CN105315705B - 栀子中提取纯化栀子黄色素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,包括以下步骤:1)取干燥栀子果实,剥壳粉碎后作为提取原料,然后放入提取罐中搅拌采用罐组式动态逆流提取方法进行提取,将提取得到的提取液经浓缩罐浓缩得浸膏;2)将步骤1)得到的浸膏溶于水中,然后上聚酰胺树脂柱吸附洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩得到浓缩液;3)将步骤2)得到的浓缩液上大孔吸附树脂柱吸附洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩至稠膏,烘干,得栀子黄色素纯品;以上百分数均是质量百分数。该方法采用罐组式动态逆流提取方法进行提取,提取率提高了30%,再通过聚酰胺树脂柱子吸附与大孔吸附树脂柱子进行富集,得到色价大于800的栀子黄色素。
Description
技术领域
本发明属于药材提取技术领域,具体涉及一种栀子中提取纯化栀子黄色素的方法。
背景技术
中药栀子是栀子属(Gardenia)茜草科常绿灌木干燥成熟的果实。栀子黄色素为栀子果实的主要活性成分之一,是自然界唯一存在的水溶性类胡萝卜素类天然色素,具有降血糖、利胆护肝和清热解毒等功效,无毒副作用、安全性能高、着色能力强、稳定性好和溶解性强等特点,广泛应用于医药、食品和日用化工等行业。
从栀子中提取栀子黄色素主要采用溶剂浸提法、生物酶提取法、物理强化提取法和超临界流体萃取法等;富集栀子黄色素的方法主要有醇沉法、聚酰胺层析法、凝胶层析法、大孔树脂吸附法和膜分离法等。从提取最终结果来看,目前这些提取方法均存在提取率低,且色价低的问题。
发明内容
为解决现有栀子黄色素提取存在的提取率低且色价低的问题,本发明提出一种栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,该方法采用罐组式动态逆流提取方法进行提取,提取率提高了30%,再通过聚酰胺树脂柱吸附与大孔吸附树脂柱进行富集,得到色价大于800的栀子黄色素。
本发明的技术方案是这样实现的:
一种栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,包括以下步骤:
1)取干燥栀子果实,剥壳粉碎后作为提取原料,然后放入提取罐中搅拌采用罐组式动态逆流提取方法进行提取,将提取得到的提取液经浓缩罐浓缩得浸膏;
2)将步骤1)得到的浸膏溶于水中,然后上聚酰胺树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用1-5倍柱床体积的10%-30%乙醇水溶液洗脱去除杂质,再以1-5倍柱床体积的80%-95%乙醇水溶液洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩得到浓缩液;
3)将步骤2)得到的浓缩液上大孔吸附树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用1-5倍柱床体积的10%-30%乙醇水溶液洗脱去除杂质,再以1-5倍柱床体积的80%-95%乙醇水溶液洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩至稠膏,烘干,得栀子黄色素纯品;以上百分数均是质量百分数。
进一步,所述步骤1)中罐组式动态逆流提取方法具体包括以下步骤:
a、栀子中的栀子黄色素提取以数罐为一组,罐组在正式循环提取之前,先对第一罐内的栀子投入40%-60%醇水溶液,其第一次的提取液送入储罐;其后第二次投入40%-60%醇水溶液后的提取液作为第二罐同样栀子提取的溶媒,第二罐第一次的提取液送入储罐,第二罐第二次的提取液作为第三罐同样栀子提取的溶媒,第三罐的初次提取液送入储罐;第一罐第三次投入40%-60%醇水溶液,其提取液作为第二罐同样栀子的提取溶媒,第二罐第三次投入40%-60%醇水溶液,其提取液作为第三罐同样栀子的提取溶媒;
b、罐组在正式循环提取过程中,对已经多次提取、且是最后一次提取的罐内栀子投入40%-60%醇水溶液,其提取液依次作为其后各罐栀子提取的溶媒;
c、最后一次提取的罐内在排出栀子废渣后,再投入同样的栀子,作为下一轮罐组依次循环提取的最末罐,其再次投入栀子后的第一次提取液送入储罐;
d、每罐药材每次的提取液在提取过程中均经过多次动态逆流提取后获得;以上百分数均是质量百分数。
进一步,所述第一罐中第一次40%-60%醇水溶液的加入量为罐内栀子质量的5-10倍,所述第一罐中第二次以及第三次的40%-60%醇水溶液的加入量为罐内栀子质量的3-6倍,所述第一罐后面各罐第一次提取在上一罐提取液的基础上补加40%-60%醇水溶液,其补加量为罐内栀子质量的1-3倍;以上百分数均是质量百分数。
进一步,所述醇溶液为乙醇水溶液、异丙醇水溶液或者正丙醇水溶液。
进一步,每罐依次常温循环提取2-5次,搅拌频率为50-300转/min。
进一步,所述步骤2)10%-30%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h,所述步骤2)80%-95%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h。
进一步,所述步骤3)10%-30%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h,所述步骤3)80%-95%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h。
本发明有益效果:
1、罐组式动态逆流提取由于溶媒循环使用而减少了溶媒用量,节约了前期加热所需的能量,因而降低了生产成本。与传统的单罐多次重复提取工艺相比,提取溶媒用量减少了30%,相应的热能节约了55%,提取率提高了30%,而且随着罐组数的增多,这种优势更加明显。
2、应用聚酰胺树脂、大孔吸附树脂技术富集栀子黄色素,分离效果理想,工艺简单,富集得到的栀子黄色素,色阶为851,在440nm处的OD值为0.39。
具体实施方式
实施例1
取干燥栀子果实,剥去外壳粉碎,称取三份,每份500g,分别放置在第一罐、第二罐与第三罐内。在第一罐内加入5倍栀子质量的质量百分数为50%乙醇水溶液,室温,开启搅拌,保持转速100转/min,提取1h,过滤提取液,送入储罐;在第一罐内再次加入5倍栀子质量的50%乙醇水溶液采用与上次提取相同的条件进行第二次提取,1h后,将提取液转移至第二罐中,并往第二罐中补充2倍栀子质量的50%乙醇水溶液,密封,开启搅拌,使之按照第一罐的提取条件提取1h,过滤提取液,送入储罐;向第一罐中第三次加入5倍量的50%乙醇水溶液,按照上两次的提取条件进行最后一次提取,1h后将提取液转移至第二罐,按照上次的条件进行第二罐的第二次提取,将其提取所得提取液迅速转移至第三罐,并对第三罐补充2倍量的50%乙醇水溶液,按上述条件进行提取,送入储罐,最后一次提取的罐内在排出栀子废渣后,再投入同样的栀子,作为下一轮罐组依次循环提取的最末罐,依次类推。储罐中得到的总提取液,测得栀子黄色素的得率为74.94mg/g,色价为231.4,440nm处的OD值为2.03。
将储罐中的总提取液冷却,静置24h,过滤,减压回收乙醇,得稠浸膏。将浸膏溶于水中,然后上聚酰胺树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用5倍柱床体积的30%乙醇水溶液以流速为1BV/h洗脱去除杂质,再以5倍柱床体积的90%乙醇水溶液以流速为1BV/h洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩得到浓缩液,得到的栀子黄色素粗品经检测,色价为436,440nm处的OD值为1.19。
将浓缩液上大孔吸附树脂柱,先用蒸馏水洗脱,再用5倍柱床体积的20%乙醇水溶液以流速为2BV/h洗脱去除杂质,再以5倍柱床体积的80%%乙醇水溶液以流速为2BV/h洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩至稠膏,烘干,得栀子黄色素纯品,经检测色价为851,440nm处的OD值为0.39;以上百分数均是质量百分数。
上述方法富集得到的栀子黄色素,加水分散,配制成50mg/mL溶液,采用阿卡波糖片进行阳性对照,以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,在磷酸钾缓冲液体系中,反应温度为50℃加入α-葡萄苷酶,以碳酸钠为终止液,测定α-葡萄苷酶的抑制率为81.35%。
实施例2
取干燥栀子果实,剥去外壳粉碎,称取三份,每份500g,分别放置在第一罐、第二罐、第三罐与第四罐内。在第一罐内加入8倍栀子质量的质量百分数为60%乙醇水溶液,室温,开启搅拌,保持转速150转/min,提取1.5h,过滤提取液,送入储罐;在第一罐内再次加入6倍栀子质量的60%乙醇水溶液采用与上次提取相同的条件进行第二次提取,1.5h后,将提取液转移至第二罐中,并往第二罐中补充1倍栀子质量的60%乙醇水溶液,密封,开启搅拌,使之按照第一罐的提取条件提取1.5h,过滤提取液,送入储罐;向第一罐中第三次加入6倍量的60%乙醇水溶液,按照上两次的提取条件进行最后一次提取,1.5h后将提取液转移至第二罐,按照上次的条件进行第二罐的第二次提取,将其提取所得提取液迅速转移至第三罐,并对第三罐补充1倍量的60%乙醇水溶液,按上述条件进行提取,送入储罐;第三罐的第二次提取液转移至第四罐,并对第四罐补充1倍量的60%乙醇水溶液,按上述条件进行提取,送入储罐,最后一次提取的罐内在排出栀子废渣后,再投入同样的栀子,作为下一轮罐组依次循环提取的最末罐,依次类推。储罐中得到的总提取液,测得栀子黄色素的得率为73.88mg/g,色价为235.1,440nm处的OD值为2.11。
将储罐中的总提取液冷却,静置24h,过滤,减压回收乙醇,得稠浸膏。将浸膏溶于水中,然后上聚酰胺树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用5倍柱床体积的30%乙醇水溶液以流速为1.5BV/h洗脱去除杂质,再以5倍柱床体积的95%乙醇水溶液以流速为1.5BV/h洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩得到浓缩液,得到的栀子黄色素粗品经检测,色价为429,440nm处的OD值为1.32。
将浓缩液上大孔吸附树脂柱,先用蒸馏水洗脱,再用5倍柱床体积的20%乙醇水溶液以流速为1.5BV/h洗脱去除杂质,再以5倍柱床体积的85%%乙醇水溶液以流速为1.5BV/h洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩至稠膏,烘干,得栀子黄色素纯品,经检测色价为846,440nm处的OD值为0.41;以上百分数均是质量百分数。
上述方法富集得到的栀子黄色素,加水分散,配制成50mg/mL溶液,采用阿卡波糖片进行阳性对照,以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,在磷酸钾缓冲液体系中,反应温度为50℃加入α-葡萄苷酶,以碳酸钠为终止液,测定α-葡萄苷酶的抑制率为82.06%。
实施例3
取干燥栀子果实,剥去外壳粉碎,称取三份,每份500g,分别放置在第一罐、第二罐与第三罐内。在第一罐内加入5倍栀子质量的质量百分数为50%乙醇水溶液,室温,开启搅拌,保持转速100转/min,提取1h,过滤提取液,送入储罐;在第一罐内再次加入5倍栀子质量的40%异丙醇水溶液采用与上次提取相同的条件进行第二次提取,1h后,将提取液转移至第二罐中,并往第二罐中补充2倍栀子质量的40%异丙醇水溶液,密封,开启搅拌,使之按照第一罐的提取条件提取1h,过滤提取液,送入储罐;向第一罐中第三次加入5倍量的40%异丙醇水溶液,按照上两次的提取条件进行最后一次提取,1h后将提取液转移至第二罐,按照上次的条件进行第二罐的第二次提取,将其提取所得提取液迅速转移至第三罐,并对第三罐补充2倍量的40%异丙醇水溶液,按上述条件进行提取,送入储罐,最后一次提取的罐内在排出栀子废渣后,再投入同样的栀子,作为下一轮罐组依次循环提取的最末罐,依次类推。储罐中得到的总提取液,测得栀子黄色素的得率为72.84mg/g,色价为226.4,440nm处的OD值为1.97。
将储罐中的总提取液冷却,静置24h,过滤,减压回收异丙醇,得稠浸膏。将浸膏溶于水中,然后上聚酰胺树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用5倍柱床体积的10%乙醇水溶液以流速为1BV/h洗脱去除杂质,再以5倍柱床体积的80%乙醇水溶液以流速为1BV/h洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩得到浓缩液,得到的栀子黄色素粗品经检测,色价为428,440nm处的OD值为1.19。
将浓缩液上大孔吸附树脂柱,先用蒸馏水洗脱,再用5倍柱床体积的10%乙醇水溶液以流速为2BV/h洗脱去除杂质,再以5倍柱床体积的95%%乙醇水溶液以流速为2BV/h洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩至稠膏,烘干,得栀子黄色素纯品,经检测色价为853,440nm处的OD值为0.38;以上百分数均是质量百分数。
上述方法富集得到的栀子黄色素,加水分散,配制成50mg/mL溶液,采用阿卡波糖片进行阳性对照,以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,在磷酸钾缓冲液体系中,反应温度为50℃加入α-葡萄苷酶,以碳酸钠为终止液,测定α-葡萄苷酶的抑制率为82.35%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)取干燥栀子果实,剥壳粉碎后作为提取原料,然后放入提取罐中搅拌采用罐组式动态逆流提取方法进行提取,将提取得到的提取液经浓缩罐浓缩得浸膏,提取用醇水溶液为乙醇水溶液、异丙醇水溶液或者正丙醇水溶液;
2)将步骤1)得到的浸膏溶于水中,然后上聚酰胺树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用1-5倍柱床体积的10%-30%乙醇水溶液洗脱去除杂质,再以1-5倍柱床体积的80%-95%乙醇水溶液洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩得到浓缩液;
3)将步骤2)得到的浓缩液上大孔吸附树脂柱吸附,先用蒸馏水洗脱,再用1-5倍柱床体积的10%-30%乙醇水溶液洗脱去除杂质,再以1-5倍柱床体积的80%-95%乙醇水溶液洗脱并收集洗脱液,将收集后的洗脱液进行浓缩至稠膏,烘干,得栀子黄色素纯品;以上百分数均是质量百分数。
2.根据权利要求1所述的栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,其特征在于,所述步骤1)中罐组式动态逆流提取方法具体包括以下步骤:
a、栀子中的栀子黄色素提取以数罐为一组,罐组在正式循环提取之前,先对第一罐内的栀子投入40%-60%醇水溶液,其第一次的提取液送入储罐;其后第二次投入40%-60%醇水溶液后的提取液作为第二罐同样栀子提取的溶媒,第二罐第一次的提取液送入储罐,第二罐第二次的提取液作为第三罐同样栀子提取的溶媒,第三罐的初次提取液送入储罐;第一罐第三次投入40%-60%醇水溶液,其提取液作为第二罐同样栀子的提取溶媒,第二罐第三次投入40%-60%醇水溶液,其提取液作为第三罐同样栀子的提取溶媒;
b、罐组在正式循环提取过程中,对已经多次提取、且是最后一次提取的罐内栀子投入40%-60%醇水溶液,其提取液依次作为其后各罐栀子提取的溶媒;
c、最后一次提取的罐内在排出栀子废渣后,再投入同样的栀子,作为下一轮罐组依次循环提取的最末罐,其再次投入栀子后的第一次提取液送入储罐;
d、每罐药材每次的提取液在提取过程中均经过多次动态逆流提取后获得;以上百分数均是质量百分数。
3.根据权利要求2所述的栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,其特征在于,所述第一罐中第一次40%-60%醇水溶液的加入量为罐内栀子质量的5-10倍,所述第一罐中第二次以及第三次的40%-60%醇水溶液的加入量为罐内栀子质量的3-6倍,所述第一罐后面各罐第一次提取在上一罐提取液的基础上补加40%-60%醇水溶液,其补加量为罐内栀子质量的1-3倍;以上百分数均是质量百分数。
4.根据权利要求1或2所述的栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,其特征在于,所述步骤2)10%-30%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h,所述步骤2)80%-95%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h。
5.根据权利要求1或2所述的栀子中提取纯化栀子黄色素的方法,其特征在于,所述步骤3)10%-30%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h,所述步骤3)80%-95%乙醇水溶液的流速为1-5BV/h。
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