CN104529978A - 荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法 - Google Patents

荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104529978A
CN104529978A CN201410833111.0A CN201410833111A CN104529978A CN 104529978 A CN104529978 A CN 104529978A CN 201410833111 A CN201410833111 A CN 201410833111A CN 104529978 A CN104529978 A CN 104529978A
Authority
CN
China
Prior art keywords
luteolin
dimethyl
methyl alcohol
crude product
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410833111.0A
Other languages
English (en)
Inventor
罗杨合
何星存
李行任
陈振林
陈海伦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hezhou University
Original Assignee
Hezhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hezhou University filed Critical Hezhou University
Priority to CN201410833111.0A priority Critical patent/CN104529978A/zh
Publication of CN104529978A publication Critical patent/CN104529978A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/28—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only
    • C07D311/30—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3 with aromatic rings attached in position 2 only not hydrogenated in the hetero ring, e.g. flavones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/22—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4
    • C07D311/26—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring with oxygen or sulfur atoms directly attached in position 4 with aromatic rings attached in position 2 or 3
    • C07D311/40—Separation, e.g. from natural material; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明的荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法，属于天然有机化学领域，其特征在于，以丙酮水溶液为溶剂，提取荸荠皮中的6,8-二甲基木犀草素，提取物用乙酸乙酯萃取后，经中压MCI柱色谱和聚酰胺柱色谱分离，然后用Sephadex LH-20凝胶色谱纯化，经重结晶，获得含量在95％以上的6,8-二甲基木犀草素产品。本发明开辟了从天然植物中提取分离6,8-二甲基木犀草素的新途径，分离效果好，产品纯度高，使一贯被视为废弃物的荸荠皮变废为宝，所选用的层析材料MCI、聚酰胺和凝胶均可反复使用，原料易得，资源丰富，生产成本低，可进行规模化生产，具有较好的应用前景。

Description

荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法
技术领域
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种6,8-二甲基木犀草素的分离纯化方法，特别是涉及一种从荸荠皮中提取分离6,8-二甲基木犀草素的方法。
背景技术
6,8-二甲基木犀草素(6,8-dimethylluteolin)，黄色晶体，化学名为6,8-二甲基-5,7,3′,4′-四羟基黄酮，为木犀草素的C-甲基化衍生物。该类衍生物具有多种药理活性，如抗氧化、抗菌、抗肿瘤等。6,8-二甲基木犀草素结构独特，自然界分布少，相关文献很少，没有发现从天然植物中提取分离6,8-二甲基木犀草素的技术介绍。荸荠(Eleocharis tuberosa)，又称马蹄，属莎草科多年生浅水草本植物荸荠的地下球茎，我国大部分地区都有栽培。其中，广西荸荠产量占全国70％，贺州荸荠产量占广西70％。据文献报道，荸荠有抗菌、抗肿瘤、防治呼吸道疾病、利肠通便和利尿排淋等作用；临床上可用于治疗咽喉疼痛、痰热咳嗽、热病烦渴、小便不利、痢疾等症。研究表明，荸荠的活性物质主要富集在果皮和果肉之间。在荸荠加工过程中，被丢弃的荸荠皮质量约占新鲜荸荠质量的25％，资源非常丰富。我们在研究中发现荸荠皮中含有6,8-二甲基木犀草素，但目前未见从荸荠皮中提取分离该化合物的文献报道。
发明内容
本发明的目的在于：提出一种荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法。
6,8-二甲基木犀草素,其化学结构式如下：
本发明的荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法，应用常规提取法和色谱技术从荸荠皮中提取分离6,8-二甲基木犀草素，具体步骤如下：
(1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份，加入提取罐中，每次加入4-10份70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物；
(2)以重量计，将提取物1份分散在5份水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物；
(3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以40-100％体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A；
(4)往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为3:1-1:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B；
(5)以重量计，将粗品B1份溶于4-8份甲醇中，加入等甲醇体积的水制成悬浊液，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C；
(6)将所得粗品C经甲醇或乙醇重结晶纯化，干燥，获得含量达95％以上的6,8-二甲基木犀草素产品。
所述步骤(3)中的所述的MCI柱规格为70×460mm，填充材料为MCI-gelCHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min，检测波长为245nm；所述的流动相为40-100％体积百分比的甲醇水溶液。
所述步骤(4)中所述的聚酰胺规格为200-300目；所用洗脱液为体积比为3:1-1:1的氯仿-甲醇溶液。
本发明与现有技术相比其有益效果是：设计科学合理，开辟了从天然植物中提取分离6,8-二甲基木犀草素的新途径，分离效果好，产品纯度高，使一贯被视为废弃物的荸荠皮变废为宝，所选用的层析材料MCI、聚酰胺和凝胶均可反复使用，原料易得，资源丰富，生产成本低，可进行规模化生产，满足医药工业需要。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。
本发明的荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法，应用常规提取法和色谱技术从荸荠皮中提取分离6,8-二甲基木犀草素，具体步骤如下：
(1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用。称取一定质量(g)的荸荠皮粉末加入提取罐中，再加入4-10倍体积(mL)的70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物。
(2)将提取物(g)分散在5倍体积(mL)的水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物。
(3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，柱规格为70mm×460mm，填充材料为日本三菱化学公司生产的MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min，检测波长为254nm，以40-100％体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，根据检测峰变化情况调节洗脱液浓度，按每份500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A。
(4)往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为3:1-1:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B。
(5)将粗品B(g)溶于4-8倍体积(mL)的甲醇中，加入等甲醇体积的水制成悬浊液，用瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司生产的Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C。
(6)将所得粗品C经甲醇或乙醇重结晶纯化，干燥，获得含量达95％以上的6,8-二甲基木犀草素产品。
实施例1
将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物1.05kg。
将提取物加入5.0L水中制成浑浊液，用5.0L乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，获得萃取物120g。
往萃取物中加入300mL甲醇溶解，用260g聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，用40-100％体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，按每份500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A 31g。
将粗品A溶于90mL甲醇中，加入60g聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺柱进行分离，用体积比为2:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B 4.3g。
将粗品B溶于18mL的甲醇中，加入18mL水制成悬浊液，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C 130mg。
将所得粗品C经甲醇重结晶纯化，干燥，获得含量95.4％的6,8-二甲基木犀草素产品10mg。
实施例2
将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物1.05kg。
将提取物加入5.0L水中制成浑浊液，用5.0L乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，获得萃取物120g。
往萃取物中加入300mL甲醇溶解，用260g聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，用40-100％体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，按每份500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A 31g。
将粗品A溶于90mL甲醇中，加入60g聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺柱进行分离，用体积比为2.5:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B 1.1g。
将粗品B溶于6.0mL的甲醇中，加入6.0mL水制成悬浊液，用SephadexLH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C 53mg。
将所得粗品C经乙醇重结晶纯化，干燥，获得含量97.5％的6,8-二甲基木犀草素产品7mg。
实施例3
将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物1.05kg。
将提取物加入5.0L水中制成浑浊液，用5.0L乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩，获得萃取物120g。
往萃取物中加入300mL甲醇溶解，用260g聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，用40-100％体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，按每份500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A 31g。
将粗品A溶于90mL甲醇中，加入60g聚酰胺拌样，将甲醇挥发干，转入聚酰胺柱进行分离，用体积比为1:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B 3.4g。
将粗品B溶于15.0mL的甲醇中，加入15.0mL水制成悬浊液，用SephadexLH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C 150mg。
将所得粗品C经甲醇重结晶纯化，干燥，获得含量96.0％的6,8-二甲基木犀草素产品15mg。
所得产品经1H-NMR、13C-NMR和ESIMS确认结构。波谱数据证实，所提取纯化得到的是6,8-二甲基木犀草素，其化学结构式如下：
6,8-二甲基木犀草素，黄色晶体。1HNMR(400MHz,pyridine-d5)δ:6.99(s,H-3),7.94(s,H-2′),7.35(d,J＝8.2Hz,H-5′),7.61(d,J＝8.2Hz,H-6′),2.33(s,3H,CH3-6),2.49(s,3H,CH3-8),13.96(s,5-OH)；13C NMR(125MHz,pyridine-d5)δ:161.3(s,C-2),103.5(d,C-3),183.3(s,C-4),157.8(s,C-5),108.0(s,C-6),164.4(s,C-7),105.0(s,C-8),153.6(s,C-9),102.7(s,C-10),123.4(s,C-1′),114.4(d,C-2′),147.9(s,C-3′),151.6(s,C-4′),117.1(d,C-5′),119.5(d,C-6′),9.0(q,CH3-6),8.9(q,CH3-8)；ESIMS(negative-ion mode)m/z 313[M–H]–。

Claims (3)

1.一种荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法，其具体步骤如下：
(1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份，加入提取罐中，每次加入4-10份70％体积百分比的丙酮水溶液，在25℃下浸泡24h，浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物；
(2)以重量计，将提取物1份分散在5份水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物；
(3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以40-100％体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90％体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A；
(4)往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为3:1-1:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B；
(5)以重量计，将粗品B1份溶于4-8份甲醇中，加入等甲醇体积的水制成悬浊液，用Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有6,8-二甲基木犀草素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C；
(6)将所得粗品C经甲醇或乙醇重结晶纯化，干燥，获得含量达95％以上的6,8-二甲基木犀草素产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的所述的MCI柱规格为70×460mm，填充材料为MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min，检测波长为245nm；所述的流动相为40-100％体积百分比的甲醇水溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中所述的聚酰胺规格为200-300目；所用洗脱液为体积比为3:1-1:1的氯仿-甲醇溶液。
CN201410833111.0A 2014-12-29 2014-12-29 荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法 Pending CN104529978A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410833111.0A CN104529978A (zh) 2014-12-29 2014-12-29 荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410833111.0A CN104529978A (zh) 2014-12-29 2014-12-29 荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104529978A true CN104529978A (zh) 2015-04-22

Family

ID=52845650

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410833111.0A Pending CN104529978A (zh) 2014-12-29 2014-12-29 荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104529978A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101269161A (zh) * 2008-05-20 2008-09-24 贺州学院 一种从荸荠皮中提取总黄酮的工艺

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101269161A (zh) * 2008-05-20 2008-09-24 贺州学院 一种从荸荠皮中提取总黄酮的工艺

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GE ZHAN ET.AL: "《Study on antibacterial properties and major bioactive》", 《EUR FOOD RES TECHNOL》 *
YANGHE LUO ET AL.: "Isolation, characterisation, and antioxidant activities of flavonoids from chufa (Eleocharis tuberosa) peels", 《FOOD CHEMISTRY》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104529983B (zh) 荸荠皮提取圣草酚的方法
CN103483402A (zh) 甜菊苷及莱鲍迪苷a的提纯制备方法
CN106349324B (zh) 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法
CN1269831C (zh) 虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法
CN104592185B (zh) 荸荠皮提取槲皮素的方法
CN101967119A (zh) 一种槟榔碱的提纯方法
CN101891727A (zh) 从神农香菊中分离提取芹菜素、刺槐素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的方法
CN104557832B (zh) 荸荠皮提取西黄松黄酮的方法
CN102391350A (zh) 一种瓜子金皂苷己的提纯方法
CN104592247A (zh) 荸荠己素的提取方法
CN104592180B (zh) 荸荠皮提取5‑甲基金鱼草素的方法
CN104529978A (zh) 荸荠皮提取6,8-二甲基木犀草素的方法
CN106336440B (zh) 从油橄榄叶中提取分离齐墩果酸的方法
CN104557824B (zh) 荸荠皮提取金鱼草素的方法
CN105949256B (zh) 一种从芹菜中分离纯化芹菜苷的方法
CN104529975A (zh) 荸荠皮提取6-甲基木犀草素的方法
CN108794443A (zh) 一种制备高纯度木犀草素的方法
CN104529961B (zh) 荸荠皮提取5-异戊烯基金鱼草素的方法
CN104557835A (zh) 荸荠皮提取荸荠丁素的方法
CN104529982B (zh) 荸荠皮提取6-异戊烯基柚皮素的方法
CN104529980A (zh) 荸荠皮提取贯众素的方法
CN104529979A (zh) 荸荠皮提取荸荠丙素的方法
CN104592187A (zh) 荸荠皮提取橙皮素的方法
CN104530069A (zh) 荸荠皮提取荸荠乙素的方法
CN1305870C (zh) 新的黄烷衍生物及其制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20150422