CN104053776A - Casp2的双链rna化合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及治疗患有眼部疾病、病症或损伤或者处于患上眼部疾病、病症或损伤的风险中的患者的方法，并包括使用下调CASP2表达的双链RNA化合物或其药学上可接受的盐的治疗方案。

Description

CASP2的双链RNA化合物及其用途

相关申请

本申请要求标题均为“治疗眼部病症的方法(Methods for TreatingEye Disorders)”的2012年1月4日提交的美国临时申请序列No.61/582,886和2012年2月8日提交的美国临时申请序列No.61/596,231的权益，所述专利全文且出于所有目的以引用方式并入本文。

序列表

本申请通过引用并入存在于命名为“243-PCT1.ST25.txt”的文件中的核苷酸和/或氨基酸序列，该文件大小为25千字节，并在2013年1月3日以IBM-PCT机器格式创建，具有MS-Windows操作系统兼容性。

发明领域

本文提供治疗眼部疾病、眼部病症或眼部损伤的组合物和方法。

发明背景

视神经病一般缺乏疗法。通过降低眼内压力部分治疗青光眼。皮质类固醇管理视神经炎，但这并不影响疾病的长期过程。通过除去压迫在视神经或视交叉上的肿瘤或动脉瘤来治疗压迫性视神经病。包括非动脉前部缺血性视神经病(NAION)的所有其它视神经病表示没有满足医疗需求。(LevinLA.Axonal loss and neuroprotection in optic neuropathies.Can JOphthalmol.2007,42(3):403-8)。

PCT公布号W0 2008/050329和WO 2009/044392涉及促细胞凋亡基因的抑制剂并公开了双链RNA分子靶向，尤其是胱天蛋白酶2(Caspase 2)。

PCT公布号WO 2010/048352涉及治疗眼部疾病的组合物和方法，并公开了尤其是靶向胱天蛋白酶2基因的化学修饰的、双链RNA化合物QPI-1007。

Ahmed Z.等(Cell Death and Disease (2011) 2, e173)表明在视神经横断的大鼠模型中由视神经损伤诱导的视网膜神经节细胞(RGC)的细胞凋亡包括胱天蛋白酶2的活化，并表明设计用于抑制胱天蛋白酶2表达的合成的双链RNA化合物表示用于干预涉及RGC损失的人类疾病的潜在的神经保护剂。

发明概述

本文提供用于治疗受试者的化合物和组合物以及治疗受试者的方法，其中所述受试者患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤或者处于患上这些病症的危险中。所述治疗包括在单次治疗中或根据具有选自一周、两周、一个月、六周、两个月和更长时间、或其组合的给药间隔的治疗方案给受试者的眼睛施用治疗有效剂量的下调胱天蛋白酶2(CASP2)表达的双链RNA化合物，其中保持所述方案直到所述受试者获得期望的疗效。本文提供的剂量对患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤或者处于患上这些病症的危险中或需要眼部神经保护的患者，诸如例如患有非动脉前部缺血性视神经病(NAION)和其它导致视网膜神经节细胞(RGC)死亡的视神经病(诸如青光眼)或者处于患上这些病症的风险中的患者，呈现有利的结果。本文提供的治疗方案对患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤(包括但不限于NAION和青光眼)或者处于患上这些病症的危险中的患者，呈现有利的结果。

本文提供的各种方面和实施方案涉及核酸分子或其药学上可接受的盐下调受试者的眼睛中CASP2表达的用途，它们结合编码CASP2的核苷酸序列(诸如mRNA序列)或其部分，例如，人CASP2的mRNA编码序列(SEQ ID NO:3-5)，编码由SEQ ID NO:6-8所示例的一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位。在一些实施方案中，将下调或靶向CASP2基因表达的核酸分子或其药学上可接受的盐以约0.05mg至约10mg/眼，诸如约0.2mg至约6.0mg/眼的剂量施用于受试者的眼睛。在各种实施方案中，所述核酸分子或其药学上可接受的盐以玻璃体内(IVT)注射施用。在一些实施方案中，单侧施用所述核酸分子或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，双侧施用所述核酸分子或其药学上可接受的盐。在优选的实施方案中，所述核酸分子是包含正义链和反义链的双链RNA(dsRNA)化合物。在各种实施方案中，所述双链RNA化合物包含具有序列：5’AGGAGUUCCACAUUCUGGC3’(SEQ ID NO:2)的反义链和具有序列5’GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(SEQ ID NO:1)的正义链。

在优选的实施方案中，所述双链RNA化合物(本文称为“QPI-1007”)具有所述以下结构：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中每个核苷酸独立地是未修饰的核糖核苷酸、2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸或L-DNA核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸和第18位上的L-脱氧胞苷以及共价结合到5’末端的反向脱碱基脱氧核糖帽(iB)；并且

其中所述反义链包含(从5’末端计数)在第2、4、6、8、11、13、15、17和19位的每个位置上2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及在第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸。

在优选的实施方案中，提供具有下述结构的双链RNA化合物或其药学上可接受的盐：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中每个核苷酸独立地是未修饰的核糖核苷酸、2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸或L-DNA核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸和第18位上的L-脱氧胞苷以及共价结合到5’末端的反向脱碱基脱氧核糖帽(iB)；

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位的每个位置上2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸；

它们用于治疗患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤或者处于患上这些病症的危险中的患者；

其中将所述化合物或其盐以约0.05mg至约10mg/眼的剂量施用于患者的眼睛。

在各种实施方案中，将QPI-1007以约0.05mg至约10mg/眼的剂量、以约0.2mg至约6.0mg/眼的剂量或以约2.4mg至约6.0mg/眼的剂量施用于患者的眼睛。

在各种实施方案中，将双链RNA化合物以0.05mg、0.06mg、0.07mg、0.08mg、0.09mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg、6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg、9.0mg、9.1mg、9.2mg、9.3mg、9.4mg、9.5mg、9.6mg、9.7mg、9.8mg、9.9mg或约10.0mg的剂量，或以0.05mg、0.06mg、0.07mg、0.08mg、0.09mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg、6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg、9.0mg、9.1mg、9.2mg、9.3mg、9.4mg、9.5mg、9.6mg、9.7mg、9.8mg、9.9mg或10.0mg的剂量施用于患者的眼睛。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，以约0.2mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，以0.2mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，以约0.6mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，以0.6mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，以约1.2mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，以1.2mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，以约2.4mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，以2.4mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，以约4.8mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，以4.8mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，以约6.0mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，以6.0mg/眼的剂量施用双链RNA化合物。

在使用的化合物或治疗方法的优选的实施方案中，制备所述化合物或其药学上可接受的盐用于玻璃体内(IVT)注射。在使用的化合物或治疗方法的优选的实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐以玻璃体内(IVT)注射施用。在一些实施方案中，所述玻璃体内(IVT)注射以单次治疗施用。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，所述治疗包括多次(即2次、3次、4次、5次、6次或更多次)施用双链RNA化合物。在优选的实施方案中，所述治疗包括多剂量方案，例如多次(即2次、3次、4次、5次、6次或更多次)连续施用。在一些实施方案中，所述多次施用包括多次玻璃体内(IVT)注射。在本文提供的使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以六(6)次连续玻璃体内(IVT)注射施用。如本文所提供，所述多次施用可以规则间隔或不规则间隔发生。在优选的实施方案中，所述多次施用以规则间隔发生。如本文所提供，所述规则间隔选自由约一周、两周、一个月、六周、两个月和超过两个月组成的组。在一些实施方案中，所述规则间隔是约一个月。在使用的化合物或治疗方法的优选的实施方案中，双链RNA化合物在连续六(6)个月中以一个月的规则间隔以玻璃体内(IVT)注射施用。

在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，例如在慢性眼睛疾病的治疗中，双链RNA化合物在超过六(6)个月(例如多达12个月、或24个月或更多个月)中以一个月或两个月的规则间隔以玻璃体内(IVT)注射施用。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，单次玻璃体内(IVT)注射的体积是约1μl至约200μl(μl是指微升)。在一些实施方案中，所述注射体积是约5μl至约200μl。在一些实施方案中，所述注射体积是约20μl至约200μl。在一些实施方案中，所述注射体积是约50μl至约100μl之间。在一些实施方案中，所述单次玻璃体内(IVT)注射的体积是50μl或100μl。

在使用的化合物或治疗方法的各种实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，在治疗患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤(包括例如视野损失、视敏度损失、神经变性、眼内压增加、缺血性事件、视网膜损伤或视神经损伤)或者处于患上这些病症的危险中的受试者中是有用的。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，在治疗患有视网膜损伤或视神经损伤或者处于患上视网膜损伤或视神经损伤的风险中的受试者中是有用的。在本文提供的一些实施方案中，所述视网膜损伤或视神经损伤包括缺血性或缺氧性损伤。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，在实现受试者的眼睛的神经保护(例如RGC的神经保护和/或视神经的神经保护)中是有用的。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，在减少或预防受试者的眼睛的视野损失中是有用的。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，在减少或预防受试者的眼睛的视敏度损失中是有用的。

在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，在提高或增强受试者的眼睛(特别是NAION或青光眼患者的眼睛)的视敏度中是有用的。

在使用的化合物或治疗方法的各种实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤选自由眼部神经病、升高的眼内压(IOP)、青光眼、急性闭角(AAC)、急性闭角型青光眼(AACG)、原发性闭角型疾病(PACD)、原发性闭角型青光眼(PACG)、干眼症、斯耶格伦干燥综合症、糖尿病性视网膜病(DR)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视神经炎、视网膜中央静脉闭塞、早午餐视网膜静脉闭塞、缺血性视神经病、视神经萎缩、视神经损伤、非动脉前部缺血性视神经病(NAION)、早产儿视网膜病(ROP)、色素性视网膜炎(RP)、视网膜变性、视网膜神经节变性、黄斑变性、遗传性视神经病、赖博氏(Leber’s)遗传性视神经病、代谢性视神经病、毒性剂所致的神经病、所有继发性青光眼、眼高压、正常眼压性青光眼和不良药物反应或维生素缺乏引起的神经病组成的组。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是视神经萎缩。在一些实施方案中，所述视神经萎缩是慢性视神经萎缩。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是视网膜变性。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是非动脉前部缺血性视神经病(NAION)。在一些实施方案中，所述NAION是急性NAION。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是NAION或急性NAION，并且将双链RNA化合物或其药学上可接受的盐在NAION症状发作的14天内施用于患者的眼睛。在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是NAION或急性NAION，并且将双链RNA化合物或其药学上可接受的盐在NAION症状发作的28天内施用于患者的眼睛。在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是视神经炎。

在使用的化合物或治疗方法的一些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是青光眼，例如，原发性青光眼或继发性青光眼。在一些实施方案中，所述青光眼是选自由原发性开角型青光眼、正常眼压性青光眼、原发性闭角型青光眼(PACG)、急性闭角型青光眼(AACG)和闭角型青光眼组成的组的原发性青光眼。在使用的化合物或方法的一些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是原发性闭角(PAC)或急性闭角(AAC)。在一些实施方案中，所述青光眼是选自由假性剥脱性青光眼、色素性青光眼、新生血管性青光眼、类固醇诱导的青光眼和难治性青光眼组成的组的继发性青光眼。

在使用的化合物或治疗方法的某些实施方案中，所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是赖博氏遗传性视神经病。

在本文提供的使用的化合物或治疗方法的各种实施方案中，双链RNA化合物呈药学上可接受的盐的形式。在优选的实施方案中，所述药学上可接受的盐是钠盐。化合物的钠盐意指含有至少一个钠原子的任何化合物。

在本文提供的使用的化合物或治疗方法的各种实施方案中，双链RNA化合物存在于包含所述化合物和其药学上可接受的载体的组合物中。在一些实施方案中，所述药学上可接受的载体是适合注射到眼睛中的无菌盐水溶液。在某些实施方案中，所述组合物还包含防腐剂。在各种实施方案中，所述组合物被配制成霜剂、泡沫剂、糊剂、软膏剂、乳剂、液体溶液、滴眼剂、凝胶剂、喷雾剂、悬浮剂、微乳剂、微球剂、微胶囊剂、纳米球、纳米颗粒、脂质囊泡、脂质体、聚合物囊泡、贴剂或隐形眼镜。在优选的实施方案中，所述组合物被配制成液体溶液。在一些实施方案中，制备所述液体溶液用于单剂量玻璃体内(IVT)注射，并且所述单剂量IVT注射的体积是约20μl至约200μl之间，优选50μl至约100μl。在一些实施方案中，制备所述液体溶液用于单剂量玻璃体内(IVT)注射，并且所述单剂量IVT注射的体积是100μl。在一些实施方案中，制备所述液体溶液用于单剂量玻璃体内(IVT)注射，并且所述单剂量IVT注射的体积是50μl。

在另一个方面，本文提供包含药学上可接受的水性赋形剂和上文和下文中所述的双链RNA化合物的可注射的组合物。在本文提供的各种实施方案中，所述可注射的组合物用于治疗患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤或者处于患上这些病症的风险中的患者，并用于施用于患者的眼睛。

在另一个方面，本文提供具有所述以下结构的靶向胱天蛋白酶2的双链RNA化合物的钠盐：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位上的未修饰的核糖核苷酸、第18位上的L-脱氧胞苷和反向脱碱基脱氧核糖部分5’帽；并且

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位上的2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位上的未修饰的核糖核苷酸；

其中所述分子式是C₃₇₅H₄₃₉N₁₄₃Na₃₇O₂₆₆P₃₇；并且

其中所述分子量是13,202Da。

在另一个方面，本文提供药物组合物，其包含具有下述结构的双链RNA化合物的钠盐：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位上的未修饰的核糖核苷酸、第18位上的L-脱氧胞苷和反向脱碱基脱氧核糖部分5’帽；并且

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位上的2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位上的未修饰的核糖核苷酸；

其中所述分子式是C₃₇₅H₄₃₉N₁₄₃Na₃₇O₂₆₆P₃₇并且所述分子量是13,202Da；和

药学上可接受的赋形剂或载体或其混合物。

在各种实施方案中，如本文所提供的双链RNA化合物的钠盐以约0.05mg至约10.0mg/剂型的量存在于组合物中。在一些实施方案中，如本文所提供的双链RNA化合物的钠盐以0.05mg至10.0mg/剂量单位的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约0.1mg至约8.0mg/剂型的量，或以0.1mg至8.0mg的量存在于组合物中。在某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约0.2mg至约6.0mg/剂型的量，或以0.2mg至6.0mg的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约0.05mg、0.06mg、0.07mg、0.08mg、0.09mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg、6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg、9.0mg、9.1mg、9.2mg、9.3mg、9.4mg、9.5mg、9.6mg、9.7mg、9.8mg、9.9mg或10.0mg/剂型的量，或以0.05mg、0.06mg、0.07mg、0.08mg、0.09mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2.0mg、2.1mg、2.2mg、2.3mg、2.4mg、2.5mg、2.6mg、2.7mg、2.8mg、2.9mg、3.0mg、3.1mg、3.2mg、3.3mg、3.4mg、3.5mg、3.6mg、3.7mg、3.8mg、3.9mg、4.0mg、4.1mg、4.2mg、4.3mg、4.4mg、4.5mg、4.6mg、4.7mg、4.8mg、4.9mg、5.0mg、5.1mg、5.2mg、5.3mg、5.4mg、5.5mg、5.6mg、5.7mg、5.8mg、5.9mg、6.0mg、6.1mg、6.2mg、6.3mg、6.4mg、6.5mg、6.6mg、6.7mg、6.8mg、6.9mg、7.0mg、7.1mg、7.2mg、7.3mg、7.4mg、7.5mg、7.6mg、7.7mg、7.8mg、7.9mg、8.0mg、8.1mg、8.2mg、8.3mg、8.4mg、8.5mg、8.6mg、8.7mg、8.8mg、8.9mg、9.0mg、9.1mg、9.2mg、9.3mg、9.4mg、9.5mg、9.6mg、9.7mg、9.8mg、9.9mg或10.0mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约0.2mg/剂型的量，或以0.2mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约0.6mg/剂型的量，或以0.6mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约1.2mg/剂型的量，或以1.2mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约2.4mg/剂型的量，或以2.4mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约4.8mg/剂型的量，或以4.8mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007的钠盐以约6.0mg/剂型的量，或以6.0mg/剂型的量存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，以约0.5mg/mL至约100.0mg/mL，或以0.5mg/mL至100.0mg/mL的浓度在药学上可接受的赋形剂或载体中配制。在药物组合物的某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，以约1.0mg/mL至约80.0mg/mL，或以1.0mg/mL至80.0mg/mL的浓度在药学上可接受的赋形剂或载体中配制。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐，以约2.0mg/mL至约60.0mg/mL，或以2.0mg/mL至60.0mg/mL的浓度在药学上可接受的赋形剂或载体中配制。

在药物组合物的某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约2.0mg/mL的浓度，或以2.0mg/mL的浓度存在于组合物中。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约12.0mg/mL的浓度，或以12.0mg/mL的浓度存在于组合物中。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约24.0mg/mL的浓度，或以24.0mg/mL的浓度存在于组合物中。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约48.0mg/mL的浓度，或以48.0mg/mL的浓度存在于组合物中。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约60.0mg/mL的浓度，或以60.0mg/mL的浓度存在于组合物中。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约100.0mg/mL的浓度，或以100.0mg/mL的浓度存在于组合物中。在某些实施方案中，双链RNA化合物或其药学上可接受的盐以约120.0mg/mL的浓度，或以120.0mg/mL的浓度存在于组合物中。

在药物组合物的某些实施方案中，QPI-1007或其钠盐以约60mg/mL的浓度在药学上可接受的赋形剂或载体或其混合物中配制。在某些实施方案中，QPI-1007或其药学上可接受的盐以60mg/mL的浓度被配制成不含防腐剂的无菌溶液。在某些实施方案中，所述无菌溶液是磷酸盐缓冲盐水。

在一些实施方案中，本文所述的使用的化合物存在于包括双链RNA化合物或其药学上可接受的盐、或上文和下文所述的组合物及其使用说明书的试剂盒中。在试剂盒的各种实施方案中，所述用途是用于治疗眼部疾病、眼部病症或眼部损伤，例如，其中所述眼部损伤包括缺血性损伤、缺血-再灌注损伤、机械损伤、神经纤维的损伤或中断和/或与缺乏神经营养因子供应相关，或其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤与视网膜神经节细胞(RGC)的死亡相关。在试剂盒的各种实施方案中，所述疾病选自本文所述的疾病和病症。在试剂盒的各种实施方案中，所述试剂盒包括双链RNA化合物或其药学上可接受的盐、或本文所述的组合物的药物剂量单位。

在各种实施方案中，用于治疗眼部疾病、眼部病症或眼部损伤的所述试剂盒包括包装在合适的密封容器中的双链RNA化合物或其药学上可接受的盐、或上文和下文所述的组合物；至少一个适合玻璃体内注射的注射器针头；和至少一个注射器。在试剂盒的一些实施方案中，所述注射器是精确校准的注射器。在试剂盒的一些实施方案中，所述针头是适合玻璃体内注射的自密封的注射器针头。在试剂盒的一些实施方案中，用于治疗眼部疾病、眼部病症或眼部损伤的所述试剂盒包括包装在合适的密封容器中的双链RNA化合物或其药学上可接受的盐、或上文和下文所述的组合物；至少一个适合玻璃体内注射的自密封的注射器针头；和至少一个精确校准的注射器。在试剂盒的各种实施方案中，所述针头选自30-规格、31-规格和32-规格的针头。在各种实施方案中，所述试剂盒还包括描述双链RNA化合物或其药学上可接受的盐或组合物、其施用方法和如政府监管可能所需的任何需要的安全性和有效性信息的打印的信息材料。

在相关方面，提供包装用于患者使用的包括QPI-1007化合物或其药学上可接受的盐的组合物或试剂盒。所述包装可被标记或包括包装标签或插页，该包装标签或插页指示包装的内容并提供关于化合物应该如何或可以被患者使用的某些信息，例如标签可包括给药信息和/或使用适应症。在某些实施方案中，所述标签的内容将具有政府机构(例如美国食品和药物管理局)规定形式的公告。在某些实施方案中，标签可指示化合物适用于治疗患有与胱天蛋白酶2的表达增加和/或视网膜神经节细胞(RGC)的细胞凋亡和/或视神经损害相关的疾病的患者；例如标签可指示化合物适用于治疗NAION或青光眼；或例如标签可指示化合物或其药学上可接受的盐适用于治疗选自由眼部神经病、升高的眼内压(IOP)、青光眼、急性闭角(AAC)、急性闭角型青光眼(AACG)、原发性闭角(PAC)、原发性闭角型青光眼(PACG)、干眼症、斯耶格伦干燥综合症、糖尿病性视网膜病(DR)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视神经炎、视网膜中央静脉闭塞、早午餐视网膜静脉闭塞、缺血性视神经病、视神经萎缩、视神经损伤、非动脉前部缺血性视神经病(NAION)、早产儿视网膜病(ROP)、色素性视网膜炎(RP)、视网膜变性、视网膜神经节变性、黄斑变性、遗传性视神经病、赖博氏遗传性视神经病、代谢性视神经病、毒性剂所致的神经病、所有继发性青光眼、眼高压、正常眼压性青光眼和不良药物反应或维生素缺乏引起的神经病组成的组的眼睛疾病。

附图简述

图1是显示通过群组接收单次IVT注射QPI-1007后的第3个月和第6个月时与历史对照相比增加或损失≥3行VA的NAION受试者的比例的柱状图。

图2提供概述剂量递增程序的流程图

发明详述

定义

为了方便起见，将说明书、实施例和权利要求中采用的某些术语描述于此。

应注意，如本文所用，单数形式“一种(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”包括复数形式，除非上下文另有明确说明。

如本文所用，关于数值的术语“约”是指数值±10％。

如本文所用，关于基因表达的术语“抑制”、“下调”或“减少”意指将基因的表达、或者RNA分子或编码一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的等效RNA分子(例如，mRNA)的水平、或一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的活性减少至低于不存在抑制因子(诸如，例如具有如本文所述的结构特点的核酸分子，例如，siNA)时所观察到的情况；例如所述表达可被减少至不存在抑制剂时观察到的90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或更小。

“核苷酸”意欲涵盖可以是天然或合成的以及修饰或未修饰的脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。核苷酸包括合成的、天然存在的和非天然存在的已知核苷酸类似物。此类类似物的实例包括，但不限于，硫代磷酸酯、亚磷酰胺、膦酸甲酯、手性膦酸甲酯、2'-O-甲基核糖核苷酸和肽-核酸(PNA)。修饰包括糖部分、碱基部分和或寡核糖核苷酸中核糖核苷酸之间的键的变化。如本文所用，术语“核糖核苷酸”涵盖天然和合成的、未修饰和修饰的核糖核苷酸以及合成的、天然存在和非天然存在的核糖核苷酸类似物。修饰包括糖部分、碱基部分和/或寡核苷酸中核糖核苷酸之间的键的变化。

“镜像核苷酸(mirror nucleotide)”是具有与天然存在的或常用的核苷酸相反的手性的核苷酸，即，天然存在的D-核苷酸的镜像(L-核苷酸)，称为镜像核糖核苷酸的L-RNA。L-核糖核苷酸或L-脱氧核糖核苷酸还可包括至少一种糖、碱基和或骨架的修饰。参加美国专利No.6,586,238。美国专利No.6,602,858公开了包含至少一种L-核苷酸取代的核酸催化剂。镜像核苷酸包括例如L-DNA(L-脱氧核糖腺苷-3’-磷酸(镜像dA)；L-脱氧核糖胞苷-3’-磷酸(镜像dC)；L-脱氧核糖鸟苷-3’-磷酸(镜像dG)；L-脱氧核糖胸苷-3’-磷酸(镜像dT)和L-RNA(L-核糖腺苷-3’-磷酸(镜像rA)；L-核糖胞苷-3’-磷酸(镜像rC)；L-核糖鸟苷-3’-磷酸(镜像rG)；L-核糖尿苷-3’-磷酸(镜像dU)。

眼部疾病

在各种实施方案中，本文提供的双链RNA化合物在治疗患有其中视神经的神经保护将是有益的的眼部疾病、病症和损伤的患者中是有用的，例如，但不限于，治疗ION(包括NAION)、青光眼(包括青光眼性视神经病)、赖博氏遗传性视神经病(LHON)或赖博氏视萎缩。

术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性或预防性的措施，其中所述目的是预防、延缓或减弱如上所列的相关眼睛病症。需要治疗的那些包括那些已经经历所述疾病或病状、那些倾向于患有所述疾病或病状，和那些需预防所述疾病或病状的。术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”是指延迟或防止受试者中病症；和/或其伴随症状的发作，或减少受试者获得病症的风险。

术语“受试者”是指动物，优选哺乳动物并包括灵长类动物(例如，人、猴、黑猩猩、大猩猩等)，术语“受试者”和“患者”在本文互换使用，例如提及哺乳动物受试者，诸如人类患者。

尽管玻璃体内注射是施用的优选方法，但也考虑其它施用的模式，包括局部、结膜下和眼球筋膜下施用。

视神经萎缩可以是先天性或获得性的。如果是先天性的，它通常是遗传性的，在儿童或青少年时恶化发作(例如赖博氏遗传性视神经病(LHON)、或赖博氏视萎缩、显性视萎缩或Kjer's视神经病和许多较不常见的遗传相关的综合症)。可选地，在怀孕、分娩期间或在临出生后的阶段可通过缺氧引起先天性视萎缩。怀孕期间服用的一些药物也与视萎缩相关。获得性视萎缩来源于多个病因，诸如对眼睛或视神经的血液供应降低(前部缺血性视神经病或后部缺血性视神经病)、视神经内的炎症或肿胀(视神经炎)和对视神经的压力(诸如来自肿瘤或青光眼)。尽管较不常见，但它也可涉及代谢疾病(例如，糖尿病)、创伤或毒性(由甲醇、烟草、或其它毒物引起)。它还见于维生素B12缺乏和骨的佩吉特氏病(Paget's disease)。

最常见的视神经病是青光眼性视神经病(又叫做青光眼)，其通过视神经乳头独特的和进行性的凹陷而剩余神经视网膜边缘没有明显苍白来区分。在青光眼性视神经病中，视网膜神经节细胞(RGC)死亡。

RGC死亡的过程被认为是双相的，其中负责损害启动的原发性损伤之后是较慢的与退化细胞周围的有害环境有关的继发性退化。例如，作为眼内压增加的结果的视网膜缺血可建立最终导致细胞死亡的级联变化。缺氧导致谷氨酸盐的兴奋毒性水平，造成细胞内钙增加，进而导致细胞凋亡或坏死引起的神经元的死亡。(Kaushik等,Neuroprotection in glaucoma.J Postgrad Med.2003,49(1):90-5)

眼内压(IOP)增加(高于22mmHg或2.9kPa)是形成青光眼的显著风险因素。然而，存在关于视神经灵敏度的显著变化以增加IOP，一些患者在相对低的压力下发生神经损害，而其他患者可具有多年高压但不会形成损害。此外，尽管在一些风险个体(例如，患有眼高压的个体)中减少IOP有助于预防青光眼并且在患有现有疾病的一些个体中还预防青光眼的进展，但是简单地减少IOP并不总是有效的。另外，实现充分的压力降低很难或者与不良作用(AE)相关。另一方面，神经保护是试图保护在起始侵害期间幸免但仍然易受损害的细胞的过程。尽管还不可用，神经保护剂很可能在阻止青光眼进展中有巨大用途。

视神经的缺氧性损伤不限于青光眼。缺血性视神经病(ION)是视神经萎缩的另一个重要亚型，包括与视神经的缺血相关的各种病症。后部缺血性视神经病(PION)是一种罕见的医学病状，其特征在于对视神经的眼球后部分的缺血性损害。(Hayreh SS.Posterior ischaemicoptic neuropathy:clinical features,pathogenesis,and management.Eye.2004,18(11):1188-206)。

ION的更常见形式，前部缺血性视神经病(AION)是干扰睫状后动脉中的血流的结果，导致视神经乳头中视神经轴突的缺血性损伤和随后的视网膜神经节细胞损失。AION区别于PION的事实是AION在倾向解剖学和心血管风险因素的患者中自发并单侧发生。此外，根据定义，如果视盘水肿急性出现，则ION被称为前部的。(Biousse V,Newman NJ.Neuro-Ophthalmology Illustrated.New York,NY:ThiemeMedical Publishers；2009)。

在青光眼之后，AION是成人永久性视力损失的第二种最常见的视神经相关的原因。在临床上，将AION分为两种类型：

1.动脉AION(A-AION)：引起视力的严重损失并且是颞动脉炎(也称为巨细胞性动脉炎)患者视力损失的主要原因，主要影响以大动脉和中动脉的肉芽肿(巨细胞)炎症为特征的老年人的系统性病症。A-AION代表小于AION所有病例的6％。(Miller等,Walsh and Hoyt'sClinical Neuro-Ophthalmology:The Essentials.第二版.Philadelphia,PA:Lippincott Williams&Wilkins；2007)。

2.非动脉AION(NAION)：包括与具有“拥堵的”(即，具有低杯盘比)视盘患者的心血管风险因素一致的AION的所有其他病例。NAION是视神经相关的视力突然损失的最常见原因并占AION所有病例的95％。

可机械地将NAION病例大致分为两组：

睫状后动脉或它们的子分区的血栓或栓塞形成–在NAION中这些是罕见事件；

视神经乳头的血管中瞬时循环不良或不循环是NAION的最常见原因(Hayreh SS.Ischemic optic neuropathy.Prog Retin Eye Res.2009,28(1):34-62)。在易感人群中由于可导致NAION的血压瞬时下降，可发生视神经乳头的瞬时循环不良或循环损失。在AION的这种病因中，睫状后动脉没有实际的阻塞。通过内颈动脉和/或眼动脉的阻塞或严重狭窄，或通过眼内压的升高，或这些因素的一些组合，可引起视神经乳头的毛细血管局部血压下降。对视神经乳头损害的严重程度取决于所产生的局部缺血的程度和持续时间，但通常比血栓或栓塞形成而引起的损害不太广泛也不太严重。

NAION通常显示为突然的、无痛的单眼视力损失，尽管一些病人确实经历一些不适。视力损失从视敏度的微弱损失到完全失明变化很大。视力恶化通常在早晨醒后发现。(Hayreh等,Nonarteritic anteriorischemic optic neuropathy:time of onset of visual loss.Am JOphthalmol.1997,124(5):641-7)。

NAION中的视野缺陷以患者主诉朝向鼻子的视力损失和较不常见的垂直损失为特征。然后，畏光是常见的不适，特别是在罕见的双侧病例中。视神经乳头出现急性水肿，这证实了该病症的前部性质。通常存在视盘出血。

在50岁或更老的人群中估计NAION的平均年发病率为2.30至10.2/100,000,(Johnson LN,Arnold AC.Incidence of nonarteritic andarteritic anterior ischemic optic neuropathy.Population-based study in thestate of Missouri and Los Angeles County,California.J Neuroophthalmol.1994,14(1):38-44)并且许多来源报道在美国NAION的发病率为约8,000/年(Hattenhauer等,Incidence of nonarteritic anterior ischemic opticneuropathy.Am J Ophthalmol.1997,123(1):103-7)。NAION是中年人和老年人的主要疾病，尽管所有年龄的人都有风险。NAION在男性中并且相对于其他种族群体在白种人中更为普遍。目前还没有批准的NAION疗法。

神经元变性过程可描述为三个步骤：原发性轴突损害、相关神经元细胞体的伴随性逆向死亡，和随后的在称为“继发性变性”的过程中相邻神经元的损害/死亡。所述继发性变性发生在神经元中，该神经元最初未被损害，但在经历原发性轴突损害的邻近神经元的死亡期间暴露于释放的细胞因子。轴突损害后的原发性逆向细胞死亡和继发性变性被认为是主要通过细胞凋亡或程序性细胞死亡介导。因此，以抑制细胞凋亡形式的治疗性干预可有效地保护在原发性轴突损害后和那些继发性变性引起的损失的神经元。即使当疾病的起始原因未知时，该策略可以是有用的，因为该策略的目的是通过阻断引起视神经萎缩的潜在细胞机制(细胞凋亡)来限制或预防神经元损害/死亡。(Brao-Osuna等,New therapeutic systems of neuroprotectors agents inthe treatment of glaucoma.Arch Soc Esp Oftalmol.2007,82(4):191-3)。

例如在视网膜中央动脉闭塞期间发生的对神经节细胞体的直接损害，导致神经在短至20分钟内快速死亡，这就是为什么它是如此灾难性疾病的原因。相反，轴突遗传(axogenic)疾病如NAION的损伤部位是轴突，其中逆向细胞死亡的过程慢得多。

视神经萎缩被定义为视神经纤维的损失，并且由视网膜神经节细胞(RGC)的死亡引起。因为它们不能分裂，RGC的损失导致视力的不可逆损失。因此，在导致视神经萎缩的疾病中使用神经保护剂进行治疗性干预可以保护RGC从而保护视力。

青光眼的大多数病例被称为原发性开角型青光眼POAG，也称为慢性开角型青光眼的形式。POAG是由导致眼内压(IOP)的眼睛前房内的房水流体的累积而引起。可通过“眼压测量法”试验测量的升高的IOP是由流体进入眼睛并且没有足够的流体流出眼睛而引起。通常，流体通过渗出睫状体血管而进入眼睛。该流体最终经过晶状体，穿过瞳孔(虹膜中心的开孔)，并进入虹膜-角膜角，所述解剖学房角形成在虹膜和角膜的会合处。然后，所述流体穿过房角的小梁网并通过施勒姆(Schlemm)管离开眼睛。

如果多余的流体进入眼睛，或如果小梁网“排水(drain)”堵塞(例如，被碎片或细胞)，使得没有足够的流体离开眼睛，则在称为“开角型青光眼”中压力累积。当虹膜的后部粘附到形成“瞳孔阻塞”的晶状体前表面，并且预防眼内流体通过瞳孔进入前房时，也可引起开角型青光眼。

如果虹膜和角膜之间的房角太窄甚至被关闭，则流体聚集，从而导致在称为“闭角型青光眼”中的压力增加。

急性闭角型青光眼(AACG)(也称为窄角型青光眼)是具有急性表现的眼部急症，需要立即治疗和已经确立的解剖病理学。AACG被定义为至少具有两种以下症状：眼部疼痛、恶心/呕吐和间断的模糊光晕视力史；并具有至少三个以下标志：IOP大于21mmHg、结膜充血、角膜上皮水肿、中度扩张的非反应性瞳孔和在闭塞存在下的前房变浅。

原发性闭角型青光眼(PACG)被定义为房角排水闭塞和特征，表明已经发生外周虹膜引起的小梁网阻塞并出现青光眼性视神经病。

未治疗的青光眼最终导致视萎缩和失明。

CASP2双链RNA(dsRNA)QPI-1007

CASP2dsRNA QPI-1007或其钠盐是靶向胱天蛋白酶2mRNA(例如，人CASP2的mRNA编码序列(SEQ ID NO:3-5))的双链(19个碱基对的双链体)的、化学修饰的、合成的RNA，并具有以下双链结构：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位上的未修饰的核糖核苷酸、第18位上的L-脱氧胞苷和反向脱氧脱碱基5’帽(iB)；并且

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位上的2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位上的未修饰的核糖核苷酸。

QPI-1007的正义链的5'末端包括反向脱碱基脱氧核糖糖，除了赋予抗核酸酶降解的能力外，还阻断正义链的5'端磷酸化的能力。不希望受到理论的限制，该修饰防止正义链的RNAi介导的活性。此外，L-DNA部分掺入正义链的第18位以在双链体中引入热力学不稳定性，以有利于将反义链装载到RISC。不希望受到理论的限制，只有QPI-1007的反义链能够引起RNAi活性。QPI-1007的反义链在第2、4、6、8、11、13、15、17和19位上包含多个2'-O甲基(2’-OMe)糖修饰的核苷，所述核苷赋予反义链核酸酶抗性并减弱潜在的种子区域(seed region)介导的脱靶活性，从而提高QPI-1007对目标靶点胱天蛋白酶2mRNA的特异性(Jackson等,Position specific chemicalmodification of siRNAs reduces"off-target"transcript silencing.RNA.2006,12(7):1197-205)。

不希望受到理论的限制，这些化学修饰赋予核酸酶抗性并减轻潜在的脱靶活性，该脱靶活性可能来源于由正义链或反义链的种子区域引起的不需要的RNAi活性。

胱天蛋白酶2的功能

胱天蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶家族，在细胞凋亡或程序性细胞死亡中起主要作用。已经鉴定了12种人胱天蛋白酶并且全部最初以称为胱天蛋白酶原的非活性(酶原)状态存在(Logue和Martin,Caspaseactivation cascades in apoptosis.Biochem Soc Trans.2008,36(Pt1):1-9)。外部应力或死亡信号或显著的细胞内损害，可激发细胞凋亡和随后的胱天蛋白酶途径的活化(Fan等,Caspase family proteases and apoptosis.Acta Biochim Biophys Sin(Shanghai).2005,37(11):719-27)。在细胞凋亡级联反应中胱天蛋白酶有两种主要类型，引发剂/激活剂和处决者(executioner)。在细胞凋亡级联反应中，引发剂将处决者胱天蛋白酶切割成它们的活性形式或切割其它蛋白，随后导致处决者胱天蛋白酶活化。活化的处决者继续细胞凋亡级联反应(Logue和Martin,2008,前面引用的文献；Kumar S.Caspase function in programmed cell death.Cell Death Differ.2007,14(1):32-43)。胱天蛋白酶2是首先被鉴定的胱天蛋白酶中的一种，但其作用以及在细胞凋亡级联反应中的位置仍在争论中(Logue,2008，同上；Troy CM,Shelanski ML.Caspase-2redux.Cell Death Differ.2003,10(1):101-7)。在结构上，胱天蛋白酶2可归类为引发剂，尽管已表明其在神经元中同时具有引发剂和处决者活性(Fan等,2005，同上；Kumar S.Caspase function in programmed celldeath.Cell Death Differ.2007,14(1):32-43；Troy和Shelanski,2003，同上；)。

在视网膜神经节细胞中胱天蛋白酶2的活化

在NAION中，RGC损害起始于轴突而不是细胞体(Levin,2007op.cit)，并且细胞死亡可被延长(即几天(Slater等,Rodent anterior ischemicoptic neuropathy(rAION)induces regional retinal ganglion cell apoptosiswith a unique temporal pattern.Invest Ophthalmol Vis Sci.2008,49(8):3671-6)。缺血性事件诸如NAION中的RGC死亡主要通过细胞凋亡(Katai N,Yoshimura N.Apoptotic retinal neuronal death byischemia-reperfusion is executed by two distinct caspase familyproteases.Invest Ophthalmol Vis Sci.1999,40(11):2697-705；Lam等,Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in ratretina.Invest Ophthalmol Vis Sci.1999,40(5):967-75；Singh等,Cell-specific caspase expression by different neuronal phenotypes intransient retinal ischemia.J Neurochem.2001,77(2):466-75)。胱天蛋白酶在细胞凋亡中起主要作用，并且在视网膜缺血性侵害的大鼠模型中显示胱天蛋白酶2在RGC中被特异性活化(Singh等,2001，同上；Kurokawa等,BDNF diminishes caspase-2but not c-Junimmunoreactivity of neurons in retinal ganglion cell layer after transientischemia.Invest Ophthalmol Vis Sci.1999,40(12):3006-11)。在瞬时全身视网膜缺血的大鼠模型中，泛-胱天蛋白酶抑制剂(Lam等,1999，同上)或胱天蛋白酶2-特异性抑制剂(Singh等,2001，同上)的IVT施用导致视网膜损害减弱。

RNA干扰途径

RNAi是存在于植物和动物中的普遍路径，并被认为已经发展为抵御病毒感染。通常，病毒在复制过程中产生长的双链RNA。长的双链RNA不是真核细胞的天然组分。称为“切酶(DICER)”的核糖核酸内切酶识别长的双链RNA并将其切割成离散的19-21个碱基对的双链RNA产物，称为小干扰RNA(siRNA)。称为RNA诱导的沉默复合物(RISC)的酶复合物使用DICER产生的片段作为引导序列，以找出并切割匹配装载的siRNA的RNA，从而区分外源病毒RNA和自身RNA。

合成的siRNA

由Fire和Mello使用匹配内源基因的长的双链RNA触发剂在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中首先证实抑制内源基因表达的RNAi途径的操作(Fire等,Potent and specific genetic interference by double-strandedRNA in Caenorhabditis elegans.Nature.1998,391(6669):806-11)。此类长的双链RNA通过DICER以这些形式被处理成siRNA，导致靶基因的沉默。然而，这种强大技术在哺乳动物中的使用受到阻碍，因为长的双链RNA诱导导致诱发干扰素途径的有效的先天免疫应答(Robbins等,siRNA and innate immunity.Oligonucl.2009,19(2):89-102)。

Elbashir等,(RNA interference is mediated by21-and22-nucleotideRNAs.Genes Dev.2001,15(2):188-200)产生匹配内源哺乳动物基因的21个核苷酸的合成的siRNA双链体，并表明此类合成的siRNA被有效装载到RISC(从而绕过DICER处理)，导致人细胞中RNAi介导的基因沉默，并表明这些小的合成的寡核苷酸没有启动如前面用较长的双链RNA观察到的强干扰素应答。然而，更多的最近的研究已显示，一些合成的siRNA可活化先天免疫系统的组分，特别是Toll样受体3(Kleinman,等,Sequence-and target-independent angiogenesissuppression by siRNA via TLR3.Nature.2008,452(7187):591-7)。一条或两条RNA链的化学修饰可减弱，或甚至消除免疫系统活化。

QPI-1007的药理学

QPI-1007的药理学程序包括体外研究，其证实了胱天蛋白酶2mRNA的RNAi介导的减少、胱天蛋白酶2mRNa的切割(通过RACE显示)和脱靶活性的潜力减少；和动物研究，其证实了i)玻璃体内(IVT)施用后RGC中荧光标记的siRNA的摄取，ii)IVT施用后收获的眼部组织中QPI-1007作用的RNAi介导机制，iii)在以下三种动物模型中QPI-1007的功效：青光眼的大鼠眼高压模型，和以NAION中RGC死亡为特征的逆向RGC细胞死亡的两种模型(视神经轴突切断术和视神经损伤模型)。

在体外将不同浓度的QPI-1007siRNA转染到人(HeLa)和大鼠(PC12)细胞后，对QPI-1007的RNAi活性进行评价。在两种细胞类型中均观察到胱天蛋白酶2mRNA水平的剂量依赖性减少。在细胞培养系统中评估QPI-1007抑制非目标靶点的潜力。数据表明QPI-1007引起足够的脱靶效应的潜力较低。

在逆向RGC细胞死亡的大鼠轴突切断术和视神经损伤(ONC)模型中，siRNA的IVT施用导致RGC的显著保护。在大鼠轴突切断术模型中，以10μg/眼(10微克/眼)两次IVT施用CASP2siRNA使轴突切断术后两周的RGC存活率超出两倍。在大鼠ONC模型中QPI-1007的IVT施用导致RGC的剂量依赖性保护，损伤后7天以20μg/眼和35μg/眼的剂量完全保护RGC。在青光眼的大鼠眼内高压模型中，诱导眼内压增加后两周以20μg/眼单次IVT施用QPI-1007提供对RGC的显著保护。

总之，非临床药理学研究提供各种体外和体内系统中QPI-1007药理活性的证据。合起来看，这些数据支持QPI-1007作为治疗眼部疾病、病症和损伤(诸如非动脉前部缺血性视神经病和导致视网膜神经节细胞死亡的其它视神经病)的神经保护剂的临床开发。

药物组合物、试剂盒和容器

本文提供了包括本文提供的施用于患者，优选患者的眼睛的双链RNA化合物的组合物、试剂盒、容器和制剂。

在某些实施方案中，所述组合物与麻醉剂联合施用。在一些实施方案中，所述麻醉剂是适合施用于人眼睛的局部麻醉剂。

在某些实施方案中，所述组合物与广谱杀菌剂联合施用。在一些实施方案中，所述广谱杀菌剂是广谱的局部杀菌剂。在各种实施方案中，所述广谱的局部杀菌剂。

在某些实施方案中，在施用所述组合物之前将局部麻醉剂和广谱的局部杀菌剂应用于眼睛。

在某些实施方案中，所述组合物与抗生素联合施用。在各种实施方案中，所述抗生素是适合施用于眼睛的抗生素。在各种实施方案中，所述抗生素被配制成滴眼剂。在某些实施方案中，在施用所述组合物之后将所述抗生素施用于患者。

在某些实施方案中，所述组合物还包含广谱杀菌剂、抗生素或其组合。

如本文所提供，试剂盒可包括至少一个容器和至少一个标签。合适的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器和试验试管。所述容器可由诸如玻璃、金属或塑料的多种材料制成。所述容器能容纳所述化合物。所述容器可可选地容纳包含所述化合物的组合物。

试剂盒可还包括第二容器，所述第二容器包括药学上可接受的缓冲液，诸如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)和/或葡萄糖溶液。该试剂盒可还包括商业和用户角度期望的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、搅拌器、针头、注射器，和/或具有适应症和/或使用说明书的包装插页。

其中所述化合物在使用之前被包装的单位剂量安瓿或多剂量容器可包括装封适用于其药学上有效的剂量或多个有效剂量的一定量的所述化合物的封闭的密封容器。所述化合物被包装为无菌制剂，并且设计所述封闭的密封容器以保护制剂无菌直至使用。

包含所述化合物的容器可还包括被标记的包装，并且所述标签可具有政府机构(例如食品和药物管理局)规定形式的公告，该公告反映在联邦法律下该机构批准其中所述用于人施用的化合物的生产、使用或销售。

联邦法律要求使用药物组合物用于人的治疗需得到联邦政府机构的批准。在美国，强制执行是食品与药物管理局的责任，其发布适当的规定以保护此类批准，详见21U.S.C.部分301-392。大多数外国国家要求类似批准。国家与国家之间的规定不同，但是个别方法对本领域技术人员是熟知的，因此优选本文提供的组合物和方法相应地符合。

实施例

无需进一步详述，据信本领域技术人员可使用前面描述，在最大程度上利用本发明。因此将以下优选的具体的实施方案解释成仅是示例性的，并不以任何方式限制要求保护的发明。

实施例1：试验化合物

所述试验化合物QPI-1007是具有下述结构的双链RNA化合物的钠盐：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位上的未修饰的核糖核苷酸、第18位上的L-脱氧胞苷和反向脱氧脱碱基5’帽；并且

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位上的2’-O-Me(2’-O-甲基,2’甲氧基)糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位上的未修饰的核糖核苷酸；

QPI-1007钠盐的分子式是：C(375)H(439)N(143)Na(37)O(266)P(37)。

QPI-1007钠盐的分子量是：13,202Da。

实施例2：首先在NAION患者中进行QPI-1007的人开放标记的 I期临床试验

设计该研究以招募多达66名患者分成如下所述的两个单独的层。

第I层第一群组的剂量以单只眼睛0.2mg的第一剂量水平开始，并且随后的第I层各群组按顺序被募集以接受递增剂量的QPI-1007(图1)。在该层中，不超过一名患者在任何24小时的时间段接受QPI-1007。

给第I层的群组中最后一名患者施用QPI-1007后，在下一群组的第一名患者接受QPI-1007之前需要7天随访期和可用的安全数据的综述。

图2提供概述剂量递增程序的流程图。

纳入标准：患者满足以下纳入标准：

第I层

1.使用美国定义的视敏度小于或等于20/200或视野被限制至小于20度的研究眼的“法定失明”。在筛选之前，该视觉功能水平必须已经稳定至少6个月。在筛选时和提前至少6个月，使用相同的视敏度试验(ETDRS或斯奈伦(Snellen))，将稳定定义为相同的视敏度分。

2.失明是影响研究眼后段的不可逆病状的结果。这些病状包括，但不限于：视网膜变性、视神经炎末期青光眼、任何病因引起的视神经萎缩、在筛选之前至少2年发作的赖博氏遗传性视神经病。

3.清晰的眼介质并能进行足够的瞳孔扩张以允许良好的眼底检查。

4.在筛选时非研究眼的视敏度和视野优于或等于研究眼。

第II层

1.在计划用QPI-1007给药之前14天内，诊断症状发作的NAION阳性。

NAION诊断要求以下所有条件：视盘水肿、与视神经病一致并且Humphrey SITA标准24-2的平均偏差低于-3.0dB的研究眼的视野缺陷、相对性瞳孔传入缺陷(如果研究眼是受影响的第一只眼)。

2.研究眼的最佳校正视敏度低于或等于20/64并优于或等于光感。

3.在筛选时非研究眼的最佳校正视敏度和视野优于或等于研究眼。

试验产品、剂量和施用模式：

试验产品：QPI-1007的活性药物成分是靶向胱天蛋白酶2mRNA的双链(19个碱基对)的、化学修饰的、合成的siRNA的钠盐。已经根据良好操作规范(GMP)生产QPI-1007。

所述药物产品，“QPI-1007注射液”，是在磷酸盐缓冲盐水中被配制成60mg/mL的不含防腐剂的无菌溶液。QPI-1007作为IVT注射的无菌溶液于用特氟隆(Teflon)包被的具有弹落式(flip-off)顶封的丁基橡皮塞密封的2mL的I型玻璃小瓶中提供。每个小瓶意欲用于单次使用并包含协议定义的剂量浓度的足够体积。用适当体积的稀释剂将QPI-1007稀释至目标浓度。通过目标剂量水平来确定制备的终浓度。

将QPI-1007注射液避光冷藏于2-8℃。在使用之前将溶液升温至室温。

施用模式

在研究中，通过玻璃体内(IVT)注射施用QPI-1007。用适合注射到眼睛的无菌盐水溶液将QPI-1007稀释以获得通过IVT注射递送的正确浓度。

使用无菌技术进行施用制备。在受控的无菌条件下进行IVT注射方法，其中包括无菌手套、无菌帘和无菌眼睑窥器(或等效物)的使用。在注射之前给予适当的局部麻醉剂和广谱的局部杀菌剂。

IVT注射后，监测患者眼内压升高、视神经乳头灌注降低和可能的注射并发症(玻璃体出血、视网膜撕裂)。另外，患者必须立即报告暗示诸如眼部疼痛、肿胀、发红、模糊和视力逐渐丧失的眼内炎的症状。

在施用QPI-1007后，给患者开抗生素滴眼剂。

对IVT注射方法的详细指导是本领域已知的(Aiello等,Evolvingguidelines for intravitreous injections.Retina.2004,24(5Suppl):S3-19；Brucker (Brucker AJ.Maximizing the Safety of IntravitrealInjections.Medscape Ophthalmology[网络].20067(2))。

给药

第I层：根据表1中的以下时间表以单次IVT注射给每群组中的患者施用QPI-1007。

表1：

第II层：根据表2中的以下时间表以单次IVT注射给每群组中的患者施用QPI-1007。

表2

群组	患者数	剂量/注射(mg)
			1(第I层后，第3群组)	多达10	多达1.2
2(第I层后，第4群组)	多达10	多达2.4
			3(第I&II层后，第1&2群组)	多达10	>1.2和≤6.0

治疗和随访的持续时间：

第I层

在第I层中在IVT注射QPI-1007(在研究的第0天)之前28天内进行所有筛选方法。

在筛选时，患者经历了眼部评估(双眼)，包括最佳校正视敏度(BCVA)评估、视野评估、眼压测量法(tonometry)、前段的裂隙灯检查和后段的裂隙灯/检眼镜检查、眼底照相(FP)以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的光学相干性断层扫描(OCT)。

在研究的第0天IVT注射QPI-1007之前，患者经历双眼的BCVA评估和眼压测量法。IVT注射后30分钟，通过眼压测量法检查患者的研究眼以确定眼内压，并通过裂隙灯/检眼镜以确定视神经灌注的状态和检查任何视网膜出血或撕裂。按照事件的时间表在注射后对患者临床监控4小时。患者在IVT注射后的当天(研究的第1天)回到临床以对两眼进行安全性评估，包括BCVA评估、眼压测量法、前段的裂隙灯检查和后段的裂隙灯/检眼镜检查。

IVT注射QPI-1007后在研究的第7、14和28天以及研究的第8和12周，患者经历眼部评估(双眼)，包括BCVA评估、眼压测量法和前段的裂隙灯检查以及后段的裂隙灯/检眼镜检查。此外，仅在研究的第12周，患者经历视野评估、FP以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的OCT。

随访发生在IVT注射QPI-1007后研究的第6和12月。患者经历眼部评估(双眼)，包括BCVA评估、眼压测量法和前段的裂隙灯检查以及后段的裂隙灯/检眼镜检查。

在研究期间通过评估生命体征、临床实验室试验、身体检查、收集不良事件(AE)和伴随药物的综述来监测患者安全性。

第II层

在第II层，所有筛选方法在IVT注射QPI-1007(在研究的第0天)之前48小时内进行，并在IVT注射的同一天进行。患者接受QPI-1007注射不超过NAION症状发作的14天。

在筛选时，患者经历眼部评估(双眼)，包括BCVA评估、视野评估、眼压测量法、前段的裂隙灯检查和后段的裂隙灯/检眼镜检查、FP以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的OCT。

在研究的第0天IVT注射QPI-1007之前，患者经历了眼压测量法(双眼)。IVT注射后30分钟，通过眼压测量法检查患者的研究眼以确定眼内压，并通过裂隙灯/检眼镜以确定视神经灌注的状态和检查任何视网膜出血或撕裂。按照事件的时间表在IVT注射后对患者临床监控4小时。患者在IVT注射后的第二天(研究第1天)回到临床以对两眼进行安全性评估，包括BCVA评估、眼压测量法、前段的裂隙灯检查和后段的裂隙灯/检眼镜检查。

在IVT注射QPI-1007后的研究第7、14和28天以及研究第8和12周，患者经历眼部评估(双眼)，包括BCVA评估、眼压测量法和前段的裂隙灯检查以及后段的裂隙灯/检眼镜检查、FP以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的OCT。另外，在研究的第7和28天以及在研究的第12周，患者经历视野评估。

随访发生在IVT注射QPI-1007后研究的第6和12月。患者经历的眼部评估(双眼)，包括BCVA评估、眼压测量法、前段的裂隙灯检查和后段的裂隙灯/检眼镜检查、FP以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的OCT。此外，仅在研究的第6个月，患者接受视野评估。

在研究期间在正在进行的基础上监测患者安全性，所述研究包括但不限于研究评估(包括评估生命体征)、临床实验室试验、身体检查、收集AE和伴随药物的综述。

眼部评估

对招募进第I层的患者的双眼进行以下眼部评估：

在筛选时和在研究的第0天(预注射，如果筛选评估提前超过48小时进行)、1、7、14和28天，在研究的第8和12/ET周以及在研究的第6和12月，使用ETDRS图表在4米处开始，评估最佳校正视敏度(BCVA)。

在筛选时和在研究的第12/ET周使用SITA标准算法评价视野。

尽可能在没有瞳孔扩张时进行眼前段的裂隙灯检查。在筛选时和在研究的第1、7、14和28天、研究的第8和12/ET周和研究的第6和12个月，记录前房、眼睑、结膜、虹膜、晶状体和角膜中的任何异常。注意任何前房炎症、晶状体眼状态和后晶状体囊状态。

在筛选时和在研究的第0天(预注射)、1、7、14和28天、研究的第8和12/ET周和研究的第6和12个月，使用Goldmann压平眼压测量法来测量眼内压(IOP)。尽可能在瞳孔扩张之前进行眼压测量法。

在筛选时和在研究的第1、7、14和28天、研究的第8和12/ET周和研究的第6和12个月，在瞳孔扩张后进行眼后段的裂隙灯/检眼镜检查以检查玻璃体、视神经乳头、黄斑和外周视网膜和眼底。注意任何玻璃质炎症。

仅在筛选时和研究的第12/ET周获得眼底照相。

仅在筛选时和研究的第12/ET周获得黄斑和视网膜神经纤维层的光学相干性断层扫描。

此外，仅在研究第0天注射后30分钟对招募进第I层的患者的研究眼进行以下眼部评估：前段的裂隙灯检查、后段的裂隙灯/检眼镜检查、Goldmann压平眼压测量法测量的IOP。

对招募进第II层的患者的双眼进行以下眼部评估：

在筛选时和在研究的第1、7、14和28天，研究的第8和12/ET周以及研究的第6和12个月，使用ETDRS图表在4米处开始，评估最佳校正视敏度(BCVA)。

在筛选时，在研究的第7和28天，研究的第12/ET周以及研究的第6个月，评估视野。

尽可能在没有瞳孔扩张时进行眼前段的裂隙灯检查。在筛选时和在研究的第1、7、14和28天、研究的第8和12/ET周和研究的第6和12个月，记录前房、眼睑、结膜、虹膜、晶状体和角膜中的任何异常。注意任何前房炎症、晶状体眼状态和后晶状体囊状态。

在筛选时和在研究的第0天(预注射)、1、7、14和28天、研究的第8和12/ET周和研究的第6和12个月，使用Goldmann压平眼压测量法来测量眼内压(IOP)。尽可能在瞳孔扩张之前进行眼压测量法。

在筛选时和在研究的第1、7、14和28天、研究的第8和12/ET周和研究的第6和12个月，在瞳孔扩张后进行眼后段的裂隙灯/检眼镜检查以检查玻璃体、视神经乳头、黄斑和外周视网膜和眼底。注意任何玻璃质炎症。

在筛选时和在研究的第7、14和28天，研究的第8和12/ET周以及研究的第6和12个月，获得眼底照相。

在筛选时和在研究的第7、14和28天，研究的第8和12/ET周以及研究的第6和12个月，获得黄斑和视网膜神经纤维层的光学相干性断层扫描。

此外，仅在研究第0天注射后30分钟对招募进第II层的患者的研究眼进行以下眼部评估：前段的裂隙灯检查、后段的裂隙灯/检眼镜检查、使用Goldmann压平眼压测量法测量的IOP。

表3：QPI-1007研究时间表–第I层–视神经萎缩患者

1 仅预注射-如果在QPI-1007注射48小时内进行筛选，则不重复

2 预注射、注射后30分钟和4小时

3 注射后30分钟(仅研究眼)

4 预注射(双眼)和注射后30分钟(仅研究眼)

5 预注射、注射后1小时和4小时

6 注射后24小时

7 仅对每一群组的前3名患者

表4：QPI-1007研究时间表–第II层–NAION患者

1 筛选和研究的第0天可发生在同一天

2 预注射、注射后30分钟和4小时

3 注射后30分钟(仅研究眼)

4 预注射(双眼)和注射后30分钟(仅研究眼)

5 预注射、注射后1小时和4小时

6 注射后24小时

7 仅对每一群组的前3名患者

结果：

在1年、2层、I期、多中心、开放标记、剂量递增研究中，对患有视网膜或视神经病理学引起的长期低视力的患者和患有急性NAION的患者进行研究，以确定单次IVT注射QPI-1007(抑制胱天蛋白酶2表达的合成的、化学修饰的siRNA)后的安全性、耐受性以及结构和功能变化。

将视敏度(VA)≤20/200的低视力受试者(第I层)和视敏度≤20/40并且在研究药物注射之前28天内症状发作的NAION受试者(第II层-S2)分别招募到6个群组(0.2-6mg)和3个群组(1.2、2.4和6mg)。接受单次IVT注射后，在第1、7、14、28天和第2、3、6、12个月评价受试者的VA、视野(VF)和视网膜神经纤维层(RNFL)厚度。

招募48名受试者(18名低视力，30名NAION)。对所有受试者的所有预期的研究访问结束，除了对最后招募的群组(S2,6mg)的最后的随访访问(第12个月)。对来自两层的第3个月(n＝48)、第6个月(n＝48)和第12个月(n＝38)的可用数据进行分析。273例中有261例不良事件(AE)是轻度到中度严重性。没有严重的AE。最常见的AE是结膜出血(n＝29)、结膜水肿(n＝11)和眼痛(n＝11)。在S2中具有图表上VA的28名NAION受试者中，最大的VA增加在第2个月(平均±SD:16.4±10.4个字母)。第3个月和第6个月在S2中提高≥3行的受试者的比例(图1)是53.6％(n＝15)和50.0％(n＝14)，而与之相比的缺血性神经病缓解治疗试验(IONDT)历史对照的比例是39.7％(n＝48)和42.6％(n＝52)(分别地p＝0.2和0.5；Fisher精确试验)[Ischemic OpticNeuropathy Decompression Trial,Arch Ophthalmol.2000；118(6):793-797]。在所有随访数据可用的S2受试者中，没有受试者VA损失≥3行，而与之相比在IONDT历史对照中，在第3、6和12个月分别为9.1％(n＝11)、14.8％(n＝18)和15.8％(n＝18)。VF平均缺陷与基线类似。RNFL厚度的降低与历史对照相似[Contreras等，2007]。

结论

在长期低视力或急性NAION的受试者中单次IVT注射QPI-1007是良好耐受的。与具有相似的初始疾病严重性的未治疗的NAION患者的公开的历史数据相比，通过单次IVT注射QPI-1007治疗的患者可防止进一步的视敏度损失。

实施例3：通过玻璃体内注射递送给急性非动脉前部缺血性视神 经病(NAION)的患者的QPI1007的II期中心随机、双盲、假对照试 验(Sham-controlled trial)

研究设计：

这是双盲、随机假对照的有效性和安全性研究。该研究将招募多达240名患有急性NAION的患者。患者将被随机分到1:1:1的比例的3组中的一组。两组将接受QPI-1007的治疗，而第三组将接受假注射。

在随机化的当天和在研究的第1、2、3、4和5个月，被随机分配到一个治疗组的患者的研究眼将接受每月一次的2.4mg或6.0mgQPI-1007的玻璃体内注射。通过基线(第0天)BCVA评分(>20/64和≤20/64)并根据国家将受试者分层。在随机化的当天和在研究的第1、2、3、4和5个月，被随机分配到假对照组的患者将接受研究眼的假注射。患者、技术人员和研究者将对治疗组单盲。仅注射医生将是非盲的，但不会涉及除了即时的注射后患者评估外的患者评估。

将对患者进行持续6个月的每月一次的跟踪，最后的随访访问在第12个月。研究方法示于下表的事件时间表中。

纳入标准：

患者必须满足以下纳入标准：

1.在计划用QPI-1007给药之前28天内，诊断症状发作的非动脉AION(NAION)阳性。NAION诊断要求以下所有条件：视盘水肿、与视神经病一致并且Humphrey SITA标准24-2的平均偏差低于-3.0dB的研究眼的视野缺陷和相对性瞳孔传入缺陷(如果研究眼是受影响的第一只眼)。

2.研究眼的最佳校正视敏度评分低于或等于20/20和优于或等于20/400在ETDRS图表上测量的斯奈伦(Snellen)当量

3.在筛选时50岁或以上年龄。

4.清晰的眼介质并能进行足够的瞳孔扩张以允许良好的眼底检查。

5.能够获得书面知情同意书。

6.愿意并能遵守研究方法和访问时间表，包括随访访问。

7.女性患者必须：(1)绝经后(2)手术绝育，或(3)持续使用有效的避孕方式直至研究的第6个月访问，且施用QPI-1007之前48小时内妊娠试验阴性。男性患者和可能怀孕的女性伴侣必须同意持续使用有效的避孕方式，直至研究的第6个月访问。注意：出于该研究的目的，绝经后被定义为没有月经至少一年并且血清FSH水平≥20IU/L。研究者可确定是否需要血清FSH水平以证实绝经期后的状态。如果女性在施用QPI-1007之前两侧输卵管结扎至少6个月、双侧卵巢切除、或完整切除子宫，则她被认为是手术绝育。避孕的有效方式包括使用以下之一：施用QPI-1007之前至少3个月稳定剂量的激素避孕药(口服、植入物、透皮贴剂或注射剂)、屏障(含杀精子剂的避孕套，含杀精子剂的避孕膜(spermicide))、IUD、或施用QPI-1007之前已经切除输精管至少6个月的男性患者/伴侣。

试验产品、剂量和施用模式

QPI-1007是靶向胱天蛋白酶2mRNA的双链(19个碱基对)、化学修饰的、合成siRNA并且设计用于暂时抑制胱天蛋白酶2的表达。QPI-1007将作为IVT注射的无菌溶液在2mL玻璃小瓶中提供。用适当体积的稀释剂将药物产物稀释至目标浓度。QPI-1007将作为IVT注射施用。所有IVT注射将以相同的注射体积(100μl)。在本研究中没有施用参考治疗。

治疗和随访的持续时间

患者必须在NAION症状发作不超过28天时接受第一次QPI-1007注射。如果双眼都具有NAION并且有资格进行研究招募，具有较差VA的眼睛将被选为研究眼。如果双眼都具有相同的VA，患者选定的并且研究者同意的眼睛将被指定为研究眼。

在筛选时，患者将经历眼部评估(双眼)，包括BCVA评估、视野评估、眼压测量法、前段的裂隙灯检查和后段的裂隙灯/检眼镜检查、眼底照相(FP)以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的SD-OCT。

IVT注射QPI-1007之前，患者将经历如下面事件表中所详述的BCVA评估和眼压测量法(双眼)，以及综合性的前后段眼睛检查。IVT注射后，立即将患者的注射眼进行视神经乳头灌注检查。IVT注射后30分钟内，将通过眼压测量法检查患者的研究眼以确定眼内压，并且通过裂隙灯/检眼镜以确定视神经灌注的状态和检查任何视网膜出血或撕裂。按照事件的时间表在IVT注射后对患者临床监控多达4小时。

在研究的第7天以及研究的第1、2、3、4、6和12个月，患者将经历包括BCVA评估、眼压测量法和前段的裂隙灯检查以及后段的裂隙灯/检眼镜检查的眼部评估(双眼)。另外，在研究的第0天以及研究的第3、6和12个月，患者将经历FP、颜色视觉试验、对比灵敏度试验以及黄斑和乳头周围视网膜神经纤维层的SD-OCT。在研究的第0天以及研究的第6和12个月，患者将经历视野评估。

SD-OCT和视野评估将被传送到中心读取中心进行评估。

在研究期间在正在进行的基础上将监测患者安全性，所述研究包括但不限于研究评估(包括评估生命体征)、临床实验室试验、身体检查、和收集报道的AE以及伴随药物的综述。

表5：事件时间表

结果：根据在该研究中获得的结果，在患有急性NAION的受试者中多次(每月一次)IVT注射QPI-1007是良好耐受的。与具有相似的初始疾病严重性的未治疗的NAION患者的公布的历史数据相比，通过多次(每月一次)IVT注射QPI-1007治疗的患者可防止进一步的视敏度损失。

虽然上述实施例已经说明实施本发明的实施方案的特定方式，但是实际上本领域技术人员将理解本文中未明确示出的实施本发明的实施方案的替代方式。应理解本公开内容被认为是本发明的原则的例证，并不意欲将本发明限制在所示的实施方案中。

本领域技术人员仅使用常规实验将承认或能够确定本文所述的本发明的具体实施方案的等效物。此类等效物意欲被下列权利要求涵盖。

Claims (50)

1.一种具有下述结构的双链RNA化合物：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中每个核苷酸独立地是未修饰的核糖核苷酸、2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸或L-DNA核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸和第18位上的L-脱氧胞苷以及共价结合到5’末端的反向脱碱基脱氧核糖帽(iB)；

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位的每个位置上2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸；

或其药学上可接受的盐；

它们用于治疗患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤或者处于患上这些病症的危险中的患者；

其中所述化合物以约0.05mg至约10mg/眼的剂量施用于所述患者的眼睛。

2.一种治疗患有眼部疾病、眼部病症或眼部损伤或者处于患上这些病症的危险中的患者的方法，所述方法包括给所述患者的眼睛施用下调CASP2表达的双链RNA化合物，或其药学上可接受的盐，所述双链RNA化合物具有下述结构：

5’iB–GCCAGAAUGUGGAACUCCU3'(正义链；SEQ ID NO:1)

3'CGGUCUUACACCUUGAGGA5'(反义链；SEQ ID NO:2)

其中每个A、C、U和G是核苷酸并且每个连续的核苷酸通过磷酸二酯键连接到下一个核苷酸；

其中每个核苷酸独立地是未修饰的核糖核苷酸、2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸或L-DNA核苷酸；

其中所述正义链包含(从5’末端计数)第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和19位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸和第18位上的L-脱氧胞苷以及共价结合到5’末端的反向脱碱基脱氧核糖帽(iB)；

其中所述反义链包含(从5’末端计数)第2、4、6、8、11、13、15、17和19位的每个位置上2’-O-甲基糖修饰的核糖核苷酸以及第1、3、5、7、9、10、12、14、16和18位的每个位置上未修饰的核糖核苷酸；

其中所述化合物以约0.05mg至约10.0mg/眼的剂量施用于所述患者的眼睛。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以约0.2mg至约6.0mg/眼的剂量被施用。

4.根据权利要求1或2中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以0.6mg/眼的剂量被施用。

5.根据权利要求1或2中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以1.2mg/眼的剂量被施用。

6.根据权利要求1或2中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以2.4mg/眼的剂量被施用。

7.根据权利要求1或2中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以4.8mg/眼的剂量被施用。

8.根据权利要求1或2中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以6.0mg/眼的剂量被施用。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物通过玻璃体内(IVT)注射被施用。

10.根据权利要求9所述的使用的化合物或方法，其中所述玻璃体内(IVT)注射在单次治疗中被施用。

11.根据权利要求1至8中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述治疗包括多次(即2、3、4、5、6或更多次)连续施用所述化合物。

12.根据权利要求11所述的使用的化合物或方法，其中所述多次连续施用包括多次连续玻璃体内(IVT)注射。

13.根据权利要求12所述的使用的化合物或方法，其中所述玻璃体内(IVT)注射被施用六(6)次。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述多次施用以规则间隔发生。

15.根据权利要求14所述的使用的化合物或方法，其中所述规则间隔选自由约1周、2周、1个月、6周、2个月和超过2个月组成的组。

16.根据权利要求15所述的使用的化合物或方法，其中所述规则间隔是约1个月。

17.根据权利要求1至8中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物作为六(6)次连续玻璃体内(IVT)注射以约1个月的规则间隔被施用。

18.根据权利要求9至17中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述每次玻璃体内(IVT)注射的体积是50μl至100μl之间。

19.根据权利要求18所述的使用的化合物或方法，其中所述IVT注射的体积是50μl或100μl。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤包括视野损失和/或视敏度缺陷。

21.根据权利要求1至19中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤包括神经变性、眼内压增加、缺血性事件、视网膜损伤或视神经损伤。

22.根据权利要求21所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤包括视网膜损伤或视神经损伤。

23.根据权利要求22所述的使用的化合物或方法，其中所述视网膜损伤或视神经损伤包括缺血性损伤或缺氧性损伤。

24.根据权利要求1至19中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤选自由眼部神经病、升高的眼内压(IOP)、青光眼、急性闭角(AAC)、急性闭角型青光眼(AACG)、原发性闭角(PAC)、原发性闭角型青光眼(PACG)、干眼症、斯耶格伦干燥综合症、糖尿病性视网膜病(DR)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关性黄斑变性(AMD)、视神经炎、视网膜中央静脉闭塞、早午餐视网膜静脉闭塞、缺血性视神经病、视神经萎缩、视神经损伤、非动脉前部缺血性视神经病(NAION)、早产儿视网膜病(ROP)、色素性视网膜炎(RP)、视网膜变性、视网膜神经节变性、黄斑变性、遗传性视神经病、赖博氏遗传性视神经病、代谢性视神经病、毒性剂所致的神经病、所有继发性青光眼、眼高压、正常眼压性青光眼、和不良药物反应或维生素缺乏引起的神经病组成的组。

25.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是视神经萎缩。

26.根据权利要求25所述的使用的化合物或方法，其中所述视神经萎缩是慢性视神经萎缩。

27.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是视网膜变性。

28.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是非动脉前部缺血性视神经病(NAION)。

29.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述非动脉前部缺血性视神经病(NAION)是急性非动脉前部缺血性视神经病(急性NAION)。

30.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是视神经炎。

31.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是青光眼。

32.根据权利要求31所述的使用的化合物或方法，其中所述青光眼是原发性青光眼或继发性青光眼。

33.根据权利要求31所述的使用的化合物或方法，其中所述青光眼是选自由原发性开角型青光眼、正常眼压性青光眼、原发性闭角型青光眼(PACG)、急性闭角型青光眼(AACG)和闭角型青光眼组成的组的原发性青光眼。

34.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、病症或损伤是原发性闭角(PAC)或急性闭角(AAC)。

35.根据权利要求32所述的使用的化合物或方法，其中所述青光眼是选自由假性剥脱性青光眼、色素性青光眼、新生血管性青光眼、类固醇诱导的青光眼和难治性青光眼组成的组的继发性青光眼。

36.根据权利要求24所述的使用的化合物或方法，其中所述眼部疾病、眼部病症或眼部损伤是赖博氏遗传性视神经病。

37.根据权利要求28或29中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物在NAION症状发作14天内被施用于患者的眼睛。

38.根据权利要求28或29中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物在NAION症状发作28天内被施用于患者的眼睛。

39.根据权利要求1至38中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述双链RNA化合物呈药学上可接受的盐的形式。

40.根据权利要求39所述的使用的化合物或方法，其中所述药学上可接受的盐是钠盐。

41.根据权利要求39或40所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以包含药学上可接受的载体的液体组合物施用于患者的眼睛。

42.根据权利要求41所述的使用的化合物或方法，其中所述药学上可接受的载体是适合注射到眼睛中的无菌盐水溶液。

43.根据权利要求41或42所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物还包含防腐剂。

44.根据权利要求41所述的使用的化合物或方法，其中所述液体溶液被制备用于单剂量玻璃体内(IVT)注射。

45.根据权利要求44所述的使用的化合物或方法，其中所述单剂量IVT注射的体积是约20μl至约200μl之间，优选约50μl至约100μl。

46.根据权利要求1至45中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物以包含药学上可接受的水性赋形剂的可注射组合物施用于所述患者。

47.根据权利要求1至46中任一项所述的使用的化合物或方法，其中所述化合物存在于包含施用于所述患者的所述化合物和使用说明书的试剂盒中。

48.根据权利要求47所述的使用的化合物或方法，其中所述试剂盒包含施用于所述患者的所述化合物的剂量单位。

49.根据权利要求48所述的使用的化合物或方法，其中在所述试剂盒中所述化合物包装在合适的密封容器中；并且所述试剂盒还包含适合玻璃体内注射的至少一个自密封注射器针头；和至少一个精确校准的注射器。

50.根据权利要求49所述的使用的化合物或方法，其中所述试剂盒还包含描述所述化合物或所述组合物、其施用方法和政府监管可能所需的任何需要的安全性和有效性信息的打印的信息材料。