CN103898038B - 一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用 - Google Patents
一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103898038B CN103898038B CN201410124438.0A CN201410124438A CN103898038B CN 103898038 B CN103898038 B CN 103898038B CN 201410124438 A CN201410124438 A CN 201410124438A CN 103898038 B CN103898038 B CN 103898038B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lipopeptid
- ycxa
- engineering bacteria
- bacillus subtilis
- application
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 41
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 19
- 239000003876 biosurfactant Substances 0.000 title claims abstract description 19
- AFWTZXXDGQBIKW-UHFFFAOYSA-N C14 surfactin Natural products CCCCCCCCCCCC1CC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)O1 AFWTZXXDGQBIKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- NJGWOFRZMQRKHT-UHFFFAOYSA-N surfactin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC1CC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(O)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)O1 NJGWOFRZMQRKHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- NJGWOFRZMQRKHT-WGVNQGGSSA-N surfactin C Chemical compound CC(C)CCCCCCCCC[C@@H]1CC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O1 NJGWOFRZMQRKHT-WGVNQGGSSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 36
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 34
- 101100213114 Bacillus subtilis (strain 168) ycxA gene Proteins 0.000 claims description 10
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 3
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910052603 melanterite Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 abstract description 3
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 abstract description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 20
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 6
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101150105823 ycxA gene Proteins 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 description 4
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 4
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 4
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 4
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 4
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 4
- RCIPRGNHNAEGHR-ZLHAWHIKSA-N 3-[(3s,6s,13s,16r,19r,22r,25r,28s)-6,13,19,22-tetrakis(2-amino-2-oxoethyl)-16-(hydroxymethyl)-25-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-10-(11-methyltridecyl)-2,5,8,12,15,18,21,24,27-nonaoxo-1,4,7,11,14,17,20,23,26-nonazabicyclo[26.3.0]hentriacontan-3-yl]propanamide Chemical compound C([C@H]1NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CC(NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](CC(N)=O)NC1=O)CCCCCCCCCCC(C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 RCIPRGNHNAEGHR-ZLHAWHIKSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 3
- 229940097572 chloromycetin Drugs 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 108700030603 mycosubtiline Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- VLKSXJAPRDAENT-OWGHDAAGSA-N 3-[(3r,6r,9s,16s,19r,22s,25s)-3,9-bis(2-amino-2-oxoethyl)-16-[(1r)-1-hydroxyethyl]-19-(hydroxymethyl)-6-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-13-octyl-2,5,8,11,15,18,21,24-octaoxo-1,4,7,10,14,17,20,23-octazabicyclo[23.3.0]octacosan-22-yl]propanoic acid Chemical compound C([C@H]1NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CC(NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](CC(N)=O)NC1=O)CCCCCCCC)C1=CC=C(O)C=C1 VLKSXJAPRDAENT-OWGHDAAGSA-N 0.000 description 1
- 101100257702 Bacillus subtilis (strain 168) srfAA gene Proteins 0.000 description 1
- 206010010071 Coma Diseases 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 101100257706 Dictyostelium discoideum srfA gene Proteins 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CAUBWLYZCDDYEF-UHFFFAOYSA-N N-Nitroso-N-methylurethane Chemical compound CCOC(=O)N(C)N=O CAUBWLYZCDDYEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710188306 Protein Y Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000958215 Streptomyces filamentosus Species 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKUAXEQHGKSLHN-UHFFFAOYSA-N [C].[N] Chemical compound [C].[N] CKUAXEQHGKSLHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009056 active transport Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 108010002015 fengycin Proteins 0.000 description 1
- CUOJDWBMJMRDHN-VIHUIGFUSA-N fengycin Chemical compound C([C@@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)OC2=CC=C(C=C2)C[C@@H](C(N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1)[C@@H](C)O)=O)NC(=O)[C@@H](CCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 CUOJDWBMJMRDHN-VIHUIGFUSA-N 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010884 ion-beam technique Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000018 nitroso group Chemical group N(=O)* 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- CUOJDWBMJMRDHN-UHFFFAOYSA-N plipastatin Chemical compound N1C(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C2CCCN2C(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCN)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)CC(O)CCCCCCCCCCCCC)CC(C=C2)=CC=C2OC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 CUOJDWBMJMRDHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010069329 plipastatin Proteins 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了属于生物技术和生物化工领域的一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用。本发明采用基因工程技术构建过表达跨膜蛋白YcxA的工程菌,强化了脂肽由细胞内向细胞外的跨膜运输,从而显著提高了脂肽的产量。本发明所得过表达脂肽载体蛋白YcxA的基因工程菌与出发菌株相比,表面活性素产量提高97%,可用于脂肽类生物表面活性剂的生产,具有良好的工业应用前景,发酵所得发酵液中脂肽产量平均为1‑5g/L。
Description
技术领域
本发明属于生物技术和生物化工领域,具体涉及一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用。
背景技术
脂肽(lipopeptide)类生物表面活性剂是一种主要由芽孢杆菌、链霉菌等微生物合成的两性物质,由亲水的环状寡肽与疏水的脂肪酸碳链组成。不同的芽孢杆菌菌株合成脂肽的种类也不同,根据脂肽的分子结构主要可分为表面活性素(surfactin)、芬芥素(fengycin、plipastatin)伊枯草菌素(iturin、bacillomycin、mycosubtilin)等。不同种类的脂肽的区别主要在于氨基酸组成与成环方式。例如,非极性的缬氨酸与亮氨酸,以及极性的谷氨酸与天冬氨酸组成的7肽构成了表面活性素的环状寡肽部分;而芬芥素A则含有酪氨酸、脯氨酸、鸟氨酸等氨基酸。脂肽,尤其是表面活性素具有良好的表面活性与生物相容性,在生物防治、环境保护以及石油开采领域有着广阔的应用前景。但由于芽孢杆菌的脂肽合成水平低,与目前使用的化学表面活性剂相比成本劣势明显,因此脂肽的规模化生产和广泛应用还都没有实现。
目前,提高微生物脂肽生产水平的方法主要是通过优化培养条件与对菌株进行诱变。在培养条件方面,王德培等对发酵培养基成分、接种量、培养温度、通气量等因素进行了优化,枯草芽孢杆菌CGMCC Mo.3412抗菌脂肽的产量达到1~2g/L(CN101892176)。牟伯中等通过向培养基中添加特定种类的氨基酸,实现了枯草芽孢杆菌脂肽产量的提高(CN101775427)。Yoneda等分别以麦芽糖与黄豆粉为主要的碳氮源,培养20-90小时,使表面活性素的产量提高至50g/L(WO2002026961)。Fahim等分析了不同的发酵供氧条件对脂肽产量以及产物选择性的影响,其结果表明,kLa在0.04~0.08s-1时表面活性素的产量最高(2g/L),而kLa在0.01s-1时芬芥素的产量可达最高(0.3g/L)(Bioresource Technology,2012,126:1-6)。在菌种诱变方面,对玫瑰孢链霉菌ATCC 31568进行紫外诱变,脂肽A21978C的产量提高了185%(CN101928677)。Carrera等使用亚硝基甲替尿烷(nitrosomethyl urethane,NMU)对枯草芽孢杆菌ATCC 21332进行化学诱变,得到的突变菌株经过40到90小时的发酵后,发酵液中表面活性素的浓度为2.0-4.0g/L(US 5227294)。Liu等(Plasma Science and Technology,2006,8(4):491)使用低能氮离子束注入进行了菌株诱变,突变菌株发酵液50与100倍稀释后的表面活性分别是出发菌株的5.6倍与17.4倍。
除优化培养条件与菌株诱变外,利用基因工程手段对生产菌株进行遗传改造从而提高脂肽产量也有部分报道。顾晓波等在枯草芽孢杆菌细胞中表达comA基因,脂肽产量提高了50%(CN1554747)。卢兆新等在ATCC 9943菌株中通过质粒超量表达脂肽抗性基因yerP,表面活性素与芬芥素产量分别是出发菌株的1.6与1.8倍(CN102220367)。通过将脂肽mycosubtilin合成酶的启动子进行替换,mycosubtilin的产量发生了8-10倍的提升(Bioresource Technology,2013,145:264-270)。
表面活性素在枯草芽孢杆菌细胞内合成,并被分泌到细胞外。脂肽跨膜运输载体蛋白则以主动运输的方式将细胞内合成并积累的表面活性素转移至细胞外。蛋白YcxA的基因ycxA在枯草芽孢杆菌基因组上位于表面活性素合成基因srfA下游,其表达产物根据二级结构预测分析为MFS家族跨膜蛋白,可能具有跨膜运输脂肽的功能(Molecular Microbiology,1993,8:821-831;Journal of MolecularMicrobiology and Biotechnology,2002,4:37-67)。未见有关于YcxA功能及其影响脂肽生产的研究结果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌。
本发明的目的还在于提供上述高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌在制备脂肽类生物表面活性剂中的应用。
本发明的技术方案如下:
一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌,其是将脂肽载体蛋白YcxA基因转化至原始菌株构建而成,其过表达脂肽载体蛋白YcxA。
所述脂肽类生物表面活性剂为表面活性素。
所述原始菌株为具有产脂肽类生物表面活性剂能力的野生菌及其诱变株、突变株或基因工程改造菌株。
所述原始菌株为枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌或假单胞菌。
优选的,所述原始菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)THY-7,保藏号为CGMCC No.8906。
所述高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌,优选枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)TS589,保藏号为CGMCC No.8907,其是将脂肽载体蛋白YcxA基因转化至原始菌株构建而成,所述原始菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)THY-7,保藏号为CGMCC No.8906。
上述工程菌在制备脂肽类生物表面活性剂中的应用。
利用采用上述工程菌生产脂肽类生物表面活性剂,步骤如下:
1)将工程菌接入LB液体培养基中,在35-40℃、摇床转速为150-250rpm的条件下培养10-20小时,得到基因工程菌菌液;
2)按照1-20%的体积百分比将步骤1得到的工程菌菌液接入发酵培养基中,在35-40℃、摇床转速为150-250rpm的条件下培养20-40小时,得到含有脂肽的发酵液;所述发酵培养基的组成为:糖类30-100g/L,无机氮源10-50g/L,有机氮源0.5-3g/L,KH2PO4 0.1-1g/L,Na2HPO4·12H2O 0.5-3g/L,MgSO4·7H2O0.05-0.3g/L,CaCl2 0.002-0.01g/L,MnSO4·H2O 0.002-0.01g/L,FeSO4·7H2O0.002-0.01g/L,pH 6.5-7.5。
所述糖类为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、淀粉或淀粉水解液。
所述无机氮源为硫酸铵、氯化铵、硝酸铵、硝酸钠或硝酸钾。
所述有机氮源为蛋白胨、酵母膏、牛肉膏或大豆粉。
一种本发明的高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌的构建方法:
利用穿梭质粒,将脂肽载体蛋白YcxA基因ycxA在大肠杆菌中进行ycxA基因过表达载体的构建,然后转化至原始菌株中表达,最终获得脂肽产量提高的基因工程菌。
所述脂肽载体蛋白YcxA基因ycxA具有SEQ ID NO:1所示DNA序列。
所述穿梭质粒可为pHT系列质粒。
构建的具体方法如下:
1.以ycxAFB和ycxARS为上下游引物,以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,进行聚合酶链式反应,获得ycxA基因序列,如SEQ ID No:1所示。所述上游引物ycxAFB的碱基序列如SEQ ID No:2所示,所述下游引物ycxARS的碱基序列如SEQ ID No:3所示。
2.将ycxA基因以及枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭质粒分别进行BamH I与Sma I双酶切,27-33℃反应过夜;然后将酶切产物纯化,使用T4DNA连接酶将两种酶切产物进行连接,反应温度15-25℃,反应时间12-16h,得到连接产物。
3.将连接产物转化E.coli宿主菌TOP10感受态细胞,涂布LB平板(含氨苄青霉素),挑取抗性克隆进行培养,提取质粒进行PCR及酶切验证,得到带有ycxA基因的重组质粒pHT-ycxA。
4.将重组质粒pHT-ycxA使用电转化方法转入枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)THY-7(于2014年3月11日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏登记号为CGMCC No.8906)中,涂布LB平板(含氯霉素),挑取抗性克隆进行培养,进行PCR验证,获得转化有pHT-ycxA质粒的基因工程菌TS589(于2014年3月11日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,菌种保藏登记号为CGMCC No.8907)。
步骤1中所述的枯草芽孢杆菌可以选择枯草芽孢杆菌1012wt(MoBiTec)、枯草芽孢杆菌TU2(Journal of Microbiology and Biotechnology,2013,23:390-396)、THY-7(生物工程学报,2013,29(4):1-6)、THY-8(化工进展,2013,32:2952-2956)或携带YcxA基因的芽孢杆菌菌株。
步骤2中所述的枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭质粒可以选择购自MoBiTec公司的pHT系列衍生质粒pHT01、pHT08或pHT10等。
所述宿主菌的原始菌株是具有产脂肽类生物表面活性剂能力的野生菌及其诱变株、突变株或基因工程改造菌株,如枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、假单胞菌或其它产脂肽的微生物,优选指枯草芽孢杆菌。
其中原始菌株优选为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)THY-7 CGMCC No.8906。
本发明的优点和有益效果:本发明采用分子生物学方法和技术,在产脂肽枯草芽孢杆菌细胞中扩增并过表达了跨膜蛋白YcxA,强化了脂肽由细胞内向细胞外的跨膜运输,从而显著提高了脂肽的产量。本发明所得过表达脂肽载体蛋白YcxA的基因工程菌与出发菌株相比,表面活性素产量提高97%,可用于脂肽类生物表面活性剂的生产,具有良好的工业应用前景,发酵所得发酵液中脂肽产量平均为1-5g/L。
生物材料保藏说明
分类命名:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
菌株编号:THY-7
保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称:CGMCC
地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期:2014年3月11日
保藏中心登记入册编号:CGMCC No.8906。
分类命名:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
菌株编号:TS589
保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称:CGMCC
地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期:2014年3月11日
保藏中心登记入册编号:CGMCC No.8907。
附图说明
图1为携带脂肽载体蛋白基因ycxA的枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pHT-ycxA的构建示意图。
图2为含有ycxA基因的重组质粒pHT-ycxA的PCR与酶切验证图;泳道1为DNA分子量标准,由上至下第四条带为1.2kb;泳道2为重组质粒pHT-ycxA使用引物ycxAFB与ycxARS进行PCR扩增的结果,可得到约1.2kb的条带;泳道3为重组质粒pHT-ycxA进行BamH I/Sma I双酶切的结果,可得到约8kb+1.2kb的条带;泳道4为DNA分子量标准,由上至下第三条带为7.5kb。
图3为过表达脂肽载体蛋白YcxA基因工程菌TS589的PCR验证图;泳道1为DNA分子量标准,由上至下第四条带为1.2kb;泳道2为TS589使用引物ycxAFB与ycxARS进行PCR扩增的结果,可得到约1.2kb的条带。
图4为出发菌株THY-7与基因工程菌TS589发酵产物中表面活性素浓度的比较结果。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。如为特别指明,实施例中所用的生化试剂均为市售试剂,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员书中的常规手段。
实施例1
携带脂肽载体蛋白基因ycxA的枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭质粒的构建
挑取枯草芽孢杆菌1012wt(购自MoBiTec公司)单菌落,接种于LB液体培养基中,在温度为37℃、摇床转速为200rpm的条件下培养16小时,12000rpm离心5min收集菌体沉淀,使用Omega公司的细菌基因组提取试剂盒提取枯草芽孢杆菌1012wt基因组DNA。以上述所得枯草芽孢杆菌1012wt基因组DNA为模板,使用上游引物ycxAFB(序列如SEQ ID No:2所示)与下游引物ycxARS(序列如SEQ ID No:3所示)进行PCR基因扩增。引物由铂尚生物技术(上海)有限公司合成,用无菌水溶解,并稀释至10μM备用。PCR扩增所用聚合酶、缓冲液、dNTP购自TaKaRa公司。PCR扩增反应体系为:
热循环条件为94℃3min;94℃30s,52℃30s,72℃2min,35个循环;72℃,10min。扩增产物经测序验证为枯草芽孢杆菌ycxA基因(序列如SEQ ID No:1所示)。扩增产物与枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pHT08(Biomega公司)进行BamH I/Sma I(TaKaRa公司)双酶切,37℃下反应过夜;所得酶切产物通过DNA纯化试剂盒(Biomega公司)进行纯化,然后使用T4DNA连接酶(TaKaRa公司)在16℃下连接过夜;连接产物转化E.coli宿主菌TOP10感受态细胞(TianGen),涂布LB固体平板(含50mg/L卡那霉素);挑选抗性克隆,小量提取质粒,得到含有ycxA基因的重组质粒pHT-ycxA,构建过程如图1所示。进行PCR验证与酶切验证(使用上游引物ycxAFB与下游引物ycxARS可扩增出约1.2kb条带,BamH I/Sma I双酶切可得到约8kb+1.2kb条带),验证结果如图2所示。
实施例2
过表达脂肽载体蛋白YcxA基因工程菌的构建
将实施例1中构建的携带脂肽载体蛋白基因ycxA的枯草芽孢杆菌-大肠杆菌穿梭质粒pHT-ycxA以电穿孔法转化枯草芽孢杆菌THY-7的感受态细胞,可得过表达脂肽载体蛋白YcxA的基因工程菌TS589。其中,枯草芽孢杆菌THY-7感受态细胞的制备采用Xue等(Journal of Microbiological Methods,1999,34:183-191)的方法。向一个1.5mL离心管中加入2.5μL重组质粒pHT-ycxA以及50μL枯草芽孢杆菌THY-7感受态细胞,混匀后加入0.1cm电转杯,冰浴30min;调节电转仪电压为1.25kV,将电转杯装入电转仪,按下电击键;电击结束后,向电转杯内加入1mL复苏培养基(配方见Xue等,Journal of Microbiological Methods,1999,34:183-191),重悬细胞,转入1.5mL离心管,37℃、200rpm震荡培养4h;取100μL菌液涂布于LB固体培养基(含5μg/mL氯霉素),置入37℃培养箱中倒置培养12小时,挑取单菌落,使用上游引物ycxAFB与下游引物ycxARS进行PCR验证,可扩增出约1.2kb条带,验证结果如图3所示,即获得过表达脂肽载体蛋白YcxA基因工程菌TS589。
实施例3
使用基因工程菌TS589生产脂肽类表面活性剂—表面活性素
将实施例2所得过表达脂肽载体蛋白ycxA基因工程菌TS589接种于LB液体培养基(含5μg/mL氯霉素)中,37℃、200rpm下培养16小时,以5%的比例接入发酵培养基中,37℃、200rpm下培养4h,加入IPTG(终浓度1mM),继续培养至24h,即得含脂肽的发酵液。取步骤1所得发酵液100μL,加入900μL去离子水,混匀,经0.22μm滤膜过滤,上样进行HPLC分析。采用ShimadzuLC20A色谱系统,色谱柱为ODS-SP 250×4.6mm(GL Sciences),流动相为乙腈:水:三氟乙酸=93:7:0.1,流速0.8mL/min,上样量20μL。HPLC分析结果表明,出发菌株THY-7表面活性素的产量为0.515g/L,过表达脂肽载体蛋白ycxA的基因工程菌TS589表面活性素的产量为1.014g/L,是出发菌株的1.97倍(如图4)。
Claims (7)
1.一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌,其是将脂肽载体蛋白YcxA基因转化至原始菌株构建而成,其过表达脂肽载体蛋白YcxA;
所述脂肽载体蛋白YcxA基因ycxA为SEQ ID NO:1所示DNA序列;所述原始菌株为枯草芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的工程菌,其特征在于,所述脂肽类生物表面活性剂为表面活性素。
3.根据权利要求1所述的工程菌,其特征在于,该工程菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TS589,保藏号为CGMCC No.8907,其是将脂肽载体蛋白YcxA基因转化至原始菌株构建而成,所述原始菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)THY-7,保藏号为CGMCC No.8906。
4.权利要求1-3任一权利要求所述的工程菌在制备脂肽类生物表面活性剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,利用权利要求1-3任一权利要求所述工程菌生产脂肽类生物表面活性剂,步骤如下:
1)将工程菌接入LB液体培养基中,在35-40℃、摇床转速为150-250rpm的条件下培养10-20小时,得到工程菌菌液;
2)按照1-20%的体积百分比将步骤1)得到的工程菌菌液接入发酵培养基中,在35-40℃、摇床转速为150-250rpm的条件下培养20-40小时,得到含有脂肽的发酵液;所述发酵培养基的组成为:糖类30-100g/L,无机氮源10-50g/L,有机氮源0.5-3g/L,KH2PO4 0.1-1g/L,Na2HPO4·12H2O 0.5-3g/L,MgSO4·7H2O0.05-0.3g/L,CaCl2 0.002-0.01g/L,MnSO4·H2O 0.002-0.01g/L,FeSO4·7H2O0.002-0.01g/L,pH 6.5-7.5。
6.权利要求5所述的应用,其特征在于,所述糖类为葡萄糖、蔗糖、果糖、麦芽糖、淀粉或淀粉水解液。
7.权利要求5所述的应用,其特征在于,所述无机氮源为硫酸铵、氯化铵、硝酸铵、硝酸钠或硝酸钾;所述有机氮源为蛋白胨、酵母膏、牛肉膏或大豆粉。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410124438.0A CN103898038B (zh) | 2014-03-28 | 2014-03-28 | 一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410124438.0A CN103898038B (zh) | 2014-03-28 | 2014-03-28 | 一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103898038A CN103898038A (zh) | 2014-07-02 |
CN103898038B true CN103898038B (zh) | 2016-10-26 |
Family
ID=50989616
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410124438.0A Active CN103898038B (zh) | 2014-03-28 | 2014-03-28 | 一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103898038B (zh) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106260502A (zh) * | 2015-05-12 | 2017-01-04 | 南京莎菲特生物科技有限公司 | 一种制备含表面素饲料添加剂的方法 |
CN105598162B (zh) * | 2016-03-27 | 2018-06-19 | 天翊科技有限公司 | 一种处理石油污染土壤的方法 |
CN109097315B (zh) * | 2018-08-01 | 2021-11-23 | 清华大学 | 一种高产脂肽的基因工程菌及其构建方法和应用 |
CN109182170B (zh) * | 2018-09-04 | 2021-04-23 | 河南工业大学 | 一株Surfactin高产菌株及其应用 |
CN110331121B (zh) * | 2019-06-24 | 2021-01-05 | 清华大学 | 一种高产脂肽的重组菌及其应用 |
CN111662943A (zh) * | 2020-05-11 | 2020-09-15 | 江苏龙蟠科技股份有限公司 | 一种脂肽类生物表面活性剂的制备方法 |
CN116478238B (zh) * | 2023-03-15 | 2024-02-06 | 北京衍微科技有限公司 | 用于促进根瘤生长的脂肽组合物 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1554747A (zh) * | 2003-12-26 | 2004-12-15 | 南开大学 | 用于生产脂肽的工程菌株及其构建方法 |
WO2012116230A1 (en) * | 2011-02-25 | 2012-08-30 | Geo Fossil Fuels, Llc | Alkaline microbial enhanced oil recovery |
-
2014
- 2014-03-28 CN CN201410124438.0A patent/CN103898038B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1554747A (zh) * | 2003-12-26 | 2004-12-15 | 南开大学 | 用于生产脂肽的工程菌株及其构建方法 |
WO2012116230A1 (en) * | 2011-02-25 | 2012-08-30 | Geo Fossil Fuels, Llc | Alkaline microbial enhanced oil recovery |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
dependent.《Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology》.2014,第42卷(第1期), * |
Transport Capabilities Encoded Within the Bacillus subtilis Genome;Milton H. Saier, Jr. et al.;《 J. Mol. Microbiol. Biotechnol.》;20021231;第4卷(第1期);37-67 * |
Xu Li er al..Overexpression of specific proton motive force‑ * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103898038A (zh) | 2014-07-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103898038B (zh) | 一种高表达脂肽类生物表面活性剂的工程菌及其应用 | |
CN103981203B (zh) | 5‑氨基乙酰丙酸高产菌株及其制备方法和应用 | |
Janvier et al. | Methylophaga marina gen. nov., sp. nov. and Methylophaga thalassica sp. nov., marine methylotrophs | |
Hmidet et al. | Enhancement of surfactin and fengycin production by Bacillus mojavensis A21: application for diesel biodegradation | |
CN101693896B (zh) | 醛脱氢酶基因 | |
CN103131721B (zh) | 瘤胃菌d-塔格糖3-差向异构酶的核苷酸序列及其应用 | |
CN105861536B (zh) | 自诱导强化型海藻糖合酶合成工程菌的制备方法与应用 | |
CN104651287A (zh) | 一种用于合成甘油葡糖苷的工程菌和应用 | |
CN102325883A (zh) | 微生物的培养方法及利用微生物制造物质的方法 | |
CN106947724A (zh) | 一种增加γ‑聚谷氨酸发酵液溶氧的方法 | |
CN102146414B (zh) | 玫瑰孢链霉菌基因工程菌的构建方法及其应用 | |
Saini et al. | Thermophilic algae: a new prospect towards environmental sustainability | |
US10787489B2 (en) | Biocatalyst comprising photoautotrophic organisms producing recombinant enzyme for degradation of harmful algal bloom toxins | |
CN108456652A (zh) | 一种鞘氨醇单胞菌基因工程菌及其构建方法与应用 | |
CN109593702A (zh) | 一种基因工程菌株实现全细胞转化合成l-苯乳酸的方法 | |
CN109576239A (zh) | 耐热磷酸化酶及其应用 | |
CN113265389A (zh) | LuxS蛋白突变体及其应用 | |
KR20140145397A (ko) | 1,3-프로판디올 생성 재조합 미생물 및 이를 이용한 1,3-프로판디올의 제조 방법 | |
CN102154336A (zh) | 嗜酸硫化芽孢杆菌硫氧还蛋白还原酶基因及其重组蛋白 | |
CN108865945B (zh) | 耐除草剂2,4-d桂林类芽孢杆菌及其应用 | |
CN107236754A (zh) | 利用聚球藻utex2973生产糖类化合物的构建体、菌株与方法 | |
Mahalik et al. | Cellulase production in Lysinibacillus sp isolated from the estuaries of Odisha | |
CN114107356B (zh) | 一种改造恶臭假单胞菌使其同化d-半乳糖的方法 | |
CN106434578A (zh) | 一种含有对羟基苯甲酸‑3‑羟化酶基因的红球菌及含有该基因的工程菌构建方法和应用 | |
CN109266676A (zh) | 一种电击转化暹罗芽孢杆菌的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20140702 Assignee: Beijing Yanwei Technology Co.,Ltd. Assignor: TSINGHUA University Contract record no.: X2024980010467 Denomination of invention: Engineering bacteria with high expression of lipopeptide biosurfactants and their applications Granted publication date: 20161026 License type: Exclusive License Record date: 20240723 |