CN104381585A - 一种高f值猪血寡肽的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种猪血利用方法，尤其涉及一种高F值猪血寡肽的提取方法。它包括猪血血红蛋白溶液制备：往猪血中加入按照质量比1：2-5：0.01-0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，离心分离，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，第一次超声波处理；前处理：物理脱氧，调节pH值，第二次超声波处理；分段酶解脱色；活性炭高F值化处理：加入占其重量为1-2%的活性炭在温度为25-35℃进行脱色处理5-10min；后处理：调节pH值，离心分离获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层超滤浓缩分离获得第二浓缩液；喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪高F值猪血寡肽。本发明方法脱色效果好，F值高，产品得率高。

Description

一种高F值猪血寡肽的提取方法

技术领域

本发明涉及一种猪血利用方法，尤其涉及一种高F值猪血寡肽的提取方法。

背景技术

猪血中红细胞的蛋白含量高达 38％， 占全血蛋白总量的 75％以上，其中 92％以上是血红蛋白， 因此猪血球是一种优良的动物蛋白源，长期以来猪血加工者直接将其制成血球粉销售。但由于血球粉中含有血红素，使得血球粉为黑红色，并且带有很重的血腥味，感官不好难以接受，其经济附加值不高。

血红素是以卟啉铁的形式与四个珠蛋白结合形成血红蛋白， 存在于红细胞中。在食品工业中，血红素可替代肉制品中的发色剂硝酸盐及人工合成色素， 使用血红素可减少亚硝酸盐的致癌作用。 在制药工业中，血红素可作为半合成胆红素原料，而且是抗癌的特效药。血红素在临床上作为补铁剂，可治疗由缺铁引起的贫血症， 这种血红素补铁剂可以直接被人体吸收，吸收率高达 10％～ 20％，具有无体内铁蓄积中毒及胃肠刺激等不良反应等优点。

CN100581377C(2010-1-20)公开了一种脱血红素猪血血红蛋白酶解物和血红素肽的制备方法；该方法以猪血红细胞为原料,通过溶血、复合蛋白酶酶解、等电离心分离制备脱血红素猪血血红蛋白酶解物及血红素肽。然而该方法制备产物的灰分较大，且脱色效果仍然有待改进。

高F 值寡肽混合物是一个由2-9 个氨基酸残基所组成的混合小肽（或称寡肽）体系，可以将之分成两个部分予以解释,即高F 值与寡肽。F 值（Fischer ratio），是支链氨基酸与芳香族氨基酸含量的摩尔数比值。正常人的血液中F 值为3.0-3.5，而患有肝脏疾病病人的F 值只有1.0 或者更低，高F值寡肽的F 值应大于20。寡肽（Oligo-peptide），是由2-9 个氨基酸组合而成的蛋白质前体，或是由蛋白质降解到2-9个氨基酸组成的蛋白质降解物，也可称小肽、短肽等。由于它具有独特的氨基酸组成和生理功能，已经受到食品和医药界的高度关注。

发明内容

本发明的目的是提供一种脱色效果好，产品的率高的高F值猪血寡肽的提取方法。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种高F值猪血寡肽的提取方法，其依次通过以下步骤制备而成：

（1） 猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：2-5：0.01-0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1-2：1000，混合均匀后在15-25℃第一次碟式离心分离3-6min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在1800-2500W的超声波功率下第一次超声波处理30-60s获得猪血血红蛋白溶液；

所述从天然植物中提取的植物酚为茶多酚或苹果多酚；

（2） 前处理：使用氮气鼓泡脱氧对所述猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然后将脱氧后的所述猪血血红蛋白溶液调节pH值至6-7，然后在600-800W的超声波功率下第二次超声波处理50-90s获得前处理液；

（3） 分段酶解脱色：将所述前处理液升温至28-35℃，调节pH值至8.5-9.5,加入第一复合酶并保温1-1.5h，所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：1-2：0.5-0.8：0.2-0.4混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为10000-20000U/g；然后再升温至45-50℃，调节pH值至10-12,加入第二复合酶并保温1.5-2h后终止酶解反应获得酶解脱色液；所述第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：2-3混合而成；所述第一复合酶与所述第二复合酶的质量比为3-5：1；

（4） 活性炭高F值化处理：向所述酶解脱色液中加入占其重量为8-10%的活性炭在温度为30-38℃进行吸附处理50-100min获得活性炭高F值化处理液；

（5） 后处理：将所述活性炭高F值化处理液调节pH值至4-5，水浴15-25min，在15-25℃第二次碟式离心分离2-5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.5-0.8MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液；

所述超滤膜为聚偏氟乙烯超滤膜，截留分子量为6000-8000Da；

（6）喷雾干燥：以可溶性淀粉为载体，将所述第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪高F值猪血寡肽。

 

本发明猪血血红蛋白溶液制备时加入的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚混合物可以使猪血抗凝和防变性，提高其热稳定性，保证营养成分不流失；获得沉淀物后进行超声波处理是为了对沉淀物中的猪血球细胞进行预破碎，利于后续的脱色；脱色采用前处理初步脱色、分段酶解二次脱色、活性炭高F值化处理和后处理多级脱色处理和提纯工艺，可充分脱除其中的颜色和血腥味，使最终制得的高F值猪血寡肽颜色接近乳白色，分子量集中在800-1200Da，氨基酸和游离氨基酸组成具有良好的平衡性，芳香族氨基酸含量小于0.05%，F值大于28。

本发明使得高F值猪血寡肽脱除了颜色和血腥味，接近乳白色，并具有乳香味，其感官性状大幅提升；高F值猪血寡肽灰分含量低，溶解度好，其氨基酸和游离氨基酸具有良好的平衡性。

作为优选，取所述后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-10--15℃冷冻1-2h，自然解冻后添加1-2倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.1-0.2倍去离子水洗涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。

以原始猪血为原料，经生物酶解配合多级处理技术和该方法制得血红素粗品副产物。采用本发明方法制备的血红素回收率达95%以上，血红素肽中的血红素含量达到40%-45%，颜色为紫红色，并且无腥味，发明人发现，这与冷冻分离后又进行第二次物理脱氧有关。

作为优选，所述喷雾干燥的进风温度为190-240℃，出风温度为60-70℃，最大水分蒸发量为3-5kg/h。

作为优选，所述猪血血红蛋白溶液制备具体是将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：3：0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1.5：1000，混合均匀后在20℃第一次碟式离心分离4min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入1.8-2倍体积的去离子水，在2000W的超声波功率下第一次超声波处理50s获得猪血血红蛋白溶液。

作为优选，所述后处理是将所述酶解脱色液调节pH值至4-5，在温度为10-18℃的水浴中处理15-25min，在18℃第二次碟式离心分离3min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.6MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。

作为优选，所述第一次碟式分离采用的碟式分离机，包括机体，其所述机体内设置有转鼓，所述机体顶部设置有进出口装置，所述进出口装置包括平行布置的原料进口管、重相出口管和轻相出口管，所述原料进口管、重相出口管和轻相出口管与所述转鼓相通，所述机体侧面设置有与所述转鼓相通的排渣部和废水出口，所述废水出口位于所述排渣部的下方，所述机体的侧面设置有清洗水进口，所述排渣部内设置有PLC装置；

所述进出口装置包括进出口座以及固定在所述进出口座上的原料进口管，所述原料进口管的侧壁上设置有用于分离重相的上向心泵和用于分离轻相的下向心泵，所述上向心泵位于所述下向心泵的上方，所述原料进口管的一侧连接有在所述原料进口管径向延伸的重相出口管的一端，所述原料进口管的另一侧连接有在所述原料进口管径向延伸的轻相出口管的一端，所述重相出口管与所述轻相出口管的另一端分别设置有流量调节装置。

本发明的优点是：

（1）                 采用可编程逻辑控制器（PLC）装置设置在所述排渣部，可以在连续进料生产的情况下实行定期定量排渣，也可以在停止进料时进行全排渣，以便自动清洗转鼓中的污垢，具有自动化程度高、对工艺调整的适应性强、调节方便、分离效果好的优点；

（2）                 通过所述原料进口管、重相出口管和轻相出口管的布置，同时配合转鼓和排渣部的设置，可以使密度相对较大的重料血球通过下向心泵室流出，使密度相对较小的轻料血浆从下向心泵室流出，对猪血血浆和血球分离的分离性能高、效果好；

（3）                 过所述原料进口管与所述上向心泵和下向心泵的布置，同时配合重相出口管、轻相出口管以及流量调节装置，可以使密度相对较大的重料血球通过下向心泵流出，使密度相对较小的轻料血浆从下向心泵流出，对猪血血浆和血球分离的分离性能高、效果好。

作为优选，所述转鼓包括主轴、固定所述主轴的基座以及与所述基座相邻的转鼓体，其还包括压紧在所述转鼓体上的且分布于所述主轴两侧的碟片压盖和转鼓盖，所述主轴侧壁固设有与所述主轴呈30-60°夹角的进料分配管，所述转鼓体内设置有不均匀布置的碟片，所述碟片与所述主轴的夹角为30-60°，所述主轴顶部设置有用于分离不同密度物料的比重环，所述比重环上方设置有用于分离重相的上向心泵室，所述比重环下方设置有用于分离轻相的下向心泵室。

本发明通过所述进料分配管与所述碟片的角度布置，同时配合比重环以及上向心泵室与下向心泵室的设置，可以使密度相对较大的重料血球通过下向心泵室流出，使密度相对较小的轻料血浆从下向心泵室流出，对猪血血浆和血球分离的分离性能高、效果好。

更优选，所述碟片压盖与所述主轴的夹角为30-60°，所述转鼓盖与所述主轴的夹角为30-60°。

更优选，所述进料分配管下方且位于所述基座与所述转鼓体的相邻处设置有O型密封圈；所述O型密封圈的周向对称设置有用于卡紧密封槽的两道切口，所述两道切口与所述O型密封圈圆心的连线夹角为90°。

O型密封圈可使转鼓密封性更好，从而提高血浆和血球的分离效果。

更优选，所述流量调节装置包括与所述重相出口管或所述轻相出口管的另一端相通的流量调节室，所述流量调节室连接有压力装置。

通过流量调节室中的压力调节，可以控制重相料和轻相料的进出口压力，从而提高分离效果。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1、本发明制备的猪高F值猪血寡肽脱除了颜色和血腥味，接近乳白色，并具有乳香味，其感官性状大幅提升；

2、本发明制备时

还可同时得到高附加值的血红素粗品副产物。

附图说明

图1是本发明碟式分离机的正视图；

图2是本发明碟式分离机的俯视图；

图3是本发明碟式分离机的侧视图；

图4是本发明碟式分离机的工作示意图；

图5是本发明碟式分离机转鼓剖视图；

图6是本发明O型密封圈放大示意图；

图7是本发明进出口装置的示意图；

图中，1-转鼓；2-进出口装置；3-排渣部；4-废水出口；5-清洗水进口；

11-主轴；12-基座；13-转鼓体；14-碟片压盖；15-转鼓盖；16-进料分配管；17-碟片；18-比重环；19-上向心泵室；110-下向心泵室；111-异形锁紧圈；112-定位块；113-内六角锥端紧定螺钉；114-水室；115-O型密封圈；116-切口；

21-进出口座；22-原料进口管；23-上向心泵；24-下向心泵；25-重相出口管；26-轻相出口管；27-流量调节装置；271-流量调节室；272-压力装置；273-第一视镜玻璃；28-进料接头；281-第二视镜玻璃。

 

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

实施例一

猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：5：0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和茶多酚或苹果多酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为2：1000，混合均匀后在25℃第一次碟式离心分离6min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在2500W的超声波功率下第一次超声波处理60s获得猪血血红蛋白溶液；

前处理：使用氮气鼓泡脱氧对猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然后将脱氧后的猪血血红蛋白溶液调节pH值至7，然后在800W的超声波功率下第二次超声波处理90s获得前处理液；

分段酶解脱色：将前处理液升温至35℃，调节pH值至9.5,加入第一复合酶并保温1.5h，所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：2：0.8：0.4混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为20000U/g；然后再升温至50℃，调节pH值至12,加入第二复合酶并保温2h后终止酶解反应获得酶解脱色液；第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1： 3混合而成；第一复合酶与第二复合酶的质量比为5：1；

活性炭高F值化处理：向所述酶解脱色液中加入占其重量为10%的活性炭在温度为38℃进行吸附处理50-100min获得活性炭高F值化处理液；

后处理：将活性炭高F值化处理液调节pH值至5，水浴25min，在25℃第二次碟式离心分离5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.8MPa下用截留分子量为8000Da的PVDF超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液；

喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪高F值猪血寡肽,喷雾干燥的进风温度为240℃，出风温度为70℃，最大水分蒸发量为5kg/h。高F值猪血寡肽颜色接近乳白色，分子量集中在800-1200Da，氨基酸和游离氨基酸组成具有良好的平衡性，芳香族氨基酸含量小于0.05%，F值大于28。

取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-15℃冷冻2h，自然解冻后添加2倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.2倍去离子水洗涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。血红素回收率达96%以上，血红素肽中的血红素含量达到40%，颜色为紫红色，并且无腥味。

如图1-图7所示，第一次碟式分离采用的碟式分离机包括机体，机体内设置有转鼓1，机体顶部设置有进出口装置2，进出口装置2包括平行布置的原料进口管22、重相出口管25和轻相出口管26，原料进口管22、重相出口管25和轻相出口管26与转鼓1相通，机体侧面设置有与转鼓1相通的排渣部3和废水出口4，废水出口4位于排渣部3的下方，机体的侧面设置有清洗水进口5，排渣部3内设置有PLC装置。转鼓1包括主轴11、固定主轴11的基座12以及与基座12相邻的转鼓体13，其还包括压紧在转鼓体13上的且分布于主轴11两侧的碟片压盖14和转鼓盖15，主轴11侧壁固设有与主轴11呈30-60°夹角的进料分配管16，转鼓体13内设置有不均匀布置的碟片17，碟片17与主轴11的夹角为30-60°，主轴11顶部设置有用于分离不同密度物料的比重环，比重环上方设置有用于分离重相的上向心泵室19，比重环下方设置有用于分离轻相的下向心泵室110。碟片压盖14与主轴11的夹角为30-60°，优选50°；转鼓盖15与主轴11的夹角为30-60°，优选50°。碟片压盖14和转鼓盖15的垂直距离为4cm。转鼓盖15上设置有异形锁紧圈111和定位块112。基座12下方设置有用于反洗的水室114，清洗水进口5与水室114相通。进料分配管16下方且位于基座12与转鼓体13的相邻处设置有O型密封圈115。O型密封圈115的周向对称设置有用于卡紧密封槽的两道切口116，两道切口116与O型密封圈115圆心的连线夹角为90°。进出口装置2包括进出口座21以及固定在进出口座21上的原料进口管22，原料进口管22的侧壁上设置有用于分离重相的上向心泵23和用于分离轻相的下向心泵24，上向心泵23位于下向心泵24的上方，原料进口管22的一侧连接有在原料进口管22径向延伸的重相出口管25的一端，原料进口管22的另一侧连接有在原料进口管22径向延伸的轻相出口管26的一端，重相出口管25与轻相出口管26的另一端分别设置有流量调节装置27。流量调节装置27包括与重相出口管25或轻相出口管26的另一端相通的流量调节室271，流量调节室271连接有压力装置272。转鼓体13上设置有将进料分配管16进一步固定的内六角锥端紧定螺钉113，流量调节室271上设置有第一视镜玻璃273。

原料进口管的顶端上方设置有进料接头28，进料接头28上设置有第二视镜玻璃281。通过第一视镜玻璃和第二视镜玻璃的安装，可以更准确地观察重相料和轻相料的分离情况。

 

实施例二

猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：2：0.01混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和茶多酚或苹果多酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1：1000，混合均匀后在15℃第一次碟式离心分离3min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在1800W的超声波功率下第一次超声波处理30s获得猪血血红蛋白溶液；

前处理：使用氮气鼓泡脱氧对猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然后将脱氧后的猪血血红蛋白溶液调节pH值至6，然后在600W的超声波功率下第二次超声波处理50s获得前处理液；

分段酶解脱色：将前处理液升温至28℃，调节pH值至8.5,加入第一复合酶并保温1h，所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：1：0.5：0.2混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为10000U/g；然后再升温至45℃，调节pH值至10,加入第二复合酶并保温1.5h后终止酶解反应获得酶解脱色液；第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：2混合而成；第一复合酶与第二复合酶的质量比为3：1；

活性炭高F值化处理：向酶解脱色液中加入占其重量为8%的活性炭在温度为30℃进行吸附处理50min获得活性炭高F值化处理液；

向酶解脱色液中加入占酶解脱色液重量为1%的活性炭在温度为25℃进行脱色处理5min获得活性炭高F值化处理液；

后处理：将活性炭高F值化处理液调节pH值至4，水浴15min，在15-25℃第二次碟式离心分离2min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.5MPa下用截留分子量为6000Da的PVDF超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液；

喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪高F值猪血寡肽,喷雾干燥的进风温度为190℃，出风温度为60℃，最大水分蒸发量为3kg/h。高F值猪血寡肽颜色接近乳白色，分子量集中在800-1200Da，氨基酸和游离氨基酸组成具有良好的平衡性，芳香族氨基酸含量小于0.05%，F值大于28。

。

取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-10℃冷冻1h，自然解冻后添加1-2倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.1倍去离子水洗涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。血红素回收率达96%以上，血红素肽中的血红素含量达到45%，颜色为紫红色，并且无腥味。

 

实施例三

猪血血红蛋白溶液制备具体是将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：3：0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1.5：1000，混合均匀后在20℃第一次碟式离心分离4min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入1.8-2倍体积的去离子水，在2000W的超声波功率下第一次超声波处理50s获得猪血血红蛋白溶液。

前处理：使用氮气鼓泡脱氧对猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然后将脱氧后的猪血血红蛋白溶液调节pH值至6.5，然后在700W的超声波功率下第二次超声波处理70s获得前处理液；

分段酶解脱色：将前处理液升温至30℃，调节pH值至8.5-9.95,加入第一复合酶并保温1.2h，所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：1.5：0.7：0.3混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为16000U/g；然后再升温至48℃，调节pH值至11,1加入第二复合酶并保温1.8h后终止酶解反应获得酶解脱色液；第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：2.5混合而成；第一复合酶与第二复合酶的质量比为4：1；

活性炭高F值化处理：向所述酶解脱色液中加入占其重量为9%的活性炭在温度为35℃进行吸附处理80min获得活性炭高F值化处理液；

后处理：将活性炭高F值化处理液调节pH值至4，在温度为15℃的水浴中处理18min，在18℃第二次碟式离心分离3min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.6MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。

喷雾干燥：将第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪高F值猪血寡肽,喷雾干燥的进风温度为200℃，出风温度为65℃，最大水分蒸发量为4kg/h。

高F值猪血寡肽颜色接近乳白色，分子量集中在800-1200Da，氨基酸和游离氨基酸组成具有良好的平衡性，芳香族氨基酸含量小于0.05%，F值大于28。

取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-12℃冷冻1.5h，自然解冻后添加1.5倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.15倍去离子水洗涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。血红素回收率达96%以上，血红素肽中的血红素含量达到45%，颜色为紫红色，并且无腥味。

 

对比实施例一

同实施例一，不同的是猪血血红蛋白溶液制备是将检验合格的生猪采血后，加入柠檬酸二钠，柠檬酸二钠与猪血的重量比为1-2：1000，混合均匀后在15℃滚筒式离心分离3-6min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水。最后制得的猪血寡肽颜色为灰白色，F值小于23。

 

对比实施例二

同实施例二，不同的是猪血血红蛋白溶液制备后未进行前处理，而是直接进行酶解脱色和后处理。

最后制得的高F值猪血寡肽颜色为灰白色，F值小于23。

 

对比实施例三

同实施例三，不同的是酶解脱色是加入按质量比1：3混合的动物蛋白水解酶和枯草菌蛋白酶，动物蛋白水解酶与猪血血红蛋白溶液的浓度比为15000U/g，酶解1-2h后终止酶解反应获得酶解脱色液；后处理是将酶解脱色液调节pH值至6-7，水浴15min，在15℃第二次碟式离心分离5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.4MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。

最后制得的高F值猪血寡肽颜色为灰白色，F值小于22。

 

对比实施例四

同实施例三，不同的是血红素肽制备是取后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-10℃冷冻1-2h，自然解冻后添加1-2倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.1-0.2倍去离子水洗涤后，接着再离心分离，不进行第二次物理脱氧，直接冷冻干燥得到。血红素回收率为90%，血红素肽中的血红素含量为30%，颜色为紫红色，略有腥味。

 

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的是实力保护。 

Claims (10)

1. 一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于依次通过以下步骤制备而成：

(1)猪血血红蛋白溶液制备：将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：2-5：0.01-0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1-2：1000，混合均匀后在15-25℃第一次碟式离心分离3-6min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入去离子水，在1800-2500W的超声波功率下第一次超声波处理30-60s获得猪血血红蛋白溶液；

所述从天然植物中提取的植物酚为茶多酚或苹果多酚；

(2)前处理：使用氮气鼓泡脱氧对所述猪血血红蛋白溶液进行第一次物理脱氧和初步脱色，然后将脱氧后的所述猪血血红蛋白溶液调节pH值至6-7，然后在600-800W的超声波功率下第二次超声波处理50-90s获得前处理液；

(3)分段酶解脱色：将所述前处理液升温至28-35℃，调节pH值至8.5-9.5,加入第一复合酶并保温1-1.5h，所述第一复合酶由动物蛋白水解酶、枯草菌蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：1-2：0.5-0.8：0.2-0.4混合而成，所述动物蛋白水解酶与所述猪血血红蛋白溶液的浓度比为10000-20000U/g；然后再升温至45-50℃，调节pH值至10-12,加入第二复合酶并保温1.5-2h后终止酶解反应获得酶解脱色液；所述第二复合酶由枯草菌蛋白酶和碱性蛋白酶按质量比1：2-3混合而成；所述第一复合酶与所述第二复合酶的质量比为3-5：1；

(4)活性炭高F值化处理：向所述酶解脱色液中加入占其重量为8-10%的活性炭在温度为30-38℃进行吸附处理50-100min获得活性炭高F值化处理液；

(5)后处理：将所述活性炭高F值化处理液调节pH值至4-5，水浴15-25min，在15-25℃第二次碟式离心分离2-5min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.5-0.8MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液；

所述超滤膜为聚偏氟乙烯超滤膜，截留分子量为6000-8000Da；

(6)喷雾干燥：以可溶性淀粉为载体，将所述第二浓缩液进行喷雾干燥获得乳白色的猪高F值猪血寡肽。

2. 根据权利要求1所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：取所述后处理步骤中获得的第二沉淀层物质，在-10--15℃冷冻1-2h，自然解冻后添加1-2倍去离子水洗涤，然后进行离心分离，取离心分离获得的沉淀物，添加0.1-0.2倍去离子水洗涤后，进行第二次物理脱氧，接着再离心分离，最后冷冻干燥得到血红素肽。

3. 根据权利要求2所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述喷雾干燥的进风温度为190-240℃，出风温度为60-70℃，最大水分蒸发量为3-5kg/h。

4. 根据权利要求3所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述猪血血红蛋白溶液制备具体是将检验合格的生猪采血后，加入按照质量比1：3：0.03混合的柠檬酸二钠、碳酸氢钠和从天然植物中提取的植物酚，其中柠檬酸二钠与猪血的重量比为1.5：1000，混合均匀后在20℃第一次碟式离心分离4min，获得第一上清层和第一沉淀层，分离获得第一沉淀物，往第一沉淀物中加入1.8-2倍体积的去离子水，在2000W的超声波功率下第一次超声波处理50s获得猪血血红蛋白溶液。

5. 根据权利要求4所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述后处理是将所述酶解脱色液调节pH值至4-5，在温度为10-18℃的水浴中处理15-25min，在18℃第二次碟式离心分离3min，获得第二上清层和第二沉淀层；取第二上清层在压力为0.6MPa下超滤膜过滤浓缩分离获得第二浓缩液。

6. 根据权利要求1-5任一项所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述第一次碟式分离采用的碟式分离机，包括机体，所述机体内设置有转鼓（1），所述机体顶部设置有进出口装置（2），所述进出口装置（2）包括平行布置的原料进口管（22）、重相出口管（25）和轻相出口管（26），所述原料进口管（22）、重相出口管（25）和轻相出口管（26）与所述转鼓（1）相通，所述机体侧面设置有与所述转鼓（1）相通的排渣部（3）和废水出口（4），所述废水出口（4）位于所述排渣部（3）的下方，所述机体的侧面设置有清洗水进口（5），所述排渣部（3）内设置有PLC装置；

所述进出口装置（2）包括进出口座（21）以及固定在所述进出口座（21）上的原料进口管（22），所述原料进口管（22）的侧壁上设置有用于分离重相的上向心泵（23）和用于分离轻相的下向心泵（24），所述上向心泵（23）位于所述下向心泵（24）的上方，所述原料进口管（22）的一侧连接有在所述原料进口管（22）径向延伸的重相出口管（25）的一端，所述原料进口管（22）的另一侧连接有在所述原料进口管（22）径向延伸的轻相出口管（26）的一端，所述重相出口管（25）与所述轻相出口管（26）的另一端分别设置有流量调节装置（27）。

7. 根据权利要求6所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述转鼓（1）包括主轴（11）、固定所述主轴（11）的基座（12）以及与所述基座（12）相邻的转鼓体（13），其还包括压紧在所述转鼓体（13）上的且分布于所述主轴（11）两侧的碟片压盖（14）和转鼓盖（15），所述主轴（11）侧壁固设有与所述主轴（11）呈30-60°夹角的进料分配管（16），所述转鼓体（13）内设置有不均匀布置的碟片（17），所述碟片（17）与所述主轴（11）的夹角为30-60°，所述主轴（11）顶部设置有用于分离不同密度物料的比重环，所述比重环上方设置有用于分离重相的上向心泵室（19），所述比重环下方设置有用于分离轻相的下向心泵室（110）。

8. 根据权利要求7所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述碟片压盖（14）与所述主轴（11）的夹角为30-60°，所述转鼓盖（15）与所述主轴（11）的夹角为30-60°。

9. 根据权利要求8所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述进料分配管（16）下方且位于所述基座（12）与所述转鼓体（13）的相邻处设置有O型密封圈（115）；

所述O型密封圈（115）的周向对称设置有用于卡紧密封槽的两道切口（116），所述两道切口（116）与所述O型密封圈（115）圆心的连线夹角为90°。

10. 根据权利要求9所述的一种高F值猪血寡肽的提取方法，其特征在于：所述流量调节装置（27）包括与所述重相出口管（25）或所述轻相出口管（26）的另一端相通的流量调节室（271），所述流量调节室（271）连接有压力装置（272）。