CN103487526B - 一种硼替佐米光学异构体的含量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种硼替佐米光学异构体含量的检测方法，该方法为高效液相色谱法，包括采用硅胶表面涂布直链淀粉三(3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相为填料的正相色谱柱，以正己烷、醇和有机胺类极性调节剂的混合溶剂为流动相，其中正己烷、醇和有机胺类极性调节剂的体积比为97~95:3~5:0~0.5，并采用紫外检测器进行检测，流速为1.0~1.4 ml/min，色谱柱的柱温为25~45℃。该方法可很好地分离硼替佐米的4个光学异构体，从而可准确地测定硼替佐米中各光学异构体的含量。该方法稳定可靠，灵敏度高，可用于硼替佐米原料药及其制剂的研究及生产过程中的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种硼替佐米光学异构体的含量检测方法，属于药物分析领域。
背景技术
硼替佐米（bortezomib）是由美国Millennium公司研发的一种新型抗肿瘤药物，商品名为万柯（Velcade），是第一个进入临床应用的蛋白酶体抑制剂。美国食品与药物管理局和欧洲药物评审局均已审批通过了万珂用于多发性骨髓瘤的临床治疗。
硼替佐米通过选择性地与蛋白酶体活性位点的苏氨酸结合，而可逆性抑制哺乳动物细胞中蛋白酶26S亚单位的糜蛋白酶/胰蛋白酶活性，从而抑制与细胞增殖相关的基因的表达，减少骨髓瘤细胞生长因子的分泌和粘附因子的表达，最终导致肿瘤细胞凋亡。临床研究证实，硼替佐米对复发、难治性多发性骨髓瘤疗效确切,不良反应相对较轻，多可以耐受。
硼替佐米的化学名为[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪甲酰)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸。硼替佐米是一个手性纯药物，其分子中有2个手性中心，存在4个光学异构体，即硼替佐米、硼替佐米对映异构体和2个非对映异构体，其结构式分别如下所示：
如上所示，本发明中将(1R,2R)非对映异构体命名为非对映异构体A，将(1S,2S)非对映异构体命名为非对映异构体B。
由于人体内的生物大分子如药酶、蛋白质、受体等具有不对称的性质，所以对于手性药物而言，各光学异构体的体内药理活性和药动学性质通常具有较大的差异。因此，对手性药物中光学异构体含量的分析和控制是手性药物质量研究和质量保证中非常重要的项目。
目前，国内外有关硼替佐米光学异构体含量的分析检测方法未见有报道。这就给硼替佐米光学异构体的分析检测带来障碍，影响对该药品的质量分析和质量控制，进而影响该药品的安全有效性。
因此，提供一种准确可靠、灵敏度高的硼替佐米光学异构体含量的检测方法，具有非常重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种硼替佐米光学异构体含量的检测方法，可用于硼替佐米原料药及其制剂的研究及生产过程中的质量控制。该方法可很好地分离硼替佐米的4个光学异构体，从而可准确地测定硼替佐米中各光学异构体的含量。该方法稳定可靠，灵敏度高。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究，最终获得如下采用高效液相色谱法的技术方案：
一种硼替佐米光学异构体的含量检测方法，该方法为高效液相色谱法，包括采用硅胶表面涂布直链淀粉三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相为填料的正相色谱柱，以正己烷、醇和有机胺类极性调节剂的混合溶剂为流动相，其中正己烷、醇和有机胺类极性调节剂的体积比为97～95:3～5:0～0.5，并采用紫外检测器进行检测，流速为1.0～1.4ml/min，色谱柱的柱温为25～45℃。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的色谱柱为AD-H手性正相色谱柱。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的流动相为正己烷、醇和有机胺类极性调节剂的混合溶剂，其中正己烷、醇和有机胺类极性调节剂的体积比为96:4:0.2。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的流动相中的醇为甲醇和乙醇的混合醇溶剂，其中甲醇和乙醇的体积比为1:0.8～1.25。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的流动相中的醇为甲醇和乙醇的混合醇溶剂，其中甲醇和乙醇的体积比为1:1。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的流动相中的有机胺类极性调节剂为二乙胺。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的紫外检测器的检测波长为270nm。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的流动相洗脱的流速为1.2ml/min。
上述硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其中所述的色谱柱的柱温为30～35℃。
本发明的方法能够有效地将硼替佐米的4个光学异构体进行分离，并准确地测定出硼替佐米各光学异构体的含量，解决了硼替佐米原料药及制剂中光学异构体的含量测定的问题，从而为硼替佐米原料药及其制剂的质量分析和质量控制奠定基础，保证了该药品的安全有效性。
附图说明
图1、实施例1的高效液相色谱图；
图2、实施例2的高效液相色谱图；
图3、实施例3的高效液相色谱图。
具体实施方式
以下典型实施例用来举例说明本发明，在本领域内的技术人员对本发明所做的简单替换或改进等均属于本发明所保护的技术方案之内。
实施例1
仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津，LC-20AD泵，SPD-20A检测器，CTO-20A柱温箱，LCsolution工作站；
色谱柱：AD-H（Chiralpak，250×4.6mm，5μm）；
流动相：正己烷：乙醇：甲醇：二乙胺=95:2.5:2.5:0.2
检测波长：270nm
流速：1.2ml/min
柱温：35℃
进样量：20μl
实验步骤：
取硼替佐米、硼替佐米对应异构体、非对应异构体A和非对应异构体B各约10mg，分别置10ml量瓶中，加入约0.3ml的甲醇超声处理溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液等量混合后作为系统适应性溶液。精密量取系统适应性溶液20μl，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。
图1中保留时间11.560分钟的色谱峰为硼替佐米对映异构体，保留时间12.617分钟的色谱峰为硼替佐米，保留时间16.547分钟的色谱峰为非对映异构体A，保留时间18.535分钟的色谱峰为非对映异构体B。在上述条件下硼替佐米4个光学异构体可以完全分离，可以满足《中国药典》的相关要求。
实施例2
仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津，LC-20AD泵，SPD-20A检测器，CTO-20A柱温箱，LCsolution工作站；
色谱柱：AD-H（Chiralpak，250×4.6mm，5μm）；
流动相：正己烷：乙醇：甲醇：二乙胺=96:2:2:0.2
检测波长：270nm
流速：1.2ml/min
柱温：35℃
进样量：20μl
实验步骤：
取硼替佐米、硼替佐米对应异构体、非对应异构体A和非对应异构体B各约10mg，分别置10ml量瓶中，加入约0.3ml的甲醇超声处理溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液等量混合后作为系统适应性溶液。精密量取系统适应性溶液20μl，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图2。
图2中保留时间12.282分钟的色谱峰为硼替佐米对映异构体，保留时间13.695分钟的色谱峰为硼替佐米，保留时间18.282分钟的色谱峰为非对映异构体A，保留时间20.470分钟的色谱峰为非对映异构体B。在上述条件下硼替佐米4个光学异构体得到完全分离，可以满足《中国药典》的相关要求。
实施例3
仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津，LC-20AD泵，SPD-20A检测器，CTO-20A柱温箱，LCsolution工作站；
色谱柱：AD-H（Chiralpak，250×4.6mm，5μm）；
流动相：正己烷：乙醇：甲醇：二乙胺=97:1.5:1.5:0.2
检测波长：270nm
流速：1.2ml/min
柱温：35℃
进样量：20μl
实验步骤：
取硼替佐米、硼替佐米对应异构体、非对应异构体A和非对应异构体B各约10mg，分别置10ml量瓶中，加入约0.3ml的甲醇超声处理溶解后，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液等量混合后作为系统适应性溶液。精密量取系统适应性溶液20μl，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。
图3中保留时间15.064分钟的色谱峰为硼替佐米对映异构体，保留时间16.119分钟的色谱峰为硼替佐米，保留时间21.065分钟的色谱峰为非对映异构体A，保留时间22.508分钟的色谱峰为非对映异构体B。在上述条件下硼替佐米4个光学异构体可以完全分离，可以满足《中国药典》的相关要求。
Claims (9)
1.一种硼替佐米光学异构体的含量检测方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法，该方法包括采用硅胶表面涂布直链淀粉三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相为填料的正相色谱柱，以正己烷、甲醇和乙醇组成的混合醇和有机胺类极性调节剂的混合溶剂为流动相，其中正己烷、甲醇和乙醇组成的混合醇和有机胺类极性调节剂的体积比为97～95:3～5:0～0.5，并采用紫外检测器进行检测，流速为1.0～1.4ml/min，色谱柱的柱温为25～45℃。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为AD-H手性正相色谱柱。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相中正己烷、甲醇和乙醇组成的混合醇和有机胺类极性调节剂的体积比为96:4:0.2。
4.根据权利要求1或3所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相中的甲醇和乙醇组成的混合醇，其中甲醇和乙醇的体积比为1:0.8～1.25。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相中的甲醇和乙醇组成的混合醇，其中甲醇和乙醇的体积比为1:1。
6.根据权利要求1或3所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相中的有机胺类极性调节剂为二乙胺。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的紫外检测器的检测波长为270nm。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相洗脱的流速为1.2ml/min。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱的柱温为30～35℃。
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