CN103467417B - 牛蒡子苷元碳酰胺衍生物及其制备方法、包含该衍生物的组合物、及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及牛蒡子苷元碳酰胺衍生物、其制备方法和包含其的组合物及其医药用途，更具体而言，涉及通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法，以及包含其的药物组合物及其医药用途。该通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐可用于抑制β-淀粉样肽形成，从而可以用于制备治疗或预防老年性痴呆症的药物或改善记忆力的药物。
Description
技术领域
本发明涉及牛蒡子苷元碳酰胺衍生物、其制备方法和包含其的组合物及其医药用途，更具体而言，涉及用于抑制β-淀粉样肽（Amyloid beta,Aβ）形成的通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐、其制备方法，以及包含其的药物组合物及其医药用途。
背景技术
阿尔茨海默病（Alzheimer's disease,AD，老年性痴呆症）是一种与年龄高度相关的，以进行性认知障碍和记忆力损伤为主的中枢神经系统的退行性病变。AD的主要临床表现为认知和记忆功能不断恶化，日常生活能力进行性减退，并有各种神经精神症状和行为障碍。早期主要表现为近期记忆丢失，个性变化；中期主要表现为易怒，恐慌，睡眠失常，甚至幻觉产生；晚期则主要表现为逻辑思维丧失，卧床不起，生活不能自理等。
导致AD的因素很多，有基因的和非基因的因素。约有5%的老年性痴呆是家族性的，其主要是由于APP和PS基因的突变而引起。而非家族性的散在的老年性痴呆的诱发因素包括年龄，载脂蛋白E4，血管病变，以及外伤性脑损伤等。研究表明，人口老龄化使得此类疾病的发病率越来越高，对社会影响也将越来越大。患病率研究显示，目前全世界大约有二千六百万AD患者，并且按照这种趋势发展，到2050年，全世界可能会有超过一亿的AD病人【Brookmeyer R.,et al.Forecasting the global burden of Alzheimer′sdisease，Alzheimers Dement,2007,3(3):186-91.】。据《2010年度中国老龄事业发展统计公报》称，2010年中国60岁及以上老年人口已达1.7765亿，占总人口的比重达13.26%，与2000年第五次全国人口普查相比，上升了2.93个百分点。目前我国已进入老年化社会，老年性痴呆症也已成为我国社会所面临的突出问题之一，寻找治疗AD的药物不仅成为一种医疗手段，更是成为一种社会责任。
AD患者尸检显示其脑组织出现明显的萎缩，脑细胞出现广泛死亡，特别是基底神经节区的脑细胞，并可见老年斑，神经原纤维结等病变。AD的主要组织病理学特征为：大脑皮质、海马、某些皮层下核团如杏仁核、前脑基底神经核和丘脑中有大量的老年斑（senile plaque，SP）形成。老年斑由大量纤维状、分子量为4kD的Aβ聚集而成【Hutton M.,et al.Genetics ofAlzheimer′s disease.Essays Biochem,1998,33:117-31.】。
研究发现老年性痴呆的神经化学和神经病理学改变均与Aβ有着密切的联系【Younkin,S.G..The role of A beta 42 in Alzheimer′s disease.J Physiol Paris,1998,92(3-4):289-92.】。Aβ假说认为：Aβ作为导致淀粉状沉淀斑的形成，神经纤维的缠结，神经元炎症，神经元功能丧失及死亡，以及最后痴呆的形成等这一系列病理变化的起始因子，Aβ的聚集扣动了导致神经退行性病变的扳机；当Aβ产生过多或者它的清除减少的时候，Aβ蛋白能够聚集成为具有高度神经毒性的多聚体；这种多聚蛋白能够引起机体产生氧化应激、炎症及Tau蛋白的高度磷酸化等诱导神经元死亡的因素。因而认为Aβ在老年性痴呆中起着重要的作用。在家族性的老年性痴呆病人中发现Aβ42在老年性痴呆症状出现之前就出现了明显的增高，这表明Aβ42可能启动了老年性痴呆的病理改变，最终导致老年性痴呆的产生。同时在散在的老年性痴呆病人最主要的显微特征就是细胞外存在大量由纤维状、分子量为4kD的Aβ组成的老年斑。另外，在APP的AD转基因小鼠中也发现Aβ先于记忆力损伤出现，同时如果再将APP转基因小鼠敲除BACE1基因后，Aβ明显被清除的同时改善和消除了神经元的死亡以及记忆损伤。所以调节Aβ产生或者清除的相关信号通路就成为了抗AD治疗的重要靶标。
牛蒡子，始载于《名医别录》，原名恶实，别名鼠粘子、大力子，为菊科牛蒡属(Arctium)植物牛蒡(Arctium lappa Linne)的成熟果实。为历版中国药典所收载，在全国各地均有分布，具有疏散风热、宣肺透疹、解毒利咽之功效。用于风热感冒、咳嗽痰多、麻疹、风疹、咽喉肿痛、痈肿疮毒等症。牛蒡子主要含有牛蒡苷和牛蒡子苷元等木脂素类成分。现代药理学研究表明，牛蒡子所含主要成分木脂素类化合物具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、防治糖尿病肾病、改善肾脏代谢功能、调节免疫、抗菌、抗氧化、钙拮抗剂及降血压等多种生理活性。2001年Jang Y.P.等报道了牛蒡子苷及苷元对谷氨酸损伤的原代培养大鼠皮层细胞具有很强的神经保护作用【Jang P.J.,et al.Neuroprotective dibenzylbutyrolactone lignans of Torreya nucifera,Planta Medica,2001,67:470-472.】；但至今未见牛蒡子苷元降低Aβ生成的作用分子机制研究报道，其系统的结构修饰也未见报道。
发明内容
本发明人通过对牛蒡子苷元的抑制Aβ生成作用的分子机制研究，发现其是通过激动AMPK (AMP-activated protein kinase)的磷酸化和减少AKT(Protein kinase B,PKB)的磷酸化，抑制mTOR（mammalian target ofrapamycin）通路，导致细胞自噬的增加，增加了Aβ的清除，从而起到治疗老年性痴呆的作用。
在此基础上，本发明人对牛蒡子苷元进行了系统的结构修饰，获得了一类活性明显增强的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，从而完成了本发明。
本发明的一个目的为提供一种通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，或其药学上可接受的盐。
本发明的又一目的为提供制备上述牛蒡子苷元碳酰胺衍生物的方法。
本发明的另一个目的为提供包含治疗有效量的选自牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的用于老年性痴呆的治疗的药物组合物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。
本发明的再一目的是提供上述牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐及其药物组合物在制备用于治疗或预防老年性痴呆症的药物或改善记忆力的产品中的用途。
本发明的再一目的为提供一种治疗老年性痴呆症或改善记忆力的方法，所述方法包括向具有该需要的患者给予治疗有效量的选自通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种，或根据本发明的包含治疗有效量的选自通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。
在本发明的第一方面，提供了一种下面通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药物学上可接受的盐：
其中：
R1和R2相同或不同，并且各自独立地为H、C1-C6烷基、C2-C6链烯基、氰基C1-C6烷基、C3-C7环烷基、取代或未取代的芳基、在芳环上取代或未取代的芳基C1-C4烷基或5-7元杂芳基；优选为H、C2-C4烷基、C2-C4链烯基、C5-C6环烷基、取代或未取代的苯基、氰基C1-C4烷基、在苯环上取代或未取代的苯基C1-C2烷基或吡啶基；最优选为H、乙基、丙基、异丙基、异丁基、环己基、烯丙基、2-氰基乙基、苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基或苯乙基；
所述取代的芳基上的取代基为选自卤素、C1-C6烷基、氰基、硝基、氨基（NH2）、羟基、羧基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基中的1-3个取代基；优选为选自卤素、C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基（NH2）、羟基、羧基、C1-C4烷氧基和卤代C1-C4烷氧基中的1-3个取代基；
所述取代的苯基上的取代基为选自卤素、C1-C6烷基、氰基、硝基、氨基（NH2）、羟基、羧基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基中的1-3个取代基；优选为选自卤素、C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基（NH2）、羟基、羧基、C1-C4烷氧基和卤代C1-C4烷氧基中的1-3个取代基；
或者
R1和R2与和它们连接的氮原子一起形成5-12元饱和或不饱和的杂环基，优选为5-10元饱和杂环基、吲哚-1-基、异吲唑-1-基、吲唑-1-基、苯并咪唑-1-基、三唑并吡嗪基，进一步优选形成吲哚-1-基、异吲唑-1-基、吲唑-1-基、苯并咪唑-1-基、2H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡嗪-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基。
在本发明中，术语“芳基”是指不含杂原子的芳香族环基，优选是碳原子数为6~14个的芳基，更优选为碳原子数为6~10个的芳基，如苯基、萘基、联苯基；所述取代的芳基的实例包括但不限于4-氯苯基、4-氟苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、4-羟基苯基、2,3-二羟基苯基、4-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基、3,4-二甲氧基苯基，最优选是苯基、4-氯苯基、4-氟苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基或3,4-二甲氧基苯基。
在本发明中，术语“C1-C6烷基”是指主链上具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等；优选乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。术语“C1-C4烷基”具有类似的含义。
在本发明中，术语“C2-C6链烯基”是指主链上具有2至6个碳原子且存在至少一个碳碳双键的直链或支链烃基，非限制性得包括乙烯基、烯丙基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基和5-己烯基。术语“C1-C4链烯基”具有类似的含义。
在本发明中，术语“C1-C6烷氧基”是指主链上具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等；优选甲氧基和乙氧基。术语“C1-C4烷氧基”具有类似的含义。
在本发明中，术语“C3-C7环烷基”是指在环上具有3至7个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基；优选环戊基、环己基和环庚基；术语“C5-C6环烷基”具有类似的含义。
在本发明中，术语“5-7元杂芳基”是指在环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的5-7元芳香族环基，非限制性地包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、吡唑基和吡啶基；优选吡咯基、咪唑基和吡啶基。
在本发明中，术语“杂环基”是指在环上具有至少一个选自N、O和S中的杂原子的杂环基。
本发明中，所述通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物中优选R1和R2之一为氢。
本发明中，所述通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物优选选自下列化合物中：
在本发明中，表示取代基从该处连接至化合物主体部分。
在本发明的第二方面，还提供了一种制备本发明的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物的方法，所述方法为以下方法之一：
方法一：
其中，R1为H，R2的定义如上所述；
所述方法包括如下步骤：
使结构式1所示的牛蒡子苷元与异氰酸酯R2-NCO发生加成反应生成通式(I’)所示的化合物。
具体而言，在惰性气体保护下，取结构式1所示的牛蒡子苷元溶于溶剂（例如，四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈等）中，再加入例如二异丙基乙二胺（DIPEA）等的碱，将该混合液加热至70±20℃，再加入R2-NCO，保温反应。反应结束后，冷却至室温，干燥纯化得到通式(I’)所示的化合物。
方法二：
其中，R1，R2的定义如上所述，
所述方法包括如下步骤：
1)使结构式1所示的牛蒡子苷元与氯甲酸对硝基苯酯发生酯化反应得到结构式2所示的化合物；
2)使结构式2所示的化合物与胺HNR1R2发生取代反应得到通式(I)所示的化合物。
具体而言，在惰性气体保护下，将结构式1所示的牛蒡子苷元溶于溶剂（例如，四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈等）中，再加入例如二异丙基乙二胺（DIPEA）等的碱和氯甲酸对硝基苯酯，将该混合液加热至70±20℃反应3~8h；再向该反应液中加入胺HNR1R2，在70±20℃继续反应8~20h；反应结束后，冷却至室温，洗涤、干燥并提纯得到通式(I)所示的化合物。
本发明的第三方面提供了包含治疗有效量的选自牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。所述药物组合物任选可以进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料和/或稀释剂。
本发明的第四方面提供了通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐，或者其包含其的组合物在制备用于治疗或预防与β-淀粉样肽形成相关的疾病或者改善记忆力的药物中的用途。所述与β-淀粉样肽形成相关的疾病包括，但不限于老年性痴呆症。
本发明的第五方面提供一种治疗与β-淀粉样肽形成相关的疾病或者改善记忆力的方法，所述方法包括向患者给予治疗有效量的选自通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种，或根据本发明的包含治疗有效量的选自通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种作为活性成分的药物组合物。
有益效果
本发明制备的牛蒡子苷元衍生物对Aβ生成具有抑制作用，动物试验表明，该类化合物具有改善记忆力之功效，可用于治疗老年性痴呆症。本发明化合物合成简单，易于制备，且合成原料丰富。
附图说明
图1显示不同浓度的化合物B-08和溶剂对照(DMSO)对CHO-APP&BACE1细胞培养液中Aβ的含量的影响，化合物溶解于DMSO，且加入培养液后DMSO浓度为0.1%；其中B-08-20表示浓度为20μM化合物B-08；B-08-10表示浓度为10μM化合物B-08；B-08-1表示浓度为1μM化合物B-08；DMSO表示溶剂对照组DMSO浓度为0.1%；(n=3,***p<0.001，与DMSO组对较)；
图2显示化合物B-08逆转转基因AD小鼠记忆力损伤的效果，不同剂量化合物组及T-V组实验小鼠为转基因AD小鼠，NT-V组实验小鼠为非转基因阴性对照小鼠；其中，B-08-90表示剂量90mg/kg/day的组；B-08-30表示剂量30mg/kg/day的组；B-08-10表示剂量10mg/kg/day的组；T-V表示转基因溶剂组（2%吐温80）；NT-V表示非转基因溶剂组（2%吐温80）；(n=10,*p<0.05，**p<0.01，与T-V组对较)；
图3显示不同剂量的化合物B-08逆转转基因AD小鼠记忆力损伤的效果，不同剂量化合物组及T-V组实验小鼠为转基因AD小鼠，NT-V组实验小鼠为非转基因阴性对照小鼠；其中，B-08-90表示剂量90mg/kg/day的组；B-08-30表示剂量30mg/kg/day的组；B-08-10表示剂量10mg/kg/day的组；T-V表示转基因溶剂组（2%吐温80）；NT-V表示非转基因溶剂组（2%吐温80）；（n=10,*p<0.05,**p<0.01,与T-V组对较）；
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明不局限于此。
下述制备例中，1H-NMR用Varian Mercury AMX300，400，500型仪器测定。MS用VG ZAB-HS或VG-7070型以及Esquire 3000plus-01005测定。所有溶剂在使用前均经过重新蒸馏，所使用的无水溶剂均是按标准方法干燥处理获得。除另有说明外，所有反应均是在氩气保护下进行并用TLC跟踪，后处理时均经饱和食盐水洗和无水硫酸镁干燥过程。产品的纯化除另有说明外均使用硅胶的柱色谱法，所使用的硅胶为200-300目，GF254为青岛海洋化工厂或烟台缘博硅胶公司生产。
本发明的牛蒡子苷元可依据文献【刘抗伦，牛蒡子的化学成分研究与抗肿瘤作用初步研究，广州中医药大学硕士学位论文，2008，16-21】制备得到。
实施例1：化合物A-01的制备
在氩气保护下，取牛蒡子苷元1（1mmol）溶于10mL无水四氢呋喃，再加入二异丙基乙二胺（DIPEA,1.5mmol），将该混合液加热至70℃，再加入乙基异氰酸酯(2mmol)，保温反应24h。反应结束后，冷却至室温，加入二氯甲烷20mL，有机相用水（20mL×2）洗涤两次，再用饱和食盐水（20mL）洗涤一次，用无水硫酸镁干燥、过滤。滤液在减压下除去溶剂，经柱层析（石油醚/丙酮=3:1），得到白色粉末状的化合物A-01，收率为74%。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ:7.00(d,J=8.0Hz,1H),6.80-6.71(m,2H),6.65(d,J=8.8Hz,1H),6.59-6.45(m,2H),5.03(s,1H),4.19-4.08(m,1H),3.89-3.92(m,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.78(s,3H),3.35-3.25(m,2H),2.97(d,J=5.7Hz,2H),2.69-2.45(m,4H),1.21(t,J=7.2Hz,3H);ESI-MS(m/z):444.3[M+H]+。
实施例2：化合物A-02的制备
在氩气保护下，取牛蒡子苷元(1mmol)溶于10mL无水四氢呋喃中，再加入二异丙基乙二胺（DIPEA,1.5mmol）和氯甲酸对硝基苯酯（1.5mmol）将该混合液加热至70℃反应6h。再向该反应液中加入正丙胺（2mmol），在70℃继续反应10h。反应结束后，冷却至室温，加入二氯甲烷20mL，有机相用水（20mL×2）洗涤两次，再用饱和食盐水（20mL）洗涤一次，用无水硫酸镁干燥、过滤。滤液在减压下除去溶剂，经柱层析（石油醚/丙酮=3:1），得到白色粉末状的化合物A-02，收率为80%。1H NMR (300MHz,CDCl3)δ:7.00(d,J=8.0Hz,1H),6.80-6.71(m,2H),6.65(d,J=8.0Hz,1H),6.58-6.48(m,2H),5.07(t,J=6.2Hz,1H),4.16(dd,J=9.1,6.8Hz,1H),3.90(d,J=8.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.22(q,J=6.7Hz,2H),2.96(d,J=5.7Hz,2H),2.75-2.41(m,4H),1.68-1.51(m,2H),0.97(t,J=7.4Hz,3H);ESI-MS(m/z)458.5[M+1]+。
实施例3：化合物A-03的制备
除了使用丁基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物A-03；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-03，收率为72%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6.99(d,J=8.0Hz,1H),6.80-6.71(m,2H),6.64(d,J=8.0Hz,1H),6.57-6.47(m,2H),5.04(s,1H),4.14(dd,J=15.8,8.0Hz,1H),3.93-3.85(m,2H),3.86-3.73(m,9H),3.25(q,J=6.7Hz,2H),2.96(d,J=5.7Hz,2H),2.70-2.46(m,4H),1.45-1.33(m,2H),0.94(t,J=7.2Hz,3H);ESI-MS(m/z):472.3[M+H]+。
实施例4：化合物A-04的制备
除了使用异丙胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物A-04；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-04，收率为68%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.05–6.96(m,1H),6.83-6.69(m,2H),6.64(dd,J=7.9,2.2Hz,1H),6.58-6.44(m,2H),4.92(d,J=7.4Hz,1H),4.16(dd,J=9.2,6.6Hz,1H),3.95-3.87(m,1H),3.87(s,3H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),2.96(d,J=5.7Hz,2H),2.74-2.39(m,4H),1.23(d,J=6.4Hz,6H);ESI-MS(m/z)458.5[M+1]+。
实施例5：化合物A-05的制备
除了使用异丁胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物A-05；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-05，收率为78%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.00(d,J=8.0Hz,1H),6.81-6.71(m,2H),6.65(d,J=8.1Hz,1H),6.56-6.48(m,2H),5.11(s,1H),4.16(t,J=7.9Hz,1H),3.90(d,J=8.1Hz,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.09(t,J=6.5Hz,2H),2.96(d,J=5.8Hz,2H),2.57(ddd,J=24.4,11.5,6.2Hz,3H),1.83(t,J=6.8Hz,1H),1.00-0.91(m,6H);ESI-MS(m/z)472.5[M+1]+。
实施例6：化合物A-06的制备
除了使用叔丁基胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物A-06；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-06，收率为69%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6.99(d,J=7.9Hz,1H),6.82-6.69(m,2H),6.64(d,J=8.1Hz,1H),6.58-6.45(m,2H),5.06(s,1H),4.22-4.14(m,1H),3.90(d,J=8.8Hz,1H),3.88-3.72(m,9H),2.96(d,J=5.5Hz,2H),2.73-2.44(m,4H),1.38(s,9H);ESI-MS(m/z):472.3[M+H]+。
实施例7：化合物A-07的制备
除了使用环己基胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物A-07；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-07，收率为62%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.00(d,J=8.0Hz,1H),6.80-6.70(m,2H),6.64(d,J=8.1Hz,1H),6.51(dd,J=11.1,4.9Hz,2H),4.96(d,J=8.1Hz,1H),4.14-4.16(m,1H),3.92-3.88(m,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.53(s,1H),2.96(d,J=5.7Hz,2H),2.68-2.45(m,4H),1.98(m,2H),1.73(m,2H),1.40-1.12(m,6H);13C NMR(75MHz,CDCl3)δ178.87,153.59,151.91,149.09,147.92,139.07,136.11,130.44,123.30,121.56,120.71,113.32,111.91,111.44,71.49,56.07,56.04,50.45,46.61,41.04,38.31,34.75,33.37,25.64,24.94;ESI-MS(m/z)：498.4[M+H]+。
实施例8：化合物A-08的制备
除了使用烯丙胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-08，收率为67%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.00(d,J=8.0Hz,1H),6.80-6.72(m,2H),6.65(dd,J=8.1,2.0Hz,1H),6.57-6.47(m,2H),5.89(d,J=16.7Hz,1H),5.35-5.09(m,3H),4.16(dd,J=9.1,6.8Hz,1H),3.94-3.87(m,2H),3.84(s,3H),3.81(s,3H),3.75(s,3H),2.97(d,J=5.8Hz,2H),2.58(m,4H);ESI-MS(m/z)456.5[M+1]+。
实施例9：化合物A-09的制备
除了使用丙腈胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物A-09；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物A-09，收率为79%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6.99(d,J=7.9Hz,1H),6.80-6.73(m,2H),6.65(dd,J=8.0,2.1Hz,1H),6.58-6.48(m,2H),4.16(dd,J=9.1,7.1Hz,1H),3.95-3.87(m,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.53(m,J=6.5Hz,2H),2.96(d,J=5.6Hz,2H),2.84-2.21(m,6H);ESI-MS(m/z)469.5[M+1]+。
实施例10：化合物B-01的制备
除了使用苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-01；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-01，收率为83%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.44(d,J=7.9Hz,2H),7.30(d,J=7.8Hz,2H),7.14-6.98(m,2H),6.84-6.74(m,2H),6.69(dd,J=8.2,2.0Hz,2H),6.59-6.45(m,1H),4.19(dd,J=9.1,6.9Hz,1H),3.91(dd,J=9.1,7.2Hz,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.82(d,J=2.3Hz,1H),3.79(s,3H),2.99(d,J=5.8Hz,2H),2.59-2.53(m,4H);ESI-MS(m/z)492.5[M+1]+。
实施例11：化合物B-02的制备
除了使用4-氟苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-02；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-02，收率为70%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.40(dd,J=8.6,4.7Hz,2H),7.04(dd,J=11.6,5.5Hz,2H),6.78(dd,J=4.7,3.0Hz,2H),6.68(d,J=8.1Hz,1H),6.60-6.44(m,3H),4.18(dd,J=9.0,7.0Hz,1H),3.90(t,J=9.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),2.98(d,J=5.7Hz,2H),2.62-2.58(m,4H);ESI-MS(m/z)510.5[M+1]+。
实施例12：化合物B-03的制备
除了使用4-氯苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-03；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-03，收率为81%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.44-7.36(m,2H),7.33-7.27(m,2H),7.04(d,J=8.4Hz,2H),6.86-6.42(m,4H),4.16(dd,J=14.3,7.8Hz,2H),3.90(t,J=8.2Hz,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),2.98(d,J=5.9Hz,2H),2.65-2.58(m,4H);ESI-MS(m/z)526.5[M+1]+。
实施例13：化合物B-04的制备
除了使用4-甲氧基苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-04；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-04，收率为75%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.35(d,J=8.5Hz,2H),7.06(d,J=8.0Hz,2H),6.98(d,J=8.9Hz,1H),6.92-6.83(m,2H),6.81-6.74(m,2H),6.68(dd,J=8.0,1.9Hz,1H),6.58-6.48(m,1H),4.18(dd,J=9.1,7.0Hz,2H),3.94-3.86(m,2H),3.85(s,3H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),2.98(d,J=5.8Hz,2H),2.60-2.56(m,4H);ESI-MS(m/z)522.5[M+1]+。
实施例14：化合物B-05的制备
除了使用4-三氟甲氧基苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-05；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-05，收率为83%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.47(d,J=8.5Hz,2H),7.19(d,J=8.4Hz,2H),7.05(d,J=8.3Hz,2H),6.78(dd,J=4.8,3.0Hz,1H),6.71-6.67(m,1H),6.59-6.49(m,2H),4.19(t,J=8.2Hz,1H),3.91(t,J=8.5Hz,1H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),2.99(d,J=5.8Hz,2H),2.65-2.54(m,4H);ESI-MS(m/z)576.5[M+1]+。
实施例15：化合物B-06的制备
除了使用3-甲氧基苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-06；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-06，收率为70%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.25-7.17(m,2H),7.12-7.00(m,2H),6.95-6.87(m,1H),6.81-6.75(m,2H),6.71-6.62(m,2H),6.59-6.49(m,1H),4.18(dd,J=9.1,7.0Hz,1H),3.90(dd,J=9.2,7.3Hz,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),2.98(d,J=5.8Hz,2H),2.60(dd,J=19.3,13.6Hz,2H),2.17(m,2H);ESI-MS(m/z)522.5[M+1]+。
实施例16：化合物B-07的制备
除了使用4-甲基苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-07；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-07，收率为78%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.32(d,J=7.9Hz,2H),7.13(d,J=7.8Hz,2H),7.06(d,J=8.1Hz,1H),6.85-6.72(m,2H),6.68(d,J=8.0Hz,1H),6.65-6.44(m,2H),4.18(t,J=8.0Hz,1H),3.91(d,J=8.1Hz,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.04-2.90(m,2H),2.59-2.53(m,4H),2.31(s,3H);ESI-MS(m/z)506.5[M+1]+。
实施例17：化合物B-08的制备
除了使用2-甲氧基苯基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物B-08；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物B-08，收率为70%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:8.10(d,J=8.4Hz,1H),7.12-6.85(m,6H),6.78(d,J=7.0Hz,2H),6.69(d,J=8.0Hz,1H),6.58-6.49(m,2H),4.22-4.14(m,1H),3.96-3.74(m,9H),2.99(d,J=5.8Hz,2H),2.71-2.47(m,4H);ESI-MS(m/z):522.3[M+H]+。
实施例18：化合物C-01的制备
除了使用苄基异氰酸酯代替乙基异氰酸酯之外，以与实施例1相同的方式制备化合物C-01；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物C-01，收率为70%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.40-7.35(m,5H),7.02(d,J=8.0Hz,1H),6.81-6.71(m,2H),6.71-6.61(m,1H),6.58-6.46(m,2H),5.39(t,J=6.2Hz,1H),4.45(d,J=5.9Hz,2H),4.16(t,J=8.1Hz,1H),3.95(s,3H),3.84(s,3H),3.75(s,3H),2.97(d,J=5.8Hz,2H),2.73-2.43(m,4H);ESI-MS(m/z)506.5[M+1]+。
实施例19：化合物C-02的制备
除了使用4-氯苄胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物C-02；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物C-02，收率为75%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.94-6.82(m,3H),6.80-6.73(m,2H),6.66(dd,J=7.8,1.9Hz,2H),6.59-6.48(m,2H),5.30(s,1H),4.38(d,J=5.8Hz,2H),4.16(dd,J=9.1,6.9Hz,1H),3.88(s,3H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),2.97(d,J=5.7Hz,2H),2.72-2.44(m,4H);ESI-MS(m/z)540.5[M+1]+。
实施例20：化合物C-03的制备
除了使用4-甲氧基苄胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物C-03；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物C-03，收率为74%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.01(d，J=7.9Hz,1H),6.93-6.82(m,2H),6.79-6.71(m,2H),6.65(dd,J=8.0,1.9Hz,1H),6.57-6.47(m,2H),4.37(d,J=5.8Hz,2H),4.30(d,J=5.6Hz,1H),4.20-4.08(m,1H),3.93-3.87(m,1H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.77(s,3H),3.75(s,3H),3.54-3.43(m,1H),2.96(d,J=5.8Hz,2H),2.74-2.43(m,2H),1.31-1.16(m,3H);ESI-MS(m/z)536.5[M+1]+。
实施例21：化合物C-04的制备
除了使用3,4-二甲氧基苄胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物C-04；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物C-04，收率为85%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.94-6.82(m,3H),6.80-6.73(m,2H),6.66(dd,J=7.8,1.9Hz,1H),6.59-6.48(m,2H),5.30(s,1H),4.38(d,J=5.8Hz,2H),4.16(dd,J=9.1,6.9Hz,1H),3.89(s,3H),3.88(s,3H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),2.97(d,J=5.7Hz,2H),2.72-2.44(m,4H);ESI-MS(m/z)566.5[M+1]+。
实施例22：化合物C-05的制备
除了使用苯乙胺代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物C-05；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物C-05，收率为65%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.38-7.30(m,2H),7.26-7.21(m,3H),6.98(d,J=8.0Hz,1H),6.80-6.72(m,2H),6.65(d,J=8.4Hz,1H),6.58-6.49(m,2H),5.08(s,1H),4.16(dd,J=9.1,6.7Hz,1H),3.90(d,J=8.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.78(s,3H),3.52-3.48(m,4H),2.97(d,J=5.7Hz,2H),2.89(t,J=6.9Hz,2H),2.56(t,J=9.6Hz,2H);ESI-MS(m/z)520.5[M+1]+。
实施例23：化合物D-01的制备
除了使用吲哚代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物D-01；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物D-01，收率为9%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:7.24-7.15(m,2H),7.09-6.96(m,2H),6.82-6.76(m,2H),6.70(dd,J=8.1,1.9Hz,1H),6.60-6.50(m,2H),4.29-4.14(m,2H),3.94-3.87(m,1H),3.85(s,3H),3.84(s,3H),3.77(s,3H),3.48(m,2H),3.21(m,2H),3.00-2.60(m,6H);ESI-MS(m/z)518.5[M+1]+。
实施例24：化合物D-02的制备
除了使用哌啶代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物D-02；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物D-02，收率为64%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6.98(dd,J=8.0,1.6Hz,1H),6.82-6.71(m,2H),6.66(dd,J=7.9,1.6Hz,1H),6.59-6.48(m,2H),4.18-4.10(m,1H),3.93-3.87(m,1H),3.87(s,3H),3.84(s,3H),3.77(s,3H),3.55(d,J=33.7Hz,5H),2.97(d,J=5.7Hz,2H),2.71-2.44(m,4H),1.69-1.55(m,5H);ESI-MS(m/z)484.5[M+1]+。
实施例25：化合物D-03的制备
除了使用吗啉代替正丙胺之外，以与实施例2相同的方式制备化合物D-03；硅胶柱层析洗脱液：石油醚\丙酮=3:1柱层析，得到白色粉末状的化合物D-03，收率为69%。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:6.99(d,J=7.9Hz,1H),6.82-6.73(m,2H),6.66(dd,J=7.9,2.0Hz,1H),6.61-6.49(m,2H),4.15(dd,J=9.0,6.5Hz,1H),3.93-3.87(m,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.78(s,3H),3.76-3.49(m,9H),2.72-2.44(m,5H);ESI-MS(m/z)486.5[M+1]+。
以上牛蒡子苷元衍生物的制备例作参考，其它的牛蒡子苷元衍生物也可以参照上述方法制得。
试验实施例
实验实施例1：细胞水平测试牛蒡子苷元衍生物对Aβ形成的抑制作用
本发明在高表达β-淀粉样蛋白前体蛋白（APP）和β-分泌酶（BACE1）的中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）上通过酶联免疫吸附实验（ELISA）测试了牛蒡子苷元碳酰胺衍生物对Aβ形成的抑制作用，得到的Aβ含量水平直接反映了其化合物活性水平。结果表明牛蒡子苷元碳酰胺衍生物对细胞内的Aβ均具有抑制作用。
1、实验原理
采用ELISA法检测细胞上清中Aβ含量，其原理是：细胞内形成的Aβ能够分泌至细胞培养液中，因此将培养液与偶联有Aβ抗体的白色透明96孔板孵育，然后加入Aβ的另一位点抗体同时进行孵育，通过抗原抗体特异性识别结合原理，将Aβ及其抗体同时特异性的吸附于96孔板上；然后用偶联了辣根过氧化物酶的二抗及其显色底物（Tetramethylbenzidine,TMB）孵育，生成的产物颜色深浅与Aβ含量成正比，分别测定标准管和样本管的吸光度值（OD450），计算Aβ的含量。
2、实验材料与方法
1）Aβ测定试剂盒购于invitrogen公司，细胞培养试剂均购于Gibico公司。
2）CHO-APP&BACE1（于CHO细胞中转入pcDNA3.1a-APP质粒，然后通过G418抗生素进行稳定株筛选，得到CHO-APP的稳定株；继续在CHO-APP细胞中转入pSecTag2-BACE1质粒，然后通过zeocin和G418两种抗生素进行稳定株筛选，得到CHO-APP&BACE1的稳定株）细胞培养：CHO-APP&BACE1用F12培养液（10%FBS）培养于24孔板中，于70%细胞密度时分别加入各种牛蒡子苷元衍生物（20μM）（参见表1）及不同浓度的化合物B-08（20，10，1，0μM）孵育24小时，取出培养液10,000离心10分钟，取上清，加入蛋白酶抑制剂（cocktail）,然后通过ELISA方法测定上清中Aβ含量。
3）将细胞上清用标准稀释液进行十倍稀释，然后按照试剂盒所提供方法进行检测。即在室温下将稀释后的上清、Aβ抗体和偶联Aβ另一种抗体的96孔板共同孵育3小时，然后用试剂盒中提供的漂洗液进行洗板4次，再加入偶联有辣根过氧化物酶的二抗室温下孵育30分钟，再用漂洗液洗板五次，然后加入显色液于室温孵育30分钟，最后加入反应中止液。以Bio-Rad酶标仪在450nm处读取OD值。
3、实验结果
结果如表1所示，牛蒡子苷元碳酰胺衍生物均有一定抑制Aβ形成的作用；
图1显示不同浓度的化合物B-08和溶剂对照(DMSO)对CHO-APP&BACE1细胞培养液中Aβ的含量的影响，化合物溶解于DMSO，且加入培养液后DMSO浓度为0.1%(V/V)；其中B-08-20表示浓度为20μM化合物B-08；B-08-10表示浓度为10μM化合物B-08；B-08-1表示浓度为1μM化合物B-08；DMSO表示溶剂对照组DMSO浓度为0.1%(V/V)；图1结果显示，化合物B-08能够浓度梯度依赖性减少细胞内的Aβ含量。
表1、牛蒡子苷元及其衍生物对Aβ形成的抑制活性
| 化合物 | 抑制率（20μM） | 化合物 | 抑制率（20μM） |
| DMSO | 0 | B-04 | 43.67% |
| 牛蒡子苷元 | 34.84% | B-05 | 38.14% |
| A-01 | 65.75% | B-06 | 44.00% |
| A-02 | 37.53% | B-07 | 34.10% |
| A-03 | 82.35% | B-08 | 82.35% |
| A-04 | 39.09% | C-01 | 49.92% |
| A-05 | 35.56% | C-02 | 57.35% |
| A-06 | 63.71% | C-03 | 43.34% |
| A-07 | 72.71% | C-04 | 38.84% |
| A-08 | 40.05% | C-05 | 55.66% |
| A-09 | 38.57% | D-01 | 51.92% |
| B-01 | 39.97% | D-02 | 41.25% |
| B-02 | 35.33% | D-03 | 43.72% |
| B-03 | 39.98% |
试验实施例2：化合物B-08逆转老年性痴呆转基因模型小鼠记忆力损伤的作用
本发明通过灌胃给药给予APP/PS1双转基因老年性痴呆模型小鼠化合物B-08，然后通过水迷宫实验测定化合物B-08对转基因小鼠记忆力损伤改善作用。结果表明化合物B-08能够明显逆转老年性痴呆模型小鼠的记忆力损伤。
1、实验原理
本实验采用的为APP/PS1双转基因老年性痴呆模型小鼠（B6C3转基因小鼠，APPswe，PS1dE9）。这类转基因小鼠能高表达嵌和鼠/人的瑞典突变APP（Mo/HuAPP695swe）和人源删除第9个外显子的早老素1蛋白（presenilin，PS1-dE9）。这两个基因突变都被认为是导致家族性老年痴呆的主要致病因素，因而这类转基因小鼠会在6-7个月的时候出现Aβ沉积并且会在7个月的时候出现空间记忆力的损害。
Morris水迷宫实验（Morris Water Maze,MWM）仪器为一个直径为1.5米，深60厘米的圆形水池。在水池中注入白色浑浊的色素，并保持水温为23℃，同时将一个宽度为直径10厘米的圆形平台置于水面下1.5厘米。在训练实验中，圆形平台则置于第四象限中,在水池的四周放置一些可见的标志来帮助小鼠记忆平台所在位置。小鼠每天进行训练，在训练中我们分别将小鼠面向池壁置于水中，然后给小鼠90秒钟时间去寻找平台位置，小鼠在平台上停留20秒钟时间以帮助它记忆平台位置，持续五天的时间。在此期间，小鼠找到平台的时间称为潜伏期，为小鼠记忆力的一个评价指标，时间越短表明其记忆力越好。在第六天，在训练之后，小鼠会进行平台寻找实验。在这次实验中，潜于水面下的平台被撤除，然后让小鼠在水池中持续90秒钟去寻找平台，记录小鼠穿越平台次数作为其记忆力的评价指标，次数越多表明其记忆力越好。
2、实验材料与方法
1）APP/PS1双转基因老年性痴呆模型小鼠购买于美国的JacksonLaboratory公司，然后繁殖。对子代的小鼠的转基因型的鉴定，通过采用对小鼠剪尾，然后PCR鉴定小鼠的APP/PS1的基因序列。在实验中采用鉴定后没有转入这两个基因的小鼠作为实验中的阴性对照小鼠。小鼠在标准条件下饲养（12/12小时明暗循环，足够水和食物，22℃的恒温，60%的湿度）。
2）老年性痴呆模型小鼠给药：在小鼠6月大小时，40只转基因小鼠被随机分为4组（T-V：转基因溶剂组；B-08-90：转基因B-0890mg/kg剂量组；B-08-30：转基因B-0830mg/kg剂量组；B-08-10：转基因B-0810mg/kg剂量组），10只非转基因小鼠作为阴性对照组（NT-V）。化合物B-08分别以1.8mg/ml，0.6mg/ml，0.2mg/ml浓度溶解于百分之二的吐温80的生理盐水溶液中,以0.1ml/20g给予灌胃给药100天，然后开始行为学实验检测（Morris水迷宫实验）。
3）小鼠每天进行三次训练，持续五天的时间。在三次训练中我们分别将小鼠面向池壁于三个除平台所在的象限中置于水中，然后给小鼠90秒钟时间去寻找平台位置，小鼠在平台上停留20秒钟时间以帮助它记忆平台位置。在此期间，记录小鼠找到平台的时间即潜伏期。在第六天，在三次训练之后，小鼠会进行平台寻找实验。在这次实验中，潜于水面下的平台被撤除，然后让小鼠在水池中持续90秒钟去寻找平台，记录小鼠穿越平台次数作为其记忆力的评价指标，次数越多表明其记忆力越好。所有的动物实验操作都严格遵守《实验动物管理条例》。
3、实验结果
图2显示化合物B-08逆转转基因AD小鼠记忆力损伤的效果，其中，B-08-90表示剂量90mg/kg/day的组；B-08-30表示剂量30mg/kg/day的组；B-08-10表示剂量10mg/kg/day的组；T-V表示转基因小鼠溶剂组（2%吐温80的生理盐水溶液）；NT-V表示非转基因小鼠溶剂组（2%吐温80的生理盐水溶液）；
Morris水迷宫实验训练实验中潜伏期的测定显示转基因AD模型小鼠潜伏期明显长于非转基因正常小鼠，化合物B-08以剂量90mg/kg/day，30mg/kg/day，10mg/kg/day给药100天后的转基因AD模型小鼠潜伏期明显低于溶剂处理转基因小鼠；结果表明转基因AD模型小鼠记忆力出现损伤，而化合物B-08能够明显改善转基因小鼠的记忆力损伤。
图3显示不同剂量的化合物B-08逆转转基因AD小鼠记忆力损伤的效果，其中，B-08-90表示剂量90mg/kg/day的组；B-08-30表示剂量30mg/kg/day的组；B-08-10表示剂量10mg/kg/day的组；T-V表示T-V表示转基因小鼠溶剂组（2%吐温80的生理盐水溶液）；NT-V表示非转基因小鼠溶剂组（2%吐温80的生理盐水溶液）；
Morris水迷宫实验，撤台试验中的穿越平台次数试验显示，转基因AD模型小鼠穿越平台所在位置次数明显少于非转基因正常小鼠，化合物B-08以90mg/kg/day，30mg/kg/day，10mg/kg/day给药100天后的转基因AD模型小鼠穿越平台所在位置次数明显多于溶剂组转基因老年性痴呆模型小鼠；实验结果进一步说明，化合物B-08能够明显改善转基因小鼠的记忆力损伤，从而起到很好治疗老年性痴呆病的效果。
Claims (10)
1.一种下面通式(I)所示的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，或其药物学上可接受的盐：
其中：
R1和R2相同或不同，并且各自独立地为H、C1-C6烷基、C2-C6链烯基、氰基C1-C6烷基、C3-C7环烷基、取代或未取代的C6～C14芳基、在芳环上取代或未取代的C6～C14芳基C1-C4烷基或5-7元杂芳基；
所述取代的芳基上的取代基为选自卤素、C1-C6烷基、氰基、氨基、羟基、C1-C4烷氧基、卤代C1-C4烷氧基中的1-3个取代基；
或者，R1和R2与和它们连接的氮原子一起形成5-12元饱和或不饱和杂环基。
2.根据权利要求1所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，或其药物学上可接受的盐，
其中，R1和R2相同或不同，并且各自独立地为H、C2-C4烷基、C2-C4链烯基、C5-C6环烷基、取代或未取代的苯基、氰基C1-C4烷基、在苯环上取代或未取代的苯基C1-C4烷基或吡啶基；
所述取代的苯基上的取代基为选自卤素、C1-C4烷基、氰基、氨基、羟基、C1-C4烷氧基、和卤代C1-C4烷氧基中的1-3个取代基；
或者，R1和R2与和它们连接的氮原子一起形成5-10元饱和杂环基、吲哚-1-基、异吲唑-1-基、吲唑-1-基、苯并咪唑-1-基或三唑并吡嗪基。
3.根据权利要求2所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，或其药物学上可接受的盐，
其中，R1和R2相同或不同，并且各自独立地为H、乙基、丙基、异丙基、异丁基、环己基、烯丙基、2-氰基乙基、苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-甲氧基苯基、4-三氟甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、苄基、4-氯苄基、4-甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基或苯乙基；
或者，R1和R2与和它们连接的氮原子一起形成吲哚-1-基、异吲唑-1-基、吲唑-1-基、苯并咪唑-1-基、2H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡嗪-2-基、哌啶-1-基或吗啉-1-基。
4.根据权利要求1所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，或其药物学上可接受的盐，其中，R1和R2之一为氢。
5.根据权利要求1所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物，或其药物学上可接受的盐，其中，所述牛蒡子苷元碳酰胺衍生物为R1和R2分别为如下基团的化合物：
6.一种根据权利要求1所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物的制备方法，所述方法为以下方法之一：
方法一：
方法一包括如下步骤：
使结构式1所示的牛蒡子苷元与异氰酸酯R2-NCO发生加成反应生成通式I’所示的化合物；
其中，R2的定义与权利要求1中的相同；
方法二：
所述方法包括如下步骤：
1)使结构式1所示的牛蒡子苷元与氯甲酸对硝基苯酯发生酯化反应得到结构式2所示的化合物；
2)使结构式2所示的化合物与胺HNR1R2发生取代反应得到通式(I)所示的化合物，
其中，R1，R2的定义与权利要求1中的定义相同。
7.一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据权利要求1-5中任一项所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐中的一种或多种化合物作为活性成分和任选的药学上可接受的辅料。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中，所述辅料为载体、赋形剂和/或佐剂。
9.根据权利要求1-5中任一项所述的牛蒡子苷元碳酰胺衍生物或其药学上可接受的盐，或者根据权利要求7的药物组合物在制备用于治疗与β-淀粉样肽形成相关的疾病的药物或者改善记忆力的产品中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述与β-淀粉样肽形成相关的疾病为老年性痴呆症。
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