CN103893835A - 一种可降解的壳聚糖生物膜及其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种可降解的壳聚糖生物膜及其制备方法及应用，包括具有天然微孔和多层结构的壳聚糖多层结构膜本体框架，通过脱钙、脱蛋白、乙酰及手工分层得到最终的壳聚糖生物膜，本发明生物膜可降解，当用作防组织粘连膜时，与无孔结构生物膜相比，多孔结构有利于营养物质的交換，防止膜下生物组织出现淤血和坏死；当用作引导组织再生膜时，多孔结构有利于成骨细胞、骨细胞的黏附和生长；无需二次手术取出。是一种生物相容性良好、安全、无毒、无刺激、可降解吸收的薄膜材料，其独特的表面结构特性可以将手术创面和周围组织有效隔离开，有效地保护好手术创面。

Description

一种可降解的壳聚糖生物膜及其制备方法及应用

技术领域

本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种用于医学及美容的甲壳质或壳聚糖生物膜和制备工艺及应用。

背景技术

在沿海地区每年捕捞蟹类水产品数量巨大，随着我国淡水及海水蟹养殖产品的增加，每年都有大量的蟹壳副产品，水产品企业提取蟹肉后，其中仅有一小部分蟹壳只简单晒干粉碎供饲料行业作为饲料钙源的添加物。虾壳和蟹壳是水产工业生产的固体废弃物。随着我国海产及人工养殖虾、蟹业的发展，这些废弃物数量越来越大，并造成了严重的环境污染，若将其回收用于制取高附加值的甲壳素纳米纤维，不但能变废为宝，还可以获得可观经济效益。作为世界上含量第二丰富的天然有机高分子化合物甲壳素也被进行了较长时间的研究，甲壳素可以从虾、螃蟹、甲壳类动物身体上获得，而每年都有很多虾蟹壳作为废弃品被遗弃，既浪费了资源又破坏了环境，使用虾蟹壳制备甲壳素纳米纤维将有利于创造环境友好型的新材料。但是关于甲壳素纳米纤维的研究刚刚处于起步阶段，在国内外相关发明专利并不多。甲壳素广泛存在于低等植物菌类、藻类的细胞，节肢动物虾、蟹、蝇蛆和昆虫的外壳，贝类、软体动物的外壳和软骨中。甲壳素纤维废弃物可自然降解。对环境不会造成污染。然而，很多的甲壳素被作为工业或者食品废弃物而丢掉，却没有得到有效的利用。因此，如何将甲壳素作为天然生物友好型的材料是一个重要的研究内容。如何提高蟹壳综合经济效益和利用水平，国内外科技界已进行不少的研究探讨，以蟹壳为原料制造的壳聚糖已在保健食品、医药、化工、生物工程等领域得到一定应用，开发前景十分看好。

生物隔膜技术(Barrier Membrane Technique，简称BMT)，是近年引起医学界广泛关注的临床治疗新技木。自上世纪90年代以来，利用人工生物膜引导机体组织再生性愈合成为国际性热门研究课题。引导组织再生(Guide Tissue Regeneration，GTR)技术是80年代末90年代初发展起来的一项新技术。其原理是利用膜的物理屏障功能将病损区与周围组织隔离，创造一个相对封闭的组织环境，从而使成骨细胞优先迁移、生长。GTR的应用为牙周病的治疗、牙种植区骨量不足及其它骨缺损的修复、骨折的愈合提供了一个新的有效途径。目前GTR膜材料可分为不可吸收和可吸收两大类。不可吸收薄膜主要是聚四氟乙烯(PTFE=Gore-Texs)膜。该膜虽然具有良好的力学強度，但存在不能自行降解问题，需二次手术去除，且细胞亲和性差，易导致伤口裂开，膜早期暴露，影响伤口的愈合。因此，对可吸收膜材料的开发和研究便成为GTR技术发展的重要方向。目前研究最多的人工合成可吸收膜材料的类型主要有聚乳酸(Polylatic acid，PLA)和聚轻基乙酸(Polyglycolic acid，PGA)以及它们的共混或共聚物，但由于该类材料的降解产物是酸，容易引发周围组织的炎症反应。目前研究最多的天然GTR膜材料主要为胶原。天然胶原GTR膜虽然具有良好的生物相容性，但其强度一般较弱，在体内吸收速度往往较难控制，且价格昂贵。因此，制备具有一定力学強度，适当降解速度以及良好的生物相容性的GTR膜材料将成为生物医用材料的研究重点。

CN103349796A公开了一种可降解的引导骨再生生物膜及其制备方法和应用。即以按一定比例称取碳酸1，2-丙二酯和聚琥珀酸丁二酯为原材料，溶入有机溶剂制备混浊液，采用盐析法合成出生物膜。该生物膜主要应用于口腔种植牙科，在口腔科骨缺损病例的应用中，可长效地维持骨再生空间，促进骨再生。上述专利虽然明与现有技术相比，通过盐析法可以合成与人体的骨外膜相类似的双层样结构，生物膜具有良好的理化性能，体内外引导骨再生生物活性，价格优廉等均可以弥补现今临床应用的生物膜的某些缺陷，如以往的生物膜较厚，术区组织张力大，创口易裂开等。从而为口腔种植牙科临床提供一种有效的生物膜，促进骨再生。但是，该生物膜为合成方式，不同部位的细胞引导，所需的不同生物膜厚度无法合理控制，且化学合成的生物膜无疑将对人体造成伤害，并且合成方式的生物膜强度较低，降解性能较差，安全性能不能保证。

防组织粘连膜为用于手术后防止创面粘连的隔离物。术后粘连是有手术史以来国内外亟待解决的重要医学难题之一。在外科领域开展的手术中，绝大多数都涉及到防止组织之间粘连的问题。术后粘连可以引起严重的并发症，如腹部、盆腔等均可引起粘连性肠梗阻，甲状腺手术后引起喉返神经损伤以及因盆腔组织粘连而导致的女性不育症。90％的患者在术后均有不同程度的粘连产生，60％的患者需要采取一定的防粘连措施。目前临床上使用的防粘连物质主要包括硅油、透明质酯酸钠以及酯酸钠等流体或半流体状物质，这类物质的特点是在体内的吸收速度过快，防粘连时间短，一般为3-4天，因此很难达到理想的防粘连效果。目前被实际应用较多的主要有氧化纤维素膜以及透明质酸/羧甲基纤维素膜，这类材料属于天然产物，因此产品质量不易控制，也较容易分解与吸收(约I周左右)，不适于长期与周边组织隔离的情况(2周以上)。另一大类为聚乳酸，聚丙交酷，聚己内酯以及它们的共聚物制备的膜。这类膜的最大缺陷就是降解速度难控制，降解产物为酸性物质，对周围组织的愈合具有很大影响。

CN1660451A公开了一种预防创伤及术后粘连的生物膜。本发明生物膜组分包含羧甲基纤维素、羧甲基壳聚糖、硫酸铝铵、戊二醛、甘油和水。加入的辅助物质虽然起到了抗粘连时间长、阻隔粘连的效果，但是由于添加了化学物质，在被降解吸收后，对人体会造成一定的伤害，尤其是术后的创面，并且这种生物膜无透气孔，透气效果差，影响术后创面的恢复。

甲壳素为白色或灰白色无定型、半透明固体，不溶于水、稀酸、稀碱及一般的有机溶剂，可溶于浓无机酸，但同时主链会发生降解生成α-氨基葡萄糖。甲壳素中并非所有结构单元都带n-乙酰基。元素分析表明，天然甲壳素分子约有12.5的氨基没有n-乙酰化，甲壳素的难溶性使其应用大受限制，因而近些年的研究开发主要集中在壳聚糖及其改性上。壳聚糖有很好的吸附性、成膜性、通透性、成纤性、吸湿性和保湿性，而被广泛用作工业中的绝缘体、吸附剂、离子交换树脂和载体等。甲壳素一般在100-180摄氏度，40％-60％的氢氧化钠溶液中非均相脱去乙酰基便转化成壳聚糖。

CN103012858A公开了一种水产品虾、蟹壳等，具体是涉及一种聚壳糖及其制备方法，属化工技术领域。该方法利用螃蟹壳经挑选后装入脱钙罐，把配制好的4％盐酸溶液泵入脱钙罐内，进行脱钙，再通过脱蛋白质(脂肪)工序，制备壳聚糖工序，得壳聚糖成品。

CN103012858A提供了一种虾蟹壳提取物壳聚糖制备的可食用内包装膜，该可食用包装膜包含壳聚糖、明胶、甘油醛和羧甲基纤维素钠，通过成膜组分间配比调整，提高可食用包装膜的物理性能。

CN103342821A公开了一种利用虾蟹壳制备甲壳素纳米纤维光学透明薄膜的方法，其特征在于：该方法包括两种化学处理、机械处理。

上述专利技术方案虽然该方法很好的解决了螃蟹壳的再利用，提高了水产部门及渔民的经济效益，也有利于环境的保护。但都是将蟹壳进行粉碎得到蟹壳粉后，通过加入一些辅助物质制得的产品，并非是将完整的蟹壳内部结构充分的利用起来，众所周知，螃蟹壳具有明显的分层结构组织。这些纳米纤维被蛋白质层所包围着，接着下一层的级别是由直径在50-300nm的甲壳素/蛋白质纤维聚集在一起的，这些纳米纤维-蛋白质纤维形成平面的交织物和分支的网状结构。同时，这些线状物被各种的蛋白质和矿物质包围着，这些矿物质主要由碳酸钙结晶体组成，线状物的宽度在不同甲壳类动物中会不同。而且，这些编织状和网状的平面可以形成扭曲的夹层模型。这个结构式通过纤维状的甲壳素-蛋白质按照旋转层叠的顺序形成的。这些扭曲夹层的厚度相当于一个层叠的密度板平面，它们逐渐的沿着法线轴旋转。蟹壳的粉碎无疑破坏了本身壳聚糖形成的天然网状及编制状的形态，无法将蟹壳的这种结构及功能得到利用，目前用虾蟹壳制作生物膜的方法一般是对提取的甲壳素及壳聚糖进行合成处理，并加入充孔剂，使得处理后的生物膜内部形成多个气孔，但该气孔彼此不相连通，且为密封的气孔，并且在对粉碎后的蟹壳提取甲壳素及壳聚糖时需要加入冰醋酸进行处理，冰醋酸在处理的过程中破坏了甲壳素的化学键，导致合成的生物膜的强度大大降低了，且气孔的密封性无法将生物膜本身的特性发挥出来，导致医学领域的引导组织再生、细胞支架等均无法使用。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明所要解决的技术问题是，提供一种绿色环保、可降解、厚度可控、通过完整蟹壳的保留，得到的壳聚糖生物膜具有天然微孔和多层结构，提高生物膜自身强度、有效提高组织细胞引导速度及防止组织粘连的可降解的壳聚糖生物膜及其制备方法及应用。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种可降解的壳聚糖生物膜，包括由完整蟹壳通过脱钙、脱蛋白质层及脱乙酰后得到的具有多层结构的由多个子结构膜本体框架组成可依次撕下的透明或半透明无色的壳聚糖多层结构膜本体框架，沿该壳聚糖多层结构膜本体框架的厚度及宽度方向方向具有多个分布不均的天然微孔，所述该壳聚糖多层结构膜本体框架的厚度为1μm～12μm，天然微孔的孔径为1μm～50μm。

一种可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，包括如下步骤：

(1)、脱钙处理：

将完整蟹壳冲洗干净，并晾干，经过质量分数为5％～7％的HCl溶液脱钙，每次浸泡1～5小时，重复2～5次；

(2)、脱蛋白质处理：

经2～5次水洗，洗净脱水后，用质量分数8～12％NaOH，40～100℃水浴加热4～16h，脱蛋白质，然后水洗至中性，得到可降解甲壳素生物膜；

(3)、脱乙酰处理：

将该可降解甲壳质生物膜用质量分数为8～15％的NaOH溶液，通过98～100℃水浴加热12～24h脱乙酰后，经水洗至中性，得到壳聚糖生物膜；

(4)、成品处理：

将水洗至中性的甲壳素生物膜在软水中浸泡3～6小时，手工分层制得原生态厚度和孔径的；

(5)、得到最终成品：

将步骤(4)得到的透明壳聚糖生物膜或半透明壳聚糖生物膜裁剪成所需的规格大小。

上述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，将具有原生态厚度和孔径的壳聚糖生物膜浸入质量分数为0.5％～1％的KMnO₄溶液，浴比10％，60℃，浸泡6小时进行脱色，得到透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜。

上述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，所述透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜经分层处理工艺和扩孔处理工艺，得到厚度为1μm～12μm，孔径为1μm～50μm的透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜。

上述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，所述分层处理工艺为手工剖层工艺或机械剖层工艺。

上述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，所述机械剖层工艺采用快速减压装置，使壳聚糖生物膜所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa，然后再借助手工剖层，撕下相应厚度的壳聚糖生物膜。

上述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，所述扩孔处理工艺，利用快速减压装置，使膜从所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa。

上述的甲壳素生物膜的制备方法，用质量分数5％的HCl溶液和质量分数8％～10％的NaOH溶液分别对透明壳聚糖生物膜或半透明甲壳素生物膜进行脱钙、脱蛋白质二次提纯处理。

一种可降解的壳聚糖生物膜的应用，用于植入人体的诱导组织生成的人体细胞支架，作为引导组织再生膜的应用。

一种可降解的壳聚糖生物膜的应用，其特征是：作为防组织粘连膜的应用。

本发明可降解的壳聚糖生物膜及其制备方法及应用的优点是：具有原生态结构特征的高纯度甲壳质或壳聚糖生物膜。制备工艺是将蟹壳经清洗、再经脱碳酸钙和蛋白质得到原生态甲壳素生物膜，或继续脱乙酰得到的壳聚糖含量大于95％原生态壳聚糖生物膜，或经分层和再次提纯，得到的壳聚糖含量大于99％超薄原生态壳聚糖生物膜。由此得到的甲壳质或壳聚糖生物膜，具有天然微孔和多层结构以及良好的天然抗菌性和生物相容性。可用于组织工程材料，如细胞支架和脑硬膜等，可广泛应用于医学和美容等领域，具有良好的经济效益和社会效益。

(1)本发明生物膜可降解，当用作防组织粘连膜时，与无孔结构生物膜相比，多孔结构有利于营养物质的交換，防止膜下生物组织出现淤血和坏死；当用作引导组织再生膜时，多孔结构有利于成骨细胞、骨细胞的黏附和生长；无需二次手术取出。是一种生物相容性良好、安全、无毒、无刺激、可降解吸收的薄膜材料，其独特的表面结构特性可以将手术创面和周围组织有效隔离开，有效地保护好手术创面。

(2)本发明生物膜制工艺简单，直接通过蟹壳脱乙酰得到壳聚糖生物膜，具有较好的力学性能和天然的多层、多空结构，通过控制甲壳质和壳聚糖的分子量来控制膜的降解速度；通过控制生物膜的孔径大小和空隙率可满足不同应用要求。分层处理工艺可满足对膜的厚度要求。

(3)本发明生物膜中不添加任何试剂，降解产物无毒性，生物安全性高，可制备兼具药物缓释、诱导组织再生和抗菌等作用的多种功能的多孔生物膜，制得甲壳质或壳聚糖生物膜，不影响生物膜中药物及生长因子的活性。

附图说明

图1为传统壳聚糖复合生物膜的结构放大示意图；

图2为本发明壳聚糖生物膜的结构示意图。

具体实施方式

下面结合附图及具体实施例对本发明做进一步详细说明；

如图1所示，采用传统的壳聚糖添加其他物质后合成的生物膜，通过增添充孔剂，在生物膜本体1的内部形成有多个不规则的封闭气孔2，多个封闭气孔2彼此独立不连接。

实施例1：

如图2所示，一种可降解的壳聚糖生物膜，包括由完整蟹壳通过脱钙、脱蛋白质层及脱乙酰后得到的具有多层结构的由多个子结构膜本体框架4组成可依次撕下的透明或半透明无色的壳聚糖多层结构膜本体框架5，沿该壳聚糖多层结构膜本体框架5的厚度及宽度方向方向具有多个分布不均的天然微孔3，所述该壳聚糖多层结构膜本体框架5的厚度为1μm～12μm，天然微孔3的孔径为1μm～50μm。

制备方法：称取洗净晾干的阿拉斯加雪蟹壳50g，用质量分数5％HCl溶液，浴比10％，30℃脱钙，每次浸泡1小时，重复2次，经2次水洗至中性，然后脱水。再用质量分数8％的NaOH溶液，40℃水浴加热4h脱蛋白质，得到可降解甲壳素生物膜。再用质量分数8％的NaOH溶液，98℃水浴加热12h脱乙酰处理，制得可降解壳聚糖生物膜。将壳聚糖生物膜在软水中浸泡3小时，手工分层可制得透明生物膜或半透明生物膜。如果需要脱色，可用质量分数为0.5％的KMnO₄溶液进行脱色，根据需要，可以对透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜进行分层处理工艺和扩孔处理工艺，分层处理工艺为手工剖层工艺或机械剖层工艺。机械剖层工艺采用快速减压装置，使壳聚糖生物膜所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa，然后再借助手工剖层，撕下相应厚度的壳聚糖生物膜。扩孔处理工艺，利用快速减压装置，使膜从所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa。可制备得到厚度1μm，孔隙为1μm的壳聚糖生物膜。如果需要纯度要求高的生物膜，可再用5％的HCl溶液和8％的NaOH溶液分别对膜进行脱钙、脱蛋白质二次提纯处理。

作为诱导组织细胞生成的细胞支架的应用：

它摒弃了天然的皮肤组织，该可降解的壳聚糖生物膜本身为天然结构及成分，将组织中可能引起人体植入后的免疫排异反应的所有可疑成份统统去除，同时完整地保留了原有组织的立体支架结构，因此它具有诱导组织生成的作用。该可降解的壳聚糖生物膜作为细胞支架，有效去除了引起免疫排斥反应的细胞表面抗原，植入人体后生物相容性良好；作为无细胞的天然组织支架，植入后很快有新生血管和成纤维细胞长入天然微孔，可很快血管化；无毒性、无致敏、无口腔粘膜刺激反应、无毒副作用。

作为防组织粘连膜的应用：

采用本发明的可降解的壳聚糖生物膜，是一种生物相容性良好、安全、无毒、无刺激、可降解吸收的天然薄膜材料，其独特的表面结构特性可以将手术创面和周围组织有效隔离开，有效地保护好手术创面。使用时将该膜的细胞支架面贴于手术创面，一方面起到促进组织修复、启动止血机制的作用，另一方面在手术创面与周围组织之间起暂时性屏障的作用，起到保护创面修复，预防组织粘连的作用。本产品可以在人体内按程序降解，经代谢后形成二氧化碳和水，排出体外。

实施例2：

称取洗净晾干的螃蟹壳20g，用6％的HCl溶液，浴比10％，30℃脱钙3次，每次浸泡4小时，换液后重复3次，水洗至中性。然后用10％NaOH溶液，50℃水浴加热6h脱蛋白质，得到可降解甲壳质生物膜。再用12％的NaOH溶液，99℃水浴加热18h脱乙酰，制得可降解壳聚糖生物膜。将甲壳质生物膜或壳聚糖生物膜在软水中浸泡4小时，快速减压分层，采用快速减压装置，使壳聚糖生物膜所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa，然后再借助手工剖层，撕下相应厚度的壳聚糖生物膜。可制得透明生物膜或半透明生物膜。用0.8％的KMnO₄溶液，浴比10％，60℃浸泡6小时进行脱色，根据需要可制备得到厚度6μm的壳聚糖生物膜，膜中孔径为25μm。可用质量分数5％的HCl溶液和质量分数9％的NaOH溶液分别对壳聚糖生物膜进行二次脱钙、脱蛋白质处理，制备纯度更高的壳聚糖生物膜。

实施例3：

将毛蟹壳洗净，用质量分数为7％的HCl溶液，功率1000w超声180s脱钙，重复3次。洗净后，用质量分数12％NaOH，100℃水浴加热16h，脱蛋白质，然后水洗至中性，得到可降解甲壳素生物膜；将该可降解甲壳质生物膜用质量分数为15％的NaOH溶液，通过100℃水浴加热24h脱乙酰后，经水洗至中性，得到壳聚糖生物膜；将脱钙后的蟹壳在质量分数为1％的KMnO₄溶液中浸泡6小时进行脱色，然后先后涂抹5％的HCl溶液、10％的NaOH溶液放入微波炉内6min，分别进行二次脱钙、脱蛋白质处理。通过实施例1、2的方法，迅速减压和手工剖层方法制备出厚度为12μm，孔隙为50μm的透明或半透明壳聚糖生物膜。

当然，上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的普通技术人员，在本发明的实质范围内，作出的变化、改型、添加或替换，都应属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种可降解的壳聚糖生物膜，其特征在于：包括由完整蟹壳通过脱钙、脱蛋白质层及脱乙酰后得到的具有多层结构的由多个子结构膜本体框架组成可依次撕下的透明或半透明无色的壳聚糖多层结构膜本体框架，沿该壳聚糖多层结构膜本体框架的厚度及宽度方向方向具有多个分布不均的天然微孔，所述该壳聚糖多层结构膜本体框架的厚度为1μm～12μm，天然微孔的孔径为1μm～50μm。

2.一种可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，其特征是，包括如下步骤：

(1)、脱钙处理：

将完整蟹壳冲洗干净，并晾干，经过质量分数为5％～7％的HCl溶液脱钙，每次浸泡1～5小时，重复2～5次；

(2)、脱蛋白质处理：

经2～5次水洗，洗净脱水后，用质量分数8～12％NaOH，40～100℃水浴加热4～16h，脱蛋白质，然后水洗至中性，得到可降解甲壳素生物膜；

(3)、脱乙酰处理：

将该可降解甲壳质生物膜用质量分数为8～15％的NaOH溶液，通过98～100℃水浴加热12～24h脱乙酰后，经水洗至中性，得到壳聚糖生物膜；

(4)、成品处理：

将水洗至中性的甲壳素生物膜在软水中浸泡3～6小时，手工分层制得原生态厚度和孔径的；

(5)、得到最终成品：

将步骤(4)得到的透明壳聚糖生物膜或半透明壳聚糖生物膜裁剪成所需的规格大小。

3.根据权利要求2所述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，其特征是：将具有原生态厚度和孔径的壳聚糖生物膜浸入质量分数为0.5％～1％的KMnO₄溶液，浴比10％，60℃，浸泡6小时进行脱色，得到透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜。

4.根据权利要求2或3所述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，其特征是：所述透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜经分层处理工艺和扩孔处理工艺，得到厚度为1μm～12μm，孔径为1μm～50μm的透明或半透明无色的可降解的壳聚糖生物膜。

5.根据权利要求4所述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，其特征是：所述分层处理工艺为手工剖层工艺或机械剖层工艺。

6.根据权利要求5所述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，其特征是：所述机械剖层工艺采用快速减压装置，使壳聚糖生物膜所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa，然后再借助手工剖层，撕下相应厚度的壳聚糖生物膜。

7.根据权利要求4所述的可降解的壳聚糖生物膜的制备方法，其特征是：所述扩孔处理工艺，利用快速减压装置，使膜从所受的压力从1～12MPa在0.01～0.1秒内迅速降至0.1MPa。

8.根据权利要求7所述的甲壳素生物膜的制备方法，其特征是：用质量分数5％的HCl溶液和质量分数8％～10％的NaOH溶液分别对透明壳聚糖生物膜或半透明甲壳素生物膜进行脱钙、脱蛋白质二次提纯处理。

9.一种可降解的壳聚糖生物膜的应用，其特征是：用于植入人体的诱导组织生成的人体细胞支架，作为引导组织再生膜的应用。

10.一种可降解的壳聚糖生物膜的应用，其特征是：作为防组织粘连膜的应用。

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