CN104357568A - 大麻遗传标记多态性检测体系 - Google Patents

Abstract

本发明公开了大麻遗传标记多态性检测体系。本发明提供了一种用于鉴定大麻的引物组，由引物对1-5共5个引物对组成。本发明的实验证明，本发明有如下优点：1、同时扩增大麻5个STR基因座，比单个基因座的扩增更加高效、快捷，为大麻STR基因座的进一步研究、大麻STR数据库的建立、案件中大麻的检验鉴定提供了有效的方法；2、优化后的大麻STR 5plex各基因座间能实现平衡扩增、具有高灵敏度和稳定性，利于检验涉毒案件中经常遇到的腐败检材；3、准确率高,采自不同产地的大麻样本，经检测和数据统计分析，能够得到各自在5个基因座上的分型。

Description

大麻遗传标记多态性检测体系

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及大麻遗传标记多态性检测体系。

背景技术

大麻为被子植物门荨麻目大麻科大麻属一年生雌雄异株草本植物。大麻属植物主要有栽培大麻(Cannabis sativa L)、印度大麻(Cannabis sativa L)和野生大麻(Cannabis ruderal is Janisch)3个品种，在长期的生物自然进化和人工培育过程中又产生了许多大麻变种和亚种。大麻具有悠久的栽培历史，是许多国家重要的经济作物，被用作纺织纤维、动物饲料、油料、药物和麻醉品。大麻具有至幻作用，能作用于神经系统，具有强烈的成瘾性和麻醉性，使人的神经由兴奋转为抑制，所以联合国公约将其列为与海洛因、可卡因并列的三大毒品之一。大麻至幻作用的有效成分包括大麻二酚(CBD)、大麻酚(CNB)和四氢大麻酚(THC)，其中起重要作用的是THC。通常根据THC和CBD的含量将大麻分为毒品型大麻(THC>0.5％,CBD<0.5％,即THC/CBD>1)、中间型大麻(THC>0.5％,CBD>0.5％)和纤维型大麻(THC<0.5％,CBD>0.5％,即THC/CBD<1)。虽然包括我国在内的许多国家均明文规定对大麻的种植等活动进行限制、管制、监察和检察等措施。然而在高额利润的驱使下，全球范围的毒品大麻种植和非法交易活动屡禁不止。与此同时，在大麻犯罪案件中缴获成批未加工的大麻植物(如整株植物、种子等)的情况也屡见不鲜。在法庭科学中，虽然可用传统的植物形态学方法和理化方法如常规化学法、毛细管电泳法、薄层色谱法等对大麻进行鉴定，但这些方法有很大的局限性，对检材的要求较高且不能进行有效的产地推断，所以为了更好的进行大麻种属鉴定,同时以期实现法庭科学推断大麻来源的需要，尝试寻求新的更好的方法来解决这一问题。

近年来随着分子生物学的快速发展，用DNA检验技术对大麻进行分子水平的鉴定成为法庭科学研究的热点和新技术方法。

RAPD即随机扩增多态性DNA标记，是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列基因组进行多态性分析的分子技术。它采用人工合成的含有9-10个碱基的随机序列组成的寡核酸做引物，通过PCR扩增获得长度不同的多态性DNA片断。RAPD形成的遗传基础是:在DNA等位区域内，因引物靶序列发生点突变，使扩增子(两个反向聚合的引物靶序列之间的DNA区域)丢失，产生显性的RAPD，或因扩增子内发生序列的插人、缺失突变，产生共显性的RAPD。个体的模板不同，其扩增产物就不同。在关于大麻的研究中，1995年Gillan和Cole等运用RAPD和HPLC两种方法对17株大麻标本进行检测，利用RAPD技术成功地对HPLC无法区分的大麻样本进行了鉴定。1996年，Jagadish等用RAPD技术成功区分了大麻和蛇麻草。Sakamoto等(1995年)、Mandol ino等(1999年)及陈其军等(2001年)分别将用RAPD技术获得的RAPD分子标记转化为SCAR标记。研究证明RAPD可以对大麻进行有效的种属鉴定。但是由于RAPD方法对模板DNA要求较高，且随机引物的片段较短，扩增产物的稳定性和重复性欠佳，检测费用较高，费时费事，所以在法庭科学实际工作中很难作为常规检测方法，其一般被用于大麻遗传多样性的研究及特异性片段的筛查等工作中。

AFLP检测技术是RAPD和RFLP技术相结合的产物，该技术的原理是对基因组DNA限制性酶切片段进行选择性扩增，它具有多态性强、不需预先知道目标基因组序列、DNA模板浓度宽容度大、谱带清晰，实验稳定性好等优点。在关于大麻的研究中，2006年，Shannon L等利用AFLP分子标记对三个工业纤维大麻品种和一个高毒药用品种间的遗传差异进行检测，10对引物扩增检测出1206条普带，其中88％具有多态性，其中18条普带对工业大麻和高毒大麻具有鉴别意义。郭佳等用银染AFLP技术用55对引物组合对12个大麻地域品种进行初筛，选出了5对多态性好的引物组合，每对AFLP引物组合扩增出47～76条普带。AFLP技术存在操作繁琐，费时费力，不便进行数据统计和对比等不足，所以AFLP也一般被用于标记的筛查等。

单核苷酸序列多态性(SNP)是基因组水平上单个核苷酸的变异引起的DNA序列多态性，是新近发展起来的一种分子遗传标记技术。其具有分布广泛、数量众多、易于批量检测等优点。2010年，Rotherham D等尝试运用SNP芯片鉴别药用型大麻和非药用型大麻，取得了一定的进展。SNP技术为二等位基因标记，具有巨大的优势和潜力。随着DNA芯片等技术的发展，其被应用于大麻种属、品种检验具有良好的发展前途。但由于其检测仪器费用高昂等原因，大麻SNP的发展还需要进行大量的基础研究。

短串联重复序列STR是由2-6bp的核心序列串联重复多次组成的寡核苷酸序列，因重复次数不同而具有高度多态性。STR标记被广泛应用到法庭科学实践中进行个体识别和亲子鉴定。也有部分法庭科学家尝试利用STR标记对植物DNA进行分析的报道。STR技术的优势在于基因座位点丰富、多态性较高、结果稳定，检测可实现自动化，节省时间和人力，所以目前用STR标记来鉴别大麻、区分大麻品种等法庭科学研究取得了一定的成果。目前用于法庭科学的研究检验的STR标记主要有27个。2003年，Hsieh等人报道了第一个大麻STR基因座。数据显示该基因座的重复单位为6bp，具有高度的多态性，检测的108个样本中该基因座的重复次数从3～40次不等，杂合度接近87.04％。结果显示此基因座可将大麻与其近缘物种(例如烟草)进行区分，因此可用于对大麻的鉴定和研究大麻种间的遗传关系。同年Gimore等使用5个STR基因座标记检测了93株大麻，共得到79种等位基因，结果经统计学分析，得出大麻不同品种间具有遗传多样性的结论，证明STR技术用于鉴别大麻植物的来源地具有一定可行性。而Alghanim和Almirall报道了一项关于大麻STR基因座结构类型的研究成果，他们利用12个不同的寡核苷酸探针对大麻STR基因座进行筛查，数据结果显示，49％的克隆产物含有微卫星序列，其中GA/CT约占50％,GTT/CAA占16％,AAG/TTC占15％,GAT/CTA占10％。同时他们还开发了11个多态性STR标记(3个二核苷酸序列和8个三核苷酸序列)，并从中检测到了52个等位基因，这11个STR基因座杂合度的范围是0.386～0.710，在群体中检出相同基因型的机会为1.8×10-7。研究结果表明这11个STR标记可以用于大麻的DNA分型及大麻品种间亲缘关系的评估。2008年Howard等在SWGDAM的指导下建立了大麻STR复合扩增系统，他们选取了10个三核苷酸重复单位的STR基因座(ANUCS301,ANUCS302,ANUCS303,ANUCS304,ANUCS305,ANUCS501,B01-CANN1,B05-CANN1,B02-CANN2,C11-CANN1),采用4个复合扩增体系对分别从大麻干燥根、茎、叶以及新鲜叶片、冰冻叶片、干燥叶片组织提取的DNA进行检测研究，结果表明干燥叶片组织是进行大麻STR分析的最好DNA来源，进行扩增的最佳DNA模板量为10ng；通过对大麻的近缘植物如烟草等的分析说明该复合系统具有较好的特异性。2009年Howard等建立了第一个澳大利亚大麻STR基因数据库，也是世界上第一个大麻STR基因数据库。这一数据库是在2008年研究成果的基础上，利用以上10个STR基因座对510个大麻植物样本(其中包含57份纤维大麻样本)进行扩增分析并建立起来的。实验中共检测到了106个等位基因和314种不同的基因型，所有的纤维大麻样本呈现单一的基因型，55％的毒品大麻样本存在一份或几份样本基因型相同的情况。数据分析结果表明这种相同基因型的情况是由无性繁殖产生的。这提示了被检测的大麻可能来源于同一个母体，从而为案件的侦破提供了有价值的线索。同年Maria等报道了一个包含6个STR基因座的复合扩增体系。通过这个复合扩增体系成功鉴别出了来自于美国33个州的98份大麻样本(包括14份纤维大麻和84份毒品大麻)。2011年Stephan等选取了15个STR基因座进行复合扩增，对63份大麻样本进行了检测，该复合体系建议的PCR初始模板量为32ng，其检测结果表明用STR进行地域来源的确认具有一定的可行性。此外，就国内而言，大麻STR基因座的研究才刚刚起步，2008年马原等用3个STR基因座对62份来自四个不同品种的云南大麻进行了个体和群体的遗传多态性调查。这一研究为应用STR遗传信息推断中国毒品原植物的品种和产地提供理论基础。总的说来，目前关于大麻的研究主要倾向于毒品型大麻与非毒品型大麻的研究，涉及到大麻地域来源的研究十分稀少。国外关于大麻的复合扩增体系的研究仍处于初级阶段，在国内则是空白。

发明内容

有鉴于此，为了填补国内大麻STR复合扩增体系研究的空白，为实现用大麻STR基因座进行大麻地域来源推断、为以后建立中国大麻STR基因库等的研究提供有力的技术支持与保障，发明了这一简便、快速、高效的大麻STR5plex荧光复合扩增检测体系。

本发明的一个目的提供一种用于鉴定大麻的引物组。

本发明提供的引物组，由引物对P17、P19、P25、P14和P24共5个引物对组成：

所述引物对P17由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P19由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P25由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P14由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P24由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10所示的单链DNA分子组成。

上述引物组中，所述引物对中的一条引物均用荧光标记，其中，所述引物对P17、P19和P25中每对引物对中的一条引物均标记FAM；

所述引物对P14和P24中每对引物对中的一条引物均标记HEX。

本发明另一个目的是提供一种用于鉴定大麻的PCR试剂。

本发明提供的PCR试剂，包括含有上述引物组的PCR试剂。

上述的PCR试剂中，所述引物对P14、P17中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.3μM；

所述引物对P16、P24中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.15μM；

所述引物对P25中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.35μM。

含有上述引物或含有上述PCR试剂的试剂盒也是本发明保护的范围。

上述引物、上述PCR试剂或上述的试剂盒在鉴定大麻中的应用也是本发明保护的范围；

或上述引物、上述PCR试剂在制备鉴定大麻产品中的应用也是本发明保护的范围。

上述引物、上述PCR试剂或上述的试剂盒在鉴定待测样本是否含有大麻中的应用也是本发明保护的范围；

或上述引物、上述PCR试剂在制备鉴定待测样本是否含有大麻产品中的应用也是本发明保护的范围。

本发明第三个目的是提供一种辅助待测样本是否为大麻或是否含有大麻的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

用上述5个引物对共同对待测样本基因组DNA进行STR复合扩增，得到扩增产物；检测所述扩增产物，

若扩增产物满足如下1)-5)全部标准，则待测样本候选为大麻或者候选含有大麻；若扩增产物不满足如下1)-5)全部标准，则待测样本候选不为大麻或者候选不含有大麻；

所述标准为：

1)含有显FAM基团颜色且大小为97-112bp的等位基因片段；

2)含有显FAM基团颜色且大小为231-249bp的等位基因片段；

3)含有显FAM基团颜色且大小为266-273bp的等位基因片段；

4)含有显HEX基团颜色且大小为163-177bp的等位基因片段；

5)含有显HEX基团颜色且大小为102-117bp的等位基因片段。

上述方法中，所述STR复合扩增反应退火温度为55.5℃；

所述待测样本为样本的基因组DNA。

本发明的检验系统适合于中国范围内种植的大麻。

本发明的实验证明，本发明有如下优点：

1、同时扩增大麻5个STR基因座，比单个基因座的扩增更加高效、快捷，为大麻STR基因座的进一步研究、大麻STR数据库的建立、案件中大麻的检验鉴定提供了有效的方法；

2、优化后的大麻5对引物扩增体系能实现平衡扩增、具有高灵敏度和稳定性，利于检验涉毒案件中经常遇到的腐败检材；

3、准确率高,采自不同产地的大麻样本，经检测和数据统计分析，能够得到各自在5个基因座上的分型。

附图说明

图1上图为未对大麻STR 5plex荧光复合体系进行优化前的扩增情况，下图为进行一系优化后的扩增效果。

图2大麻STR 5plex荧光扩增系统的灵敏度检测结果

图3大麻STR 5plex荧光扩增系统的组织同一性检测结果

图4大麻STR 5plex荧光扩增系统的种属特异性检测结果

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、STR复合扩增引物设计

1、设计原则

根据文献报道和遗传基因库，目前已发现了一些大麻STR基因座，但并不是所有的这些STR基因座都适用于大麻基因相关性分析、DNA分型及法庭科学毒品原植物检测等方面的研究。依据下列原则筛选合适的大麻STR基因座：

1)、基因座的重复序列简单，重复单位为二、三、四或五核苷酸的基因座；

基因座的扩增片段大小在90-400bp之间，为了防止基因座之间出现重叠，相同荧光组合的基因座之间至少应有9-10bp的间隔；

2)、基因座突变率低(一般不超过2.80×10³)、多态性好，保证检测结果的稳定性和可靠性；

3)、所选择的各个基因座的引物必须具有兼容性即引物不相互作用，特别是引物3’端不能出现互补序列；因为基因座的引物间的特殊序列发生相互作用如出现引物二聚体、发卡结构时会产生非特异性条带或额外带，使产物量下降，甚至是无扩增产物；

4)、各基因座引物长短适中，具有相似的物理特性和反应动力学特点、扩增效率高。复合扩增各个基因座之间的扩增效率的平衡是通过调节引物的浓度来达到一致的；所以尽量选择扩增效率高的基因座，在调节平衡的时候引物浓度的变动范围就比较宽松，从而为扩增效率相对较低的基因座引物的浓度调节提供空间。

5)、所选基因座必须具有高度的种属特异性。

2、STR复合扩增引物

根据上述基因座选择原则，对文献资料中报道的大麻STR基因座的遗传学数据进行研究分析，初步筛选出5个大麻核心基因座：P17、P14、P19、P24、P25。

五个STR基因座为研究对象，参考文献获得5对大麻STR基因座的引物序列，通过多引物配对软件AutoDimer version1.0对获得的5对引物进行发卡结构及二聚体的配对分析，设置Minimum SCORE(指两个引物间互补配对的碱基对数减去错配的碱基对数所得到的值)为7，结果表明引物间无稳定的二聚体或者发卡结构，扩增效率高，灵敏度强，引物序列如表1所示。

表1 为STR复合扩增引物序列

上述P17、P19、P24的上游引物FAM荧光标记，P14、P25的上游引物HEX荧光标记。引物序列由上海英潍捷基公司合成，带修饰的引物序列一律采用HPLC纯化方式进行纯化，未经修饰的引物序列采用PAGE方式纯化。

实施例2、STR复合扩增引物在鉴定大麻中的应用

1、基因组DNA的提取

分别提取大麻花、茎和叶的基因组DNA。

2、STR复合扩增体系优化

以编号为1的大麻的花的基因组DNA为模板，将P14、P17、P19、P24及P25引物对混合进行PCR扩增，并对扩增体系和反应条件进行优化，具体如下：

优化前扩增体系如表2所示：

表2 优化前扩增体系

优化前STR复合扩增反应条件如下：

初始变性条件：92-96℃，5-11分钟；

变性条件：91-97℃，30秒钟-2分钟；

退火条件：53-62℃，30秒钟-2分钟；

延伸条件：65-75℃，30秒钟-1分钟；

循环参数：25-30个循环；

终延伸：65-72℃，25-60分钟；

保温：4℃维持；

优化后扩增体系如表3所示。

表3 为优化后扩增体系

优化后反应条件为：

初始变性条件：95℃，5分钟；

变性条件：94℃，30秒钟；

退火条件：55.5℃，30秒钟；

延伸条件：72℃，30秒钟；

循环条件：28～30次

终延伸条件：72℃，30分钟；

保温：4℃维持。

优化前后复合扩增体系结果见图1所示，A图为优化前，B图为优化后，可以看出，优化前复合扩增体系扩增不平衡，出现大片段基因座的丢失并有较多的非特异性峰和杂带，优化后的复合体系得到了五个基因座的完整等位基因片段，扩增图谱清晰明确，具有良好的平衡性与稳定性。P17基因座得到109bp和112bp的等位基因片段，P19基因座得到243bp的等位基因片段，P25基因座得到270bp的等位基因片段，P24基因座得到111bp的等位基因片段，P14基因座得到168bp和174bp的等位基因片段。

P14、P17、P19、P24及P25扩增产物为大麻特异基因座片段，可用这5对引物对检测待测样本是否为大麻或者是否含有大麻，具体方法如下：

用5个引物对组成的复合扩增体系共同对待测样本进行STR复合扩增，检测扩增产物，若扩增产物满足如下1)-5)全部标准，则待测样本候选为大麻或者候选含有大麻；若扩增产物不满足如下1)-5)全部标准，则待测样本候选不为大麻或者候选不含有大麻；

所述标准为：

1)含有显FAM基团颜色且大小为97-112bp的等位基因片段；

2)含有显FAM基团颜色且大小为231-249bp的等位基因片段；

3)含有显FAM基团颜色且大小为266-273bp的等位基因片段；

4)含有显HEX基团颜色且大小为163-177bp的等位基因片段；

5)含有显HEX基团颜色且大小为102-117bp的等位基因片段。

因此选用优化后反应体系和优化后反应条件为最佳反应体系和条件，进行后期实验。

3、灵敏度检测

将编号为1的大麻花的基因组DNA依次稀释为5ng/μL、4ng/μL、3ng/μL、2ng/μL、1ng/μL、0.5ng/μL、0.25ng/μL、0.1ng/μL，用5对大麻STR复合扩增引物按照最佳反应体系和最佳反应条件分别进行PCR扩增。

结果如图2所示，满足上述2中所述的标准，该体系的最小检出量为0.1ng/μL，说明其灵敏度为0.1ng/μL。

用0.05ng/μL作为模板，进行反复试验，结果无法得到可辨认的STR荧光图谱。

4、同一性检测

将编号为1的大麻样本花、茎和叶的基因组DNA 5ng/μL，用5对大麻STR复合扩增引物按照最佳反应体系和最佳反应条件分别进行PCR扩增。

结果如图3所示，可以看出，该体系具有良好地组织同一性。

5、种属特异性

选择基因座时很重要的一方面就是要考虑该基因座是否有良好的种属特异性，对本复合扩增体系来说就是检验建立的大麻5个基因荧光复合扩增检测体系能否区分大麻与其他植物检材，达到对大麻准确鉴别鉴定的目的。

在植物学分类中，大麻属被子植物门木兰纲金缕梅亚纲荨麻目大麻科大麻属，其与罂粟、烟草、苜蓿、桑属于同一纲，而且与桑属于同一亚纲、同一目，罂粟也是毒品植物，与虞美人从形态上很难鉴别。这说明它们有比较近的亲缘关系,因此在引物的筛选上就要考虑是否能够区分这些亲缘标本；而且在某些毒品案件中，烟草经常被掺杂在大麻毒品中，或者用烟草做掩护来掩盖大麻。此外，玉米、小麦、水稻等常见的经济作物也可能被用来贩毒，也需要鉴别。

将大麻、小麦、桑、烟草、虞美人、罂粟的叶片分别提取基因组DNA，用上述最佳反应体系和反应条件进行PCR扩增。

结果如图4所示，大麻的扩增产物含有显FAM基团颜色且大小为103/108bp的等位基因片段；含有显FAM基团颜色且大小为237bp的等位基因片段；含有显FAM基团颜色且大小为269/272bp的等位基因片段；含有显HEX基团颜色且大小为110bp的等位基因片段；含有显HEX基团颜色且大小为164/170bp的等位基因片段。满足上述5种全部标准。

而小麦、桑、烟草、虞美人、罂粟均不满足上述5种全部标准，在这些非大麻植物中对应基因片段没有出现属于大麻的特异基因片段。

上述结果表明，说明本发明的引物及方法可以特异检测大麻。

Claims (9)

1.一种用于鉴定大麻的引物组，由引物对P17、P19、P25、P14和P24共5个引物对组成：

所述引物对P17由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P19由序列表中序列3所示的单链DNA分子和序列表中序列4所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P25由序列表中序列5所示的单链DNA分子和序列表中序列6所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P14由序列表中序列7所示的单链DNA分子和序列表中序列8所示的单链DNA分子组成；

所述引物对P24由序列表中序列9所示的单链DNA分子和序列表中序列10所示的单链DNA分子组成。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：

所述引物对P17、P19和P25中每对引物对中的一条引物均标记FAM；

所述引物对P14和P24中每对引物对中的一条引物均标记HEX。

3.一种用于鉴定大麻的PCR试剂，包括含有权利要求1或2中的所述引物组的PCR试剂。

4.根据权利要求3所述的PCR试剂，其特征在于：

所述引物对P14、P17中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.3μM；

所述引物对P16、P24中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.15μM；

所述引物对P25中的各条引物在所述PCR试剂中的终浓度均为0.35μM。

5.含有权利要求1或2所述引物或含有权利要求3或4所述PCR试剂的试剂盒。

6.权利要求1或2所述引物、权利要求3或4所述PCR试剂或权利要求5所述的试剂盒在鉴定大麻中的应用；

或权利要求1或2所述引物、权利要求3或4所述PCR试剂在制备鉴定大麻产品中的应用。

7.权利要求1或2所述引物、权利要求3或4所述PCR试剂或权利要求5所述的试剂盒在鉴定待测样本是否含有大麻中的应用；

或权利要求1或2所述引物、权利要求3或4所述PCR试剂在制备鉴定待测样本是否含有大麻产品中的应用。

8.一种辅助待测样本是否为大麻或是否含有大麻的方法，包括如下步骤：

用权利要求1或2中的所述5个引物对共同对待测样本基因组DNA进行STR复合扩增，得到扩增产物；检测所述扩增产物，

若扩增产物满足如下1)-5)全部标准，则待测样本候选为大麻或者候选含有大麻；若扩增产物不满足如下1)-5)全部标准，则待测样本候选不为大麻或者候选不含有大麻；

所述标准为：

1)含有显FAM基团颜色且大小为97-112bp的等位基因片段；

2)含有显FAM基团颜色且大小为231-249bp的等位基因片段；

3)含有显FAM基团颜色且大小为266-273bp的等位基因片段；

4)含有显HEX基团颜色且大小为163-177bp的等位基因片段；

5)含有显HEX基团颜色且大小为102-117bp的等位基因片段。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

所述STR复合扩增反应退火温度为55.5℃；

所述待测样本为样本的基因组DNA。