CN103619842B - 吡咯并喹啉醌二钠盐的结晶及其制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提供一种对溶剂的分散性优异、对皮肤的透过性优异的新的吡咯并喹啉醌二钠结晶及其有效的制造方法。根据本发明，提供使用冻结干燥、常压干燥或减压干燥等干燥方法将在特定条件下得到的结晶进行干燥得到的新的吡咯并喹啉醌二钠结晶及其制造方法。

Description

吡咯并喹啉醌二钠盐的结晶及其制造方法

相关申请的参考

本申请享受在先的日本专利申请的特愿2011-134279（申请日：2011年6月16日）的优先权，其公开内容整体通过引用成为本说明书的一部分。

技术领域

本发明涉及吡咯并喹啉醌二钠盐的结晶及其制造方法。

背景技术

吡咯并喹啉醌（以下，有时简称为“PQQ”）被提出可能为一种新的维生素（例如，非专利文献1）。PQQ不限于存在于细菌，也存在于真核生物的霉菌、酵母中，作为辅酶发挥重要的作用，近年来，明确了细胞的增殖促进作用、抗白内障作用、肝脏疾病预防治疗作用、创伤治愈作用、抗过敏作用、逆转录酶抑制作用和乙二醛酶I抑制作用-抗癌作用等多种生理活性。因此，PQQ作为在医药品、食品和化妆品领域中有用的物质受到关注。例如，在医药品领域，PQQ作为心脏（专利文献1）、皮肤（专利文献2）和神经（专利文献3）等的治疗药期待着其的应用。此外，在食品领域，PQQ作为具有抗衰老效果的物质，在化妆品领域，PQQ作为具有美肌效果的物质，期待着其的应用。

PQQ能够通过有机化学合成法和发酵法等制造，多以碱金属盐、特别是二钠盐的结晶（以下，有时称为“二钠结晶”）提供。该PQQ二钠结晶，为五水合物的结晶，通过单晶解析进行结构解析（非专利文献1）。PQQ二钠结晶的制作方法，除了非专利文献1的制作方法之外，还报告有通过调整溶液的pH使其结晶化的方法（专利文献4）、通过使用水溶性有机溶剂的沉淀法使PQQ二钠结晶从水溶液中析出的方法（专利文献5）。但是，任一种情况下，都是得到的固体的结晶性低，或者使用了不适宜食用的溶剂的方法。并且，得到的结晶的保存性不一定很高。

PQQ在医药品和化妆品中的应用，需要有高的结晶性，杂质少，具有对溶剂稳定的溶解性或者对溶剂高的分散性，并且具有高的保存性。此外，在食品和医药品中应用时，还需要对人体无害。在皮肤用医药品和化妆品中应用时，进一步需要对皮肤高的渗透性。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2005-530786号公报

专利文献2：日本特开2011-246442号公报

专利文献3：日本特开2007-269769号公报

专利文献4：国际公开第2011/007633号

专利文献5：日本特公平7-113024号公报

非专利文献

非专利文献1：Ishida,T.etal.,“MolecularandcrystalstructureofPQQ(methoxatin),anovelcoenzymeofquinoproteins:extensivestackingcharacterandmetalioninteraction”,JournalofAmericanChemicalSociety,1998,Vol.111,p.6822-6828

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的目的在于提供一种对溶剂的分散性和对皮肤的透过性优异、在医药领域、化妆品领域或食品领域有用的新的PQQ二钠结晶及其有效的制造方法。

用于解决课题的方法

本发明的发明人们发现通过在特定条件下制备PQQ二钠结晶，能够得到PQQ二钠结晶的新的晶形（晶形1和晶形2）。特别是，本发明的发明人们发现PQQ二钠结晶在食用油中具有热稳定性，并且发现在食用油中加热PQQ二钠结晶，在短时间内能够得到良好的晶形1和晶形2的结晶。本发明的发明人们还发现，晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶，在油中分散性高，对皮肤的透过性好。本发明为基于上述发现的发明。

即，根据本发明，提供以下的发明。

（1）一种吡咯并喹啉醌二钠结晶，其中，水分含量在7重量%以下。

（2）上述（1）所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶，其中，水分含量在4.6重量%以下。

（3）上述（1）或（2）所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶（晶形1），其中，使用CuKα射线的粉末X射线衍射中，在11.4±0.4、13.5±0.4、18.0±0.4、18.7±0.4、26.0±0.4、28.5±0.4°显示2θ角度的峰。

（4）上述（1）或（2）所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶（晶形2），其中，使用CuKα射线的粉末X射线衍射中，在8.7±0.4、11.5±0.4、12.0±0.4、17.4±0.4、18.7±0.4°显示2θ角度的峰。

（5）一种医药组合物，其包含上述（1）～（4）中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

（6）一种化妆品组合物，其包含上述（1）～（4）中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

（7）一种功能性食品或营养剂，其包含上述（1）～（4）中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

（8）一种吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，用于制造上述（1）～（4）中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶，该制造方法包括：

得到作为上述吡咯并喹啉醌二钠结晶的前体的结晶（前体结晶），接着，对前体结晶进行干燥的工序。

（9）上述（8）所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，其中，上述前体结晶通过将溶解有吡咯并喹啉醌的钠盐的乙醇或异丙醇浓度为10～90%的水溶液的pH调整为2～5的范围进行结晶化。

（10）上述（8）或（9）所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，其中，上述前体结晶为在使用CuKα射线的粉末X射线衍射中在9.1±0.4、10.3±0.4、13.8±0.4、17.7±0.4、18.3±0.4、24.0±0.4、27.4±0.4、39.5±0.4°显示2θ角度的峰的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

（11）上述（8）～（10）中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，其中，干燥通过在油中对结晶加热而进行。

本发明的PQQ二钠结晶，不仅具有高的纯度，而且提高了溶液中的分散性和对皮肤的渗透性，作为化妆品、医药品或功能性食品的成分有用。

附图说明

图1为表示PQQ二钠结晶（晶形1）的粉末X射线衍射的结果的图。

图2为表示使干燥工序的温度变化的情况下的粉末X射线衍射的结果的图。

图3为表示用乙醇沉淀法制备的PQQ二钠结晶的粉末X射线衍射的结果的图。

具体实施方式

本发明的PQQ二钠结晶，为水分含量低的结晶（以下，有时称为“低水分含量结晶”）。具体来说，本发明的PQQ二钠结晶，为水分含量在7%以下的PQQ二钠结晶。从结晶的稳定性的观点出发，结晶中的水分含量更优选4.6%以下、更加优选3%以下。本发明的PQQ二钠结晶，例如，为本说明书中记载的晶形1或者晶形2的PQQ二钠结晶，但是本发明的PQQ二钠结晶，也可以为选自晶形1、晶形2和其以外的晶形的结晶中的1种以上的结晶的混合物，本发明的晶形1或者晶形2的PQQ二钠结晶，例如，即使与作为本发明的PQQ二钠结晶的前体的结晶（以下，有时简称为“前体结晶”）混合，在使用上也没有问题。

本发明的PQQ二钠结晶，优选为在使用CuKα射线的粉末X射线衍射中在11.4±0.4、13.5±0.4、18.0±0.4、18.7±0.4、26.0±0.4、28.5±0.4°显示2θ角度的峰的PQQ二钠结晶（晶形1）。该峰能够通过安装有单色器的通常的粉末X射线衍射装置观测。测定数据也包括测定误差，因此本发明规定的晶形，为具有与峰的角度相关的合理的同一性的晶形。

本发明的PQQ二钠结晶，优选为在使用CuKα射线的粉末X射线衍射中在8.7±0.4、11.5±0.4、12.0±0.4、17.4±0.4、18.7±0.4°显示2θ角度的峰的PQQ二钠结晶（晶形2）。此外，粉末X射线衍射测定中，作为低水分含量结晶能够在通常的测定（常温）中观察的是晶形1的结晶形态，晶形2在通常的湿度环境下无法观察，需要在180℃以上的高温状态的环境下或者干燥气氛下等测定。

本发明的PQQ二钠结晶，通过包括得到本发明的PQQ二钠结晶的前体结晶、对该前体结晶进行干燥的工序的方法制造。本发明中，PQQ二钠结晶的前体结晶是指水分含量超过4.6%、优选超过7.0%的PQQ二钠结晶。本发明中，PQQ二钠结晶的前体结晶的水分含量优选为14%以下。

作为本发明的PQQ二钠结晶的原料，能够使用PQQ钠盐（即，PQQ单钠盐、PQQ二钠盐和PQQ三钠盐），优选能够使用PQQ三钠。PQQ钠盐可以包含作为制造工序上可以含有的杂质的食盐等，这种情况下，在本发明的制作过程中适当除去杂质，能够提高产物的纯度。就PQQ二钠结晶的前体结晶而言，能够在乙醇或异丙醇浓度为10～90重量%的水溶液中，在PQQ钠盐的固体不完全溶解的条件（即，PQQ钠盐饱和的条件）下添加PQQ钠盐（例如，PQQ钠盐的固体），接着，添加酸，将水溶液的pH调整到2～5的范围，使其结晶化。水溶液中的乙醇或者异丙醇浓度，优选为35～65重量%的浓度。另外，PQQ钠盐不完全溶解的条件（即，PQQ饱和的条件），根据使用的醇浓度不同而范围变化，但在作为PQQ钠盐使用三钠盐的情况下，是指PQQ三钠盐的浓度为0.5～800g/L，更优选0.5～100g/L，更加优选5～60g/L的条件，醇浓度高，则能够使用低浓度的PQQ。具体来说，水溶液为50%乙醇水溶液的情况下，能够使用的PQQ三钠浓度为1～200g/L。另外，水溶液的pH，更优选能够调整为2.5～3.5的范围。

前体结晶通过将水溶液的pH调整到规定的值，然后反应0.1～96小时得到。为了得到大的结晶，更优选反应时间能够设为6～72小时。此外，能够在反应温度为0～90℃、更优选为10～60℃进行。结晶化的条件，可以考虑搅拌的有无和强弱对于结晶品质的影响，自由地选择。

得到的前体结晶能够经过过滤、离心分离、倾析得到。可以再将其通过醇等清洗，作为前体结晶提供，但也可以不进行分离操作，将析出的结晶直接以其原始状态作为前体结晶提供。如此得到的前体结晶优选为在使用CuKα射线的粉末X射线衍射中在9.1±0.4、10.3±0.4、13.8±0.4、17.7±0.4、18.3±0.4、24.0±0.4、27.4±0.4、39.5±0.4°显示2θ角度的峰的PQQ二钠结晶，优选作为结晶水，包含12.7%的水分。

本发明的制造方法，使PQQ二钠结晶的前体结晶进行结晶化之后，对前体结晶进行干燥。由此，能够得到本发明的PQQ二钠结晶。具体来说，前体结晶的干燥能够通过冻结干燥、常压干燥和/或减压干燥进行。干燥工序能够通过调整干燥时间、干燥温度等干燥条件，进行从前体结晶到晶形1或晶形2的PQQ二钠结晶的晶形的转变，得到本发明的PQQ二钠结晶。干燥温度根据方法的不同而不同，例如能够设为-80～250℃，优选设为-60～250℃。干燥温度的下限为冻结干燥时的初始温度，上限为不产生PQQ二钠的分解的温度。例如，干燥温度在冻结干燥时能够设为-80～0℃，优选设为-60～0℃，在常压干燥时能够设为40～250℃，在减压干燥时能够设为0～250℃。更具体来说，为了得到晶形1的PQQ二钠结晶，在减压干燥时，没有特别限定，例如，能够在50℃进行20小时以上、优选进行70小时以上干燥，在常压干燥时，能够在120℃以上且低于180℃进行30分钟以上的加热。为了得到晶形2的PQQ二钠结晶，例如，在常压干燥时，能够在180℃以上进行30分钟以上的加热。此外，PQQ二钠的晶形1，在大气压下，在180℃进行相转移，变化为晶形2。因此，PQQ二钠的晶形2也能够通过首先制作晶形1，然后使得结晶发生相转移而得到。此外，干燥工序能够以结晶中的水分含量为指标而结束。例如，本发明中，就干燥而言，以结晶的水分含量在7重量%以下、优选4.6重量%以下，更优选3%重量以下为指标，结束干燥。PQQ二钠的分解程度会根据周围的环境变化，从减少分解的观点出发，干燥在氮气气氛下进行比通常在空气下进行更优选，此外，在氮气气氛下，容易提高干燥温度，缩短干燥时间。

本发明的制造方法的更优选的实施方式，前体结晶的干燥能够通过在油中加热前体（例如，油炸）的方法进行。在油中加热前体结晶的情况下，从进行变换到晶形1或晶形2的观点出发，优选加热温度在常压下为120～200℃。为了得到晶形1的PQQ二钠结晶，油温没有特别限定，例如能够设为120℃以上且低于180℃，为了得到晶形2的PQQ二钠结晶，能够设为在其以上的温度，即，180～200℃。只要油不着火，并且PQQ二钠结晶不分解，加热温度可以超过200℃。另外，加热时间优选在30分钟以上。油只要是能够食用的油就没有特别限定，能够使用大豆油、中链脂肪酸油、玉米油、鱼油、橄榄油、菜籽油、米油、鱼油、椰子油等食用油。通过该工序得到的油和PQQ二钠结晶的混合物，作为低水分含量的PQQ二钠结晶的浆料，例如，可以在软胶囊用途中直接使用，或者，通过己烷等除去油再使用。目前为止已知PQQ的反应性很高，但是不知在食用油中的热稳定性，根据本发明，PQQ二钠结晶，具有高温稳定性，并且令人惊讶的是，通过加热能够变换为新的晶形1或晶形2。在油中加热前体结晶的方法，在短时间内能够得到晶形1或晶形2的PQQ二钠结晶，这一点有利。

本发明的晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶，在食用油中的分散性高，此外，对皮肤的渗透性高。此外，本发明的晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶为低水分含量结晶，具有高的保存性。本发明得到的PQQ二钠结晶还具有因为是结晶所以纯度高的优点。此外，晶形2的PQQ二钠结晶是在湿润气氛下比较容易吸湿的结晶，因此，优选在干燥气氛下保存。

因此，本发明的PQQ二钠结晶，作为人用或动物用，能够适合作为食品、功能性食品、营养剂、化妆品、医药品或准药品（医薬部外品，quasidrug）使用。这里所说的功能性食品，是指健康食品、营养辅助食品、营养功能食品、营养保健食品和特定保健用食品等以健康的维持或者代替用餐的营养补给为目的而摄取的食品。作为食品、功能性食品、营养剂、化妆品、医药品或准药品的具体形态，可以列举胶囊剂（例如，明胶胶囊、软胶囊）、片剂、咀嚼片、锭剂、营养补充饮料（ドリンク剤，nutritioussupplementdrinks）等，但是不限于此，本发明的晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶，水分含量少，因此对于锭剂成型、保存等有利。本发明的晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶，如上所述，在油脂中的分散性、对皮肤的渗透性优异。因此，本发明提供包含本发明的PQQ二钠结晶的医药组合物、化妆品组合物、功能性食品和营养剂。特别是本发明的结晶对皮肤的渗透性优异，因此，本发明的医药组合物，能够成为经皮给药用的医药组合物。此外，本发明的结晶在油脂中的分散性优异，因此，适合对油分散体系的制剂的处方。因此，本发明的医药组合物、化妆品组合物，优选以乳剂、悬浮剂这样的分散制剂的形态、软膏剂、霜剂这样的半固体制剂的形态或者软胶囊这样的成型制剂的形态提供。

本发明的PQQ二钠结晶作为功能性食品产品化的情况下，作为添加剂，例如能够使用甜味剂、着色剂、防腐剂、增稠稳定剂、抗氧化剂、发色剂、漂白剂、防菌防霉剂、胶基、苦味剂、酶、光泽剂、酸味剂、调味料、乳化剂、强化剂、制造用剂、香料、香辛料提取物等。此外，本发明的PQQ二钠结晶，一般能够加入到通常的食品例如味噌、酱油、即时酱汤、拉面、炒面、咖喱、玉米汤、麻婆豆腐、麻婆茄子、意粉酱、布丁、蛋糕、面包等中。此外，本发明的医药组合物也可以包含本发明的PQQ二钠结晶和至少一种以上的制剂用添加剂。此外，本发明的化妆品组合物，可以包含本发明的PQQ二钠结晶和至少一种以上的化妆品添加剂。制剂用添加剂和化妆品添加剂，按照医药组合物和化妆品组合物的处方形态，只要是本领域技术人员就能够适当选择。

实施例

以下，通过参考例、实施例和比较例更详细地说明本发明，但是本发明不仅仅限定于这些例子。

粉末X射线衍射，使用株式会社MACScience制造的M18XCE装置或者株式会社RIGAKU制造的RINT2500。

X射线：Cu/管电压40kV/管电流100mA

扫描速度：4.000°/min

取样宽度：0.020°

结晶的水分含量（重量%）的测定通过卡尔费休法进行。

参考例1：前体结晶

按照日本专利第2751183号公报的记载，用培养法得到原料的PQQ三钠。将包含20gPQQ的含水PQQ三钠盐的固体60g加入到1L的乙醇浓度50重量%的水溶液中，使其饱和。此时，固体没有完全溶解。在室温下加入盐酸，调整pH到3.5。盐酸的添加，用大约2小时缓慢滴加。添加盐酸后，搅拌2天，然后，过滤所得到的乙醇水溶液，以收率99mol%得到含水PQQ二钠结晶。进行粉末X射线衍射，得到的结晶在9.1±0.4、10.3±0.4、13.8±0.4、17.7±0.4、18.3±0.4、24.0±0.4、27.4±0.4、39.5±0.4°显示2θ角度的峰。在温度40℃、相对湿度（RH）75%的环境中放置所得到的结晶，测定水分含量，结果得到的结晶的水分含量为12.7%，纯度为87.3%。

实施例1：晶形1

将参考例1得到的前体结晶放入减压干燥器（Advantech公司制造，产品名：FS-420）中，在膜片式真空泵（AGardnerDenverProduct公司制造DRYFASTULTRA，产品编号：2032）中减压到装置极限（2Torr），然后在50℃干燥77小时。

进行粉末X射线衍射，结果得知得到的结晶，为在11.4±0.4、13.5±0.4、18.0±0.4、18.7±0.4、26.0±0.4、28.5±0.4°显示2θ角度的峰的PQQ二钠结晶（晶形1）（图1）。如图1所示，本实施例得到的PQQ二钠结晶，为与含水量多的前体结晶的晶形不同的新的晶形（晶形1）的结晶。测定水分含量的结果，得到的结晶的水分含量为0.7%，结晶的水分含量与前体结晶相比大幅度降低，得到的结晶的纯度为99.3%。

实施例2：晶形1

在减压干燥器（Advantech公司生产，产品编号：FS-420）中放入参考例1得到的前体结晶，在大气压下，在120℃干燥1天。进行粉末X射线衍射，结果得知得到的结晶，与实施例1得到的晶形1相同。测定水分含量的结果，得到的结晶的水分含量为2.2%，纯度为97.8%。

实施例3：晶形1（油中，150℃，0.5小时）

将参考例1得到的前体结晶9.6g放入日清oillio制食用油ODO65g中，在150℃加热30分钟（炸）。进行粉末X射线衍射，结果得知得到的结晶与实施例1得到的晶形相同。加热时间比实施例1和实施例2短，在油中加热前体结晶，用短时间得到晶形1。

得到的结晶进行高效液相色谱分析的结果，得知结晶中所含的杂质量没有增加，得到的结晶具有99%以上的纯度。另外，测定水分含量的结果，得到的结晶的水分含量为1.9%。加热时间比实施例1和实施例2短，得到的结晶的水分含量比前体结晶大幅度降低，与实施例1和实施例2的晶形的水分含量等同。

实施例4：水分含量7%的结晶混合物

将参考例1得到的前体结晶放入减压干燥器中，使用膜片式真空泵（AGardnerDenverProduct公司制造DRYFASTULTRA、产品编号：2032）减压到装置极限（2Torr），然后在50℃干燥22小时。

进行粉末X射线衍射，结果得知得到的结晶为在11.4±0.4、13.5±0.4、18.0±0.4、18.7±0.4、26.0±0.4、28.5±0.4°显示2θ角度的峰的晶形1的PQQ二钠结晶、与参考例1的前体结晶的混合物。测定水分含量的结果，得到的结晶的水分含量为7%，纯度为93%。得到的结晶混合物，之后通过减少水分含量，能够逐渐变换为晶形1的结晶（例如，参照在相同条件下干燥77小时的实施例1）。

实施例5：加热温度和得到的晶形的关系

本实施例研究干燥工序中的加热温度和得到的晶形的关系。

以温度变化速度20℃/min对参考例1得到的前体结晶进行加热，达到各设定温度，在15分钟后开始测定。粉末X射线：5～60℃，4°/min

研究各设定温度时结晶的晶形，结果

30℃时为与前体结晶相同的结晶，

120℃时为与实施例4的水分含量7%的结晶混合物相同的前体结晶和晶形1混合的结晶混合物，

150℃时为晶形1的结晶，

180℃时为在8.7±0.4、11.5±0.4、12.0±0.4、17.4±0.4、18.7±0.4°显示2θ角度的峰的新的晶形的PQQ二钠结晶（晶形2）。在各个温度处理的结晶的粉末X射线衍射的结果如图2所示。进行晶形2的结晶的热重量分析，结果得知晶形2的结晶的水分含量几乎为0%。但是，该结晶不稳定，在30℃静置一段时间（例如，半天以上），就会吸湿，成为与前体结晶相同的晶形的结晶（图2）。

比较例1：与参考例1不同的PQQ二钠结晶

在水中溶解参考例1的前体结晶，加入乙醇，从而析出红色的PQQ二钠结晶。测定水分含量的结果，得到的结晶的水分含量为14.5%。然后，进一步与实施例1同样在减压下将得到的结晶干燥96小时，进行粉末X射线分析。但是，得知通过该方法得到的结晶具有在9.4、22.4°显示2θ角度的峰的结晶性低的结构（图3）。另外，测定水分含量的结果，得到的结晶的水分含量为9.6%，纯度为90.4%。

实施例6：晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶的分散性试验

本实施例中，比较晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶和现有的结晶在食用油脂中的分散性。

首先，如下制备晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶。晶形1的结晶如下得到：将参考例1的PQQ二钠盐的前体结晶3g放入玻璃制容器中，膜片式真空泵（AGardnerDenverProduct公司制造DRYFASTULTRA、产品编号：2032）减压到装置极限（2torr），然后在150℃减压干燥4小时，作为暗茶色的固体得到。干燥后，使容器内返回大气压，迅速关闭玻璃制容器的盖子。晶形2的结晶如下得到：将参考例1的PQQ二钠盐的前体结晶3g放入200mL的茄形烧瓶中，一边以100mL/min的流速回流氮气，一边在200℃加热4小时，作为暗茶色的固体得到。干燥后，一边回流氮，一边将烧瓶内的温度降低到室温。本实施例中，作为对照，使用参考例1的PQQ二钠结晶（前体结晶）。

将5mg得到的结晶（前体结晶、晶形1和晶形2）分别添加到200μL大豆油中，移至聚丙烯制容器中，剧烈混合。然后，在室温静置，测定所有在大豆油中浮动的结晶沉降到容器底面的时间，作为各结晶的分散性指标。

结果如表1所示。

[表1]

	沉降时间（分钟）
		晶形1	30
晶形2	45
		前体结晶	0.5

如表1所示，前体结晶在0.5分钟所有的结晶沉降到容器的底面，但是晶形1和晶形2的结晶沉降为止分别需要30分钟和45分钟的时间。由此表明，晶形1和晶形2的结晶，在食用油脂中的分散性，比前体结晶提高。从表1可知，晶形1和晶形2的结晶在食用油脂中的分散性，提高了前体结晶的50倍以上。

通常，在软胶囊的制造中，有效成分与食用油脂混合而制剂化。本发明的低水分含量的PQQ二钠结晶，比现有结晶的分散性高，可以认为例如适于软胶囊制剂的制造。

实施例7：晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶对皮肤的渗透试验

本实施例中，使用实施例6制备的晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶，比较对皮肤的渗透性。

实施例6中制备的晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶以及参考例1的前体结晶分别与L-抗坏血酸的粉末（和光公司制造，特级）以1:4的重量比混合，制作试验用组合物，用于渗透试验。作为对照，使用L-抗坏血酸的粉末。

渗透试验，使用猪的皮肤进行。用自来水清洁猪的皮肤，完全擦去水分。使该猪的皮肤接触每5mg的试验用组合物，其后，用带子固定在皮肤上。80分钟后，剥开带子，用自来水清洗皮肤，除去皮肤表面附着的试验用组合物。PQQ的结晶对皮肤的渗透性的高低，通过皮肤的着色程度进行评价。具体来说，本实施例，将处置后的皮肤的照片存入计算机中，使用图像处理软件（产品名：Paint（windowsXP自带软件）、（Microsoft公司制造）测定皮肤的亮度变化，由此进行评价。此时，皮肤的亮度的变化通过下式计算：

结果示于表2。

[表2]

	皮肤渗透性
		晶形1	44
晶形2	59
		前体结晶	32
L-抗坏血酸粉末	0

如表2所示，晶形1和晶形2的结晶，与前体结晶相比较，显示对皮肤的高渗透性。由此表明，晶形1和晶形2的PQQ二钠结晶适宜在化妆品或经皮给药用的医药品等中的使用。

处方例1：明胶胶囊制剂

将辅酶Q10（三菱瓦斯化学公司制造）8g、大豆蛋白水解物（日清oillio公司制造）2g和实施例1的PQQ二钠结晶（晶形1）2g放入塑料袋，充分振动混合，制备经口摄取用组合物。得到的组合物以每个10mg封入明胶胶囊中，得到明胶胶囊制剂。

处方例2：油分散液的软胶囊制剂

将红花-色拉油（日清oillio公司制造）2700g、甘油脂肪酸酯（理研维他命公司制造）300g、和蜂蜡（横滨油脂工业公司制造）300g一起在70℃搅拌，之后，加入实施例1的PQQ二钠结晶（晶形1），用混合机混合。得到的混合物封入软胶囊，得到软胶囊制剂。

Claims (10)

1.一种吡咯并喹啉醌二钠结晶(晶形1)，其特征在于：

水分含量在7重量％以下，使用CuKα射线的粉末X射线衍射中，在11.4±0.4、13.5±0.4、18.0±0.4、18.7±0.4、26.0±0.4、28.5±0.4°显示2θ角度的峰。

2.一种吡咯并喹啉醌二钠结晶(晶形2)，其特征在于：

水分含量在7重量％以下，使用CuKα射线的粉末X射线衍射中，在8.7±0.4、11.5±0.4、12.0±0.4、17.4±0.4、18.7±0.4°显示2θ角度的峰。

3.如权利要求1或2所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶，其特征在于：

水分含量在4.6重量％以下。

4.一种医药组合物，其特征在于：

包含权利要求1～3中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

5.一种化妆品组合物，其特征在于：

包含权利要求1～3中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

6.一种功能性食品或营养剂，其特征在于：

包含权利要求1～3中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

7.一种吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，用于制造权利要求1～3中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶，该制造方法的特征在于：

包括得到作为所述吡咯并喹啉醌二钠结晶的前体的结晶(前体结晶)，接着，对前体结晶进行干燥的工序。

8.如权利要求7所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，其特征在于：

所述前体结晶通过将溶解有吡咯并喹啉醌的钠盐的乙醇或异丙醇浓度为10～90％的水溶液的pH调整为2～5的范围进行结晶化。

9.如权利要求7所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，其特征在于：

所述前体结晶为在使用CuKα射线的粉末X射线衍射中在9.1±0.4、10.3±0.4、13.8±0.4、17.7±0.4、18.3±0.4、24.0±0.4、27.4±0.4、39.5±0.4°显示2θ角度的峰的吡咯并喹啉醌二钠结晶。

10.如权利要求7～9中任一项所述的吡咯并喹啉醌二钠结晶的制造方法，其特征在于：

干燥通过在油中对结晶加热而进行。