CN105524837A - 一种用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的方法 - Google Patents

一种用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的方法 Download PDF

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CN105524837A CN201610123808.8A CN201610123808A CN105524837A CN 105524837 A CN105524837 A CN 105524837A CN 201610123808 A CN201610123808 A CN 201610123808A CN 105524837 A CN105524837 A CN 105524837A
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徐树建
刘金民
刘笑天
陈玉倩
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Abstract

本发明公开了一种用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的方法，属水产养殖领域。小新月菱形藻过去常采用开放型跑道池式培养，基础投资大，易污染，洗刷困难，操作不灵活，占地面积大，生产受季节影响大，不稳定。与传统技术相比，本发明小新月菱形藻培养液配方更加科学合理，用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻，藻类生长快，设备简单，操作灵活，洗刷方便，成本低，生产稳定，不受季节影响且环保、节能。

Description

一种用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的方法
技术领域
本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的方法。
背景技术
小新月菱形藻俗称“小硅藻”，隶属硅藻门，羽纹硅藻纲，管壳缝目，菱形藻科，菱形藻属，为温暖性、咸水种或半咸水种藻类植物。藻体为单个细胞，主要生长在潮间带滩面上，也浮游于水中，我国各海区均有出现。细胞中央部分膨大，纺锤形，两端渐尖，笔直或朝同一个方向弯曲，似月牙形。细胞长12-23微米，宽2-3微米。细胞中央有一细胞核，色素体黄褐色，两片，位于中央细胞核两侧。行纵分裂繁殖，生长适温5-28℃，最适15-26℃，超过28℃，细胞停止生长，最终大量死亡。对盐度适应范围广，18-61.5‰均能生长，最适25-32‰。最适光照强度4000-15000lux，小型培养时忌直射阳光。适应pH范围7-10，最适7.5-8.5，是我国较早培养和应用的单细胞饵料，广泛用于贝类和虾类育苗。
过去，王兆伟公开了一种小新月菱形藻培养基(申请号CN201510190532.0)，所述培养基包括以下质量浓度的组分：NaNO380-120mg/L、NaH2PO48-12mg/L、柠檬酸铁铵2.5-3.5mg/L、Na2EDTA10-12mg/L、Na2SiO3·9H2O20-30mg/L、VB10.005-0.007mg/L、VB120.04-0.06mg/L、ZnSO4·4H2O22-24μg/L、MnCl2·4H2O175-180μg/L、CuSO4·5H2O9-11μg/L、Na2MoO4·2H2O7.0-7.5μg/L、CoCl2·6H2O11-13μg/L和植物生长调节因子二苯脲0.1-1mg/L和对氯苯氧乙酸0.1-1mg/L。该发明所述培养基培养小新月菱形藻生长速率快、细胞密度大，适于规模化批量生产，但成本较高，易污染，且操作麻烦。关于小新月菱形藻培养方法，过去常采用开放型跑道池式培养，该法基础投资大，易污染，洗刷困难，操作不灵活，占地面积大，生产受季节影响大，不稳定。为了克服目前技术不足，本发明公开了一种用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的方法。与传统技术相比，本发明小新月菱形藻培养液配方更加科学合理，用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻，藻类生长快，设备简单，操作灵活，洗刷方便，成本低，生产稳定，不受季节影响且环保、节能。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液，其特征在于，小新月菱形藻培养液由以下重量份数的原料组成：工业氨水(含氨25％-28％)2-5份，过磷酸钙0.4-0.8份，磷酸二氢钾0.05-0.08份，硅酸钠0.1-0.3份，葡萄糖酸亚铁0.2-0.5份，硬脂酸镁0.06-0.0g份，阿斯巴甜0.001-0.004份，牛磺酸0.2-0.6份，钛溶液0.5-0.8份，f/2微量元素溶液0.4-0.7份，f/2维生素溶液0.8-1.4份，920植物生长刺激素0.004-0.008份，磁化海水1000份；其中钛溶液制备方法(重量份数比)：把0.7366份草酸钛，溶解于100份蒸馏水中，加入5份氢氧化铵，使之成碱性，发生沉淀，用离心法将沉淀集中，用20份0.05mol/L的硫酸溶解即得；f/2微量元素溶液配方(重量份数比)：ZnSO4·4H2O0.02-0.04份，MnCl2·4H2O0.04-0.08份，CuSO4·5H2O0.01-0.03份，FeC6H5O7·5H2O4-6份，Na2MoO4·2H2O0.02-0.05份，CoCl2·6H2O0.03-0.06份，Na2EDTA3-5份，蒸馏水1000份；f/2维生素溶液配方(重量份数比)：维生素B120.005-0.008份，维生素B10.1-0.3份，维生素H0.0005-0.0008份，蒸馏水1000份。
优选地，所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法：
小新月菱形藻的第一级培养方法：取一废旧的饮料瓶，透明，容积在500-800毫升，撕去标签纸，去掉瓶盖，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂；所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份；
加入步骤1所述的小新月菱形藻培养液300毫升，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的小新月菱形藻藻种接种，接种密度3.5万个细胞/毫升，轻轻摇匀，用消毒脱脂棉外包一层纱布做成的棉塞塞住瓶口；把此饮料瓶连同其中的藻液一起放进光照培养箱中培养，共培养7天，前4天，培养箱设置光照强度4500-5000lux，温度23±1℃，光暗周期设为L16+D8，即16小时光照，8小时黑暗，循环往复；后3天，设置光照强度7000-9000lux，温度25±1℃，光暗周期设为L20+D4，即20小时光照，4小时黑暗，循环往复；到第4天，添加步骤1所述的新鲜培养液35毫升，以补充因生长繁殖消耗掉的营养盐，到第6天，添加蒸馏水25毫升，补充挥发掉的水分并稀释藻液；整个培养期间，每天手动摇瓶4次，即每隔6小时摇动一次，每次45秒钟；到第7天末，藻细胞密度可达180±20万个细胞/毫升，停止培养，拔出棉塞，将藻液从瓶口倒出，此藻液作为下一级培养的藻种。
优选地，所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法：小新月菱形藻的第二级培养方法：取一2000毫升的圆柱形量筒，洗刷干净，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂；所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份；
装入步骤1所述的小新月菱形藻培养液1000毫升，轻轻摇匀，用第一级培养的藻液作为藻种进行接种，接种密度4.5万个细胞/毫升，用干净报纸和橡皮筋封口，不要充气，进行培养，将此培养装置放进微藻培养室中进行培养，培养室空调控温，日光灯管提供照明，以打开灯管的数量多少来调节光照强度；共培养10天，前6天，设置光照强度5000-5500lux，温度23±1℃，光周期设为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复；后4天，设置光照强度8000-8500lux，温度25±1℃，光周期设为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，到第7天，添加步骤1所述的小新月菱形藻培养液40毫升，以补充因细胞生长、繁殖消耗掉的营养盐，到第8天，添加蒸馏水30毫升，以补充挥发掉的水分并稀释藻液；到第10天末，细胞密度达160±20万个细胞/毫升，停止充气和照明，揭开报纸，将藻液从量筒筒口倒出，培养结束。
优选地，所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法：
小新月菱形藻的第一级培养方法：取一废旧的饮料瓶，透明，容积在500-800毫升，撕去标签纸，去掉瓶盖，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中西药复合消毒剂；所述中西药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份，十二烷基苯磺酸钠0.5-1份，乙醇0.5-1份，苯甲酸钠0.5-1份，硫酸铝0.5-1份，明矾0.5-1份；
加入步骤1所述的小新月菱形藻培养液300毫升，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的小新月菱形藻藻种接种，接种密度3.5万个细胞/毫升，轻轻摇匀，用消毒脱脂棉外包一层纱布做成的棉塞塞住瓶口；把此饮料瓶连同其中的藻液一起放进光照培养箱中培养，共培养7天，前4天，培养箱设置光照强度4500-5000lux，温度23±1℃，光暗周期设为L16+D8，即16小时光照，8小时黑暗，循环往复；后3天，设置光照强度7000-9000lux，温度25±1℃，光暗周期设为L20+D4，即20小时光照，4小时黑暗，循环往复；到第4天，添加步骤1所述的新鲜培养液35毫升，以补充因生长繁殖消耗掉的营养盐，到第6天，添加蒸馏水25毫升，补充挥发掉的水分并稀释藻液；整个培养期间，每天手动摇瓶4次，即每隔6小时摇动一次，每次45秒钟；到第7天末，藻细胞密度可达180±20万个细胞/毫升，停止培养，拔出棉塞，将藻液从瓶口倒出，此藻液作为下一级培养的藻种。
有益结果
与传统技术相比，本发明小新月菱形藻培养液配方更加科学合理，用废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻，藻类生长快，产量高，设备简单，操作灵活，洗刷方便，成本低，生产稳定，不受季节影响且环保、节能。
附图说明
图1用废旧饮料瓶培养小新月菱形藻的示意图；
用于示意小新月菱形藻的第一级培养方法，其中附图标记为：1消毒棉塞封口，2藻液；
图2用量筒培养小新月菱形藻的示意图；
用于示意小新月菱形藻的第二级培养方法，其中附图标记为：3报纸和橡皮筋封口，4藻液。
具体实施方式
下面结合实施例进一步对该技术进行说明。
一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液，其特征在于，小新月菱形藻培养液由以下重量份数的原料组成：工业氨水(含氨25％-28％)2-5份，过磷酸钙0.4-0.8份，磷酸二氢钾0.05-0.08份，硅酸钠0.1-0.3份，葡萄糖酸亚铁0.2-0.5份，硬脂酸镁0.06-0.0g份，阿斯巴甜0.001-0.004份，牛磺酸0.2-0.6份，钛溶液0.5-0.8份，f/2微量元素溶液0.4-0.7份，f/2维生素溶液0.8-1.4份，920植物生长刺激素0.004-0.008份，磁化海水1000份；其中钛溶液制备方法(重量份数比)：把0.7366份草酸钛，溶解于100份蒸馏水中，加入5份氢氧化铵，使之成碱性，发生沉淀，用离心法将沉淀集中，用20份0.05mol/L的硫酸溶解即得；f/2微量元素溶液配方(重量份数比)：ZnSO4·4H2O0.02-0.04份，MnCl2·4H2O0.04-0.08份，CuSO4·5H2O0.01-0.03份，FeC6H5O7·5H2O4-6份，Na2MoO4·2H2O0.02-0.05份，CoCl2·6H2O0.03-0.06份，Na2EDTA3-5份，蒸馏水1000份；f/2维生素溶液配方(重量份数比)：维生素B120.005-0.008份，维生素B10.1-0.3份，维生素H0.0005-0.0008份，蒸馏水1000份。
优选地，所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法：
小新月菱形藻的第一级培养方法：取一废旧的饮料瓶，透明，容积在500-800毫升，撕去标签纸，去掉瓶盖，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂；所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份；
加入步骤1所述的小新月菱形藻培养液300毫升，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的小新月菱形藻藻种接种，接种密度3.5万个细胞/毫升，轻轻摇匀，用消毒脱脂棉外包一层纱布做成的棉塞塞住瓶口；把此饮料瓶连同其中的藻液一起放进光照培养箱中培养，共培养7天，前4天，培养箱设置光照强度4500-5000lux，温度23±1℃，光暗周期设为L16+D8，即16小时光照，8小时黑暗，循环往复；后3天，设置光照强度7000-9000lux，温度25±1℃，光暗周期设为L20+D4，即20小时光照，4小时黑暗，循环往复；到第4天，添加步骤1所述的新鲜培养液35毫升，以补充因生长繁殖消耗掉的营养盐，到第6天，添加蒸馏水25毫升，补充挥发掉的水分并稀释藻液；整个培养期间，每天手动摇瓶4次，即每隔6小时摇动一次，每次45秒钟；到第7天末，藻细胞密度可达180±20万个细胞/毫升，停止培养，拔出棉塞，将藻液从瓶口倒出，此藻液作为下一级培养的藻种。
优选地，所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法：小新月菱形藻的第二级培养方法：取一2000毫升的圆柱形量筒，洗刷干净，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂；所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份；
装入步骤1所述的小新月菱形藻培养液1000毫升，轻轻摇匀，用第一级培养的藻液作为藻种进行接种，接种密度4.5万个细胞/毫升，用干净报纸和橡皮筋封口，不要充气，进行培养，将此培养装置放进微藻培养室中进行培养，培养室空调控温，日光灯管提供照明，以打开灯管的数量多少来调节光照强度；共培养10天，前6天，设置光照强度5000-5500lux，温度23±1℃，光周期设为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复；后4天，设置光照强度8000-8500lux，温度25±1℃，光周期设为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，到第7天，添加步骤1所述的小新月菱形藻培养液40毫升，以补充因细胞生长、繁殖消耗掉的营养盐，到第8天，添加蒸馏水30毫升，以补充挥发掉的水分并稀释藻液；到第10天末，细胞密度达160±20万个细胞/毫升，停止充气和照明，揭开报纸，将藻液从量筒筒口倒出，培养结束。
优选地，所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法：
小新月菱形藻的第一级培养方法：取一废旧的饮料瓶，透明，容积在500-800毫升，撕去标签纸，去掉瓶盖，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中西药复合消毒剂；所述中西药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份，十二烷基苯磺酸钠0.5-1份，乙醇0.5-1份，苯甲酸钠0.5-1份，硫酸铝0.5-1份，明矾0.5-1份；
加入步骤1所述的小新月菱形藻培养液300毫升，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的小新月菱形藻藻种接种，接种密度3.5万个细胞/毫升，轻轻摇匀，用消毒脱脂棉外包一层纱布做成的棉塞塞住瓶口；把此饮料瓶连同其中的藻液一起放进光照培养箱中培养，共培养7天，前4天，培养箱设置光照强度4500-5000lux，温度23±1℃，光暗周期设为L16+D8，即16小时光照，8小时黑暗，循环往复；后3天，设置光照强度7000-9000lux，温度25±1℃，光暗周期设为L20+D4，即20小时光照，4小时黑暗，循环往复；到第4天，添加步骤1所述的新鲜培养液35毫升，以补充因生长繁殖消耗掉的营养盐，到第6天，添加蒸馏水25毫升，补充挥发掉的水分并稀释藻液；整个培养期间，每天手动摇瓶4次，即每隔6小时摇动一次，每次45秒钟；到第7天末，藻细胞密度可达180±20万个细胞/毫升，停止培养，拔出棉塞，将藻液从瓶口倒出，此藻液作为下一级培养的藻种。
步骤1中所述过磷酸钙，磷酸二氢钾，硅酸钠，葡萄糖酸亚铁，硬脂酸镁，阿斯巴甜，牛磺酸，920植物生长刺激素，草酸钛，氢氧化铵，硫酸，ZnSO4·4H2O，MnCl2·4H2O，CuSO4·5H2O，FeC6H5O7·5H2O，Na2MoO4·2H2O，CoCl2·6H2O，Na2EDTA，蒸馏水，维生素B12，维生素B1，维生素H化学药品纯度均需化学纯级别，但工业氨水是工业纯级别；
步骤1所述工业氨水是含氨25％-28％的水溶液，氨水中仅有一小部分氨分子与水反应形成铵离子和氢氧根离子，即氢氧化铵，是仅存在于氨水中的弱碱。工业氨水氨水无色透明且具有刺激性气味，有毒，对眼、鼻、皮肤有刺激性和腐蚀性，能使人窒息，故操作过程中需带口罩和胶皮手套；
步骤1所述磁化海水制备方法：取海水，脱脂棉过滤，加热，煮沸3-5分钟，冷却，流经磁化水器后，即为磁化水；磁化水器磁感应强度为0.3T，流量为2-3t/h，流速为0.1-0.2m/s；步骤1中f/2微量元素溶液和f/2维生素溶液可以预先配成母液放入4℃冰箱保存备用，但放置时间不要超过20天；
步骤2所述小新月菱形藻接种过程需在无菌操作台上进行；
步骤2中接种用的小新月菱形藻预先进行提纯(本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如高氏提取法)，以确保接种时藻种为纯种且处于生长旺盛的指数生长期。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (4)

1.一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液，其特征在于，小新月菱形藻培养液由以下重量份数的原料组成：工业氨水(含氨25％-28％)2-5份，过磷酸钙0.4-0.8份，磷酸二氢钾0.05-0.08份，硅酸钠0.1-0.3份，葡萄糖酸亚铁0.2-0.5份，硬脂酸镁0.06-0.09份，阿斯巴甜0.001-0.004份，牛磺酸0.2-0.6份，钛溶液0.5-0.8份，f/2微量元素溶液0.4-0.7份，f/2维生素溶液0.8-1.4份，920植物生长刺激素0.004-0.008份，磁化海水1000份；其中钛溶液制备方法(重量份数比)：把0.7366份草酸钛，溶解于100份蒸馏水中，加入5份氢氧化铵，使之成碱性，发生沉淀，用离心法将沉淀集中，用20份0.05mol/L的硫酸溶解即得；f/2微量元素溶液配方(重量份数比)：ZnSO4·4H2O0.02-0.04份，MnCl2·4H2O0.04-0.08份，CuSO4·5H2O0.01-0.03份，FeC6H5O7·5H2O4-6份，Na2MoO4·2H2O0.02-0.05份，CoCl2·6H2O0.03-0.06份，Na2EDTA3-5份，蒸馏水1000份；f/2维生素溶液配方(重量份数比)：维生素B120.005-0.008份，维生素B10.1-0.3份，维生素H0.0005-0.0008份，蒸馏水1000份。
2.根据权利要求1所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法，其特征在于：
小新月菱形藻的第一级培养方法：取一废旧的饮料瓶，透明，容积在500-800毫升，撕去标签纸，去掉瓶盖，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂；所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份；
加入步骤1所述的小新月菱形藻培养液300毫升，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的小新月菱形藻藻种接种，接种密度3.5万个细胞/毫升，轻轻摇匀，用消毒脱脂棉外包一层纱布做成的棉塞塞住瓶口；把此饮料瓶连同其中的藻液一起放进光照培养箱中培养，共培养7天，前4天，培养箱设置光照强度4500-5000lux，温度23±1℃，光暗周期设为L16+D8，即16小时光照，8小时黑暗，循环往复；后3天，设置光照强度7000-9000lux，温度25±1℃，光暗周期设为L20+D4，即20小时光照，4小时黑暗，循环往复；到第4天，添加步骤1所述的新鲜培养液35毫升，以补充因生长繁殖消耗掉的营养盐，到第6天，添加蒸馏水25毫升，补充挥发掉的水分并稀释藻液；整个培养期间，每天手动摇瓶4次，即每隔6小时摇动一次，每次45秒钟；到第7天末，藻细胞密度可达180±20万个细胞/毫升，停止培养，拔出棉塞，将藻液从瓶口倒出，此藻液作为下一级培养的藻种。
3.根据权利要求1所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法，其特征在于：小新月菱形藻的第二级培养方法：取一2000毫升的圆柱形量筒，洗刷干净，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中草药复合消毒剂；所述中草药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份；
装入步骤1所述的小新月菱形藻培养液1000毫升，轻轻摇匀，用第一级培养的藻液作为藻种进行接种，接种密度4.5万个细胞/毫升，用干净报纸和橡皮筋封口，不要充气，进行培养，将此培养装置放进微藻培养室中进行培养，培养室空调控温，日光灯管提供照明，以打开灯管的数量多少来调节光照强度；共培养10天，前6天，设置光照强度5000-5500lux，温度23±1℃，光周期设为L12+D12，即12小时光照，12小时黑暗，循环往复；后4天，设置光照强度8000-8500lux，温度25±1℃，光周期设为L18+D6，即18小时光照，6小时黑暗，到第7天，添加步骤1所述的小新月菱形藻培养液40毫升，以补充因细胞生长、繁殖消耗掉的营养盐，到第8天，添加蒸馏水30毫升，以补充挥发掉的水分并稀释藻液；到第10天末，细胞密度达160±20万个细胞/毫升，停止充气和照明，揭开报纸，将藻液从量筒筒口倒出，培养结束。
4.根据权利要求1所述的一种用于废旧饮料瓶和量筒二级培养小新月菱形藻的培养液二级培养小新月菱形藻的方法，其特征在于：
小新月菱形藻的第一级培养方法：取一废旧的饮料瓶，透明，容积在500-800毫升，撕去标签纸，去掉瓶盖，洗刷干净，用蒸馏水润洗3遍，再采用消毒剂浸泡消毒20分钟，所述消毒剂为中西药复合消毒剂；所述中西药复合消毒剂组成成分(重量份数比)：红背菜2-4份，鱼腥草6-9份，柴胡5-8份，连钱草7-12份，藿香10-15份，苍术7-12份，地肤子8-15份，紫花地丁5-7份，麦冬3-6份，板蓝根0.5-0.9份，百部10-14份，穿心莲5-8份，蒲公英2-6份，桑黄1-3份，十二烷基苯磺酸钠0.5-1份，乙醇0.5-1份，苯甲酸钠0.5-1份，硫酸铝0.5-1份，明矾0.5-1份；
加入权利要求1所述的小新月菱形藻培养液300毫升，取处于指数生长期、干净、无污染、生长旺盛的小新月菱形藻藻种接种，接种密度3.5万个细胞/毫升，轻轻摇匀，用消毒脱脂棉外包一层纱布做成的棉塞塞住瓶口；把此饮料瓶连同其中的藻液一起放进光照培养箱中培养，共培养7天，前4天，培养箱设置光照强度4500-5000lux，温度23±1℃，光暗周期设为L16+D8，即16小时光照，8小时黑暗，循环往复；后3天，设置光照强度7000-9000lux，温度25±1℃，光暗周期设为L20+D4，即20小时光照，4小时黑暗，循环往复；到第4天，添加步骤1所述的新鲜培养液35毫升，以补充因生长繁殖消耗掉的营养盐，到第6天，添加蒸馏水25毫升，补充挥发掉的水分并稀释藻液；整个培养期间，每天手动摇瓶4次，即每隔6小时摇动一次，每次45秒钟；到第7天末，藻细胞密度可达180±20万个细胞/毫升，停止培养，拔出棉塞，将藻液从瓶口倒出，此藻液作为下一级培养的藻种。
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