CN103459401A - 稠合的氨基二氢噻嗪衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的稠合的氨基二氢噻嗪衍生物及其可药用盐，其中X是氢或氟；R是一氟甲基或二氟甲基；所述化合物具有Aβ生成抑制作用或BACE1抑制作用，且可用作由Aβ引起的且以阿尔茨海默型痴呆为代表的神经变性疾病的预防或治疗剂。

Description

稠合的氨基二氢噻嗪衍生物
本发明涉及稠合的氨基二氢噻嗪衍生物及其药物应用。更具体而言，本发明涉及稠合的氨基二氢噻嗪衍生物，其具有淀粉样蛋白-β(下文称作Aβ)蛋白产生抑制作用或β-位点淀粉样蛋白-β前体蛋白裂解酶1(下文称作BACE1或β-分泌酶)抑制作用并且有效治疗Aβ蛋白导致的神经变性疾病，特别是阿尔茨海默型痴呆、唐氏综合征等；且本发明涉及包含所述稠合的氨基二氢噻嗪衍生物作为活性成分的药物组合物。
阿尔茨海默病是以神经元变性和损失以及老年斑和神经原纤维缠结形成为特征的疾病。目前，仅阿尔茨海默病的症状被以乙酰胆碱酯酶抑制剂为代表的症状改善剂来治疗，还没有开发出抑制该疾病发展的基础治疗法。为了产生用于阿尔茨海默病的基础治疗法，需要研制控制发病原因的方法。
认为作为淀粉样蛋白前体蛋白(下文称为APP)的分解产物的Aβ-蛋白高度参与神经元的变性和损失以及痴呆症状的发作。Aβ-蛋白具有作为主要成分的由40个氨基酸组成的Aβ40及在C-末端增加了两个氨基酸的Aβ42。已知Aβ40和Aβ42非常容易聚集，并且是老年斑的主要组分。此外，还已知APP和早老素基因中的突变可增加Aβ40和Aβ42，这在家族性阿尔茨海默病中观察到。因此，减少Aβ40和Aβ42生成的化合物预期是阿尔茨海默病的疾病进程抑制剂或预防剂。
Aβ通过由β-分泌酶(BACE1)和随后由γ-分泌酶裂解APP而生成。出于该原因，为了抑制Aβ生成，已经作出努力来得到γ-分泌酶和β-分泌酶抑制剂。
公开的国际专利申请WO2011/005738(Eli Lilly and Company)描述了式(A)化合物和它们作为BACE抑制剂的应用:
Figure BDA00003544663600021
其中R1、R2、R3、X、m、n和p如该文所定义。
公开的国际专利申请WO2009/091016(EisaiR&DManagementCo.，Ltd.)中已经公开了式(B)的稠合的氨基二氢噻嗪化合物:
Figure BDA00003544663600022
其中环A表示C6-14芳基等;L表示-NReCO-[其中Re表示氢原子等]等;环B表示C6-14芳基等;X表示C1-3亚烷基等;Y表示单键等;Z表示C1-3亚烷基等；R1和R2独立地表示氢原子等；且R3、R4、R5和R6独立地表示氢原子、卤素原子等。
公开的国际专利申请WO2010/038686(Eisai R&D Management Co.、Ltd.)已经公开了另外的式(C)的稠合的氨基二氢噻嗪化合物:
Figure BDA00003544663600023
其中环A表示C6-14芳基等;L表示-NReCO-[其中Re表示氢原子等]等;环B表示C6-14芳基等;X表示C1-3亚烷基等;Y表示单键等;Z表示氧原子等；R1和R2各自独立地表示氢原子等；且R3、R4、R5和R6各自独立地表示氢原子、卤素原子等。
本发明代表了基于WO2009/091016所公开的一类化合物的选择。
本发明的目的是提供具有Aβ生成抑制作用或BACE1抑制作用的且可用作由Aβ引起的且以阿尔茨海默型痴呆为代表的神经变性疾病的预防或治疗剂的更多的化合物，所述化合物为稠合的氨基二氢噻嗪衍生物。
因此，本发明提供了式(I)化合物及其可药用盐:
Figure BDA00003544663600031
其中
X是氢或氟;
R是一氟甲基或二氟甲基。
在本发明的一个实施方案中，X是氢。
在本发明的另一个实施方案中，R是一氟甲基。
本发明具体的化合物为:
N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺:
Figure BDA00003544663600032
N-(3-((4aS，5S，7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a，5，7，7a-四氢-4H-呋喃并[3，4-d][1，3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺:
Figure BDA00003544663600041
N-(3-((4aS，5S，7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a，5，7，7a-四氢-4H-呋喃并[3，4-d][1，3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺:
Figure BDA00003544663600042
N-(3-((4aS，5S，7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a，5，7，7a-四氢-4H-呋喃并[3，4-d][1，3]噻嗪-7a-基)-4，5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺:
Figure BDA00003544663600043
及其可药用盐。
在一个实施方案中，本发明提供了化合物，该化合物是N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺或其可药用盐。
在一个实施方案中，本发明提供了化合物，该化合物是N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺或其可药用盐。
式(I)化合物不限于特定的异构体，且包括所有可能的异构体(诸如酮-烯醇异构体、亚胺-烯胺异构体、非对映异构体和旋转异构体)及其混合物。例如，式(I)化合物包括以下的互变异构体:
Figure BDA00003544663600051
本发明的化合物包含位于式（I）中四氢呋喃并-噻嗪基环的三个手性中心。这些手性中心中的每一个的立体化学构型优选为S，即它们是(4aS,5S,7aS)立体异构体。为免产生疑问，本发明的(4aS,5S,7aS)立体异构体可以以与一种或多种其他可能的立体异构体的混合物存在，例如以外消旋混合物存在。
在一个实施方案中，本发明提供了式(I)化合物，其在(4aS,5S,7aS)手性中心是立体化学纯的。在本说明书的范围内，术语立体化学纯是指具有80%或更高的重量的(4aS,5S,7aS)立体异构体和20%或更低重量的其他立体异构体的化合物。在另一个实施方案中，式(I)化合物具有90%或或更高的重量的(4aS,5S,7aS)立体异构体和10%或更低重量的其他立体异构体。在又一个实施方案中，式(I)化合物具有95%或更高的重量的(4aS,5S,7aS)立体异构体和5%或更低重量的其他立体异构体。在又一个实施方案中，式(I)化合物具有97%或更高的重量的(4aS,5S,7aS)立体异构体和3%或更低重量的其他立体异构体。
在本说明书中，尽管化合物的多晶型物可以存在，但是化合物同样不限于此且可以作为单一晶形或单一晶形的混合物存在。化合物可以是无水物或水合物。任意这些形式均包括在本说明书的权利要求中。
本发明还包含同位素标记的化合物，其除了一个或多个原子被具有原子质量或质量数不同于自然界通常发现的原子质量或质量数的原子所代替外，与式(I)化合物相同。可以引入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟、磷、氯、锝、和碘的同位素，例如2H、3H、11C、14C、13N、15O、18F、32P、99mTc、123I和131I。
包含前述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物及所述化合物的可药用衍生物(例如盐)属于本发明范围之内。同位素标记的本发明化合物，例如那些引入放射性同位素例如3H和/或14C的化合物可用于药物和/或底物组织分布试验。认为3H和14C有用是由于它们易于制备和检测。11C、15O和18F同位素被认为可用于PET(正电子成像术)中，且99mTc、123I和131I同位素被认为可用于SPECT(单光子放射计算机断层显象术)中，其均可用于脑成像中。由于较强的代谢稳定性，用重同位素例如2H代替可以提供某些治疗优势，例如延长的体内半衰期或者减少的剂量需求，并且因此被认为在某些情况下有用。通常可以通过用容易获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂，实施下文流程中和/或实施例中公开的方法来制备本发明中同位素标记的式(I)化合物。
本发明的式(I)的稠合的氨基二氢噻嗪衍生物可以是可药用盐。可药用盐包括Berge、Bighley和Monkhouse,J.Pharm.Sci.、1977、766、1-19所描述的那些。可药用盐的实例包括无机酸盐(例如硫酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、氢氟酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐和氢碘酸盐)、有机羧酸盐(例如乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐和乳酸盐)、有机磺酸盐(例如甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐和樟脑磺酸盐)、氨基酸盐(例如天冬氨酸盐和谷氨酸盐)、季铵盐、碱金属盐(例如钠盐和钾盐)和碱土金属盐(例如镁盐和钙盐)。
如果必要，可以通过常规方法将本发明的式(I)化合物转化成可药用盐。可以通过适当合并有机合成化学等领域典型使用的方法的方法制备所述的盐。方法的具体实例包括用酸溶液中和滴定本发明化合物的游离溶液。
本发明的式(I)的稠合的氨基二氢噻嗪衍生物或其可药用盐可以是其溶剂化物。溶剂化物的实例包括水合物。
如果必要，可以通过使化合物进行自身公知的溶剂化形成反应将本发明式(I)的化合物转化成溶剂化物。
本发明还提供了用于治疗法的式(I)化合物或其可药用盐。
本发明的稠合的氨基二氢噻嗪衍生物或其可药用盐具有极佳的Aβ产生抑制作用或BACE1抑制作用，且可用作Aβ导致的和以阿尔茨海默型痴呆为代表的神经变性疾病的预防或治疗剂。本发明化合物减少Aβ40和Aβ42二者。此外，本发明化合物可具有BACE2抑制作用。
因此，在另一个方面，本发明提供了如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐，其用于抑制淀粉样-β蛋白的产生。
在进一步的方面，本发明提供了如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐，其用于抑制β-位点淀粉样蛋白-β前体蛋白裂解酶1(BACE1)。
在进一步的方面，本发明提供了用于治疗神经变性疾病的如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐。神经变性疾病的实例包括阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA，cerebrovascular amyloidangiopathy)、轻度认知功能损害(MCI，mild cognitive impairment)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆(dementias of mixedvascular and degenerative origin)、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆(dementia associated with diffuse Lewy Body type of AD)。在一个实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆(AD)。
在另一个方面，本发明提供了如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防神经变性疾病，诸如阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA)、轻度认知功能损害(MCI)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆。在一个实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆或唐氏综合征。在另一个实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆(AD)。
在另一个方面，本发明提供了如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防神经变性疾病，诸如阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA)、轻度认知功能损害(MCI)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆。在一个实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆(AD)。
在另一个方面，本发明提供了抑制淀粉样-β蛋白的产生和/或治疗或预防以下疾病的方法：神经变性疾病、诸如阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA)、轻度认知功能损害(MCI)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆，所述方法包括向罹患所述病症的人类个体施用治疗或预防有效量的式(I)化合物或其可药用盐。神经变性疾病的实例包括上文列出的那些。在一个实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆(AD)。“有效量”意指足以引起对个体的益处或至少引起个体病症的变化的量。
可通过本发明化合物治疗的另外的病症包括2型糖尿病、克雅病(CJD)、周围神经损伤、周围神经病变、进行性核上麻痹、卒中、肌萎缩侧索硬化(ALS)、自身免疫性疾病、炎症、动脉血栓形成、焦虑症、精神病性精神障碍、癫痫、疾病的发作(seizures)、惊厥、应激障碍(stressdisorders)、血管淀粉样变性、疼痛、格-施-沙综合征、瘙痒病、脑病、脊髓小脑性共济失调、肝豆状核变性、格雷夫斯病、亨廷顿病、惠普尔病、Kostmann病、青光眼、遗传性脑出血伴淀粉样变性、脑出血伴淀粉样变、血管淀粉样变性、脑炎症、脆性X染色体综合征、卒中、图雷特综合征、包涵体肌炎、应激障碍、抑郁、双相性精神障碍和强迫症。
在本发明的一个方面还提供了用于治疗2型糖尿病的如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐。在本发明的进一步的方面还提供了如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防2型糖尿病。在本发明的又一个方面还提供了抑制淀粉样-β蛋白的产生和/或治疗或预防2型糖尿病的方法，所述方法包括向罹患所述病症的人类个体施用治疗或预防有效量的式(I)化合物或其可药用盐。
本发明的进一步的方面提供了药物组合物，其包含作为活性成份的如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐以及可药用载体。所述组合物可以是任何适合的形式，这取决于预期的施用方法。例如其可为用于口服施用的片剂、胶囊剂或液体形式，或者用于胃肠外施用的溶液剂或混悬剂。
可以通过常规方法配制本发明稠合的氨基二氢噻嗪衍生物或其可药用盐。剂型的优选实例包括片剂、包衣片例如薄膜衣片和糖衣片、细颗粒、颗粒剂、散剂、胶囊剂、糖浆剂、锭剂、吸入剂、栓剂、注射剂、软膏剂、滴眼液、滴鼻剂、滴耳剂、泥敷剂和洗剂。
这些固体制剂例如片剂、胶囊剂、颗粒剂和散剂一般可以包含0.01-100wt%、优选0.1-100wt%的作为活性成分的本发明稠合的氨基二氢噻嗪衍生物或其可药用盐。
例如，可以通过使用常规方法掺合一般用作药物制剂材料的成分并且添加典型使用的赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、着色剂和矫味剂并且添加稳定剂、乳化剂、吸收促进剂、表面活性剂、pH调节剂、防腐剂和抗氧化剂(如果必要)来配制活性成分。所述成分的实例包括动物和植物油，例如大豆油、牛油和合成甘油酯；烃类例如液体石蜡、角鲨烷和固体石蜡；酯油例如肉豆蔻酸辛基十二烷基酯和肉豆蔻酸异丙酯；高级醇类例如十八醇十六醇混合物和山萮醇；硅酮树脂；硅油；表面活性剂例如聚氧乙烯脂肪酸酯、失水山梨醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油和聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物；水溶性聚合物例如羟乙基纤维素、聚丙烯酸、羧乙烯基聚合物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和甲基纤维素；低级醇类例如乙醇和异丙醇；多元醇类例如甘油、丙二醇、二丙烯醇和山梨醇；糖类例如葡萄糖和蔗糖；无机粉末例如硅酸酐、硅酸镁铝和硅酸铝；和纯水。所用赋形剂的实例包括乳糖、玉米淀粉、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、山梨醇、结晶纤维素和二氧化硅。所用粘合剂的实例包括聚乙烯醇、聚乙烯基醚、甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、虫胶、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇-聚氧乙烯嵌段共聚物和葡甲胺。所用崩解剂的实例包括淀粉、琼脂、明胶粉、结晶纤维素、碳酸钙、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精、果胶和羧甲基纤维素钙。所用润滑剂的实例包括硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇、二氧化硅和氢化植物油。所用着色剂的实例包括允许加入到药物中的那些着色剂。所用矫味剂的实例包括可可粉、薄荷醇、empasm、薄荷油、冰片和桂皮粉。显然，所述成分并不限于上述添加成分。
例如，通过常规方法添加作为活性成分的本发明稠合的氨基二氢噻嗪衍生物或其可药用盐、赋形剂和(如果必要)粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味剂等、然后使该混合物形成散剂、细颗粒、颗粒剂、片剂、包衣片、胶囊剂等，来制备口服制剂。显然，如果必要，可以对片剂或颗粒适当包衣，例如包糖衣。
例如，可以通过常规方法添加pH调节剂、增溶剂、等渗剂等和增溶剂、稳定剂等(如果必要)来制备糖浆剂或注射剂。注射剂可以是预先制备的溶液或可以是粉末自身或在使用前溶解的包含适宜添加剂的粉末。注射剂通常可以包含0.01-100wt%、优选0.1-100wt%的活性成分。此外，用于口服施用的液体制剂例如混悬液或糖浆剂通常可以包含0.01-100wt%、优选0.1-100wt%的活性成分。
例如，可以通过任意常规方法制备外用制剂，而没有特别限制。作为基质材料，可以使用常用于药物、准标准药物(quasi drug)、化妆品等的任意各种材料。基质材料的实例包括这样的材料例如动物和植物油、矿物油、酯油、蜡、高级醇类、脂肪酸、硅油、表面活性剂、磷脂类、醇类、多元醇类、水溶性聚合物、粘土矿物和纯水。如果必要，可以加入pH调节剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂和杀真菌剂、着色剂、矫味剂等。此外，如果必要，可以掺入这样的成分，例如具有分化诱导作用的成分、血流促进剂、杀菌剂、消炎剂、细胞激活物、维生素、氨基酸、保湿剂和角质层分离剂。
本发明稠合的氨基二氢噻嗪衍生物或其可药用盐的剂量根据例如症状程度、年龄、性别、体重、施用方式、盐类型和疾病具体类型的不同改变。通常而言，活性成分以约30μg-10g、优选100μg-5g且更优选100μg-1g/天口服施用于成人或通过注射以约30μg-1g、优选100μg-500mg且更优选100μg-300mg/天施用于成人，分别以一次剂量或分几次剂量施用。
式(I)化合物可用于与其他治疗剂组合，例如主张可用作神经变性疾病、诸如阿尔茨海默病的疾病缓解治疗或对症治疗的药物。因此，在进一步的方面，本发明提供了药物产品，其包含作为第一种活性成份的式(I)化合物或其可药用盐与至少一种可用于治疗神经变性疾病的另外的活性成份的组合。在本发明的一个实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默型痴呆(AD)。所述另外的活性成分的适合的实例可以是对症活性剂，例如已知改变胆碱能传导的那些，诸如M1和M3毒蕈碱受体激动剂或别构调节剂、M2毒蕈碱受体拮抗剂、M4激动剂或正向别构调节剂(PAMs)、乙酰胆碱酯酶抑制剂(诸如四氢氨基吖啶、盐酸多奈哌齐和雷司替明)、烟碱性受体激动剂或别构调节剂(诸如α7激动剂或别构调节剂或α4β2激动剂或别构调节剂)、PPAR激动剂(诸如PPARγ激动剂)、5-HT4受体激动剂或部分激动剂、组胺H3拮抗剂、5-HT6受体拮抗剂或5HT1A受体配体和NMDA受体拮抗剂或调节剂、5-HT2A拮抗剂、5-HT7拮抗剂、D1激动剂或PAMs、D4激动剂或PAMs、D5激动剂或PAMs、GABA-Aα5反相激动剂或负向别构调节剂(NAMs)、GABA-Aα2/3激动剂或PAMs、mGluR2调节剂(PAMs或NAMs)、mGluR3PAMs、mGluR5PAMs、PDE1抑制剂、PDE2抑制剂、PDE4抑制剂、PDE5抑制剂、PDE9抑制剂、PDE10抑制剂、GlyT1抑制剂、DAAO抑制剂、ASC1抑制剂、AMPA调节剂、SIRT1激活剂或抑制剂、AT4拮抗剂、GalR1拮抗剂、GalR3配体、腺苷A1拮抗剂、腺苷A2a拮抗剂、α2A拮抗剂或激动剂、选择性和非选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRIs)，或潜在的疾病缓解剂，诸如γ分泌酶抑制剂或调节剂、α分泌酶激活剂或调节剂、淀粉样蛋白聚集抑制剂、淀粉样蛋白抗体、tau聚集抑制剂或tau磷酸化/激酶抑制剂、tau脱磷酸/磷酸酶激活剂、促分裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4/MEK4/MAP2K4)抑制剂、c-Jun N-末端激酶(JNK)抑制剂、酪蛋白激酶抑制剂、MK2(促分裂原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶2)抑制剂、MARK(微管亲和调节激酶)抑制剂、CDK5(周期蛋白依赖激酶5)抑制剂、GSK-3(糖原合酶激酶-3)抑制剂和tau-微管蛋白激酶-1(TTBK1)抑制剂。所述的其他治疗剂的进一步的实例可以是钙通道阻滞剂、HMG-CoA(3-羟基-3-甲基-戊二酰-CoA)还原酶抑制剂(他汀类药物)和降脂剂、NGF(神经生长因子)拟似物、抗氧化剂、GPR3配体、纤溶酶激活剂、中性溶酶(NEP)激活剂、IDE(胰岛素降解酶)激活剂、褪黑激素MT1和/或MT2激动剂、TLX/NR2E1(无尾X受体(tailless X receptor))配体、GluR1配体、RAGE(晚期糖基化终产物受体)拮抗剂、EGFR(表皮生长因子受体)抑制剂、FPRL-1(甲酰肽样受体-1)配体、GABA拮抗剂、以及MICAL(与casL相互作用的分子)抑制剂、例如氧化还原酶(oxoreductase)抑制剂、CB1拮抗剂/反相激动剂、非甾体抗炎药(NSAIDs)、抗炎剂(例如通过增强或减少神经炎症可以用于治疗神经炎症的活性剂)、淀粉样蛋白前体蛋白(APP)配体、抗-淀粉样蛋白疫苗和/或抗体、促进或增强淀粉样蛋白外排和/或清除的活性剂、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、EP2拮抗剂、11-βHSD1(羟类固醇脱氢酶)抑制剂、肝X受体(LXR)激动剂或PAMs、脂蛋白受体相关蛋白(LRP)拟似物和/或配体和/或增强剂和/或抑制剂、丁酰胆碱酯酶抑制剂、犬尿烯酸拮抗剂和/或犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)的抑制剂、FQ孤啡肽/痛敏肽(NOP)/阿片样受体1(ORL1)拮抗剂、兴奋性氨基酸转运蛋白(EAAT)配体(激活剂或抑制剂)、以及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)抑制剂、烟酸和/或GPR109激动剂或PAMs与降胆固醇剂和/或HMGCoA还原酶抑制剂(他汀类药物)的组合、dimebolin或类似的活性剂、抗阻胺剂、金属结合/螯合剂、抗生素、生长激素促分泌剂、降胆固醇剂、维生素E、胆固醇吸收抑制剂、胆固醇外排促进剂(cholesterol efflux promoters)和/或激活剂和胰岛素增量调节剂(insulin upregulating agents)。
在一个实施方案中，本发明提供了药物产品，其包含作为第一种活性成份的式(I)化合物或其可药用盐与至少一种选自以下的另外的活性成份的组合:-
·胆碱酯酶抑制剂，例如多奈哌齐、加兰他敏、雷司替明、四氢氨基吖啶及其可药用盐，
·5-HT6拮抗剂，例如SB-742457及其可药用盐，
·HMGCoA还原酶抑制剂，例如洛伐他汀、罗苏伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀及其可药用盐。
所述组合的各单个组分可以以分开的或组合的药物制剂依次或同时施用。因此，所述药物产品可例如为包含混合的第一个和另外的活性成份的药物组合物。或者，药物产品可例如在分开的各药物制剂中包含第一个和另外的活性成份，所述分开的各药物制剂适于向有需要的患者同时、依次或分开施用。
可方便地提供上文提及的组合(产品)以用于药物制剂形式，且因此包含如上文所定义的组合以及可药用载体或赋形剂的药物制剂构成本发明的进一步的方面。
当式(I)化合物或其可药用盐与第二种治疗活性剂组合使用时，各个化合物的剂量可与当该化合物单独使用时不同。本领域技术人员会容易地理解适合的剂量。
因此，本发明的另外的方面提供了制备药物组合物的方法，其包括将至少一种如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐与一种或多种可药用辅助剂、稀释剂或载体和/或与一种或多种其他治疗或预防活性剂混合。
在一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，其包含式(I)化合物、一种或多种用于治疗阿尔茨海默病的其他活性剂、诸如对症活性剂、例如已知改变胆碱能传导的那些、诸如M1和M3毒蕈碱受体激动剂或别构调节剂、M2毒蕈碱拮抗剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂(诸如四氢氨基吖啶、盐酸多奈哌齐和雷司替明)、烟碱性受体激动剂或别构调节剂(诸如α7激动剂或别构调节剂或α4β2激动剂或别构调节剂)、PPAR激动剂(诸如PPARγ激动剂)、5-HT4受体激动剂或部分激动剂、组胺H3拮抗剂、5-HT6受体拮抗剂或5HT1A受体配体和NMDA受体拮抗剂或调节剂、5-HT2A拮抗剂、5-HT7拮抗剂、D1激动剂或正向别构调节剂(PAMs)、D4激动剂或PAMs、GABA-Aα5反相激动剂或负向别构调节剂(NAMs)、GABA-Aα2/3激动剂或PAMs、mGluR2调节剂(PAMs或NAMs)、mGluR3PAM、mGluR5PAM、PDE1抑制剂、PDE2抑制剂、PDE4抑制剂、PDE5抑制剂、PDE9抑制剂、PDE10抑制剂、GlyT1抑制剂、DAAO抑制剂、ASC1抑制剂、AMPA调节剂、SIRT1激活剂或抑制剂、AT4拮抗剂、GalR1拮抗剂、GalR3配体、腺苷A1拮抗剂、腺苷A2a拮抗剂、α2A拮抗剂或激动剂、选择性和非选择性去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRIs)、或潜在的疾病缓解剂诸如γ分泌酶抑制剂或调节剂、α分泌酶激活剂或调节剂、淀粉样蛋白聚集抑制剂、淀粉样蛋白抗体、tau聚集抑制剂或tau磷酸化抑制剂，以及可药用载体。在另一个实施方案中，本发明提供了组合产品，其包含式(I)化合物或其可药用盐以及如上文所述的另外的治疗剂，其在分开或组合的药物制剂中用于依次或同时施用。
在进一步的方面，本发明提供了抑制淀粉样-β蛋白的生成和/或治疗或预防神经变性疾病的方法，所述神经变性疾病诸如阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA)、轻度认知功能损害(MCI)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆，所述方法包括向罹患所述病症的人类个体施用治疗或预防有效量的上文所述的药物组合物或如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐。“有效量”意指足以引起对个体的益处或至少引起个体病症的变化的量。
阿尔茨海默病(AD)病理特征为存在神经原纤维缠结(NFTs)和斑，其由不同长度的淀粉样(Aβ)肽组成，例如42氨基酸(Aβ42)和40氨基酸(Aβ40)。除这些病理标志之外，脑萎缩也是明显的。斑的出现被认为是由于Aβ肽的聚集。在脑中Aβ肽类通过β-分泌酶(BACE-1)和γ–分泌酶相继裂解淀粉样蛋白前体蛋白(APP)而形成。因此旨在通过抑制BACE-1或γ-分泌酶而抑制淀粉样蛋白形成的潜在的AD药物必须能够在脑中暴露充分以对AD产生作用。
尽管BACE-1是停止或减缓淀粉样蛋白肽类的产生的有吸引力的靶点，但多个研究组已发现鉴别能穿透中枢神经系统(CNS)并由此在作用部位抑制所述酶的BACE-1抑制剂具有挑战性。
脑被几个屏障保护，包括血脑屏障(BBB)和转运蛋白(Hitchcock和Pennington,J Med Chem2006,29,7559；Ueno,Curr.Med.Chem.2007,14,1199；Gloor等,Brain Res.Rev.2001,36,258)。已经鉴定有几种外排转运蛋白具有阻止化合物进入脑的特征。防止外源物穿透CNS的特征性最强和最显著的物质之一是P-糖蛋白(Pgp)(Kusuhara和Sugiyama,DrugDiscovery Today,2001,6,150；Mahar Doan等,J.Pharm.Expt。Ther.2002,303,1029；Lin,Drugs of Today2004,40,5；Lin&Yamazaki,ClinPharmacokinet.2003,42,59；Schinkel,Adv.Drug Deliv.Rev.1999,36,179)。已显示Pgp外排对于BACE-1抑制剂是重要的(Hussain等,J.Neurochem.2007,100,802)。因此，克服Pgp外排是重要的。
本领域的技术人员会理解在体外或体内测定或预测CNS穿透有几种途径。CNS穿透的潜力在体外可以通过测定化合物是否能经受Pgp外排而评价，即，通过进行体外Pgp试验而评价。本领域的技术人员会理解可以使用多种细胞系，且细胞系的选择可以或可以不影响试验的结果。
本领域的技术人员会理解体外Pgp试验是体内CNS穿透的预测试验。本领域的技术人员会理解有多种途径评价化合物在体内的CNS穿透性。例如，可以定量化血液或血浆和脑中的化合物浓度，计算脑:血(Br:Bl)或脑:血浆(Br:Pl)比例。该方法历史上一直沿用，且已经被广泛接受为测定CNS穿透的方法(Summerfield等,J Pharmacol.Expt.Ther.2007,322,205)。本领域的技术人员会理解该类型的试验可以在稳态、单个时间点、多个时间点进行，或者可以通过引用曲线下面积(AUC)比而完成。所有的方法是同样有效的，但各方法可能有本领域技术人员会识别的某些注意事项。近来已经出版的文献提出考虑体内的游离浓度是重要的，且当没有发生从脑中外排时，游离血浆浓度应当与游离脑浓度相同或或相当(Kalvass和Maurer,Biopharmaceutics&Drug Disposition2002,23,327；Mauer等人,DrugMetab.Disposition2005,33,175；Trainor Expert Opin.Drug Discov.2007,2,51)。因此，可以自由穿透CNS且不遭受主动外排(例如被Pgp或另一种转运蛋白外排)的化合物应证实游离脑:游离血浆(Brfr:Plfr)或未结合脑:未结合血浆(Bru:Plu)为约1:1。本领域的技术人员会理解游离或未结合浓度可以通过总的脑浓度或总的血浆浓度乘以在脑组织或血浆中未结合的分数/部分而计算，所述未结合分数/部分可以通过下文描述的试验测定。本领域的技术人员会理解未结合分数/部分可随试验因素而该改变，例如浓度或温度等。本领域的技术人员能对其进行评估，并选择最适合的一组条件。本领域的技术人员还会理解对于每个筛选的化合物只要条件相同，则试验对于所测试的范围中的化合物将得到相一致的数据，由此最小化任何偏差。还已经提出对于不主动由脑外排的化合物，脑脊髓液(CSF)中的药物浓度相当于的游离脑浓度(He等,Xenobiotica2009,39,687)。因此另一种测定CNS穿透的方法会是评价CSF:游离血浆(CSF:Plfr)或CSF:未结合血浆(CSF:Plu)。如果血浆中的游离药物能渗透进入CNS，且不被主动内排或外排，则CSF:Plfr或CSF:Plu应当为约1:1。本领域的技术人员会理解与测定CSF药物浓度和萃取CSF相关的问题，例如，根据抽取的方法，CSF可能被血液污染，还有根据所使用的剂量CSF浓度的准确性可能较低。
因此已显示具有低的CNS暴露的葛兰素史克的BACE抑制剂(GSK188909)(BACE-1IC505nM)在急性给药后在TASTPM小鼠的脑(其过度表达人APPsweK595N/M596I和PS-1M146V)中降低Aβ40产生方面无效(Hussain等,J.Neurochem.2007,100,802–809)。施用口服剂量250mg/kg之后，GSK188909在TASTPM小鼠中的脑浓度为0.62uM。当GSK188909口服施用(250mg/kg的口服剂量)5小时之前给予Pgp抑制剂(GF120918)时，发现GSK188909的脑浓度为5.43uM，即Pgp抑制剂的共同施用引起CNS穿透几乎增加9-倍，这显示Pgp外排是阻止BACE抑制剂穿透CNS的重要机制。此外，在无Pgp抑制剂时，在TASTPM小鼠中250mg/kg口服剂量的GSK188909对脑Aβ40水平不具有任何作用，而当共同施用(在GSK188909施用之前5小时)Pgp抑制剂时，相对于安慰剂处置的小鼠，观测到脑Aβ40水平减少68%。
另一篇论文报道了Bristol-Myers Squibb的三个BACE-1抑制剂的类似的效果(Meredith等,J.Pharm.Expt.Ther.2008,326,502-513)。发现所述三种报道的化合物在体外为Pgp底物。当施用于小鼠时，这三种化合物显示低CNS穿透，且不降低脑中的淀粉样蛋白水平，但能降低血浆淀粉样蛋白水平。当将同样的三种化合物施用于Pgp敲除(KO)小鼠时，CNS穿透水平增加，且化合物能降低脑中的淀粉样蛋白水平。
Schering-Plough的研究人员也有已发表的论文(Iserloh等,Bioorg.Med.Chem.Lett.2008,18,418)显示，来自它们的系列的BACE-1抑制剂(例如来自上述的参考的实施例11)受到Pgp外排，其结果是发现该化合物在大鼠中显示低的Br:Pl(<0.1)。
上文引用的文献强调了鉴别不受到Pgp外排的BACE-1抑制剂的困难。此类抑制剂将是非常符合需要的，已经有许多研究小组尝试发现此类化合物，但没有成功。因此不是Pgp底物、且因此可以容易穿透CNS并降低脑中的淀粉样蛋白的BACE-1抑制剂将是受到期望的。
最近，Wyeth的研究人员报道了为克服Pgp外排在一系列的环状酰基胍BACE-1抑制剂中进行的大量的工作(Malamas等人,Bioorg.Med.Chem.Lett.2010,20,6597)。发现所述化合物为弱的Pgp底物，且Br:Pl接近1:1。然而，两种具有降低的Pgp外排的先导实施例(来自上述参考的实施例84和89)在30mg/kg口服给药后8小时，不降低Tg2576小鼠脑中的Aβ40。功效的缺乏归咎于所述化合物显示高的脑组织结合的事实。因此，发现非Pgp底物但在脑组织中仍然有适合的未结合部分、且能降低脑中的淀粉样蛋白的BACE-1抑制剂是重要的。
还已经显示在体外非Pgp底物的BACE抑制剂可以穿透CNS(例如来自Merck的TC-1)，且可以降低APP-YAC小鼠和猴的脑中的Aβ40水平(Sankaranarayanan等,J.Pharmacol.Expt.Ther.2009,328,131-140)。因此，体外Pgp试验显示TC-1不是Pgp底物，且当将TC-1施用于APP-YAC小鼠(100mg/kg腹膜内)时，其能如脑浓度和脑:血浆比例所示那样适度地穿透CNS，且这种能力导致脑淀粉样蛋白的适度降低。
Figure BDA00003544663600171
在APP-YAC小鼠中100mg/kg腹膜内施用后TC-1的脑浓度和血浆浓度，和对脑Ab40水平的相应作用。
在单独的各试验中显示当与CYP3A4抑制剂(利托那韦)共同施用时，TC-1可穿透猴的CSF。在这些试验中，发现TC-1的平均血浆浓度为2.7uM，而发现CSF浓度为0.025uM。然而，因为TC-1有～99%结合于血浆蛋白，所以计算游离血浆浓度为～0.027nM。已发现相对于介质处理的对照组，CSF Aβ40水平显示降低42%。因此，能自由穿透CNS的BACE抑制剂预期将能降低CNS中的淀粉样蛋白水平。不必须与CYP3A4抑制剂共同施用会是有益的。
已经显示本发明的化合物在细胞实验中降低Aβ产生，这与它们在动物降低Aβ产生的能力相关。因此，本发明化合物可用于降低人类Aβ产生，且因此可用于治疗神经变性疾病、诸如阿尔茨海默病。
大鼠体内CNS穿透
雄性Sprague Dawley大鼠从Charles River UK Ltd.(Margate,UK)获得，且根据UK总部指南饲养。将药物在0.5%甲基纤维素中制成适合的浓度。以下文表1至4中所描述的剂量通过管饲法经口向动物给药(2mL/kg)。
在下文表1至4中所详细说明的给药后时间点，向动物腹膜内注射戊巴比妥钠(约330mg/kg，用于终端麻醉)。
使用截断机将动物断头，并将躯干血收集至含100IU肝素的15mlFalcon管中。将血液涡旋，随后以6000rpm在4°C离心5分钟。收集血浆用于DMPK和ELISA试验，并在-80°C存储直至使用。将脑解剖出，沿中线分开，称重、并在-80°C存储直至进一步使用。
血浆、脑和CSF样品的分析方法
乙腈工作溶液的制备
将测试化合物制备为在DMSO中的1mg游离碱/mL的溶液，将其涡旋，并超声处理5分钟。通过分别将10μL添加至990μL乙腈和将30μL添加至970μL乙腈，将该1mg/mL的DMSO溶液稀释为10和30μg/mL的乙腈储备溶液。然后将该10和30μg/mL的乙腈储备溶液系列稀释1:9(v/v)(将100μL储备溶液加入900μL乙腈中)，得到以下溶液:0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10和30μg/mL乙腈。
血浆标准品、空白和样品的制备
将对照雄性Sprague Dawley大鼠血浆和研究用血浆样品在-80°C存储直至分析当天，在分析当天将它们在室温解冻。将对照血浆离心(2,000g，10分钟)，并等分(90μL)，放入微量离心管中用于制备标准品和空白样品。在收集血浆之后，立即将研究样品预先等分(100μL)放入微量离心管。
将适当的乙腈储备溶液的等分试样(10μL)加入对照血浆中(得到100μL的最终体积)，得到所需的校准标准，其覆盖1-3000ng/mL的范围。通过将10μL乙腈加入90μL空白血浆中制备双白(double blank)和空白样品。
脑标准品、空白和样品的制备
收集对照雄性Sprague Dawley大鼠脑和研究用脑样品，然后称重，并在-80°C存储直至分析当天，在分析当天将它们在室温解冻。解冻之后，立即将脑用水稀释(每克组织4mL)，并使用机械匀浆器匀化。将各研究样品等的分试样(100μL)置于准备用于分析的Micronics管中，并制备足够的对照脑匀浆的等分试样(90μL)用于制备标准品和空白。
将适当的乙腈储备溶液的等分试样(10μL)加入对照脑匀浆中(得到100μL的最终体积)，得到所需的校准标准，其覆盖1.5-5000ng/g的范围。通过将10μL乙腈加入90μL空白脑匀浆中制备双白和空白样品。
血浆和脑样品、标准品和空白的萃取
将各血浆和脑匀浆样品、标准品和空白(100μL)用乙腈的等分试样(300μL)(含0.1%甲酸和100ng/mL的适当的内标物)萃取。将双白用乙腈的等分试样(300μL)(含0.1%甲酸)萃取。然后将所有的样品、标准品和空白涡旋混合，并离心(2000g，15分钟)。然后将得到的上清液的等分试样(50μL)置于2mL96-深孔板中，并用乙腈:水(50:50v/v)(150μL)稀释，即可用于通过特定的LC-MS/MS方法的分析。
CSF样品、标准品和空白的制备
将对照雄性Sprague Dawley大鼠CSF和研究用CSF样品在-80°C存储直至分析当天，在分析当天将它们在室温解冻。将各研究样品的等分试样(50μL)放入准备用于分析的Micronics管中，并制备足够的对照CSF的等分试样(45μL)用于制备标准品和空白。
将适当的乙腈储备溶液的等分试样(5μL)加入对照CSF中(得到50μL的最终体积)，得到所需的校准标准，其覆盖1-1000ng/mL的范围。通过将5μL乙腈加入45μL空白CSF中制备双白和空白样品。
CSF样品、标准品和空白的萃取
将各CSF样品、标准品和空白(50μL)用乙腈的等分试样(150μL)(含0.1%甲酸和100ng/mL的适合的内标物)萃取。将双白用乙腈的等分试样(150μL)(含0.1%甲酸)萃取。然后将所有的样品涡旋混合，然后将各等分试样(50μL)在2mL96-深孔板中在150μL乙腈:水(50/50v/v)中进一步稀释，即可用于LC-MS/MS分析。
然后使用偶联至Waters Xevo TQ质谱仪的Waters Acquity UPLC分析所有的样品。
LC条件:
柱:Acquity UPLC BEH C18,1.7um,2.1x50mm，保持在40°C
流动相:A=95%水:5%含0.01M乙酸铵的MeOH
B=5%水:95%含0.01M乙酸铵的MeOH
梯度:
时间(分钟) B(%)
0 5
1.2 95
1.5 95
1.7 5
2.0 5
流速:0.6mL/分钟；进样体积5μL；自动进样器温度6°C
对于每次进样的前0.3分钟，使LC流废弃。
通过Waters QuanOptimise软件自动优化MS/MS转换。
淀粉样蛋白检测
从大鼠脑中用DEA/NaCl提取Aβ肽:
新鲜制备100ml冷却的在50mM NaCl中的0.2%二乙胺(DEA)(pH10)，并将1ml/25mg脑组织加入各半球形孔中(即40x脑体积)。立即将所述脑用Polytron PT1200匀化1.5分钟，在匀化后将样品置于冰上孵育1小时。将3ml匀浆转移至异质同晶聚合物管(Beckman#362333)中，在4°C以133000x g(55,000rpm)旋转45分钟。然后通过加入1/10体积0.5MTris/HCl(pH6.8)将上清液中和至pH8-8.3。所述样品可以被新鲜使用，或在干冰上速冻并在-80°C储存，直至需要进行分析。
人/大鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA(Wako试剂盒)
Wako Aβ40ELISA试剂盒(代号294-62501)使用针对表位Aβ(11-28)而建立的单克隆抗体BNT77，和特异检测Aβ40的C-端部分的单克隆抗体BA27。该试剂盒用于人或大鼠Aβ(1-40)的定量测定，还用于生物基质、诸如组织培养基、组织匀浆、CSF和血浆中的截短的Aβ40系列(Aβ(x-40))的定量测定。
对于分析而言，使用试剂盒中包含的标准稀释液将血浆和脑样品1:1稀释，并使用试剂盒中包含的标准稀释液将CSF样品1:8稀释。根据生产商说明进行试验，且一式两份地分析样品。使用Microsoft Excel2003分析数据，且统计分析使用Genstat第9版进行。
因此，当以10mg/kg的剂量经口施用对比实施例1、且在施用后2、4、6和8小时收集血浆(plasma)、脑(brain)和CSF样品时，测定了以下浓度(表1):
表1:对比实施例1的数据(WO2009/091016中的实施例73)
Figure BDA00003544663600211
Figure BDA00003544663600221
1通过[Pl]乘以Pl Fu计算。
2通过[Br]乘以Br Fu计算。
从以上研究可见，对比实施例1显示在4和6小时脑中的Aβ40分别降低59%和64%；且在4和6小时CSF中的Aβ40分别降低76%和70%。
已经在大鼠体内评价了某些本发明化合物以证实CNS穿透的水平；这些数据在以下各表中呈现。
令人惊讶地是，通过测定CNS穿透的任何上述的公认的方法，已发现本发明的实施例化合物相对于来自WO2009/091016的化合物在大鼠中显示增加的CNS穿透。因此，本发明化合物可显示改善的特性，由于它们更容易靶向作用位点——脑，且因此可以显示改善的功效或以较低浓度或剂量显示功效或显示减少的外周介导的副作用(peripherally mediated sideeffects)(通过优先的CNS分配)或者任何或所有这些方面的组合。
因此，当以10mg/kg的剂量经口施用实施例4、且在施用后2、4、6和8小时收集血浆和脑样品时，测定了以下浓度(表2)。
表2:实施例4的数据
Figure BDA00003544663600222
1通过[Pl]乘以Pl Fu计算。
2通过[Br]乘以Br Fu计算。
从以上研究可见，实施例4显示在4和6小时脑中的Aβ40分别降低51%和42%；且在4和6小时CSF中的Aβ40分别降低67%和63%。
因此本发明化合物显示了增加的CNS穿透，同时证实了在CNS中的功效。因此达到了所述功效，而循环血浆浓度较低。
因此，当以10mg/kg的剂量经口施用实施例3、且在施用后2、4、6和8小时收集血浆、脑和CSF样品时，测定了以下浓度(表3)。
表3:实施例3的数据
Figure BDA00003544663600231
1通过[Pl]乘以Pl Fu计算。
2通过[Br]乘以Br Fu计算。
从以上研究可见，实施例3显示在4和6小时脑中的Aβ40分别降低58%和61%；且在4和6小时CSF中的Aβ40分别降低75%和71%。因此本发明化合物显示了增加的CNS穿透，同时证实了在CNS中的功效。因此达到了所述功效，而循环血浆浓度较低。
当以10mg/kg的剂量经口施用实施例2、且在施用后2、4、6和8小时收集血浆、脑和CSF样品时，测定了以下浓度(表4):
表4:实施例2的数据
Figure BDA00003544663600232
1通过[Pl]乘以Pl Fu计算。
2通过[Br]乘以Br Fu计算。
从以上研究可见，实施例2显示在4和6小时脑中的Aβ40分别降低63%和65%；且在4和6小时CSF中的Aβ40分别降低85%和69%。因此本发明化合物显示了增加的CNS穿透，同时证实了在CNS中的功效。因此达到了所述功效，而循环血浆浓度较低。
血浆蛋白结合(PPB)和脑组织结合(BTB)的测定方法
化合物制备
将化合物溶于DMSO中，得到1mg游离碱/mL溶液，将后将其在乙腈中进一步稀释至100μg/mL(将100μL的1mg/mL的溶液在900μL乙腈中稀释)。
基质制备
在透析(dialysis)早上，将预先在-80°C存储的对照雄性Sprague Dawley大鼠的血浆和脑在室温解冻。检查血浆的pH，且如需要用1M HCl将其调节至7.4。然后将血浆离心(2000g，10分钟)，将脑用每克组织2mL磷酸盐缓冲盐水(pH7.4)稀释，并使用机械匀浆器匀化。然后将100μg/mL乙腈化合物溶液的等分试样(10μL)加入1mL血浆和脑匀浆中，并涡旋混合，得到在基质中的1μg/mL的最终化合物浓度。
RED板制备
根据制造商指导制备快速平衡透析(RED)板(Thermo Scientific)，即将底板在20%(v/v)乙醇中浸泡10分钟，然后用去离子水清洗两次，随后将其干燥。然后将适当的数量的一次性透析管(n=每个化合物3个)(ThermoScientific)装入底板，并将含1μg/mL化合物的基质加入透析管中的基质室(200μL)中，将PBS的等分试样(350μL)加入缓冲液室中。然后将其粘合封盖，并在130rpm的搅拌下在37°C空气中孵育6小时。
取样
在6小时孵育后，除去密封，并从PBS室中取等分试样(50μL)，将其分配至Micronics管中。同样地，从基质室中移出等分试样(50μL)，并置于单独的Micronics管中。然后将血浆和脑与50μL不含药的PBS混合并将PBS样品与50μL相应的不含药的基质混合，得到相等的最终组合物和体积(100μL)。
样品分析
将样品涡旋混合，并加入含0.1%甲酸的乙腈和100ng/mL适合的内标的等分试样(300μL)。然后将样品混合，离心(2000g，15分钟)，并将上清液的等分试样(100μL)移至96-深孔板中，并用相等体积的水稀释，即可用于LC-MS/MS分析。
在以上试验中得到以下化合物的以下数据(表5)。
表5:
Figure BDA00003544663600251
数据表示3次平行测试的平均值
fu=未结合部分
从上文呈现的数据本领域的技术人员会明了本发明化合物达到与对比实施例1相似的脑Aβ40的减少，但具有更低血浆浓度和游离血浆浓度。这是有利的，且表明与WO2009/091016的化合物相比，本发明化合物会以更低的浓度具有相似的或更好的功效，因此将较少可能引起不想要的外周介导的副作用、诸如心血管影响、磷脂质病(phospholipidosis)、肝毒性、肾毒性和胃肠道毒性。
除了改善CNS穿透之外，与WO2009/091016中描述的化合物相比，还证实本发明化合物具有改善的代谢稳定性，如下表所述(表6):
表6:
Figure BDA00003544663600252
Figure BDA00003544663600261
1.在下文所述的试验中与人肝微粒体(HLM)孵育30分钟后保留的母体的百分比。
人肝微粒体稳定性试验
将化合物溶于DMSO中，以制备1mmol/L DMSO溶液。将该DMSO溶液用蒸馏水稀释，以制备1μmol/L化合物给药溶液(DMSO浓度:0.1%)。
将105μL反应缓冲液(1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)/1mmol/L EDTA(pH7.4)/蒸馏水=1/1/5,v/v/v)、15μL1μmol/L化合物给药溶液和15μL大鼠或人肝微粒体(5mg/mL)混合，并在37°C预孵育5分钟。通过添加15μLNADPH生成系统(3.3mmol/Lβ-NADPH+、80mmol/L葡萄糖-6-磷酸、1单位/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、60mmol/L MgCl2)启动代谢反应。对于对照样品，用60mmol/L MgCl2代替NADPH生成系统。将150μL该反应混合液(最终化合物浓度:0.1μmol/L，最终DMSO浓度:0.01%)在37°C孵育30分钟，并通过添加150μL含适合的内标化合物的甲醇/乙腈溶液将反应终止。将样品涡旋，离心，并将得到的上清液进行LC/MS分析。
接下来将描述制备本发明的式(I)化合物或其可药用盐的方法。
A.通用制备方法A:
Figure BDA00003544663600271
在所述式中，X和R如上文所定义，且PG是保护基团(例如三苯甲基)。
通用制备方法A是从作为原料的化合物A-(I)通过步骤A-(i)至步骤A-(xii)的多个步骤制备对应于本发明的化合物(I)的化合物A-(13)的方法。
化合物A-(1)可以如WO2009/091016中所述以对映异构纯形式制备或如实施例中所述以消旋体形式制备。
步骤A-(i):
该步骤是通过芳基锂试剂或格氏试剂与化合物A-(1)的加成反应获得化合物A-(2)的步骤。
例如，可以在与如J.Am.Chem.Soc.2005,127,5376-5383；Bull.Chem.Soc.Jpn.,1993,66,2730-2737和Synlett.2004,第8期,第1408-1413页中所述的那些条件相同的条件下进行该步骤中的反应。
芳基锂试剂或格氏试剂可以通过本领域技术人员已知的方法制备。具体而言，相应的苯基锂试剂或芳基(包括杂环)镁试剂可以通过例如芳基卤化合物与商购可得的有机金属试剂、诸如烷基锂试剂诸如正、仲或叔丁基锂或格氏试剂、诸如异丙基溴化镁或金属镁之间的卤素-金属交换反应制备。
该步骤中使用的溶剂根据所使用原料和试剂而变化，且不特别限制，只要其不抑制反应、允许原料在其中溶解至一定程度、且在反应期间总是惰性的即可。优选的溶剂的实例包括诸如乙醚、四氢呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷、苯和甲苯的有机溶剂、及其混合溶剂。不特别限制反应时间，且通常为0.1至48小时，优选为0.1至12小时。反应温度根据所使用原料和试剂等而变化，且优选保持低温，例如，在-78°C以使副产物的形成最少，尽管可使用高至0°C、10°C或甚至室温的温度，这取决于两种组分的反应性，例如当有机金属试剂为格氏试剂时。
通过加入例如作为添加剂的TMEDA(四甲基乙二胺)、HMPA(六甲基磷酰胺)或路易斯酸例如三氟化硼-乙醚复合物(BF3.OEt2)可得到有利的结果例如改善的收率和减少的反应时间。
步骤A-(ii):
该步骤是通过使化合物A-(2)进行N-O键的还原裂解反应获得化合物A-(3)的步骤。
N-O键的还原裂解反应可以在例如使用锌-乙酸、金属催化剂诸如氢-氧化铂(hydrogen-platinum oxide)或氢化铝锂的条件下进行。
使用锌、诸如锌-乙酸的反应例如可以在与J.Org.Chem.2003,68,1207-1215和Org.Lett.2005,7,5741-5742如中所述的那些条件相同的条件下进行。使用的酸的实例包括乙酸、甲酸和盐酸。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括甲醇、乙醇、1,4-二烷、THF和水。以上的酸还可用作溶剂。反应温度通常为-20°C至溶剂回流的温度，优选为冰冷的温度至溶剂回流的温度。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至48小时，优选为5分钟至24小时。
使用金属催化剂、诸如氢-氧化铂的反应例如可以在与如Tetrahedron:Asymmetry,1994,5,1018-1028和Tetrahedron,1997,53,5752-5746中所述的那些条件相同的条件下进行。化合物A-(3)例如可以通过使用氧化铂作为催化剂在溶剂、诸如甲醇中氢化化合物A-(2)得到。
使用氢化铝锂的反应例如可以在与如Bull.Chem.Soc.Jpn.,1993,66,2730-2737中所述的那些条件相同的条件下进行。化合物A-(3)例如可以通过在溶剂、诸如醚中使用氢化铝锂还原化合物A-(2)得到。
步骤A-(iii):
该步骤是从化合物A-(3)获得化合物A-(4)的步骤。硫脲衍生物A-(4)可以从化合物A-(3)通过本领域技术人员已知的方法得到。
在该步骤中可以通过将化合物A-(3)与苯甲酰异硫氰酸酯在溶剂、例如二氯甲烷或甲苯或乙酸乙酯中进行反应得到化合物A-(4)。该反应例如可以在与J.Med.Chem.1990,33,2393-2407如中所述的那些条件相同的条件下进行。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括二氯甲烷、氯仿、甲苯、1,4-二
Figure BDA00003544663600291
烷、THF和乙酸乙酯。反应温度通常为-20°C至溶剂回流的温度、且优选冰冷的温度至室温。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至48小时，优选为5分钟至24小时。
步骤A-(iv):
该步骤是通过将化合物A-(4)环化得到化合物A-(5)的方法。
在该反应中，化合物A-(4)可以在各种条件下通过活化化合物A-(4)的醇而被环化，来得到化合物A-(5)。
例如，在该反应中例如可以通过在酸、诸如浓盐酸的存在下、在溶剂、诸如甲醇中加热化合物A-(4)得到化合物A-(5)。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如甲醇、乙醇、1-丙醇和水的溶剂、其混合溶剂及用作溶剂的酸。该反应可以在所述溶剂的存在或不存在下通过使用1当量至大量过剩过量的适当的酸起作用而进行。使用的酸的实例包括浓盐酸、氢溴酸、硫酸、三氟乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸及其混合物。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至溶剂回流的温度。
或者，可以通过将化合物A-(4)与三氟甲磺酸酐在溶剂、例如二氯甲烷中、在碱、例如吡啶的存在下反应来得到化合物A-(5)。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。本领域的技术人员会理解并不总是需要溶剂，且该反应也可在没有溶剂的情况下进行，例如当碱为吡啶时如此。溶剂的实例包括例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、THF、1,2-二甲氧基乙烷和甲苯的溶剂、及其混合溶剂。使用1至20当量的适当的碱在所述溶剂中可以进行该反应。所使用的碱的实例包括吡啶、2,6-二甲基吡啶、碳酸钠、碳酸钾及其混合物。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为-78°C至室温。
步骤A-(v):
该步骤是通过将化合物A-(5)的醇保护基团脱保护获得化合物A-(6)的方法。
本领域的技术人员会理解可选择多种适合的醇保护基团，且保护基团的选择受其化学稳定性和脱保护所需的条件所影响。适合的保护基团在T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"Protective Groups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基),第三版",John Wiley&Sons(1999)中描述。
当保护基团为三苯甲基(三苯基甲基)时，用于脱保护的适合的条件可以在T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"Protective Groups in OrganicChemistry(有机化学中的保护基),第三版",John Wiley&Sons(1999),P.102-104中找到。
例如，通过用酸处理化合物A-(5)除去三苯甲基保护基团可以从A-(5)制备化合物A-(6)。根据酸的选择，其可用作溶剂，或者还可加入溶剂。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括醇溶剂、例如甲醇和乙醇，其可能与或可能不与水联合使用。适合的溶剂系统的一个实例是甲醇水溶液。本领域的技术人员会理解化合物A-(5)可能溶于或可能不溶于溶剂中或可能部分溶解。不特别限制使用的酸。酸的实例包括强无机酸、例如浓盐酸。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至溶剂回流的温度、且优选室温。
或者，该反应可使用酸在无溶剂存在的情况下进行。此类酸的实例包括甲酸。不特别限制反应时间，且通常为0.1至72小时，优选为0.1至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至溶剂回流的温度，优选室温。本领域的技术人员会理解这些条件除所需的醇之外还可能导致形成伴随的甲酸酯。本领域的技术人员会知道如何监测反应和上述甲酸酯的形成。本领域的技术人员还会理解如何将所述甲酸酯转化为所需的醇。例如，通过例如用醇(例如甲醇或乙醇)在碱(例如三乙胺)的存在下将酯水解可将所述甲酸酯转化为醇。不特别限制反应时间，且通常为0.1至72小时，优选为0.1至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至溶剂回流的温度。
步骤A-(vi):
该步骤是通过将化合物A-(6)中的伯醇转化为CH2F(如步骤A-(vi)-a所述)或者转化为CHF2(如步骤A-(vi)-b和c中所述)而从化合物A-(6)获得化合物A-(7)的方法，其中R如在化合物-(I)中所述。
步骤A-(vi)-a
该步骤是通过将化合物A-(6)中的伯醇转化为CH2F(通过将醇活化、并用相当的氟化物替代)而从化合物A-(6)获得化合物A-(7)的步骤，其中R=CH2F。
本领域的技术人员会理解可使用单一试剂进行所述醇的活化和相当的氟化物的替代。所述试剂的实例为二乙基氨基三氟化硫(DAST,J.Org.Chem.1975,40,574)、双-(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(deoxo-fluor,Synthesis,2002,17,2561；J.Org.Chem.1999,64,7048；Chem.Commun.1999,215)、二乙基氨基二氟锍四氟硼酸盐(XtalFluor-E,J.Org.Chem.2010,75,3401)、吗啉代二氟锍四氟硼酸盐(XtalFluor-M,J.Org.Chem.2010,75,3401)和全氟-1-丁基磺酰氟(PBSF,Tetrahedron Lett.1995,36,2611)。本领域的技术人员会理解在一些情况中添加另外的试剂以提供氟化物的另外的来源是必要的或有利的，所述试剂的实例包括但不限于三乙胺三氢氟酸盐(TEA.3HF)、三乙胺二氢氟酸盐(TEA.2HF)和氟化氢。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括例如二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、THF的溶剂、及其混合溶剂。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为0°C至室温。
步骤A-(vi)-b和c
这些步骤是通过将化合物A-(6)中的伯醇转化为CHF2而从化合物A-(6)获得化合物A-(7)的步骤，其中R=CHF2，其通过将醇氧化为醛(步骤b)，并通过与氟化试剂反应将所述醛转化为二氟甲基(步骤c)实现。
步骤A-(vi)-b
该步骤是通过使化合物A-(6)进行氧化反应将醇A-(6)转化为醛的步骤。将伯醇转化为醛的氧化条件为本领域技术人员已知。所述条件和试剂的实例包括与戴斯-马丁氧化剂(Dess-Martin periodinane)(J.Org.Chem.1983,48,4155；Org.Synth.Coll.Vol.10,696)在适合的溶剂例如DCM中、在适合的反应温度、例如0°C至室温进行反应。本领域的技术人员还会理解可能使用一系列备选的条件进行该反应，例如使用TPAP(Synthesis1994,639)、斯文氧化反应(Swern oxidation)(Synthesis1981,165–185；Org.React.39:297–572；Synthesis1990:857–870)、Parikh-Doering氧化反应(J.Am.Chem.Soc.,1967,89:5505–5507)、Corey-Kim氧化反应(J.Am.Chem.Soc1972,94,7586)、Pfitzner-Moffatt(J.Am.Chem.Soc.1963,85,3027)或使用氯铬酸吡啶(PCC)(Tetrahedron1990,46:4417–4420；Tetrahedron Lett.,1975,16,2647-2650)。
本领域的技术人员还会理解在操作某些醛时可能需要预防措施。
步骤A-(vi)-c
该步骤是将醛转化为二氟甲基的步骤。本领域的技术人员会理解所述醛至二氟甲基的转化可使用氟化试剂进行。所述试剂的实例为二乙基氨基三氟化硫(DAST,J.Org.Chem.1975,40,574)、双-(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(deoxo-fluor,Synthesis,2002,17,2561；J.Org.Chem.1999,64,7048；Chem.Commun.1999,215)、二乙基氨基二氟锍四氟硼酸盐(XtalFluor-E,J.Org.Chem.2010,75,3401)和吗啉代二氟锍四氟硼酸盐(XtalFluor-M,J.Org.Chem.2010,75,3401)。本领域的技术人员会理解在一些情况中添加另外的试剂以提供氟化物的另外的来源是必要的或有利的，所述试剂的实例包括但不限于三乙胺三氢氟酸盐(TEA.3HF)、三乙胺二氢氟酸盐(TEA.2HF)和氟化氢。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括例如二氯甲烷(DCM)、二氯乙烷(DCE)、氯仿、1,2-二氯乙烷、THF的溶剂、及其混合溶剂。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为0°C至溶剂回流温度、优选为0°C至室温。
步骤A-(vii)
该步骤是通过将化合物A-(7)的保护基团脱保护得到化合物A-(8)的方法。化合物A-(8)可以在本领域技术人员已知的用于除去苯甲酰基的脱保护条件下得到。例如，在该反应中例如可以通过在碱诸如DBU的存在下将化合物A-(7)在溶剂诸如甲醇中加热来得到化合物A-(8)。该反应例如可以在与Synth.Commun.2002,32(2),265-272中描述的那些条件相同的条件下进行。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如甲醇、乙醇和1-丙醇的溶剂。该反应可以使用1至20当量的适当的碱在所述溶剂中进行。使用的碱的实例包括DBU。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为室温至溶剂回流的温度。
或者，在该反应中例如可以通过将化合物A-(7)与无机碱诸如碳酸钾一起加热来得到化合物A-(8)。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如甲醇、乙醇和1-丙醇的溶剂。该反应可以使用1至20当量的适当的碱在所述溶剂中进行，且优选使用略微过量的碱。使用的碱的实例包括碳酸钾。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为室温至溶剂回流的温度，优选为50–100°C。本领域的技术人员会理解所选择的溶剂将通过其回流温度限制反应温度。适合的溶剂的实例包括回流的甲醇。
步骤A-(viii):
该步骤是通过化合物A-(8)的硝化反应得到化合物A-(9)的步骤。在该硝化反应中，可以从化合物A-(8)通过本领域技术人员已知的方法得到化合物A-(9)。该反应使用的硝化剂的实例包括硝酸钾/浓硫酸、发烟硝酸/浓硫酸和发烟硝酸/乙酸酐。该反应适合的溶剂包括三氟乙酸。不特别限制反应温度、且通常为-20°C至室温、且优选的反应温度包括0-10°C。
步骤A-(ix):
该步骤是通过化合物A-(9)的氨基的叔丁氧羰基化获得化合物A-(10)的步骤。
该反应可以在与氨基化合物的叔丁氧羰基化中通常使用的那些条件相同的条件下进行，诸如文献诸如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"Protective Groups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基),第三版",John Wiley&Sons(1999),P.518-525中描述的条件。化合物A-(10)例如可以通过将化合物A-(9)与二碳酸二叔丁酯在溶剂、诸如四氢呋喃中反应得到。供选择的溶剂包括乙腈和DMF。本领域的技术人员会理解尽管不是必要的，但还可将碱加入该反应混合物中。适合的碱的实例包括但不限于三乙胺和二异丙基乙胺。不特别限制反应温度、且通常为室温至回流温度，优选为室温至60°C。
步骤A-(x):
该步骤是从化合物A-(10)获得化合物A-(11)的步骤。
通过本领域技术人员已知的合成方法通过还原硝基化合物A-(10)来合成化合物A-(11)。所述方法的实例包括使用贵金属催化剂、诸如阮内镍、钯、钌、铑或铂通过催化氢化来还原。其他的还原试剂包括例如氯化锡。溶剂的实例包括醇溶剂、诸如甲醇、乙醇和1-丙醇、优选乙醇。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至18小时。反应温度通常为室温。供选择的还原反应条件包括在适当的反应温度、例如65°C与铁和添加剂诸如氯化铵或盐酸在醇溶剂诸如乙醇中进行反应。
步骤A-(xi):
该步骤是通过将化合物A-(11)与羧酸和缩合剂进行缩合而从化合物A-(11)获得化合物A-(12)的步骤。该缩合反应可以在与通常使用的那些条件、以及以下文献中描述的条件相同的条件下进行。已知的方法的实例包括J.Med.Chem.,1991,34(1),227-234；Heterocycles,1991,32(10),1968-1972和J.Med.Chem.,1994,37(7),998-1014中描述的那些。
化合物A-(11)可以是游离形式或盐。
不特别限制该反应中的溶剂，只要其不抑制反应即可。溶剂的实例包括四氢呋喃、1,4-二
Figure BDA00003544663600351
烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、甲苯、乙腈和二甲苯。缩合剂的实例包括CDI(N,N'-羰二咪唑)、Bop(1H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基(三(二甲基氨基))磷六氟磷酸盐)、DCC(N,N-二环己基碳二亚胺)、氰基磷酸二乙酯、PyBOP(苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐)和WSC/EDC.HCl(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)。适合的条件包括活化酸的试剂、诸如N,N’-羰基二咪唑。可使用相对于化合物A-(11)而言1当量至大量过量的酸。当需要时可加入1当量至大量过量的有机碱诸如三乙胺或N,N-二异丙基乙胺。
不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度根据所使用的原料、溶剂等而变化，且不特别限制。可接受冰冷的温度至溶剂回流的温度、优选冰冷的温度至室温。
或者，化合物A-(12)可以通过将所需要的羧酸转化为相应的酰基氯、然后将所述酰基氯与化合物A-(11)反应来得到。所述酰基氯可以通过本领域技术人员已知的手段合成。例如可通过将所需要的羧酸与亚硫酰氯在溶剂例如二氯甲烷、N,N’-二甲基咪唑啉-2-酮、NMP或DMF存在或不存在下进行反应而转化为相应的酰基氯。可使用相对于所需要的羧酸而言1至2当量或大量过量的亚硫酰氯。反应温度为-30°C至回流，且优选为-10°C至室温。还可使用添加剂、例如羰基二咪唑。还可通过在DMF的存在下用草酰氯在溶剂诸如二氯甲烷中处理所述酸来形成酰基氯。反应温度为-30°C至室温，优选为-10°C至室温。
或者，可以通过将所需要的羧酸转化为混合的酸酐、然后将所述混合的酸酐与化合物A-(11)进行反应来得到化合物A-(12)。所述混合的酸酐可以通过本领域技术人员已知的手段合成。例如通过将所需要的羧酸与氯甲酸酯诸如氯甲酸乙酯或氯甲酸异丙酯在碱诸如三乙胺的存在下进行反应来进行所述合成。使用相对于所需要的羧酸而言1-2当量的氯甲酸酯和碱。反应温度为-30°C至室温，优选为-20°C至室温。
例如通过将混合的酸酐与化合物A-(11)在溶剂诸如二氯甲烷、四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺中反应而进行混合的酸酐与化合物A-(11)的缩合的步骤。使用相对于化合物A-(11)而言1当量至大量过量的所需要的羧酸。
不特别限制反应时间，且通常为0.5至48小时，优选为0.5至12小时。反应温度为-20°C至50°C，优选为-20°C至室温。
或者，通过将所需要的羧酸转化为活化的酯、然后将所述活化的酯与化合物A-(11)进行反应可以得到化合物A-(12)。例如通过在缩合剂诸如DCC的存在下将所需要的羧酸与活化的酯合成试剂在溶剂诸如1,4-二
Figure BDA00003544663600361
烷、四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺中反应而进行得到活化的酯的步骤。所述活化的酯合成试剂的实例包括N-羟基琥珀酰亚胺。使用相对于化合物A-(11)而言1至1.5当量的活化的酯合成试剂和缩合剂。不特别限制反应时间，且通常为0.5至48小时，优选为0.5至24小时。
反应温度为-20°C至50°C，优选为-20°C至室温。
例如通过将活化的酯与化合物A-(11)在溶剂诸如二氯甲烷、四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺中反应而进行活化的酯与化合物A-(11)缩合的步骤。使用相对于化合物A-(11)而言1当量至大量过量的活化的酯。不特别限制反应时间，且通常为0.5至48小时，优选为0.5至24小时。反应温度为-20°C至50°C，优选为-20°C至室温。
步骤A-(xii):
该步骤是通过将化合物A-(12)的叔丁氧羰基脱保护而得到化合物A-(13)的步骤。
该反应可以在与叔丁氧羰基的脱保护反应中通常使用的那些条件相同的条件下进行，诸如文献诸如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"ProtectiveGroups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基),第三版",JohnWiley&Sons(1999),第518-525页中描述的条件。可以通过将化合物A-(12)与强酸、例如三氟乙酸在溶剂的存在或不存在下进行反应来得到化合物A-(13)。适合的溶剂包括二氯甲烷。供选择的酸包括例如在适合的溶剂诸如甲醇、乙醚或二
Figure BDA00003544663600371
烷中的盐酸。
反应温度通常为冰冷的温度至80°C、优选室温。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至48小时，优选为5分钟至12小时。
B.通用制备方法B:
在所述式中，X和R如上文所定义。
通用制备方法B是从作为原料的化合物A-(9)经由步骤B-(i)至步骤B-(ii)的多个步骤制备作为本发明的化合物(I)的衍生物的化合物A-(13)的供选择的方法。
可如通用制备方法A或实施例所述制备化合物A-(9)。
步骤B-(i)：
该步骤是从化合物A-(9)获得化合物A-(14)的步骤。
通过本领域技术人员已知的合成方法通过还原硝基化合物A-(9)合成化合物A-(14)。还原反应条件包括在适当的反应温度、例如室温至溶剂回流温度、优选在提升的温度、例如55-65°C与铁和添加剂诸如氯化铵或盐酸在醇溶剂诸如乙醇中进行反应。所述方法的供选择的实例包括使用贵金属催化剂、诸如阮内镍、钯、钌、铑或铂通过催化氢化来还原。其他的还原试剂包括氯化锡或用在AcOH中的Zn还原。溶剂的实例包括醇溶剂、诸如甲醇、乙醇和1-丙醇、优选乙醇。不特别限制反应时间，且通常为0.5至24小时，优选为0.5至18小时。反应温度通常为室温。
步骤B-(ii):
该步骤是通过将化合物A-(14)与酰基氯进行缩合而从化合物A-(14)获得化合物A-(13)的步骤。
可以通过将所需要的羧酸转化为相应的酰基氯、然后将所述酰基氯与化合物A-(14)反应来得到化合物A-(13)。不特别限制反应时间，且通常为0.5至48小时，优选为0.5至12小时。所述酰基氯可以通过本领域技术人员已知的手段合成。例如可通过将所需要的羧酸与亚硫酰氯在溶剂例如二氯甲烷、N,N’-二甲基咪唑啉-2-酮、NMP或DMF存在或不存在下进行反应而转化为相应的酰基氯。可使用相对于所需要的羧酸而言1至2当量或大量过量的亚硫酰氯。本领域的技术人员会理解所使用的反应条件的选择可影响反应的结果、例如所述条件可影响酰基氯是否与苯胺或异硫脲基团反应。本领域的技术人员会理解亚硫酰氯与羧酸的反应导致除形成所需的酰基氯之外同时形成1当量的盐酸。本领域的技术人员会理解当前的条件不使用除去由此形成的盐酸的方法。在该反应中形成的盐酸可能影响或可能不影响反应的选择性，其可能导致或可能不导致有益的结果。不特别限制反应时间，且通常为0.5至48小时，优选为0.5至12小时。反应温度为-30°C至回流，且优选为-10°C至室温。还可通过在DMF的存在下用草酰氯在溶剂诸如二氯甲烷中处理所述酸来形成酰基氯。反应温度为-30°C至室温，优选为-10°C至室温。
C.通用制备方法C:
Figure BDA00003544663600391
在所述式中，X如上文所定义。
通用制备方法C是通过步骤C-(i)至步骤C-(ix)的多个步骤从作为原料的化合物A-(15)制备作为本发明的化合物A-(7)(当R是CH2F时)的衍生物的化合物A-(24)的供选择的方法。
化合物A-(15)可商购获得。
步骤C-(i):
该步骤是获得化合物A-(16)的步骤，其通过使用相当的氟化物打开环氧化物A-(15)，得到化合物A-(16)。
具体而言，可以通过使用吡啶氢氟酸盐处理环氧化物而打开环氧化物A-(15)。优选地，该反应应当在室温以下、优选-30–4°C进行。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。适合的溶剂的实例包括但不限于二氯甲烷。添加碱可显示是有益的或有利的。适合的碱的实例包括但不限于吡啶。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至24小时、优选0.5–6小时。
步骤C-(ii):
该步骤是在三步骤的连续的方法中从醇A-(16)获得化合物A-(17)的步骤。
在第一个步骤中，将化合物A-(16)用在溶剂中的碱处理以形成相应的(S)-2-(氟甲基)环氧乙烷。该反应适合的溶剂的实例包括THF。适合的碱的实例包括双(三甲基硅基)氨基钾。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为-20°C至室温。
在第二个和第三个步骤中，通过使用锍叶立德(sulfonium ylide)打开环氧化物将中间体(S)-2-(氟甲基)环氧乙烷转化为相应的烯丙基醇，所述开环得到中间体烯丙基醇盐，然后将其烷基化，得到化合物A-(17)。本领域的技术人员能理解该转化可以以一锅法或作为两个独立的反应进行。本领域的技术人员会理解一锅法反应与操作两个分开的反应相比的优点和缺陷，并相应地根据它们的需求选择最好的方法。
具体而言，中间体环氧化物(S)-2-(氟甲基)环氧乙烷可通过三甲基碘化锍的阴离子和结果失去二甲硫醚而开环，得到相应的烯丙基醇盐。三甲基碘化锍可以使用适合的碱、例如丁基锂或双(三甲基硅基)氨基锂去质子化。只要不干扰该反应，不特别限制该反应中使用的溶剂。适合的溶剂的实例包括THF。本领域的技术人员会理解在该情况中，措辞溶剂用于指在其中进行反应的液体，且试剂可能不被其溶解。优选地该反应应当在室温以下、优选-30–20°C进行。一旦加入后，将反应混合液温至室温以促进反应。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至24小时、优选为1-6小时。
本领域的技术人员会理解从该反应生成的中间体醇盐可与烷基化剂、诸如溴乙酸叔丁酯直接反应，且该反应可在有或没有另外的溶剂的情况下进行。如果需要另外的溶剂促进反应，则诸如DMF或NMP的溶剂是适合的。不特别限制反应温度。适合的反应温度包括室温至80°C、优选室温。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至1周、优选1-48小时。
本领域的技术人员会理解可将中间体醇盐淬灭，分离，并纯化，然后施加独立的烷基化条件。该反应可以在与醇化合物的O-烷基化反应中通常使用的那些条件(诸如Tetrahedron Lett.2005,46,7751-7755中描述的条件)相同的条件下进行。在该反应中，化合物A-(17)可以通过例如以下步骤获得：通过向中间体醇在THF中的溶液中加入碱、诸如氢化钠以制备醇盐，然后将该醇盐与溴乙酸叔丁酯反应。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如THF、DMF和二甲基亚砜的溶剂。该反应可以在此类溶剂的存在下通过引起1至3当量的适当的碱发挥作用而进行。所使用的碱的实例包括氢化钠、氢化钾和叔丁醇钾。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时、优选0.5至12小时。反应温度通常为-20°C至50°C。
可以通过在该反应中加入盐、诸如四丁基碘化铵实现更优选的结果，诸如改善的收率。
或者，可以通过在相转移条件下进行烷基化反应从中间体烯丙基醇得到化合物A-(17)。不特别限制该反应的溶剂，只要其不干扰该反应、且与水不混溶即可。适合的溶剂的实例包括但不限于二氯甲烷和氯仿。使用的碱是水溶性的，所述碱的实例包括但不限于氢氧化钠水溶液和氢氧化钾水溶液。此外，该反应需要加入相转移催化剂。适合的相转移催化剂的实例包括但不限于四丁铵盐、例如四丁基硫酸氢铵。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至40°C。
步骤C-(iii):
该步骤是两步骤的连续的反应，从化合物A-(17)通过将酯基脱保护、然后形成Weinreb酰胺得到化合物A-(18)。
具体而言，可以将化合物A-(17)的叔丁基酯在与叔丁基酯化合物的脱保护中通常使用的那些条件(例如在文献诸如T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基),第三版”,John Wiley&Sons(1999),p.404-408中所述的条件)相同的条件下脱保护。在该反应中，例如，化合物A-(17)可以与适合的酸在适合的溶剂诸如作为溶剂和酸的甲酸中反应。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至60°C。
然后通过与N,O-二甲基盐酸羟胺在标准的酰胺形成条件下进行反应可以将中间体酸转化为Weinreb酰胺(Tetrahedron Lett.1981,22,3815)，即通过使用缩合剂将中间体酸与N,O-二甲基盐酸羟胺缩合。或者，该步骤是通过将中间体酸与N,O-二甲基盐酸羟胺通过酰化反应缩合而获得化合物A-(18)的步骤。
使用缩合剂进行的中间体酸与N,O-二甲基盐酸羟胺的缩合反应可以在与通常使用的那些条件相同的或以下文献中所述的条件下进行。已知方法的实例包括J.Med.Chem.,1991,34(1),227-234；Heterocycles,1991,32(10),1968-1972和J.Med.Chem.,1994,37(7),998-1014中的那些。
N,O-二甲基羟胺可以是游离形式或盐。
不特别限制该反应中的溶剂，只要其不抑制反应即可。溶剂的实例包括四氢呋喃、1,4-二
Figure BDA00003544663600421
烷、乙酸乙酯、乙酸甲酯、二氯甲烷、氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、甲苯、乙腈和二甲苯。缩合剂的实例包括CDI(N,N'-羰二咪唑)、Bop(1H-1,2,3-苯并三唑-1-基氧基(三(二甲基氨基))磷六氟磷酸盐)、DCC(N,N-二环己基碳二亚胺)、氰基磷酸二乙酯、PyBOP(苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐)和WSC/EDC.HCl(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)。适合的条件包括活化酸的试剂、诸如N,N’-羰基二咪唑。可使用相对于中间体酸而言1当量至大量过量的N,O-二甲基盐酸羟胺。当需要是可加入1当量至大量过量的有机碱诸如三乙胺。
不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度根据所使用的原料、溶剂等而变化，且不特别限制。可接受冰冷的温度至溶剂回流的温度、优选冰冷的温度至室温。
步骤C-(iv):
该步骤是通过将有机金属(芳基锂试剂或格氏试剂)试剂与Weinreb酰胺A-(18)反应(如Tetrahedron Lett.1981,22,3815中所述)获得化合物A-(19)的步骤。
可以例如在与如Tetrahedron Lett.1981,22,3815中所述的那些条件相同的条件下进行该步骤中的反应。
可以通过本领域技术人员已知的方法制备芳基锂试剂或格氏试剂。具体而言，相应的苯基锂试剂或苯基镁(格氏)试剂可以通过例如芳基卤化合物与商购可得的有机金属试剂、诸如烷基锂试剂诸如正、仲或叔丁基锂或格氏试剂、诸如异丙基溴化镁或金属镁之间的卤素-金属交换反应制备。
该步骤中使用的溶剂根据所使用原料和试剂而变化，且不特别限制，只要其不抑制反应、允许原料在其中溶解至一定程度、且在反应期间总是惰性的即可。优选的溶剂的实例包括诸如乙醚、四氢呋喃、1,4-二烷、1,2-二甲氧基乙烷、苯和甲苯的有机溶剂、及其混合溶剂。不特别限制反应时间，且通常为0.1至48小时，优选为0.1至12小时。反应温度根据所使用原料和试剂等而变化，且优选保持低温，例如，在-78至-60°C，尽管可使用高至0°C、10°C或甚至室温的温度，这取决于两种组分的反应性，例如当有机金属试剂为格氏试剂时。
步骤C-(v):
该步骤是通过化合物A-(19)的肟化获得化合物A-(20)的步骤。
该步骤中的反应可以在与羰基化合物的肟化反应中经常使用的那些条件相同的条件下进行，诸如Org.Lett.2007,9,753-756；Tetrahedron:Asymmetry1994,5,1018-1028和Tetrahedron,1998,54,5868-5882中描述的条件。
具体而言，例如化合物A-(20)可以通过在碱存在或碱不存在的情况下将化合物A-(19)与羟胺或羟胺盐(例如盐酸羟胺或硫酸羟胺)进行反应得到。
不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制反应即可。优选的溶剂的实例包括例如乙醇、甲醇、四氢呋喃、1,4-二
Figure BDA00003544663600432
烷、1,2-二甲氧基乙烷和二氯甲烷的有机溶剂、及这些溶剂的混合物、以及水。使用的碱的实例包括醋酸钠、吡啶、氢氧化钠、氢氧化铯、氢氧化钡和2,6-二甲基吡啶。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至24小时，优选为5分钟至12小时。反应温度通常为-20°C至溶剂回流的温度、且更优选0°C至溶剂回流的温度。
步骤C-(vi):
该步骤是通过链烯基肟A-(20)的热分子内环加成获得化合物A-(21)的步骤。
该反应在添加剂、例如氢醌存在下进行。
不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制反应即可。适合的反应溶剂包括高沸点溶剂、诸如二甲苯。不特别限制反应温度、且通常为80–200°C或溶剂回流温度。不特别限制反应时间，且通常为0.5至48小时，优选为0.5至24小时。
步骤C-(vii):
该步骤是通过使化合物A-(21)进行N-O键的还原裂解反应获得化合物A-(22)的步骤。
该反应可以在通用制备方法A、步骤A-(ii)中所述的条件下进行。
步骤C-(viii):
该步骤是从化合物A-(22)获得化合物A-(23)的步骤。硫脲衍生物A-(23)可以从化合物A-(22)通过本领域技术人员已知的方法得到。
该反应可以在通用制备方法A、步骤A-(iii)中所述的条件下进行。
步骤C-(ix):
该步骤是通过将化合物A-(23)环化获得化合物A-(24)的方法。化合物A-(24)是化合物A-(7)(当R是CH2F时)的衍生物。
该反应可以在通用制备方法A、步骤A-(iv)中所述的条件下进行。
D.通用制备方法D:
Figure BDA00003544663600441
在所述式中，X如上文所定义。
通用制备方法D是通过步骤D-(i)至步骤D-(iV)的多个步骤从作为原料的化合物A-(25)制备化合物A-(2)(当PG是Tr时)供选择的方法。A-(2)是本发明的化合物(I)的中间体。
化合物A-(25)的制备在通用制备方法F和G中描述。
步骤D-(i):
该步骤是获得化合物A-(26)的步骤，通过用碱和烷基化剂(氯乙酰基)吗啉处理醇A-(25)，得到化合物A-(26)。
本领域的技术人员会理解该反应可以在与醇化合物的O-烷基化反应中通常使用的那些条件(诸如Tetrahedron Lett.2005,46,7751-7755中描述的条件)相同的条件下进行。在该反应中，化合物A-(25)可以通过例如以下步骤获得：通过向中间体醇在THF中的溶液中加入碱、诸如氢化钠以制备醇盐，然后将该醇盐与溴乙酸叔丁酯反应。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如THF、DMF和二甲基亚砜的溶剂。该反应可以在此类溶剂的存在下通过引起1至3当量的适当的碱发挥作用而进行。使用的碱的实例包括氢化钠、氢化钾和叔丁醇钾。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为-20°C至50°C。
可以通过在该反应中加入盐、诸如四丁基碘化铵实现更优选的结果，诸如改善的收率。
或者，化合物A-(26)可以从化合物A-(25)通过在相转移条件下进行烷基化反应得到。不特别限制该反应的溶剂，只要其不干扰该反应、且与水不混溶即可。适合的溶剂的实例包括但不限于二氯甲烷和氯仿。使用的碱是水溶性的，所述碱的实例包括但不限于氢氧化钠水溶液和氢氧化钾水溶液。此外，该反应需要加入相转移催化剂。适合的相转移催化剂的实例包括但不限于四丁铵盐、例如四丁基硫酸氢铵。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至40°C。
步骤D-(ii):
该步骤是通过将有机金属(芳基锂试剂或格氏试剂)试剂与化合物A-(26)反应(如Synlett1997,12,1414中所述)获得化合物A-(27)的步骤。
例如可以在与如Synlett1997,12,1414中所述的那些条件相同的条件下进行该步骤中的反应。
可以通过本领域技术人员已知的方法制备芳基锂试剂(包括杂环)或格氏试剂(包括杂环)。具体而言，相应的苯基锂试剂或苯基镁(格氏)试剂可以通过例如芳基卤化合物与商购可得的有机金属试剂、诸如烷基锂试剂诸如正、仲或叔丁基锂或格氏试剂、诸如异丙基溴化镁或金属镁之间的卤素-金属交换反应制备。通过使用异丙基溴化镁–氯化锂复合物可得到更有利的结果。
该步骤中使用的溶剂根据所使用原料和试剂而变化，且不特别限制，只要其不抑制反应、允许原料在其中溶解至一定程度、且在反应期间总是惰性的即可。优选的溶剂的实例包括诸如乙醚、四氢呋喃、14-二
Figure BDA00003544663600461
烷、1,2-二甲氧基乙烷、苯和甲苯的有机溶剂、及其混合溶剂。不特别限制反应时间，且通常为0.1至48小时，优选为0.1至12小时。反应温度根据所使用原料和试剂等而变化，且优选保持低温，例如，在-78至-60°C，尽管可使用高至0°C、10°C或甚至室温的温度，这取决于两种组分的反应性，例如当有机金属试剂为格氏试剂时。
步骤D-(iii):
该步骤是通过化合物A-(27)的肟化获得化合物A-(28)的步骤。
该步骤中的反应可以在与羰基化合物的肟化反应中经常使用的那些条件相同的条件下进行，诸如Org.Lett.2007,9,753-756；Tetrahedron:Asymmetry1994,5,1018-1028和Tetrahedron,1998,54,5868-5882中描述的条件。
具体而言，例如化合物A-(28)可以通过在碱存在或碱不存在的情况下将化合物A-(27)与羟胺或羟胺盐(例如盐酸羟胺或硫酸羟胺)进行反应得到。
不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制反应即可。优选的溶剂的实例包括例如乙醇、甲醇、四氢呋喃、1,4-二
Figure BDA00003544663600462
烷、1,2-二甲氧基乙烷和二氯甲烷的有机溶剂、及这些溶剂的混合物、以及水。使用的碱的实例包括醋酸钠、吡啶、氢氧化钠、氢氧化铯、氢氧化钡和2,6-二甲基吡啶。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至24小时，优选为5分钟至12小时。反应温度通常为-20°C至溶剂回流的温度、且更优选0°C至溶剂回流的温度。
步骤D-(iv):
该步骤是通过链烯基肟A-(28)的热分子内环加成获得化合物A-(2)(当PG是Tr时)的步骤。
该反应可以在通用制备方法C、步骤C-(vi)中所述的条件下进行。
E.通用制备方法E:
Figure BDA00003544663600471
在所述式中，X如上文所定义。
通用制备方法E是从作为原料的化合物A-(25)经过步骤E-(i)至步骤E-(iii)的多个步骤制备作为本发明的化合物(I)的中间体的化合物A-(27)供选择的方法。
化合物A-(25)的制备在通用制备方法F和G中描述。
步骤E-(i):
该步骤是，通过用碱和烷基化剂溴乙酸叔丁酯处理醇A-(25)，将化合物A-(25)烷基化以得到化合物A-(29)的步骤。
本领域的技术人员会理解该反应可以在与醇化合物的O-烷基化反应中通常使用的那些条件(例如在Tetrahedron Lett.46(2005)45,7751-7755中描述的条件)相同的条件下进行。在该反应中，化合物A-(25)可以通过例如以下步骤获得：通过向中间体醇在THF中的溶液中加入碱、诸如氢化钠以制备醇盐，然后将该醇盐与溴乙酸叔丁酯反应。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如THF、DMF和二甲基亚砜的溶剂。该反应可以在此类溶剂的存在下通过引起1至3当量的适当的碱发挥作用而进行。使用的碱的实例包括氢化钠、氢化钾和叔丁醇钾。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为-20°C至50°C。
可以通过在该反应中加入盐、诸如四丁基碘化铵实现更优选的结果，诸如改善的收率。
或者，可以通过在相转移条件下进行烷基化反应从化合物A-(25)得到化合物A-(29)。不特别限制该反应的溶剂，只要其不干扰该反应、且与水不混溶即可。适合的溶剂的实例包括但不限于二氯甲烷和氯仿。使用的碱是水溶性的，所述碱的实例包括但不限于氢氧化钠水溶液和氢氧化钾水溶液。此外，该反应需要加入相转移催化剂。适合的相转移催化剂的实例包括但不限于四丁铵盐、例如四丁基硫酸氢铵。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至40°C。
步骤E-(ii):
该步骤是两步骤的连续的反应，从化合物A-(29)通过将酯基脱保护、然后形成Weinreb酰胺得到化合物A-(30)。
该反应可以在通用制备方法C、步骤C-(iii)中所述的条件下进行。
步骤E-(iii):
该步骤是通过将有机金属(芳基锂试剂或格氏试剂)试剂与化合物A-(30)进行反应(如Tetrahedron Lett.1981,22,3815中所述)获得化合物A-(27)的步骤。
该反应可以在通用制备方法C、步骤C-(iv)中所述的条件下进行。
F.通用制备方法F:
Figure BDA00003544663600481
通用制备方法F是通过步骤F-(i)从作为原料的化合物A-(28)制备作为本发明的化合物(I)的中间体的化合物A-(25)的方法。
化合物A-(28)可商购获得。
该步骤是获得化合物A-(25)的步骤，通过使用锍叶立德打开环氧化物A-(28)，得到烯丙基醇A-(25)。本领域的技术人员会理解可未经分离而将烯丙基醇A-(25)直接转化为诸如A-(26)、A-(29)或A-(30)的化合物。本领域的技术人员能理解该转化可以以一锅法或作为两个独立的反应进行。本领域的技术人员会理解一锅法反应与操作两个分开的反应相比的优点和缺陷，并相应地根据它们的需求选择最好的方法。
具体而言，环氧化物A-(28)可以通过三甲基碘化锍的阴离子和结果失去二甲硫醚而开环，得到相应的烯丙基醇盐。三甲基碘化锍可以使用适合的碱、例如丁基锂去质子化。只要不干扰该反应，不特别限制该反应中使用的溶剂。适合的溶剂的实例包括THF。本领域的技术人员会理解在该情况中，措辞溶剂用于指在其中进行反应的液体，且试剂可能不被其溶解。优选地该反应应当在室温以下、优选-30–20°C进行。一旦加入后，将反应混合液温至室温以促进反应。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至24小时、优选为1-6小时。
本领域的技术人员会理解从该反应生成的醇盐可与烷基化剂直接反应，诸如与溴乙酸叔丁酯反应得到A-(29)，或者与4-(氯乙酰基)-吗啉反应得到A-(26)，且该反应可在有或没有另外的溶剂的情况下进行。如果需要另外的溶剂促进反应，则诸如DMF或NMP的溶剂是适合的。不特别限制反应温度。适合的反应温度包括室温至80°C、优选室温。不特别限制反应时间，且通常为5分钟至1周、优选1-48小时。
本领域的技术人员会理解可将中间体醇盐淬灭，分离，并纯化，然后施加独立的烷基化条件。该反应可以在与醇化合物的O-烷基化反应中通常使用的那些条件(诸如Tetrahedron Lett.2005,46,7751-7755中描述的条件)相同的条件下进行。在该反应中，化合物A-(29)可以通过例如以下步骤获得：通过向中间体醇在THF中的溶液中加入碱、诸如氢化钠以制备醇盐，然后将该醇盐与溴乙酸叔丁酯反应。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括诸如THF、DMF和二甲基亚砜的溶剂。该反应可以在此类溶剂的存在下通过引起1至3当量的适当的碱发挥作用而进行。使用的碱的实例包括氢化钠、氢化钾和叔丁醇钾。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至12小时。反应温度通常为-20°C至50°C。
可以通过在该反应中加入盐、诸如四丁基碘化铵实现更优选的结果，诸如改善的收率。
G.通用制备方法G:
Figure BDA00003544663600501
通用制备方法G是通过步骤G-(i)从作为原料的化合物A-(31)制备作为本发明的化合物(I)的中间体的化合物A-(25)的供选择的方法。
可商购获得外消旋形式的化合物A-(31)。本领域的技术人员会理解化合物A-(31)可以以外消旋形式或对映异构纯形式使用。
具体而言，该步骤是选择性保护化合物A-(31)的伯醇的步骤，且可以使用一系列本领域技术人员已知的保护基团完成该反应。本领域的技术人员会理解经常选择大保护基团用于该类型的转化。
所述保护基团的一个实例是三苯甲基(三苯基甲基)保护基团。
本领域的技术人员会理解可选择多种适合的醇保护基团，且保护基团的选择受其化学稳定性和脱保护所需的条件所影响。适合的保护基团在T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基),第三版”,John Wiley&Sons(1999)中描述。
当保护基团为三苯甲基(三苯基甲基)时，用于脱保护的适合的条件可以在T.W.Greene和P.G.M.Wuts,“Protective Groups in OrganicChemistry(有机化学中的保护基),第三版”,John Wiley&Sons(1999),P.102-104中找到。
例如，通过用三苯甲基氯(三苯基甲基氯)处理化合物A-(31`)，可以从A-(31)制备化合物A-(25)。不特别限制该反应中使用的溶剂，只要其不抑制该反应、且允许原料在其中溶解至一定程度即可。溶剂的实例包括甲苯或二氯甲烷。本领域的技术人员会理解碱的使用可促进反应或改善反应收率。适合的碱的实例包括但不限于三乙胺和二异丙基乙胺。不特别限制反应时间，且通常为0.5至72小时，优选为0.5至24小时。反应温度通常为冰冷的温度至溶剂回流的温度、优选为冰冷的温度至40°C。
以下将参照实施例、制备实施例和试验例更具体地描述本发明。然而，本发明不限于此。实施例中所用的缩写是本领域技术人员公知的常规缩写。一些缩写如下所示：
LCMS,LC/MS&LC-MS(液相色谱法/质谱法)；MS(质谱法)；MDAP(质谱引导的自动纯化)；NMR(核磁共振)；s,d,t,dd,m,br(单峰,双峰,三重峰,双二重峰,多重峰,宽峰)；Ph,Me,Et,Pr,Bu,Bn(苯基,甲基,乙基,丙基,丁基,苄基)；THF(四氢呋喃)；DCM(二氯甲烷)；DMF(N,N-二甲基甲酰胺)；h,hr,hrs(小时)；EDC&EDAC(N-3-(二甲基氨基丙基)-N’乙基碳二亚胺盐酸盐)；DMAP(4-N,N-二甲基氨基吡啶)；DMSO(二甲基亚砜)；UV(紫外线)；RT&rt(室温)；Rt(保留时间)；min&mins(分钟)；EtOAc(乙酸乙酯)；Et2O(乙醚)；MeCN(乙腈)；EtOH(乙醇)；MeOH(甲醇)；PhCH3&PhMe(甲苯)；tlc(薄层色谱法)；TFA(三氟乙酸)；NaOH(氢氧化钠)；HCl(盐酸)；NMP(N-甲基吡咯烷酮或1-甲基-2-吡咯烷酮)；HPLC(高效液相色谱法)；TBAF(氟化四丁铵)；BuLi(正丁基锂)；PyBOP:苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐；Pd2dba3:三(二亚苄基丙酮)二钯；Pd(t-Bu3P)2:双(三-叔丁基膦)钯；TFA:三氟乙酸；pTLC:制备级薄层色谱法；HRMS(高分辨质谱)；Tr或Trt(三苯甲基或三苯基甲基)。
在以400MHz的(报告)频率操作的Bruker AM系列波谱仪记录1HNMR谱。以相对于四甲基硅烷的δ单位(ppm)记录质子核磁共振谱中的化学位移且以赫兹(Hz)记录偶合常数(J)。将峰模式称为s：单峰，d：双峰，t；三重峰，br；宽峰。
在下列实施例和制备例中的“室温”通常意指约10℃－约35℃。除非另有指定，否则“%”表示wt%。
使用ChemBioDraw Ultra11.0和12.0由化学结构生成化学名。
附图说明：图1是来自化合物4-(9)的手性HPLC分离的典型的色谱图。
实施例1:N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H- 呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺(实施 例1-(14))的合成
Figure BDA00003544663600521
1-(2)(3aR,4S,6aS)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六氢呋 喃并[3,4-c]异 唑的合成
在N2气氛下在-78°C将正丁基锂在己烷中的溶液(2.50M；29.8mL)滴加至1-溴-2,3-氟苯(2.93mL)在THF/甲苯(15mL/150mL)中的溶液中。将该反应溶液在相同的温度搅拌30分钟。然后在相同的温度将三氟化硼-乙醚复合物(9.2mL)和(3aR,4S)-4-((三苯甲基氧基)甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600523
唑(17.0g)在甲苯(50mL)中的溶液依次滴加至该反应溶液中。在相同的温度搅拌60分钟后，将NH4Cl水溶液(饱和，50mL)小心地加入该反应溶液中，随后温至室温。然后将盐水(200mL)加入该反应溶液中，并将该混合液用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥，并通过过滤分离不溶物质。将滤液浓缩，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(梯度：从0%至20%的在DCM:己烷1:3中的EtOAc)，得到标题化合物(15.51g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.18-3.38(m,2H),3.44-3.54(m.,1H),3.83–3.99(m,2H),4.04–4.38(br.s.,2H),5.35(s,1H),7.03-7.51(m,18H)
1-(3)((2S,3R,4S)-4-氨基-4-(2,3-二氟苯基)-2-((三苯甲基氧基)甲基)四 氢呋喃-3-基)甲醇
在0°C将锌粉(20.0g)加入在制备实施例1-(2)中得到的(3aR,4S,6aS)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600531
唑(15.51g)在乙酸(120mL)中的溶液中。将该反应溶液温至室温，并搅拌18小时。将不溶物质经由
Figure BDA00003544663600532
通过过滤分离，使用乙酸(100mL)和AcOEt(300mL)洗涤，并将滤液浓缩。小心地加入饱和的NaHCO3水溶液以中和残余物，并将该混合液用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，并蒸发，得到标题化合物(15.42g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.60-2.68(m,1H),2.85(brs,3H),3.29(d,J=4.8Hz,2H),3.66(dd,J=12.1,4.8Hz,1H),3.89-3.99(m,2H),4.31(d,J=9.1Hz,1H),4.34-4.40(m,1H),7.04-7.19(m,2H),7.20-7.33(m,10H),7.39-7.50(m,6H)
1-(4)N-(((3S,4R,5S)-3-(2,3-二氟苯基)-4-(羟基甲基)-5-((三苯甲基氧基) 甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺
将苯甲酰异硫氰酸酯(6g)滴加至在制备实施例1-(3)中得到的((2S,3R,4S)-4-氨基-4-(2,3-二氟苯基)-2-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃-3-基)甲醇(15.42g)在CH2Cl2(80mL)中的溶液中，并将该混合液在室温搅拌18小时。加入EtOAc，并将该混合液用NaHCO3(3x100mL)萃取，经MgSO4干燥，蒸发，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(0%至30%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(19.06g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):3.00(t,J=6.2Hz,1H),3.08-3.17(m,1H),3.26(dd,J=10.2,4.2Hz,1H),3.38(dd,J=10.2,3.9Hz,1H),3.73-3.95(m,2H),4.04-4.12(m,1H),4.54(d,J=9.6Hz,1H),4.69(d,J=9.9Hz,1H),7.05–7.68(m,21H)7.88(d,J=7.1Hz,2H),8.88(s,1H),11.83(s,1H)
1-(5)N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-((三苯甲基氧基)甲 基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺
将在制备实施例1-(4)中得到的N-(((3S,4R,5S)-3-(2,3-二氟苯基)-4-(羟基甲基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺(19.06g)溶于DCM(75mL)中。加入吡啶(8.6mL)，并将该混合液冷却至0°C。滴加三氟甲磺酸酐(9.6mL)，并将该反应混合液在0°C搅拌。90分钟后，通过小心地加入NaHCO3(饱和的水溶液，250mL)将该反应淬灭，并用EtOAc(3x250mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，在真空下浓缩，并经硅胶柱色谱纯化(0%至30%的EtOAc/己烷)，得到标题化合物(14.52g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.63-2.76(m,1H),3.07–3.24(m,2H),3.32-3.52(m,3H),3.99-4.11(m,1H),4.53–4.63(m,2H),7.09-7.56(m,21H),8.08–8.30(m,2H)
1-(6)N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(羟基甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺的合成
将在制备实施例1-(5)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(8.42g)混悬于甲醇(100mL)中，并加入水(3mL)和浓盐酸(5mL)。将该反应混合液剧烈搅拌过夜，然后减压浓缩至约30mL的体积。然后将该混合液用NaHCO3(饱和的水溶液，100mL)小心地中和，并用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(0%至50%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(4.20g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.94(br.s.,1H),2.83(d,J=10.6Hz,1H),3.14-3.49(m,2H),3.77(d,J=8.8Hz,1H),3.97(dd,J=11.7,2.7Hz,1H),4.08(d,J=6.3Hz,1H),4.46-4.63(m,2H),7.07-7.25(m,3H),7.37-7.60(m,3H),8.00–8.26(m,2H)
1-(7)N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-甲酰基-4a,5,7,7a-四氢-4H- 呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺的合成
将在制备实施例1–(6)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(羟基甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(4.20g)溶于DCM(60mL)中，并将该溶液冷却至0°C。历经10分钟分批加入1,1,1-三(乙酰基氧基)-1,1-二氢-1,2-苯并碘杂氧杂戊环-3(1H)-酮(5.50g)，并使该反应混合液温至室温。搅拌2小时后，加入NaHCO3(饱和的水溶液，100mL)，并将该混合液用DCM(3x150mL)萃取。将合并的有机部分经MgSO4干燥，并蒸发，得到标题化合物(3.04g,纯度约60%)，将其未经纯化地用于接下来的步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.97(dd,J=14.0,4.2Hz,1H),3.23(d,J=11.6Hz,1H),3.29–3.38(m,1H),4.08-4.18(m,1H),4.56-4.83(m,2H),7.11-7.24(m,3H),7.39-7.64(m,3H),7.98-8.18(m,2H),9.96(d,J=1.0Hz,1H)。
1-(8)N-((4aS,5S,7aS)-5-(二氟甲基)-7a-(2,3-二氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺的合成
将在制备实施例1-(7)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-甲酰基-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(3.04g，纯度约60%)溶于DCM(50mL)中，并将该溶液冷却至0°C。然后滴加二乙基氨基三氟化硫(0.99mL)，使该反应混合液加温，并在室温搅拌。2小时后，通过加入NaHCO3(饱和的水溶液，100mL)将该反应混合液淬灭，并用DCM(2x150mL)萃取。将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(5%至50%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(757mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.89(dd,J=13.8,3.7Hz,1H),3.22(d,J=13.1Hz,1H),3.46–3.61(m,1H),4.02(d,J=8.8Hz,1H),4.56(d,J=9.1Hz,1H),4.62-4.72(m,1H),5.86–6.18(m,1H),7.08-7.25(m,3H),7.40-7.63(m,3H),7.96–8.16(br.s.,2H)。
1-(9)(4aS,5S,7aS)-5-(二氟甲基)-7a-(2,3-二氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H- 呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺的合成
将在制备实施例1-(8)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-5-(二氟甲基)-7a-(2,3-二氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(891mg)溶于甲醇(10mL)中，加入1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(1.02g)，并将该溶液加热至回流(加热块温度70°C)。16小时后，将该反应混合液冷却，减压浓缩，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(0%至80%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(565mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.88(dd,J=13.4,4.0Hz,1H),3.13(dd,J=13.6,3.3Hz,1H),3.24(dt,J=7.7,3.7Hz,1H),3.89(d,J=8.3Hz,1H),4.33-4.70(m,4H),5.94(td,J=56.3,3.8Hz,1H),7.05-7.25(m,3H)
1-(10)(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a- 四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺的合成
将在制备实施例1-(9)中得到的(4aS,5S,7aS)-5-(二氟甲基)-7a-(2,3-二氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(565mg)溶于TFA(3mL)中，并将该溶液冷却至0°C。加入硫酸(浓硫酸，0.8mL)、随后历经20分钟滴加发烟硝酸(0.08mL)。在0°C搅拌90分钟后，将该反应混合液小心地用NaHCO3(饱和的水溶液，50mL)中和，用EtOAc(3x100mL)萃取，并将合并的有机部分经MgSO4干燥，并蒸发。将残余物经硅胶柱色谱纯化(0%至80%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(700mg，纯度约80%)，将其未经纯化地用于接下来的步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.04(dd,J=14.0,3.9Hz,1H),3.23-3.31(m,1H),3.59(d,J=3.0Hz,1H),4.23(d,J=9.9Hz,1H),4.44-4.60(m,2H),6.02(t,J=57.6Hz,1H),8.02-8.26(m,2H)
1-(11)((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a- 四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯的合成
将在制备实施例1-(10)中得到的(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(700mg，纯度约80%)溶于THF(10mL)中，历经20分钟分批加入二碳酸二叔丁酯(450mg)，并将该反应混合液加热至60°C。以两小时间隔加入两批另外的二碳酸二叔丁酯(250mg)。6小时后，将该反应混合液冷却，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，20mL)。然后将该混合液用EtOAc(3x50mL)萃取，并将合并的有机部分经MgSO4干燥，并蒸发。将残余物经硅胶柱色谱纯化(0%至50%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(489mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.53(s,9H),2.81(dd,J=13.9,4.0Hz,1H),2.98(dd,J=13.9,2.3Hz,1H),3.41(dd,J=7.3,3.5Hz,1H),3.86(d,J=8.3Hz,1H),4.46(d,J=8.6Hz,1H),4.52-4.71(m,1H),6.00(t,J=54.6Hz,1H),7.36(br.s.,1H),8.03-8.22(m,2H)
1-(12)((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a- 四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯的合成
将在制备实施例1-(11)中得到的((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(489mg)溶于乙醇(10mL)中，并加入氯化锡二水合物(800mg)。搅拌16小时后，加入NaOH(2N水溶液，20mL)，并将该混合液用EtOAc(2x50mL)萃取。将合并的有机部分经MgSO4干燥，并蒸发，得到标题化合物(457mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.52(m,9H),2.79(dd,J=13.8,3.9Hz,1H),3.08(d,J=13.6Hz,1H),3.34(d,J=3.5Hz,1H),3.70(br.s.,2H),3.85(d,J=8.3Hz,1H),4.40-4.62(m,2H),5.76-6.14(dt,J=4.0,56.6Hz,1H),6.28-6.38(m,1H),6.45(ddd,J=11.1,6.3,2.8Hz,1H)
1-(13)((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-(5-甲氧基吡嗪-2-甲酰氨基)苯 基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸 叔丁基酯的合成
将在制备实施例1-(13)中合成的((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(100mg)溶于DCM(2mL)中，并加入5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(50mg)、N,N-二异丙基乙胺(100mg)和(1H-苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐(175mg)。将该反应混合液在室温搅拌3天，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，25mL)。将该反应混合液用EtOAc(2x40mL)萃取，将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并经硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷梯度)，得到标题化合物(108mg)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.54(s,9H),2.82(dd,J=13.5,3.4Hz,1H),3.08(d,J=12.9Hz,1H),3.33–3.45(m,1H),3.84–3.93(m,1H),4.10(s,3H),4.46-4.65(m,2H),5.97(dt,J=3.8,56.6Hz,1H),7.08(br.s.,1H),7.27–7.36(m,1H),8.14(ddd,J=11.6,7.0,2.7Hz,1H),8.20(d,J=1.3Hz,1H),9.04(d,J=1.3Hz,1H),9.55(s,1H)
1-(14)N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃 并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺的合成
将在制备实施例1-(13)中合成的((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-(5-甲氧基吡嗪-2-甲酰氨基)苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(108mg)溶于DCM(2mL)中，并加入TFA(1mL)。在室温搅拌后2小时，将该反应混合液蒸发，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，25mL)。将该反应混合液用EtOAc(3x25mL)萃取，并将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并经硅胶色谱纯化，得到标题化合物，为白色固体(45mg)。1H NMR(400MHz,MeOD)δppm2.87-2.99(m,1H),3.17-3.26(m,2H),3.89(d,J=8.8Hz,1H),4.09(s,3H),4.39-4.59(m,2H),6.02(dt,J=3.8,55.8Hz,1H),7.48-7.63(m,1H),7.98(ddd,J=12.1,7.0,2.7Hz,1H),8.29(d,J=1.3Hz,1H),8.92(d,J=1.5Hz,1H)
实施例2:N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋 喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺的合成
2-(2)(R)-1-氯-3-氟丙-2-醇的合成
将吡啶氢氟酸盐(70%HF和30%吡啶复合物)(460mL，5.10mol)转移至带有磁性的涂覆特氟龙的搅拌棒的1L聚丙烯锥形瓶中。将烧瓶冷却至-30°C，并在反应期间使用涂覆PTFE的温度计监测内部温度。将吡啶(60mL，741.83mmol)以使内部温度不超过0°C的速度少量多次地注入。然后将反应容器转移至冰浴中，使内部温度成为0°C。使用带有针的注射泵或滴液漏斗滴加(R)-2-(氯甲基)环氧乙烷(60ml，765.2mmol)在DCM(60ml)中的溶液。历经140分钟的时间完成添加。将针的尾端(～2cm)浸入HF-吡啶混合液中是重要的。在添加期间，温度由0°C增加至4°C。将该混合液再搅拌30分钟，并缓慢倾至冰(1100g)-水(600mL)-NaCl(200g)-DCM(500mL)的混合液上。将有机层分离，并将水层用DCM(8x300mL)萃取。将合并的有机萃取物与NaHCO3(120mL)一起搅拌，经MgSO4干燥，并浓缩。(在蒸发的开始将水浴的温度保持低于20°C，且在末尾保持约10°C，保持压力在150毫巴)。得到粗制的产物(78.65g)，为黄色液体。
以相同的规格将以上试验重复13次，得到1020g粗制的物质。在40-50°C/8毫巴将粗制的产物减压蒸馏，得到标题化合物，为澄清的油状物(378.2g)。1H NMR(400MHz,CDCl3))δppm2.36-2.56(m,1H)3.61-3.73(m,2H)4.03-4.16(m,1H)4.47(dd,J=4.80,1.14Hz,1H)4.59(dd,J=4.80,1.01Hz,1H)
2-(3)(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)乙酸叔丁基酯的合成
在氮气下将(R)-1-氯-3-氟丙-2-醇(50.0g，444.37mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中。将该溶液冷却至-20°C。历经40分钟少量多次地加入(9批次～每次10g)双(三甲基硅基)氨基钾(89.8g，450.16mmol)，确保内部温度保持在-5°C至-10°C。然后将该反应混合液温至室温，并在氮气下搅拌过夜。
在不同的烧瓶中，将三甲基碘化锍(181.35g，888.65mmol)溶于THF中。将该溶液冷却至-30°C。历经25分钟加入双(三甲基硅基)氨基锂(888.65mL，1M在THF中的溶液，888.65mmol)。添加后，内部温度从-30°C增加至-26°C。将该反应混合液在-30°C搅拌30分钟。向该溶液中加入(S)-2-(氟甲基)环氧乙烷溶液(在之前的烧瓶制备)。在-30°C历经5分钟完成添加。然后将该反应混合液温至室温，并搅拌3小时。然后使用冰浴将其冷却至3°C(内部温度)，并加入1-甲基-2-吡咯烷酮(100mL)。内部温度上升至8°C。使用滴液漏斗滴加在1-甲基-2-吡咯烷酮(100mL)中的溴乙酸叔丁酯(131.22mL，888.65mmol)，并确保温度保持在17-20°C之间。将该反应混合液在冰浴中搅拌10分钟直至温度达到5°C。除去冰浴，并将该反应混合液在室温搅拌过夜。将水(2L)倾入该反应混合液中，随后加入Et2O(1L)。搅拌10分钟后，将两层分离，并将水层用Et2O(4x500mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，并浓缩。将粗制的产物经硅胶柱色谱纯化(开始时使用己烷、然后使用5%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物，为黄色液体(57g，63%)。
以相同的规格将以上反应重复3次，得到168g标题化合物。在0.3毫巴和80-95°C通过减压蒸馏将其进一步纯化，得到产物，为澄清的液体(93.88g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.48(s,9H)4.01(s,1H)4.05(s,1H)4.12-4.22(m,1H)4.36-4.44(m,1H)4.48-4.57(m,1H)5.33-5.51(m,2H)5.67-5.82(m,1H)
2-(4)(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺的合成
将(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)乙酸叔丁基酯(96.26g，471.31mmol)冷却至0°C。加入甲酸(354mL)。使该混合液温至室温，并搅拌过夜。然后将该反应混合液减压浓缩(水浴温度40°C)。将残余物与甲苯(3x100mL)共沸，得到羧酸，为深棕色油状物。将残余物溶于DCM(720mL)中，在冰浴冷却至3°C的内部温度。历经10分钟分批加入N,N’-羰基二咪唑(87.88g，542.00mmol)，确保内部温度不超过8°C。然后除去冰浴，并将该混合液在室温搅拌48分钟。然后将其在冰浴中冷却直至3°C的内部温度。历经10分钟加入N,O-二甲基盐酸羟胺(55.17g，565.57mmol)(内部温度上升至8°C)。使该反应混合液温至室温，并搅拌过夜。加入2N HCl(500mL)，并将两层分离。将水层用DCM(2x200mL)萃取，并将合并的有机部分经MgSO4干燥，并蒸发。使用EtOAc作为洗脱剂将粗制的产物经NH硅胶垫过滤纯化，得到产物，为浅黄色液体(70g，366.10mmol)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.01(s,3H)3.50(s,3H)3.99-4.11(m,1H)4.11-4.20(m,2H)4.23-4.27(m,1H)4.35-4.39(m,1H)5.16-5.31(m,2H)5.60(ddd,J=17.43,10.29,7.26Hz,1H)。
2-(5)((S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)-1-(2-氟苯基)乙酮的合成
历经20分钟在N2气氛下在-78°C将正丁基锂在己烷中的溶液(2.50M；176.52mL，441.29mmol)滴加至2-溴氟苯(49.00mL，451.88mmol)在THF(670mL)中的溶液中。在添加期间将该反应的温度保持-60°C。将该黄色溶液在-78°C搅拌30分钟。滴加(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(67.50g，353.03mmol)在THF(100mL)中的溶液，保持内部温度低于-60°C。将该反应混合液在-78°C搅拌45分钟。将NH4Cl水溶液(200mL)加入该反应溶液中，将该反应溶液温至室温，加入EtOAc(700mL)。将两层分离。将水层用EtOAc(300mL)萃取。将合并的有机部分用水(9300mL)洗涤，经MgSO4干燥(40g)，并浓缩。将粗制的产物经硅胶柱色谱纯化(1%至10%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物，为黄色液体(63.78g，80%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm4.16-4.31(m,1H)4.42-4.51(m,1H)4.54-4.61(m,1H)4.67-4.88(m,2H)5.35-5.52(m,2H)5.80(ddd,J=17.43,10.29,7.26Hz,1H)7.11-7.19(m,1H)7.24-7.31(m,1H)7.49-7.60(m,1H)7.92-8.00(m,1H)。
2-(6)(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)-1-(2-氟苯基)乙酮肟的合成
将(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)-1-(2-氟苯基)乙酮(63.25g，279.59mmol)溶于无水甲醇(620mL)中，并加入盐酸羟胺(25.26g，363.47mmol)和乙酸钠(34.40g，419.39mmol)。将该反应混合液加热至50°C达90分钟，然后冷却至室温。然后将其经由Celite过滤，用EtOAc(600mL)洗涤，并在真空下浓缩。将EtOAc(500mL)加入粗制的产物中、随后加入水(600mL)。将两层分离，并将水层用EtOAc(2x500mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，并浓缩。将粗制的产物经硅胶色谱纯化(10%至50%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物，为澄清的油状物。其以几何异构体的混合物存在(67.76g，100%)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.91-4.06(m,1H)4.16-4.19(m,1H)4.29(d,J=5.56Hz,1H)4.78(d,J=0.76Hz,2H)5.24-5.43(m,2H)5.57-5.77(m,1H)7.06-7.14(m,1H)7.15-7.24(m,1H)7.35-7.41(m,1H)7.47(td,J=7.45,1.77Hz,1H)9.24(br.s,1H)。
2-(7)(3aR,4S,6aS)-4-(氟甲基)-6a-(2-氟苯基)六氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600621
唑 的合成
将(S)-2-((1-氟丁-3-烯-2-基)氧基)-1-(2-氟苯基)乙酮肟(67.5g，279.81mmol)溶于二甲苯(560mL)中，并加入氢醌(5.54g，50.36mmol)。将该反应混合液加热至回流(加热块温度145°C)达5小时。将该反应混合液冷却至室温，并将溶剂蒸发。将残余物通过柱色谱经氨基硅胶(30%的在己烷中的EtOAc)纯化，得到标题化合物，为黄色油状物(50.53g，75%)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm3.32-3.42(m,1H)3.96(dd,J=10.11,1.52Hz,2H)4.16-4.43(m,2H)4.44-4.83(m,2H)5.38(s,1H)7.09(dd,J=11.75,8.72Hz,1H)7.18(td,J=7.58,1.26Hz,1H)7.28-7.34(m,1H)7.71(br.s.,1H)。
2-(8)((2S,3R,4S)-4-氨基-2-(氟甲基)-4-(2-氟苯基)四氢呋喃-3-基)甲醇 的合成
将(3aR,4S,6aS)-4-(氟甲基)-6a-(2-氟苯基)六氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600631
唑(62.20g，257.14mmol)溶于乙酸(540mL)中，并将该溶液冷却至0°C。历经15分钟加入锌粉(168.14g，2571.4mmol)。反应温度从8°C上升至16°C。添加后除去冰浴，并使该反应混合液温至室温。内部温度增加至40°C，并逐步降至24°C。将该反应混合液在室温搅拌16小时。将该反应混合液经由Celite过滤，并用1.5LEtOAc洗涤。将溶剂蒸发，并将粗制的产物溶于氯仿(600mL)中，使用滴液漏斗缓慢加入氨(28%水溶液，240mL)。内部温度上升至40°C。将各层分离，并将水层用氯仿(3x250mL)进一步萃取。将合并的有机萃取物经无水MgSO4干燥，并蒸发，得到标题化合物(63.00g，100%)，其未经进一步纯化地用于下一步骤中。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.39-2.86(m,4H)3.81(dd,J=11.87,4.55Hz,1H)3.94(dd,J=9.09,3.03Hz,1H)4.07(dd,J=12.13,4.04Hz,1H)4.25(d,J=9.09Hz,1H)4.40-4.68(m,3H)7.09(ddd,J=12.57,8.15,1.26Hz,1H)7.17(td,J=7.58,1.26Hz,1H)7.28-7.34(m,1H)7.49(td,J=8.08,1.77Hz,1H)
2-(9)N-(((3S,4R,5S)-5-(氟甲基)-3-(2-氟苯基)-4-(羟基甲基)四氢呋喃-3- 基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺的合成
将((2S,3R,4S)-4-氨基-2-(氟甲基)-4-(2-氟苯基)四氢呋喃-3-基)甲醇(62.72g，257.84mmol)溶于无水二氯甲烷(500mL)中。将该溶液冷却至0°C。历经30分钟加入苯甲酰异硫氰酸酯(38.16mL，283.62mmol)在DCM(40mL)中的溶液。内部温度从5°C增加至7°C。使该混合液温至室温，并在室温搅拌55分钟。除去溶剂，得到橙色泡沫。将残余物用1:9MeOH:EtOAc(500mL)溶液研磨，并将固体过滤，得到第一批产物(10.50g)。除去溶剂，并将残余物用9:1MeOH:EtOAc(300mL)溶液研磨，得到第2批(55.80g)产物。将母液蒸发，并将残余物用9:1MeOH:EtOAc(100mL)研磨，得到第3批产物(4.32g)。再进行两次研磨，得到第4批(3.88g)和第5批(4.10g)。最后将残余物通过柱色谱经氨基硅胶纯化(70%-80%的在己烷中的EtOAc)，得到0.35g产物。总共得到78.95g标题化合物，为白色固体,75%收率。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.03(br.s.,1H)3.10(td,J=8.21,4.29Hz,1H)3.92-4.26(m,3H)4.42-4.74(m,4H)7.04(ddd,J=12.25,8.21,1.26Hz,1H)7.19(td,J=7.71,1.26Hz,1H)7.28-7.36(m,1H)7.50-7.58(m,2H)7.62-7.68(m,1H)7.73(td,J=8.02,1.64Hz,1H)7.87(dd,J=8.46,1.14Hz,2H)8.89(s,1H)11.82(s,1H)
2-(10)N-((4aS,5S,7aS)-5-(氟甲基)-7a-(2-氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋 喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺的合成
将N-(((3S,4R,5S)-5-(氟甲基)-3-(2-氟苯基)-4-(羟基甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺(78.70g，193.63mmol)溶于吡啶(391mL，5190.48mmol)中，并将该混合液冷却至0°C。历经40分钟滴加三氟甲磺酸酐(43.98mL，261.40mmol)(内部温度从4°C增加至18°C)。将该反应混合液在冰浴中搅拌1小时25分。通过缓慢加入氯化铵(饱和的水溶液，260mL)、然后加入水(390mL)将其淬灭。将水层用EtOAc(3x500mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，在真空下浓缩，并经硅胶柱色谱纯化(20%至60%EtOAc/己烷)，得到标题化合物(70.86g，94%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.83(dd,J=13.64,3.79Hz,1H)3.30(dd,J=13.89,3.54Hz,1H)3.38-3.47(m,1H)4.07(dd,J=9.22,2.65Hz,1H)4.51-4.78(m,4H)7.15(ddd,J=12.44,8.15,1.14Hz,1H)7.22(td,J=7.58,1.26Hz,1H)7.34-7.41(m,1H)7.41-7.48(m,3H)7.49-7.56(m,1H)8.10-8.18(m,2H)。
2-(11)(4aS,5S,7aS)-5-(氟甲基)-7a-(2-氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃 并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺的合成
将N-((4aS,5S,7aS)-5-(氟甲基)-7a-(2-氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(70.56g，181.65mmol)溶于甲醇(420mL)中，加入1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(55.73mL，372.69)，并将该溶液加热至回流(加热块温度80°C)达5小时。将该反应混合液减压浓缩，并将残余物经硅胶柱色谱纯化(10%至50%的在己烷中的EtOAc)，得到标题化合物(46.05g，89%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.79(dd,J=13.39,4.04Hz,1H)2.98-3.05(m,1H)3.12(dd,J=13.39,3.54Hz,1H)3.87(dd,J=8.46,2.65Hz,1H)4.46(br.s.,2H)4.48-4.67(m,4H)7.06(ddd,J=12.57,8.15,1.26Hz,1H)7.15(td,J=7.58,1.26Hz,1H)7.24-7.31(m,1H)7.44(td,J=8.08,2.02Hz,1H)。
2-(12)(4aS,5S,7aS)-7a-(2-氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺的合成
将(4aS,5S,7aS)-5-(氟甲基)-7a-(2-氟苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(45.85g，161.26mmol)溶于TFA(192mL)中，并将该溶液冷却至0°C。历经25分钟先后滴加硫酸(为浓硫酸，33.65mL，161.26mmol)、发烟硝酸(7.78mL，185.44mmol)。在0°C搅拌30分钟后，将该反应混合液倾至冰(500g)/CHCl3(500mL)上，并用6N NaOH(水溶液)碱化至pH12。将两层分离，并将水层用CHCl3(2x500mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，并浓缩，得到产物，为浅橙色泡沫(52.11g，98%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.80(dd,J=13.26,3.92Hz,1H)3.03(dt,J=7.77,3.82Hz,1H)3.08(dd,J=13.39,3.28Hz,1H)3.85(dd,J=8.84,2.27Hz,1H)4.49-4.67(m,4H)7.22(dd,J=10.99,8.97Hz,1H)8.16-8.23(m,1H)8.43(dd,J=6.82,2.78Hz,1H)。
2-(13)((4aS,5S,7aS)-7a-(2-氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯的合成
在室温在氮气下将(4aS,5S,7aS)-7a-(2-氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(52.0g，157.90mmol)溶于THF(440mL)中。在室温通过注射器滴加三乙胺(37.41mL，268.43mmol)。将该溶液冷却至0°C。历经15分钟分批加入在THF(50mL)中的二碳酸二叔丁酯(51.69g,236.85mmol)(内部温度保持4°C)。将该反应混合液在冰浴中搅拌15分钟，将其温至室温，并搅拌过夜。TLC显示原料剩余。将该反应混合液冷却至0°C。加入三乙胺(22mL，157.90mmol)，随后加入在THF(10mL)中的二碳酸二叔丁酯(17.23g,78.95mmol)。将该反应混合液温至室温，并在氮气下搅拌过夜。将THF蒸发直至剩余～300mL。加入EtOAc(1L)，并将得到的沉淀过滤，得到25.34g产物，为白色固体。将THF(100mL)和饱和的NH4Cl水溶液(0.5L)加入滤液中。将两层分离，并将水层用EtOAc(2x250mL)萃取。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，并浓缩。将EtOAc(500mL)加入残余物中，并将沉淀过滤，得到产物，为白色固体(36.16g)。总共得到61.50g，90.7%收率。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.53(s,9H)2.73(dd,J=13.64,4.04Hz,1H)2.98(d,J=13.14Hz,1H)3.18(br.s.,1H)3.84(d,J=8.08Hz,1H)4.45-4.74(m,4H)7.19-7.26(m,1H)7.35(br.s.,1H)8.16-8.26(m,1H)8.27-8.36(m,1H)
2-(14)((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2-氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯的合成
将((4aS,5S,7aS)-7a-(2-氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(67.99g，158.32mmol)溶于乙醇(500mL)中。在室温历经20分钟分批加入氯化锡二水合物(125.03g，554.13mmol)。加入氯化锡后该反应的内部温度从18°C变为12°C。将得到的黄色混悬液在室温搅拌。在室温搅拌40分钟后，混悬液转变为澄清的溶液，且内部温度上升至40°C。最后在搅拌20分钟后，内部温度降至23°C。将该反应混合液在室温搅拌过夜(16小时)。在0°C将该反应混合液历经20分钟缓慢倾至冷却的NaOH溶液(2N水溶液，1L)和
Figure BDA00003544663600661
(～110g)上。将得到的混合液经由更多的
Figure BDA00003544663600662
过滤，并用EtOAc(2L)萃取。将两层分离。将合并的有机萃取物用水(500mL)和盐水(500mL)洗涤，经MgSO4干燥，并蒸发，得到标题化合物，为黄色固体(59.28g，94%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.51(s,9H)2.70(dd,J=13.71,3.60Hz,1H)3.11(d,J=12.51Hz,1H)3.21(br.s.,1H)3.64(br.s.,2H)3.87(d,J=7.45Hz,1H)4.48-4.69(m,4H)6.54-6.66(m,2H)6.87(dd,J=11.94,8.53Hz,1H)
2-(15)((4aS,5S,7aS)-7a-(2-氟-5-(5-甲氧基吡嗪-2-甲酰氨基)苯基)-5-(氟 甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯的 合成
向((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2-氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(4.70g)和5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(2.65g)在DCM(60mL)中的搅拌的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(8.0mL)和(1H-苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐(9.0g，历经10分钟分批加入)。将该反应混合液在室温搅拌18小时，在真空下浓缩至约20mL，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，100mL)。将该反应混合液用EtOAc(2x150mL)萃取，将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并经硅胶色谱纯化(0%至50%在DCM中的EtOAc梯度)，得到标题化合物(6.71g，纯度约90%)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.54(m,9H),2.71–2.83(br.s.,1H),3.03–3.34(br.s.,1H),3.81–4.01(br.s.,1H),4.09(m,3H),4.48-4.75(m,4H),7.05-7.20(m,1H),7.36-7.58(m,1H),7.93–8.02(m,1H),8.20(d,J=1.3Hz,1H),9.04(d,J=1.3Hz,1H),9.53(br.s.,1H)
2-(16)N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并 [3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺的合成
将在制备实施例2-(2)中合成的((4aS,5S,7aS)-7a-(2-氟-5-(5-甲氧基吡嗪-2-甲酰氨基)苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(6.71g，纯度约90%)溶于DCM(20mL)中，并加入TFA(10mL)。在室温搅拌后2小时，将该反应混合液蒸发，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，50mL)。将该反应混合液用EtOAc(2x100mL)萃取，并将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并经硅胶色谱纯化(0%至50%在DCM中的EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(3.26g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.81(dd,J=13.4,3.8Hz,1H),3.08(dt,J=7.7,3.7Hz,1H),3.18(dd,J=13.4,3.3Hz,1H),3.88(dd,J=8.6,2.5Hz,1H),4.09(s,3H),4.43-4.73(m,6H),7.10(dd,J=11.9,8.8Hz,1H),7.55(dd,J=7.1,2.8Hz,1H),7.91-8.00(m,1H),8.17(d,J=1.3Hz,1H),9.04(d,J=1.0Hz,1H),9.51(s,1H)
实施例3:N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H- 呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺的合成
Figure BDA00003544663600681
3-(2)((4aS,5S,7aS)-5-(二氟甲基)-7a-(2-氟-5-(5-甲氧基吡嗪-2-甲酰氨基) 苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯的 合成
向((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2-氟苯基)-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(2.70g)和5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(1.25g，在WO2009/091016中描述)在DCM(30mL)中的搅拌的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(3.5mL)和(1H-苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷-1-基)磷六氟磷酸盐(4.2g)。将该反应混合液在室温搅拌18小时，在真空下浓缩至约20mL，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，100mL)。将该反应混合液用EtOAc(2x150mL)萃取，将合并的有机部分经MgSO4干燥，蒸发，并经硅胶色谱纯化(0%至25%在DCM中的EtOAc梯度)，得到标题化合物(1.74g)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm1.54(s,9H),2.76–2.88(m,1H),2.95-3.28(m,1H),3.34-3.53(m,1H),3.83–3.93(m,1H),4.10(s,3H),4.46-4.68(m,2H),5.98(dt,J=3.6,56.8Hz,1H),7.07-7.20(m,1H),7.36–7.48(m,1H),7.96-8.04(d,J=7.8Hz,1H),8.20(d,J=1.0Hz,1H),9.04(d,J=1.3Hz,1H),9.53(br.s.,1H)
3-(3)N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃 并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺的合成
将在制备实施例3-(2)中合成的((4aS,5S,7aS)-5-(二氟甲基)-7a-(2-氟-5-(5-甲氧基吡嗪-2-甲酰氨基)苯基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.74g)溶于DCM(20mL)中，并加入TFA(10mL)。在室温搅拌后2小时，将该反应混合液蒸发，并加入碳酸氢钠(饱和的水溶液，50mL)。将该反应混合液用EtOAc(2x100mL)萃取，并将合并的有机部分经MgSO4干燥，并蒸发，得到标题化合物，为白色固体(1.33g)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.89(dd,J=13.6,3.8Hz,1H),3.18(dd,J=13.3,2.9Hz,1H),3.29–3.37(m,1H),3.90(d,J=7.3Hz,1H),4.09(s,3H),4.41–4.70(m,4H),5.96(dt,J=4.5,56.1Hz,1H),7.12(dd,J=11.9,8.8Hz,1H),7.50-7.62(m,1H),7.97(dt,J=8.7,3.3Hz,1H),8.17(d,J=1.3Hz,1H),9.04(d,J=1.0Hz,1H),9.52(s,1H)
实施例4:N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋 喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BDA00003544663600701
步骤4-(2):1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-醇
Figure BDA00003544663600702
在室温向三苯基甲基氯(3.31kg,11.87mo1，0.99当量)在甲苯(6.74kg)中的溶液中加入丁-3-烯-1，2-二醇(1.06kg，12.02mol，1.0当量)。将该反应混合液冷却至0°C。将三乙胺(2.72kg，26.91mol，2.24当量)缓慢加入该反应混合液中，同时保持温度低于5°C，随后加入4-二甲基氨基吡啶(8.38g，0.068mol，5.71mmol)。使该反应混合液温至10°C，然后加热至40°C。将该反应混合液在40°C搅拌过夜。随后对该反应混合液进行TLC(Rf0.45，用庚烷/EtOAc20%)分析。将该反应混合液冷却至26.5°C，过滤，并将固体用甲苯(2.72kg)冲洗。将滤液用28%NH4Cl水溶液(3.38kg)和饱和的NaCl水溶液(1.26kg)相继洗涤。然后将有机相减压浓缩，得到油状物，为粗制的混合物(3.95kg)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm7.42(dd,J=8.3,1.0Hz,6H),7.33(dd,J=10.5,4.8Hz,6H),7.30–7.19(m,3H),5.94–5.83(m,1H),5.25(td,J=17.3,1.8Hz,1H),5.08(td,J=10.9,1.8Hz,1H),2.99(dd,J=8.9,6.3Hz,1H),2.84(dd,J=8.9,5.7Hz,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δ144.35,140.07,128.78,128.26,127.39,115.04,86.25,70.88,68.27。
HRMS对于C23H22O2[M+Na]+计算值353.1517；实测值353.1543。
4-(3):2-((1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基)氧基)乙酸叔丁基酯
在氮气气氛下制备四丁基硫酸氢铵(367g，1.08mol，0.1当量)在甲苯(4.63kg)中的混悬液，并将其冷却至0°C。缓慢加入50%NaOH水溶液(9.09kg)，保持温度低于50°C。缓慢加入来自步骤4-(2)的粗制的混合物(在甲苯中的3.95kg1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-醇，总重量6.34kg)，保持温度低于15°C。将该反应混合液搅拌15分钟。加入溴乙酸叔丁酯(1.01kg，5.19mol，0.43当量)，形成浆体。加入水(1kg)、然后加入溴乙酸叔丁酯(1.55kg，7.95mol，0.66当量)，同时保持温度在30°C以下。将该反应混合液搅拌过夜。随后对该反应混合液进行TLC(Rf0.60，用庚烷/EtOAc20%)分析。加入水(9.72kg)和2-甲氧基-2-甲基丙烷(10.4kg)，然后将该反应混合液用水(3.90kg)和饱和的NaCl水溶液(0.63kg)相继洗涤。然后将有机相减压浓缩，得到粗制的混合物(4.70kg)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.47(dt,J=7.9,3.9Hz,6H),7.27–7.19(m,6H),7.14(dd,J=14.2,6.9Hz,3H),5.81–5.70(m,1H),5.28(d,J=17.2Hz,1H),5.21(d,J=9.9Hz,1H),4.10–3.94(m,3H),3.34(dt,J=17.7,8.8Hz,1H),3.18(dd,J=9.6,5.3Hz,1H),1.43(s,9H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ169.48,143.95,135.69,128.69,127.67,126.86,118.47,86.62,81.07,80.74,66.75,66.41,28.05。
HRMS对于计算值C29H22O4[M+Na]+467.2193；实测值467.2198。
4-(4):2-((1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基)氧基)乙醛
Figure BDA00003544663600721
将来自步骤4-(3)的粗制的混合物(2-((1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基)氧基)乙酸叔丁基酯3.01kg，6.771mol，1.00当量)溶于CH2Cl2(5.81L)中。将该反应混合液冷却至-78°C。分批加入DIBAL(1.5M，在甲苯中，4.14L，6.19mol，1.00当量)，同时保持温度在-65°C以下。将该反应混合液在-78°C再搅拌30分钟。将HCl水溶液(4.00L，2.0M)缓慢加入该反应混合液中，同时保持温度低于-60°C。然后将该反应温至至16.8°C。将HCl水溶液(2.0M，3.50L)缓慢加入该反应混合液中。将有机相萃取，然后用HCl水溶液(1M,7.50L)和10%NaHCO3水溶液(3.75L)相继洗涤。将有机相以粗制的溶液用于下一步骤中(11.48kg)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm9.62(s,1H),7.43(dd,J=8.3,0.9Hz,6H),7.32(dd,J=13.5,5.6Hz,6H),7.25(t,J=7.3Hz,3H),5.81–5.70(m,1H),5.30(dd,J=17.3,1.0Hz,1H),5.24(dd,J=10.4,0.8Hz,1H),4.19(q,J=18.2Hz,2H),4.05(dd,J=11.4,6.2Hz,1H),3.16(dd,J=9.7,6.3Hz,1H),3.05(dd,J=9.7,4.4Hz,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm201.70,144.14,135.92,128.75,128.32,127.48,119.01,86.55,80.79,74.60,66.57。
4-(5):2-((1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基)氧基)乙醛肟
Figure BDA00003544663600731
将CH2Cl2(7.76kg)加入来自步骤4-(4)的粗制的溶液(11.48kg总重量)中。加入NaOAc(1.11kg，13.54mol)，并将该反应混合液在18.7°C搅拌30分钟。加入盐酸羟胺(706g，10.16mol)，并将该反应混合液在18.9°C再搅拌18小时。加入水(10.1L)。将该两相的混合液搅拌45分钟。将有机相分离，然后用10%NaHCO3水溶液(5.04l)洗涤。然后将有机相减压浓缩，得到粗制的混合物(2.67kg)，为绿色油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.52–7.49(m,0.5H),7.48–7.43(m,6H),7.29–7.21(m,6H),7.20–7.13(m,3H),6.96(t,J=3.6Hz,0.5H),5.73–5.64(m,1H),5.24(dd,J=17.3,1.1Hz,1H),5.18(dd,J=10.5,0.5Hz,1H),4.43(dd,J=16.4,3.5Hz,0.51H),4.36(dd,J=16.4,3.7Hz,0.5H),4.17(dd,J=12.9,5.3Hz,0.5H),4.07(dd,J=12.9,6.1Hz,0.5H),3.93–3.81(m,1H),3.32–3.25(m,1H),3.15–3.08(m,1H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δppm151.59,148.71,143.92,135.37,135.18,128.67,127.71,126.92,126.90,118.43,118.34,86.66,86.63,81.09,80.25,66.43,66.40,65.63,63.14。
注意：该化合物是异构体的混合物，这是大量碳峰和半整数质子积分的原因。
HRMS对于计算值C25H25NO3[M+Na]+410.1732；实测值410.1748。
4-(6):(3aR＊,4S＊)-4-((三苯甲基氧基)甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c] 异
Figure BDA00003544663600732
唑
Figure BDA00003544663600733
将来自步骤4-(5)的粗制的混合物(0.432kg)溶于2-甲氧基-2-甲基丙烷(2.16L)中，然后在氮气气氛下冷却至0°C。将5%NaOCl水溶液(4.66kg)加入(12.5mL/分钟)该反应混合液中，然后将该反应混合液在0°C搅拌3小时。将得到的白色混悬液温至室温，并搅拌过夜。将该混悬液过滤，并用冷的2-甲氧基-2-甲基丙烷(0.5L)冲洗固体。将收集的固体在真空干燥箱中干燥，得到标题化合物(195.1g)，为白色固体。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.43–7.38(m,6H),7.33–7.27(m,6H),7.27–7.21(m,3H),4.60–4.41(m,3H),4.08–3.89(m,3H),3.38(dd,J=9.8,4.4Hz,1H),3.28–3.18(m,1H)；13CNMR(125MHz,CDCl3)δppm168.82,143.58,128.53,127.93,127.23,86.91,80.83,73.00,64.80,61.52,58.72
HRMS对于计算值C25H23NO3[M+H]+386.1756；实测值386.1786。
4-(7):(3aR＊,4S＊,6aS＊)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六氢 呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600741
唑
Figure BDA00003544663600742
在-75至-69°C在氮气气氛下将2.50M正丁基锂在己烷中的溶液(197mL，0.493mol，1.90当量)滴加至1-溴-2,3-二氟苯(95.1g，0.493mol，1.90当量)在THF/甲苯(100mL/1000mL)中的溶液中。10分钟后，滴加三氟化硼-乙醚复合物(62.5mL，0.493mol)，同时保持温度在-71°C以下。加入之前制备(3aR＊,4S＊)-4-((三苯甲基氧基)甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600743
唑(100g，0.259mol，1.0当量)在THF(400mL)中的溶液，同时保持温度在-70°C以下。在-75°C搅拌1.5小时后，将饱和的NH4Cl水溶液(300mL)和水(100mL)缓慢加入(历经5分钟)该反应溶液中。加入2-甲氧基-2-甲基丙烷(300mL)，并将该反应混合液温至0°C。将有机相分离，并用27%NaCl水溶液(200mL)洗涤。将有机层减压浓缩，并从THF(200mL)/异丙醇(700mL)中再结晶。将标题化合物(87.5g)分离。1HNMR(500MHz,DMSO)δppm7.42–7.33(m,8H),7.31(t,J=7.6Hz,6H),7.28–7.21(m,3H),7.20–7.12(m,1H),6.39(s,1H),4.13(d,J=8.2Hz,1H),4.03(s,1H),3.97(s,1H),3.89(d,J=9.2Hz,1H),3.81–3.70(m,1H),3.36–3.29(m,1H),3.26(dd,J=10.1,6.0Hz,1H),3.15(dd,J=10.0,3.5Hz,1H)；13CNMR(125MHz,DMSO)δppm150.74(dd,JCF=246.4,14.4Hz),148.66(dd,JCF=248.3,13.5Hz),144.09,130.58,128.67,128.32,127.48,124.75,124.45,117.18(d,JCF=17.0Hz),86.57,84.91,78.16,76.81,64.82,56.46。
HRMS对于计算值C31H27F2NO3[M+Na]+522.1857；实测值522.1900。
4-(8):(2S＊,3R＊,4S＊)-4-氨基-4-(2,3-二氟苯基)-2-((三苯甲基氧基)甲基) 四氢呋喃-3-基)甲醇
Figure BDA00003544663600751
向(3aR＊，45＊，6aS＊)-6a-(2，3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600752
唑(87.5g，0.175mol，1.0当量)中加入乙酸(385mL)。将该混悬液冷却至15°C，并历经2-3分钟少量多次地加入锌(88.4g，1.35mol，7.71当量)。历经3-4小时将该反应混合液温至18°C，并搅拌9小时。将该反应混合液经Celite(40g)过滤，并用甲苯(210mL)冲洗。将收集的滤液减压浓缩，加热浴温度低于35°C，并用三批次甲苯(3x130mL)驱赶溶剂。将得到的油状物溶于CH2Cl2(320mL)中。加入水(195mL)、随后加入28%NH4OH(43.4mL)。将有机层分离，并将剩余的水相用CH2Cl2(130mL)萃取。将合并的有机相用27%NaCl水溶液(87.5mL)洗涤。将该溶液减压浓缩，溶于THF(270mL)中，并经由Celite过滤。将固体用THF(130mL)冲洗，并将合并的滤液在真空下浓缩，得到标题化合物(69.1g)，为泡沫。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm7.47(t,J=7.5Hz,1H),7.41(d,J=7.5Hz,6H),7.34–7.27(m,7H),7.28–7.21(m,3H),7.19–7.10(m,1H),4.14(d,J=8.7Hz,1H),4.15–4.09(m,1H),3.77(dd,J=8.6,2.6Hz,1H),3.59(dd,J=11.1,6.4Hz,1H),3.46(dd,J=11.1,6.6Hz,1H),3.18(dd,J=9.9,3.0Hz,1H),3.07(dd,J=9.9,5.8Hz,1H),2.62(dd,J=14.6,6.6Hz,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm150.68(dd,JCF=244.4,13.9Hz),148.46(dd,JCF=246.7,13.0Hz),144.36,135.44(d,JCF=8.1Hz),128.76,128.23,127.37,124.31,124.23,116.12(d,JCF=17.1Hz),86.29,81.48,78.92(d,JCF=4.3Hz),66.03,63.93,59.49,51.27
HRMS对于计算值C31H29F2NO3[M+Na]+524.2013；实测值524.2039。
4-(9):((2S,3R,4S)-4-氨基-4-(2,3-二氟苯基)-2-((三苯甲基氧基)甲基)四 氢呋喃-3-基)甲醇(-)二苯甲酰基-L-酒石酸
Figure BDA00003544663600761
手性拆分
将外消旋混合物(2S＊,3R＊,4S＊)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六氢呋喃并[3,4-c]异唑(69.1g，0.138mol，1.0当量)和(-)-二苯甲酰基-L-酒石酸(49.4g，0.138mol，1.0当量)溶于丙酮(346mL)中。然后历经15分钟将该混合液加热至61.9°C。加入甲苯(415mL)。然后将该溶液冷却至室温。然后将该反应混合液冷却至-5°C，并在此温度再搅拌1小时。将该混悬液过滤，并用甲苯/丙酮(V/V6/5,138mL，冷却至0°C)的溶液洗涤。将该固体在减压下干燥，并将标题化合物(44.5g)分离。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm8.00–7.95(m,4H),7.66(t,J=7.4Hz,2H),7.53(t,J=7.8Hz,4H),7.47–7.39(m,2H),7.40–7.35(m,6H),7.35–7.28(m,6H),7.28–7.23(m,3H),7.23–7.15(m,1H),5.75(s,1H),4.19(d,J=9.5Hz,2H),4.02(dd,J=9.5,2.1Hz,1H),3.61(dd,J=11.4,6.4Hz,1H),3.52(dd,J=11.4,6.2Hz,1H),3.21–3.14(m,1H),3.12–3.05(m,1H),2.77(dd,J=14.3,6.4Hz,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm168.07,165.23,150.68(dd,JCF=245.2,13.4Hz),148.27(dd,JCF=248.0,13.6Hz),144.18,134.09,129.75,129.60,129.24,128.70,128.28,127.45,124.88,124.20,117.40(d,JCF=16.8Hz),86.40,80.73,76.73,72.22,65.42,64.58,58.63,50.51。
HRMS对于计算值C31H29F2NO3[M+Na]+524.2013；实测值524.2047。手性HPLC参数:
仪器、试剂和流动相:
仪器:
Figure BDA00003544663600771
试剂:
Figure BDA00003544663600772
流动相:
将100mL2-丙醇和900mL庚烷(分别用100mL和1000-mL的刻度量筒测量)和0.5mL三乙胺(用玻璃容量吸移管测量)加入适合的烧瓶并混合。在使用时在线脱气。
稀释溶液：2-丙醇
HPLC参数:
Figure BDA00003544663600781
被测物和杂质的保留时间:
Figure BDA00003544663600782
图1显示来自化合物4-(9)的手性HPLC分离的典型的色谱图。
4-(10):N-(((3S,4R,5S)-3-(2,3-二氟苯基)-4-(羟基甲基)-5-((三苯甲基氧 基)甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺
Figure BDA00003544663600791
将((2S，3R，4S)-4-氨基-4-(2，3-二氟苯基)-2-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃-3-基)甲醇（-）二苯甲酰基-L-酒石酸(44.21g，0.05lmol，1.0当量)在EtOAc(133mL)中的混悬液冷却至1.7°C。加入NaOH水溶液(1.0M，121mL，0.12mol，2.4当量)，同时保持温度低于5°C。将该反应混合液搅拌5分钟，然后历经5分钟加入异硫氰酸苄酯(9.43g，0.058mol，1.12当量)。1.5小时后，加入EtOAc(133mL)。将有机相分离，并用饱和的NaHCO3水溶液(130mL)和18%NaCl水溶液(44mL)相继洗涤。将合并的水相用EtOAc(66mL)和CH2Cl2(30mL)萃取。将所有的有机相合并，过滤，并减压浓缩。在用CH2Cl2(88mL)驱赶剩余溶剂后，分离了泡沫状的标题化合物(34.2g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm11.97(br s,1H),11.20(br s,1H),7.94(d,J=7.4Hz,2H),7.63(t,J=7.4Hz,1H),7.51(t,J=7.8Hz,2H),7.38–7.21(m,17H),7.13(dd,J=13.4,7.9Hz,1H),5.13(t,J=4.4Hz,1H),5.07(d,J=9.7Hz,1H),4.47(d,J=9.8Hz,1H),4.24–4.16(m,1H),3.68(t,J=4.6Hz,2H),3.19(dd,J=10.1,2.9Hz,1H),3.01(dd,J=10.1,4.8Hz,1H),2.63–2.52(m,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm180.06,168.14,150.75(dd,JCF=244.6,13.2Hz),147.93(dd,JCF=247.5,13.5Hz),144.15,133.46,132.55.131.90(d,JCF=6.4Hz),129.04,128.86,128.67,128.28,127.43,124.41,124.25,116.12(d,JCF=17.0Hz),86.27,79.75,75.03,68.04,64.63,58.16,53.35。
HRMS对于计算值C39H34F2N2O4S[M+H]+663.2129；实测值663.2200。
4-(11):N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-((三苯甲基氧基)甲 基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺
在-20°C向N-(((3S，4R，5S)-3-(2，3-二氟苯基)-4-(羟基甲基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺(34.0g，0.0511mo1，1.0当量)在CH2Cl2(204mL)中的溶液中加入吡啶(10.3ml，0.128mol，2.50当量)。然后历经12分钟加入三氟甲磺酸酐(9.46mL，0.0563mol，1.10当量)在CH2Cl2(34mL)中的溶液，同时保持温度低于-17°C。将该反应混合液在-20°C搅拌30分钟，然后将其缓慢温至至5°C。加入饱和的NH4Cl水溶液(85mL)和水(32mL)。然后将水层用CH2Cl2(68mL)萃取。将有机相减压浓缩，得到标题化合物(33.6g)，为橙色泡沫。
HRMS对于计算值C39H32F2N2O3S[M+H]+647.2180；实测值647.2123。
4–(12):N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(羟基甲基)-4a,5,7,7a-四 氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA00003544663600802
将甲酸(116mL)加入N-((4aS，5S，7aS)-7a-(2，3-二氟苯基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)-4a，5，7，7a-四氢-4H-呋喃并[3，4-d][1，3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(33.30g，0.051mol，1.0当量)中，将该混合液在室温搅拌25分钟。滴加水(17mL)，然后将该反应混合液再搅拌30分钟。将得到的混悬液过滤；在真空下与甲苯(360mL)共沸蒸馏将滤液干燥。加入甲醇(110mL)、随后加入三乙胺(22mL，0.15mol，3.0当量)，并将该溶液搅拌2小时。将溶剂在真空下除去，并用甲苯(66mL)驱赶溶剂。将残余的油状物溶于CH2Cl2(250ml)中，并用HCl水溶液(1M,100mL)、饱和的NaHCO3水溶液(67mL)和18%NaCl水溶液(67mL)相继洗涤。将有机相减压浓缩。将甲苯(66mL)和THF(67mL)加入残余物中，然后将该溶液经由Celite过滤，并减压浓缩，得到标题化合物(21g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm8.11(dd,J=16.4,4.2Hz,2H),7.70–7.58(m,1H),7.57–7.44(m,3H),7.43–7.34(m,1H),7.34–7.26(m,1H),4.43(d,J=9.5Hz,1H),4.25–4.16(m,1H),4.10(d,J=9.2Hz,1H),3.59(d,J=4.5Hz,2H),3.30–3.21(m,1H),3.20–3.08(m,2H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm169.08,150.95(dd,JCF=245.8,13.1Hz),148.22,148.09(dd,JCF=248.7,13.2Hz),133.46,129.11,128.99,128.62,125.43,124.70,118.16(d,JCF=16.9Hz),81.36,75.29,66.76,62.39,40.77,24.25。
HRMS对于计算值C20H18F2N2O3S[M+H]+405.1084；实测值405.1081。
4-(13):N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺
Figure BDA00003544663600811
在氮气气氛下将N-((4aS，5S，7aS)-7a-(2，3-二氟苯基)-5-(羟基甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(21.0g，0.519mol，1.0当量)溶于干燥的THF(105mL)中，并将该溶液在0°C冷却。加入N,N-二异丙基乙胺(40.7mL，0.234mol，4.50当量)、三乙胺三氢氟酸盐(14.0mL，0.0857mol，1.65当量)和全氟丁基磺酰氟(22.4mL，0.125mol，2.40当量)，同时保持温度低于5°C。将该反应混合液在0°C搅拌3小时，然后缓慢温至RT，并搅拌11小时。向该反应混合液中加入饱和的NH4Cl(100mL)、随后加入2-甲氧基-2-甲基丙烷(100mL)。将有机相分离，并用HCl水溶液(1.0M，100ml)洗涤，浓缩，并再溶于2-甲氧基-2-甲基丙烷(301ml)中。然后将有机相用HCl水溶液(1M，63mL)、饱和的NaHCO3水溶液(100mL)洗涤。将最后的水层用2-甲氧基-2-甲基丙烷萃取。将合并的有机相用18%NaCl水溶液(63mL)洗涤，并减压浓缩，得到标题化合物(19.40g)，为泡沫。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm8.02(s,2H),7.61–7.51(m,1H),7.51–7.38(m,3H),7.39–7.18(m,2H),4.72–4.49(m,2H),4.48–4.37(m,1H),4.41(d,J=9.1Hz,21H),3.04(s,2H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm150.92(dd,JCF=245.5,13.3Hz),148.11(dd,JCF=248.2,13.4Hz),132.40,128.99,128.63,125.16,124.94,117.61,83.64(d,JCF=170.2Hz),79.51(d,JCF=18.4Hz),76.17,66.27,23.67。
HRMS对于计算值C20H17F3N2O2S[M+H]+407.1041；实测值407.1024。
4-(14):(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H- 呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺
Figure BDA00003544663600821
在氮气下将N-((4aS，5S，7aS)-7a-(2，3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a，5，7，7a-四氢-4H-吠喃并[3，4-d][1，3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(19.40g，0.048mo1，1.0当量)溶于甲醇(97mL)中。加入1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(8.92mL，0.060mol，1.25当量)，并将该溶液加热至55-60°C。8小时后，将该反应混合液减压浓缩，并将残余物经硅胶快速柱色谱(5%至100%的在庚烷中的EtOAc)纯化，得到标题化合物(9.01g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm7.38–7.28(m,1H),7.26–7.14(m,2H),6.12(s,2H),4.66–4.41(m,2H),4.37–4.27(m,2H),4.29(d,J=8.2Hz,1H),3.74(dd,J=8.2,2.6Hz,1H),3.30(s,1H),3.06–2.90(m,2H),2.79–2.71(m,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm150.84(dd,J=244.8,14.0Hz),149.71,148.07(dd,JCF=247.8,13.4Hz),133.08(d,JCF=7.7Hz),125.24,124.55(dd,JCF=7.2,4.3Hz),116.58(d,JCF=17.2Hz),83.91(d,JCF=170.0Hz),79.12(d,JCF=18.2Hz),77.96(d,JCF=4.9Hz),66.22,36.41(d,JCF=3.3Hz),23.40。
HRMS对于计算值C13H13F3N2OS[M+H]+303.0779；实测值303.0767。
4-(15):(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四 氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺
Figure BDA00003544663600831
将(4aS，5S，7aS)-7a-(2，3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a，5，7，7a-四氢-4H-呋喃并[3，4-d][1，3]噻嗪-2-胺(9.10g，0.03mol，1.0当量)溶于三氟乙酸(36.4mL)中，并将该溶液冷却至0°C。加入硫酸(为浓硫酸，12.0mL)、随后滴加发烟硝酸(6.9mL)，同时保持温度低于5°C。在0-5°C搅拌4小时后，将该反应混合液缓慢地加入剧烈搅拌的NaOH水溶液(43.3g，在273mL水中)中，同时保持温度低于20°C。将该反应混合液用CH2Cl2(1x94ml，and2x64mL)萃取，并将合并的有机相用NaCl饱和水溶液(46mL)洗涤。将Celite(15.0g)加入该有机物中，并将该混合液用CH2Cl2(40mL)洗涤过滤。将溶剂蒸发，得到标题化合物(8.3g)，将其未经纯化地用于接下来的步骤中。1HNMR(500MHz,DMSO)δppm8.41–8.30(m,1H),8.22–8.13(m,1H),6.36(s,2H),4.70–4.46(m,2H),4.43–4.31(m,1H),4.35(d,J=8.7Hz,1H),3.69(dd,J=8.5,1.6Hz,1H),3.04–2.91(m,2H),2.86–2.76(m,1H)；13CNMR(125MHz,DMSO)δppm152.36(dd,JCF=246.8,12.3Hz),151.13,150.32(dd,JCF=238.2,12.2Hz),143.25(dd,JCF=7.9,2.5Hz),134.70(d,JCF=9.5Hz),121.28,113.02(d,JCF=22.3Hz),83.74(d,JCF=170.1Hz),79.44(d,JCF=18.3Hz),78.02(d,J=3.9Hz),36.96,23.28。
HRMS对于计算值C13H12F3N3O3S[M+H]+348.0630；实测值348.0614。
4-(16):(4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四 氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺
Figure BDA00003544663600832
向铁(8.03g，0.144mol，6.0当量)中加入乙醇(66.56mL)、随后加入浓HCl(62%,1.2mL，0.014mol，0.60当量)。将该混合液加热至65°C达2小时，然后加入饱和的NH4Cl(33%,33.3mL)，并将反应温度保持在55°C。将(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(8.32g,0.024mol，1.0当量)和浓HCl(1.93mL，0.024mol，1.0当量)在乙醇(41.6mL)中的溶液加入铁混悬液中。将该反应混合液在55°C搅拌30分钟，然后加入乙醇(50mL)，并将该混悬液冷却至20°C，经由Celite(8.3g)过滤，并用乙醇(125mL)冲洗。将滤液减压浓缩，然后加入水(66mL)、随后加入3.0M NaOH水溶液(24mL，0.0179mol，3.0当量)。将得到的混合液用CH2Cl2(2x83mL)萃取。将有机相合并，经Celite过滤，并减压浓缩，得到标题化合物(7.60g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm6.42–6.35(m,2H),6.02(brs,2H),4.66–4.41(m,2H),4.37–4.25(m,1H),4.21(d,J=8.0Hz,1H),3.69(dd,J=7.8,2.2Hz,1H),2.97(qd,J=13.5,3.4Hz,3H),2.74–2.64(m,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm151.08(dd,JCF=240.1,14.8Hz),148.88,145.40(d,JCF=10.7Hz),139,33(dd,JCF=233.5,13.8Hz),132.53(d,JCF=8.1Hz),109.90,100.70(d,JCF=20.0Hz),83.99(d,JCF=169.9Hz),78.79(d,JCF=18.3Hz),77.99(d,JCF=5.5Hz),66.22,36.24,23.14。
HRMS对于计算值C13H14F3N3OS[M+H]+318.0888；实测值318.0874。
4-(17):N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃 并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺
Figure BDA00003544663600841
将5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(4.01g，0.026mol，1.10当量)在N，N，-二甲基咪唑啉-2-酮(22.5mL)中的混悬液在环境温度搅拌15分钟，然后冷却至0°C。加入亚硫酰氯(2.24mL，0.031mol，1.3当量)，同时保持温度低于10°C。将得到的混悬液在0-10°C搅拌2小时，这时其转变为澄清的溶液。在另一个容器中，将(4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(7.60g，0.024mol，1.0当量)溶于N,N’-二甲基咪唑啉-2-酮(22.5mL)中。将得到的溶液加入酰基氯的溶液中，同时保持温度低于10°C。将该反应混合液搅拌30分钟。加入水(112mL)，同时保持温度低于30°C。将得到的混合液搅拌30分钟，然后加入EtOAc(112mL)。向该混合液中加入50%NaOH(10.0g)水溶液直至水层的pH达到11。将水层用EtOAc(75mL)萃取。将有机物合并，用NaCl饱和水溶液(38mL)和水(38mL)洗涤。将有机物经硅胶垫(15g)过滤，并用EtOAc(37.5mL)冲洗。将有机物在真空下浓缩，得到固体。向该固体中加入1-丙醇(112mL)，并将该混悬液加热至100°C。将该混合液冷却至-10°C，并保持1小时。将固体过滤，用冷的1-丙醇(15mL)冲洗，并在真空下干燥(35°C)至恒重，得到标题化合物(8.18g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm10.73(s,1H),8.88(d,J=0.8Hz,1H),8.39(d,J=0.9Hz,1H),8.11–7.87(m,1H),7.73(d,J=5.0Hz,1H),6.07(s,2H),4.68–4.44(m,2H),4.41–4.28(m,1H),4.23(d,J=8.3Hz,1H),4.01(s,3H),3.82(dd,J=8.1,2.4Hz,1H),3.18(dd,J=13.5,3.5Hz,1H),3.01(dd,J=13.5,3.8Hz,1H),2.77–2.69(m,1H)；13C NMR(125MHz,DMSO)δppm162.24,162.20,150.05(dd,JCF=242.1,14.4Hz),149.37,144.42(dd,JCF=245.5,13.7Hz),142.18,138.09,134.73(dd,JCF=10.3,2.7Hz),134.03,133.22(d,JCF=9.1Hz),116.6,108.42(d,JCF=22.4Hz),83.98(d,JCF=169.9Hz),79.21(d,JCF=18.2Hz),77.96(d,JCF=5.2Hz),66.26,54.78,36.23,23.64。
HRMS对于C19H18F3N5O3S[M+H]+计算值454.1161；实测值454.1149。
比旋度[α]D+115.3(c0.584,MeOH)
比旋度参数:
设备:
旋光计:Perkin Elmer,341型或相当的设备
旋光管:Microglass旋光管，100mm光程长度，
1.0mL容量，Perkin-Elmer目录号B001-7047
天平:标刻度的分析天平，能称量±0.1mg
水浴:NESLAB RTE1121Chiller或相当的设备
测定体积的玻璃器A类
皿:
石英标准ID号098799,或相当的设备
旋光计:Perkin Elmer,341型或相当的设备
试剂:
甲醇:HPLC级，Baker(目录号9093-03)或相当的试剂
设备参数:
灯:Na/Hal,Perkin-Elmer目录号B000-8754
旋光管:Microcell(100mm),Perkin-Elmer目录号B004-1693
池长度:100mm(1分米)
模式:OROT
波长:589nm
池温度:20°C
积分时间:2秒
孔:MICRO
水浴温度:20±1°C
4-(7)(3aR＊,4S＊,6aS＊)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六氢 呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600861
唑的供选择的合成
Figure BDA00003544663600871
4-(18):1-吗啉代-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮
Figure BDA00003544663600872
向装有1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-醇(41.6g，0.111mo1，1.0当量)的反应器中加入甲苯(146mL)。将得到的溶液冷却至0-5°C，并加入四正丁基硫酸氢铵(7.52g，0.0222mol，0.20当量)。在0-5°C加入4-(氯乙酰基)吗啉(18.1g，0.111mol，1.00当量)。将氢氧化钠(50%wt.在水中；88.6g，1.10mol，10当量)冷却至15°C，并装入该反应混合液中，使T<10°C。将该反应混合液在T<15°C搅拌1小时，并监测1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-醇的消耗(目标>99%)。向将该反应混合液中装入2-甲氧基-2-甲基丙烷(146mL)和水(146mL)，使T<20°C。将有机物用18%NaCl水溶液(73mL)和饱和的NH4Cl水溶液(21mL)洗涤。将有机物经Celite(10.4g)过滤以除去微粒，并用2-甲氧基-2-甲基丙烷(83mL)冲洗。将溶剂在T<30°C在真空下蒸发，放置后，得到白色固体(55.0g，98.7%收率，有残余的溶剂的原因)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.46–7.41(m,6H),7.32–7.25(m,6H),7.25–7.18(m,3H),5.79–5.68(m,1H),5.28(d,J=17.0Hz,1H),5.26(d,J=10.1Hz,1H),4.20(d,J=12.7Hz,1H),4.10(d,J=12.7Hz,1H),3.97–3.88(m,1H),3.69–3.47(m,8H),3.25(dd,J=9.9,6.5Hz,1H),3.17(dd,J=9.9,4.3Hz,1H)；13CNMR(125MHz,CDCl3)δppm167.84,143.84,134.84,128.67,127.78,127.04,119.06,86.73,81.07,68.78,66.78,66.34,45.94,42.16。
4-(19):1-(2,3-二氟苯基)-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮
Figure BDA00003544663600881
在氮气下将异丙基氯化镁-LiCl复合物(1.30M在THF中155.0mL,0.0715mol)冷却至0-5°C，并加入2，3-二氟溴苯(13.8g，0.0715mol，1.50当量)，此时T<10°C。在0-5°C1小时后，加入1-吗啉代-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮(21.8g，0.048mol，1.0当量)在THF(2.0体积)中的溶液，此时T<10°C。将该反应混合液搅拌2.5小时，并监测1-吗啉代-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮的消耗(目标>97%)。通过加入冷的饱和的NH4Cl水溶液(110mL)和水(33mL)中将该反应混合液淬灭，此时T<20°C。加入2-甲氧基-2-甲基丙烷(218mL)，并将各层分离。将有机物用饱和的NH4Cl水溶液(65mL)和18%NaCl水溶液(44mL)洗涤。在T<25°C将有机物在真空下浓缩为淡黄色油状物(21.6g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.70–7.64(m,1H),7.47–7.42(m,6H),7.37–7.30(m,1H),7.30–7.25(m,6H),7.24–7.19(m,3H),7.19–7.13(m,1H),5.84–5.71(m,1H),5.30(d,J=17.3Hz,1H),5.25(d,J=10.4Hz,1H),4.78(dd,J=17.7,3.1Hz,1H),4.70(dd,J=17.7,3.1Hz,1H),4.03(dd,J=11.8,6.5Hz,1H),3.35(dd,J=9.8,6.4Hz,1H),3.18(dd,J=9.8,4.6Hz,1H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δppm194.15(dd,JCF=4.9,2.4Hz),150.77(dd,JCF=250.3,14.1Hz),150.29(dd,JCF=256.4,13.9Hz),143.98,135.34,128.75,127.76,126.95,125.70(d,JCF=12.0Hz),125.16(d,JCF=3.5Hz),124.55(dd,JCF=6.4,4.2Hz),121.62(d,JCF=17.6Hz),118.83,86.78,81.35,74.98(d,JCF=9.5Hz),66.71。
4-(20):1-(2,3-二氟苯基)-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮肟
Figure BDA00003544663600891
在环境温度向1-(2,3-二氟苯基)-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮(21.1g，0.0435mol，1.0当量)在MeOH(106mL)中的溶液中加入NaOAc(5.36g，0.0653mol，1.50当量)。5分钟后，分批加入NH2OH HCl(3.33g,0.048mol，1.10当量)。将该混悬液温至35°C，并搅拌1小时。将该反应混合液冷却至17.8°C，并搅拌15分钟，然后过滤，并用EtOAc(84mL)冲洗。将滤液在真空下浓缩(T<30°C)。向得到的残余物中加入2-甲氧基-2-甲基丙烷(169mL)和水(21.1mL)。将有机物用NaHCO3饱和水溶液(53mL)和18%NaCl水溶液(21mL)洗涤。将有机物在真空下浓缩，得到标题化合物，为油状物(21.0g)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.42–7.32(m,6H),7.30–7.15(m,10H),7.16–7.06(m,1H),7.03–6.95(m,1H),5.72–5.58(m,1H),5.24–5.13(m,2H),4.80(d,J=14.6Hz,1H),4.73(d,J=14.6Hz,1H),4.45(d,J=12.4Hz,0.3H),4.35(d,J=12.4Hz,0.3H),3.99–3.91(m,0.3H),3.91–3.83(m,1H),3.20(dd,J=9.9,6.8Hz,0.3H),3.09(dd,J=9.8,6.6Hz,1H),3.02(dd,J=9.9,4.2Hz,0.3H),2.95(dd,J=9.8,4.0Hz,1H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δppm155.40,150.59(dd,JCF=248.1,13.0Hz),148.86(dd,JCF=252.6,13.5Hz),143.96,135.10,128.73,128.69,127.72,127.68,126.92,126.85,124.96,124.56(d,JCF=10.6Hz),124.03–123.86(m),118.64(d,JCF=15.1Hz),117.92(d,JCF=17.2Hz),86.66,86.50,81.30,80.32,69.20,66.54,66.48,62.57。
4-(7):(3aR*,4S*,6aS*)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)六 氢呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600892
唑
Figure BDA00003544663600901
向1-(2，3-二氟苯基)-2-(1-(三苯甲基氧基)丁-3-烯-2-基氧基)乙酮肟(20.0g，0.0400mol，1.0当量)在甲苯(140mL)中的溶液中加入氢醌(0.0882g，0.008mol，0.2当量)。将该反应混合液加热至回流(110-115°C)，并保持13小时。将该反应混合液冷却至20-25°C，然后在真空下浓缩(T<45°C)。用2-丙醇(100mL)驱赶溶剂。向该粗制的残余物中加入异丙醇(140mL)，并将该混合液加热至65-70°C直至形成澄清的溶液。将该溶液以10°C/时冷却至0°C，然后保持1小时。将得到的混悬液过滤，并将该固体用冷的2-丙醇(40.0)冲洗。干燥后，得到粉末状的标题化合物(13.2g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm7.42–7.33(m,8H),7.31(t,J=7.6Hz,6H),7.28–7.21(m,3H),7.20–7.12(m,1H),6.39(s,1H),4.13(d,J=8.2Hz,1H),4.03(s,1H),3.97(s,1H),3.89(d,J=9.2Hz,1H),3.81–3.70(m,1H),3.36–3.29(m,1H),3.26(dd,J=10.1,6.0Hz,1H),3.15(dd,J=10.0,3.5Hz,1H)；13CNMR(125MHz,DMSO)δppm150.74(dd,JCF=246.4,14.4Hz),148.66(dd,JCF=248.3,13.5Hz),144.09,130.58,128.67,128.32,127.48,124.75,124.45,117.18(d,JCF=17.0Hz),86.57,84.91,78.16,76.81,64.82,56.46。
5-甲氧基吡嗪-2-甲酸的合成
将5-氯吡嗪-2-甲酸(5.0g，0.032mol)装入装配有热电偶、顶置式搅拌器和回流冷凝器的圆底烧瓶中。将甲醇(37.5mL，0.926mol)加入、随后加入浓硫酸(0.2mL，0.004mol)。将3-颈烧瓶装配加热罩，然后将该反应混合液加热至约65.0°C(内部温度)。将该反应混合液在约65.0°C(内部温度)继续搅拌约4小时。该反应混合液冷却至约25.8°C(内部温度)。加入甲醇(12mL，0.31mol；EMD；Lot50197)，并将该浆体在约22.3°C(内部温度)继续搅拌约15分钟，然后在氮气气氛下冷却至约10.0°C(内部温度)。将25%在甲醇中的甲醇钠(1:3，甲醇钠:甲醇，7.7mL)装入烧瓶中，同时将温度保持低于30.0°C(内部温度)。将该反应混合液调节至20.4°C(内部温度)。30分钟后，将氢氧化钠(2.0g，0.04mol)和水(37.5mL，2.08mol)合并形成溶液，然后将该溶液加入反应混合液中。加入水(50.0mL，2.78mol)，然后将该反应混合液加热至40.0°C(内部温度)达约60分钟。除去加热罩，然后该反应混合液冷却至约25.4°C(内部温度)。以使得温度保持低于30.0°C(内部温度)的速度(约5分钟)加入38%HCl水溶液(38:62,氯化氢:水，4.0mL)。将该粘稠的浆体在约21.4°C(内部温度)搅拌1小时，然后经烧结漏斗过滤。将固体用水(10.0mL，0.555mol)冲洗，并在真空下干燥过夜，得到5-甲氧基吡嗪-2-甲酸(3.59g)。1H NMR(500MHz,DMSO)δppm13.24(1H,br s),8.79(1H,d,J=1.2Hz),8.37(1H,d,J=1.2Hz),3.98(s,3H)；13CNMR(125MHz,DMSO)δppm165.36,161.88,143.88,136.82,135.55,54.69。
实施例4.N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-((S)-氟甲基)-4a,5-二氢-4H-呋喃 并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4,5-二氟苯基}-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺的供选择 的合成
Figure BDA00003544663600921
4-(22)(3aR,4S,6aS)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋 喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600922
唑(也称为1-(2))
在-78°C在氮气气氛下将正丁基锂在己烷中的溶液(2.76M，15ml)缓慢加入2-溴氟苯(5.07ml)在甲苯(400ml)和THF(40ml)中的溶液中。将得到的混合液搅拌30分钟，然后相继加入三氟化硼乙醚复合物(5.2ml)和(3aR,4S)-4-三苯甲基氧基甲基-3a,4-二氢-3H,6H-呋喃并[3,4-c]异
Figure BDA00003544663600923
唑(7.96g)在THF(60ml)中的溶液，同时保持内部温度低于-60°C。添加后，将得到的混合液在相同的温度搅拌2.5小时，然后加入过量的饱和的氯化铵水溶液，然后使该混合液温至室温。将有机物用EtOAc萃取，并将有机层用盐水洗涤。将得到的有机层经MgSO4干燥，并将该固体通过过滤除去。将滤液在真空下浓缩，并经硅胶柱色谱纯化(梯度：0%至40%的在庚烷中的EtOAc)。将得到的粗制的化合物混悬于庚烷中，并通过过滤收集该固体。将该固体在真空下干燥，得到标题化合物，为白色固体(7.76g)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):3.25-3.31(m,2H),3.47(bs,1H),3.87-4.22(m,4H),5.34(bs,1H),7.04-7.13(m,2H),7.22-7.31(m,9H),7.42-7.44(m,7H)
4-(23)((2S,3R,4S)-4-氨基-4-(2,3-二氟苯基)-2-三苯甲基氧基甲基四氢 呋喃-3-基)甲醇(也称为1-(3))
在室温将锌粉(10.1g)加入在制备实施例4-(22)中得到的(3aR,4S,6aS)-6a-(2,3-二氟苯基)-4-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃并[3,4-c]异唑(7.76g)在乙酸(75ml)中的混悬液中。将该混合液在室温搅拌11.5小时，然后将该固体经Celite过滤除去。将滤液在真空下浓缩，然后将残余物用EtOAc溶解。缓慢加入28%氨水溶液，并将有机层分离，用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。将该固体通过过滤除去，并将滤液减压浓缩。在室温将锌粉(10.1g)加入残余物在乙酸(75ml)中的混悬液中。后将该混合液在相同的温度搅拌11.5小时，将该固体经Celite过滤除去。将滤液在真空下浓缩，然后将残余物用EtOAc溶解。缓慢加入28%氨水溶液，并将有机层分离，用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。将该固体通过过滤除去，并将滤液减压浓缩。将粗制的混合物经氨基硅胶柱色谱纯化(梯度：50%至100%的在庚烷中的EtOAc)，得到标题化合物(7.04g)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.60-2.64(m,1H),3.27(d,J=4.8Hz,2H),3.61-3.65(m,1H),3.89-3.94(m,2H),4.30(d,J=9.2Hz,1H),4.33-4.37(m,1H),7.04-7.16(m,2H),7.20-7.30(m,10H),7.40-7.43(m,6H)
4-(24)N-(((3S,4R,5S)-3-(2,3-二氟苯基)-4-(羟基甲基)-5-((三苯甲基氧基) 甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺(也称为1-(4))
在0°C将苯甲酰异硫氰酸酯(2.1ml)加入在制备实施例4-(23)中得到的[(2S,3R,4S)-4-氨基-4-(2,3-二氟苯基)-2-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃-3-基]甲醇(7.04g)在DCM(26ml)中的溶液中。在相同的温度搅拌10小时50分钟后，将该混合液直接经硅胶柱色谱纯化(梯度：20%至50%的在庚烷中的EtOAc)，得到标题化合物(9.47g)，为浅黄色固体。
4-(25)N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-((三苯甲基氧基)甲 基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(也称为1-(5) 和4-(11))
在0°C在氮气气氛下将三氟甲磺酸酐(3ml)加入在制备实施例4-(24)中得到的N-(((3S,4R,5S)-3-(2,3-二氟苯基)-4-(羟基甲基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)四氢呋喃-3-基)硫代氨甲酰基)苯甲酰胺(9.47g)在吡啶(35ml)中的溶液中。在相同的温度搅拌1小时40分钟后，将该混合液倾入饱和的碳酸氢钠水溶液中，并加入EtOAc。将有机层分离，并用水和盐水洗涤，然后经MgSO4干燥。将该固体通过过滤除去，并将滤液在真空下浓缩。将残余物经硅胶柱色谱纯化(梯度：30%至70%的在庚烷中的EtOAc)。将得到的粗制的化合物经硅胶柱色谱(梯度：10%至35%的在庚烷中的EtOAc)再次纯化，得到标题化合物(8.34g)，为浅黄色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.68(dd,J=13.6,3.2Hz,1H),3.11-3.14(m,1H),3.32-3.36(m,2H),3.42-3.46(m,1H),4.04(d,J=9.2Hz,1H),4.54-4.60(m,2H),7.13-7.33(m,11H),7.37-7.53(m,10H),8.11-8.13(m,2H)
4-(26)N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(羟基甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(也称为1-(6)和4-(12))
在室温将甲酸(35ml)加入在制备实施例4-(25)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-((三苯甲基氧基)甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(8.79g)在乙醚(35ml)中的溶液中。在室温搅拌15.25小时后，将该混合液在真空下浓缩至原体积的约一半。在室温将甲酸(15ml)加入残余物中。在室温搅拌4小时后，将该混合液在真空下浓缩。将甲醇(450ml)和TEA(9ml)加入残余物中，并将该混合液在回流下搅拌1小时。再次加入TEA(9ml)，并将该混合液在回流下搅拌3小时。将得到的混合液在真空下浓缩，并加入饱和的氯化铵水溶液。将该反应混合液用EtOAc萃取，并用饱和的氯化铵溶液和盐水洗涤。将得到的有机层经MgSO4干燥，并将该固体通过过滤除去。将滤液在真空下浓缩，并经硅胶柱色谱纯化(梯度：50%至100%的在庚烷中的EtOAc)，得到目标化合物(5.5g)，为浅黄色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.80-2.84(m,1H),3.20-3.24(m,1H),3.35-3.38(m,1H),3.73-3.77(m,1H),3.94-3.97(m,1H),4.05-4.08(m,1H),4.51-4.56(m,2H),7.12-7.24(m,3H),7.43-7.47(m,2H),7.51-7.55(m,1H),8.10-8.12(m,2H)
4-(27)N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢 -4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(也称为4-(13)
在0°C向在制备实施例4-(26)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(羟基甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(3.83g)在THF(60ml)中的溶液中相继加入TEA(14.9ml)、三乙胺三氢氟酸盐复合物(5.83ml)和全氟丁基磺酰氟(6.17ml)。在相同的温度搅拌2小时后，使该混合液温至室温，然后在室温再次搅拌1小时20分钟。再次加入三乙胺三氢氟酸盐复合物(4.37ml)，然后将该混合液在室温再次搅拌1小时10分钟。再次加入TEA(7.49ml)和全氟丁基磺酰氟(3.09ml)，并将该混合液在室温搅拌1小时。将得到的混合液倾入饱和的碳酸氢钠水溶液中，并用EtOAc萃取。将有机层经MgSO4干燥，并将该固体通过过滤除去。将滤液在真空下浓缩，并经硅胶柱色谱纯化(梯度：30%至100%的在庚烷中的EtOAc)，得到目标化合物(2.11g)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.83(dd,J=13.6,3.6Hz,1H),3.24(d,J=13.6Hz,1H),3.36(bs,1H),4.03(d,J=8.8Hz,1H),4.45-4.75(m,4H),7.12-7.24(m,3H),7.46(t,J=7.6Hz,2H),7.54(t,J=7.2Hz,1H),8.08(d,J=4.8Hz,2H)
4-(28)(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H- 呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(也称为4-(14))
将DBU(1.47ml)加入在制备实施例4-(27)中得到的N-((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)苯甲酰胺(2.114g)在MeOH(20ml)中的溶液中。将该混合液加热至回流，并搅拌4小时15分钟，然后冷却至室温，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱纯化经氨基硅胶纯化(梯度：20%至80%的在庚烷中的EtOAc)，得到目标化合物，为无色胶状物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.78-2.82(m,1H),2.98(五重峰,J=4.0Hz,1H),3.10-3.14(m,1H),3.87(dd,J=8.4,2.4Hz,1H),4.46-4.63(m,6H),7.04-7.15(m,2H),7.17-7.21(m,1H)
4-(29)((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四 氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯
在0°C将发烟硝酸(475μl)加入在制备实施例4-(28)中得到的(4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(1.45g)在TFA(12ml)和硫酸(917μl)中的溶液中，然后将该混合液在相同的温度搅拌90分钟。再次相继加入硫酸(917μl)和发烟硝酸(475μl)，并将该混合液在相同的温度搅拌150分钟，然后将该反应混合液倾至碎冰和氢氧化钠溶液(50%，8.1ml)上，并将反应容器用氯仿洗涤。将氢氧化钠溶液(50%)加入该混合液中直至pH超过13，然后用氯仿萃取(3次)。将合并的有机萃取物经MgSO4干燥，并将该固体通过过滤除去。将滤液在真空下浓缩。将残余物溶于THF(12ml)中，并在室温加入TEA(4.58ml)和Boc2O(1.92g)。在室温搅拌19小时后，将得到的混合液倾至饱和的氯化铵水溶液上，并用EtOAc萃取。将有机层用饱和的氯化铵水溶液、水和盐水相继洗涤。将有机层经MgSO4干燥，并将该固体通过过滤除去。将滤液在真空下浓缩，然后将粗制的化合物经硅胶柱色谱纯化(梯度：20%至50%的在庚烷中的EtOAc)，得到目标化合物(1.17g)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):1.53(s,9H),2.71-2.76(m,1H),2.96-3.00(m,1H),3.13-3.20(m,1H),3.84(d,J=8.8Hz,1H),4.47(dd,J=8.8,1.2Hz,1H),4.50-4.72(m,3H),7.29-7.31(m,1H),8.04-8.09(m,1H),8.11-8.14(m,1H)
4-(30)((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四 氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯
在室温将氯化锡(II)二水合物(2.06g)加入在制备实施例2-(29)中得到的((4aS,5S,7aS)-7a-(2,3-二氟-5-硝基苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(1.17g)在乙醇(20ml)中的混悬液中。将该混合液在相同的温度搅拌16小时(固体逐渐溶解，且反应颜色变为黄色)。将得到的混合液倾入2N氢氧化钠溶液中，并用EtOAc萃取有机物。将有机层用水和盐水相继洗涤，然后经MgSO4干燥。将该固体通过过滤除去，并将滤液在真空下浓缩。将粗制的混合物经硅胶柱色谱纯化(梯度：20%至60%的在庚烷中的EtOAc)乙酸酯，得到目标化合物(1.09g)，为浅黄色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):1.51(s,9H),2.69-2.73(m,1H),3.07-3.15(m,2H),3.69(bs,2H),3.84-3.85(m,1H),4.49-4.67(m,4H),6.34-6.36(m,1H),6.44(ddd,J=11.2,6.4,2.8Hz,1H)
4-(31)N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并 [3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺(也称为 4-(17))
在室温将甲氧基吡嗪-2-甲酸(159mg)、PyBOP(898mg)和二异丙基乙胺(754μl)加入在制备实施例4-(30)中得到的((4aS,5S,7aS)-7a-(5-氨基-2,3-二氟苯基)-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基)氨基甲酸叔丁基酯(359mg)在DCM(14ml)中的混合液中。将该混合液在相同的温度搅拌3小时。将得到的混合液经硅胶柱色谱(梯度：15%至70%的在庚烷中的EtOAc)直接纯化。蒸发后，在室温将TFA(7ml)加入得到的化合物在DCM(7ml)中的混合液中。在相同的温度搅拌75分钟后，将得到的混合液在真空下浓缩。将氯仿和饱和的碳酸氢钠水溶液加入残余物中，并用氯仿萃取(3次)有机物。将合并的有机层经MgSO4干燥，并将该固体通过过滤除去。将粗制的混合物经氨基硅胶柱色谱(梯度：30%至100%的在庚烷中的EtOAc)纯化，得到目标化合物(320mg)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):2.81(dd,J=13.6,4.0Hz,1H),3.02-3.06(m,1H),3.15(dd,J=13.6,3.6Hz,1H),3.86(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),4.07(s,3H),4.50-4.59(m,5H),4.64-4.65(m,1H),7.18-7.20(m,1H),8.06(ddd,J=11.6,6.8,2.8Hz,1H),8.16(d,J=1.2Hz,1H),9.01(d,J=1.2Hz,1H),9.52(bs,1H)
体外细胞试验:
来自大鼠胎脑的神经元培养物中Aβ肽的定量
(1)大鼠原代神经元培养物
由第18天胚胎Wistar大鼠(查理士河(Charles River)，英国)的大脑皮层制得原代神经元培养物。具体而言，在乙醚麻醉下，在无菌条件下将胚胎从怀孕的大鼠中取出。将脑从胚胎中分离，浸入含10mM HEPES(Gibco#15630-056)的HBSS(Sigma Aldrich#H9269)中。在立体显微镜下从分离的脑中收集大脑皮层。于37°C将收集的大脑皮层碎片在含0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液(GIBCO,#25300)的酶溶液中酶处理20分钟以使细胞分散。然后将细胞洗涤两次，然后温和地再混悬于Neurobasal介质(Gibco#21103)中，所述介质补充有2%B27补充剂(GIBCO#17504-044)、0.5mM L-谷氨酰胺(GIBCO#25030)、1x N2(GIBCO#17502-048)、100ug/ml Pen/Strep(GIBCO15140-122)和5%热灭活的FCS(PAA#A15-701)中。将该细胞分散物经由40-μm尼龙过滤网(BD Falcon#352340)过滤以除去剩余的细胞团块，由此得到神经元细胞混悬液。将该神经元细胞混悬液用以上的介质稀释，然后以100μL/孔的体积、以3.25×105个细胞/ml的初始细胞密度将其铺在涂有聚-D-赖氨酸的96孔培养板(Greiner#655940)中。于37°C在5%CO2-95%空气中将所铺的细胞在培养板中培养24小时。将全部量的培养基用“试验Neurobasal介质(assay Neurobasal medium)”(如以上所述，不包括热灭活的FCS)替换，然后将细胞再培养5天。
(2)加入化合物
在培养的第6天将药物按照以下方法加入培养板中。以最终试验浓度(FAC)x1000的浓度在DMSO中得到8个点的化合物系列稀释液。然后通过向1ul DMSO化合物储备液中加入999ul“试验Neurobasal介质”(如上一部分所述)制备化合物溶液。从各个细胞培养板的孔中移去全部量的介质，并加入140μL/孔的“试验Neurobasal介质”，随后加入60ul的化合物溶液。最终DMSO浓度为0.1%。
(3)取样
加入化合物后将细胞培养1或3天，分别用于ABx-40和ABx-42试验。收集150μl的样品介质，并用作ELISA样品。
(4)细胞存活的评价
依据以下方法使用Alamar试验评价细胞存活。收集用于ELISA试验的样品之后，将在试验Neurobasal介质中的50μl20%Alamar蓝溶液(Invitrogen#DAL1100)加入各孔中的50μl剩余的样品中。然后在37°C、5%CO2-95%空气中将细胞孵育1小时。
使用Pherastar plus读板器(BMG labtech)在540/590nm进行各孔的荧光强度的测定。在测定时，将没有铺细胞而仅含有介质和Alamar溶液的孔设为本底(bkg)。
(5)AβELISA
将来自Wako Pure Chemical Industries，Ltd.的人/大鼠β淀粉样蛋白(42)ELISA试剂盒Wako(#290-62601)和人/大鼠β淀粉样蛋白(40)ELISA试剂盒Wako(#294-62501)用于AβELISA。根据描述于试剂盒所附的文档中的制造商建议的方案进行AβELISA。结果显示为对照组的百分比，各化合物的IC50值使用XLFIT5软件包(IDBS)、使用四参数对数拟合模型确定。
本发明的化合物具有减少Aβ42生成的作用。
本发明的通式(I)的化合物或其可药用盐具有减少Aβ42生成的作用。因此，本发明可以特别提供用于由Aβ引起的神经变性疾病的预防或治疗剂，诸如阿尔茨海默型痴呆或唐氏综合征。
如上文的体外试验所测定，实施例1至4的化合物显示表7中的IC50值:
表7:
Figure BDA00003544663600991

Claims (15)

1.式(I)化合物或其可药用盐:
Figure FDA00003544663500011
其中
X是氢或氟;
R是一氟甲基或二氟甲基。
2.权利要求1中所要求的化合物或其可药用盐，其中X是氢。
3.权利要求1或权利要求2中所要求的化合物或其可药用盐，其中R是一氟甲基。
4.权利要求1至3中任意一项所要求的化合物或其可药用盐，其中化合物选自:
N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺；
N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺；
N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(二氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺；
4-(17):N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺。
5.权利要求1中所要求的化合物或其可药用盐，所述化合物是N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4-氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺。
6.权利要求1中所要求的化合物或其可药用盐，所述化合物是N-(3-((4aS,5S,7aS)-2-氨基-5-(氟甲基)-4a,5,7,7a-四氢-4H-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基)-4,5-二氟苯基)-5-甲氧基吡嗪-2-甲酰胺。
7.用于治疗法的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐。
8.用于抑制淀粉样-β蛋白的生成的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐。
9.用于抑制β-位点淀粉样蛋白-β前体蛋白裂解酶1(BACE1)的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐。
10.用于治疗神经变性疾病，诸如阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA)、轻度认知功能损害(MCI)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐。
11.权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防神经变性疾病，诸如阿尔茨海默型痴呆(AD)、唐氏综合征、脑血管淀粉样血管病(CAA)、轻度认知功能损害(MCI)、记忆丧失、早老性痴呆、老年性痴呆、遗传性脑出血伴淀粉样变性、以及其他退行性痴呆、诸如混合的血管性和退行性起源的痴呆、与核上性麻痹有关的痴呆、与皮质基底变性有关的痴呆、与帕金森病(PD)有关的痴呆和与AD弥漫性路易体型有关的痴呆。
12.用于治疗2型糖尿病的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐。
13.权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐在制备药物中的应用，所述药物用于治疗或预防2型糖尿病。
14.药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐以及可药用载体。
15.药物产品，其包含作为第一种活性成份的权利要求1至6中任意一项所要求的化合物或其可药用盐与至少一种可用于治疗神经变性疾病的另外的活性成份的组合。
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