CN104849460A - 一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液 - Google Patents

一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液 Download PDF

Info

Publication number
CN104849460A
CN104849460A CN201510287239.6A CN201510287239A CN104849460A CN 104849460 A CN104849460 A CN 104849460A CN 201510287239 A CN201510287239 A CN 201510287239A CN 104849460 A CN104849460 A CN 104849460A
Authority
CN
China
Prior art keywords
component
bsa
core antigen
enzyme
hcv
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510287239.6A
Other languages
English (en)
Inventor
魏海明
侯亚兰
甘宜梧
王春艳
李静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Biobase Biodustry Shandong Co Ltd
Original Assignee
Biobase Biodustry Shandong Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biobase Biodustry Shandong Co Ltd filed Critical Biobase Biodustry Shandong Co Ltd
Priority to CN201510287239.6A priority Critical patent/CN104849460A/zh
Publication of CN104849460A publication Critical patent/CN104849460A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
    • G01N33/5767—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis non-A, non-B hepatitis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/08—RNA viruses
    • G01N2333/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • G01N2333/183—Flaviviridae, e.g. pestivirus, mucosal disease virus, bovine viral diarrhoea virus, classical swine fever virus (hog cholera virus) or border disease virus
    • G01N2333/186—Hepatitis C; Hepatitis NANB

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种稳定的丙肝核心抗原酶结合物稀释液，包括组分1、组分2和组分3，组分1中含有PBST缓冲液，组分2中含ＢＳＡ和Casein；组分3中含１％硫柳汞。本发明提供一种稳定高效的酶结合物稀释液配方，保证试剂能在2～8℃条件下稳定放置1年并且降低了成本。

Description

一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液
技术领域
本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及丙型肝炎病毒核心抗原检测的方法。
背景技术
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)感染而引起的一种全球性传染病。据估计目前全世界有1. 7亿丙肝病毒感染者，我国的丙肝感染率大约为30%，目前至少有4000~6000万丙肝患者。其中有80~85%的感染者将发展为慢性丙型肝炎，其中又有20%可发展为肝纤维化，最终有4~5%的肝纤维化患者发生肝细胞性肝癌，危害十分严重。
目前，尚无针对丙型肝炎病毒的特效治疗药物，丙型肝炎疫苗的研制也因HCV快速变异而困难重重，短期内难有突破进展。因此，HCV的早期诊断对于筛查HCV传染源、指导临床治疗和预后判断有重大意义。
现有HCV常用检测方式主要有:(1)间接检测：用来检测体内抗HCV抗体，由于HCV感染后到抗HCV抗体的出现有一个约40~70天的“窗口期”，所以抗HCV不能作为HCV感染的早期诊断指标；(2)直接检测：通过定性或定量检测HCV病毒粒子的组成成分以确定病毒的存在。由于HCV感染后6 ~15天感染者血液中即有HCV-RNA的出现，并在血清阳转之前达到一个较高的水平，因此采用该检测技术对献血员进行常规筛选可以大大降低“窗口期”感染的危险，虽然定性或定量检测HCV病毒粒子的方法具有早期、敏感和特异等特点，但由于该技术需要昂贵精密的仪器、较高的实验技巧、昂贵的试剂，且容易导致交叉污染导致假阳性偏高，导致其很难推广到单个献血员，在发展中国家的应用也受到很大程度的限制。
鉴于以上HCV病毒检测方法的局限性，尽快研制出快速、准确、低廉并在各大医院可普及的HCV检测方法成为必要。目前国内市场上已有两家体外诊断试剂公司生产的丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（ELISA）是针对于HCV核心抗原的检测，从而使HCV感染的“窗口期”大大缩短的相关报道。然而由于丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（ELISA）酶结合物不稳定常出现对样品检测结果不准确的现象。所以需要在酶结合物稀释液中加入稳定剂，传统的酶稀释液常用含有无关高浓度蛋白1%BSA或10%动物血清等来作为酶的稳定剂，然而BSA市场价格较高，动物血清运输、保存不方便。
发明内容
针对于丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（ELSA）酶结合物不稳定问题，本发明提供一种稳定高效的酶结合物稀释液配方，保证试剂能在2～8℃条件下稳定放置1年并且降低了成本。
本发明是通过以下措施实现的：
一种丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（ELSA）酶结合物稀释液
①  液：用PBST为缓冲液，BSA无关蛋白为稳定剂的酶结合物稀释液的试剂盒为第一组合；
②  液：用PBST为缓冲液，BSA和Casein无关蛋白为稳定剂的酶结合物稀释液的试剂盒为第二组合；
③  液：用Tris-HCl为缓冲液，BSA和Casein无关蛋白为稳定剂的酶结合物稀释液的试剂盒为第三组合；
④      液：用PBST为缓冲液，Casein无关蛋白为稳定剂的酶结合物稀释液的试剂盒为第四组合。
四种酶结合物稀释液编号和内容如下：
①   PBST+BSA+防腐剂(酶用量1:15000 )
②   PBST+BSA+Casein+防腐剂(酶用量1:10000)
③   TBST+BSA+Casein+防腐剂(酶用量1:10000)
④   PBST+Casein+防腐剂(酶用量1:6000 )
用四种组合的HCV抗体酶联免疫诊断试剂盒分别对质控血清进行检测。按中国生物制品规程要求分别进行对40℃放置试剂盒的检测和37℃放置3d试剂盒的破坏性稳定性检测。
本发明的有益效果：
本发明提供的酶结合物稀释液，不仅可以在2～8℃和37℃环境中稳定长期保存，稳定性良好，可以长久应用，而且也节约了成本，既经济又好用。
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
实施例1
酶结合物稀释液的组分及浓度为
（1）组分1（PBST缓冲液）
KH2PO4                         0.2g
Na2HPO4·12H2O                  2.9g
KCl                            0.2g
NaCl                           8.0g
Tween-20  0.05%                0.5mL
加蒸馏水至 1000mL，4°C存放备用；
组分2（稳定剂）
牛血清白蛋白(BSA)       0.1g
加洗涤缓冲液至100mL，4°C存放备用；
组分3
无。
（2）用该组合的HCV核心抗原检测试剂盒（ELISA）对质控血清进行检测。按中国生物制品规程要求分别进行对40℃放置试剂盒的检测和37℃放置3d试剂盒的破坏性稳定性检测。
实施例2
组分1（PBST洗涤缓冲液）
KH2PO4                         0.2g
Na2HPO4·12H2O                  2.9g
KCl                            0.2g
NaCl                           8.0g
Tween-20  0.05%                0.5mL
加蒸馏水至 1000mL，4°C存放备用；
组分2
牛血清白蛋白(BSA) +Casein              0.1g 。
实施例3
组分1（TBST缓冲液）
Tris-HCl(50mM)                  6.05g
NaCl                            8.0g
Tween-20  0.05%                0.5mL
加蒸馏水至 1000mL，4°C存放备用；
组分2
牛血清白蛋白(BSA) BSA+Casein     0.1g
加洗涤缓冲液至100mL，4°C存放备用；
组分3
硫柳汞                          0.1% 。
方法同实施例1
加洗涤缓冲液至100mL，4°C存放备用。
实施例4
组分1（PBST洗涤缓冲液）
KH2PO4                         0.2g
Na2HPO4·12H2O                  2.9g
KCl                            0.2g
NaCl                           8.0g
Tween-20  0.05%                0.5mL
加蒸馏水至 1000mL，4°C存放备用；
组分2
Casein                          0.1g
加洗涤缓冲液至100mL，4°C存放备用；
组分3
硫柳汞                         0.1% 。
方法同实施例1。
操作时为保证酶结合物稀释液为同一条件下进行对比，用同一批丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂（ELISA）。同时配制以上四种不同酶稀液的抗HCV酶结合物，组成四组试剂盒，对这四组试剂盒作平行对比实验。
实验时严格按试剂盒说明书进行操作，每一组合加阴性对照、阳性对照各3孔，加1 Ncu/ml ，2Ncu/ml HCV血清各10孔，1份阳性质控血清(以P表示)加10孔，40份HCV阴性血清各加1孔，共加样76份。计算出阴性对照、阳性对照、1 Ncu/ml ，2Ncu/ml、阳性质控血清P的平均S/CO值和40份抗HCV阴性血清的平均S/CO值。
酶标抗体活性验证：
表1 四种试剂盒放置4℃检测质控血清的S/CO平均值及实验结果
表1显示四种试剂盒放置4℃对样品检测结果的S/CO值各平均值差异不大，阴、阳性结果分明。
表2 四种试剂盒37℃放置3d检测质控血清的S/CO平均值及实验结果
表2显示四种试剂盒放置37℃ 3d对样品检测结果的S/CO值平均值差异较明显。
四种试剂盒检测质控血清试验结果分析:从四种酶结合物稀释液编号和内容中可以看出:传统的①酶结合物稀释液用酶量最少，②、③酶结合物稀释液用酶量稍微高一点，④酶结合物稀释液用酶量较高。从表1看实验结果，可以看出四种不同酶稀液的组合实验结果基本相同，无太大差异，只是①液试验结果中阴性的S/CO值微偏高一点，说明①液检测结果阴性本底较高。从表2看，试剂盒在37℃放置3d的试验结果中，①液试剂盒检测结果:阳性质控品的S/CO值很少，甚至有些样品的S/CO值比4℃时还要高。阴性的S/CO值普遍升高，说明试验结果本底高，3孔阴性对照平均S/CO值和40份阴性血清S/CO值平均值大于1，说明阴性对照和40份阴性血清检测结果为阳性，说明试剂盒稳定性不好，检测结果不可靠；②、③液试剂盒实验结果稳定性较好，各阴性、阳性的S/CO值和4℃的S/CO值相比变化很小，说明稳定性好，本底好；④液试剂盒试验结果，虽然阴性的S/CO值较低，和4℃相比变化小，但阳性的S/CO值和4℃相比变化大降得很多，说明④液试剂盒不稳定。
从上述实验结果可知，①液、④液试剂盒稳定性不好，不能用于试剂的生产。在②、③液中，③液试剂有轻微混浊现象，且我们曾在4℃放置一段时间(lm)后又有沉淀产生，说明③液也不稳定;②液为透明溶液，我们曾放置lm 、2m、3m、6m、12m,②液仍然为透明溶液，且②液对不同厂家的HCV抗原制备的丙型肝炎包被均一性都很好。而且，②液相对来说成本较低，②液在HCV核心抗原检测试剂盒（ELISA）生产中质量稳定，可以将②液酶稀液用于HCV核心抗原检测试剂盒（ELISA）的大量生产。传统的酶稀释液常用含有无关高浓度蛋白1%BSA或10%动物血清等来作为酶的稳定剂，BSA市场价格较高，动物血清运输、保存不方便，我们新研制的②液是用少量的BSA和更少量的Casein(市场价格较BSA更低)来作为酶的稳定剂，一方面BSA对酶的稳定性起保护作用，另一方而Casein对试验结果的本底降低较好。且这两种物质的合理配合可以保持试剂盒的质量稳定，还可以降低生产成本。对于HCV核心抗原检测试剂盒（ELISA）生产具有广阔的应用前景。

Claims (4)

1.一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液，其特征在于包括组分1、组分2和组分3，各组分原料含量如下：
组分1（TBST缓冲液）
Tris-HCl(50mM)                  6.05g
NaCl                            8.0g
Tween-20  0.05%                0.5mL
加蒸馏水至 1000mL，4°C存放备用；
组分2
牛血清白蛋白(BSA) BSA+Casein     0.1g
加洗涤缓冲液至100mL，4°C存放备用；
组分3
硫柳汞                          0.1%。
2.根据权利要求1所述的一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液，其特征在于包括组分1中缓冲液为PH7.4TBST缓冲液。
3.根据权利要求1所述的一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液，其特征在于包括组分2中稳定剂牛血清白蛋白(BSA) BSA+Casein。
4.根据权利要求1所述的一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液，其特征在于包括组分3中防腐剂硫柳汞。
CN201510287239.6A 2015-05-29 2015-05-29 一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液 Pending CN104849460A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510287239.6A CN104849460A (zh) 2015-05-29 2015-05-29 一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510287239.6A CN104849460A (zh) 2015-05-29 2015-05-29 一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104849460A true CN104849460A (zh) 2015-08-19

Family

ID=53849258

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510287239.6A Pending CN104849460A (zh) 2015-05-29 2015-05-29 一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104849460A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115445462A (zh) * 2022-09-29 2022-12-09 山东博科生物产业有限公司 一种新冠病毒s蛋白抗原佐剂乳化物的乳化方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1170875A (zh) * 1996-05-07 1998-01-21 东亚医用电子株式会社 C型肝炎病毒感染病的诊断试剂
EP1020727A1 (en) * 1998-07-30 2000-07-19 Advanced Life Science Institute, Inc. Method for assaying hepatitis c virus
EP1251353A2 (en) * 2001-03-28 2002-10-23 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. A hepatitis C antigen-antibody combination assay for the early detection of infection

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1170875A (zh) * 1996-05-07 1998-01-21 东亚医用电子株式会社 C型肝炎病毒感染病的诊断试剂
EP1020727A1 (en) * 1998-07-30 2000-07-19 Advanced Life Science Institute, Inc. Method for assaying hepatitis c virus
EP1251353A2 (en) * 2001-03-28 2002-10-23 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. A hepatitis C antigen-antibody combination assay for the early detection of infection

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
宋惠娟 等: "丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂中酶结合物稀释液对酶结合物稳定性影响的研究", 《药品评价》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115445462A (zh) * 2022-09-29 2022-12-09 山东博科生物产业有限公司 一种新冠病毒s蛋白抗原佐剂乳化物的乳化方法
CN115445462B (zh) * 2022-09-29 2024-03-15 山东博科生物产业有限公司 一种新冠病毒s蛋白抗原佐剂乳化物的乳化方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103674657B (zh) 血清或血浆样本中的抗原抗体免疫复合物处理试剂盒及其应用
CN103163294B (zh) 乙肝5项化学发光检测试剂盒的制备方法
CN105004862B (zh) 一种高通量联合检测丙肝病毒抗原抗体的试剂
CN102072957A (zh) 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法
CN103323599B (zh) 一种狂犬病毒核蛋白时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法
CN104090105A (zh) 一种检测hev抗体的方法及试剂盒和该试剂盒的制备方法
CN104090106A (zh) 乙型肝炎病毒表面抗原定量测定试剂盒及其制备方法
CN105572386A (zh) 一种免疫荧光层析法检测肝素结合蛋白用试剂盒及其制备方法
Hu et al. Detection of hepatitis B virus PreS1 antigen using a time-resolved fluoroimmunoassay
CN105938146A (zh) 一种hbv表面抗体时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法
CN105067599A (zh) 一种检测胃泌素释放肽前体的化学发光免疫检测试剂盒
CN104280551A (zh) 鸭坦布苏病毒病e-elisa检测试剂盒及其制备方法
CN103777026A (zh) 一种用于诊断肝细胞性肝癌的试剂盒
CN105759033A (zh) 一种Cox A16及EV71病毒抗原的鉴别检测方法
CN101738474B (zh) 一种巨细胞病毒、风疹病毒联合检测试剂检测卡
Sahai et al. Viral hepatitis in pregnancy--a study of its effect on maternal and Foetal outcome
CN104849460A (zh) 一种稳定的丙型肝炎病毒核心抗原酶结合物稀释液
CN110954694A (zh) 一种肝炎类病原学复合质控品及其制备方法
CN105938144A (zh) 一种hbv表面抗原时间分辨免疫荧光检测试剂盒及其制备方法
CN103323604B (zh) 一种结核杆菌IgG抗体酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法
CN104991057A (zh) 一种水貂阿留申病毒抗体elisa快速检测试剂盒及其制备方法
CN106771134B (zh) 一种鲤疱疹病毒ⅱ型夹心elisa检测试剂盒及检测方法
CN103645320A (zh) 一种呋喃它酮代谢物化学发光酶联免疫快速检测试剂盒
CN105717297A (zh) 禽大肠杆菌病Tshs抗体夹心间接ELISA检测试剂盒、检测方法及应用
CN204359795U (zh) 螨特异性IgG4亚型抗体检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
EXSB Decision made by sipo to initiate substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150819

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication