CN103987699A - 作为pi3k调节剂的喹唑啉衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的取代的喹唑啉衍生物，其中A、X1、X2、X3、X4和R5如本说明书中所定义。这类化合物适合于治疗由PI3K酶活性介导的障碍或疾病。

Description

作为PI3K调节剂的喹唑啉衍生物
本发明涉及新喹唑啉衍生物的制备和其作为候选药物的用途，其呈游离形式或药学可接受的盐形式，具有有价值的药物样性质例如代谢稳定性和适宜药动学；用于调节、尤其是抑制磷酸肌醇3’OH激酶家族(此后为PI3K)、适合地为同工型PI3Kδ的活性或功能的形式，正如在体外和体内试验中所示的，其对不同同源(paralogs)PI3Kα和β具有的选择性至少为10-倍，更优选至少为30-倍。
预计PI3Kδ的选择性抑制可避免由PI3Kα和/或PI3Kβ介导的潜在副作用，例如胰岛素信号传导抑制和全身细胞生长途经抑制。
适合地，本发明涉及单独或与一种或多种其他药物活性化合物组合治疗PI3K-相关疾病的方法，所述PI3K-相关疾病包括、但不限于自身免疫障碍、炎性疾病、过敏性疾病、呼吸道疾病例如哮喘和COPD、移植排斥、例如造血起源的癌症或实体瘤。
在第一个方面中，本发明涉及式(I)的喹唑啉化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，
其中
A是包含1-2个选自N、O或S的杂原子的饱和5-8元单-或6-12元双环稠合、双环桥连或双环螺杂环，其中所述杂环未被取代或被1-4个取代基取代，所述取代基选自
羟基-
卤代-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-羰基-
卤代-C1-C7-烷基-
卤代-C1-C7-烷基-羰基-
C1-C7-烷氧基-羰基-
氧代(O＝)；
X1和X2是CH、N、CR
其中R独立地选自
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-；
X3是CH、N、CR3
其中R3选自
氰基-
硝基-
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
C1-C10-环烷基-氧基-
苯基-氧基-
苄基-氧基-
C1-C7-烷氧基-C1-C7-烷氧基-
羧基-
C1-C7-烷氧基-羰基-
氨基-羰基-
N-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
氨基-磺酰基-
N-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
1-吡咯烷代-磺酰基-
4-吗啉代-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-；
X4是CH、N、CR4
其中R4选自
F3C-；
R5选自
氢-
卤素-
羟基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
C1-C7-烷基-羰基-
C1-C7-烷基-羰基-氨基-
氨基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-
条件是如果X4是CH，则R3和R5不都是甲氧基。
本文给出的任何通式意欲表示此类化合物的水合物、溶剂合物和多晶型物，及其混合物。
如本文所用，本发明的语境(尤其在权利要求的语境)中所用的术语“一个”、“一种”、“该”和类似术语被解释为包括单数和复数，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾。
本文所述的所有方法可以以任何适宜的顺序进行，除非本文另有指明或与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例和示例性语言(例如“如”)的使用仅仅旨在更好地说明本发明并且不限制另外要求保护的本发明的范围。
通过参考下列描述、包括下列术语词汇表和最后的实施例，可更充分地理解本发明。如本文所用的术语“包括”、“含有”和“包含”在本文中以其开放、非限定性含义使用。当提及式I化合物时，这意指还包括式I化合物的互变体和N-氧化物。
当复数形式用于化合物、盐等时，这也意指单一化合物、盐等。
上文和下文使用的一般术语在本公开的语境中优选具有下列含义，除非另有指明：
本文所用的术语“烷基”是指具有至多20个碳原子的全饱和支链(包括单个或多个支链)或无支链烃部分。除另有提供之外，烷基是指具有1至16个碳原子、1至10个碳原子、1至7个碳原子或1至4个碳原子的烃部分。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2，2-二甲基戊基、2，3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。典型地，烷基具有1-7个、更优选1-4个碳。
本文所用的术语“卤代-烷基”是指本文所定义的烷基，其被一个或多个本文所定义的卤代基团取代。卤代-烷基可以是单-卤代-烷基、二-卤代-烷基或多-卤代-烷基，包括全-卤代-烷基。单-卤代-烷基可在烷基中具有一个碘、溴、氯或氟。二-卤代-烷基和多-卤代-烷基可在烷基中具有两个或更多个相同卤代原子或不同卤代基团的组合。通常，多-卤代-烷基含有最多12个、或10个、或8个、或6个、或4个、或3个、或2个卤代基团。卤代-烷基的非限定性实例包括氟-甲基、二-氟-甲基、三-氟-甲基、氯-甲基、二-氯-甲基、三-氯-甲基、五-氟-乙基、七-氟-丙基、二-氟-氯-甲基、二-氯-氟-甲基、二-氟-乙基、二-氟-丙基、二-氯-乙基和二氯-丙基。全-卤代-烷基是指所有氢原子被卤代原子替代的烷基。
本文所用的术语A的“饱和杂环基”是指环系，例如5-、6-、7-或8-元单环或6-、7-、8-、9-、10-、11-或12-元双环系统且包含至少一个选自N的杂原子，其为分子其余部分的连接点。杂环基可以连接在杂原子或碳原子上。杂环可以包含1-2个另外的选自N、O或S的杂原子。杂环基可以包括稠合或桥连环和螺环。杂环A的实例包括、但不限于
在另一个实施方案中，杂环A的实例包括、但不限于
本文所用的术语″环烷基″是指3-12个碳原子的饱和或部分不饱和单环、双环或三环烃基。除非另有提供，环烷基是指具有3至10个环碳原子或3至7个环碳原子的环状烃基。示例性双环烃基包括八氢吲哚基、十氢萘基。示例性三环烃有双环[2.1.1]己基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.1]庚烯基、6，6-二甲基双环[3.1.1]庚基、2，6，6-三甲基双环[3.1.1]庚基、双环[2.2.2]辛基。示例性四环状烃基包括金刚烷基。
本文所用的术语"环烷基"优选是指环丙基、环戊基或环己基。
本文所用的术语“氧基”是指-O-连接基团。
本文所用的术语“羧基”是-COOH。
如本文所用，所有取代基以显示一个或多个其所包含的官能团的次序的方式书写。官能团如本文上面所定义。如果适合，其连接点显示为连字符(-)或相等标志(＝)。
“治疗”包括预防性(预防)和治疗性治疗以及延迟疾病或障碍的进展。
“组合”是指一种剂量单位形式的固定组合、或组合施用的成分套盒，其中式(I)化合物及组合伴侣(例如下文解释的其他药物，也称为“治疗剂或活性助剂(co-agent)”)可同时独立地施用或以时间间隔分别地施用，尤其是这些时间间隔允许组合伴侣显示合作效应，例如协同效应。本文所用的术语“共施用”或“组合施用”等意指包括向需要其的单个受试者(例如患者)施用所选择的组合伴侣，并且意欲包括治疗方案，其中不一定通过相同的施用途径或同时施用这些活性剂。本文所用的术语“药物组合”意指由混合或组合多于一种活性成分而产生的产品并且包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”意指活性成分、例如式(I)化合物和组合伴侣均以单一实体或剂量的形式同时向患者施用。术语“非固定组合”是指活性成分、例如式(I)化合物和组合伴侣以单独实体同时、并行或在无具体时间限制下相继向患者施用，其中此类施用提供了患者体内的两种化合物的治疗有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。
本文描述了本发明的各种实施方案。应认识到，每个实施方案中指定的特征可与其他指定的特征组合以提供其他实施方案。
本发明进一步涉及式(I)化合物的药学可接受的前药。特别地，本发明还涉及本文所定义的式I化合物的前药，其就此在体内转化成式I化合物。因此对式I化合物的任何提及被理解为酌情也提及式I化合物的对应前药。
本发明进一步涉及式(I)化合物的药学可接受的代谢物。
在一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中A是选自如下的饱和杂环：
其未被取代或被1-4个取代基取代，所述取代基选自
羟基-
卤代-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-羰基-
卤代-C1-C7-烷基-
卤代-C1-C7-烷基-羰基-
C1-C7-烷氧基-羰基-
氧代(O＝)。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
A是选自如下的饱和杂环：
其未被取代或被1-3个取代基取代，所述取代基选自
羟基-
氟-
C1-C4-烷基-
C1-C4-烷基-羰基-
氟-C1-C4-烷基-
氧代(O＝)。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
A是选自如下的饱和杂环：
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
A是选自如下的饱和杂环：
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X1是CH、N、CR1
其中R1选自
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X1是CH、N、CR1
其中R1选自
氟-
C1-C4-烷基-
氟-C1-C4-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X1是CH。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X1是CR1
其中R1选自
氟-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X2是CH、N、CR2
其中R2选自
C1-C7-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X2是CH、N、CR2
其中R2选自
C1-C4-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X2是CH。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；且
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；且
R5选自
甲氧基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-；且
X3是CH或CR3
其中R3选自
氰基-
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
C1-C4-烷基-
C1-C4-烷氧基-
氟-C1-C4-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C4-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C4-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-；且
X3是CH或CR3
其中R3选自
氰基-
氟-
氯-
氟-C1-C4-烷基-
C1-C4-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
甲氧基-；且
X3是CH或CR3
其中R3选自
氰基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-；且
X3是N。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
C1-C4-烷基-
C1-C4-烷氧基-
氟-C1-C4-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C4-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-；且
X3是N。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
甲氧基-；且
X3是N。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
氢；且
X3是CR3
其中R3选自
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
1-吡咯烷代-磺酰基-
4-吗啉代-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是N；
R5选自
氢；且
X3是CR3
其中R3选自
C1-C4-烷基-磺酰基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是CH；
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-；且
X3是CR3
其中R3选自
氰基-
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是CH；
R5选自
C1-C4-烷基-
C1-C4-烷氧基-
氟-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C4-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C4-烷基-氨基-；且
X3是CR3
其中R3选自
氰基-
氟-
氯-
氟-C1-C4-烷基-
C1-C4-烷基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是CR4
其中R4选自
F3C-；
R5选自
氨基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-；且
X3是CH。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
X4是CR4
其中R4选自
F3C-；
R5选自
氢-；且
X3是CH或CR3
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
1-吡咯烷代-磺酰基-
4-吗啉代-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，如实施例中所述。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
A是选自如下的饱和杂环
X1是CH；
X2是CH；
X4是N；
R5选自
甲氧基-；且
X3是N。
在另一个实施方案中，本发明提供了式(I)的化合物和/或其药学可接受的盐和/或溶剂合物，其中
A是选自如下的饱和杂环
X1是CR1
其中R1选自氟-；
X2是CH；
X4是N；
R5选自
甲氧基-；且
X3是CH或CR3
其中R3选自
氰基-。
式(I)化合物可具有不同的异构形式。本文所用的术语“旋光异构体”或“立体异构体”是指对于本发明的给定化合物来说可存在的任何各种立体异构构型并且包括几何异构体。可以理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心上。因此，本发明包括化合物的对映体、非对映体或外消旋体。“对映体”是彼此互为非重叠镜像的一对立体异构体。一对对映体的1∶1混合物是“外消旋”混合物。在适当的情况下，该术语用于指明外消旋混合物。“非对映体”是具有至少两个不对称原子、但彼此不互为镜像的立体异构体。绝对的立体化学是根据Cahn-Ingold-Prelog R-S体系指定的。当化合物是纯对映体时，在每个手性碳上的立体化学可以被指定为R或S。绝对构型是未知的经拆分的化合物可以根据在钠D线波长它们旋转平面偏振光的方向(右旋或左旋)指定为(+)或(-)。本文所述的一些化合物含有一个或多个不对称中心或轴，并因此可以产生根据绝对立体化学能定义为(R)-或(S)-的对映异构体、非对映异构体和其他立体异构体形式。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间混合物。可以用手性合成子或手性试剂制备或者用常规技术拆分光学活性的(R)-和(S)-异构体。如果化合物包含双键，取代基可以是E或Z构型。如果化合物包含二取代的环烷基，环烷基取代基可以具有顺式-或反式-构型。还预期包括所有的互变异构形式。
本文所用的术语“药学可接受的盐”是指保留本发明化合物的生物有效性和性质的盐，且通常不是生物学或在其他方面不可取的盐。在许多情况下，本发明化合物能通过存在的氨基和/或羧基或与其相似的基团形成酸和/或碱盐。
药学可接受的酸加成盐可与无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
可以由其衍生得到盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。
可以由其衍生得到盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、磺基水杨酸等。药学可接受的碱加成盐可与无机碱和有机碱形成。
可以由其衍生得到盐的无机碱包括例如铵盐和周期表的1族至12族的金属。在一些实施方案中，该盐衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵、钾、钠、钙和镁盐。
可以由其衍生得到盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺、包括天然存在的取代的胺、环状胺、碱性离子交换树脂等。一些有机胺包括例如异丙胺、苄星青霉素(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺(meglumine)、哌嗪和氨丁三醇。
通过常规化学方法，可以从母体化合物、碱性或酸性部分合成本发明的药学可接受的盐。一般来讲，可以如下制备所述的盐：使所述化合物的游离酸形式与化学计算量的适当的碱(例如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应或使所述化合物的游离碱形式与化学计算量的适当的酸反应。这类反应通常在水或有机溶剂或两者的混合溶剂中进行。一般来讲，在可行时，使用非水介质例如醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是可取的。其他适合的盐的列表可以见于Remington′s PharmaceuticalSciences，第20版，Mack出版公司(Mack Publishing Company)，Easton，Pa.(1985)，以及见于Stahl和Wermuth的“Handbook ofPharmaceuticalSalts：Properties，Selection，and Use”(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。
对于分离或纯化目的，使用非药学可接受的盐例如苦味酸盐或高氯酸盐也是有可能的。对于治疗用途，仅使用药学可接受的盐或游离化合物。
鉴于游离形式的新式(I)化合物与以其盐形式的那些、包括可例如在纯化或鉴定新化合物中用作中间体的那些盐之间的密切关系，如适当且便利，对前文和后文的化合物或式(I)化合物的任何提及应理解为提及游离形式的化合物和/或也提及其一种或多种盐以及一种或多种溶剂合物例如水合物。
本文给出的任何通式亦意欲表示该化合物的未标记形式和同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文给出的通式描绘的结构，除了一个或多个原子被具有所选择原子量或质量数的原子替换。可引入至本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为2H、3H、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl、125I。本发明包括本文定义的各种同位素标记的化合物，例如存在放射性同位素例如3H、13C，和14C的那些化合物或存在非放射性同位素例如2H和13C的那些化合物。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(用14C)、反应动力学研究(用例如2H或3H)，检测或成像技术如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)、包括药物或底物组织分布分析，或在患者的放射治疗中。特别是，18F或标记化合物特别优选用于PET或SPECT研究。本发明的同位素标记化合物及其前药可一般地通过进行方案中或实施例中公开的方法和以下所述实施例和制备、通过将非同位素标记试剂替换为易于获得的同位素标记试剂进行制备。
此外，用较重同位素、特别是氘(即2H或D)取代可因更大的代谢稳定性而提供一些治疗优势，例如体内半衰期延长或所需剂量降低或治疗指数提高。应理解，在此情况下氘被视为式(I)化合物的取代基。该较重同位素、具体而言是氘的浓度可通过同位素富集因子来界定。本文所用的术语“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素丰度与天然丰度的比率。如果本发明化合物中的取代基表示为氘，则对于各指定氘原子，该化合物具有至少至少3500(在各指定氘原子处具有52.5％氘纳入)、至少4000(60％氘纳入)、至少4500(67.5％氘纳入)、至少5000(75％氘纳入)、至少5500(82.5％氘纳入)、至少6000(90％氘纳入)、至少6333.3(95％氘纳入)、至少6466.7(97％氘纳入)、至少6600(99％氘纳入)或至少6633.3(99.5％氘纳入)的同位素富集因子。
同位素标记的式(I)化合物可一般通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于所附实施例和制备中所述的方法、使用适当的同位素标记试剂代替先前使用的非标记试剂来制备。
根据本发明的药学可接受的溶剂合物包括其中用于结晶溶剂可以是同位素取代的例如D2O、d6-丙酮、d6-DMSO的溶剂合物。
本发明化合物，即含有能够充当氢键的供体和/或受体的基团的式(I)化合物，能够与适合的共晶体形成剂(co-crystal former)形成共晶体。这些共晶体可由式(I)化合物、通过已知的共晶体形成方法制备。此类方法包括研磨、加热、共升华、共熔化或在结晶条件下在溶液中使式(I)化合物与共晶体形成剂接触以及分离由此形成的共晶体。适合的共晶体形成剂包括描述于WO 2004/078163中的那些。因此，本发明进一步提供了包含式(I)化合物的共晶。
本发明化合物的任何不对称原子(例如碳等)可以以外消旋或对映体富集例如(R)-、(S)-或(R，S)-构型存在。在一些实施方案中，每个不对称原子在(R)-或(S)-构型中具有至少50％对映体过量、至少60％对映体过量、至少70％对映体过量、至少80％对映体过量、至少90％对映体过量、至少95％对映体过量、或至少99％对映体过量。具有不饱和键的原子上的取代基可以，如有可能，以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。
因此，如本文所用，本发明化合物可以呈可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如作为基本上纯的几何(顺式或反式)异构体、非对映体、旋光异构体(对映体)、外消旋体或其混合物。
根据本发明可得的异构体的混合物可以以本领域技术人员已知的方式分离成单个异构体；非对映体可例如通过在多相溶剂混合物之间分配、重结晶和/或色谱分离如在硅胶上或通过例如在反相柱上的中压液相色谱法而分离，并且外消旋体可例如通过与光学纯成盐试剂形成盐并且将如此可获得的非对映体混合物分离、例如借助于分步结晶或通过在旋光性柱材料上的色谱法而分离。
任何所产生的终产物或中间体的外消旋物可通过已知方法例如通过分离用旋光性酸或碱获得的其对映体盐并且释放该旋光性酸或碱化合物而拆分成旋光对映体。特别是，碱性部分由此可用于将本发明化合物拆分成它们的旋光对映体，例如通过对与旋光性酸如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒石酸、二-O，O′-对甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸形成的盐进行分步结晶来拆分。外消旋产物也可通过手性色谱法例如高压液相色谱法(HPLC)、使用手性吸附剂来拆分。
本发明化合物以游离形式、以其盐或其前药衍生物形式获得。
当碱性基团和酸性基团两者均存在于同一分子时，本发明化合物也可形成内盐，例如两性离子分子。
本发明还提供了本发明化合物的前药，所述前药在体内可转化为本发明化合物。前药是活性或无活性的化合物，在将其施用于受试者后通过体内生理学作用如水解、代谢等而被化学修饰为本发明化合物。在制备和使用前药中所涉及的适宜性和技术是本领域技术人员众所周知的。前药在概念上可以被分成非穷举的两类：生物前体前药和载体前药。参见ThePractice of Medicinal Chemistry，第31-32章(编者Wermuth，Academic Press，SanDiego，Calif.，2001)。通常，生物前体前药是无活性的或者与相应的活性药物化合物相比具有低活性的化合物，其含有一个或多个保护基团，通过代谢或溶剂解被转化为活性形式。活性药物形式和任何被释放的代谢产物均应具有可接受的低毒性。
载体前药是含有转运部分，如增强摄取和/或对作用部位的定位递送的转运部分的药物化合物。对于这类载体前药，希望药物部分和转运部分之间的连接是共价键，前药是无活性的或者比药物化合物的活性低，并且任何被释放的转运部分就可接受性而言是无毒的。对于其中转运部分用于促进摄取的前药而言，转运部分的释放通常应该是迅速的。在其他情况中，希望利用可提供缓慢释放的部分，例如某些聚合物或者其他部分如环糊精。载体前药可以例如用于改善一种或多种以下性质：增加亲脂性、延长药理作用的持续时间、提高部位特异性、降低毒性和不良反应和/或改善药物制剂(例如稳定性、水溶性、抑制不希望的感官或生理化学性质)。例如，可以通过(a)羟基与亲脂性羧酸(例如具有至少一个亲脂性部分的羧酸)、或(b)羧酸基团与亲脂性醇(例如具有至少一个亲脂性部分的醇如亲脂性醇)的酯化来增加亲脂性。
示例性的前药例如游离羧酸的酯和硫醇的S-酰基衍生物，以及醇或酚的O-酰基衍生物，其中酰基具有如本文定义的含义。适合的前药通常是在生理条件下通过溶剂解可转化为母体羧酸的药学可接受的酯衍生物，例如本领域通常使用的低级烷基酯、环烷基酯、低级链烯基酯、苄基酯、单-或二-取代的低级烷基酯如ω-(氨基、单-或二-低级烷基氨基、羧基、低级烷氧基羰基)-低级烷基酯、α-(低级烷酰基氧基、低级烷氧基羰基或二-低级烷基氨基羰基)-低级烷基酯，如新戊酰氧基甲基酯等。此外，胺也已被掩蔽为芳基羰基氧基甲基取代的衍生物，这些衍生物在体内被酯酶裂解而释放游离药物和甲醛(Bundgaard，J.Med.Chem.2503(1989))。此外，含有酸性NH基团如咪唑、酰亚胺、吲哚等的药物也被N-酰氧基甲基基团掩蔽(Bundgaard，Design of Prodrugs，Elsevier(1985))。羟基已被掩蔽为酯和醚。EP 039,051(Sloan和Little)公开了曼尼西碱异羟肟酸前药、其制备和用途。
而且，本发明化合物、包括其盐也可以以其水合物形式获得，或者包括其他用于其结晶的溶剂。
本发明在第二个方面中涉及式I的化合物的制备。根据自身已知的方法制备式I的化合物或其盐，不过，这些方法预先并没有描述用于制备式I的化合物。
一般反应方法：
在一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物的制备方法(方法A)，包含下列步骤：使式II化合物
其中所述取代基如上述所定义，与式III的化合物反应，
其中所述取代基如上述所定义，-B(OR’)2表示环状或无环硼酸或硼酸衍生物，例如频哪酸-硼，该反应在催化剂例如Pd(0)催化剂例如Pd(PPh3)4的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下进行。在约100-120℃温度例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且能适用于本方法；
其中制备式II的化合物，包含步骤b：使式IV的化合物
其中所述取代基如上述所定义，与式V的胺在常规缩合条件下反应，
其中所述取代基如上述所定义。该反应通过将羧酸和式V的胺溶于适合的溶剂进行，所述溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应衍生物，例如(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应混合物在约-20-50℃例如-5℃-30℃例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行；
其中制备式IV的化合物，包含步骤c：皂化式VI的化合物
其中所述取代基如上述所定义，RA选自C1-C7-烷基。羧酸酯的皂化在常规皂化条件下、在碱水例如氢氧化锂和极性有机溶剂例如二噁烷的存在下进行。该反应可以在约室温下进行。
其中制备式VI的化合物，包含步骤d：使式VII的化合物
其中所述取代基如上述所定义，RA选自C1-C7-烷基，-B(OR’)2表示环状或无环硼酸或硼酸衍生物，例如频哪酸-硼，与6-溴-4-氯-喹唑啉[38267-96-8]在催化剂的存在下例如Pd(0)催化剂例如二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下反应。在约100-120℃温度下例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应可以在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且能适用于本方法。
在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物的制备方法(方法B)，包含步骤e：使式VIII的化合物
其中所述取代基如上述所定义，-B(OR’)2表示环状或无环硼酸或硼酸衍生物，例如频哪酸-硼，与式IX的化合物反应，
其中所述取代基如上述所定义，Hal表示卤素，特别是碘或溴，该反应在催化剂例如Pd(0)催化剂例如Pd(PPh3)4的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下进行。在约100-120℃温度下例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应可以在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且能适用于本方法；
其中制备式VIII的化合物，包含步骤f：使式II的化合物与二硼衍生物例如双-(频哪酸)-二硼、任选地在钯催化剂例如1，1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(PdCl2(dppf)-CH2Cl2)的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水例如乙酸钾的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如二噁烷的存在下反应。将该反应体系在约80℃搅拌几小时；
其中制备式II的化合物，包含方法A的步骤b、c和d。
在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物的制备方法(方法C)，包含步骤g：使式X的化合物
其中所述取代基如上述所定义，与式V的胺在常规缩合条件下反应。该反应通过将羧酸和式V的胺溶于适合的溶剂进行，所述溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应衍生物，例如(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应混合物在约-20-50℃例如-5℃-30℃例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行；
其中制备式X的化合物，包含步骤h：皂化式XI的化合物
其中所述取代基如上述所定义，RA选自C1-C7-烷基。羧酸酯的皂化在常规皂化条件下、在碱水例如氢氧化锂和有机溶剂例如二噁烷的存在下进行。
该反应可以在约室温下进行；
其中制备式XI的化合物，包含步骤i：使式VI的化合物与式III的化合物在催化剂例如Pd(0)催化剂例如Pd(PPh3)4的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下反应。在约100-120℃温度例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且能适用于本方法；
其中制备式VI的化合物，包含方法A的步骤d。
在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物的制备方法(方法D)，包含步骤a：使式II的化合物与式III的化合物反应；
其中制备式II的化合物，包含步骤j：使式XI的化合物
其中所述取代基如上述所定义，-B(OR’)2表示环状或无环硼酸或硼酸衍生物，例如频哪酸-硼，与6-溴-4-氯-喹唑啉[38267-96-8]在催化剂例如Pd(0)催化剂例如二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下反应。在约100-120℃温度例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且能适用于本方法；
其中制备式XI的化合物，包含步骤k：使式XII的化合物
其中所述取代基如上述所定义，Hal表示卤素，特别是碘或溴，与二硼衍生物例如双-(频哪酸)-二硼在催化剂例如1，1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(PdCl2(dppf)-CH2Cl2)的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水例如乙酸钾的存在下、任选地在一种或多种稀释剂例如极性溶剂例如二噁烷的存在下反应。将该反应体系在约80℃搅拌几小时；
其中制备式XII的化合物，包含步骤l：使式XIII的化合物
其中所述取代基如上述所定义，Hal表示卤素，特别是碘或溴，与式V的胺在常规缩合条件下反应。该反应通过将羧酸和式V的胺溶于适合的溶剂进行，所述溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应衍生物，例如(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应混合物在约-20-50℃例如-5℃-30℃例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
在另一个实施方案中，本发明涉及式I的化合物的制备方法(方法E)，包含步骤g：使式X的化合物
与式V的胺反应；
其中制备式X的化合物，包含步骤m：使式IV的化合物与式III的化合物在催化剂例如Pd(0)催化剂例如Pd(PPh3)4的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下反应。在约100-120℃温度例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且能适用于本方法；
其中制备式IV的化合物，包含步骤n：使式XIV的化合物
其中所述取代基如上述所定义，-B(OR’)2表示环状或无环硼酸或硼酸衍生物，例如频哪酸-硼，与6-溴-4-氯-喹唑啉[38267-96-8]在催化剂例如Pd(0)催化剂例如二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2的存在下)、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水的存在下、任选地在一种或多种稀释剂特别是极性溶剂例如乙腈的存在下反应。在约100-120℃温度例如在微波炉内搅拌该反应体系。该反应在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。这种类型的反应也称作Suzuki反应，典型的反应条件是本领域公知的且可以适用于本方法；
其中制备式XIV的化合物，包含步骤o：使式XV的化合物
其中所述取代基如上述所定义，Hal表示卤素，特别是碘或溴，与二硼衍生物例如双-(频哪酸)-二硼任选地在钯催化剂例如1，1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(PdCl2(dppf)-CH2Cl2)的存在下、任选地在一种或多种反应助剂例如碱例如碱水例如乙酸钾的存在下、任选地在一种或多种稀释剂例如极性溶剂例如二噁烷的存在下反应。将该反应体系在约80℃搅拌几小时。
保护基团：
在上述方法中，存在于起始材料中且不希望参与反应的官能团如有必要以保护形式存在，并将所存在的保护基团断裂，由此所述起始化合物也可以以盐形式存在，只要成盐基团存在且盐形式的反应是可能的。在根据需要进行的另外的反应步骤中，起始化合物中不应参与反应的官能团可以以未保护形式存在或可以例如被一个或多个保护基团保护。然后根据已知方法之一完全或部分地除去保护基团。保护基团以及引入和除去它们的方法描述于例如“Protective Groups in Organic Chemistry”，Plenum Press，London，New York1973和“Methoden der organischen Chemie”，Houben-Weyl，第4版，Vol.15/1，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart 1974和Theodora W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley&Sons，New York 1981。保护基团特征在于它们可被容易除去，即不发生不希望的继发反应，例如通过溶剂解、还原、光解或者可选地在生理学条件下除去。
本发明还包括本方法的任意变型，其中使用可在其任意阶段获得的中间体产物作为起始材料并进行其余步骤，或者其中起始材料在反应条件下在原位形成，或者其中反应成分以其盐或光学纯的对映体形式使用。
本发明化合物和中间体还可以根据本领域技术人员一般已知的方法互相转化。
中间体和终产物可根据标准方法例如使用色谱方法、分配方法、(重)结晶等进行后处理和/或纯化。
下列一般适用于本文前面和后文提及的所有方法。
所有上面提及的方法步骤可在本领域技术人员已知的反应条件下进行，包括明确提及的那些反应条件，不存在或通常存在溶剂或稀释剂、包括例如对所用试剂惰性且溶解它们的溶剂或稀释剂下、不存在或存在催化剂、缩合剂或中和剂例如离子交换剂如阳离子交换剂、如以H+形式，取决于反应和/或反应物的性质、在低温、正常温度或高温例如在约-100℃至约190℃的范围、包括例如约-80℃至约150℃、例如-80至-60℃、在室温、在-20至40℃或在回流温度、在大气压或在密闭的容器中，酌情在压力下和/或在惰性气氛下，例如在氩气或氮气气氛下。
在反应的所有阶段，所形成的异构体混合物可例如用与本文上述类似的方法分离成单个异构体例如非对映体或对映体，或被分离成任何所需的异构体混合物例如外消旋体或非对映体混合物。
可从中选择适用于任何特定反应的溶剂的那些溶剂，包括明确提及的那些溶剂，或例如水；酯，例如低级烷基-低级链烷酸酯如乙酸乙酯；醚，例如脂族醚如乙醚，或环醚例如四氢呋喃或二噁烷；液态芳族烃，例如苯或甲苯；醇，例如甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈，例如乙腈；卤化烃，例如二氯甲烷或氯仿；酰胺，例如二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺；碱，例如杂环氮碱，例如吡啶或N-甲基吡咯烷-2-酮；羧酸酐，例如低级链烷酸酐，例如乙酸酐；环烃、直链或支链烃，例如环己烷、己烷或异戊烷、甲基环己烷；或那些溶剂的混合物，例如水溶液，除在方法描述中另有指明之外。这类溶剂混合物也可用于后处理例如色谱法或分配。
化合物、包括其盐也可以以水合物形式获得，或其晶体可例如包括用于结晶的溶剂。可以存在不同的结晶形式。
本发明还涉及那些方法形式，其中在方法的任何阶段可作为中间体获得的化合物用作起始材料并且进行其余方法步骤，或其中起始材料在反应条件下形成或以衍生物形式、例如以被保护的形式或以盐的形式使用，或者可通过根据本发明的方法获得的化合物在方法条件下产生并在原位进一步处理。
合成本发明化合物所用的所有起始材料、构建单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂或者可市售可得或者可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法生产(Houben-Weyl第4版1952，Methods of OrganicSynthesis，Thieme，Volume21)。
磷酸肌醇-3激酶(PI3K)家族的成员涉及于很多不同细胞类型中的细胞生长、分化、存活、细胞骨架重塑和胞内细胞器转运有关(Okkenhaug和Wymann，Nature Rev.Immunol.3：317(2003)。
迄今为止，八种哺乳动物PI3K已被鉴定，基于其基因序列、结构、衔接分子、表达、活化模式和优先底物被分成三种主要的类别(I、II和III)。
PI3Kδ是属于I类PI3K家族(PI3Kα、β、γ和δ)的脂质激酶，其产生酪氨酸激酶相关受体下游的第二信使信号。
PI3Kδ是由衔接蛋白和p110δ催化亚基组成的杂二聚体，其将磷脂酰肌醇-4，5-二-磷酸(PtdInsP2)转化成磷脂酰肌醇-3，4，5-三-磷酸(PtdInsP3)。效应蛋白与PtdInsP3相互作用并触发与细胞活化、分化、迁移和细胞存活有关的特定信号传导途径。
p110δ和p110γ催化亚单位的表达对白细胞是优先的。也在平滑肌细胞、肌细胞和内皮细胞中观察到表达。相反，p110α和p110β由所有细胞类型表达(Marone等人Biochimica et Biophysica Acta1784：159(2008))。
PI3Kδ与B细胞发育和功能有关(Okkenhaug等人Science297：1031(2002))。
B细胞还在许多自身免疫性和过敏性疾病的发病机理以及移植排斥过程中起关键作用(Martin和Chan，Annu.Rev.Immunol.24：467(2006))。
趋化性涉及与很多自身免疫性或炎性疾病、血管发生、侵袭/转移、神经退化或创伤愈合有关(Gerard等人Nat.Immunol.2：108(2001))。在白细胞迁移中响应于趋化因子的短暂特定事件完全依赖于PI3Kδ和PI3Kγ(Liu等人Blood 110：1191(2007))。
PI3Kα和PI3Kβ在维持体内稳态中起重要作用，并且这些分子靶标的药理学抑制已与癌症治疗相关(Maira等人Expert Opin.Ther.Targets12：223(2008))。
PI3Kα涉及于胰岛素信号传导和细胞生长途径(Foukas等人Nature441：366(2006))。期望PI3Kδ同工型选择性抑制可避免潜在的副作用例如高血糖症和代谢或生长失调。
本发明在第三方面涉及本发明化合物作为药物的用途。特别地，式I化合物具有有价值的药理学性质，如前文和后文所述。本发明因此提供：
■如本文定义的式(I)化合物，其作为药物/用作药物；
■如本文定义的式(I)化合物，其作为药剂/用作药剂；
■如本文定义的式(I)化合物，其用于预防和/或治疗由PI3K酶活性、优选由PI3Kδ活性介导的病症、疾病或障碍；
■如本文定义的式(I)化合物用于制备预防和/或治疗由PI3K酶活性、优选由PI3Kδ活性介导的病症、疾病或障碍的药物中的用途；
■如本文定义的式(I)化合物用于预防和/或治疗由PI3K酶活性、优选由PI3Kδ活性介导的病症、疾病或障碍的用途；
■如本文定义的式(I)化合物用于抑制PI3K酶、优选PI3Kδ的用途；
■如本文定义的式(I)化合物用于治疗选自以下的障碍或疾病的用途：自身免疫疾病、炎性疾病、过敏性疾病、呼吸道疾病例如哮喘和COPD、移植排斥、例如造血起源的癌症或实体瘤；
■调节受试者PI3K酶活性、优选由PI3Kδ活性的方法，包括对受试者施用治疗有效量的如本文所定义的式I化合物；
■治疗由PI3K酶、优选由PI3Kδ介导的障碍或疾病的方法，包括对受试者施用治疗有效量的如本文所定义的式(I)化合物的步骤；
■抑制细胞中PI3K酶、优选PI3Kδ的方法，包括使所述细胞接触有效量的如本文所定义的式I化合物。
如本文所用的术语“受试者”是指动物。典型地所述动物是哺乳动物。受试者也是指例如灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述受试者是灵长类动物。在另外其他实施方案中，所述受试者是人。
如本文所用的术语“抑制”是指特定的病症、症状或障碍或疾病的减轻或遏抑，或者生物学活性或过程的基线活性的显著降低。
如本文所用的术语“治疗”任何疾病或障碍在一个实施方案中指改善疾病或障碍(即减缓或阻止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”指缓和或改善至少一种身体参数，包括可能不为患者所察觉的身体参数。在又一个实施方案中，“治疗”指从身体上(例如稳定可察觉的症状)或生理学上(例如稳定身体的参数)或上述两方面调节疾病或障碍。在又一个实施方案中，“治疗”指预防或延迟疾病或障碍的发作、发生或恶化。
如本文所用，如果受试者在生物学上、医学上或生活质量上受益于治疗，则此类受试者是“需要”此类治疗。
术语“施用”主题化合物意指向需要治疗的受试者提供本发明化合物及其前药。“与一种或多种其他治疗剂组合施用”包括同时(并行)和以任意次序连贯施用，以及以任意施用途径施用。
本发明涉及新喹唑啉衍生物在预防和/或治疗由PI3K酶活性介导的病症、疾病或障碍中的用途。
本发明包括治疗病症、疾病或障碍的方法，在所述病症、疾病或障碍中，一种或多种B细胞炎性功能如抗体生成、抗体呈递、细胞因子生成或淋巴器官形成异常或不可取的疾患，包括类风湿性关节炎、寻常性天疱疮、特发性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、干燥综合征、自身免疫性溶血性贫血、ANCA相关性血管炎、冷球蛋白血症、血栓性血小板减少性紫癜、慢性自身免疫性荨麻疹、过敏症(特发性皮炎、接触性皮炎、过敏性鼻炎)、古德帕斯丘综合征以及造血源的癌症。
本发明包括治疗病症、疾病或障碍的方法，其中一种或多种中性白细胞的炎性功能例如超氧化物释放、受刺激的胞吞作用或化学趋化迁移异常或是不期望的，包括类风湿性关节炎、脓毒症、肺部疾病或呼吸道疾病，例如哮喘，炎症性皮肤病，例如银屑病等。
本发明包括治疗病症、疾病或障碍的方法，其中一种或多种嗜碱性粒细胞和肥大细胞的炎性功能例如化学趋化迁移或过敏原-IgE-介导的脱粒异常或是不期望的，包括过敏性疾病(特应性皮炎、接触性皮炎、过敏性鼻炎)和其他疾病，例如COPD、哮喘或肺气肿。
本发明包括治疗病症、疾病或障碍的方法，其中一种或多种T细胞的炎性功能例如细胞因子产生或细胞介导的细胞毒性异常或是不期望的，包括类风湿性关节炎、多发性硬化、急性或慢性细胞组织或器官移植物排斥或造血来源的癌症。
此外，本发明包括治疗神经变性疾病、心血管疾病和血小板聚集的方法。
在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗上文提及的病症或疾病之一、尤其是响应于PI3K酶抑制的疾病的方法。式I化合物或其药学可接受的盐可以其自身或药物组合物的形式向需要此类治疗的温血动物例如人预防或治疗地施用，优选以有效对抗所述疾病的量施用，该化合物尤其以药物组合物形式施用。
在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物或其药学可接受的盐以其自身或以具有至少一种药学可接受的载体的药物组合物形式用于治疗性和预防性管理上文提及的一种或多种由PI3K酶介导的疾病的用途。
在另一实施方案中，本发明涉及式I化合物或其药学可接受的盐、尤其是据称是优选的式I化合物或其药学可接受的盐在制备用于治疗性和预防性管理上文提及的一种或多种疾病、尤其是选自下列的障碍或疾病的药物组合物中的用途：自身免疫障碍、炎性疾病、过敏性疾病、呼吸道疾病例如哮喘和COPD、移植排斥、例如造血起源的癌症或实体瘤。
本发明在第四方面涉及包含本发明化合物的药物组合物。本发明因此提供
■包含(即含有或由其组成)如本文定义的化合物和一种或多种载体/赋形剂的药物组合物；
■包含治疗有效量的如本文定义的式I化合物和一种或多种载体/赋形剂的药物组合物。
如本文所用的术语“药学可接受的载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣剂、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗细菌剂、抗真菌剂)、等张剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、染料等物质及其组合，如本领域普通技术人员已知的那样(参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Printing Company，1990，第1289-1329页)。除了任意常规载体与活性成分不相容的情况外，涵盖其在治疗或药物组合物中的用途。
本发明提供了包含本发明化合物和药学可接受的载体的药物组合物。药物组合物可以被配制以用于特定的施用途径，例如口服施用、胃肠道外施用和直肠施用等。此外，本发明的药物组合物还可以被制备为固体形式(包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、粉剂或栓剂)，或者液体形式(包括但不限于溶液剂、混悬剂或乳剂)。药物组合物可以经过常规的药物操作如灭菌，和/或可以含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。
典型地，药物组合物是包含活性成分和如下成分的片剂和明胶胶囊：
a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；
b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁盐或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂还包含
c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还包含
d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐或者泡腾混合物；和/或
e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
可以按照本领域已知的方法对片剂进行薄膜包衣或肠溶包衣。
适合口服施用的组合物包括片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂或者糖浆剂或酏剂形式的有效量的本发明化合物。按照本领域已知的制备药物组合物的任意方法来制备用于口服使用的组合物，这类组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的物质，以提供药学上美观和可口的制剂。片剂可含有与适合制备片剂的无毒、药学可接受的的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂是例如：惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂是未被包衣的或者通过已知技术对其进行包衣，以延缓在胃肠道中的崩解和吸收并由此提供历经较长时间的持久作用。例如，可以采用时间延迟材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服使用的制剂可以被制备成硬明胶胶囊剂，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者被制备成软明胶胶囊剂，其中活性成分与水或油介质如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
某些可注射的组合物优选水性等张溶液或混悬液，栓剂可由脂肪乳剂或混悬剂有利地制备。所述的组合物可以被灭菌和/或含有辅剂如防腐剂、稳定剂、润湿剂或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，它们还可以含有其它在治疗上有价值的物质。所述组合物可分别按照常规的混合、制粒或包衣方法制备，并且含有约0.1-75％或包含约1-50％的活性成分。
适合透皮应用的组合物包含有效量的本发明化合物和适合载体。适用于透皮递送的载体包括可吸收的药理学可接受的溶剂，以帮助穿过宿主的皮肤。例如，透皮装置是绷带剂的形式，该绷带剂包含背衬部分、含有化合物和任选的载体的贮库、任选的速率控制屏障(以便历经较长时间以受控和预定的速率递送化合物至宿主皮肤)和固定该装置于皮肤的器具。
适合局部应用、例如应用于皮肤和眼的组合物包括水性溶液剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、凝胶剂或可喷雾的制剂，例如用于通过气雾剂等递送的那些制剂。这类局部传递系统将特别适于皮肤应用，例如用于治疗皮肤癌、例如在防晒霜、洗剂、喷雾剂中的预防性应用等。因此，它们特别适用于本领域众所周知的局部制剂，包括化妆品。这类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
如本文所用，局部应用也可涉及吸入或鼻内应用。它们可方便地以干粉形式(单独地或作为混合物、例如与乳糖的干掺合物递送，或为混合型成分颗粒、例如与磷脂的颗粒)由干粉吸入器递送，或为气雾剂喷雾呈递形式由加压容器、泵、喷雾器、雾化器或喷射器递送，使用和不使用适宜的推进剂。
本发明还提供了包含作为活性成分的本发明化合物的无水药物组合物和剂型，因为水可以促进一些化合物的降解。
可以使用无水或含水量低的成分以及低水分或低湿度的条件来制备本发明的无水药物组合物和剂型。应当制备和贮存无水的药物组合物，以便保持其无水的性质。因此，使用已知可阻止与水接触的材料来包装无水组合物，以便它们可以被包含在适宜的制剂药盒中。适宜包装的实例包括但不限于密封的箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和窄条袋。
本发明还提供了包含一种或多种降低作为活性成分的本发明化合物分解速率的试剂的药物组合物和剂型。这种试剂在本文中称为“稳定剂”，包括但不限于抗氧化剂如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。
生理学上可接受的载体的实例包括缓冲剂例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸；低分子量(低于约10个残基)多肽；蛋白质如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他糖类，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂例如EDTA；糖醇例如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子例如钠；和/或非离子型表面活性剂例如聚乙二醇(PEG)和
适合的赋形剂/载体可以是任何固态、液态、半固态赋形剂或在气雾剂组合物的情况下，是本领域技术人员通常可用的气态赋形剂。
固态药用赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、氯化钠、脱脂奶粉等。
液态和半固态赋形剂可选自甘油、丙二醇、水、乙醇和各种油类，包括石油、动物、植物或合成来源的油类，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选的液态载体、特别是用于注射溶液的液体载体包括水、盐水、葡萄糖水溶液和二醇。
压缩气体可用于分散气雾剂形式的式(I)化合物。适用于此目的的惰性气体是氮、二氧化碳等。其他适合的药用赋形剂和其制剂描述于由E.W.Martin编辑的Remington′s Pharmaceutical Sciences(MackPublishingCompany，第18版，1990)。
活性成分的剂量取决于待治疗的疾病和种属、年龄、重量、和个体状况、个体药动学数据和施用方式。制剂中化合物的量可在本领域技术人员采用的全部范围内变化。典型地，制剂将含有以重量百分比(wt％)计约0.01-99.99wt％的式(I)化合物(基于总制剂)，其余为一种或多种适合的药用赋形剂。
包含与至少一种药学可接受的载体(例如赋形剂和/或稀释剂)结合的如本文定义的式(I)化合物的药物组合物可以常规方法制备，例如借助于常规混合、制粒、包衣、溶解或冻干工序。
在另一实施方案中，本发明涉及用于向罹患响应于PI3K酶抑制的疾病的温血动物、尤其是人或市售可用的哺乳动物施用的药物组合物，其包含有效量的用于抑制PI3K酶的式I化合物或其药学可接受的盐，连同至少一种药学可接受的载体。
在另一实施方案中，本发明涉及用于预防性或尤其治疗性管理需要这种治疗的温血动物、尤其是人或市售可用的哺乳动物的障碍或疾病的药物组合物，所述障碍或疾病选自自身免疫障碍、炎性疾病、过敏性疾病、呼吸道疾病例如哮喘和COPD、移植排斥、例如造血源的癌症或实体瘤。
本发明在第五方面涉及包含式I化合物和一种或多种其他活性成分的组合。本发明因此提供
■组合，特别是药物组合，其包含治疗有效量的式I化合物和一种或多种治疗活性剂，例如免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂或化疗剂，例如如下所示；
■组合的药物组合物，其适于同时或相继施用，其包含治疗有效量的如本文定义的式(I)化合物；治疗有效量的一种或多种组合伴侣例如免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂或化疗剂，例如如下所示；一种或多种药学可接受的赋形剂；
■如本文定义的组合的药物组合物，其(i)作为药物(ii)用于治疗由PI3K酶介导的疾病，(iii)用于治疗由PI3K酶介导的疾病的方法。
“组合”意指一种剂量单位形式的固定组合，或者用于组合施用的成套药盒，其中式(I)化合物和组合伴侣可以在同一时间单独施用，或者在一定的时间间隔内分别施用，所述时间间隔尤其应当使得各组合伴侣显示出合作效应，例如协同效应。
术语本发明化合物的“治疗有效量”是指将引发受试者的生物学或医学响应、例如降低或抑制酶或蛋白活性、或改善症状、缓和病状、减缓或延缓疾病进展、或预防疾病等的本发明化合物的量。在一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于受试者时对以下各项有效的本发明化合物的量：(1)至少部分缓和、抑制、预防和/或改善(i)由I3Kδ失调介导的或(ii)与PI3Kδ失调有关的或(iii)特征在于PI3Kδ失调的病症或障碍或疾病；或(2)减轻或抑制PI3Kδ活性。在另一个非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当施用于细胞或组织或非细胞生物学材料或介质时至少部分减轻或抑制PI3Kδ有效的本发明化合物的量。
式I化合物可以以单独的活性成分施用或与其他药物(例如作为佐剂)例如免疫抑制剂或免疫调节剂或其他抗炎剂联合施用，例如用于治疗或预防同种-或异种移植物急性或慢性排斥或炎性病症或自身免疫障碍、或与化疗剂例如恶性细胞抗-增殖剂联合施用。例如，式I化合物可用于与以下各项联合使用：钙调磷酸酶抑制剂，例如环孢菌素A或FK506；mTOR抑制剂，例如雷帕霉素、40-O-(2-羟基乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578、AP23573、TAFA-93、biolimus-7或biolimus-9；具有免疫抑制性质的子囊霉素，例如ABT-281、ASM981等；皮质甾类；环磷酰胺；硫唑嘌呤(azathioprene)；氨甲喋呤(methotrexate)；来氟米特(leflunomide)；咪唑立宾(mizoribine)；麦考酚酸(mycophenolic acid)或盐；麦考酚酯吗啉乙酯；15-脱氧精胍菌素或免疫抑制性同源物、类似物或其衍生物；PKC抑制剂，例如在WO 02/38561或WO 03/82859中所公开，例如实施例56或70的化合物；JAK3激酶抑制剂，例如N-苄基-3，4-二羟基-亚苄基-氰基乙酰胺α-氰基-(3，4-二羟基)-]N-苄基肉桂酰胺(Tyrphostin AG 490)、灵菌红素25-C(PNU156804)、[4-(4′-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P131)、[4-(3′-溴-4′-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉](WHI-P154)、[4-(3′，5′-二溴-4′-羟基苯基)-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉]WHI-P97、KRX-211、3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈，以游离形式或药学可接受的盐形式，例如单-柠檬酸盐(也称为CP-690，550)、或如WO 04/052359或WO05/066156公开的化合物；免疫抑制剂单克隆抗体，例如白细胞受体的单克隆抗体，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD25、CD28、CD40、CD45、CD52、CD58、CD80、CD86或其配体；其他免疫调节性化合物，例如具有至少一部分CTLA4胞外结构域或其突变体的重组结合分子，例如与非-CTLA4蛋白序列连接的CTLA4的至少胞外结构域或其突变体，例如CTLA4Ig(例如称为ATCC68629)或其突变体，例如LEA29Y；粘着分子抑制剂，例如LFA-1拮抗剂、ICAM-1或-3拮抗剂、VCAM-4拮抗剂或VLA-4拮抗剂；或化疗剂，例如紫杉醇、吉西他滨、顺铂、多柔比星或5-氟尿嘧啶；或抗组胺剂；或镇咳药、或支气管扩张剂；或血管紧张素受体阻滞剂；或抗-感染剂。
当式I化合物与其他免疫抑制剂/免疫调节剂、抗炎剂、化疗剂或抗感染剂治疗联合施用时，共施用的免疫抑制剂、免疫调节剂、抗炎剂、化疗剂或抗感染剂化合物的剂量当然根据所用共用药物的类型、例如其是否是甾类或钙调磷酸酶抑制剂、所用的具体药物、待治疗的病症等等而变化。
实验细节：
只要不特别描述起始材料的制备，则化合物是已知的或可通过本领域已知的方法或如下文所述类似地制备。
下列实施例阐述本发明而无任何限制。
缩写：
Ar          芳基
BOC         碳酸叔丁酯
br.s.       宽单峰
CH2Cl2      二氯甲烷
CH3CN       乙腈
d           双峰
dd          双峰的双峰
DIPEA       N-乙基二异丙胺
DME         1，4-二甲氧基乙烷
DMF         N，N-二甲基甲酰胺
DMSO        二甲亚砜
dt          三峰的双峰
EtOAc       乙酸乙酯
FCC         快速柱色谱法
h           小时
HBTU        (2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HPLC        高压液相色谱法
HT          高通量
H2O         水
K           开尔文氏绝对温度
LC          液相色谱法
M           摩尔
MeCN        乙腈
MeOD        甲醇-d4
MeOH        甲醇
MgSO4       硫酸镁
MHz         兆赫兹
MS          质谱
m           多重峰
min.        分钟
mw          微波
Na2SO4      硫酸钠
NEt3        三乙胺
NH3         氨
NMR         核磁共振
PL-HCO3MP   聚合物负载的碳酸氢盐大孔聚苯乙烯
PL-SO3HMP   聚合物负载的磺酸大孔聚苯乙烯
rt          室温
Rt          保留时间
s           单峰
SCx-2       聚合物负载的磺酸大孔聚苯乙烯
t           三重峰
TFA         三氟乙酸
THF         四氢呋喃
UPLC        超高效液相色谱法
使用AutoNom命名所有化合物。
LC特异性：
LC方法1(Rt (1) )：在40℃烘箱温度，通过具有XBridge MS柱C18 30/3.02.5m的Waters HPLC alliance-HT，应用梯度H2O(+0.1％甲酸)/CH3CN(+0.1％甲酸)90/10-5/95(1.7分钟和1.2mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法2(Rt (2) )：在40℃烘箱温度，通过具有XBridge MS柱C18 30/3.02.5m的Waters HPLC alliance-HT系统，应用梯度H2O(+0.1％TFA)/CH3CN(+0.1％TFA)90/10-5/95(1.7分钟和1.2mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法3(Rt (3) )：在40℃烘箱温度，通过具有XBridge MS柱C18 30/3.02.5m的Waters HPLC alliance-HT系统，应用梯度H2O(+0.1％TFA)/CH3CN(+0.1％TFA)95/5-5/95(3.7分钟和1.2mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法4(Rt (4) )：在45℃烘箱温度，通过具有SunFire柱C18 20X4.6mmm的Waters HPLC alliance-HT系统，应用梯度H2O(+0.1％TFA)/CH3CN(+0.1％TFA)95/5-0/100(4分钟和1mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法5(Rt (5) )：在30℃烘箱温度，通过具有Acquity UPLC BEH C1850X2.1mm，1.7um柱的Waters UPLC-MS W系统，应用梯度H2O(+0.1％甲酸)/CH3CN(+0.1％甲酸)95/5-10/90(4分钟和0.7mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法6(Rt (6) )：在30℃烘箱温度，通过具有Acquity UPLC BEH C1850X2.1mm，1.7nm柱的Waters UPLC-MS系统，应用梯度H2O(+0.1％甲酸)/CH3CN(+0.1％甲酸)80/20-5/95(4.2分钟和0.7mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法7(Rt (7) )：在40℃烘箱温度，通过具有XBridge MS柱C18 30/3.02.5m的Waters HPLC alliance-HT系统，应用梯度H2O(+0.1％甲酸)/CH3CN(+0.1％甲酸)95/5-5/95(3.7分钟和1.2mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法8(Rt (8) )：在40℃烘箱温度，通过具有XBridge MS柱C18 30/3.02.5m的Waters HPLC alliance-HT系统，应用梯度H2O(+0.1％甲酸)/CH3CN(+0.1％甲酸)99/1-5/95(2.2分钟和1.2mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法9(Rt (9) )：在40℃烘箱温度，通过具有XBridge MS柱C18 30/3.02.5m的Waters HPLC alliance-HT系统，应用梯度H2O(+0.1％TFA)/CH3CN(+0.1％TFA)99/1-5/95(2.2分钟和1.2mL/min.作为溶剂流速)获得保留时间(Rt)。
LC方法10(Rt (10) )：使用Waters HPLC-MS仪器得到FIA-MS(MS)。
中间体化合物的制备
中间体1：5-溴-2-甲氧基-3-三氟甲基-吡啶
将2-甲氧基-3-三氟甲基-吡啶(2.7g，14.79mmol)和1，3-二溴-5，5-二甲基乙内酰脲(5.28g，18.48mmol)放入圆底烧瓶中。向该混合物中缓慢地加入40ml TFA。将该混合物在环境温度搅拌(16h)。反应完成后，真空蒸发TFA溶剂，通过添加饱和NaHCO3将得到的残余物中和至pH6-7。用DCM将水层萃取2次，用盐水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥，真空浓缩，得到油状物和白色固体的混合物。将残余物再溶于20％乙酸乙酯/庚烷(50ml)，过滤出不溶性白色固体。浓缩滤液，然后通过硅胶快速色谱法纯化(EtOAc/庚烷5/95)，得到5-溴-2-甲氧基-3-三氟甲基-吡啶，为无色液体(2.08g，52％收率)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm4.03(s，3H)7.95(d，1H)8.4(d，1H)。
2-甲氧基-3-三氟甲基-吡啶
将2-氯-3-三氟甲基-吡啶(3g，16.53mmol)溶于30ml甲醇钠的甲醇溶液(5.4M)。将该混合物在环境温度搅拌2天。此后，将该反应体系置于冰中，用DCM萃取3次。用盐水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥，真空浓缩，得到2-甲氧基-3-三氟甲基-吡啶，为亮色液体(2.7g，89％收率)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm3.98(s，3H)7.2(dd，1H)8.11(d，1H)8.45(d，1H)。MS：178.1[M+1]+，Rt(1)＝1.29min。
中间体2：5-溴-2-乙氧基-3-三氟甲基-吡啶
根据对中间体1所述的方法、使用乙醇钠的乙醇溶液而不是甲醇钠溶液制备中间体2。1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6，298K)：ppm1.33(t，4H)4.45(q，3H)8.31(s，1H)8.58(s，1H)。
中间体3：1-[4-(5-溴-2-甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-基]-乙酮
在rt向5-溴-2-甲基苯甲酸(2.0g，9.30mmol)在DCM(25mL)中的混合物中加入DIPEA(3.25mL，18.60mmol)和HBTU(4.23g，11.16mmol)。将该反应混合物在rt搅拌20min。然后向该混合物中加入1-(哌嗪-1-基)乙酮(1.311g，10.23mmol)，将该反应混合物在rt搅拌1小时。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用DCM萃取。用盐水将有机层洗涤2次，通过相分离柱干燥，蒸发。通过使用Biotage Isolera系统的快速色谱法纯化(胺官能化硅胶KP-NH，用环己烷/EtOAc0-100％洗脱)，得到标题化合物(2.475g，82％收率)，为白色泡沫体。MS：325.4[M+1]+，Rt(2)＝0.94min。
中间体4：1-[4-(3-溴-5-三氟甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-基]-乙酮
根据对中间体3所述的方法，使用3-溴-5-三氟甲基苯甲酸而不是5-溴-2-甲基苯甲酸制备中间体4。MS：379.3-381.3[M+H]+，Rt(2)＝1.129min。
中间体5：1-[4-(3-溴-5-甲氧基-苯甲酰基)-哌嗪-1-基]-乙酮
根据对中间体3所述的方法。使用3-溴-5-甲氧基苯甲酸(中间体17)而不是5-溴-2-甲基苯甲酸制备中间体5。MS：343.2[M+H]+，Rt(2)＝1.02min。
中间体6：1-[4-(3-溴-5-甲基-苯甲酰基)-哌嗪-1-基]-乙酮
根据对中间体3所述的方法。使用3-溴-5-甲氧基苯甲酸(中间体17)而不是5-溴-2-甲基苯甲酸制备中间体6。MS：325.2-327.1[M+H]+，Rt(2)＝0.98min。
中间体7：1-[4-(3-溴-5-氯-苯甲酰基)-哌嗪-1-基]-乙酮
根据对中间体3所述的方法，使用3-溴-5-甲氧基苯甲酸(中间体17)而不是5-溴-2-甲基苯甲酸制备中间体7。MS：345.2-347.1-349.0[M+H]+，Rt(2)＝1.02min。
中间体8：N-(4-溴-2-(三氟甲基)苯基)甲磺酰胺
在0-5℃向2-氨基-5-溴三氟甲苯(1.0g，4.17mmol)在DCM(10mL)中的混合物中加入NEt3(1.16mL，8.33mmol)，然后滴加甲磺酰氯(0.389mL，5mmol)。将该反应混合物在rt搅拌4天。2天后，再加入NEt3(1.16mL，8.33mmol)。3天后不再放出气体，再加入NEt3(0.580mL，4.17mmol)和甲磺酰氯(0.324mL，4.17mmol)。反应不完全，然后将该反应混合物在微波炉中在110℃加热20min。不再有气体放出，由此终止反应。用水和DCM稀释该反应混合物。分离各层。用水洗涤有机层，用MgSO4干燥，蒸发。通过使用CombiFlash Companion ISCO系统的快速色谱法纯化(Redisep硅胶40g柱，用环己烷/EtOAc 100∶0-70∶30洗脱)，未得到纯化合物。通过制备型HPLC、使用Gilson系统纯化(SunFire C18柱，用H2O+0.1％TFA/CH3CN20％-85％洗脱)，得到标题化合物(404mg，31％收率)，为白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm3.12(s，3H)7.55(d，1H)7.91(d，1H)7.92(s，1H)9.56(s，1H)。MS(10)：316.3-318.2[M-1]-。
中间体9：N-(3-溴-5-(三氟甲基)苯基)甲磺酰胺
在0-5℃向3-氨基-5-溴三氟甲苯(1.0g，4.17mmol)在吡啶(10mL)中的混合物中滴加甲磺酰氯(0.389mL，5mmol)。将该反应混合物在rt搅拌4天。反应不完全，然后将该反应混合物在微波炉中在150℃加热15min。不再有气体放出，由此终止反应。浓缩该反应混合物至干，将残余物与甲苯一起共蒸发。然后用饱和NaHCO3水溶液稀释残余物，用DCM萃取。用MgSO4干燥有机层，蒸发。通过使用CombiFlash Companion ISCO系统的快速色谱法纯化(Redisep硅胶12g柱，用环己烷/EtOAc 100∶0-70∶30洗脱)，得到标题化合物(1.05g，79％收率)，为白色固体。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm3.14(s，3H)7.48(s，1H)7.64(s，1H)7.68(s，1H)10.42(s，1H)。MS(10)：316.3-318.2[M-1]-。
中间体10：2-二氟甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)- 吡啶
在密封试管中加入在乙腈(5mL)中的2-羟基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(300mg，1.357mmol)、氯二氟乙酸钠(320mg，2.036mmol)。将该混悬液加热至80℃，搅拌过夜。将该反应混合物冷却至rt，用EtOAc稀释，用NaHCO3水溶液和盐水洗涤。用MgSO4干燥有机层，过滤，蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，95/5)，得到标题化合物(197mg，53％收率)。MS：272.8[M+H]+，Rt(6)＝3.12min。
中间体11：6，6-二氟-[1，4]二氮杂庚环
按照文献方法制备该化合物：Wellner，E.；Sandin，H.；Synthesis；2002；2；223-226。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm3.47(s，4H)3.89(t，4H)。
根据下述一般方法制备本文所述的硼酸或硼酸酯类。
方案1
a)双-(频哪酸)-二硼，PdCl2(dppf)-CH2Cl2，KOAc，二噁烷，80℃，16h。
中间体12：2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-烟腈
溶液A：将PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.958g，1.174mmol)、KOAc(6.91g，70.4mmol)和双-(频哪酸)-二硼(7.15g，28.2mmol)放入250mL烧瓶，脱气。
溶液B：在单独的小瓶中，将5-溴-2-甲氧基烟腈(5g，23.47mmol)溶于100mL无水二噁烷。将溶液B加入到溶液A中，将该反应混合物加热至80℃16h。将该反应混合物冷却至rt，用EtOAc稀释，过滤出剩余的固体。真空蒸发滤液，得到黑色油状物，通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，95/5)，得到标题化合物(5.7g，89％收率)，为浅褐色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.31(s，12H)4.03(s，3H)8.31(s，1H)8.62(s，1H)。MS：261.5[M+1]+，Rt(2)＝1.47min。
使用与用于中间体12类似的方法、使用相应的芳基溴作为原料制备中间体13-22。
(1)LC方法1，(2)LC方法2
中间体23：3-溴-5-甲氧基苯甲酸
在105℃向剧烈搅拌的1-溴-3-甲氧基-5-甲基苯(1g，4.97mmol)、吡啶(3.22mL，39.8mmol)和水(8ml)的混合物中加入小部分KMnO4(3.14g，19.89mmol)。将变成黑色混悬液的混合物在105℃搅拌24小时，然后冷却至RT，用Hyflo过滤。用EtOAc将黑色残余物洗涤几次。然后用EtAOc稀释滤液，用2M HCl溶液洗涤。用硫酸钠干燥有机层，过滤，浓缩，得到标题化合物(281mg，24％收率)，为白色固体。MS：229.1[M+H]+，Rt(1)＝1.18min。
最终化合物的制备
方案2
a)在常规的磷酰氯条件下，通过在稀释(例如在CH2Cl2中)或净磷酰氯中回流加热或在130℃下加热进行6-溴-3H-喹唑啉-4-酮的氯化。b)使用常规Suzuki条件、使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行6-溴-4-氯-喹唑啉与3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸或3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌。优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中搅拌该反应体系。c)在常规皂化条件下皂化羧酸酯，其中优选使用可能的碱水氢氧化锂和有机溶剂，例如优选二噁烷。该反应优选在室温下进行。d)优选在常规缩合条件下使羧酸与式R”’NHR”的胺类缩合。可以通过将羧酸和式R”’NHR”的胺溶于适合的溶剂进行反应，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。优选将该反应混合物在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温搅拌。该反应优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。e)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R-B(OR’)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规Suzuki的条件下使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌该反应体系。该反应优选可以在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案2中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例1：5-{4-[3-(4-乙酰基-哌嗪-1-羰基)-苯基]-喹唑啉-6-基}-2-甲氧基-烟腈
向1-{4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(100mg，0.228mmol)、2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-烟腈(89mg，0.273mmol)和Pd(PPh3)4(13.14mg，0.011mmol)的混合物中加入3mL DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.455mL，0.455mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至140℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(47mg，41％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.98(br.s.，3H)3.37-3.70(m，8H)4.07(s，3H)7.71(dt，1H)7.75(t，1H)7.91(br.s.，1H)8.04(dt，1H)8.25(d，1H)8.35(br.s.，1H)8.43(dd，1H)8.80(br.s.，1H)8.92(br.s.，1H)9.41(s，1H)。MS：493.2[M+1]+，Rt(1)＝1.14min。
1-{4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮
向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸(2g，6.08mmol)在60mL CH2Cl2中的溶液中加入HBTU(2.53g，6.68mmol)和DIPEA(2.122mL，12.15mmol)。将该反应混合物在rt搅拌10min，在rt加入1-哌嗪-1-基-乙酮(0.935g，7.29mmol)，将该反应混合物在rt再搅拌2h。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，95/5)，得到标题化合物(3.03mg，91％纯度(HPLC)，定量收率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.03(br.s.，3H)3.52(br.s.，8H)7.69-7.76(m，2H)7.84(s，1H)7.91(d，1H)8.09(d，1H)8.19-8.22(m，2H)9.43(s，1H)。MS：439.6-441.8[M+1]+，Rt(2)＝1.02min。
3-(6-嗅-喹唑啉-4-基)-苯甲酸
在rt向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸乙酯(1.41g，4.11mmol)在二噁烷(45mL)中的溶液中加入1M LiOH.H2O水溶液(8.22ml，8.22mmol)，将该反应混合物在rt搅拌3h。用1M HCl水溶液(5mL)使反应停止，过滤形成的沉淀，真空干燥，得到标题化合物(880mg，65％收率)，为淡黄色固体。用EtOAc萃取滤液，用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到标题化合物(555mg，35％收率)，为淡黄色固体。合并两次分离的固体，得到标题化合物，为淡黄色固体(880+550mg＝1.43g，定量收率)。MS：331.0[M+1]+，Rt(1)＝1.14min。
3-(6-嗅-喹唑啉-4-基)-苯甲酸乙酯
向6-溴-4-氯-喹唑啉(2g，8.21mmol)、3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸(1.673g，8.62mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.288g，0.411mmol)和K3PO4(2.62g，12.32mmol)的混合物中加入16mL乙腈。给该反应混合物通氩气，加入2mL水，覆盖试管，使用微波炉加热至100℃15min，然后冷却至rt。过滤形成的黄色固体，用乙醚洗涤，真空干燥，得到标题化合物(1.54g)，为黄色固体。用EtOAc稀释滤液，用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。将得到的残余物在MeOH中研磨，得到标题化合物，为黄色固体(580mg)。合并两次固体，得到2.12g标题化合物，为黄色固体。1H-NMR(400MHz，MeOD，298K)：δppm1.42(t，3H)4.43(q，2H)7.77(t，1H)7.97-8.07(m，2H)8.16(dd，1H)8.22(d，1H)8.29(d，1H)8.41(s，1H)9.34(s，1H)。MS：357.0-359.0[M+1]+，Rt(1)＝1.52min。
6-嗅-4-氯-喹唑啉
将6-溴-3H-喹唑啉-4-酮(20g，89mmol)混悬于140mL POCl3，在140℃搅拌3h。真空浓缩该反应混合物，将残余物溶于500mL干CH2Cl2，用200g固体NaHCO3中和。过滤该混合物，真空蒸发滤液，得到标题化合物(21g，95％收率)，为浅褐色固体。1H-NMR(400MHz，CDCl3，298K)：δppm7.98(d，1H)8.09(d，1H)8.5(s，1H)9.1(s，1H)。MS：243.0-244.9[M+1]+，Rt(1)＝1.24min。
实施例2：{3-[7-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-萘-1-基]-苯基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮(50mg，0.122mmol)、2-甲氧基-嘧啶-5-硼酸(22mg，0.146mmol)和Pd(PPh3)4(7mg，0.006mmol)的混合物中加入2mL DME。给该反应混合物通氩气，加入1MNa2CO3水溶液(0.243mL，0.243mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至140℃10min，然后冷却至rt，用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/CH2Cl2之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。通过制备Gilson HPLC型反相纯化，然后用PL-HCO3 MP中和合并的级分，得到标题化合物(38mg，71％收率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.15(s，3H)2.20-2.38(m，4H)3.37-3.70(m，4H)3.99(s，3H)7.65(d，1H)7.73(t，1H)7.86(s，1H)8.02(d，1H)8.24(d，1H)8.33(s，1H)8.43(d，1H)9.05(s，2H)9.41(s，1H)MS：441.1[M+1]+，Rt(2)＝0.75min。
[3-(6-嗅-喹唑啉-4-基)-苯基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸(2g，6.16mmol)和HBTU(2.57g，6.78mmol)的混合物中加入DMF(15mL)和DIPEA(2.26mL，12.95mmol)。将该反应混合物在rt搅拌10min，在rt加入1-甲基-哌嗪(1.23g，12.33mmol)，然后加入DIPEA(2.26mL，12.95mmol)，将该反应混合物在rt再搅拌5min。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用AcOEt萃取。用NaHCO3、盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，99/1-90/10)，得到标题化合物(2.26g，90％纯度(HPLC)，80％收率)。1H-NMR(400MHz，MeOD-d4，298K)：δppm2.21(s，3H)2.25-2.44(m，4H)3.37-3.70(m，4H)7.62-7.81(m，3H)7.86-7.96(m，1H)8.08(d，1H)8.17-8.24(m，2H)9.41(s，1H)。MS：411.4[M+1]+，Rt(3)＝1.38min。
可以使用与用于实施例1类似的方法、使用适合的原料制备实施例3-29。
纯化后不中和实施例20、21和22，得到TFA盐。
(1)LC方法1，(2)LC方法2，(3)LC方法3，(4)LC方法4，(5)LC方法5
实施例34：2-甲氧基-5-{4-[3-((R)-3-甲基-哌嗪-1-羰基)-苯基]-喹唑啉-6-基}-烟腈
向(R)-4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酰基]-2-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，0.196mmol)、2-甲氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-烟腈(76mg，0.235mmol，80％纯度)和Pd(PPh3)4(11.30mg，0.009mmol)的混合物中加入3ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1MNa2CO3水溶液(0.391mL，0.391mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至140℃10min，然后冷却至室温，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。将残余物溶于2ml CH2Cl2，加入TFA(0.301mL，3.91mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。此后，浓缩该混合物，通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(36mg，39％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm0.74-1.05(br.s.，3H)，2.35-3.10(m，5H)3.47-3.65(m，1H)4.06(s，3H)4.33(br.s.，1H)7.64(dt，1H)7.73(t，1H)7.84(t，1H)8.00(dt，1H)8.23(d，1H)8.33(d，1H)8.43(dd，1H)8.78(br.s.，1H)8.90(d，1H)9.40(s，1H)。MS：464.6[M+1]+，Rt(1)＝0.98min。
(R)-4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酰基]-2-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸(0.5g，1.519mmol)在中15ml CH2Cl2的溶液中加入HBTU(0.634g，1.671mmol)和DIPEA(0.796mL，4.56mmol)。将该反应混合物在室温搅拌30分钟，加入(R)-2-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.365g，1.823mmol)，将该反应混合物在环境温度再搅拌2h。用H2O使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，95/5)，得到标题化合物(1g，89％纯度，定量收率)。MS：511.2-513.1[M+1]+，Rt(1)＝1.51min。
使用与用于实施例34类似的方法、使用适合的原料制备实施例35。
(2)LC方法2
实施例36：1-(4-{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酰基}-2，2-二甲基-哌嗪-1-基)-乙酮
向(3，3-二甲基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}甲酮(117.7mg，0.213mmol)中加入4ml THF。加入三乙胺(0.188mL，0.851mmol)，然后加入乙酰氯(0.023mL，0.319mmol)。将该反应混合物在室温搅拌5min。向该反应混合物中加入EtOAc。用饱和NaHCO3和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。通过制备型反相GilsonHPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(82.7mg，78％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.16-1.53(m，6H)1.86-2.05(m，3H)3.46-3.75(m，6H)3.90(s，3H)6.88-7.00(m，1H)7.60-7.80(m，2H)7.82-8.05(m，2H)8.11(dd，1H)8.18-8.27(m，2H)8.38(d，1H)8.58(d，1H)9.38(s，1H)。MS：496.5[M+1]+，Rt(3)＝1.70min。
(3，3-二甲基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(6-甲氧基-呲啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮
向[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯基]-(3，3-二甲基-哌嗪-1-基)-甲酮(111.9mg，0.263mmol)、6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(42.4mg，0.263mmol)和Pd(PPh3)4(30.4mg，0.026mmol)的混合物中加入2.5ml乙腈。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.789mL，0.789mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至130℃20min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在饱和NaHCO3水溶液/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到粗化合物(117.7mg，81％收率)。MS：454.5[M+1]+，Rt(3)＝1.40min。
[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯基]-(3，3-二甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸(428.1mg，1.301mmol)在8ml DMF中的溶液中加入HBTU(543mg，1.431mmol)和DIPEA(0.477mL，2.73mmol)。将该反应混合物在rt搅拌20min，在rt加入2，2-二甲基-哌嗪(163mg，1.431mmol)和DIPEA(0.477mL，2.73mmol)，将该反应混合物在rt搅拌过夜。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，99/1-90/10)，得到标题化合物(234.9mg，＞99％纯度，42.5％收率)。MS：427.1[M+1]+，Rt(7)＝1.17min。
使用与用于实施例36类似的方法、使用适合的原料制备实施例37。
(3)LC方法3
实施例38：(2，5-二氮杂-双环[2.2.1]庚-2-基)-{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮
向[3-(7-溴-萘-1-基)-苯基]-(2，5-二氮杂-双环[2.2.1]庚-2-基)-甲酮(56.8mg，0.139mmol)、6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(23.35mg，0.153mmol)和Pd(PPh3)4(16.04mg，0.014mmol)的混合物中加入1.5ml乙腈。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.416mL，0.416mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至130℃20min，然后冷却至rt。过滤后，通过制备型反相Gilson HPLC直接纯化该混合物，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(26.7mg，44％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.50-1.85(m，2H)2.73-3.05(m，2H)3.35-3.75(m，3H)3.91(s，3H)4.35-4.70(d，1H)6.95(d，1H)7.69-7.78(m，2H)7.91-8.01(m，2H)8.10(t，1H)8.19-8.24(m，2H)8.39(d，1H)8.59(d，1H)9.38(s，1H)。MS：438.2[M+1]+，Rt(3)＝1.35min。
[3-(7-溴-萘-1-基)-苯基]-(2，5-二氮杂-双环[2.2.1]庚-2-基)-甲酮
向用10ml CH2Cl2稀释的叔丁基-5-(3-(6-溴喹唑啉-4-基)苯甲酰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(400.4mg，0.786mmol)中加入TFA(4mL，51.9mmol)。将该反应混合物在室温搅拌30min。蒸发挥发性物质，加入EtOAc。用NaHCO3水溶液和盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到粗化合物(158mg，＞99％纯度，49.1％收率)。MS：409.0-410.9[M+1]+，Rt(3)＝1.22min。
5-(3-(6-溴喹唑啉-4-基)苯甲酰基)-2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯
向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸(310mg，0.942mmol)在8ml DMF中的溶液中加入HBTU(429mg，1.130mmol)和DIPEA(0.3455mL，1.98mmol)。将该反应混合物在rt搅拌20min。在rt加入2，5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸叔丁酯(373mg，1.884mmol)和DIPEA(0.3455mL，1.98mmol)，将该反应混合物在rt搅拌10min。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用EtOAc萃取。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(庚烷/EtOAc，80/20-0/100)，得到标题化合物(400.4mg，＞99％纯度，83％收率)。MS：511.3[M+1]+，Rt(3)＝2.19min。
使用与用于实施例38类似的方法、使用适合的原料制备实施例39。
(3)LC方法3
实施例40：{3-[6-(5-甲基-6-甲基氨基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮(100mg，0.243mmol)、甲基-[3-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，２]二氧杂环戊硼烷-2基)-吡啶-2-基]-氨基甲酸叔丁酯(102mg，0.292mmol)和Pd(PPh3)4(14.05mg，0.012mmol)的混合物中加入3ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1MNa2CO3水溶液(0.486mL，0.486mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至140℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。将残余物溶于3ml CH2Cl2，加入TFA(0.562mL，7.29mmol)。将该反应混合物在环境温度搅拌16h。然后浓缩该反应混合物，通过制备型Gilson HPLC反相纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(70mg，64％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.12(s，3H)2.15(s，3H)2.17-2.40(m，4H)2.90(d，3H)3.39-3.70(m，4H)6.28(q，1H)7.65(br.s.，2H)7.74(t，1H)7.82(s，1H)7.98(d，1H)8.13(d，2H)8.33(d，2H)9.32(s，1H)。MS：453.3[M+1]+，Rt(8)＝1.25min。
使用与用于实施例40类似的方法、使用适合的原料制备实施例41。
(8)LC方法8
方案3
a)在常规的磷酰氯条件下，通过在稀释(例如在CH2Cl2中)或净磷酰氯中回流加热或在130℃下加热进行6-溴-3H-喹唑啉-4-酮的氯化。b)在常规Suzuki条件下、使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行6-溴-4-氯-喹喔啉与3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸或3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌。优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行该反应体系。c)在常规皂化条件下皂化羧酸酯，其中优选使用可能的碱水氢氧化锂和有机溶剂，例如优选二噁烷。该反应优选在室温下进行。d)优选在常规缩合条件下使羧酸与式R”’NHR”的胺类缩合。可以通过将羧酸和式R”’NHR”的胺溶于适合的溶剂进行反应，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，３-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。优选将该反应混合物在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温搅拌。该反应优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。e)使用钯催化剂例如优选1，1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(PdCl2(dPPf)-CH2Cl2)、碱水例如优选乙酸钾、有机溶剂例如优选二噁烷和双-(频哪酸)-二硼对硼酸酯进行硼化(Fornation)。优选将该反应体系在约80℃搅拌几小时。f)芳基溴(R-Br)与硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规的Suzuki条件下使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应优选在惰性气体；如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案3中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例42：{3-[6-(6-乙氧基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向(4-甲基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮(100mg，0.218mmol)、5-溴-2-乙氧基-3-(三氟甲基)吡啶(70.7mg，0.262mmol)和Pd(PPh3)4(12.61mg，0.011mmol)混合物中加入2ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.436mL，0.436mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至140℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(70mg，61％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.37(t，3H)2.13(s，3H)2.17(br.s.，2H)2.34(br.s.，2H)3.43(br.s.，2H)3.62(br.s.，2H)4.53(q，2H)7.65(dt，1H)7.74(t，1H)7.85(t，1H)8.02(dt，1H)8.23(d，1H)8.32(d，1H)8.44-8.47(m，2H)8.84(d，1H)9.41(s，1H)。MS(2)：522.6[M+1]+，Rt(2)＝1.16min。
(4-甲基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮
将双-(频哪酸)-二硼(463mg，1.824mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(99mg，0.122mmol)和KOAc(477mg，4.86mmol)放入小瓶，用氩气流脱气2min。在单独的小瓶中，将[3-(6-溴-喹唑啉4-基)-苯基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮(500mg，1.216mmol)溶于10ml无水二噁烷。将[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮的二噁烷溶液加入到“催化剂”小瓶中，然后在80℃加热2h。冷却至rt后，加入30ml乙酸乙酯，将该混合物通过硅藻土垫过滤。浓缩深色滤液，然后用30ml庚烷稀释。形成深色沉淀，过滤该混合物，浓缩滤液，然后高度真空干燥，得到标题化合物，为棕色固体(710mg，50％纯度，55％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3，298K)：δppm1.37(s，12H)2.35(s，3H)2.45(br.s.，2H)2.53(br.s.，2H)3.62(br.s.，2H)3.85(br.s.，2H)7.69(d，2H)7.84(br.s.，1H)7.87(m，1H)8.12(d，1H)8.32(dd，1H)8.52(br.s.，1H)9.41(s，1H)。MS：459.3[M+1]+，Rt(1)＝1.0min。
使用与用于实施例42类似的方法、使用适合的原料制备实施例43-48。
(1)LC方法1，(2)LC方法2
实施例49：2-甲氧基-N，N-二甲基-5-{4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-苯基]-喹唑啉-6-基}-苯甲酰胺
向2-甲氧基-5-{4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-苯基]-喹唑啉-6-基}-苯甲酸(50mg，0.084mmol)在2ml CH2Cl2中的溶液中加入HBTU(38.1mg，0.101mmol)和DIPEA(0.044mL，0.251mmol)。将该反应混合物在rt搅拌10min，在rt加入二甲胺的THF溶液(2M)(0.210mL，0.419mmol)，将该反应混合物在rt再搅拌30min。用H2O使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(25mg，58％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.15(s，3H)2.22(br.s.，2H)2.36(br.s.，2H)2.79(s，3H)，2.99(s，3H)3.41(br.s.，2H)3.62(br.s.，2H)3.86(s，3H)7.22(d，1H)7.56(d，1H)7.65(dt，1H)7.73(t，1H)7.79(dd，1H)7.82(t，1H)7.98(dt，1H)8.17(d，1H)8.19(s，1H)8.38(dd，1H)9.37(s，1H)。MS：510.6[M+1]+，Rt(2)＝0.85min。
2-甲氧基-5-{4-[3-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-苯基]-喹唑啉-6-基}-苯甲酸
向(4-甲基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮(300mg，0.655mmol)、5-溴-2-甲氧基-苯甲酸(181mg，0.785mmol)和Pd(PPh3)4(37.8mg，0.033mmol)的混合物中加入4ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(1.309mL，1.309mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至140℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，浓缩。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，合并级分，得到标题化合物(60mg，15％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.79(s，3H)3.03-3.82(m，8H)3.89(s，3H)7.28(d，1H)7.72(dt，1H)7.77(t，1H)7.92(dd，2H)7.98(d，1H)8.05(dt，1H)8.20-8.22(m，2H)8.41(dd，1H)9.39(s，1H)。MS：483.4[M+1]+，Rt(1)＝0.75min。
方案4
a)在常规的磷酰氯条件下，通过在稀释(例如在CH2Cl2中)或净磷酰氯中回流加热或在130℃下加热进行6-溴-3H-喹唑啉-4-酮的氯化。b)在常规Suzuki条件下、使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行6-溴-4-氯-喹唑啉与3-(乙氧基羰基)吡啶基-硼酸或3-(乙氧基羰基)吡啶基-硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌。优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行该反应体系。c)在常规皂化条件下皂化羧酸酯，其中优选使用可能的碱水氢氧化锂和有机溶剂，例如优选二噁烷。该反应优选在室温下进行。d)优选在常规缩合条件下使羧酸与式R”’NHR”的胺类缩合。可以通过将羧酸和式R”’NHR”的胺溶于适合的溶剂进行反应，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。优选将该反应混合物在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温搅拌。该反应优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。e)使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R(OR’)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应优选在惰性气体；如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案4中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例50：1-(4-{5-[6-(5-三氟甲基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-吡啶-3-羰基}-哌嗪-1-基)-乙酮
向1-{4-[5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-吡啶-3-羰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(100mg，0.204mmol，90％纯度(UPLC))、硼酸3-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-5-三氟甲基-吡啶(80mg，0.204mmol，70％纯度)和Pd(PPh3)4(11.81mg，0.010mmol)的混合物中加入2ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.409mL，0.409mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(55mg，53％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.96-2.1(br.s.，3H)3.41-3.70(m，8H)8.31(d，1H)8.40(s，1H)8.50(s，1H)8.56(d，1H)8.69(br.s.，1H)8.90(s，1H)9.04(s，1H)9.20(s.，1H)9.35(br.s.，1H)9.49(s，1H)。MS：507.6[M+1]+，Rt(2)＝0.93min。
1-{4-[5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-吡啶-3-羰基]-哌嗪-1-基}-乙酮
向5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-烟酸(1g，3.03mmol)在10ml CH2Cl2中的溶液中加入HBTU(1.38g，3.63mmol)和DIPEA(1.06mL，6.06mmol)。将该反应混合物在rt搅拌10min，在rt加入1-哌嗪-1-基-乙酮(0.466g，3.63mmol)，将该反应混合物在rt再搅拌3h。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，95/5)，得到标题化合物(1.13g，90％纯度，76％收率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.04(br.s.，3H)3.41-3.70(m，8H)8.12(d，1H)8.24(br.s.，2H)8.31(br.s.，1H)8.89(s，1H)9.07(s，1H)9.47(s，1H)。MS：440.4-442.4[M+1]+，Rt(9)＝1.48min。
5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-烟酸
在rt向5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-烟酸乙酯(1.34g，3.74mmol)在二噁烷(45mL)中的溶液中加入1M LiOH.H2O水溶液(7.48ml，7.48mmol)，将该反应混合物在rt搅拌1.5h。用1M HCl水溶液(5mL)使反应停止，过滤形成的沉淀，真空干燥，得到标题化合物，为淡黄色固体。用EtOAc萃取滤液，用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到标题化合物，为淡黄色固体。合并两次分离的固体，得到标题化合物，为淡黄色固体(1.1g，81％收率)。MS：330.5-332.5[M+1]+，Rt(2)＝0.97min。
5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-烟酸乙酯
向6-溴-4-氯-喹唑啉(6g，23.41mmol)、硼酸5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-烟酸乙酯(6.81g，24.58mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.822g，1.17mmol)和K3PO4(7.45g，35.1mmol)的混合物中加入96ml乙腈。给该反应混合物通氩气，加入12ml水，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至100℃12min，然后冷却至rt。用水使该混合物猝灭，用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，通过硅藻土垫过滤，蒸发。将得到的残余物在MeOH中研磨，得到标题化合物，为淡橙色固体(5.3g，95％纯度，60％收率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.38(t，3H)4.41(q，2H)8.1(d，1H)8.25(d，2H)8.65(s，1H)9.22(s，1H)9.32(s，1H)9.48(s，1H)。MS：358.1-360.1[M+1]+，Rt(1)＝1.28min。
使用与用于实施例50类似的方法、使用适合的原料制备实施例51-74。
实施例75：{5-[6-(5-甲基-6-甲基氨基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-吡啶-3-基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向[5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-吡啶-3-基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮(100mg，0.243mmol)、叔丁基甲基(3-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶-2-基)(107mg，0.291mmol)和Pd(PPh3)4(14.01mg，0.012mmol)的混合物中加入2ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.485mL，0.485mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。将残余物溶于2ml CH2Cl2，加入TFA(0.374mL，4.85mmol)。将该反应混合物在室温搅拌3h。此后，浓缩该混合物，通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(32mg，29％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.12(s，3H)2.16(s，3H)2.25(br.s.，2H)2.37(br.s.，2H)2.89(d，3H)3.49(br.s.，2H)3.66(br.s.，2H)6.29(q，1H)7.69(d，1H)8.12(d，1H)8.16(d，1H)8.30(t，1H)8.36-8.38(m，2H)8.84(d，1H)9.12(d，1H)9.36(s，1H)。MS：454.2[M+1]+，Rt(9)＝1.21min。
方案5
a)在常规的磷酰氯条件下，通过在稀释(例如在CH2Cl2中)或净磷酰氯中回流加热或在130℃下加热进行6-溴-3H-喹唑啉-4-酮的氯化。b)在常规Suzuki条件下、使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行6-溴-4-氯-喹唑啉与3-(乙氧基羰基)吡啶基-硼酸或3-(乙氧基羰基)吡啶基-硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌。优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行该反应体系。c)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R-B(OR’)2的硼酸酯之间Suzuki的交叉偶合在常规的Suzuki条件下使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。d)在常规皂化条件下皂化羧酸酯，其中优选使用可能的碱水氢氧化锂和有机溶剂，例如优选二噁烷。该反应优选在室温下进行。e)羧酸与式R”’NHR”的胺的缩合优选在常规缩合条件下进行。该反应通过将羧酸和式R”’NHR”的胺溶于适合的溶剂进行，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，并且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述适合的碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应混合物优选在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案5中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例76：{5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-吡啶-3-基}-(4-甲基-[1，4]-二氮杂庚环-1-基)-甲酮
向5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-烟酸(100mg，0.279mmol)在2ml CH2Cl2中的溶液中加入DIPEA(0.097mL，0.558mmol)和丙基膦酸酐(DMF的溶液，50％)(0.244mL，0.419mmol)。将该反应混合物在rt搅拌30min，加入1-甲基-[1，4]-二氮杂庚环(65.7mg，0.557mmol)，将该反应混合物在环境温度再搅拌2h。再加入1-甲基-[1，4]-二氮杂庚环(49.27mg，0.418mmol)和DIPEA(0.097mL，0.558mmol)，将该反应混合物在环境温度搅拌16h。用水使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(54mg，43％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.77(m，1H)1.86(m，1H)2.17-2.28(d，3H)2.44-2.56(m，3H)2.66(m，1H)3.50-3.59(m，2H)3.63-3.72(m，2H)3.92(s，3H)6.96(d，1H)8.14-8.18(m，1H)8.22-8.24(dd，2H)8.33(dt，1H)8.43(dd，1H)，8.63(t，1H)8.84(dd，1H)9.12(dd，1H)9.42(s，1H)。MS：455.2[M+1]+，Rt(2)＝0.79min。
5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-烟酸
在rt向5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-烟酸乙酯(0.91g，2.19mmol，93％纯度(HPLC))在二噁烷(30mL)中的溶液加入1M LiOH.H2O水溶液(4.38mL，4.38mmol)，将该反应混合物在环境温度搅拌3小时。用1MHCl水溶液使反应停止，过滤形成的沉淀，真空干燥，得到标题化合物(570mg，72％收率)，为淡黄色固体。用EtOAc萃取滤液，用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到标题化合物(205mg，27％收率)，为黄色固体。合并两次分离的固体，得到标题化合物(570+205mg＝775mg，99％收率)。MS：359.2[M+1]+，Rt(1)＝0.96min。
5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-烟酸乙酯
向[5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-烟酸乙酯(1g，2.79mmol)、2-甲氧基-5-吡啶硼酸(0.448g，2.93mmol)和Pd(PPh3)4(0.161mg，0.140mmol)的混合物中加入15ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(5.58mL，5.58mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至120℃20min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在H2O/EtOAc之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。残余物得到标题化合物(910mg，93％纯度，78％收率)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.37(t，3H)3.91(s，3H)4.42(q，2H)6.96(d，1H)8.14(dd，1H)8.23-8.25(m，2H)8.43(dd，1H)8.62(d，1H)8.72(t，1H)9.31(dd，2H)9.43(s，1H)。MS：387.1[M+1]+，Rt(2)＝1.24min。
使用与用于实施例76类似的方法、使用适合的原料制备实施例77-83。
(1)LC方法1，(2)LC方法2
实施例84：{5-[6-(4-甲氧基-3-三氟甲基-苯基)-喹唑啉-4-基]-吡啶-3-基}-((S)-2-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向5-[6-(4-甲氧基-3-三氟甲基-苯基)-喹唑啉-4-基]-烟酸(70mg，0.165mmol)在3ml CH2Cl2中的溶液中加入HBTU(68.7mg，0.181mmol)和DIPEA(0.057mL，0.329mmol)。将该反应混合物在rt搅拌20min，加入(S)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(49.4mg，0.247mmol)和DIPEA(0.057mL，0.329mmol)，将该反应混合物在环境温度再搅拌1h。浓缩该反应混合物。将残余物溶于2ml CH2Cl2，加入TFA(0.120mL，1.646mmol)。将该反应混合物在室温搅拌3h。此后，浓缩该混合物，通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(60mg，68％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.24(br.s.，3H)2.53-2.89(m，7H)3.96(s，3H)7.41(d，1H)7.99(d，1H)8.07(dd，1H)8.21-8.23(dd，2H)8.30(t，1H)，8.44(dd，1H)8.82(d，1H)9.13(d，1H)9.43(s，1H)。MS：508.3[M+1]+，Rt(1)＝0.99min。
使用与用于实施例84类似的方法、使用适合的原料制备实施例85。
方案6
a)在常规的磷酰氯条件下，通过在稀释(例如在CH2Cl2中)或净磷酰氯中回流加热或在130℃下加热进行6-溴-3H-喹唑啉-4-酮的氯化。b)在常规Suzuki条件下、使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行6-溴-4-氯-喹唑啉与3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸或3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌。优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行该反应。c)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R-B(OR’)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规的Suzuki条件下使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。d)在常规皂化条件下皂化羧酸酯，其中优选使用可能的碱水氢氧化锂和有机溶剂，例如优选二噁烷。该反应优选在室温下进行。e)羧酸与式R”’NHR”的胺的缩合优选在常规缩合条件下进行。该反应通过将羧酸和式R”’NHR”的胺溶于适合的溶剂进行，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，并且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述适合的碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应体系优选在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案6中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例86：(4-乙基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮
向搅拌的3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酸(100mg，0.280mmol)在2ml CH2Cl2中的溶液中加入HBTU(127mg，0.336mmol)和DIPEA(0.147mL，0.839mmol)。将该反应混合物在rt搅拌10min，加入1-乙基-哌嗪(38mg，0.336mmol)，将得到的反应混合物在rt再搅拌30min。用H2O使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(40mg，35％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm0.97(t，3H)2.18-2.50(m，6H)3.37-3.71(m，4H)3.91(s，3H)6.97(d，1H)7.66(d，1H)7.74(dd，1H)7.83(s，1H)7.99(d，1H)8.12(d，1H)8.23(br.s，2H)8.38(d，1H)8.60(s，1H)9.39(s，1H)。MS：454.2[M+1]+，Rt(2)＝0.89min。
3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酸
在rt向3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酸乙酯(800mg，1.91mmol)在二噁烷(20mL)中的混悬液中加入1M LiOH.H2O水溶液(9.55ml，9.55mmol)，将该反应混合物在rt搅拌4h。用1M HCl水溶液(5mL)使反应停止，过滤形成的沉淀，真空干燥，得到标题化合物(700mg，90％纯度，92％收率)，为淡黄色固体。将该化合物不经进一步纯化用于下一步。MS：358.1[M+1]+，Rt(2)＝1.11min。
3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酸乙酯
向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-苯甲酸乙酯(845mg，2.176mmol)、2-甲氧基-5-吡啶硼酸(399mg，2.61mmol)和Pd(PPh3)4(126mg，0.109mmol)的混合物中加入20ml DME。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(4.35mL，4.35mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至120℃15min，然后冷却至rt，用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤，分配在盐水/CH2Cl2之间。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(CH2Cl2/MeOH，95/5)，得到标题化合物(800mg，92％纯度，88％收率)。MS：386.5[M+1]+，Rt(2)＝1.45min。
使用与用于实施例86类似的方法、使用适合的原料制备实施例87-96。
(1)LC方法1，(2)LC方法2
实施例97：{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-((R)-2-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向搅拌的3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酸(100mg，0.254mmol)在2ml DMF中的溶液中加入HBTU(144mg，0.381mmol)和DIPEA(0.177mL，1.016mmol)。将该反应混合物在rt搅拌30min，加入(R)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(76mg，0.381mmol)，将得到的反应混合物在rt再搅拌2h。用H2O使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。将残余物溶于3ml CH2Cl2，加入TFA(1ml)。将该反应混合物在环境温度搅拌2h。此后，浓缩该混合物，通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(29mg，26％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.23(d，3H)2.55-3.2(m，7H)3.91(s，3H)6.95(d，1H)7.62(d，1H)7.72(t，1H)7.81(s，1H)7.98(d，1H)8.11(d，1H)8.22(d，2H)8.38(d，1H)8.59(s，1H)9.38(s，1H)。MS：440.1[M+1]+，Rt(2)＝0.89min。
实施例98：{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-((S)-2-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
向搅拌的3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酸(110mg，0.308mmol)在2.5ml DMF中的溶液中加入HBTU(175mg，0.462mmol)和DIPEA(0.108mL，0.616mmol)。将该反应混合物在rt搅拌20min，加入(S)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(123mg，0.616mmol)和DIPEA(0.108mL，0.616mmol)，将得到的反应混合物在rt再搅拌2h。用H2O使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过硅胶快速色谱法纯化(庚烷/乙酸乙酯，1/1)，得到中间体化合物(170mg，91％纯度(UPLC)，93％收率)，MS：540.3[M+1]+。将残余物(170mg，0.287mmol)溶于2ml CH2Cl2，加入TFA(0.331mL，4.30mmol)。将该反应混合物在环境温度搅拌2h。此后，用NaOH溶液(1M)使该混合物猝灭，用CH2Cl2萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(58mg，31％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.23(d，3H)2.55-3.15(m，7H)3.91(s，3H)6.95(d，1H)7.62(d，1H)7.72(t，1H)7.81(s，1H)7.98(dt，1H)8.12(dd，1H)8.21(d，1H)8.22(s，1H)8.38(dd，1H)8.59(d，1H)9.38(s，1H)。MS：440.3[M+1]+，Rt(1)＝0.85min。
实施例99：((S)-2，4-二甲基-哌嗪-1-基)-{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-甲酮
向{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯基}-((S)-2-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮(50mg，0.091mmol)在1ml MeOH中的溶液中加入37％甲醛溶液(0.008mL，0.109mmol)。将该反应混合物在rt搅拌30min，然后加入NaBH3CN(6.86mg，0.109mmol)，将得到的反应混合物在rt再搅拌2h。用饱和NaHCO3溶液使反应停止，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤有机层，用MgSO4干燥，过滤，真空蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(20mg，48％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.25(d，3H)1.82(m，1H)1.99(m，1H)2.11(s，3H)2.53-2.74(m，3H)3.12-3.27(m，2H)3.91(s，3H)6.96(d，1H)7.63(dt，1H)7.74(t，1H)7.81(br.s.，1H)7.99(dt，1H)8.11(dd，1H)8.21(d，1H)8.22(s，1H)8.39(dd，1H)8.59(d，1H)9.39(s，1H)。MS：454.3[M+1]+，Rt(1)＝0.85min。
方案7
a)羧酸与式R3NHR4的胺类的缩合优选在常规缩合条件下进行。该反应可以通过将羧酸和式R3NHR4的胺溶于适合的溶剂进行，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，并且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述适合的碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应混合物优选在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温温度搅拌。该反应优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。b)使用钯催化剂例如优选1，1-双(二苯基膦基)-二茂铁]-二氯钯(PdCl2(dppf)-CH2Cl2)、碱水例如优选乙酸钾、有机溶剂例如优选二噁烷和双-(频哪酸)-二硼形成硼酸酯。将该反应体系优选在约80℃搅拌几小时。c)6-溴-4-氯-喹唑啉与硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规Suzuki条件下使用二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。d)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R5-B(OR’)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案7中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例100：1-(4-{5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-2-甲基-苯甲酰基}-哌嗪-1-基)-乙酮
给1-{4-[5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-2-甲基-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(150mg，0.331mmol)、6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(50.6mg，0.331mmol)、K3PO4(105mg，0.496mmol)和PdCl2(PPh3)2(11.61mg，0.017mmol)的混合物通氩气几分钟。然后向该混合物中加入4ml乙腈，然后加入0.4ml水。封盖小瓶，使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min。然后将该混合物冷却至rt，用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤。用饱和碳酸氢盐溶液洗涤有机层，通过相分离柱干燥，蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用SCx-2柱中和合并的级分，得到标题化合物(100mg，60％收率)，为粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.90-2.10(m，3H)2.37(s，3H)3.20-3.80(br.m.，8H)3.91(s，3H)，6.96(dd，1H)7.57(dd，1H)7.73(d，1H)7.87(dd，1H)，8.12(d，1H)8.18(s，1H)8.20(s，1H)8.23(br.s.，1H)8.38(dd，1H)8.60(br.s.，1H)9.36(s，1H)。MS：482.3[M+1]+，Rt(1)＝1.01min。
1-{4-[5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-2-甲基-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮
给6-溴-4-氯喹唑啉(1.8g，7.39mmol)(商品来源)、1-{4-[2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(4.23g，7.39mmol，65％纯度(UPLC))、K3PO4(2.354g，11.09mmol)和PdCl2(PPh3)2(0.259g，0.370mmol)的混合物通氩气几分钟。然后向该混合物中加入15ml乙腈，然后加入1.5ml水。封盖小瓶，使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min。然后将该混合物冷却至rt，用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤。用饱和碳酸氢盐溶液洗涤有机层，通过相分离柱干燥，蒸发。通过使用Biotage Isolera系统的快速色谱法纯化(胺官能化硅胶KP-NH，用环己烷/EtOAc0-100％)洗脱，得到标题化合物(1.65g，49％收率)，为黄色粉末。MS：453.2-455.1[M+1]+，Rt(1)＝0.99min。
实施例101：1-(4-{3-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-5-三氟甲基-苯甲酰基}-哌嗪-1-基)-乙酮
向1-{4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-三氟甲基-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(120mg，0.19mmol，80％纯度(HPLC))、2-甲氧基-5-吡啶硼酸(34.9mg，0.228mmol)和Pd(PPh3)4(10.98mg，0.009mmol)的混合物中加入2ml乙腈。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.380mL，0.380mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至120℃ 10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，用EtOAc洗涤。浓缩滤液。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-SO3H MP中和合并的级分，得到标题化合物(48mg，47％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.91-2.03(br.s.，3H)3.36-3.70(m，8H)3.91(s，3H)6.98(d，1H)8.06(br.s.，1H)8.14(d，1H)8.25(d，3H)8.30(br.s.，1H)8.44(d，1H)8.63(br.s.，1H)9.42(s，1H)。MS：536.6[M+1]+，Rt(2)＝1.18min。
使用与用于实施例101类似的方法、使用适合的原料制备实施例102-109。
(1)LC方法1，(2)LC方法2
方案8
a)在常规的磷酰氯条件下，通过在稀释(例如在CH2Cl2中)或净磷酰氯中回流加热或在130℃下加热进行6-溴-3H-喹唑啉-4-酮的氯化。b)在常规Suzuki条件下、使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行6-溴-4-氯-喹唑啉与3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸或3-(乙氧基羰基)苯基-硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合。将该反应体系优选在约100-120℃温度、优选在微波炉内搅拌。优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行该反应体系。c)羧酸酯的皂化在常规皂化条件下进行，其中可能使用碱水，优选氢氧化锂，和有机溶剂，例如优选二噁烷。该反应可以优选在室温进行。d)羧酸与式R3NHR4的胺的缩合优选在常规缩合条件下进行。该反应可以通过将羧酸和式R3NHR4的胺溶于适合的溶剂进行，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，并且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述适合的碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如和优选(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)。将该反应混合物优选在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。e)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R5-B(OR’)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规Suzuki条件下使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案8中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例110：1-(4-{3-氟-5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-苯甲酰基}-哌嗪-1-基)-乙酮
给1-{4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-氟-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(150mg，0.328mmol)、6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(50.2mg，0.328mmol)、K3PO4(104mg，0.492mmol)和PdCl2(PPh3)2(11.51mg，0.016mmol)的混合物通氩气几分钟。然后向该混合物中加入3ml乙腈，然后加入0.3ml水。封盖小瓶，使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min。然后将该混合物冷却至rt，用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤。用饱和碳酸氢盐溶液洗涤有机层，通过相分离柱干燥，蒸发。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用SCx-2柱中和合并的级分，得到标题化合物(68mg，41％收率)，为粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm1.88-2.06(m，3H)3.34-3.69(m，8H)3.91(s，3H)6.97(d，1H)7.58(d，1H)7.73(s，1H)7.85(dd，1H)8.15(d，1H)8.19-8.26(m，2H)8.42(dd，1H)8.62(d，1H)9.39(s，1H)。MS：485.0[M+1]+，Rt(1)＝1.04min。
1-{4-[3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-氟-苯甲酰基]-哌嗪-1-基}-乙酮
在rt向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-氟-苯甲酸(1.36g，3.72mmol)在CH2Cl2(15mL)中的混合物中加入DIPEA(1.30mL，7.44mmol)和HBTU(1.694g，4.47mmol)。将该反应混合物在rt搅拌20min。然后向该混合物中加入1-(哌嗪-1-基)乙酮(0.572g，4.47mmol)，将该反应混合物在rt搅拌1h。用饱和NaHCO3和水溶液使反应停止，用CH2Cl2萃取。用盐水将有机层洗涤2次，通过相分离柱干燥，蒸发。通过使用Biotage Isolera系统的快速色谱法纯化(胺官能化硅胶KP-NH，用环己烷/EtOAc0-100％洗脱)，得到标题化合物(1.20g，68％收率)，为浅褐色泡沫体。MS：457.4-459.3[M+1]+，Rt(2)＝1.03min。
3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-氟-苯甲酸
在rt向3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-氟-苯甲酸乙酯(1.417g，3.78mmol)在二噁烷(15mL)中的溶液中加入2M LiOH.H2O水溶液(7.55mL，7.55mmol)，将该反应混合物在rt搅拌2h。用2M HCl水溶液(5mL)使反应停止，过滤形成的沉淀，真空干燥，得到标题化合物(1.36g，99％收率)，为白色固体。MS：349.0[M+1]+，Rt(1)＝1.17min。
3-(6-溴-喹唑啉-4-基)-5-氟-苯甲酸乙酯
给6-溴-4-氯喹唑啉(1.5g，6.16mmol)、3-(乙氧基羰基)-5-氟苯基硼酸(1.306g，6.16mmol)、K3PO4(1.961g，9.24mmol)和PdCl2(PPh3)2(216mg，0.308mmol)的混合物通氩气几分钟。然后向该混合物中加入24ml乙腈，然后加入2.4ml水。封盖小瓶，使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min。然后将该混合物冷却至rt，用CH2Cl2稀释，通过硅藻土垫过滤。用饱和碳酸氢盐溶液洗涤有机层，通过相分离柱干燥，蒸发。通过使用BiotageIsolera系统的快速色谱法纯化(胺官能化硅胶KP-NH，用环己烷/EtOAc0-30％洗脱)，得到标题化合物(1.417g，61％收率)，为固体。MS：375.1-377.1[M+1]+，Rt(1)＝1.54min。
实施例111的化合物使用与用于实施例110类似的方法、使用适合的原料制备。
(1)LC方法1
实施例112：1-(4-{4-[6-(2-甲氧基-嘧啶-5-基)-喹唑啉-4-基]-吡啶-2-羰基}-哌嗪-1-基)-乙酮
向2-甲氧基嘧啶-5-基硼酸(36.9mg，0.240mmol)和Pd(PPh3)4(11.56mg，0.010mmol)的混合物中加入1-{4-[4-(6-溴-喹唑啉-4-基)-吡啶-2-羰基]-哌嗪-1-基}-乙酮(88mg，0.200mmol)在2ml乙腈中的溶液。给该反应混合物通氩气，加入1M Na2CO3水溶液(0.400mL，0.400mmol)，封盖小瓶。使用微波炉将该反应混合物加热至120℃10min，然后冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤，浓缩。通过制备型反相Gilson HPLC纯化，然后用PL-HCO3MP中和合并的级分，得到标题化合物(40mg，43％收率)，为白色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.01-2.06(d，3H)3.48(br.s.，3H)3.58(br.s.，3H)3.65(br.s.，1H)3.73(br.s.，1H)3.99(s，3H)8.01(dd，1H)8.06(br.s.，1H)8.28(d，1H)8.34(d，1H)8.49(dd，1H)8.87(d，1H)9.09(s，2H)9.47(s，1H)。MS：470.6[M+1]+，Rt(2)＝0.78min。
使用与用于实施例112类似的方法、使用适合的原料制备实施例113和114的化合物。
(2)LC方法2
方案9
a)使用钯催化剂例如优选1，1-双(二苯基膦基)-二茂铁]-二氯钯(PdCl2(dppf)-CH2Cl2)、碱水例如优选乙酸钾、有机溶剂例如优选二噁烷和双-(频哪酸)-二硼形成硼酸酯。将该反应体系优选在约80℃搅拌几小时。b)6-溴-4-氯-喹唑啉与硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规Suzuki条件下使用二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。d)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R5-B(OR，)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规Suzuki条件下使用钯催化剂例如优选二氯二苯膦钯(PdCl2(PPh3)2)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度优选在微波炉内搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。c)芳基溴与硼酸或硼酸衍生物例如式R5-B(OR，)2的硼酸酯之间的Suzuki交叉偶合在常规Suzuki条件下使用钯催化剂例如优选四(三苯膦)钯(Pd(PPh3)4)、碱水和有机溶剂例如优选乙腈进行。将该反应体系优选在约100-120℃温度搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。d)羧酸与式R3NHR4的胺的缩合优选在常规缩合条件下进行。该反应可以通过将羧酸和式R3NHR4的胺溶于适合的溶剂进行，所述适合的溶剂例如卤代烃，例如二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-2-甲基-吡咯烷酮、二氯甲烷或两种或多种这样的溶剂的混合物，并且该反应通过添加适合的碱和适合的偶合试剂进行，所述适合的碱例如三乙胺、二异丙基乙胺(DIPEA)或N-甲基吗啉，所述适合的偶合试剂在原位形成羧酸的反应性衍生物，例如(2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HBTU)，优选丙基膦酸酐。将该反应混合物优选在约-20-50℃、尤其是-5℃-30℃、例如在0℃-室温的温度搅拌。该反应可以优选在惰性气体例如氮气或氩气气氛中进行。
根据方案9中所述的一般方法制备本文所述的最终化合物。
实施例115：{5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-2-甲基-苯基}-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
在rt向5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-2-甲基-苯甲酸(55mg，0.148mmol)在CH2Cl2(2mL)中的混合物中加入DIPEA(0.039mL，0.222mmol)和50％的丙基膦酸酐的DMF溶液(0.065mL，0.222mmol)。将该反应混合物在rt搅拌30min。然后向该混合物中加入1-甲基哌嗪(0.016mL，0.148mmol)，将该反应混合物在rt搅拌12h。用饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用CH2Cl2萃取。然后通过相分离柱干燥有机层，蒸发。通过制备型反相HPLC纯化，然后用SCx-2柱中和合并的级分，得到标题化合物(32mg，46％收率)，为黄色粉末。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6，298K)：δppm2.13(s，3H)2.17(br.s.，2H)2.34(d，2H)2.36(s，3H)3.26(t，2H)3.65(br.s.，2H)3.92(s，3H)6.96(d，1H)7.56(d，1H)7.64(d，1H)7.87(dd，1H)8.12(dd，1H)8.19(d，1H)8.23(d，1H)8.38(dd，1H)8.59(d，1H)9.36(s，1H)。MS：454.3[M+1]+，Rt(1)＝：0.87min。
5-[6-(6-甲氧基-吡啶-3-基)-喹唑啉-4-基]-2-甲基-苯甲酸
给5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-2-甲基-苯甲酸(318mg，0.741mmol)、6-甲氧基吡啶-3-基硼酸(113mg，0.741mmol)、K3PO4(236mg，1.112mmol)和PdCl2(PPh3)2(26.0mg，0.037mmol)的混合物通氩气几分钟。然后向该混合物中加入6ml乙腈，然后加入0.8ml水。封盖小瓶，使用微波炉将该反应混合物加热至120℃5min。然后将该混合物冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤。用2M HCl溶液洗涤有机层。当部分化合物保持进入水相时，碱化pH约为8，再用EtOAc萃取该化合物。用Na2SO4干燥合并的有机层，过滤，蒸发。用EtOAc/环己烷沉淀，得到标题化合物(168mg，61％收率)，为黄色粉末。MS：372.2[M+1]+。Rt(1)＝1.22min。
5-(6-溴-喹唑啉-4-基)-2-甲基-苯甲酸
给6-溴-4-氯喹唑啉(300mg，1.232mmol)、2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-苯甲酸(497mg，1.232mmol，UPLC纯度65％)、K3PO4(392mg，1.848mmol)和PdCl2(PPh3)2(43.2mg，0.062mmol)的混合物通氩气几分钟。然后向该混合物中加入8ml乙腈，然后加入0.8ml水。封盖小瓶，使用微波炉将该反应混合物加热至120℃5min。然后将该混合物冷却至rt，用EtOAc稀释，通过硅藻土垫过滤。用2M HCl溶液洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤，蒸发。用EtOAc/环己烷沉淀，得到标题化合物(318mg，80％纯度，60％收率)，为浅褐色粉末。MS：345.0[M+1]+，Rt(1)＝1.23min。
使用与用于实施例115类似的方法、使用适合的原料制备实施例116-117。
(1)LC/MS方法1
生物学评价
生物学测定
1 酶PI3Kα和PI3Kδ同工型抑制的测定
1.1 脂质激酶活性试验
实施例1-117的化合物作为PI3激酶抑制剂的效能可如下证明：
在半面积COSTAR 96孔板以50μl/孔的终体积进行激酶反应。测定中ATP和磷脂酰肌醇的终浓度分别为5μM和6μg/mL。加入PI3激酶例如PI3激酶δ引发反应。
p110δ.每孔如下加入测定成分：
·第2-1列，每孔10μL测试化合物的5％DMSO溶液。
·在第1列的前4个孔和第12列的后4个孔中加入10μL5％体积/体积DMSO测定总活性。
·在第1列的后4个孔和第12列的前4个孔中加入10μM对照化合物测定背景。
·每块板制备2ml“测定混合物”：
1.912ml HEPES测定缓冲液
8.33μl3mM ATP储备液，每孔终浓度为5μM
1μl处于活性期的[33P]ATP，每孔0.05μCi
30μl 1mg/ml PI储备液，每孔终浓度为6μg/mL
5μl 1M MgCl2储备液，每孔终浓度为1mM
·每孔加入20μl测定混合物。
·每块板制备2ml“酶混合物”(在2ml激酶缓冲液中含有x*μl PI3激酶p110β)。在加入到测定板期间将“酶混合物”置于冰上。
·每孔加入20μl“酶混合物”以开始反应。
·然后将板于室温孵育90分钟。
·向每孔加入50μL WGA-SPA珠(麦胚凝集素包被的闪烁亲近测定珠)混悬液终止反应。
·采用TopSeal-S(聚苯乙烯微量板的热密封剂，PerkinElmerLAS[Deutschland]GmbH，Rodgau，德国)密封测定板，于室温孵育至少60分钟。
·然后采用Jouan台式离心机(Jouan Inc.，Nantes，法国)将测定板于1500rpm离心2分钟。
·采用Packard TopCount将测定板计数，每孔计数20秒。
＊酶体积将取决于所用批次的酶活性。
在更优选的测定中，在低体积非结合CORNING 384孔黑色板(Cat.No.#3676)中以每孔10μl的终体积进行激酶反应。测定中ATP和磷脂酰肌醇(PI)的终浓度分别为1μM和10μg/mL。通过加入ATP引发反应。
每孔如下加入测定成分：
第1-20列，每孔50nl测试化合物的90％DMSO溶液，8个浓度(1/3和1/3.33系列稀释步骤)，单份。
·低对照：第23-24列，半数孔加入50nl 90％DMSO(终浓度0.45％)。
·高对照：第23-24列，另外半数孔加入50nl参照化合物(例如WO2006/122806中实施例7的化合物)(终浓度2.5μM)。
·标准：第21-22列，50nl如试验化合物稀释的如刚提及的参照化合物。
·每份测定制备20ml“缓冲液”：
200μl 1M TRIS HCl pH7.5(终浓度为10mM)
60μl 1M MgCl2(终浓度为3mM)
500μl 2M NaCl(终浓度为50mM)
100μl 10％CHAPS(终浓度为0.05％)
200μl 100mM DTT(终浓度为1mM)
18.94ml超纯水
·每份测定制备10ml‘PI’：
200μl 1mg/mL l-α-磷脂酰肌醇(Liver Bovine，Avanti PolarLipids Cat.No.840042C MW＝909.12)，制备于3％辛基葡糖苷中(终浓度为10μg/mL)
9.8ml‘缓冲液’
·每份测定制备10ml‘ATP’：
6.7μl 3mM ATP储备液，终浓度为每孔1μM
10ml‘缓冲液’
·每份测定的2.5ml每一PI3K构建体用“PI”如下制备，具有以下终浓度：
10nM PI3KαEMV B1075
25nM βEMV BV949
10nM δEMV BV1060
150nMγEMV BV950
·每孔加入5μl的‘PI/PI3K’。
·每孔加入5μl‘ATP’以引发反应。
·然后将板在室温孵育60分钟(α、β、δ)或120分钟(γ)。
·通过加入10μl激酶-Glo(Promega Cat.No.#6714)终止反应。
·10分钟后，在积分时间为100毫秒且灵敏度设置为191的Synergy2读取器(BioTek，Vermont USA)中对测定板读数。
·输出：高对照为约60’000计数并且低对照为30’000或更低。
·该发光测定得出有用的Z’比率在0.4至0.7之间。
Z’值是测定稳健性的通用量度。Z’在0.5至1.0之间被认为是优异的测定。
对于此测定，如下制备所提及的PI3K构建体：
1.2基因构建体的产生
使用两个不同构建体BV 1052和BV 1075以产生用于化合物筛选的PI3激酶α蛋白。
PI3KαBV-1052p85(iSH2)-Gly接头-p110a(D20aa)-C-端His标记
p85亚单位的inter SH2结构域(iSH2)和p110-a亚单位(具有前20个氨基酸缺失)的PCR产物通过重叠PCR产生并融合。
iSH2 PCR产物由第一链cDNA产生，最初使用以下引物：
gwG130-p01(5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)(SEQID NO：1)和gwG130-p02(5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’)(SEQ ID NO：2)。随后，在二次PCR反应中，使用以下引物分别在p85iSH2片段的5’端和3’端添加Gateway(Invitrogen AG，Basel，瑞士)重组AttB1位点和接头序列：
gwG130-p03(5’-GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATAT-GCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)(SEQ ID NO：3)和
gwG152-p04(5’-TACCATAATTCCACCACCACCACCGGAAATTCCCCCTGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’)(SEQ IDNO：4)。
p110-a片段也由第一链cDNA产生，最初使用引物gwG152-p01(5’-CTAGTGGAATGTTTACTACCAAATGG-3’)(SEQ ID NO：5)和gwG152-p02(5’-GTTCAATG-CATGCTGTTTAATTGTGT-3’)(SEQ IDNO：6)。
在随后的PCR反应中，使用如下引物分别在p110-a片段的5’端和3’端添加接头序列和组氨酸标记：
gw152-p03(5’-GGGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTATGGTAC-TAGTGGAATGTTTACTACC-AAATGGA-3’)(SEQ ID NO：7)和
gwG152-p06(5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCGTTCAATG-CATGCTGTTTAATTGTGT-3’)(SEQ ID NO：8)。
p85-iSH2/p110-a融合蛋白在第三PCR反应中、通过在iSH2片段3’端和p110-a片段5’端的重叠接头、使用上述gwG130-p03引物和含有重叠组氨酸标记和以下AttB2重组序列的引物进行装配：
(5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCTCC-3’)(SEQ ID NO：9)。
将该终产物在(Invitrogen)OR反应中重组至供体载体pDONR201中以产生ORF318进入克隆。该克隆通过测序验证，并用于Gateway LR反应中以转移插入片段至Gateway适配的pBlueBac4.5(Invitrogen)载体中用于生成杆状病毒表达载体LR410。
PI3KαBV-1075p85(iSH2)-12XGly接头-p110a(D20aa)-C-端His标记
杆状病毒BV-1075的构建体通过三部分连接生成，包括p85片段和p110-a片段被克隆至载体pBlueBac4.5中。p85片段衍生自用Nhe/Spe消化的质粒p1661-2。p110-a片段衍生自LR410(参见上文)，作为SpeI/HindIII片段。克隆载体pBlueBac4.5(Invitrogen)用Nhe/HindIII消化。这产生构建体PED 153.8。
p85成分(iSH2)通过PCR、使用ORF 318(上文所述)作为模板和如下的一个正向引物
KAC1028(5’-GCTAGCATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAATATACC)(SEQ ID NO：10)和以下两个反向引物产生：
KAC1029(5’-GCCTCCACCACCTCCGCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC)(SEQ ID NO：11)和
KAC1039(5’-TACTAGTCCGCCTCCACCACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC)(SEQ ID NO：12)。
两个反向引物重叠并掺入12x Gly接头和p110a基因的N-末端序列于SpeI位点。12x Gly接头替换BV1052构建体中的接头。将PCR片段克隆至pCR2.1TOPO(Invitrogen)中。在所获得的克隆中，确定p1661-2是正确的。该质粒用Nhe和SpeI消化，将所得片段凝胶分离，纯化，用于亚克隆。
p110-a克隆片段通过克隆LR410(参见上文)被SpeI和HindIII的酶消化产生。SpeI位点位于p110a基因的编码区。将所得片段凝胶分离，纯化，用于亚克隆。
克隆载体pBlueBac4.5(Invitrogen)通过用Nhe和HindIII进行酶消化而制备。切开的载体用Qiagen(Quiagen N.V，Venlo，芬兰)柱纯化，然后用小牛肠碱性磷酸酶(CIP)(New England BioLabs，Ipswich，MA)脱磷酸化。CIP反应完成后，再次将切开的载体柱纯化以产生最终的载体。使用RocheRapid连接酶和供应商说明进行三部分连接。
PI3KβBV-949p85(iSH2)-Gly接头-p110b(全长)-C-端His标记
p85亚单位的inter SH2结构域(iSH2)和全长p110-a亚单位的PCR产物通过重叠PCR产生并融合。
iSH2PCR产物由第一链cDNA产生，最初使用引物gwG130-p01(5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)(SEQ ID NO：1)和gwG130-p02(5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’)(SEQ ID NO：2)。随后，在二次PCR反应中，Gateway(Invitrogen)重组AttB1位点和接头序列被分别添加至p85iSH2片段的5’端和3’端，使用引物gwG130-p03(5’-GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATA-TACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)(SEQ ID NO：3)和gwG130-p05(5’-ACTGAAGCATCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAAT-GCTGTTCATACGTTTGTC-3’)(SEQID NO：13)。
p110-b片段也由第一链cDNA产生，最初使用引物gwG130-p04(5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTTCAGTTTCATAATGCC-TCCTGCT-3’)(SEQ ID NO：4)，其含有接头序列和p110-b的5’端，和
gwG130-p06(5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATCTGTAGTCTTT-CCGAACTGTGTG-3’)(SEQ ID NO：14)，其含有融合至组氨酸标记的p110-b的3’端序列。
p85-iSH2/p110-b融合蛋白通过重叠PCR、iSH2片段3’端和p110-b片段5’端接头的反应、使用以上提及的gwG130-p03引物和含有重叠组氨酸标记和AttB2重组序列(5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTT-AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3’)(SEQ IDNO：15)的引物进行装配。
将该终产物在Gateway(Invitrogen)OR反应中重组至供体载体pDONR201中以产生ORF253进入克隆。该克隆通过测序验证，并用于Gateway LR反应以转移插入片段至Gateway适配的pBlueBac4.5(Invitrogen)载体中，用于产生杆状病毒表达载体LR280。
PI3KδBV-1060p85(iSH2)-Gly接头-p110d(全长)-C-端His标记
p85亚单位的inter SH2结构域(iSH2)和全长p110-d亚单位的PCR产物通过重叠PCR产生并进行融合。
iSH2PCR产物由第一链cDNA产生，最初应用下列引物：
gwG130-p01(5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)(SEQID NO：1)和gwG130-p02(5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’)(SEQ ID NO：2)。随后在第二次PCR反应中，应用下列引物分别在p85iSH2片段的5’端和3’端加上Gateway(Invitrogen)重组AttB1位点和接头序列：
gwG130-p03(5’-GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACAT-ATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’)(SEQ ID NO：3)和
gwG154-p04(5’-TCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC-3’)(SEQ ID NO：16)。
p110-a片段也由第一链cDNA产生，最初应用下列引物：gwG154-p01(5’-ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT-3’)(SEQ ID NO：17)和gwG154-p02(5’-CTACTG-CCTGTTGTCTTTGGACACGT-3’)(SEQ IDNO：18)。
在随后的PCR反应中，应用下列引物分别在p110-d片段的5’端和3’端加上接头序列和组氨酸标记：gw154-p03(5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA-3’)(SEQID NO：19)和gwG154-p06(5’-AGCTCCGTGATGGTGAT-GGTGATGTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT-3’)(SEQ ID NO：20)。
p85-iSH2/p110-d融合蛋白是在第三次PCR反应中、通过iSH2片段3’端和p110-d片段5’端的重叠接头而组装，使用上述gwG 130-p03引物和包含重叠组氨酸标记和Gateway(Invitrogen)AttB2重组序列的引物：(5’-GGGACCACTTTGTA-CAAGAAAGCTGGGTTT-AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3’)(SEQ ID NO：21)。
将该终产物在Gateway(Invitrogen)OR反应中重组到供载体pDONR201中，以产生ORF319进入克隆。该克隆经测序确证，并在Gateway LR反应中用于将插入片段转移至Gateway适配的pBlueBac4.5(Invitrogen)载体中，以产生杆状病毒表达载体LR415。
PI3KγBV-950p110g(D144aa)-C-端His标记
该构建体获自Roger Williams实验室，MRC Laboratory ofMolecularBiology，Cambridge，UK(2003年11月)。构建体的描述参见Pacold M.E.等人(2000)Cell103，931-943。
1.3 蛋白质表达和纯化
生成PI3K同工型重组杆状病毒和蛋白的方法：
将含有不同PI3激酶基因的pBlue-Bac4.5(对于a、b和d同工型)或pVL1393(对于g)质粒用BaculoGold WT基因组DNA(BD Biosciences，Franklin Lakes，NJ，USA)共转染，使用供应商推荐的方法。随后，将转染得到的重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞上噬斑纯化，以生成若干表达重组蛋白的分离物。通过抗-HIS或抗同工型抗体蛋白质印迹分析选择阳性克隆。对于PI3Kα和δ同工型，对PI3K的首次克隆病毒储备物进行二次噬斑纯化。以低感染复数(moi)进行所有杆状病毒分离物的扩增，以生成高滴度、低传代储备物用于蛋白生成。杆状病毒命名为BV1052(α)和BV1075(α)、BV949(β)、BV1060(δ)和BV950(γ)。
蛋白生产包括在2l玻璃Erlenmyer烧瓶(110rpm)或摇袋式生物反应器(wave-bioreactor)(22-25rpm)中以moi 2-10感染(3代或更低)无蛋白培养基中悬浮的Tn5(Trichoplusia ni)或TiniPro(Expression Systems，LLC，Woodland，CA，USA)细胞达39-48小时。最初，将10l工作体积的摇袋式生物反应器以3e5细胞/ml的密度半容量(5L)接种。将反应器以15rpm在细胞生长期摇晃72小时，添加5％氧空气混合物(每分钟0.2l)。在感染前，立即分析摇袋式反应器的密度、存活力，并稀释至约1.5e6细胞/ml。再培养2-4小时，加入100-500ml高滴度、低传代病毒。对于39-48小时的感染期，增加氧至35％，摇晃平台的rpm增至25。在感染期间，通过Vicell存活力分析仪(Beckman Coulter，Inc，Fullerton，CA，USA)生物工艺监测细胞的存活力、直径和密度。每12-18小时直至收集，读取各种参数和代谢物(pH、O2饱和度、葡萄糖等)的Nova Bioanalyzer(NOVABiomedicalCorp.，Waltham，MA，USA)读数。感染后48小时内收集摇袋式生物反应器的细胞。离心收集细胞(4℃/1500rpm)，随后在汇集沉淀期间保持在冰上用于裂解和纯化。用少量冷的未补充Grace’s培养基(w/o蛋白酶抑制剂)处理沉淀汇集物。
HTS(BV1052)的PI3Kα纯化方案
PI3Kα以三个色谱步骤纯化：使用Ni琼脂糖树脂的固定化金属亲和性色谱(GE Healthcare，属于General Electric Company，Fairfield，CT，USA)、使用Superdex 20026/60柱(GE Healthcare)的凝胶过滤，和最后在SP-XL柱(GE Healthcare)上的阳离子交换步骤。所有缓冲液冷却至4℃，裂解在冰上冷却进行。柱上分级在室温迅速进行。
通常，将冷冻的昆虫细胞在高渗裂解缓冲液中裂解，并施加至准备好的IMAC柱上。将树脂用3-5个柱体积的裂解缓冲液洗涤，继而用3-5个柱体积的含有45mM咪唑的洗涤缓冲液洗涤，然后用含有250mM咪唑的缓冲液洗脱目标蛋白。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析各级分，汇集含有目标蛋白的级分，施加至准备好的GFC柱。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析来自GFC柱的级分，汇集含有目标蛋白的级分。将来自GFC柱的汇集物用低盐缓冲液稀释，施加至准备好的SP-XL柱。将柱用低盐缓冲液洗涤，直至得到稳定的A280基线吸收，使用0mM NaCl至500mM NaCl的20个柱体积梯度洗脱。同样，通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析来自SP-XL柱的级分，汇集含有目标蛋白的级分。将最终的汇集物透析至含有50％甘油的储备缓冲液中，储存于-20℃。在磷酸肌醇激酶试验中分析最终汇集物的活性。
HTS(BV949)的PI3Kβ纯化方案
PI3Kβ以两个色谱步骤纯化：使用Ni琼脂糖树脂(GE Healthcare)的固定化金属亲和性色谱(IMAC)和使用Superdex 20026/60柱(GEHealthcare)的凝胶过滤(GFC)。所有缓冲液冷却至4℃，裂解在冰上冷却进行。柱上分级在室温迅速进行。
通常，将冷冻的昆虫细胞在高渗裂解缓冲液中裂解，并施加至准备好的IMAC柱上。将树脂用3-5个柱体积的裂解缓冲液洗涤，继而用3-5个柱体积的含有45mM咪唑的洗涤缓冲液洗涤，然后用含有250mM咪唑的缓冲液洗脱目标蛋白。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析各级分，汇集含有目标蛋白的级分，施加至准备好的GFC柱。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析来自GFC柱的级分，汇集含有目标蛋白的级分。将最终的汇集物透析至含有50％甘油的储备缓冲液中，储存于-20℃。在磷酸肌醇激酶试验中分析最终汇集物的活性。
HTS(BV950)的PI3Kγ纯化方案
PI3Kγ以两个色谱步骤纯化：使用Ni琼脂糖树脂(GE Healthcare)的固定化金属亲和性色谱(IMAC)和使用Superdex 20026/60柱(GEHealthcare)的凝胶过滤(GFC)。所有缓冲液冷却至4℃，裂解在冰上冷却进行。柱上分级在室温迅速进行。通常，将冷冻的昆虫细胞在高渗裂解缓冲液中裂解，并施加至准备好的IMAC柱上。将树脂用3-5个柱体积的裂解缓冲液洗涤，继而用3-5个柱体积的含有45mM咪唑的洗涤缓冲液洗涤，然后用含有250mM咪唑的缓冲液洗脱目标蛋白。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析各级分，汇集含有目标蛋白的级分，施加至准备好的GFC柱。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析来自GFC柱的级分，汇集含有目标蛋白的级分。将最终的汇集物透析至含有50％甘油的储备缓冲液中，储存于-20℃。在磷酸肌醇激酶试验中分析最终汇集物的活性。
HTS(BV1060)的PI3Kδ纯化方案
PI3Kδ以三个色谱步骤纯化：使用Ni琼脂糖树脂(GE Healthcare)的固定化金属亲和性色谱、使用Superdex 20026/60柱(GE Healthcare)的凝胶过滤，和最后在Q-HP柱(GE Healthcare)上的阴离子交换步骤。所有缓冲液冷却至4℃，裂解在冰上冷却进行。柱上分级在室温迅速进行。通常，将冷冻的昆虫细胞在高渗裂解缓冲液中裂解，并施加至准备好的IMAC柱上。将树脂用3-5个柱体积的裂解缓冲液洗涤，继而用3-5个柱体积的含有45mM咪唑的洗涤缓冲液洗涤，然后用含有250mM咪唑的缓冲液洗脱目标蛋白。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析各级分，汇集含有目标蛋白的级分，施加至准备好的GFC柱。通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析来自GFC柱的级分，汇集含有目标蛋白的级分。将来自GFC柱的汇集物用低盐缓冲液稀释，施加至准备好的Q-HP柱。将柱用低盐缓冲液洗涤，直至得到稳定的A280基线吸收，使用0mM NaCl至500mM NaCl的20个柱体积梯度洗脱。此外，通过考马斯染色的SDS-PAGE凝胶分析来自Q-HP柱的级分，汇集含有目标蛋白的级分。将最终的汇集物透析至含有50％甘油的储备缓冲液中，储存于-20℃。在磷酸肌醇激酶试验中分析最终汇集物的活性。
通过四参数曲线拟合程序与“excel fit”确定IC50。使用四参数对数方程计算每一化合物8个浓度(通常10、3.0、1.0、0.3、0.1、0.030、0.010和0.003μM)百分抑制的IC50值(IDBS XLfit)。或者，使用idbsXLfit模型204即一种四参数对数模型计算IC50值。
再或者，对于ATP耗竭试验，将待测试的式I化合物溶于DMSO，以0.5μL每孔直接分配至白色384-孔板。为开始反应，向每孔添加10μL10nM PI3激酶和5μg/mL 1-α-磷脂酰肌醇(PI)，继而添加10μL 2μM ATP。进行反应，直至约50％的ATP被耗竭，然后添加20μL激酶-Glo溶液(Promega Corp.，Madison，WI，USA)终止反应。将终止的反应物孵育5分钟，然后经由发光检测剩余的ATP。然后确定IC50值。
实施例1-117的化合物中的一些显示出一定水平的针对不同的同源PI3Kα、β、γ和δ的选择性。
适合地，正如体外体内试验中所示的，针对同工型PI3Kδ的选择性为针对不同同源PI3Kα和β的选择性的至少10-倍，更优选至少30-倍。
这些测定中以IC50表示的活性范围优选在1nM至5000nM之间，更优选在1nM至约1000nM之间。
细胞测定
1 Rat1细胞中PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ抑制的测定
使用均匀夹心式磷酸-ELISA、基于Perkin Elmer的ALPHA技术在细胞环境中显示化合物在阻断PI3K/PKB途经活化中的效能，所述基于Perkin Elmer的ALPHA技术用于Rat1细胞中PKB Ser473磷酸化的化合物介导的抑制的敏感性定量，所述细胞用PI3-激酶同工型α、β或δ的活化形式稳定转染：
1.1 细胞和细胞培养条件
在补充了10％热灭活的胎牛血清(Amimed，目录号2-01F16-I)、1％L-谷氨酰胺(Invitrogen，目录号25030-02)、1％青霉素-链霉素(GIBCO，目录号15140-114)和10μg/ml Puromycine(Sigma，目录号P9620)的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM高葡萄糖，GIBCO，目录号41956-039)中培养稳定表达myr-HA-标记的催化PI3K I类p110同工型α、β或δ的组成型活性亚单位的Rat1细胞系(已经证实在p110同工型N-末端上添加十四烷基化信号导致PI3K组成型活化和相应的下游信号，例如在Ser473的PKB磷酸化)。
1.2细胞的化合物处理和样品的制备
将测试化合物制备成10mM在DMSO中的储备溶液(Merck，#8.02912.2500)。在384孔培养板(Greiner PP-Microplate，#781201)中用3-倍连续90％DMSO稀释液(Merck，#8.02912.2500)制备测试化合物，其中浓度从2mM开始共8个浓度。在随后的2个1∶20稀释步骤(5μl+95μl)中使用MATRIX PlateMate 2x2手按移液器(384孔-栏)从主培养板中将测试化合物(1∶400)预稀释入384孔培养板的饥饿培养基中。然后将25μl/孔的这种1∶400稀释液加入到细胞培养板中。按照1∶800稀释的最终化合物导致全部化合物的起始浓度为2.5μM；将最终DMSO浓度保持恒定在0.125％，还用于对照细胞(高和低对照)。
将Rat1-myr-HA-p110α、β或δ细胞进行胰蛋白酶消化，用CASY TT细胞计数器(System GmbH，Reutlingen德国)计数。将表达myr-HA-p110α、β或δ的Rat1细胞以15,000细胞/孔接种在384-孔培养板的50μl/孔完全培养基中，并在37℃、5％CO2中孵育20h，直到细胞层达到80-90％汇合率为止。在随后的2个1∶20稀释步骤(5μl+95μl)中使用MATRIX PlateMate 2x2手按移液器(384孔-栏)从主培养板中将测试化合物(1∶400)预稀释入384孔培养板的饥饿培养基中。然后将25μl/孔的这种1∶400稀释液加入到细胞培养板中。按照1∶800稀释的最终化合物导致全部化合物的起始浓度为2.5μM；将最终DMSO浓度保持恒定在0.125％，还用于对照细胞(高和低对照)。按照1∶800稀释的最终化合物导致全部化合物的起始浓度为2.5μM；将最终DMSO浓度保持恒定在0.125％，还用于对照细胞(高和低对照)，得到最终化合物浓度为10、3.333、1.111、0.370、0.123、0.041、0.014，、0.005μM。
将未处理的细胞用作低对照，将在无化合物的存在下刺激的细胞用作高对照。在与化合物一起孵育1h后，通过添加富含0.72％BSA的15μl 3x裂解缓冲液(使用SureFire试剂盒作为5x溶液提供)裂解细胞，得到总体积45μl细胞裂解液/孔。即刻使用细胞裂解液，在-20℃冷冻贮存(在密封培养板中)至使用位置。将5μl裂解液各自转入Proxy-培养板，并按照供应商的说明与Surefire珠、反应缓冲液(包含适合的抗体)、活化缓冲液和稀释缓冲液混合，得到总体积12μl/孔(测定中总最终BSA浓度为0.1％)。在RT在黑暗中2h孵育后(通过振摇)，使用EnVision读出器(Perkin Elmer)测定光发射。将高对照与低对照之差取为100％，将化合物的作用表示为抑制百分比。根据剂量响应曲线通过图外推确定IC50值。
2)鼠B细胞活化的测定
当通过B细胞受体(BCR)刺激细胞时，PI3Kδ已被验证可调节B细胞功能(Okkenhaug等人Science297：1031(2002)。为评估化合物对B细胞活化的抑制性质，在用抗-IgM刺激后，测量源自小鼠脾抗体的鼠B细胞上活化标记物CD86和CD69的上调。CD69是熟知的B和T细胞的活化标记物(Sancho等人Trends Immunol.26：136(2005)。CD86(也被称为B7-2)主要在抗原呈递细胞、包括B细胞上表达。静息B细胞以低水平表达CD86，但在刺激例如BCR或IL-4受体后上调CD86。B细胞上的CD86与T细胞上的CD28相互作用。这种相互作用对于最佳T细胞活化和最佳IgG1响应的产生是必需的(Carreno等人Annu Rev Immunol.20：29(2002))。
收集来自Balb/c小鼠的脾，分离脾细胞并用含有10％胎牛血清(FBS)、10mM HEPES、100单位/mL青霉素/链霉素的RPMI洗涤两次。以这种方式补充的RPMI此后被称为培养基。将细胞在培养基中调节至2.5X106个细胞/mL并将200μl细胞悬液(5x106个细胞)加至96孔板的适当孔中。
然后通过加入培养基中的50μl抗-IgM mAb(终浓度：30μg/mL)刺激细胞。在37℃孵育24小时后，将细胞用下列抗体合剂染色：用于评估B细胞的抗-小鼠CD86-FITC、抗-小鼠CD69-PerCP-Cy5.5、抗-小鼠CD19-PerCP，以及用于评估T细胞的抗-小鼠CD3-FITC、抗-小鼠CD69-PE(2μl每种抗体/孔)。在室温(RT)于暗处1小时后，将细胞转移至96深孔板中。将细胞用1ml含有2％FBS的PBS洗涤1次，在重新悬浮于200μl中后，在FACS Calibur流式细胞仪上分析该样品。在FSC/SSC点图中根据大小和粒度对淋巴细胞进行门控并进一步分析CD19、CD3和活化标记物(CD86、CD69)的表达。使用BD CellQest软件，将来自斑点印迹的数据计算成CD19+或CD3+种群内对活化标记物阳性染色的细胞的百分比。
对于评估化合物的抑制性质，首先将化合物溶解并在DMSO中稀释，然后在培养基中以1∶50稀释。将来自Balb/c小鼠的脾细胞分离，重新悬浮并转移至96孔板(200μl/孔)，如上所述。将经稀释的化合物或溶剂加至板(25μl)中并在37℃孵育1小时。然后在37℃将培养物用25μl抗-IgM mAb/孔(终浓度30μg/mL)刺激24小时并用抗-小鼠CD86-FITC和抗-小鼠CD19-PerCP(2μl每种抗体/孔)染色。如上所述通过流式细胞仪定量在CD19阳性B细胞上的CD86表达。
生物学数据
酶测定
实施例 PI3Kα(uM) PI3Kδ(uM)
1 0.294 0.0072
2 0.779 0.0095
3 0.062 ＜0.003
4 1.1585 0.009
5 1.3215 0.0085
6 0.589 0.008625
7 0.712 0.006
8 0.268 0.0095
9 1.398 0.01004
10 ＞9.1 0.027
11 1.0735 0.028
12 0.4175 0.02025
13 1.328 0.034
14 0.0785 ＜0.003
15 1.2315 0.017
16 0.695 0.0125
17 0.3525 0.006375
18 1.2855 0.0421429
19 0.678 0.0115
20 2.483 0.024
21 2.2676667 0.0145
22 0.7895 0.0115
23 0.931 0.0125
24 0.4 0.015
25 0.1835 0.007
26 0.6136 0.01775
27 0.4035 0.0185
28 0.418 0.009
29 0.075 0.003
30 0.3866667 0.0066667
31 0.631 0.006
32 0.174 0.007
33 0.639 0.012
34 0.488 0.0225
35 0.262 0.007
36 0.21725 0.0045
37 0.426 0.004
38 0.3725 0.007
39 0.77 0.0115
40 0.2695 0.003
41 0.7075 0.0205
42 0.152 0.006
43 0.3745 0.011
44 0.2825 ＜0.003
45 1.1975 0.0365
46 5.295 0.0235
47 ＞9.1 0.027
48 3.7995 0.0475
49 8.9455 0.0355
50 0.319 0.0105
51 0.1175 0.0035
52 0.189 0.0075
53 0.472 0.007
54 0.069 0.003
55 0.19275 0.00925
56 0.5425 0.011
57 0.4615 0.02175
58 0.6455 0.0055
59 1.7095 0.0315
60 0.657 0.0195
61 0.39 0.003
62 1.151 0.007
63 0.505 0.006
64 0.583 0.011
65 0.64 0.01
66 0.763 0.0095
67 0.306 0.007
68 0.097 0.003
69 0.88 0.008
70 1.026 0.03
71 0.5505 0.008
72 0.0695 0.003
73 0.0605 ＜0.003
74 0.1496667 0.005
75 0.3195 0.012
76 0.5775 0.0235
77 0.573 0.014
78 0.123 0.0045
79 0.3595 0.01
80 0.717 0.0105
81 0.401 0.003625
82 1.334 0.0215
83 0.904 0.021
84 0.5585 0.0095
85 0.793 0.007
86 0.3805 0.0155
87 0.126 ＜0.003
88 0.1 0.002675
89 0.099 0.004
90 0.181 0.00575
91 0.1465 ＜0.003
92 0.1955 0.00375
93 0.12 ＜0.003
94 0.174 0.006
95 0.281 0.009
96 0.316 0.006
97 0.463 0.023
98 0.1015 0.0035
99 0.237 0.0045
100 0.188 0.005
101 1.271 0.016
102 0.77 0.011
103 2.121 0.008
104 3.293 0.038
105 0.72 0.007
106 0.44 0.005
107 0.716 0.005
108 0.158 0.007
109 0.435 0.014
110 0.366 0.008
111 1.357 0.01
112 2.316 0.049
113 0.979 0.018
114 0.071 0.003
115 0.888 0.0425
116 0.306 0.014
117 0.238 0.009
细胞测定
实施例 细胞PI3Kd/IC50[umol l-1] mCD86/IC50 CD86[nmol l-1]
1 0.02735 69.5
2 0.0275 69.5
7 0.083 20.15
12 0.0535 107
44 0.037 86.5
75 0.014 54
81 0.0195 79
91 0.0323333 44
110 0.103 155
117 0.043 101

Claims (16)

1.式(I)的取代的喹唑啉衍生物和/或互变体和/或N-氧化物和/或其药学可接受的盐，
其中
A是任选地包含1-2个另外的选自N、O或S的杂原子的饱和5-8元单-或6-12元双环稠合、双环桥连或双环螺杂环，其中所述杂环未被取代或被1-4个取代基取代，所述取代基选自
羟基-
卤代-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-羰基-
卤代-C1-C7-烷基-
卤代-C1-C7-烷基-羰基-
C1-C7-烷氧基-羰基-
氧代(O＝)；
X1和X2是CH、N、CR
其中R独立地选自
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-；
X3是CH、N、CR3
其中R3选自
氰基-
硝基-
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
C1-C10-环烷基-氧基-
苯基-氧基-
苄基-氧基-
C1-C7-烷氧基-C1-C7-烷氧基-
羧基-
C1-C7-烷氧基-羰基-
氨基-羰基-
N-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
氨基-磺酰基-
N-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
1-吡咯烷代-磺酰基-
4-吗啉代-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-；
X4是CH、N、CR4
其中R4选自
F3C-；
R5选自
氢-
卤素-
羟基-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
C1-C7-烷基-羰基-
C1-C7-烷基-羰基-氨基-
氨基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-
条件是如果X4是CH，则R3和R5不都是甲氧基。
2.根据权利要求1的化合物，其中
A是选自如下的饱和杂环
其未被取代或被1-4个取代基取代，所述取代基选自
羟基-
卤代-
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-羰基-
卤代-C1-C7-烷基-
卤代-C1-C7-烷基-羰基-
C1-C7-烷氧基-羰基-
氧代(O＝)。
3.根据权利要求1或2任一项的化合物，其中
X4是N；
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-；且
X3是CH或CR3
其中R3选自
氰基-
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-。
4.根据权利要求1至2任一项的化合物，其中
X4是N；
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-
1-吡咯烷基-
1-哌嗪基-；且
X3是N。
5.根据权利要求1或2任一项的化合物，
X4是N；
R5选自
氢；且
X3是CR3
其中R3选自
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-羰基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-磺酰基-
1-吡咯烷代-磺酰基-
4-吗啉代-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-。
6.根据权利要求1至2任一项的化合物，其中
X4是CH；
R5选自
C1-C7-烷基-
C1-C7-烷氧基-
卤代-C1-C7-烷基-氧基-
氨基-
N-C1-C7-烷基-氨基-
N，N-二-C1-C7-烷基-氨基-；且
X3是CR3
其中R3选自
氰基-
卤素-
卤代-C1-C7-烷基-
C1-C7-烷基-。
7.根据权利要求1至2任一项的化合物，其中
X4是CR4
其中R4选自
F3C-；
R5选自
氨基-磺酰基-
C1-C7-烷基-磺酰基-氨基-；且
X3是CH。
8.根据权利要求1-2和3或1-2和4任一项的化合物，其中
A是选自如下的饱和杂环
X1是CR1
其中R1选自氟-；
X2是CH；
X4是N；
R5选自
甲氧基-；且
X3是CH或CR3
其中R3选自
氰基-；
或
A是选自如下的饱和杂环
X1是CH；
X2是CH；
X4是N；
R5选自
甲氧基-；且
X3是N。
9.如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)化合物，其用作药物。
10.如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)的化合物在制备用于治疗由PI3K酶活性、优选由PI3Kδ活性介导的疾病或障碍的药物中的用途。
11.药物组合物，其包含治疗有效量的如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)化合物和一种或多种药学可接受的载体。
12.调节受试者P13K酶活性、优选PI3Kδ活性的方法，包括对受试者施用治疗有效量的如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)化合物。
13.治疗由PI3K酶、优选由PI3Kδ介导的障碍或疾病的方法，包含对受试者施用治疗有效量的如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)的化合物的步骤。
14.根据权利要求13的方法，其中所述障碍或疾病选自自身免疫障碍、炎性疾病、过敏性疾病、呼吸道疾病例如哮喘和COPD、移植排斥、例如造血起源的癌症或实体瘤。
15.如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)化合物在治疗受试者由PI3K酶活性、优选由PI3Kδ活性介导的障碍或疾病中的用途。
16.如权利要求1-8任一项中所定义的式(I)化合物在治疗障碍或疾病中的用途，所述障碍或疾病选自自身免疫障碍、炎性疾病、过敏性疾病、呼吸道疾病例如哮喘和COPD、移植排斥、例如造血起源的癌症或实体瘤。
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