CN104303997A - 一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法 - Google Patents
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104303997A CN104303997A CN201410420844.1A CN201410420844A CN104303997A CN 104303997 A CN104303997 A CN 104303997A CN 201410420844 A CN201410420844 A CN 201410420844A CN 104303997 A CN104303997 A CN 104303997A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- induction
- lily
- seedling
- callus
- embryo callus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Abstract
本发明公开了一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：该百合脱毒方法的步骤如下：1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织；2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理；3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织；4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁；5）对步骤4）中的组培苗进行病毒检测，检测合格即为百合脱毒种苗。本发明的百合脱毒方法通过两次胚性愈伤诱导解决了所需脱毒材料多、脱毒苗抗性差及脱毒不彻底的问题，能有效克服百合种植次数较多造成的种性退化问题，具有脱毒效率高、方法操作简单、生产设备要求低的特点，能够满足规模化生产的需要。
Description
技术领域
本发明涉及种植前测试或处理种子的技术领域，尤其涉及一种百合种苗脱毒的方法；具体地说是一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法。
背景技术
随着世界百合生产和种球贸易的扩大，百合的病虫害得到迅速传播，严重影响了百合的产量和质量，其中，病毒病是近来发生较严重的世界性主要病害之一。随着我国百合进口、引种数量和种植面积的迅速增加，以及不规范的种植和种球自繁,病毒病开始在我国各百合种植区发生流行,一般发病率在40%-50%，二代种球的带毒率在90%以上。不仅严重地影响了百合的产量和质量，甚至成为加速我国百合栽培的种群衰退的重要因素。
目前关于百合脱毒技术的研究主要集中在剥茎尖、热处理和化学处理等技术的综合应用，这些方法虽然能有效脱除百合病毒，但存在所需脱毒材料较多、污染率高、技术难度操作较大、脱毒种源种性退化严重而造成脱毒苗抗性差等问题，难以满足规模化生产的要求。例如，专利号为CN201110405600.2的中国专利“百合种球脱毒方法”，它将百合鳞茎经过35-40℃高温预处理，然后经过高低温（38/25℃）处理、接着经过消毒剥取茎尖（大小0.8-1.2mm）接种于含有病毒唑浓度为（5-6mg/L）的培养基获得无毒百合鳞茎。该脱毒方法存在的问题是：脱毒材料需求量大，茎尖消毒易污染、剥离茎尖易褐化，形成的脱毒鳞茎种性退化严重，抗性较差，虽然能够脱除一部分病毒，但在扩繁及栽培过程中植株长势差，易二次感染病毒，难以应用于实际生产。此外，专利号为CN201210050972.2的中国专利“东方百合种球脱毒方法”，虽然也经历了热处理、剥取茎尖、化学脱毒等方法，但却没有经过愈伤脱毒以及组培苗剥茎尖，易造成种性严重退化，而且该方法中茎尖剥离不易操作，故难以形成规模化生产的脱毒种苗。
发明内容
本发明的目的是针对现有百合脱毒技术存在的不足，提供一种可持续化、易操作且能够规模化生产的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，该方法能有效提高种苗抗性，具有茎尖剥取容易、脱毒率高、可大量扩繁等优势。
本发明的目的是通过以下技术方案解决的：
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：该百合脱毒方法的步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁；
5）对步骤4）中的组培苗进行病毒检测，检测合格即为百合脱毒种苗。
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，该百合脱毒方法的详细步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织：
选取完好且无病斑的百合鳞片，用清水冲洗干净后，接着用中性肥皂水浸泡15-20min，再用流水冲洗0.5-2小时；用75%的酒精浸泡30-40s后放入0.1%-0.2%的升汞中10-15分钟，再用无菌水冲洗4-6次，然后把鳞片切成0.5-1.0cm2的方块放入诱导胚性愈伤的培养基内进行暗培养，20-35天后转接1次，再继续培养20-35天后形成胚性愈伤组织；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理：
把诱导成功的胚性愈伤组织从外部转接到诱导不定芽培养基上，光照条件下培养25-35天至小芽长至0.5cm以上，然后把诱导成芽的组培瓶移到光照培养箱内暗培养15-20天，光照培养箱内的温度控制在25℃-38℃进行变温热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织：
把上述经过热处理的百合小苗，剥取0.5-0.8cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，在25-30℃条件下暗培养2-3个月，使其诱导出胚性愈伤组织，在培养期间每隔一定时间转接一次；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁：
把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上，暗培养1-2个月后继代扩繁一次，3-4个月后即可得到直径0.3-1.5cm的百合小鳞茎；
5）随机抽取步骤4）中的百合小鳞茎，进行病毒检测：
对步骤4）中完成脱毒处理的百合小鳞茎随机抽取10%-20%，进行RT-PCR反转录病毒检测，经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种苗。
步骤1）中用于诱导百合鳞片产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8。
步骤2）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA。
步骤2）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基的光照条件为：光照强度为1300-2000Lx，每天的光/暗周期设定为光周期时间大于暗周期时间。
步骤2）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基的光照条件为：光照强度为1500Lx，光/暗时间周期为14-16h/10-8h。
步骤2）中的热处理时的温度控制在33℃-38℃高温处理8h-12h、然后25℃-28℃低温处理16h-12h交替进行。
步骤3）中用于诱导茎尖产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2.5mg/L Picloram +0.5mg/L NAA+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8。
步骤3）中的转接间隔时间为15-20天。
步骤4）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA。
本发明所述的一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，是发明人经过仔细研究、大量实验验证后获得的优选结果，相比现有技术，本发明的创新点为：
本发明通过采用综合脱毒技术，即两次愈伤组织诱导、热处理、茎尖脱毒相结合的方法，有效的克服了脱毒材料较多、剥茎尖外植体易污染、种性退化等生产过程中的瓶颈，有效的获得抗性较强的无毒组培苗。
本发明采用鳞片胚性愈伤诱导可有效的去除鳞片所携带的部分病毒；采用胚性愈伤诱导成组培苗，既避免了百合剥离茎尖过程中的消毒过程，又减少了百合剥离茎尖的材料；另外采用变温热处理技术可以较好地脱除部分病毒，且热处理后剥取0.5-0.8cm的茎尖生长点进行培养，此操作简单，污染率地，脱毒效果较好。
本发明的百合脱毒方法采用茎尖诱导成胚性愈伤，即提高了百合的种性，又进一步脱除了百合病毒，该方法流程简单、容易操作，故易于形成规模化生产的脱毒种苗，适宜推广使用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，该百合脱毒方法的详细步骤如下：1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织：选取完好且无病斑的百合鳞片，用清水冲洗干净后，接着用中性肥皂水浸泡15-20min，再用流水冲洗0.5-2小时；用75%的酒精浸泡30-40s后放入0.1%-0.2%的升汞中10-15分钟，再用无菌水冲洗4-6次，然后把鳞片切成0.5-1.0cm2的方块放入诱导胚性愈伤的培养基内进行暗培养，20-35天后转接1次，再继续培养20-35天后形成胚性愈伤组织，用于诱导百合鳞片产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8；2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理：把诱导成功的胚性愈伤组织从外部转接到诱导不定芽培养基上，该胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，光照强度为1300-2000Lx的光照条件下培养25-35天至小芽长至0.5cm以上，每天的光/暗周期设定为光周期时间大于暗周期时间，优选方案为光照强度1500Lx，光/暗时间周期为14-16h/10-8h，然后把诱导成芽的组培瓶移到光照培养箱内暗培养15-20天，光照培养箱内的温度控制在25℃-38℃进行变温热处理，具体来说，热处理时的温度控制在33℃-38℃高温处理8h-12h、然后25℃-28℃低温处理16h-12h交替进行；3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织：把上述经过热处理的百合小苗，剥取0.5-0.8cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，用于诱导茎尖产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2.5mg/L Picloram +0.5mg/L NAA+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8，在25-30℃条件下暗培养2-3个月，使其诱导出胚性愈伤组织，在培养期间每隔一定时间转接一次，转接间隔时间优选为15-20天；4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁：把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上，将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，暗培养1-2个月后继代扩繁一次，3-4个月后即可得到直径0.3-2cm的百合小鳞茎；5）随机抽取步骤4）中的百合小鳞茎，进行病毒检测：对步骤4）中完成脱毒处理的百合小鳞茎随机抽取10%-20%，进行RT-PCR反转录病毒检测，经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种苗。胚性愈伤组织是一种能够产生胚状体的愈伤组织，它质地较坚实，颜色有乳白色或黄色，表面具有球形颗粒，分裂活性强，可分化形成新的植株。组培特异性诱导仅是为了说明本发明的百合脱毒方法中采用两次组培诱导胚性愈伤，而不包含其它含义。
本发明中采用的培养基中MS所含成分如下表所示。
实施例一
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，该百合脱毒方法的详细步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织：选取完好且无病斑的百合鳞片，用清水冲洗干净后，接着用中性肥皂水浸泡15min，再用流水冲洗1小时；用75%的酒精浸泡40s后放入0.2%的升汞中10分钟，再用无菌水冲洗5次，然后把鳞片切成0.5cm2的方块放入诱导胚性愈伤的培养基内进行暗培养，30天后转接1次，再继续培养30天后形成胚性愈伤组织，用于诱导百合鳞片产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理：把诱导成功的胚性愈伤组织从外部转接到诱导不定芽培养基上，该胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，光照强度为1500Lx、光/暗时间周期为15h/9h的光照条件下培养25天至小芽长至0.5cm以上，然后把诱导成芽的组培瓶移到光照培养箱内暗培养15天，光照培养箱内的热处理温度控制在35℃高温处理10h、然后28℃低温处理14h交替进行以进行变温热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织：把上述经过热处理的百合小苗，剥取0.5cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，用于诱导茎尖产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2.5mg/L Picloram +0.5mg/L NAA+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8，在30℃条件下暗培养2-3个月，使其诱导出胚性愈伤组织，在培养期间每隔15天转接一次；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁：把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上，将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，暗培养2个月后继代扩繁一次，4个月后即可得到直径0.3-1.5cm的百合小鳞茎；
5）随机抽取步骤4）中的百合小鳞茎，进行病毒检测：对步骤4）中完成脱毒处理的百合小鳞茎随机抽取10%-20%，进行RT-PCR反转录病毒检测，经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种苗。
实施例二
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，该百合脱毒方法的详细步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织：选取完好且无病斑的百合鳞片，用清水冲洗干净后，接着用中性肥皂水浸泡20min，再用流水冲洗2小时；用75%的酒精浸泡30s后放入0.1%的升汞中15分钟，再用无菌水冲洗4次，然后把鳞片切成1.0cm2的方块放入诱导胚性愈伤的培养基内进行暗培养，25天后转接1次，再继续培养35天后形成胚性愈伤组织，用于诱导百合鳞片产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理：把诱导成功的胚性愈伤组织从外部转接到诱导不定芽培养基上，该胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，光照强度为1300Lx、光/暗时间周期为16h/8h的光照条件下培养30天至小芽长至0.5cm以上，然后把诱导成芽的组培瓶移到光照培养箱内暗培养20天，光照培养箱内的热处理温度控制38℃高温处理8h、然后25℃低温处理16h交替进行以进行变温热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织：把上述经过热处理的百合小苗，剥取0.8cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，用于诱导茎尖产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2.5mg/L Picloram +0.5mg/L NAA+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8，在25℃条件下暗培养2-3个月，使其诱导出胚性愈伤组织，在培养期间每隔20天转接一次；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁：把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上，将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，暗培养1.5个月后继代扩繁一次，3个月后即可得到直径0.3-1.5cm的百合小鳞茎；
5）随机抽取步骤4）中的百合小鳞茎，进行病毒检测：对步骤4）中完成脱毒处理的百合小鳞茎随机抽取10%-20%，进行RT-PCR反转录病毒检测，经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种苗。
实施例三
一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，该百合脱毒方法的详细步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织：选取完好且无病斑的百合鳞片，用清水冲洗干净后，接着用中性肥皂水浸泡18min，再用流水冲洗0.5小时；用75%的酒精浸泡35s后放入0.15%的升汞中13分钟，再用无菌水冲洗6次，然后把鳞片切成0.8cm2的方块放入诱导胚性愈伤的培养基内进行暗培养，35天后转接1次，再继续培养25天后形成胚性愈伤组织，用于诱导百合鳞片产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理：把诱导成功的胚性愈伤组织从外部转接到诱导不定芽培养基上，该胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，光照强度为2000Lx、光/暗时间周期为14h/10h的光照条件下培养35天至小芽长至0.5cm以上，然后把诱导成芽的组培瓶移到光照培养箱内暗培养18天，光照培养箱内的热处理温度控制在35℃高温处理10h、然后25℃低温处理14h交替进行以进行变温热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织：把上述经过热处理的百合小苗，剥取0.6cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，用于诱导茎尖产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2.5mg/L Picloram +0.5mg/L NAA+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8，在28℃条件下暗培养2-3个月，使其诱导出胚性愈伤组织，在培养期间每隔18天转接一次；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁：把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上，将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA，暗培养2个月后继代扩繁一次，4个月后即可得到直径0.3-1.5cm的百合小鳞茎；
5）随机抽取步骤4）中的百合小鳞茎，进行病毒检测：对步骤4）中完成脱毒处理的百合小鳞茎随机抽取10%-20%，进行RT-PCR反转录病毒检测，经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种苗。
本发明通过采用综合脱毒技术，即两次愈伤组织诱导、热处理、茎尖脱毒相结合的方法，有效的克服了脱毒材料较多、剥茎尖外植体易污染、种性退化等生产过程中的瓶颈，有效的获得抗性较强的无毒组培苗。本发明采用鳞片胚性愈伤诱导可有效的去除鳞片所携带的部分病毒；采用胚性愈伤诱导成组培苗，既避免了百合剥离茎尖过程中的消毒过程，又减少了百合剥离茎尖的材料；另外采用变温热处理技术可以较好地脱除部分病毒，且热处理后剥取0.5-0.8cm的茎尖生长点进行培养，此操作简单，污染率地，脱毒效果较好。本发明的百合脱毒方法采用茎尖诱导成胚性愈伤，即提高了百合的种性，又进一步脱除了百合病毒，该方法流程简单、容易操作，故易于形成规模化生产的脱毒种苗，适宜推广使用。
本发明未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：该百合脱毒方法的步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁；
5）对步骤4）中的组培苗进行病毒检测，检测合格即为百合脱毒种苗。
2.根据权利要求1所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：该百合脱毒方法的详细步骤如下：
1）将无病虫害的百合鳞片通过组培特异性诱导产生胚性愈伤组织：
选取完好且无病斑的百合鳞片，用清水冲洗干净后，接着用中性肥皂水浸泡15-20min，再用流水冲洗0.5-2小时；用75%的酒精浸泡30-40s后放入0.1%-0.2%的升汞中10-15分钟，再用无菌水冲洗4-6次，然后把鳞片切成0.5-1.0cm2的方块放入诱导胚性愈伤的培养基内进行暗培养，20-35天后转接1次，再继续培养20-35天后形成胚性愈伤组织；
2）将胚性愈伤组织诱导成苗并进行热处理：
把诱导成功的胚性愈伤组织从外部转接到诱导不定芽培养基上，光照条件下培养25-35天至小芽长至0.5cm以上，然后把诱导成芽的组培瓶移到光照培养箱内暗培养15-20天，光照培养箱内的温度控制在25℃-38℃进行变温热处理；
3）剥离茎尖并对其进行特异性诱导产生胚性愈伤组织：
把上述经过热处理的百合小苗，剥取0.5-0.8cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，在25-30℃条件下暗培养2-3个月，使其诱导出胚性愈伤组织，在培养期间每隔一定时间转接一次；
4）再次将胚性愈伤组织诱导成苗并扩繁：
把愈伤组织转接到诱导成芽的培养基上，暗培养1-2个月后继代扩繁一次，3-4个月后即可得到直径0.3-1.5cm的百合小鳞茎；
5）随机抽取步骤4）中的百合小鳞茎，进行病毒检测：
对步骤4）中完成脱毒处理的百合小鳞茎随机抽取10%-20%，进行RT-PCR反转录病毒检测，经检测确认不带百合无证病毒、黄瓜花叶病和百合斑驳病毒，即为百合脱毒种苗。
3.根据权利要求1或2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤1）中用于诱导百合鳞片产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8。
4.根据权利要求1或2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤2）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA。
5.根据权利要求1或2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤2）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基的光照条件为：光照强度为1300-2000Lx，每天的光/暗周期设定为光周期时间大于暗周期时间。
6.根据权利要求5所述的于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤2）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基的光照条件为：光照强度为1500Lx，光/暗时间周期为14-16h/10-8h。
7.根据权利要求1或2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤2）中的热处理时的温度控制在33℃-38℃高温处理8h-12h、然后25℃-28℃低温处理16h-12h交替进行。
8.根据权利要求1或2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤3）中用于诱导茎尖产生胚性愈伤组织的培养基为：MS+2.5mg/L Picloram +0.5mg/L NAA+6%蔗糖+6.5g/L琼脂，该培养基的pH=5.8。
9.根据权利要求2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤3）中的转接间隔时间为15-20天。
10.根据权利要求1或2所述的基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法，其特征在于：步骤4）中将胚性愈伤组织诱导成苗的培养基为：1/2MS+6%糖+0.7mg/L6-BA+0.2NAA。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410420844.1A CN104303997B (zh) | 2014-08-25 | 2014-08-25 | 一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410420844.1A CN104303997B (zh) | 2014-08-25 | 2014-08-25 | 一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104303997A true CN104303997A (zh) | 2015-01-28 |
| CN104303997B CN104303997B (zh) | 2017-02-01 |
Family
ID=52359438
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410420844.1A Active CN104303997B (zh) | 2014-08-25 | 2014-08-25 | 一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104303997B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105123525A (zh) * | 2015-09-10 | 2015-12-09 | 陈丁龙 | 一种百日草脱毒苗的获取方法 |
| CN105165609A (zh) * | 2015-09-10 | 2015-12-23 | 无锡南理工科技发展有限公司 | 一种高效获得非洲菊脱毒幼苗的方法 |
| CN106613967A (zh) * | 2016-12-01 | 2017-05-10 | 大连大学 | 一种植物组织培养脱毒的外植体及其脱毒方法 |
| CN108094200A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-06-01 | 新疆生产建设兵团第六师农业科学研究所 | 一种热处理结合茎尖剥离获得安祖花脱毒苗的培育方法 |
| CN109315291A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-02-12 | 连云港市农业科学院 | 一种规模化繁育无病毒百合籽球的方法 |
| CN111280059A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-16 | 南京农业大学 | 一种高效的百合脱毒方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101658135A (zh) * | 2009-09-02 | 2010-03-03 | 北京林业大学 | 一种百合种球病毒的脱除方法 |
| KR20110050871A (ko) * | 2009-11-09 | 2011-05-17 | 단국대학교 산학협력단 | 제초제 저항성 백합의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 제초제 저항성 백합 |
| CN102577965A (zh) * | 2012-03-01 | 2012-07-18 | 玉溪明珠花卉股份有限公司 | 东方百合种球脱毒方法 |
| CN103947554A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-30 | 重庆市城口县景之源苗木发展有限公司 | 百合通过体细胞胚胎发生途径脱毒的方法 |
-
2014
- 2014-08-25 CN CN201410420844.1A patent/CN104303997B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101658135A (zh) * | 2009-09-02 | 2010-03-03 | 北京林业大学 | 一种百合种球病毒的脱除方法 |
| KR20110050871A (ko) * | 2009-11-09 | 2011-05-17 | 단국대학교 산학협력단 | 제초제 저항성 백합의 제조방법 및 상기 방법에 의해 제조된 제초제 저항성 백합 |
| CN102577965A (zh) * | 2012-03-01 | 2012-07-18 | 玉溪明珠花卉股份有限公司 | 东方百合种球脱毒方法 |
| CN103947554A (zh) * | 2014-05-04 | 2014-07-30 | 重庆市城口县景之源苗木发展有限公司 | 百合通过体细胞胚胎发生途径脱毒的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MAGDALENA KEDRA ET.AL.,: "MORPHOGENESIS OF LILIUM MARTAGON L. EXPLANTS IN CALLUS CULTURE", 《ACTA BIOLOGICA CRACOVIENSIA SERIES BOTANICA》 * |
| 廖晴等: "东方百合OT系列试管鳞茎的诱导与植株再生体系的建立", 《新疆农业科学》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105123525A (zh) * | 2015-09-10 | 2015-12-09 | 陈丁龙 | 一种百日草脱毒苗的获取方法 |
| CN105165609A (zh) * | 2015-09-10 | 2015-12-23 | 无锡南理工科技发展有限公司 | 一种高效获得非洲菊脱毒幼苗的方法 |
| CN106613967A (zh) * | 2016-12-01 | 2017-05-10 | 大连大学 | 一种植物组织培养脱毒的外植体及其脱毒方法 |
| CN108094200A (zh) * | 2017-12-18 | 2018-06-01 | 新疆生产建设兵团第六师农业科学研究所 | 一种热处理结合茎尖剥离获得安祖花脱毒苗的培育方法 |
| CN109315291A (zh) * | 2018-11-26 | 2019-02-12 | 连云港市农业科学院 | 一种规模化繁育无病毒百合籽球的方法 |
| CN109315291B (zh) * | 2018-11-26 | 2021-07-20 | 连云港市农业科学院 | 一种规模化繁育无病毒百合籽球的方法 |
| CN111280059A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-16 | 南京农业大学 | 一种高效的百合脱毒方法 |
| WO2021189544A1 (zh) * | 2020-03-26 | 2021-09-30 | 南京农业大学 | 一种高效的百合脱毒方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104303997B (zh) | 2017-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104303997A (zh) | 一种基于胚性愈伤特异诱导的百合脱毒方法 | |
| CN105145359B (zh) | 一种羊齿天冬组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103947554B (zh) | 百合通过体细胞胚胎发生途径脱毒的方法 | |
| CN104663458A (zh) | 一种川百合组培快繁方法 | |
| CN104813939A (zh) | 一种荷花再生体系的构建方法 | |
| CN105191793A (zh) | 紫马铃薯组培苗的高效繁育方法 | |
| CN109105263A (zh) | 一种国兰根状茎组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105494098A (zh) | 一种快速繁殖金铁锁种苗的方法 | |
| CN102487829A (zh) | 一种粉用型荸荠综合脱毒快繁的方法 | |
| Ravi et al. | Apogamous sporophyte development through spore reproduction of a South Asia's critically endangered fern: Pteris tripartita Sw. | |
| CN104488715B (zh) | 一种通过花蕾进行宽叶弹簧草鳞茎诱导和植株再生的方法 | |
| CN108142281A (zh) | 一种杜仲组织培养方法 | |
| CN106613993A (zh) | 一种枳的组织培养再生苗的培养方法 | |
| CN101233825A (zh) | 食用百合脱毒快繁培养基 | |
| CN105594596A (zh) | 一种用于规模化生产的草莓脱毒快繁的组培方法 | |
| CN105409773A (zh) | 一种乌羽玉无菌播种及再生体系建立的方法 | |
| CN104255498A (zh) | 一种楤木的种苗快速繁殖的方法 | |
| Klaocheed et al. | Induction of direct shoot organogenesis from shoot tip explants of an ornamental aquatic plant, Cryptocoryne wendtii | |
| CN115281089A (zh) | 一种提高马铃薯病毒病脱除效率的方法 | |
| CN101233826B (zh) | 食用百合的脱毒快繁技术 | |
| CN109496859B (zh) | 一种多肉植物红蛋水泡的组织培养方法 | |
| CN106665347A (zh) | 一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法 | |
| Rittirat et al. | In vitro rapid multiplication of a highly valuable ornamental aquatic plant Anubias heterophylla | |
| CN102870674B (zh) | 一种红葱组培快速繁殖方法 | |
| CN115669545B (zh) | 一种光核桃愈伤组织的诱导方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20190916 Address after: 416800, Xiangxi, Hunan Tujia and Miao Autonomous Prefecture Longshan County, wash Luo Township washing Luo Street Patentee after: LONGSHAN COUNTY XILE LILY FOODS CO., LTD. Address before: 222006 Jiangsu Province, Lianyungang city Sinpo District Yingzhou Road No. 8 Patentee before: Lianyungang Academy of Agricultural Science |
|
| TR01 | Transfer of patent right |