CN104186835B

CN104186835B - 一种玛咖叶红茶及其制备方法

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Publication number: CN104186835B
Application number: CN201410405666.5A
Authority: CN
Inventors: 郭春苗; 闫论; 朱光辉; 牛新民
Original assignee: Dayaoshan Yao Autonomous County Of Ruyuan King Tea Industry Ltd Co
Current assignee: Ruyuan Yao Autonomous County Yaoshanwang Tea Industry Co ltd
Priority date: 2014-08-18
Filing date: 2014-08-18
Publication date: 2019-05-17
Anticipated expiration: 2034-08-18
Also published as: CN104186835A

Abstract

本发明公开了一种玛咖叶红茶及其制备方法。选用玛咖叶时要去掉叶柄，将切好的玛咖叶抖松，不让其粘贴在一起，装入事先铺好干净纱布的蒸笼内，厚度在5‑7厘米之间，以能均匀受蒸为宜，经蒸青工序，以玛咖叶软熟保持鲜绿为好，立即出笼倒入干净的容器内摊晾后进行揉搓后进行发酵，发酵室气温24—25℃，相对湿度95%，摊叶厚度8—12cm；将发酵好的玛咖茶叶立即进行烘干，以制止茶叶继续发酵后，经摊凉过筛、包装，制备获得玛咖叶茶富含丰富的总黄酮，且可以有效清除DPPH自由基、·OH和O₂ ^‑·，且量效关系显著，具有广泛的应用价值。

Description

一种玛咖叶红茶及其制备方法

技术领域

本发明涉及红茶制备技术领域。具体的说，本发明涉及一种玛咖叶红茶的制备技术领域。

背景技术

玛咖（Lepidium meyenii Walp）为十字花科独行菜属一年生或两年生草本植物，原产于海拔3500~4500的秘鲁安第斯山区。玛咖是一种药食同源性植物，2000 多年以来一直是生活在安第斯山印加人的主要食物之一，有“秘鲁人参”和“南美人参”的美称。

现代研究表明玛咖含有丰富的营养和药用成分，主要包括玛咖烯、玛咖酰胺、玛咖生物碱、芥子油苷、异硫氰酸酯和甾醇等。玛咖具有抗氧化、抗疲劳、提高性功能、促进生长、缓解更年期综合症等功效。

黄酮类化合物是植物中广泛存在的一类活性物质，具有抗癌防癌、抗菌杀菌、改善心血管功能、延缓衰老、降血脂血压等功效。2001 年玛咖首次在我国云南省丽江、会泽、曲靖等地引种，至2010 年底全国种植面积达194.4 hm2，玛咖产量838.7t，现已广泛的新疆塔什库尔干地区大面积种植。玛咖已成为当前功能食品研究的热点，以玛咖为主要原料的保健食品受到了各国消费者的广泛青睐。2011 年，我国卫生部批准玛咖作为新资源食品。目前国内外对玛咖茎进行了大量的研究，如Campos 等对玛咖中芥子油苷、总酚和抗氧化物质的提取方法进行了研究，结果表明，同时提取这类化合物的最佳条件为，乙醇体积分数58%，料液比1:10（g/mL），在70 ℃下提取90 min。

周晓明等对新疆产玛咖根茎中的黄酮进行了提取工艺的研究，确定最佳提取工艺为乙醇浓度70.3%、料液比1:27（g/mL）、超声时间28.4 min，此工艺条件下玛咖总黄酮的提取率为2.113%。但是对玛咖叶的开发利用却鲜见报道。开发玛咖叶功能性物质，以期为玛咖资源的保护和综合利用提供现实的需求。

发明内容

针对目前国内外未见利用开发玛咖叶的技术现状，现有技术主要针对玛咖根部功能性物质的开发，传统将玛咖叶作为废弃物处理的现状。本发明的目的旨在于提供一种玛咖叶红茶及其制备方法，并通过功能性研究试验证明制备的红茶富含丰富的总黄酮，且可以有效清除DPPH 自由基、·OH和O₂ ^-·，且量效关系显著，具有广泛的应用价值。

本发明具体提供一种玛咖叶红茶的制备方法，具体制备方法步骤如下：

（1）采叶和处理：以采晚秋玛咖中上部无污染、无病虫害的叶片，采叶时要去掉叶柄，老嫩叶分开，尽量做到老嫩一致；采后用清水漂洗干净，放在室内阴干至无水滴为止，将已去叶柄的玛咖叶叠成8-12层厚，切成长1厘米，宽0.3-0.5厘米的条叶。

（2）装笼：将切好的玛咖叶抖松，不让其粘贴在一起，装入事先铺好干净纱布的蒸笼内，厚度在5-7厘米之间，以能均匀受蒸为宜。

（3）蒸青：锅内放清水，烧开后，将蒸笼放在锅内盖严，用大火、急火迅速蒸，待上大气后，根据蒸具密闭程度改用小火蒸2.5-5分钟，揭开盖查看，以玛咖叶软熟保持鲜绿为好，立即出笼倒入干净的容器内摊晾；焖蒸后立即驱散蒸汽是关键；蒸青过程中气味呈现出淡淡的清香时起锅摊放才会使玛咖叶茶冲泡时的青味少；蒸青时间一定要掌握好，时间短，青味没有蒸出，涩味重，汤色偏绿；时间过长，玛咖叶焖成黄色，颜色不好看，营养损失多。

（4）揉搓：待玛咖叶摊凉后，用手在木板上沿一个方向摊滚，使叶形大致卷曲，叶汁溢出粘附在叶面上，手搓有润滑感即可；揉搓采用常见的揉捻设备、装置，其揉捻的适合度，以细胞破坏率90%以上，条索紧卷，茶汁充分外溢，粘附于叶表面，用手紧握，茶汁溢而不成滴流。

（5）发酵：发酵是玛咖叶红茶形成品质的关键过程，是在酶促作用下，以多酚类化合物氧化为主体的一系列化学变化的过程；发酵室气温一般在24—25℃，相对湿度95%，摊叶厚度一般在8—12cm为宜；发酵适度的茶叶青草气消失，出现一种新鲜的、清新的花果香，叶色红变，春茶黄红色、夏茶红黄色，嫩叶色泽红匀，老叶因变化困难常红里泛青。

（6）干燥：将上述发酵好的玛咖茶叶立即进行烘干，以制止茶叶继续发酵；烘干一般分两次，第一次称毛火，温度110℃—120℃，使茶叶含水量在20—25%，第二次称足火，温度85℃—95℃，茶叶成品含水量为5%。

（7）摊凉过筛：将制成的玛咖叶茶迅速倒入干净的容器内摊凉，冷却后用适当的筛子筛去过细的碎末。

（8）包装：将筛好的干玛咖叶红茶，按色、形、味进行分级包装后放在干燥密闭的容器内储存。

（9）配料：经过以上工序制成的玛咖叶茶，为增强其保健功能，可以此为基本原料，同其他天然植物配制成具有不同功能的保健茶、减肥茶、药茶等，但无论哪种配方，配料总数不能超过茶叶总量的25%。

本发明中，揉捻目的一是使叶细胞通过揉捻后破坏，茶汁外溢，加速多酚类化合物的酶促氧化，为形成红茶特有的内质奠定基础；二是使叶片揉卷成紧直条索，缩小体积，塑造美观的外形；三是茶汁溢聚于叶条表面，冲泡时易溶于水，形成外形光泽，增加茶汤浓度。

本发明中，将上述发酵后的玛咖叶放入热锅中，用木扒不停地翻动，使水分尽快蒸发，至大半干时改用小稳火使水分进一步蒸发、均匀一致；至玛咖叶趋于干燥时，再用大火，并急速翻动，使其受热均匀，然后迅速撤火；要随时注意，当手捏不粘、手捻发脆，眼看叶脉呈蟹壳黄色、鼻闻具有清香味、品尝辨味适当（焦而不生），即为成品，迅速撤火。

通过上述提供的技术方案，与现有技术相比，本发明的具体发明内容可以达到以下显著的技术效果：

本发明制备的玛咖叶红茶，克服传统上只选择玛咖根部而舍弃玛咖叶子，认为玛咖叶没有功能性物质和利用价值，并通过功能性研究试验证明制备的玛咖叶红茶富含丰富的总黄酮，且可以有效清除DPPH 自由基、·OH和O₂ ^-·，且量效关系显著，具有广泛推广和使用的价值。

附图说明

图1为玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT对·OH 的清除率图。

图2为玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT 对DPPH 自由基的清除率图。

图3为玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT 对O₂ ^-·的清除率图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐明本发明，当然，这些实施例仅用于说明本发明。

玛咖叶 2012 年11 月采集于新疆塔什库尔干塔吉克自治县玛咖种植基地，干燥，粉碎，过60目筛，细粉装入自封袋备用；D101 大孔吸附树脂，天津市海光化工有限公司；芦丁对照品（批号：100080-200707）中国药品食品生物制品检定所；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、L-(+)-抗坏血酸（Vc）、2, 6-二叔丁基对甲酚（BHT），分析纯，国药集团化学试剂有限公司；其余试剂均为分析纯级。TU-1810 紫外可见分光光度仪，北京普析通用仪器有限公司；DZKW-4 电子恒温水浴锅，南昌市恒顺化验设备制造有限公司；离心机（LD4-2A），北京医用离心机厂；分析天平（PB203-N 型），梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司公司；高速万能粉碎机（FW100 型），天津市泰斯特仪器有限公司产品；SHZ-D(II)循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司。

本发明中选用的所有试剂和仪器都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。

实施例一：玛咖叶红茶的制备

玛咖叶红茶的制备通过以下具体方法制备：

（1）采叶和处理：以采晚秋玛咖中上部无污染、无病虫害的叶片，采叶时要去掉叶柄，要老嫩叶分开，尽量做到老嫩一致；采后用清水漂洗干净，放在室内阴干至无水滴为止，将已去叶柄的玛咖叶叠成8-12层厚，切成长1厘米，宽0.3-0.5厘米的条叶。

将上述发酵后的玛咖叶放入热锅中，用木扒不停地翻动，使水分尽快蒸发，至大半干时改用小稳火使水分进一步蒸发、均匀一致；至玛咖叶趋于干燥时，再用大火，并急速翻动，使其受热均匀，然后迅速撤火；要随时注意，当手捏不粘、手捻发脆，眼看叶脉呈蟹壳黄色、鼻闻具有清香味、品尝辨味适当（焦而不生），即为成品，迅速撤火。

实施例二：玛咖叶总黄酮的测定

标准曲线的绘制：准确称取干燥芦丁标准样品10mg 并置于50 mL 容量瓶中，然后用80%乙醇定容，摇匀，既得浓度为0.2 mg/mL 的标准溶液，待用。准确吸取芦丁标准液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于7 个比色管中，分别加入5% NaNO₂ 溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min 后分别加入10% Al(NO₃)₃ 溶液0.3mL，摇匀，静置6 min 后加入4% NaOH 溶液4.0mL，再用80%乙醇定容至10 mL，摇匀，静置15 min 后，以第一支试管溶液为空白参比，用紫外分光光度计在510 nm 下测定吸光度。以吸光度为纵坐标（Y），浓度（μg/mL）为横坐标（X），得到标准曲线方程：

Y=9.3982X +0.0257，R²=0.9991。

样品中黄酮含量测定：准确移取1.0 mL的样品液于比色管中，按上述标准曲线的绘制方法测定吸光度。

根据标准回归方程计算黄酮质量。总黄酮得率按照式（1）计算：

黄酮得率/%=CV/M×100% （1）

注：C 为提取液浓度，g/mL，V 为提取液原始体积，mL；M为所取玛咖叶粉末质量，g。

实施例三：玛咖叶红茶毒理安全性实验研究

目的：检测玛咖红茶作为保健食品的安全性。

方法：小鼠经口急性毒性、二项致突变试验(小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验) 以及90 d 喂养试验。

结果：

(1) 玛咖叶红茶细粉对两种性别的SPF级昆明种小鼠急性经口毒性试验,12 h累积两次灌胃总量为10 g/kg·BW(相当于人群推荐日摄入量0.033 g/kg·BW的300倍),观察两周内动物未见明显中毒症状, 无动物死亡,按急性毒性分级标准评价,该受试物属实际无毒级。

(2)二项致突变试验(骨髓细胞微核、小鼠精子畸变)结果均为阴性。

(3)以1.5%、3.0%、6.0%比例将玛咖叶红茶细粉加入基础饲料中进行90d喂养实验,连续经口给予13周；低、中、高剂量组雌、雄性大鼠实际摄入受试物的量分别相当于人群推荐日摄入量0·033g/kg·BW的46、93、187倍和43、87、175倍。

试验结果表明:一是各组动物生长发育良好,对体重、食物利用率无不良影响;二是血液学检查,雌雄性大鼠各受试物剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白各项血液学指标与对照组比较均无显著差异,且各项指标均在本实验室历史对照范围内;三是血生化检查,除中、高剂量组雌性大鼠的AST、高剂量组雌性大鼠TCH显著低于对照组(其测定值均在本室内历史对照检测范围内),其它各受试物剂量组大鼠血清ALT、AST、TP、Alb、GLU、BUN、CRE、TCH、TG测定生化指标与对照组比较均无显著性差异,且均在本室内历史对照值范围内;四是脏器重量及脏/体比值与对照组比较,差异均无显著性;五是病理组织学检查,正常对照组与高剂量组除少数肝、肾、肺组织切片可见可逆性改变外,其余被检脏器均未见明显毒性所致的病理损伤。

以上结果表明: 玛咖叶红茶细粉对小鼠急性毒性实际无毒、二项致突变结果阴性、90d喂养对动物生长发育临床观察指标无影响、脏器重量及脏/体比值以及病理组织无不良影响,因而作为保健食品是安全的。表明本发明提供的玛咖红茶作为保健食品是安全的。

实施例四：玛咖叶红茶的抗氧化活性实验

1.1 玛卡叶红茶总黄酮的抗氧化活性实验

按照常见响应面分析实验确定的玛咖叶红茶总黄酮提取最佳条件进行提取，提取液离心（4000 r/min）10 min，取上清液，经D101 大孔树脂纯化、乙醇洗脱（体积分数70%），所得洗脱液回收乙醇溶剂后冷冻干燥即得玛咖叶红茶总黄酮粉末。配制适宜质量浓度溶液进行抗氧化活性实验。

1.2 统计学分析

试验数据以平均值±标准差（Mean±SD）表示。采用Microsoft Office Excel2007 数据分析工具进行处理，并用Duncan 多重比较（SSR 法）检验各处理平均数之间的差异显著性（P<0.05）。

1.3 羟自由基（·OH）清除活性的测定

参照 Smironff 等的方法并加以改进。在10 mL比色试管中依次加入6 mmol/LFeSO₄溶液2.0mL、不同质量浓度的待测液2.0mL、6mmol/L 的H₂O₂ 溶液2.0 mL，摇匀静置10min，再加入6 mmol/L 的水杨酸溶液2.0 mL，摇匀，静置30 min 后于510 nm 处测其吸光度；做多次平行实验，取平均值。阳性对照用L-抗坏血酸和BHT 同法操作。清除率计算公式为：

清除率 Y/%=[1-(D_i-D_j)/D₀]×100 （2）

注：D₀ 为空白对照；D_i为某质量浓度黄酮类组分的吸光度；D_j 为无水杨酸时的吸光度。

1.4 对·OH 的清除效果

不同浓度下玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT对·OH 的清除率参见附图1 所示。由附图1 可知，随着玛咖叶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT质量浓度的增加，对·OH的清除率均逐渐增大，当质量浓度为1.2 mg/mL 时，玛咖叶总黄酮和L-抗坏血酸对·OH的清除率接近且达到最大，其清除分别为率91.06%和99.86%；而在该浓度下BHT 的清除率只有50.11%；玛咖叶黄酮、L-抗坏血酸清除·OH的IC₅₀分别为0.605 mg/mL和0.393mg/L，BHT 清除·OH的IC₅₀ 约为1.2 mg/mL。可见，玛咖叶总黄酮对·OH 的清除活性比L-抗坏血酸弱，但强于BHT 的清除活性。

1.5 DPPH 自由基清除活性的测定

参考现有技术文献，配制DPPH自由基溶液0.2 mmol/L，DPPH自由基乙醇溶液在517nm处有紫色基团特征吸收峰。将玛卡叶红茶总黄酮溶液按一定的浓度稀释，以L-抗坏血酸和BHT做对照。实验分为样品组、对照组和空白组，加入样品和DPPH自由基溶液后，用涡旋振荡器充分混匀，避光反应30 min，517 nm处测定吸光值。

做多次实验平行实验，取平均值。清除率计算式为：

清除率 Y/%=[1-(A_i-A_j)/A₀]×100 （3）

注：A_i 为样品（2 mL）+DPPH 溶液（2 mL）的吸光度；A_j 为样品（2 mL）+无水乙醇（2mL）的吸光度；A₀ 为DPPH溶液（2 mL）+无水乙醇（2 mL）的吸光度。

玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT 对DPPH 自由基的清除率参见附图2 所示。由附图2 表明，随着玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT 质量浓度的增加，对DPPH自由基的清除率均呈上升趋势。当最大实验质量浓度为0.4 mg/mL 时，玛咖叶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT对DPPH 自由基的清除率达到99.80%，77.33%和73.91%。玛咖叶黄酮、L-抗坏血酸和BHT 清除DPPH自由基的IC₅₀ 分别为0.165，0.028 和0.203 mg/L，因此，玛咖叶总黄酮对DPPH 自由基的清除能力比L-抗坏血酸弱，但强于BHT。

1.6 超氧阴离子自由基（O₂ ^-·）清除活性的测定

采用邻苯三酚自氧化法。取0.1 mol/L Tris-HCl（pH 8.2）缓冲液4.5 mL，置于20℃水浴中预热20min，分别加入0.1 mL 不同浓度样品溶液和5 mmol/L邻苯三酚溶液0.3mL，混匀后于25 ℃水浴中反应5min，加入10 mol/L HCl 溶液1 mL 终止反应，320 nm处测定吸光度A_i，空白对照组以相同体积的去离子水代替样品。做3 次平行实验，取平均值。阳性对照用L-抗坏血酸和BHT 同法操作。清除率计算式为：

清除率 Y/%=[(K₀-K_i)/K₀]×100 （4）

注：K₀ 为空白的吸光度；K_i 为样液测定的吸光度。

玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT 对O₂ ^-·的清除率参见附图3 所示。由附图3表明，玛咖叶红茶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT对O₂ ^-·的清除率同样随质量浓度的升高而增大。当质量浓度为0.2 mg/mL 时，L-抗坏血酸对O₂ ^-·的清除率已达到94.74%；而玛咖叶总黄酮和BHT 的清除率为35.91%和26.23%。当质量浓度大于0.2 mg/mL时，玛咖叶总黄酮的清除率上升较快，达到最高质量浓度（1.2 mg/mL）时，对O₂ ^-·的清除率为92.39%，而BHT 对O₂ ^-·的清除率只有61.98%。玛咖叶总黄酮、L-抗坏血酸和BHT 清除O₂ ^-·的IC₅₀ 分别为0.425mg/mL，0.105 mg/mL 和0.806 mg/mL。可见，玛咖叶红茶总黄酮清除O₂ ^-·基的能力也是比L-抗坏血酸弱，强于BHT。

综上所述，本发明制备的玛咖叶红茶总黄酮对·OH、O₂ ^-·、DPPH自由基均具有较强的抑制作用，其抑制率随质量浓度的增加而增大、具有一定的量效关系、抑制效果优于等质量浓度的BHT溶液；造成这种结果的原因是，黄酮类物质是多羟基化合物，且大部分具有一定程度的共轭结构，具有较好的抗氧化性；而实验所用的玛咖叶红茶总黄酮的纯度并非足够高，还有一定量的杂质影响实验结果。从IC₅₀比较，玛咖叶红茶总黄酮对于3种自由基清除能力从高到低的顺序为DPPH自由基＞O^2-·＞·OH，表明玛咖叶红茶总黄酮对不同的自由基的清除能力不同。

以上阐述本发明中的实施例，玛咖叶原料较丰富，本发明制备的玛咖叶红茶总黄酮含量较高、玛咖叶总黄酮类清除自由基能力较强、黄酮化合物又具有多种生理活性功能，值得深入开发利用研究。上述系列研究并不是对本发明作其它形式上的限制，本专业的人员可以对上述阐述的技术内容进行变更等效实施例。但是只要是没有脱离本发明技术方案内容，根据本发明的技术实质，只是对以上实例进行简单修改、等同变化与改型，仍然属于本发明技术的保护范围。

Claims

1.一种玛咖叶红茶的制备方法，其特征在于，所述的玛咖叶红茶通过如下具体制备方法获得：

(1)采叶和处理：以采晚秋玛咖中上部无污染、无病虫害的叶片，采叶时要去掉叶柄，要老嫩叶分开，老嫩一致；采后用清水漂洗干净，放在室内阴干至无水滴为止，将已去叶柄的玛咖叶叠成8-12层厚，切成长1厘米，宽0.3-0.5厘米的条叶；

(2)装笼：将切好的玛咖叶抖松，不让其粘贴在一起，装入事先铺好干净纱布的蒸笼内，厚度在5-7厘米之间，以能均匀受蒸为宜；

(3)蒸青：锅内放清水，烧开后，将蒸笼放在锅内盖严，用大火、急火迅速蒸，待上大气后，根据蒸具密闭程度改用小火蒸2.5-5分钟，揭开盖查看，以玛咖叶软熟保持鲜绿为好，立即出笼倒入干净的容器内摊晾；焖蒸后立即驱散蒸汽是关键；

(4)揉搓：待玛咖叶摊凉后，用手在木板上沿一个方向摊滚，使叶形大致卷曲，叶汁溢出粘附在叶面上，手搓有润滑感即可；

(5)发酵：发酵室气温在24—25℃，相对湿度95％，摊叶厚度一般在8—12cm为宜；发酵适度的茶叶青草气消失，出现一种新鲜的、清新的花果香，叶色红变，春茶黄红色、夏茶红黄色，嫩叶色泽红匀，老叶因变化困难常红里泛青；

(6)干燥：将上述发酵好的玛咖茶叶立即进行烘干，以制止茶叶继续发酵；烘干一般分两次，第一次称毛火，温度110℃—120℃，使茶叶含水量在20—25％，第二次称足火，温度85℃—95℃，茶叶成品含水量为5％；

(7)摊凉过筛：将制成的玛咖叶茶迅速倒入干净的容器内摊凉，冷却后用适当的筛子筛去过细的碎末；

(8)包装：将筛好的干玛咖叶红茶，按色、形、味进行分级包装后放在干燥密闭的容器内储存；

(9)配料：经过以上工序制成的玛咖叶茶，为增强其保健功能，以此为基本原料，同其他天然植物配制成具有不同功能的保健茶、减肥茶、药茶，但无论哪种配方，配料总数不能超过茶叶总量的25％。