGTAGTAGTAAAACCCTCGCAACTGGTACGCGGCGCGGCCAAGCCGTTAAACCCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGA；

核糖体rRNA18S基因（18S）序列：GTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCAATTATACAGCGAAACTGCGAATGGCTCATTATATAAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACTTGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAATCCCGACTTCGGAAGGGATGTATTTATTAGATTAAAAACCAATGCCCTTCGGGGCTCACTGGTGATTCATGATAACTCCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTTCCCTATCAACTTTCGATGTTTGGGTATTGGCCAAACATGGTTGCAACGGGTAACGGAGGGTTAGGGCTCGACCCCGGAGAAGGAGCCTGAGAAACGGCTACTACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGTGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGTGTACTGGTCCGGCCGGGCCTTTCCCTCTGTGGAACCCCATGCCCTTCACTGGGTGTGGCGGGGAAACAGGACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGCTCCAGGCAGGCCTATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGACAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGACGGTGTTATTTTTTGACCCGTTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTGCTTGGGCTCCAGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAG；

核糖体rRNA28S基因（28S）序列：

GTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGTTTATGACCAGACTTGGGCTTGGTTAATCATCTGGGGTTCTCCCCAGTGCACTTTTCCAGTCCAGGCCAGCATCAGTTTTCCCCGGGGGATAAAGACTTCGGGAATGTGGCTCTCTTCGGGGAGTGTTATAGCCCGTTGTGTAATACCCTGGGGGGGACTGAGGTTCGCGCATCTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTCATCAACGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTC；

伏马菌素合成基因（FUM）序列：

GTCCTACGCGATACATCCCACCACAATTGACCACTGCCTCCAACTCTTCTTCCCTGCTAGCTGTGACGGAATCTTTTACCGAGCCGAGAAACTATGCGTTCCAACAGCAATCGGACGCTTGTATCTTGCGGATGGGAAGCTGTGGGAGGTAGAGGGTGCCCGAGCTGAAGCATTGGCCGCGACAAACTCCGGGGGCTCGATTTCTGGGGCCGCTATCGTGGTGTCCCAACATGACTCTGTCCTGCTCTCTCTGGAGGATGGAAAATTCTCCCCACTGGAAATGGATCTTGGAGGGGAAGGAAACGCAGATTTGGTTGGTGCGGCACGTCTCGAATGGAAACCAAACTTGGACTTTGCCGATATGCATAGCCTTGTTCGCCCAAGTCATGGATCTATGAACGACGGCCCCGAGCTTGATC。

进一步地，所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的溯源指标如下表所示：

表1豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品溯源指标

进一步地，所述产毒基因簇为FUM基因。

进一步地，所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品为真空冻干粉，可用于食品、饲料中镰刀菌的定性检测，也可用于质量控制，产品在0-4℃贮存，两年内稳定，常温运输。

一种根据所述的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步：培养串珠镰刀菌ACCC36127至对数生长期，采集孢子加入到10-30mL的0.5%的豆粉水溶液中，目标菌添加量约为2*10⁵CFU/mL；

第二步：样品置于干净无菌袋中，混合仪拍打混合，再将混匀好的上述溶液加入到总体的豆粉水溶液中，重复混合步骤；

第三步：将步骤二中制备好的菌液分装0.5mL/瓶，放置橡胶盖，但不要塞紧，置于中试冻干机中低温真空冷冻干燥，制备成混合冻干粉。

进一步地，所述第三步中的冷冻工艺参数如下：

1）预冷阶段：隔板温度5℃；

2）冷冻阶段：设置隔板温度为10℃，每个阶段降低10℃，至-50℃，每个温度阶段运行时间分别为1h；

3）主干燥阶段：隔板温度-50℃，运行时间0.5h，真空度0.2mbar；隔板温度-40℃，运行时间7h，真空度0.4mbar；隔板温度-35℃，运行时间7h，真空度0.6mbar；隔板温度-25℃，运行时间5h，真空度0.8mbar；隔板温度-15℃，运行时间4h，真空度1.0mbar；隔板温度-5℃，运行时间2h，真空度1.2mbar；

4）二次干燥阶段：隔板温度0℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度15℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度25℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar。

本发明是在标准样品定性测试理论的研究成果基础上，在国家生物安全标准样品体系框架下，研究解决上述实际工作中遇到的问题，以来源明确的产毒真菌串珠镰刀菌模拟自然污染豆粉样品，制备一种生物及产毒信息完整的串珠镰刀菌实物标准样品，根据串珠镰刀菌具有分类学意义的技术指标，解决了串珠镰刀菌实物标准样品溯源参照系与参照指标问题，并应用于本标准样品的定值以及均匀性、稳定性分析中，获得具有真正溯源意义的串珠镰刀菌实物标准样品，是国内首次分类定级标准样品的研制，具有重要的意义。

附图说明

图1为豆粉中串珠镰刀菌实物定性标准样品的制备流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。

实施例

采用标准物质分类定级理论，建立对豆粉中串珠镰刀菌实物定性标准样品的定值溯源参照系与参照指标，包括以下步骤：

第一步：标准物质定值溯源参照系的建立：

（1）串珠镰刀菌的分类地位

污染的豆粉样品中一个镰刀菌的分类地位（taxon）特性值为串珠镰刀菌（种），其中，用于分类的特性是镰刀菌的分类地位，该镰刀菌（被测对象）的特性值为串珠镰刀菌（种）。镰刀菌（属）的分类地位特性值集包含直孢组、李瑟组、拟穗霉组、枝孢组、砖红组、美丽组、马特组、蛛丝组、表球组、嗜蚧组、膨孢组和色变组12个组一级的子集，李瑟组子集中包括串珠镰刀菌、增殖镰刀菌、亚粘团串珠镰刀菌和花腐镰刀菌。因此，镰刀菌（属）的分类地位特性子集具有典型的层级结构（属—组—种），同级（组或种）子集之间具有并列互斥关系，串珠镰刀菌被“李瑟组”包容并均为封闭类。

（2）串珠镰刀菌溯源参照系的理论指标

“分生孢子形态”是串珠镰刀菌“分类地位”特性的一个子特性，它与菌落形态、菌丝形态等子特性构成其上级子特性“形态特性”；而“形态特性”、“生化特性”、“遗传学特性”等构成“分类地位”这个分类特性；因此，以上与之相关的子特征均视为串珠镰刀菌溯源参照系的理论指标。

（3）串珠镰刀菌溯源参照系的指标的确认

采集5株来自不同菌种保藏中心的（ACCC36127、CGMCC3.4759、ACCC37123、CICC40363、ACCC30133）菌落特性、显微结构、遗传序列（18S基因、28S基因、ITS基因及产毒基因序列）、化学特性（产玉米赤霉烯酮毒素）的分析数据，见表2，结合4种近缘种的比对分析，确认串珠镰刀菌溯源参照系的指标为：1.菌落颜色，2.菌落直径，3.小型分生孢子数量，4.小型分生孢子链生，5.分生孢子形状，6.分生孢子大小，7.生化指标，8.遗传序列。

表2不同串珠镰刀菌菌株特性比对分析

豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的具体指标如下表所示：

表3豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品指标

所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的制备方法，包括以下步骤：

第一步：培养串珠镰刀菌ACCC36127至对数生长期，采集孢子加入到20mL的0.5%的豆粉水溶液中，目标菌添加量约为2*10⁵CFU/mL；

第二步：样品置于干净无菌袋中，混合仪拍打混合，再将混匀好的上述溶液加入到总体的豆粉水溶液中，重复混合步骤；

第三步：将步骤二中制备好的菌液分装0.5mL/瓶，放置橡胶盖，但不要塞紧，置于中试冻干机中低温真空冷冻干燥，制备成混合冻干粉，

冷冻工艺参数如下：

1）预冷阶段：隔板温度5℃；

2）冷冻阶段：设置隔板温度为10℃，每个阶段降低10℃，至-50℃，每个温度阶段运行时间分别为1h；

3）主干燥阶段：隔板温度-50℃，运行时间0.5h，真空度0.2mbar；隔板温度-40℃，运行时间7h，真空度0.4mbar；隔板温度-35℃，运行时间7h，真空度0.6mbar；隔板温度-25℃，运行时间5h，真空度0.8mbar；隔板温度-15℃，运行时间4h，真空度1.0mbar；隔板温度-5℃，运行时间2h，真空度1.2mbar。

4）二次干燥阶段：隔板温度0℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度15℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度25℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar。

所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品为真空冻干粉，可用于食品、饲料中串珠镰刀菌的定性检测，也可用于质量控制，产品在0-4℃贮存，两年内稳定，常温运输。

由8家实验室（辽宁出入境检验检疫局、大连出入境检验检疫局、河南出入境检验检疫局、山东农业大学生命科学院、辽宁师范大学生命科学学院、山东出入境检验检疫局、吉林出入境检验检疫局、沈阳出入境检验检疫局）对制备出的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品定值。定值采用串珠镰刀菌溯源参照系的8个指标，测试方法采用GB/T4789.16—2003，每个定值实验室测试5支标准样品，数值取均值；测序采用2家测序公司（铂尚生物科技有限公司和北京六合华大基因科技有限公司）完成，所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的序列为：

内转录间隔区基因（ITS）序列：TCCGTAGGTGAACCTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGTTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGCCCTTGCGGCAAGCCGGCCCCGAAATCTAGTGGCGGTCTCGCTGCAGCTTCCATTGCGTAGTAGTAAAACCCTCGCAACTGGTACGCGGCGCGGCCAAGCCGTTAAACCCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGA；

核糖体rRNA18S基因（18S）序列：GTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCAATTATACAGCGAAACTGCGAATGGCTCATTATATAAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACTTGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAATCCCGACTTCGGAAGGGATGTATTTATTAGATTAAAAACCAATGCCCTTCGGGGCTCACTGGTGATTCATGATAACTCCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTTCCCTATCAACTTTCGATGTTTGGGTATTGGCCAAACATGGTTGCAACGGGTAACGGAGGGTTAGGGCTCGACCCCGGAGAAGGAGCCTGAGAAACGGCTACTACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGTGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGTGTACTGGTCCGGCCGGGCCTTTCCCTCTGTGGAACCCCATGCCCTTCACTGGGTGTGGCGGGGAAACAGGACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGCTCCAGGCAGGCCTATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGACAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGACGGTGTTATTTTTTGACCCGTTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTGCTTGGGCTCCAGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAG；

核糖体rRNA28S基因（28S）序列：

GTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGTTTATGACCAGACTTGGGCTTGGTTAATCATCTGGGGTTCTCCCCAGTGCACTTTTCCAGTCCAGGCCAGCATCAGTTTTCCCCGGGGGATAAAGACTTCGGGAATGTGGCTCTCTTCGGGGAGTGTTATAGCCCGTTGTGTAATACCCTGGGGGGGACTGAGGTTCGCGCATCTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTCATCAACGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTC；

伏马菌素合成基因（FUM）序列：

GTCCTACGCGATACATCCCACCACAATTGACCACTGCCTCCAACTCTTCTTCCCTGCTAGCTGTGACGGAATCTTTTACCGAGCCGAGAAACTATGCGTTCCAACAGCAATCGGACGCTTGTATCTTGCGGATGGGAAGCTGTGGGAGGTAGAGGGTGCCCGAGCTGAAGCATTGGCCGCGACAAACTCCGGGGGCTCGATTTCTGGGGCCGCTATCGTGGTGTCCCAACATGACTCTGTCCTGCTCTCTCTGGAGGATGGAAAATTCTCCCCACTGGAAATGGATCTTGGAGGGGAAGGAAACGCAGATTTGGTTGGTGCGGCACGTCTCGAATGGAAACCAAACTTGGACTTTGCCGATATGCATAGCCTTGTTCGCCCAAGTCATGGATCTATGAACGACGGCCCCGAGCTTGATC。

定值结果汇总见表4：

表4合作定值结果

以上内容是结合优选技术方案对本发明所做的进一步详细说明，不能认定发明的具体实施仅限于这些说明。对本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出简单的推演及替换，都应当视为本发明的保护范围。

SEQUENCELISTING

<110>蒋,丹

刘,淑艳

万,超

丁,健

<120>豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品及其制备方法

<130>20160222

<160>4

<170>PatentInversion3.3

<210>1

<211>555

<212>DNA

<213>串珠镰刀菌

<400>1

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<213>串珠镰刀菌

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Claims (6)

1.一种豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品，其特征在于：所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品包含的序列为：

内转录间隔区基因（ITS）序列：TCCGTAGGTGAACCTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCAATTGTTGCCTCGGCGGATCAGCCCGCTCCCGGTAAAACGGGACGGCCCGCCAGAGGACCCCTAAACTCTGTTTCTATATGTAACTTCTGAGTAAAACCATAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCAAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGTTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGCCCTTGCGGCAAGCCGGCCCCGAAATCTAGTGGCGGTCTCGCTGCAGCTTCCATTGCGTAGTAGTAAAACCCTCGCAACTGGTACGCGGCGCGGCCAAGCCGTTAAACCCCCAACTTCTGAATGTTGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGGA；

核糖体rRNA18S基因（18S）序列：GTAGTCATATGCTTGTCTCAAAGATTAAGCCATGCATGTCTAAGTATAAGCAATTATACAGCGAAACTGCGAATGGCTCATTATATAAGTTATCGTTTATTTGATAGTACCTTACTACTTGGATAACCGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAAAATCCCGACTTCGGAAGGGATGTATTTATTAGATTAAAAACCAATGCCCTTCGGGGCTCACTGGTGATTCATGATAACTCCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGGTTCATTCAAATTTCTTCCCTATCAACTTTCGATGTTTGGGTATTGGCCAAACATGGTTGCAACGGGTAACGGAGGGTTAGGGCTCGACCCCGGAGAAGGAGCCTGAGAAACGGCTACTACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTAGTGACAATAAATACTGATACAGGGCTCTTTTGGGTCTTGTAATTGGAATGAGTACAATTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGTGGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGCCTGGCTGGCCGGTCCGCCTCACCGCGTGTACTGGTCCGGCCGGGCCTTTCCCTCTGTGGAACCCCATGCCCTTCACTGGGTGTGGCGGGGAAACAGGACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGCTCCAGGCAGGCCTATGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGACAGTCGGGGGCATCAGTATTCAATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAGGAACGAAAGTTAGGGGATCGAAGACGATCAGATACCGTCGTAGTCTTAACCATAAACTATGCCGACTAGGGATCGGACGGTGTTATTTTTTGACCCGTTCGGCACCTTACGAGAAATCAAAGTGCTTGGGCTCCAGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAATTGACGGAAG；

核糖体rRNA28S基因（28S）序列：

GTGAAATTGTTGAAAGGGAAGCGTTTATGACCAGACTTGGGCTTGGTTAATCATCTGGGGTTCTCCCCAGTGCACTTTTCCAGTCCAGGCCAGCATCAGTTTTCCCCGGGGGATAAAGACTTCGGGAATGTGGCTCTCTTCGGGGAGTGTTATAGCCCGTTGTGTAATACCCTGGGGGGGACTGAGGTTCGCGCATCTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTCATCAACGACCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTC；

伏马菌素合成基因（FUM）序列：

GTCCTACGCGATACATCCCACCACAATTGACCACTGCCTCCAACTCTTCTTCCCTGCTAGCTGTGACGGAATCTTTTACCGAGCCGAGAAACTATGCGTTCCAACAGCAATCGGACGCTTGTATCTTGCGGATGGGAAGCTGTGGGAGGTAGAGGGTGCCCGAGCTGAAGCATTGGCCGCGACAAACTCCGGGGGCTCGATTTCTGGGGCCGCTATCGTGGTGTCCCAACATGACTCTGTCCTGCTCTCTCTGGAGGATGGAAAATTCTCCCCACTGGAAATGGATCTTGGAGGGGAAGGAAACGCAGATTTGGTTGGTGCGGCACGTCTCGAATGGAAACCAAACTTGGACTTTGCCGATATGCATAGCCTTGTTCGCCCAAGTCATGGATCTATGAACGACGGCCCCGAGCTTGATC。

2.根据权利要求1所述的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品，其特征在于：所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的溯源指标如下表所示：

表1豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品溯源指标

。

3.根据权利要求2所述的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品，其特征在于：所述产毒基因簇为FUM基因。

4.根据权利要求1或2所述的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品，其特征在于：所述豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品为真空冻干粉，可用于食品、饲料中镰刀菌的定性检测，也可用于质量控制，产品在0-4℃贮存，两年内稳定，常温运输。

5.一种根据权利要求1或2所述的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步：培养串珠镰刀菌ACCC36127至对数生长期，采集孢子加入到10-30mL的0.5%的豆粉水溶液中，目标菌添加量约为2*10⁵CFU/mL；

第二步：样品置于干净无菌袋中，混合仪拍打混合，再将混匀好的上述溶液加入到总体的豆粉水溶液中，重复混合步骤；

第三步：将步骤二中制备好的菌液分装0.5mL/瓶，放置橡胶盖，但不要塞紧，置于中试冻干机中低温真空冷冻干燥，制备成混合冻干粉。

6.根据权利要求5所述的豆粉中串珠镰刀菌定性标准样品的制备方法，其特征在于：所述第三步中的冷冻工艺参数如下：

1）预冷阶段：隔板温度5℃；

2）冷冻阶段：设置隔板温度为10℃，每个阶段降低10℃，至-50℃，每个温度阶段运行时间分别为1h；

3）主干燥阶段：隔板温度-50℃，运行时间0.5h，真空度0.2mbar；隔板温度-40℃，运行时间7h，真空度0.4mbar；隔板温度-35℃，运行时间7h，真空度0.6mbar；隔板温度-25℃，运行时间5h，真空度0.8mbar；隔板温度-15℃，运行时间4h，真空度1.0mbar；隔板温度-5℃，运行时间2h，真空度1.2mbar；

4）二次干燥阶段：隔板温度0℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度15℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar；隔板温度25℃，运行时间3h，真空度0.0010mbar。