CN104255474A - 一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法 - Google Patents

一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法 Download PDF

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CN104255474A CN201410463185.XA CN201410463185A CN104255474A CN 104255474 A CN104255474 A CN 104255474A CN 201410463185 A CN201410463185 A CN 201410463185A CN 104255474 A CN104255474 A CN 104255474A
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杨存
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Abstract

本发明研究了一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法,包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养等步骤,本发明方法所制备的乌饭树悬浮细胞生长分裂速度快,操作工艺简单可控,有助于获得大量的药用次生代谢产物,且生长周期短。

Description

一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法
技术领域
[0001] 本发明涉及乌饭树悬浮细胞培养的快繁方法,属于植物技术领域。
背景技术
[0002] 乌饭树,杜醇花科,Vaccinium Aracieaiws?,常绿灌木,又名南烛,西烛叶、乌米饭、苞越桔等,广布于长江以南各省区,福建、浙江、江苏、安徽、江西、湖南、湖北、广东,南至台湾、广东(海南岛);朝鲜,越南,日本,泰国也有,多生于山坡灌木丛或马尾松林内,向阳山坡路旁,多生长在酸性土壤中。喜光、耐旱、耐寒、耐瘠薄,适生范围较广,我国大部分地区均可种植。是不可多得的制作盆景、盆栽的优良素材。繁殖多以扦插和播种为主。果:酸、甘、平,无毒,强筋,益气,固精。枝叶:苦、平,无毒。根:主治跌打损伤肿痛,鲜根捣烂水煎外洗。散瘀,消肿,止痛,治牙痛,组培方法研究目前尚处于起步阶段,悬浮细胞培养还无人研究,悬浮细胞具有操作简单可控,生产成本低,繁殖率高等优点。
发明内容
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种乌饭树悬浮细胞的快速繁殖方法,由该方法所制备得到的乌饭树悬浮细胞生长分裂速度快,操作工艺简单可控,有助于获得大量的药用次生代谢产物,且生长周期短。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取乌饭树近芽处幼嫩的叶片,在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面被毛和污垢,流水冲洗20min,超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min,同时均匀摇动,无菌水冲洗6_7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D4mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭lg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导,光照强度8001x,光期6h,暗期18h,诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6_BA2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖,pH5.8,光照20001x,温度28 °C,增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.lmg/L+5mL/L蜂蜜,45继代三次后称重。
[0005] 采用本发明制备的乌饭树悬浮细胞生长分裂速度快,操作工艺简单可控,有助于获得大量的药用次生代谢产物,且生长周期短。
[0006] 下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
[0007] 实施例1
取乌饭树近芽处幼嫩的叶片,在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面被毛和污垢,流水冲洗20min,超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min,同时均匀摇动,无菌水冲洗6_7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D3mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭lg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导,光照强度8001x,光期6h,暗期18h,诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6_BAlmg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖,pH5.8,光照20001x,温度28 °C,增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.05mg/L+5mL/L蜂蜜,45继代三次后称重。
[0008] 实施例2
取乌饭树近芽处幼嫩的叶片,在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面被毛和污垢,流水冲洗20min,超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min,同时均匀摇动,无菌水冲洗6_7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D5mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭lg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导,光照强度8001x,光期6h,暗期18h,诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6_BA2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖,pH5.8,光照20001x,温度28 °C,增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.lmg/L+5mL/L蜂蜜,45继代三次后称重,计算增殖率。
[0009] 实施例3
取乌饭树近芽处幼嫩的叶片,在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面被毛和污垢,流水冲洗20min,超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min,同时均匀摇动,无菌水冲洗6_7遍,吸水纸吸去表面水分,消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D4mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭lg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导,光照强度8001x,光期6h,暗期18h,诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6_BA2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖,pH5.8,光照20001x,温度28 °C,增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.05mg/L+5mL/L蜂蜜,45继代三次后称重,计算增殖率。

Claims (4)

1.一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法,包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养,其主要步骤如下: (1)采取乌饭树幼嫩的叶片,在超净工作台上对其进行消毒处理; (2)取步骤(I)消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D3-5mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭lg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导,光照强度8001x,光期6h,暗期18h ; (3)取步骤(2)中诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L+6-BAl-2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖,pH5.8,光照20001x,温度28 °C ; (4)取步骤(3)增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.05-0.lmg/L+5mL/L蜂蜜,45继代三次后称重计算增殖率。
2.按照权利要求1所述的一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(I)中所述乌饭树无菌叶片的获得为,取乌饭树近芽处幼嫩的叶片,在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面被毛和污垢,流水冲洗20min,超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min,同时均匀摇动,无菌水冲洗6-7遍,吸水纸吸去表面水分。
3.按照权利要求1所述的一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(3)中培养基中附加了 CH,可促进愈伤组织的分裂生长。
4.按照权利要求1所述的一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(4)液体悬浮培养中附加了硫代硫酸钠和蜂蜜,硫代硫酸钠可以防止愈伤主治的褐化,蜂蜜可以促进悬浮细胞的生长。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109984043A (zh) * 2019-05-15 2019-07-09 西南林业大学 一种以叶片为外植体的樟叶越桔组织培养方法
CN110622862A (zh) * 2019-10-16 2019-12-31 西南林业大学 一种樟叶越桔悬浮细胞培养体系的建立方法

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