CN103981245A - 利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的是利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法。传统的螺旋藻加工方法取得的螺旋藻得到的蛋白是粗蛋白。本发明按照料水重量比是1：6-10的比例于螺旋藻泥中加入水，使螺旋藻泥均匀分散于水中，得到螺旋藻泥混悬液；NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的pH值是7.5-8.5，加入活性是10-150万u/g生物酶，使得酶底比达到600-700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是45-70℃，酶解3-10小时，得到螺旋藻酶解液，煮沸灭酶活10min，迅速冷却，6000r/min离心10min，得到螺旋藻小肽酶解液，喷雾干燥后得到螺旋藻小分子活性肽。本发明所制备的螺旋藻活性小肽更容易被机体吸收，酶解产物与血浆蛋白相比有一定的优势，具有成为高档蛋白饲料原料替代血浆蛋白的潜力。
Description
技术领域
本发明涉及的是利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法，属生物技术领域。
背景技术
螺旋藻又称蓝细菌，是一种丝状多细胞螺旋体的原核藻类生物，属于蓝藻门颤藻科。螺旋藻具有很高的营养价值，其蛋白质含量高达60%~70%，是目前已知食物中最高的，而且含有丰富的氨基酸、维生素、脂肪、类胡萝卜素、多糖以及矿物质，是人类理想的食物及药物资源。大量的研究表明，螺旋藻具有抗病毒、抑癌症、抗氧化、抗辐射、降血脂、增强免疫力等功能。因此，螺旋藻具有广阔的开发前景。生物活性肽是由氨基酸组成的具有生物活性的肽类化合物，一般是以植物或动物蛋白为原料，利用化学方法将蛋白质水解而制成。小分子的活性肽不仅能够提供机体生长发育所需的营养物质，而且具有增强免疫力、降血栓、抑制细菌、降血压、抗氧化等功能。与游离氨基酸和蛋白质相比，小分子的活性肽能够更好、更快地被机体吸收。因此，越来越多的研究者开始关注生物活性肽，小肽的制备、分离、纯化、提取及其所具有的生物活性已经成为研究的热点，并且取得不少的成果。
高蛋白含量的生物活性小肽作为一种新型的饲料添加剂日益受到人们的关注。螺旋藻含有丰富的蛋白质，是极佳的蛋白质来源，目前以螺旋藻泥为蛋白原料生产高活性小肽的研究鲜有报道，传统的螺旋藻加工方法就是采集螺旋藻泥后，通过干燥把水份去掉，这样取得的螺旋藻得到的蛋白是粗蛋白，与小分子活性肽有着很大的区别，这些区别表现在小分子活性肽比蛋白质有更好的吸收率、更好的生物利用度及生理活性。因此，利用螺旋藻泥制备小分子活性肽是非常有意义的，本发明提供了以螺旋藻泥为主要原料进行酶解制备高活性小肽的生产方法，用本发明方法能制备出高质量的小分子活性肽。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法，用生物酶将螺旋藻泥进行酶解，得到酶解产物小分子活性肽，克服传统螺旋藻泥加工方式所存在的不足，使得螺旋藻的加工产物具有更高的吸收率理好的生物利用度。
上述发明目的通过下述技术方案实现，利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法，包括下述具体步骤：
（1）称取一定量的螺旋藻泥，按照料水重量比是1：6-10的比例于螺旋藻泥中加入水，使螺旋藻泥均匀分散于水中，得到螺旋藻泥混悬液备用；
（2）用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是7.5-8.5，加入活性是10-150万u/g生物酶，所加的酶用量使得酶底比达到600-700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是45-70℃，酶解3-10小时，得到螺旋藻酶解液备用；
（3）螺旋藻酶解液煮沸灭酶活10 min，迅速冷却，6000r/min离心10min，得到螺旋藻小肽酶解液，喷雾干燥后得到螺旋藻小分子活性肽；
上述方法的步骤（2）的优选方法是：用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是8.5，加入活性是10-150万u/g生物酶，所加的酶用量使得酶底比达到700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是55℃，酶解3小时，得到螺旋藻酶解液备用；
所述生物酶指的是：碱性蛋白酶、植物蛋白水解复合酶或菠萝蛋白酶。
采取上述措施的本发明，对制备条件进行了深入的研究，基于所选制备条件的本发明制备的螺旋藻活性肽的水解度(DH)为11.82%，三氯乙酸-可溶性氮指数（TCA-SNI）为55.13%。利用高效凝胶过滤色谱法对酶解产物进行分子量的测定，结果显示：分子量小于1000 Da的寡肽占66.6%，小肽分子量分布主要集中在260 Da附近，约2个氨基酸残基，含量为39.57%。将喷雾干燥后的酶解产物与血浆蛋白进行对比，酶解产物（上清）的粗蛋白含量为64.89%，小肽含量为35.67%；血浆蛋白的粗蛋白含量为75.84%，小肽含量为1.15%； 酶解产物总磷含量为1.64%，是血浆蛋白的11倍；钙含量为0.20%，铁含量为125.6 mg/kg，与血浆蛋白相当；赖氨酸含量为2.45%，组氨酸含量为3.20%，蛋氨酸含量为4.98%。酶解产物具有抗氧化性，其DPPH自由基清除率为61.30%，而且本发明所制备的螺旋藻活性小肽更容易被机体吸收，所以酶解产物与血浆蛋白相比有一定的优势，具有成为高档蛋白饲料原料替代血浆蛋白的潜力。
具体实施方式
实施例1
（1）称取100公斤的螺旋藻泥，加入600公斤的水，使螺旋藻泥均匀分散于水中，得到螺旋藻泥混悬液备用；
（2）用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是7.5，加入活性是10万u/g碱性蛋白酶，所加的酶用量使得酶底比达到600u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是45℃，酶解3小时，得到螺旋藻酶解液备用；
（3）螺旋藻酶解液煮沸灭酶活10 min，迅速冷却，6000r/min离心10min，得到螺旋藻小肽酶解液，喷雾干燥后得到螺旋藻小分子活性肽。
实施例2
（1）称取100公斤的螺旋藻泥，加入100公斤 的水，使螺旋藻泥均匀分散于水中，得到螺旋藻泥混悬液备用；
（2）用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是8.5，加入活性是150万u/g植物蛋白水解复合酶，所加的酶用量使得酶底比达到700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是70℃，酶解10小时，得到螺旋藻酶解液备用；
（3）螺旋藻酶解液煮沸灭酶活10 min，迅速冷却，6000r/min离心10min，得到螺旋藻小肽酶解液，喷雾干燥后得到螺旋藻小分子活性肽。
实施例3
（1）称取100公斤的螺旋藻泥，加入100公斤 的水，使螺旋藻泥均匀分散于水中，得到螺旋藻泥混悬液备用；
（2）用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是8.5，加入活性是100万u/g菠萝蛋白酶，所加的酶用量使得酶底比达到700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是55℃，酶解3小时，得到螺旋藻酶解液备用；
（3）螺旋藻酶解液煮沸灭酶活10 min，迅速冷却，6000r/min离心10min，得到螺旋藻小肽酶解液，喷雾干燥后得到螺旋藻小分子活性肽。
Claims (2)
1.利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法，其特征在于所述方法包括下述具体步骤：
（1）称取一定量的螺旋藻泥，按照料水重量比是1：6-10的比例于螺旋藻泥中加入水，使螺旋藻泥均匀分散于水中，得到螺旋藻泥混悬液备用；
（2）用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是7.5-8.5，加入活性是10-150万u/g生物酶，所加的酶用量使得酶底比达到600-700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是45-70℃，酶解3-10小时，得到螺旋藻酶解液备用；
（3）螺旋藻酶解液煮沸灭酶活10 min，迅速冷却，6000r/min离心10min，得到螺旋藻小肽酶解液，喷雾干燥后得到螺旋藻小分子活性肽；
所述生物酶指的是：碱性蛋白酶、植物蛋白水解复合酶或菠萝蛋白酶。
2.根据权利要求1所述的利用螺旋藻泥制备高活性小肽的方法，其特征在于所述方法步骤是：
用1mol/L NaOH溶液调节螺旋藻泥混悬液的酸碱度，使pH值是8.5，加入活性是10-150万u/g生物酶，所加的酶用量使得酶底比达到700u/g，调整螺旋藻泥混悬液的酶解温度是55℃，酶解3小时，得到螺旋藻酶解液备用。
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