CN103479833A - 一种用于保肝的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于保肝的组合物,它是由下述原料制备而成的制剂:奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-半胱氨酸。本发明还公开了前述组合物的制备方法和用途。本发明将奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸和N-乙酰-L-半胱氨酸组合使用,具有明显的保肝作用,可用于治疗和/或预防急性肝损伤和慢性肝损伤。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于保肝的组合物。
背景技术
肝脏是身体重要的排毒器官,肠胃道所吸收的有毒物质,都要在肝脏经过解毒程序变为无毒物质,再经过胆汁或尿液排出体外。中医中所述的“肝”主要负责藏血和疏泄。藏血是储存身体的养份,疏泄则是指身体的疏通调节(新陈代谢)功能。日常生活中不合理的饮食、生活习惯对肝脏都会有或轻或重的损伤,所以对肝脏的保护尤为重要。
奶蓟,又名大蓟、水飞蓟,是菊科植物水飞蓟的果实,其主要有效成分为水飞蓟素。水飞蓟素是水飞蓟宾、脱氢水飞蓟宾、水飞蓟宁、聚水飞蓟宾等化合物的总称,具有直接清除活性氧、抑制5′-脂氧合酶、保护肝细胞膜、促进被损伤肝细胞合成DNA及结构蛋白、免疫调节和抗肝纤维化等药理作用,是一种具有良好应用前景的肝病治疗药物(闫玉峰等,水飞蓟的化学成分及药理研究进展[J].中国药事,2000,14(5):335-337.)。
绿茶是未经发酵制成的茶,较多的保留了鲜叶的天然物质。茶多酚(teatolyphenols)是绿茶药效的主要活性成分,占茶叶干质量的15%-20%,其主要组分为儿茶素(catechins)。茶多酚具有消除自由基、抗氧化等生物活性,在抑菌、抗病毒、防治心血管疾病、保肝等方面都有良好的功效。实验研究证明,茶多酚可以明显减轻CCl4和酒精等引起的肝损伤(饶光宇等,茶多酚对小鼠实验性肝损伤的保护作用[J].中国中药杂志,2001,26(3):191-193;周晓蓉等,茶多酚对实验性酒精性肝损伤大鼠的治疗作用[J].世界华人消化杂志,2006,14(1):51-56.)。
巴西莓是一种棕榈树结的果实。巴西莓含有多种活性成分,特别是花色苷、原花青素和其他的黄酮类,具有很强的抗氧化活性,特别是对抗超氧化物和过氧化自由基,能延长高脂饮食雌果蝇的寿命(王春旭,巴西莓和白藜芦醇对高糖、高蛋白或高脂饮食果蝇寿命的影响及机制研究.华中科技大学,2012年.)。有研究表明原花青素能对氧自由基、化学诱导、乙醇、重金属离子等导致的肝损伤起保护作用(邹金发等,原花青素在肝损伤中的作用[J].中国医学工程,2012年06期;陈季武等,原花青素对·OH致损的鼠肝线粒体的保护作用[J].华东师范大学学报(自然科学版),2004年2期;邓宇等,番茄红素和原花青素对汞致大鼠肝损伤影响的实验研究[J].全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集,2010年)。
硫辛酸(Alpha Lipoic Acid)是一种既具水溶性又具脂溶性的维生素类的物质。硫辛酸含有双硫五元环结构,电子密度很高,具有显著的亲电子性和与自由基反应的能力,因此它具有抗氧化性,此外,硫辛酸的巯基很容易进行氧化还原反应,故可保护巯基酶免受重金属离子的毒害。有实验研究证实,硫辛酸对肝脏缺血再灌注损伤以及CCl4所致的小鼠急性肝损伤有明显保护作用(齐崧旭等,α-硫辛酸预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的实验研究.中外医学研究,2011年29期;杨国宇等,硫辛酸对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用.兽药与饲料添加剂,2002年6期)。
N-乙酰-L-半胱氨酸,能够清除自由基,抑制内皮细胞粘附和白细胞浸润,对缺血再灌注损伤有很好的防治效果。有研究表明,给予N-乙酰-L-半胱氨酸可明显降低缺血再灌注所致的血浆LDH、GOT活性及心、肝、肺、肾组织MPO活性和MDA含量增高,病理观察显示组织损伤改善(管利东等,N-乙酰-L-半胱氨酸对失血性休克大鼠再灌注损伤的保护作用.中国药理学与毒理学杂志,2003,17(6):420-425)。
现未见将奶蓟、绿茶、巴西莓中的原花青素、α-硫辛酸、N-乙酰-L-半胱氨酸联合用于保肝作用的报道。
发明内容
本发明的目的是提供了一种用于保肝的组合物。本发明的另一目的是提供了该组合物的制备方法和用途。
本发明用于肝保护的组合物,它是由下述原料制备而成的制剂:奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸和N-乙酰-L-半胱氨酸。
优选地,它是含有下述重量配比的原料制备而成的制剂:
奶蓟提取物2~5份、绿茶提取物1~3份、巴西莓提取物1~4份、α-硫辛酸1~2份、N-乙酰-L-半胱氨酸1份。
进一步优选地,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:
奶蓟提取物5~6份、绿茶提取物2~3份、巴西莓提取物1~2份、α-硫辛酸1~2份、N-乙酰-L-半胱氨酸1份。
更一步优选地,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:
奶蓟提取物5份、绿茶提取物3份、巴西莓提取物1份、α-硫辛酸2份、N-乙酰-L-半胱氨酸1份。
所述奶蓟提取物中水飞蓟素的含量>80%(w/w);所述绿茶提取物中茶多酚的含量为80%(w/w);所述巴西莓提取物中原花青素的含量>5%(w/w);所述α-硫辛酸的纯度≥98%;所述N-乙酰-L-半胱氨酸的纯度≥98%。
本发明组合物是由奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-半胱氨酸为活性成分,加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
其中,所述的制剂是口服制剂。
其中,所述的口服制剂是微乳剂、胶囊剂量、片剂、口服液、丸剂。
本发明还提供了一种制备所述的组合物的方法,它包括如下步骤:
a、按上述重量配比,称取各原料;
b、加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。
本发明还提供了所述的组合物在制备保肝药物或保健食品中的用途。
其中,所述的药物或保健食品是治疗和/或预防急性肝损伤或者慢性肝损伤的药物或保健食品。所述治疗和/或预防急性肝损伤的药物或保健食品为治疗和/或预防急性肝脏缺血再灌注损伤的药物或保健食品。
本发明将奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸和N-乙酰-L-半胱氨酸组合使用,具有明显保肝作用,可用于急性肝脏缺血再灌注损伤、慢性肝损伤的肝保护,具有明显治疗效果和预防效果。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1实施例1制备微乳剂的粒径分布图
图2各实施例组合物处理对肝脏急性缺血再灌注损伤后血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性的影响结果
图3各实施例组合物处理对肝脏急性缺血再灌注损伤后血清谷草转氨酶(AST)活性的影响结果
图4单一组分或组合物处理对肝脏急性缺血再灌注损伤后血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性的影响结果
图5单一组分或组合物处理对肝脏急性缺血再灌注损伤后血清丙氨酸转氨酶(AST)活性的影响结果
具体实施方式
实验材料:
奶蓟提取物,购自陕西锦泰生物工程有限公司,其中,水飞蓟素含量>80%(w/w);
绿茶提取物,按照蒋丽等.不同提取方法对茶多酚理化性质的影响.食品科学.2010,31(14):136-139的超声波提取法提取,具体方法为:称取一定量的茶叶,粉碎,按固液比20:1ml/g加入蒸馏水,调pH至5.0,加入纤维素酶至终浓度为200U/g,反应温度为40℃,以600W超声功率进行超声提取20~30min,浓缩提取液,得绿茶提取物,其中,茶多酚的含量为80%(w/w);
巴西莓提取物,购自陕西锦泰生物工程有限公司,其中,原花青素含量>5%w/w;
α-硫辛酸,购自西安金绿生物工程技术有限公司,纯度≥98%;
N-乙酰-L-半胱氨酸,购自Sigma公司,纯度≥98%。
实施例1本发明微乳剂的制备
组合物配比:(每100ml微乳剂中的含量)
将上述比例混合物24g,先加入100mL的PEG400,混合,加入200mL大豆油,于70℃恒温搅拌混匀,然后加入60mL聚山梨酯80、50mL丙三醇、1500ml的水,再于70℃恒温搅拌得油相,然后搅拌将油相匀速滴入适量水中,通过乳化分散得到微乳制剂,加水调整终体积至2L。微乳制剂的粒径表征如图1所示。
实施例2本发明微乳剂的制备
组合物配比:(每100ml微乳剂中的含量)
制备方法同实施例1。
实施例3本发明微乳剂的制备
组合物配比:(每100ml微乳剂中的含量)
制备方法同实施例1。
实施例4本发明微乳剂的制备
组合物配比:(每100ml微乳剂中的含量)
制备方法同实施例1。
实施例5本发明微乳剂的制备
组合物配比:(每100ml微乳剂中的含量)
制备方法同实施例1。
实施例6本发明胶囊剂的制备
组合物配比:(每粒胶囊剂中的含量)
称取上述比例的混合物,加入硬脂酸镁、微晶纤维素和淀粉制粒,然后加入明胶和二氧化硅装胶囊,即得胶囊剂。
实施例7本发明软胶囊的制备
组合物配比:(每粒软胶囊剂中的含量)
称取上述比例的混合物与大豆油、大豆卵磷脂等混合基质按1:1.2混合,加热熔溶,混匀后得软胶囊内容物;
胶皮的制备:按明胶:水:甘油1:0.8:0.4的比例,先将明胶和水放入容器中,加热至80℃,不断搅拌使之溶解,然后加入甘油继续搅拌,待完全溶解后停止加热,自然冷却至室温后作软胶囊材;
将上述所得的内容物和软胶囊材在软胶囊压制机上压制,经清洗、干燥、灭菌、包装即得软胶囊。
实施例8:本发明片剂的制备
组合物配比:(每粒片剂中的含量)
称取上述比例的混合物,加入适量淀粉浆过筛混匀后制湿粒,湿粒烘干后再过筛,然后加入0.6~3%的硬脂酸镁压片,即得片剂。
实施例9:本发明丸剂的制备
组合物配比:(每粒丸剂中的含量)
称取上述比例的混合物,充分粉碎后过六至七号筛,混匀,然后加入蒸馏水泛丸,干燥,即得丸剂。
以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明组合物对大鼠急性肝缺血再灌注损伤的作用
1、实验方法
成年雄性SD大鼠60只(购于成都达硕生物科技有限公司),随机分为6组,每组10只。手术前三天每天分别灌胃给予2.5毫升生理盐水(对照组)、实施例1所制备的微乳剂(组合物1组)、实施例2所制备的微乳剂(组合物2组)、实施例3所制备的微乳剂(组合物3组)、实施例4所制备的微乳剂(组合物4组)和实施例5所制备的微乳剂(组合物5组)。
实验当天,按照如下方法建立大鼠急性肝缺血再灌注损伤模型:称重,戊巴比妥钠(腹腔注射,30mg/kg)麻醉后,将大鼠气管切开后插管,并用呼吸机(HX-100E小动物呼吸机,成都泰盟科技有限公司)行机械通气;一侧股动脉插管并接压力传感器用于放血维持休克状态和监测大鼠平均动脉血压,一侧股静脉用充满肝素的20G留置针插管用于液体输注和采血。分离肝十二指肠韧带,充分暴露第一肝门部,游离出支配肝中叶、左叶的肝蒂,包括门静脉,肝动脉及胆管。用无创小血管夹阻断中叶及左肝叶血流,造成70%肝脏缺血,但不阻断右肝叶血流。热缺血时间60分钟,然后开放再灌注3小时。
在基础状态和再灌注3小时,各组动物分别经股静脉取血3毫升/只,分离得到血清,然后测定丙氨酸转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。
所有数据都以均数±标准差表示,并行单因素方差分析(SPSS16.0软件),P<0.05表示差异有统计学意义。*P<0.001vs.对照组。
2、实验结果
实验结果如图2和图3所示:基础状态时,各组动物血清ALT和AST活性没有显著性差异;再灌注3小时后,与对照组比较,各组合物组的血清ALT和AST活性显著低(均为P<0.001),其中,组合物1组的血清ALT和AST活性最低。
实验结果表明,本发明组合物可以显著降低缺血再灌注引起的肝损伤,对急性肝脏缺血再灌注损伤具有良好的预防和治疗效果,具有保肝作用,其中,实施例1制备的组合物效果最优。
试验例2本发明组合物对大鼠急性肝缺血再灌注损伤的作用
1、实验方法
成年雄性SD大鼠30只(购于成都达硕生物科技有限公司),随机分为6组,每组5只。手术前三天每天分别灌胃给予2.5毫升奶蓟提取物(12mg/mL)、绿茶提取物(12mg/mL)、巴西莓提取物(12mg/mL)、α-硫辛酸(12mg/mL)、N-乙酰-L-半胱氨酸(12mg/mL)或实施例1所制备的微乳剂(组合物组)。
实验当天,按照试验例1方法建立大鼠急性肝缺血再灌注损伤模型。在基础状态和再灌注3小时时,各组动物分别经股静脉取血3毫升/只,分离得到血清,然后测定丙氨酸转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。
2、实验结果
实验结果如图4和图5所示:基础状态各组动物血清ALT和AST活性没有显著性差异;而复灌3小时后,与对照组比较,单独使用奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸和N-乙酰-L-半胱氨酸,动物血清ALT和AST活性有明显降低(P<0.001);本发明组合物组动物,血清ALT和AST活性不仅显著低于对照组(P<0.001),还明显低于单独使用各组分的动物(P<0.05)。
本发明组合物对急性肝脏缺血再灌注损伤的保护作用,显著优于各成分单独使用,说明各成分发挥了协同增效的作用。
试验例3本发明组合物对慢性肝损伤的作用
1、实验方法
成年雄性SD大鼠40只(购于成都达硕生物科技有限公司),200~250g。其中,取30只,随机分为正常组,模型组和组合物组(使用实施例1制备的微乳制剂),每组10只,其余10只备用(用于造模过程中动物意外死亡后的补充)。
慢性肝脏损伤模型采用腹腔注射四氯化碳(CCl4,2毫升/公斤体重)建立,每周2次,持续9周。正常组动物常规饲养,不造模不给药。其余各组动物分别于造模的第一天开始给药,均为灌胃给药,实验组给药剂量为2.5毫升制备的组合物,模型组动物给生理盐水。
各组动物于造模后10周,尾静脉采血分离血清,测定丙氨酸转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。
所有数据都以均数±标准差表示,并行单因素方差分析,P<0.05表示差异有统计学意义。*P<0.001vs.模型组。
2、实验结果
实验结果如下表所示:
表1本发明组合物对慢性肝损伤的作用
如表1所示,与模型组相比,本发明组合物组的动物血清ALT和AST活性显著低(P<0.001)。
实验结果表明,本发明组合物对慢性肝损伤有明显的保护作用。
综上,本发明组合物对急性肝脏缺血再灌注损伤、慢性肝损伤有明显的保护作用,可用于制备预防和/或治疗急性肝损伤、慢性肝损伤的药物和保健食品。
Claims (10)
1.一种用于保肝的组合物,其特征在于:它是由下述原料制备而成的制剂:
奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸和N-乙酰-L-半胱氨酸。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:
奶蓟提取物2~5份、绿茶提取物1~3份、巴西莓提取物1~4份、α-硫辛酸1~2份、N-乙酰-L-半胱氨酸1份。
3.根据权利要求2所述的组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂:
奶蓟提取物5份、绿茶提取物3份、巴西莓提取物1份、α-硫辛酸2份、N-乙酰-L-半胱氨酸1份。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的组合物,其特征在于:所述奶蓟提取物中水飞蓟素的含量>80%(w/w);所述绿茶提取物中茶多酚的含量为80%(w/w);所述巴西莓提取物中原花青素的含量>5%(w/w);所述α-硫辛酸的纯度≥98%;所述的N-乙酰-L-半胱氨酸的纯度≥98%。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的组合物,其特征在于:它是由奶蓟提取物、绿茶提取物、巴西莓提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-半胱氨酸为活性成分,加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
6.根据权利要求5所述的组合物,其特征在于:所述的制剂是口服制剂;优选地,所述的口服制剂是微乳剂、胶囊剂、软胶囊剂、片剂、丸剂。
7.一种制备权利要求1-6任意一项所述的组合物的方法,它包括如下步骤:
a、按权利要求1-7任意一项所述重量配比,称取各原料;
b、加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。
8.权利要求1-6任意一项所述的组合物在制备保肝药物或保健食品中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途,其特征在于:所述的药物或保健食品是治疗和/或预防急性肝损伤或者慢性肝损伤的药物或保健食品。
10.根据权利要求9所述的用途,其特征在于:所述治疗和/或预防急性肝损伤的药物或保健食品为治疗和/或预防急性肝脏缺血再灌注损伤的药物或保健食品。
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