CN104350838A - 金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法 - Google Patents
金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104350838A CN104350838A CN201410582811.7A CN201410582811A CN104350838A CN 104350838 A CN104350838 A CN 104350838A CN 201410582811 A CN201410582811 A CN 201410582811A CN 104350838 A CN104350838 A CN 104350838A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- terminal bud
- symbiosis
- fagaceae
- roxburgh anoectochilus
- anoectochilus terminal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 241000934230 Anoectochilus roxburghii Species 0.000 title claims abstract description 21
- 230000035784 germination Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 16
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 claims abstract description 27
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 241000719837 Anoectochilus Species 0.000 claims description 73
- 241000219428 Fagaceae Species 0.000 claims description 24
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 15
- 241001361634 Rhizoctonia Species 0.000 claims description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002023 wood Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 claims description 5
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 3
- 235000021552 granulated sugar Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 11
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 11
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 2
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 abstract 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 abstract 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract 1
- 241000233855 Orchidaceae Species 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000684075 Rhizoctonia sp. Species 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 241000719836 Anoectochilus formosanus Species 0.000 description 1
- 241001313862 Arethusa Species 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 244000089742 Citrus aurantifolia Species 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000732800 Cymbidium Species 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 239000000306 component Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007773 growth pattern Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
本发明涉及一种金线莲种子与丝核菌共生萌发快速成苗的方法，由金线莲种子与共生真菌共生萌发成原球茎，由共生真菌持续为原球茎提供营养，原球茎成长分化为金线莲幼苗的快速育苗模式。本发明方法简便、成本低廉，整个培育过程仅需一种育苗培养基、仅需一次转移金线莲的原球茎即可成苗，从金线莲种子与真菌共生到培育成金线莲幼苗仅需70—90天的培育期，培育金线莲幼苗的周期比传统的金线莲种子无菌播种育苗周期缩短30—60天以上；所培育出的金线莲幼苗抗病力强，移栽成活率达95%以上，培育过程当中不使用任何化学合成物质，非常容易转化成为大规模工厂化培育金线莲幼苗的模式。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体来说是金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法。
背景技术
金线莲为地生兰，种子细微，比毛发还细小，不具胚乳，无发芽能力，只有在真菌共生下，才促进种子萌发生长,但其发芽率很低。而金线莲对生态环境要求也极为严苛，多生长在常绿阔叶林的沟边，小溪边的土质松散，阴凉潮湿地带，所以野生金线莲的成苗率就更低，或为万分之一。由于金线莲的自然繁殖率极低，生态环境的严重破坏，以及人为的盲目采挖，野生金线莲已经日趋枯竭，濒临灭绝。近年来，国内外研究人员纷纷加强对金线莲的药用价值开发力度，金线莲中许多具备药理活性成分的化合物不断地被发现与验证，金线莲的药用价值和保健功能为越来越多的人们所认知，市场需求越来越大。
现有兰科植物的繁育模式—组培工厂(金线莲茎段为外植体无菌组培和金线莲种子无菌播种)繁育金线莲，虽然可以繁育大量的金线莲组培苗，但存在着许多不足：首先，育苗工艺繁琐，需要配制3或4种培养基质，原球茎需要转接3次或4次。其次，育苗的生产成本较高，需要无菌的工作环境；育苗周期较长，至少需要110-120天的培育时间，甚至更长的培育周期。
金线莲组培苗从无菌的环境移栽到自然的生长环境，导致生长缓慢、植株抗病力低、有效药用成分达不到要求，对金线莲的药用价值开发形成制约。
在自然界中，整个兰科植物的生活史都与共生真菌紧密联系着，共生真菌促进兰科植物种子萌发，为萌发的原球茎提供营养物质，促进其转化成幼苗成长。
研究金线莲种子与共生真菌共生萌发快速成苗的方法，是完全模拟兰科植物在自然界中的自然生长规律，发现金线莲种子与共生真菌背后的共生规律，实现从金线莲种子与真菌共生萌发的有性繁育和快速成苗，这一种繁育模式具有成苗周期短，仅需70—90天；成苗抗病力和抗逆性强；金线莲成苗的有效药用成分接近野生金线莲。这一由金线莲种子和真菌共生萌发快速繁育金线莲幼苗的生产模式，可为其它珍稀兰科植物品种的保育开辟一个全新的高效繁育模式。
目前，国内外能够把真菌的共生技术运用在兰科植物的有性繁育和人工规模化栽培品种是天麻，由上世纪80年代徐锦堂研发而成。此后，国内外的许多兰科真菌研究专家学者对其它兰科植物的共生真菌、真菌与兰科植物种子共生机理作了深入全面的理论研究和实践运用，但是还没有能够实现从兰科植物种子和真菌共生萌发、萌发的原球茎继续成长发育成幼苗规模化栽培这一关键阶段技术的突破。
发明内容
本发明的目的是提供一种金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法，是全国首创的培育仿野生金线莲与真菌共生成苗的快速生长模式。
实现本发明目的的技术方案是：
金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法，包括如下步骤，
（1）金线莲共生萌发真菌的分离、纯化：
选取野生金线莲健壮幼苗根状茎的顶端突起部位、或是根状茎的节上突起部位；将这一部位用70%酒精表面消毒3-5s，置于清水琼脂培养基中培养、分离、纯化；
（2）制备金线莲共生萌发真菌的液体菌种：
将分离纯化后的金线莲有效共生萌发真菌—丝核菌（Rhizoctonia sp.），保藏号为CGMCC No.9728，从低温保藏的斜面试管活化后，制备成液体共生菌种备用；
液体菌种的配制比例为：20%马铃薯提取液∶1—5%山毛榉科树叶提取液∶0.5—1.5%白砂糖；
所述山毛榉科树叶提取液的制备采用现有技术，具体是将山毛榉科树叶与水按1：5的比例混合，煮沸半小时，滤出原液制成；
（3）制备金线莲共生萌发丝核菌的固体培养基：
培养基由山毛榉科树叶、山毛榉科木屑、麦麸或米糠按照比例混合，再经过高温杀菌，然后将丝核菌的液体菌种接种到培养基上，在温度为25℃—27℃的环境下培养，待共生真菌长满整个培养基，等待播种；
所述培养基原料配制的比例为：山毛榉科树叶30-45%∶山毛榉科木屑30-45%∶米糠或麦麸10-40%，培养基的含水量为60—62%；
（4）金线莲种子的播种与暗培养：
将成熟的金线莲种子撒播在长满共生真菌的培养基上，在温度为25—27℃的环境下，暗培养45—60天，金线莲种子与共生真菌共生萌发成长为粗壮的原球茎，原球茎长度达可达1.5-3cm；
（5）金线莲原球茎的转移与光培养：
将粗壮的金线莲原球茎转移至山毛榉科树叶：山毛榉科木屑体积比为1：1～1：3的混合基质中，在光照强度为1000-3000Lux，光照时间为10-12h/d，温度为25℃-27℃的条件下，光培养20—30天，即可成长为具有原生态的仿野生金线莲幼苗，金线莲幼苗高度可达5cm以上。
本发明提供的菌种丝核菌（Rhizoctonia sp.），已于2014年9月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏号为CGMCC No.9728。
所述步骤（2）液体菌种制备的周期为：5-7天，在温度为25℃—27℃条件下培养。
本发明将获得的真菌接种在消毒后的山毛榉科树叶上，将成熟的金线莲种子撒播在带菌的树叶上进行共生萌发培养，以检验所得的真菌对金线莲种子共生萌发的有效性，以金线莲种子的萌发率和金线莲原球茎的生长速度作为两个主要筛选标准，筛选出最有效的金线莲共生萌发菌，并对此共生真菌进行分子鉴定和保存。此方法分离金线莲种子有效萌发共生真菌的分离效率在60%—80%以上。目前筛选出最有效的金线莲共生萌发真菌，种子萌发率在15-20%之间。这一分离方法相对于传统的利用金线莲根部分离有效共生萌发真菌的方法更简单、快速；分离效率高10倍以上。
本发明金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法，工艺流程简单，成本低，育苗周期比传统的种子无菌播种和组培方法时间缩短一半甚至一倍以上；而且育苗全程不添加任何人工合成化学物质；金线莲从种子与所分离筛选的共生萌发真菌结合共生萌发成原球茎，共生真菌持续为原球茎提供营养，成长分化成金线莲幼苗，育苗全程仅需一种固体培养基和经一次转移，培育周期仅在70—90天；金线莲幼苗已经携带共生真菌，与无菌的金线莲组培苗相比更具抗病力和抗逆性；所培育的金线莲幼苗的有效药用成分更接近野生金线莲的有效药用成分。这一育苗方法的发明，可为其它珍稀兰科植物的繁育及濒危珍稀兰花品种的保育产生一定的借鉴意义。
附图说明
图1为金线莲种子；
图2为金线莲根状茎的突起部位；
图3为实施例金线莲原球茎与丝核菌共生萌发36天的照片；
图4为实施例金线莲原球茎与丝核菌共生萌发60天的照片；
图5为实施例金线莲原球茎与丝核菌共生萌发70天的照片；
图6为实施例金线莲共生幼苗与丝核菌共生萌发85天的照片；
图7为实施例金线莲共生幼苗与丝核菌共生萌发93天的照片。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例
金线莲种子与共生真菌共生萌发快速成苗的方法，包括以下步骤：
（1）金线莲共生萌发真菌的分离、纯化：
选取野生金线莲健壮幼苗根状茎的顶端突起部位（如图2所示），将这一部位用70%酒精表面消毒3-5s，置于清水琼脂培养基中培养、分离、纯化；
已经筛选好的金线莲共生萌发真菌—丝核菌（Rhizoctonia sp.），已于2014年9月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC）保藏号为CGMCC No.9728。
（2）液体菌种的制备：将丝核菌CGMCC No.9728的菌株自低温保藏斜面试管活化后，制备成液体共生菌种备用；液体菌种的配制比例为：20%马铃薯提取液、2%山毛榉科树叶提取液、1%白砂糖，在室温为25℃-27℃的条件下培养5-7天备用。
（3）制备金线莲共生萌发丝核菌的固体培养基：培养基成分包括：山毛榉科树叶、山毛榉科木屑、米糠，按照其重量比例为：40∶40∶20的比例混合配制而成，培养基的含水量为60%，经120℃高温灭菌,灭菌时间为1h，将步骤（2）菌株的液体菌种接种到固体培养基上，培养10-14天，待大部分或是全部固体培养基长满共生真菌时备用。
（4）金线莲种子的播种与暗培养：将成熟的金线莲种子（如图1所示）撒播在步骤（3）固体培养基上，金线莲种子与共生真菌共生萌发成原球茎，在室温25-27℃的条件下，经过45—60天的暗培养，发育成长度达1.5-3cm金线莲原球茎，如图3-4所示。
（5）金线莲原球茎的转移与光培养：将粗壮的金线莲原球茎转移到山毛榉科树叶：山毛榉科木屑体积比为1：1的混合基质，在室温25℃-27℃的条件下，光照强度在2000Lux,每天光照12h, 光培养约20-30天，原球茎分化成为具有原生态的仿野生金线莲幼苗,幼苗高度可达5cm以上，如图5-7所示。
下面列表显示本实施例共生菌株对金线莲种子萌发率及株高的影响
| 菌 株 | 种子成熟度 | 36天萌发率 | 90天株高cm |
| 丝核菌CGMCCNo.9728 | 100% | 15-20% | 5.1 |
Claims (1)
1.金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法，其特征在于包括以下步骤:
（1）金线莲共生萌发真菌的分离、纯化：
选取野生金线莲健壮幼苗根状茎的顶端突起部位、或是根状茎的节上突起部位；将这一部位用70%酒精表面消毒3-5s，置于清水琼脂培养基中培养、分离、纯化；
（2）制备金线莲共生萌发真菌的液体菌种：
将分离纯化后的金线莲有效共生萌发真菌—丝核菌，保藏号为CGMCC No.9728，从低温保藏的斜面试管活化后，制备成液体共生菌种备用；
液体菌种的配制比例为：20%马铃薯提取液∶1—5%山毛榉科树叶提取液∶0.5—1.5%白砂糖；
山毛榉科树叶提取液的制备：将山毛榉科树叶与水按1：5的比例混合，煮沸半小时，滤出原液制成；
（3）制备金线莲共生萌发丝核菌的固体培养基：
培养基由山毛榉科树叶、山毛榉科木屑、麦麸或米糠按照比例混合，再经过高温杀菌，然后将丝核菌的液体菌种接种到培养基上，在温度为25℃—27℃的环境下培养，待共生真菌长满整个培养基，等待播种；
所述培养基原料配制的比例为：山毛榉科树叶30-45%∶山毛榉科木屑30-45%∶米糠或麦麸10-40%，培养基的含水量为60—62%；
（4）金线莲种子的播种与暗培养：
将成熟的金线莲种子撒播在长满共生真菌的培养基上，在温度为25—27℃的环境下，暗培养45—60天，金线莲种子与共生真菌共生萌发成长为粗壮的原球茎；
（5）金线莲原球茎的转移与光培养：
将粗壮的金线莲原球茎转移至山毛榉科树叶：山毛榉科木屑体积比为1：1～1：3的混合基质中，在光照强度为1000-3000Lux，光照时间为10-12h/d，温度为25℃-27℃的条件下，光培养20—30天，成长为具有原生态的仿野生金线莲幼苗。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410582811.7A CN104350838B (zh) | 2014-10-28 | 2014-10-28 | 金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410582811.7A CN104350838B (zh) | 2014-10-28 | 2014-10-28 | 金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104350838A true CN104350838A (zh) | 2015-02-18 |
| CN104350838B CN104350838B (zh) | 2016-04-20 |
Family
ID=52518236
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410582811.7A Expired - Fee Related CN104350838B (zh) | 2014-10-28 | 2014-10-28 | 金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104350838B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106856713A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-06-20 | 南昌大学 | 一种促进金线莲种子萌发成苗的方法 |
| CN113025496A (zh) * | 2019-12-24 | 2021-06-25 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 一株诱导金线莲种子萌发成苗的真菌 |
| CN116076344A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-05-09 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种利用丝核菌促进金线莲原球茎分化与菌根化繁育及栽培的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1433670A (zh) * | 2002-01-25 | 2003-08-06 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 菌根真菌在金线莲栽培中的应用技术 |
| CN101233808A (zh) * | 2008-03-07 | 2008-08-06 | 浙江省中药研究所有限公司 | 一种药用金线莲割茎留根再生种植方法 |
| CN101855994A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-10-13 | 东莞市生物技术研究所 | 一种金线莲共生苗的生产方法 |
-
2014
- 2014-10-28 CN CN201410582811.7A patent/CN104350838B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1433670A (zh) * | 2002-01-25 | 2003-08-06 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 菌根真菌在金线莲栽培中的应用技术 |
| CN101233808A (zh) * | 2008-03-07 | 2008-08-06 | 浙江省中药研究所有限公司 | 一种药用金线莲割茎留根再生种植方法 |
| CN101855994A (zh) * | 2009-11-04 | 2010-10-13 | 东莞市生物技术研究所 | 一种金线莲共生苗的生产方法 |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106856713A (zh) * | 2017-02-27 | 2017-06-20 | 南昌大学 | 一种促进金线莲种子萌发成苗的方法 |
| CN113025496A (zh) * | 2019-12-24 | 2021-06-25 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 一株诱导金线莲种子萌发成苗的真菌 |
| CN113025496B (zh) * | 2019-12-24 | 2022-03-15 | 中国医学科学院药用植物研究所 | 一株诱导金线莲种子萌发成苗的真菌 |
| CN116076344A (zh) * | 2022-10-18 | 2023-05-09 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种利用丝核菌促进金线莲原球茎分化与菌根化繁育及栽培的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104350838B (zh) | 2016-04-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103190292B (zh) | 粗腿羊肚菌的林下栽培方法 | |
| CN101524035B (zh) | 暗褐网柄牛肝菌人工栽培方法 | |
| CN105325244B (zh) | 一种联合应用amf与pgpr菌剂进行柑橘容器菌根苗栽培的方法 | |
| CN103392460B (zh) | 一种野生山豆根的扦插扩繁方法 | |
| KR101401096B1 (ko) | 유성생식을 통한 자마 증식방법 | |
| CN103461143B (zh) | 一种油茶组织培养快速繁殖方法 | |
| KR20140057917A (ko) | 백합 구근의 재배방법 | |
| CN103283481B (zh) | 一种鸡油菌对马尾松幼苗的浸染方法 | |
| CN104620854B (zh) | 准野生紫灵芝栽培工艺 | |
| CN104429553A (zh) | 一种蓝莓容器扦插育苗的生产方法 | |
| CN104350838B (zh) | 金线莲种子与真菌共生萌发快速成苗的方法 | |
| CN103798013B (zh) | 一种铁皮石斛种子实生苗的培育方法 | |
| CN101194563A (zh) | 利用野生茄子嫁接防止茄子黄萎病的方法 | |
| CN105706872B (zh) | 白芨种子直播自然繁殖育苗方法 | |
| CN103202227A (zh) | 中药材金线莲种苗选育及快繁培育方法 | |
| CN103371045A (zh) | 一种兰州百合的繁殖方法 | |
| CN106718496A (zh) | 一种低产老品种油茶林山地改造提高产量的方法 | |
| CN105706733A (zh) | 一种槐栓菌的代料栽培方法 | |
| CN104813931A (zh) | 一种铁皮石斛组培快繁的方法 | |
| CN103299902B (zh) | 一种用于组织培养楝树幼苗的方法 | |
| CN107216186A (zh) | 具有抗病促生作用功能生物有机肥的生产方法及施用方法 | |
| CN109874667A (zh) | 一种香叶天竺葵多倍体的培育方法 | |
| CN103621400A (zh) | 一种香椿芽菜无土栽培方法 | |
| CN103125388B (zh) | 米老排的组织培养方法 | |
| CN101990825B (zh) | 菌根工业品的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160420 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |