CN104107225A - 中药材远志抗凝血有效部位及其提取方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种远志抗凝血的有效部位及其提取方法和应用。称取一定量的远志药材,加入80%乙醇浸泡过夜,加热回流提取,过滤,减压回收乙醇至无醇味,得醇提物;在醇提物中加入石油醚,萃取,分离除去石油醚部位;将乙酸乙酯加入到剩余的水溶液中,萃取,收集乙酸乙酯提取液,浓缩至浸膏,真空干燥,粉碎得有效部位B;之后将正丁醇加入剩余的溶液中,萃取,收集正丁醇提取液,浓缩至浸膏,真空干燥,粉碎得有效部位C。本发明以中药材远志为原料,采用现代提取分离技术,提取并筛选出部位B和部位C具有明显的抗凝血活性,且药效物质含量高,药理活性优于传统水提物的药效部位。本发明的远志抗凝血有效部位可在制备抗凝血药物中应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药有效部位,具体属于远志抗凝血有效部位及其提取方法和应用。
背景技术
远志为远志科远志属药用植物,为常见中药,在我国应用历史悠久,历代本草中均有记载,始载于《神农本草经》,被列为上品,视为养命之要药。本品味苦、辛、温,归心、肾、脾经,具有安神益智、祛痰、消肿之功效,用于失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚、咳痰不爽、疮疡肿毒、乳房肿痛等。近年来,随着对远志研究的不断深入,发现远志含有复杂的化学成分,如口山酮,寡糖酯,皂苷,生物碱等,并具有广泛的药理活性,如解酒、抗癌、抗菌、安神益智、降压等。
远志属其它药用植物在全国不同地区的应用也较广泛,如黄花远志、长毛籽远志、华南远志、香港远志等均具有活血、化瘀作用,并有相关文献作为佐证。但是关于中药材远志,则未见其有诸如活血、化瘀等药理作用的相关报道,这使得中药材远志的临床应用受到了一定程度的限制。
发明内容
本发明的目的是提供远志抗凝血的有效部位。采用现代提取分离技术,以中药材远志为原料,提取并筛选出药效物质含量高,且药理活性优于传统水提物的药效部位。
本发明提供的一种远志抗凝血有效部位的提取方法,包括如下步骤:取中药材远志,剪短至1-2cm,加入8-10倍量的80%乙醇浸泡过夜,加热回流提取2-3次,每次2h,合并提取液,过滤,滤液减压回收至无醇味,得醇提物;在醇提物中加入1-1.5倍体积的沸点60℃-90℃的石油醚,液液萃取2-3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位A;在石油醚萃取后的剩余液体中加入1-1.5倍体积的乙酸乙酯,液液萃取2-3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位B;在乙酸乙酯萃取后的剩余液体中加入1-1.5倍体积的正丁醇,液液萃取2-3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位C;将正丁醇萃取后的剩余液体,经60℃真空干燥,粉碎得部位D。
经药理实验证明,部位B和部位C具有明显的抗凝血活性。按抗凝血活性的强弱排列:部位C>部位B>水提物。
本发明以中药材远志为原料,采用现代提取分离技术,提取并筛选出部位B和部位C具有明显的抗凝血活性,且药效物质含量高,药理活性优于传统水提物的药效部位。
本发明提供的远志抗凝血有效部位可在制备抗凝血药物中应用。将本发明提供的远志抗凝血有效部位单独或与其他药物配伍后与药学上可接受的载体混合,采用药剂学的制药方法制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、口服液体剂、栓剂、微囊或透皮控释贴剂。
本发明的有益效果在于:本发明远志抗凝血有效部位具有活血化瘀、消痈肿的功效;可用于胸痹心痛、各种痈疽的治疗;适用于各种痈疽所致疼痛等病症;与现有技术相比,本发明的有效部位提供了一种有开发价值的全新药物,通过实验研究表明,疗效显著,利于临床应用,具有广阔的开发应用前景。
附图说明
图1远志各部位的提取、分离流程图,A:石油醚,B:乙酸乙酯,C:正丁醇,D:萃取水。
图2远志各分离部位的指纹图谱,图中:S1-萃取水,S2-对照品,S3-石油醚,S4-水提物,S5-乙酸乙酯,S6-远志药材甲醇提取物,S7-正丁醇。①-口山酮区,②-寡糖酯区,③-皂苷区。a-口山酮III,b-3,6’-二芥子酰基蔗糖。
图3远志不同部位的抗凝血活性I:乙酸乙酯部位(部位B)的抗凝血活性;II:正丁醇部位(部位C)的抗凝血活性。
具体实施方法
实施例1
1)远志各提取部位的制备
取250g中药材远志,剪短至1cm-2cm,加10倍量80%乙醇(2500mL)浸泡过夜,加热回流提取3次,每次2h,合并提取液,过滤,滤液减压回收至无醇味,得醇提物。在醇提物中加入等体积的沸点60℃-90℃的石油醚,液液萃取3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位A;在石油醚萃取后的剩余液体中加入等体积的乙酸乙酯,液液萃取3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位B;在乙酸乙酯萃取后的剩余液体中加入等体积的正丁醇,液液萃取3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位C;将正丁醇萃取后的剩余液体,经60℃真空干燥,粉碎得部位D,见图1。
2)对照药物的制备
①远志药材传统水提取物的制备
取30g中药材远志,加10倍量蒸馏水(300mL),加热回流提取3次,每次2h,合并提取液,过滤,滤液浓缩至浸膏,经60℃真空干燥,粉碎得水提物。
②远志药材甲醇提取物的制备(S6)
取远志粉末(过4号筛)1.0g,精密称定,置具塞三角瓶中,加70%甲醇10mL,称重,超声提取30min,称重,补足减失重量,静置,过滤。取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。
实施例2远志各提取、分离部位的指纹图谱研究
对上述提取、分离的各部位进行指纹图谱研究,观察其在远志的口山酮区、糖酯区、皂苷区是否存在化学成分差异。具体方法和结果如下:
1 色谱柱
Venusil Agela MP C18,4.6mm×250mm,5um。(厂家:天津博纳艾杰尔科技有限公司)
2 色谱条件
乙腈(A)-0.05%磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,采集时间:70min,洗脱梯度见表1;检测波长:316nm;柱温:30℃;室温30℃;流速:1.0mL.min-1;进样量:10μl;理论塔板数数以3,6′-二芥子酰基蔗糖酯计,不低于3000。
表1.洗脱梯度表
3 结果
部位B与部位C在B区(糖酯区)的化学成分种类及含量明显异于其它部位。部位C的C区(皂苷区)与其它部位也明显不同,显示其皂苷含量高于其它部位。结果见图2。
已有文献报道,远志皂苷有一定毒性,可造成实验动物的胃肠道肿胀,充气,甚至出现肠道坏死等不良反应。
实施例3远志各部位的抗凝血活性筛选
对上述远志提取、分离的各部位的在体抗凝血作用进行了活性筛选实验研究。具体方法和结果如下:
1 动物
品系:SD小鼠;性别:雄性;体重:18-22g;来源:北京维通利华实验动物有限公司,动物合格证号:SCXK(京)2011-0012,饲养:SPF级动物房常规饲养。
2 供试样品
部位A、B、C、D分别溶于0.5%的羧甲基纤维素钠溶液,分别配制成浓度为0.01315g/mL、0.00713g/mL、0.05621g/mL、0.04447g/mL的溶液。
3 对照药物
Ⅰ.名称:远志传统水提取物,溶于0.5%的羧甲基纤维素钠溶液,终反应浓度0.5g/mL。
Ⅱ.名称:阿司匹林,拜耳医药保健有限公司(购于太原市长城药店),磨成粉末,溶于0.5%的羧甲基纤维素钠溶液,终反应浓度为1.271mg/mL。
4 实验方法
4.1 实验动物分组及给药方法
取小鼠70只,随机分为7组,每组10只小鼠,分别为空白组、阿司匹林对照组、水提取物对照组、A组、B组、C组、D组,分别给予0.5%的羧甲基纤维素钠溶液,阿司匹林、水提物、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、萃取水部位。灌胃给药体积0.1mL/10g;连续给药8d。
4.2 对小鼠凝血时间的影响
对小鼠连续给药8天,于末次给药1h后,用长7~10cm、内径1mm的玻璃毛细管(上海新朋玻璃仪器有限公司,规格:0.9-1.1,长度:10cm,数量:500根)插入小鼠眼内眦后静脉丛中,深约4~5mm,轻轻转动再缩回,自血液流入毛细管内开始计时,血液注满后取出毛细管平放于桌上,每隔约30s依次折断毛细管的两端(约0.5cm),并缓慢向左右拉开,观察折断处是否有血凝丝,至血凝丝出现为止,所经历时间即为凝血时间,数据的平均值即为该小鼠的凝血时间。小鼠的正常凝血时间为2min-7min。
5 实验结果:如表2所示
表2.凝血时间表
与空白组相比:*P<0.05
从实验结果可见,阿司匹林、部位B、部位C、部位D均能延长小鼠的凝血时间,与空白组相比有显著性差异(P<0.05),见表2及图3。虽然水提物、部位B、部位C均能延长小鼠凝血的时间,P值均小于0.05;但是,与空白组相比,水提物的P值为0.049,趋近于0.05;而部位B与部位C的P值则分别为0.018和0.031;从P值的大小来判断的话,上述3个部位的抗凝血作用仍有较大的差异。按抗凝血活性的强弱排列:部位C>部位B>水提物。
部位C组中有6只小鼠先后出现死亡,经尸体解剖后发现,这6只小鼠均出现了不同程度的胃肠道肿胀及肠胀气。这应该与远志皂苷的毒性有关。
实验结论:
本发明将中药材远志提取、分离成若干部位,经体内动物实验证明,部位B和部位C的抗凝血活性优于传统水提物。由于部位C中所含的皂苷类成分较多,可能会引起一些不良反应,诸如胃肠胀气或肠道坏死等。
Claims (6)
1.一种远志抗凝血有效部位的提取方法,包括如下步骤:取中药材远志,剪短至1-2cm,加入8-10倍量的80%乙醇浸泡过夜,加热回流提取2-3次,每次2h,合并提取液,过滤,滤液减压回收至无醇味,得醇提物;在醇提物中加入1-1.5倍体积的沸点60℃-90℃的石油醚,液液萃取2-3次,分离除去石油醚部位;在石油醚萃取后的剩余液体中加入1-1.5倍体积的乙酸乙酯,液液萃取2-3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位B。
2.一种远志抗凝血有效部位的提取方法,包括如下步骤:取中药材远志,剪短至1-2cm,加入8-10倍量的80%乙醇浸泡过夜,加热回流提取2-3次,每次2h,合并提取液,过滤,滤液减压回收至无醇味,得醇提物;在醇提物中加入1-1.5倍体积的沸点60℃-90℃的石油醚,液液萃取2-3次,分离除去石油醚部位;在石油醚萃取后的剩余液体中加入1-1.5倍体积的乙酸乙酯,液液萃取2-3次,分离除去乙酸乙酯部位;在乙酸乙酯萃取后的剩余液体中加入1-1.5倍体积的正丁醇,液液萃取2-3次,收集、合并萃取液,回收溶剂,浓缩至浸膏,60℃真空干燥,粉碎得部位C。
3.如权利要求1所述提取方法获得的有效部位B。
4.如权利要求2所述提取方法获得的有效部位C。
5.如权利要求3所述的有效部位B在制备抗凝血药物中的应用。
6.如权利要求4所述的有效部位C在制备抗凝血药物中的应用。
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