CN104541969B - 一种双孢蘑菇栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及一种双孢蘑菇生长菌剂及利用该菌剂的双胞蘑菇的栽培方法。该菌剂中有效成分为能够产生ACC脱氨酶的微生物。双孢蘑菇栽培方法，包括制种、培养料制作、播种、发菌、覆土、出菇、采收等步骤。本发明通过对于双孢蘑菇覆土出菇机理的研究，研制了一种双孢蘑菇生长菌剂，并利用这种双孢蘑菇生长菌剂提出了一种新的双孢蘑菇栽培技术，在该技术中，通过对于覆土材料的选择替代，通过以添加有ACC脱氨酶的蛭石替代现有的土壤，既可提前出菇，同时具有无病虫害污染、产量高的优点，而且由于蛭石本身具有改良土壤结构的有益效果，因而本发明具有较好的推广应用价值。

Description

一种双孢蘑菇栽培方法

技术领域

本发明属于食用菌栽培技术领域，具体涉及一种双孢蘑菇生长菌剂及利用该菌剂的双胞蘑菇的栽培方法。

背景技术

双孢蘑菇（Agaricus bisporus）是世界上栽培最广泛、生产量和消费量最大的一种食用菌。自双孢蘑菇人工栽培伊始，人们就发现栽培双孢蘑菇时必须覆土，否则很少或不能出菇，其机理至今仍不清楚。除双孢蘑菇外，巴西蘑菇（A. brasiliensis）和鸡腿菇（Coprinus comatus）也同样存在这种现象。

覆土虽然是促进双孢蘑菇出菇的必要条件，但是覆土技术对于双孢蘑菇的生产也有其他的较为严重的不利影响。首先，由于需要覆盖3.0cm厚度左右的覆土，降低了培养料厚度和单位面积床层的产量；第二，覆土极易招致病虫危害，如在我国普遍发生的蘑菇疣孢霉病，轻者减产1-2成，重者甚至绝收，而其病原菌则主要来自土壤；第三，菇表带土，影响蘑菇的鲜售和进一步深加工；第四，覆土不能重复利用，导致覆土来源越来越少，不利于双孢蘑菇的可持续发展；第五，现有的覆土技术中，很多菇农需要到外地购买土壤，再经消毒、覆土，使双孢蘑菇生产成本增加近1/3，提高了生产成本。因此，研究、利用双孢蘑菇覆土出菇机理，从而在栽培时不覆土或使用其他替代材料，对双孢蘑菇或者其他食用菌的栽培生产非常重要，也非常迫切。

发明内容

本发明目的在于提供一种双孢蘑菇生长菌剂，利用该菌剂可以较好的解决现有双胞蘑菇栽培中的覆土方面的技术问题；本发明另一目的在于提供一种利用该生长菌剂的双孢蘑菇的栽培方法，通过实验，该方法具有较好的增产作用。

本发明所采取的技术方案介绍如下。

一种双孢蘑菇生长菌剂，其有效成分为能够产生ACC脱氨酶的微生物。

所述双孢蘑菇生长菌剂中，能够产生ACC脱氨酶的微生物为恶臭假单胞菌UW4菌株，该菌株保藏于美国农业研究菌种保藏中心，保藏编号为NRRL B-50193，保藏日为2008年6月9日。将恶臭假单胞菌UW4菌株用于双孢蘑菇生长菌剂时，微生物保存介质为草炭，活性量为1~2亿个菌/g草炭；用于双孢蘑菇生产使用时，按1~3%的质量比混合灭菌后含水量为16~18%的蛭石后作为覆土使用，较佳用量为2%的质量比。

利用所述双孢蘑菇生长菌剂的双孢蘑菇栽培方法，包括以下步骤：

（1）制种、培养料制作、播种和发菌，常规方法对双孢蘑菇菌种扩增、制作培养料、播种和发菌；步骤简要介绍如下：

母种：双孢蘑菇母种培养基一般采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，25℃培养15~20 d后即可扩增使用。

原种：原种培养基配方一般采用如下配方：质量百分数计，腐熟麦杆或稻杆77%、腐熟牛粪粉20%、石膏粉1%、碳酸钙2%，培养基含水量62%、pH7.5左右。母种培养基中菌种接种于原种培养基后，25℃培养35~40 d后即可进一步扩增使用。

栽培种：一般而言，生产中所使用栽培种培养基与原种培养基相同，将原种培养基中菌种接种栽培种培养基后，25℃培养40~45d后即可用于实际生产。

生产：将栽培种接种于栽培料后即可进行实际的双孢蘑菇生产，栽培料配方一般为麦秸与牛粪按重量1：1比例的混合物，为确保栽培料中养分充足，一般额外添加2%左右质量的过磷酸钙、饼肥、碳酸钙、尿素、复合肥等混合物作为辅料以增加营养，同时添加适量石灰调节栽培料pH值。

按配方配制栽培料，经堆制发酵后，铺于菇棚床架上。播种栽培种前，一般对菇棚床架上栽培料进行二次发酵，具体为：向菇棚通入蒸汽进行二次发酵，料温保持60℃、20~24h；发酵过程中，通风降温，当料温降到52 ℃左右时，再维持4~6 d进一步腐化发酵。栽培料发酵结束后，开窗通风使栽培料降至室温。生产中，栽培料平铺于床架上，料厚20 cm左右。

大田实际生产时，根据各地气温情况选择最适栽培季节，一般而言，秋季栽培时当平均气温下降到27℃～28℃，并且温度呈下降趋势时即可播种，24℃左右是最适宜的播种温度。以河南地区为例，适宜在8月底到9月上、中旬播种，如果在温室、塑料大棚内生产，播种期比常规还要推迟7～10天。

栽培种播种于栽培料时，常规操作方法为：播种时把菌种（栽培种）的一半撒在料面，用手抖动使菌种落在培养料里，倒置培养料，然后再把另一半均匀的撒在培养料表面，用手扒一下使菌种稍漏进表层。播种量一般为每平方米1.5~1.8 瓶菌种（大约0.75~1Kg左右）。

播种后保持菇棚温度22~26℃、空气相对湿度75%～80%进行发菌，使菌丝快速生长至整个栽培料。

（2）覆土，在步骤（1）中双孢蘑菇菌种播种后约20~25天后，菌丝即可长到或基本接近料底时需进行覆土以促进双孢蘑菇萌发形成子实体并进一步出菇，覆土要均匀一致，厚度约为3~4 cm；

所述覆土采用灭菌后含水量为16~18%的蛭石进行覆盖，其中灭菌后蛭石中添加有含水量为16~18%的蛭石质量1~3%的恶臭假单胞菌UW4草炭混合物，恶臭假单胞菌UW4草炭混合物中恶臭假单胞菌UW4的活菌数为1~2亿个菌/g草炭；灭菌后蛭石中恶臭假单胞菌UW4草炭混合物的添加量较优配比为含水量为16~18%的蛭石质量的2%。

（3）覆土后管理，覆土后至出菇前要对覆土喷水调湿，原则上要少喷、勤喷、轻喷、循环喷，以达到“调透土，不漏料”的效果；总体而言，菇棚内空气湿度以保持在80～85%，地面以潮湿但不浸水为宜；同时要保持适当通气量；菇棚温度要逐步降至20℃以下，最好保持在15~18℃，以刺激子实体形成。

（4）出菇后管理，保持温度为15~18℃、空气相对湿度为90~95%以刺激菇蕾形成，当菇蕾穿出土层时再喷一次结菇水；菇蕾形成时，菇棚通风以慢通风为好，同时要注意避免棚温剧烈变化。

（5）采收，在现蕾后的5~7天，菇盖3~4厘米、菌膜未破时采收；每天可根据实际情况采收多次，但采收时力应尽量不损伤小的菇蕾。

本发明通过对于双孢蘑菇覆土出菇机理的研究，研制了一种双孢蘑菇生长菌剂，并利用这种双孢蘑菇生长菌剂提出了一种新的双孢蘑菇栽培技术，在该技术中，通过对于覆土材料的选择替代，通过以添加有ACC脱氨酶的蛭石替代现有的土壤，既可提前出菇，同时具有无病虫害污染、产量高的优点，而且由于蛭石本身具有改良土壤结构的有益效果，因而本发明具有较好的推广应用价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的解释说明。

实施例

本发明是发明人在长期的对双孢蘑菇覆土栽培机理研究基础上所探索研究出来的。我们的研究表明，双孢蘑菇合成乙烯的途径与高等植物相同，都是通过甲硫氨酸经1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）氧化途径。因而，发明人提出双孢蘑菇覆土出菇的机理是：覆土中的ACC脱氨酶产生菌降解了双孢蘑菇菌丝中所产生的ACC，减少了乙烯的合成，从而解除了乙烯对出菇的抑制作用。

在此机理上，本发明研究制备了一种双孢蘑菇生长菌剂，并利用该生长菌剂探索出了一种新的双孢蘑菇栽培技术，在该技术中，通过以含有双孢蘑菇生长菌剂的蛭石替代现有的覆土材料，可以较好的解决现有的双孢蘑菇栽培技术中覆土材料的技术缺陷。同时相关对比实验证明，本发明具有较好的提高蘑菇产量的技术效果。

对相关技术方案及实验情况简要介绍如下。

在介绍具体技术方案前，对本实施例中相关菌株及培养基情况简要说明如下。

脱氨酶产生菌：本实施例所采用的ACC脱氨酶产生菌为恶臭假单胞菌，所采用的菌株为美国农业研究菌种保藏中心所保藏的，保藏编号为NRRL B-50193的恶臭假单胞菌UW4（Pseudomonas putida UW4），保藏日为2008年6月9日。美国农业研究菌种保藏中心位于伊利诺伊州皮契里亚，为由美国农业部农业研究中心支持的政府性质的菌种保藏中心，英文全称：Agrieultutal Research Service Culture Colleetion，简称NRRL。

培养基：

ACC脱氨酶产生菌即恶臭假单胞菌UW4的保存采用细菌斜面培养基保存，配方为：1000 mL培养基中，胰蛋白胨 17g，大豆蛋白胨 3 g，氯化钠 5g ，葡萄糖 2.5g，磷酸氢二钾2.5g，琼脂粉 18g，蒸馏水定容。

使用时，恶臭假单胞菌UW4首先进行扩增，扩增时采用摇瓶培养方式扩增，摇瓶培养基配方为：1000 mL培养基中，胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，氯化钠10g，蒸馏水定容。

生产用双孢蘑菇生长菌剂：

为较好的利用本发明的技术原理，实际生产过程中可将ACC脱氨酶产生菌扩增后与草炭混合，以草炭作为微生物保存介质进行使用。具体而言，以恶臭假单胞菌UW4为例，在恶臭假单胞菌UW4扩增过程中，摇瓶发酵培养18h后，将培养液在无菌条件下与灭菌草炭（121℃灭菌30 min）拌匀，28±3℃继续发酵培养2~5 d，检测活菌数达到1~2亿个菌/g草炭时备用即可。将双孢蘑菇生长菌剂用于生产中作为覆土材料使用时，一般按含水量为16~18%的蛭石质量1~3%的比例与灭菌后蛭石混合作为覆土使用，本实施例中以2%的比例进行了具体实验。

双孢蘑菇：本实施例所用双孢蘑菇的品种为双孢蘑菇AS 2796，由福建农业科学院食用菌研究所提供。

双孢蘑菇栽培料：

栽培料制备过程简要介绍如下：栽培料配方为麦秸与牛粪按重量1：1比例的混合物，为确保栽培料中养分充足，同时添加占栽培料质量2%的过磷酸钙、饼肥、碳酸钙、尿素、复合肥等混合物（以质量比计，过磷酸钙︰饼肥︰碳酸钙︰尿素︰复合肥=1︰2︰1︰1︰1）作为辅料以增加营养，同时添加适量石灰调节栽培料pH值为7.0左右。

栽培料配制过程中需要注意的是：牛粪使用前要晒干、粉碎，过1厘米规格的筛子。麦秸要求干燥且无霉变，最好是将其切成18~20cm的小段或者进行碾压，以使茎秆变软有利于吸水和发酵。

栽培料配制完成后要建堆发酵，建堆发酵前，为使麦秸和牛粪充分吸水，建堆前3~5天要进行预湿，具体为：在干净整洁的硬化地面上把粉碎后的麦秸铺在底层，上面盖牛粪，根据场地大小堆制成约1.0 m高、长宽不限的大堆，每天在上面淋pH 8.5左右的石灰水，直到底部有水溢出，以使料充分湿透。

麦秸和牛粪预湿后，选择水泥地面建堆发酵，建堆前用石灰粉或3~5%石灰水对麦秸和牛粪进行消毒。建堆过程：建堆时先铺1层约30 cm厚的草料，堆宽2.5 m，长约10 m，然后在上面铺1层粪，以盖没住草料层为度，粪上再铺1层30 cm厚的草料，上面再撒1层粪，依此顺序向上堆叠，总层数约10~12层，直到料堆高达1.5～1.6 m。然后最上面盖1层粪，并在上层浇入水。建堆时，饼肥和尿素等辅料在堆料中间3～6层时加入，上下两头不加。

堆料时，料堆四周应垂直、整齐，以利于保持堆内温度，同时促进堆料内部嗜热微生物的繁殖。所堆料堆顶部做成弧形，同时在堆顶覆盖草帘以防日晒。堆体中部每平方米应插入直径12～15 cm的木棒等物3～5根，以利于通气，促进微生物的活动。

料堆发酵过程中，如遇下雨，应盖薄膜，以防止雨水淋入料内，雨后则需及时揭膜，以利通气。正常情况下，堆温在第4天即可升到70℃，此时即需注意翻堆以促进发酵充分和均匀。翻堆的具体时间由料内的温度变化来决定，具体而言：当料温升到70 ℃以上不再上升、且保持1～2 d后有下降的趋势时，需立即进行翻堆。发酵过程中，料堆共翻堆4次，各次的时间间隔为7天、6天、5天、4天。翻堆的原则是上下内外交替。第1次翻堆后可补加适量复合肥、过磷酸钙（也可第2次翻堆过程中补加），并将培养料的含水量控制在65%～ 70%，料堆的干湿程度以单手紧握料时，手指间能挤出10滴水为度。以后每次翻堆逐渐减少水分，到第四次翻堆时，单手紧握料时，干湿程度以达到能挤出1~2滴水为宜。为调节料堆pH值，第2次翻堆后可加适量石膏粉并适当补水，第3次翻堆后调节pH为7.2～7.8，在第四次翻堆后再堆制三天后即可散堆入棚栽培使用。

本发明所提供的利用双孢蘑菇生长菌剂的双孢蘑菇栽培方法，包括以下步骤：

（1）制种、播种和发菌，常规方法对双孢蘑菇菌种扩增、制作培养料、播种和发菌；播种。步骤简要介绍如下：

母种：双孢蘑菇母种培养基采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，25℃培养15~20 d后扩增使用。

原种：原种培养基配方采用如下配方：质量百分数计，腐熟麦杆或稻杆77%、腐熟牛粪粉20%、石膏粉1%、碳酸钙2%，培养基含水量62%、pH7.5左右。母种培养基中菌种接种于原种培养基后，25℃培养35~40 d后进一步扩增使用。

栽培种：栽培种培养基与原种培养基相同，将原种培养基中菌种接种栽培种培养基后，25℃培养40~45d后即可用于实际生产。

生产：将栽培种接种于栽培料后即可进行实际的双孢蘑菇生产，栽培料配方为麦秸与牛粪按重量1：1比例的混合物，同时添加占栽培料质量2%的过磷酸钙、饼肥、碳酸钙、尿素、复合肥等混合物（以质量比计，过磷酸钙︰饼肥︰碳酸钙︰尿素︰复合肥=1︰2︰1︰1︰1）作为辅料以增加营养，同时添加适量石灰调节栽培料pH值。具体制备过程可参见前述内容。

栽培采用菇房床架式栽培，床架4～6层，床架宽1～1.5米，层距60～70厘米，底层离地20～30厘米，顶层距房顶1.3米左右。南北两面靠墙走道宽约65厘米，东西两面靠墙走道宽约50厘米，床架之间走道宽度60～70厘米。一般而言，菇房大小控制在有效栽培面积100～200平方米左右。也可采用塑料大棚床架栽培，此种方式要求大棚东西走向，按栽培面积按111平方米设置，要求棚长10米，棚宽5米，棚高3.5～4米，床架4层；按222平方米设置，要求棚长12米，棚宽8米，棚高4.5米左右，床架4层。

自然条件下蘑菇从培养料配制、发酵、播种到出菇结束大约需要6～8个月的时间。以河南地区为例，具体生产安排如下：培养料堆制发酵(8月上、中旬)→播种发菌培养(9月上、中旬)→覆土管理(9月下旬到10月上旬)→秋菇管理(10月中旬到12月上、中旬)→越冬管理(12月中旬到第二年3月上、中旬)→春菇管理(3月上、中旬到4月中、下旬)→生产结束、清除废料(5月)。如果采用日光温室或者菇房在冬季有加温条件的，在低温季节仍可以出菇，就不需要越冬管理，生产周期相应缩短。

生产中，栽培料平铺于床架上，料厚20 cm左右。栽培种播种于栽培料时，操作方法为：播种时把菌种（栽培种）的一半撒在料面，用手抖动使菌种落在培养料里，倒置培养料，然后再把另一半均匀的撒在培养料表面，用手扒一下使菌种稍漏进表层。播种量控制为每平方米1.5~1.8 瓶菌种（大约0.75~1Kg左右）。

播种后保持温度22~26℃、空气相对湿度75%～80%进行发菌，使菌丝快速生长至整个栽培料。

（2）覆土，在步骤（1）中双孢蘑菇菌种播种后约20~25天后，菌丝即可长到或基本接近料底时需进行覆土以促进双孢蘑菇萌发形成子实体并进一步出菇，覆土要均匀一致，厚度约为3~4 cm；

所述覆土材料包括有本发明所提供的双孢蘑菇生长菌剂，具体为：灭菌后含水量为16~18%的蛭石，其中添加有蛭石质量2%的恶臭假单胞菌UW4草炭混合物，恶臭假单胞菌UW4草炭混合物中恶臭假单胞菌UW4的活菌数为1~2亿个菌/g草炭。

（3）覆土后管理，覆土后至出菇前要对覆土喷水调湿，原则上要少喷、勤喷、轻喷、循环喷，以达到“调透土，不漏料”的效果；总体而言，菇棚内空气湿度以保持在80～85%，地面以潮湿但不浸水为宜；同时要保持适当通气量；菇棚温度要逐步降至20℃以下，最好保持在15~18℃，以刺激子实体形成。

（4）出菇后管理，保持温度为15~18℃、空气相对湿度为90~95%以刺激菇蕾形成，当菇蕾穿出土层时再喷一次结菇水；菇蕾形成时，菇棚通风以慢通风为好，同时要注意避免棚温剧烈变化。

（5）采收，在现蕾后的5~7天，菇盖3~4厘米、菌膜未破时采收；每天可根据实际情况采收多次，但采收时力应尽量不损伤小的菇蕾。

为证明本发明的具体技术效果，同时设置了多个对照，简要说明如下。

对照组与本发明所提供的双孢蘑菇种植方式及管理方式均相同，差别仅在于覆土材料，具体如下：

对照1，覆土采用常规覆土，具体为：取农田15~20厘米以下的半活性半生的土，打碎过筛，制作成土粒，然后加入3%左右的麦糠，将含水量调至16%～18%(将土握成团能自然散开的程度)，用石灰调节ph约7.5左右，经太阳下暴晒、消毒处理后使用；

对照2，覆土采用常规覆土+常规覆土质量2%的恶臭假单胞菌UW4草炭混合物，常规覆土与对照1相同，恶臭假单胞菌UW4草炭混合物与本申请相同；

对照3，覆土采用常规覆土方式进行，常规覆土与对照1相同，但后续进行了灭菌（121℃、2h）处理；

对照4，覆土采用在对照3处理方式基础上+常规覆土质量2%的恶臭假单胞菌UW4草炭混合物，恶臭假单胞菌UW4草炭混合物与本申请相同；

对照5，覆土采用灭菌后含水量为16~18%的蛭石进行，与本申请相比，即缺少ACC脱氨酶产生菌的添加。

栽培结束后，将本发明与对照进行对比，从多个角度对本发明的技术效果进行评价，简要介绍如下。

染杂菌情况

通过双孢蘑菇的整个栽培过程可以发现，本发明、对照3、对照4、对照5由于对于覆土材料均采用了灭菌处理，因而无无头菇（疣孢霉，Mcogone perniciosa）感染现象出现。而对照1、对照2由于缺少对覆土材料的灭菌，在覆土后20 d左右出现无头菇感染，经统计床层感染面积在3~10%之间。

出菇时间

对各种栽培方式的出菇时间进行记录，具体出菇时间如下表所示。

从表中可以看出，本发明中双孢蘑菇出菇最早，比对照1（现有技术常用的覆土方式）出菇提前3天，而对照2由于同样加入了双胞蘑菇生长菌剂，因而也比对照1提前出菇2天。对照4 同样由于加入了本发明所提供的双胞蘑菇生长菌剂，因而也比对照1出菇提前1天。

而对照3、对照5由于对覆土材料进行了灭菌处理，材料中缺少解除乙烯对出菇影响的微生物，因而相较于对照，出菇时间有所偏晚。同时值得注意的是，对照3相对于对照5而言，出菇时间又有所提前，推测认为，由于蛭石成分相对单一，而现有覆土方式所采用土壤成分较为复杂，因而现有的土壤成分反倒适合新的微生物的定植、扩增。

总体而言，从出菇时间的对比可以看出，添加有ACC脱氨酶产生菌的处理的双孢蘑菇，出菇时间均较早，从另一方面证明了本发明所提出的双孢蘑菇覆土出菇机理提出的正确性。

双孢蘑菇产量

以第一潮和第二潮菇产量计，具体产量结果如下表。

从上表可以看出，本发明比对照1增产35%，对照4比对照1增产13%。对照2、对照3与对照1产量基本持平。而对照5比对照1则减产37%。具体分析而言，从蘑菇产量来看，本发明与灭菌后土壤中添加有双孢蘑菇生长菌剂的对照4相较于对照，蘑菇产量均有所提高。而对照2虽然同样添加了双孢蘑菇生长菌剂，但是由于覆土所用土壤未进行彻底灭菌，因而所添加的生长菌剂中的ACC脱氨酶实际上并未发挥出应有的作用，因而未表现出明显的增产效果。对照3覆土所用土壤灭菌后，在实际生长过程中，由于受环境影响，因而实际相当于未灭菌，因而与对照产量相当是可以预期的。而对照5由于蛭石成分单一，相当于缺少相应微生物生长基质，因而相对于对照，减产效果也是基本可以预期的。

总体而言，本发明通过对于双孢蘑菇覆土出菇机理的研究，提供了一种双孢蘑菇生长菌剂，并利用这种生长菌剂提供了一种双孢蘑菇栽培技术，最终通过对于覆土材料的选择替代，不但具有一定的增产效果，而且能够提前出菇时间。优化方案下，通过以添加有ACC脱氨酶的蛭石替代现有的土壤，既可提前出菇，同时具有无病虫害污染、产量高的优点，而且由于蛭石本身具有改良土壤结构的有益效果，因而本发明具有较好的推广应用价值。

Claims (4)

1.一种双孢蘑菇栽培方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

（1）制种、培养料制作、播种和发菌，对双孢蘑菇菌种扩增、制作培养料、播种和发菌；

（2）覆土，在步骤（1）中双孢蘑菇菌种播种20~25天后，菌丝长到或基本接近料底时进行覆土，覆土厚度为3~4 cm；

所述覆土材料为：按1~3%的质量比，双孢蘑菇生长菌剂与灭菌后含水量为16~18%的蛭石的混合物；

所述双孢蘑菇生长菌剂，该菌剂中有效成分为能够产生ACC脱氨酶的微生物；微生物保存介质为草炭，活性量为1~2亿个菌/g草炭；

所述能够产生ACC脱氨酶的微生物为恶臭假单胞菌UW4菌株，该菌株保藏于美国农业研究菌种保藏中心，保藏编号为NRRL B-50193，保藏日为2008年6月9日；

（3）覆土后管理，覆土后至出菇前要对覆土喷水调湿，空气湿度保持在80～85%，保持通气量，温度保持在15~18℃；

（4）出菇后管理，保持温度为15~18℃、空气相对湿度为90~95%以刺激菇蕾形成，当菇蕾穿出土层时再喷一次结菇水；菇蕾形成时，慢通风，同时要注意避免温度剧烈变化；

（5）采收，在现蕾后的5~7天，菇盖3~4厘米、菌膜未破时采收。

2.如权利要求1所述双孢蘑菇栽培方法，其特征在于，步骤（2）中所用覆土材料为：按2%的质量比，双孢蘑菇生长菌剂与灭菌后含水量为16~18%的蛭石的混合物。

3.如权利要求1所述双孢蘑菇栽培方法，其特征在于，步骤（1）中，双孢蘑菇菌种发菌时所用栽培料为麦秸与牛粪按重量1 ：1 比例的混合物，栽培料中添加占栽培料质量2% 的过磷酸钙、饼肥、碳酸钙、尿素、复合肥的混合物作为辅料；

以质量比计，过磷酸钙︰饼肥︰碳酸钙︰尿素︰复合肥=1 ︰ 2 ︰ 1 ︰ 1 ︰1。

4.如权利要求1所述双孢蘑菇栽培方法，其特征在于，步骤（1）中双孢蘑菇菌种扩增过程包括如下步骤：

母种：双孢蘑菇母种培养基采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，25℃培养15~20 d 后扩增使用；

原种：原种培养基配方采用如下配方：质量百分数计，腐熟麦杆或稻杆77%、腐熟牛粪粉20%、石膏粉1%、碳酸钙2%，培养基含水量62%、pH7.5；母种培养基中菌种接种于原种培养基后，25℃培养35~40 d 后进一步扩增使用；

栽培种：栽培种培养基与原种培养基相同，将原种培养基中菌种接种栽培种培养基后，25℃培养40~45d 后用于实际生产。