CN103444531B

CN103444531B - 一种金丝楠木组织培养的快繁方法

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Publication number: CN103444531B
Application number: CN201310383018.XA
Authority: CN
Inventors: 赵光平
Original assignee: ZUNYI HUAFU AGRICULTURAL BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: ZUNYI HUAFU AGRICULTURAL BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-08-28
Filing date: 2013-08-28
Publication date: 2016-01-20
Anticipated expiration: 2033-08-28
Also published as: CN103444531A

Abstract

本发明涉及一种金丝楠木组织培养的快繁方法，包括以下步骤：（1）选种，预处理、浸泡后放入基质中萌发，待胚分化后转移培养；（2）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养；（3）取新生的幼嫩苗切段进行生根培养；（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养；（5）将增殖培养获得的不定丛芽接种到生根培养基中进行生根培养；（6）炼苗与移栽。本发明采用幼苗茎段组织生根培养，和不定丛芽诱导增殖培养相结合，合理驯化，循环取材，最大程度的保留了金丝楠木的完整基因组，提高了金丝楠木的成活率和品质，加快了金丝楠木的生长速度。

Description

一种金丝楠木组织培养的快繁方法

技术领域

本发明涉植物组织培养技术领域，特别是涉及一种金丝楠木组织培养的快繁方法。

背景技术

金丝楠木（学名：pHoebezhennanS.LeeetF.N.Wei）为樟科常绿大乔木，国家二级保护渐危种，为我国特有，是驰名中外的珍贵用材树种，又是著名的庭园观赏和城市绿化树种，在国内主要分布于湖北西部、贵州西北部及四川等地。根据《博古要览》，楠木有三种，即香楠、金丝楠木和水楠。其中，以金丝楠木最为珍贵，其属国家二级保护植物，在明末就已经濒临灭绝。金丝楠木的材质具有防潮、耐腐蚀、不变形、温和幽香、冬暖夏凉、光照下会发出丝丝金光等特点。自古以来，金丝楠木就是皇室宫殿、少数寺庙建筑和家具的重要用材，是集生物柴油、药用、香料及重要木材于一体的珍稀优良经济树种，种植经济效益显著，市场前景广阔。但由于历代砍伐利用，加上金丝楠木的生长速度较慢，致使这一丰富的森林资源近于枯竭。现存的金丝楠木林多为人工组织培养的繁殖的半自然林和风景保护林，在庙宇、村舍、公园、庭院等处尚有少量的大树，但病虫危害较严重，也相继在衰亡。我国通过多年的研究，已初步掌握金丝楠木的生长特性及其组织培养的繁殖技术。目前楠木的繁殖主要是依靠多年的国有林场的技术人员，利用楠木种子资源进行育苗和培植。然而，金丝楠木的组织培养繁殖方法尚未见到相关报道。

如CN101569264A公开的一种金丝楠木扦插快速繁殖方法，包括快繁大棚基地建设，用珍珠岩作扦插其质；取当年生或多年生的木质化或半木质化健壮枝条，剪成长约2～4cm插穗，每插穗带1叶1芽；进行苗床的消毒和插穗的消毒；用生根剂或生根粉处理插条；扦插后基质的含水量控制在60%左右，环境湿度控制在95%左右，透光率50%的遮阳网双层遮阴，温度控制在20-30度之间；验苗与移植。该方案以当年生或多年生的木质化或半木质化健壮枝条为材料，培养出的金丝楠木苗质量不够理想。

再如CN102379241B公开的一种红叶石楠组织培养的快繁方法，是取红叶石楠茎段，修剪为外植体，灭菌后诱导，得不定芽；将不定芽进行继代培养，之后进行增殖培养；将增殖培养后的不定芽进行生根培养，得到生根苗；将生根苗炼苗，移栽到消毒组织培养的繁殖基质中培养，获得红叶石楠再生植株。该方案适用于红叶石楠的组织培养，因红叶石楠为蔷薇科植物，与樟科的金丝楠木的生物组织特点和生长需要有所不同，固该方案不适于金丝楠木的培植。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种金丝楠木组织培养的快繁方法。

本发明提供了如下的技术方案：

一种金丝楠木组织培养的快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）选种，预处理、浸泡后放入基质中萌发，待胚分化后转移培养：

选择保满、无伤的金丝楠木种子，用800倍多菌灵容液进行预处理，再将种子放入20ppm的生根剂中浸泡30min漏出后，放入珍珠岩基质中，以4cm×4cm的距离安放，然后喷水浇湿，待种子萌发，胚进行分化后有小根生长时，再将种子移到已消毒的苗床中进行培养，得到幼嫩苗和幼嫩萌条；

（2）取新生的幼嫩苗切段进行驯化后再进行生根培养：

取幼嫩苗，流水冲洗半小时，切成约1.5cm长，带2个节的茎段，0.15%升汞溶液做表面消毒15min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA1.0mg/L+白糖2%，pH值5.7±0.1的1/2改良MS的驯化瓶中进行驯化，再放入培养基成分为1/2改良MS+0.6mg/LTBA+0.6mg/LNAA+0.6mg/LIAA的生根培养基上进行生根培养，培养温度为25±1℃，光照强度为2500～3000LX，获得金丝楠木试管苗；

（3）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养：

用800倍多菌灵溶液对幼嫩萌条进行预处理，预处理3天后将幼嫩萌条放入生根剂溶液中浸泡处理15min，之后冲洗30min，置于操作台上，剪成带1至2个节间的茎段，接着用75%乙醇处理15s，再用0.1%升汞浸泡处理10min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L的芽驯化瓶中；

（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养：

待步骤（3）芽驯化瓶中产生不定丛芽后，接种到增殖培养基中，获得更多的不定丛芽；所述增殖培养基以改良MS培养基为基本培养基，所述改良MS培养基的成分中NH₄NO₃的浓度降为825mg/L，增殖培养基成分为：改良MS+825mg/LNH₄NO₃+1.0mg/LBA；

（5）将增殖培养获得的不定丛芽接种到生根培养基中进行生根培养：

从步骤（4）中增殖培养获得的不定丛芽中选择生长健壮、株高1.8～2.2cm的芽切割下来，转接到步骤（3）中所述的生根培养基中，按照步骤（3）所述条件进行生根培养，获得金丝楠木试管苗；

（6）炼苗与移栽：

将步骤（2）、（5）中生根培养基瓶里的金丝楠木苗移栽至炼苗棚内进行炼苗，7d后将其从瓶中小心取出，洗净根部培养基，用0.1%高锰酸钾浸泡处理5min，清洗，沾取25mg/L的ABT生根粉移栽入备好草炭、消毒剂的基质中，移栽后做好棚内苗床温度管理，加盖塑料膜保温，加盖遮阴率80%～90%，每7d喷撒一次800倍杀菌药液，所述杀菌药液为75%多菌灵或25%甲基托布，交替使用。

本发明以所述步骤（2）、（5）（6）中培养得到的金丝楠木幼嫩苗和幼嫩萌条为材料，重复步骤（2）、（3）、（4）、（5）、（6）的操作，进行金丝楠木组织的循环培养。

本发明采用改良MS和1/2MS培养基，有利于金丝楠木组织培养的成功。培养基是组织培养中离体质料赖以生存和发展的基地，由植物生长所必需的有机营养成分、微量元素和生长调节剂组成。培养基的成分是根据植物生长发育所需的营养而设计的，不仅包括植物所需的氮、磷、钾及锌、铜、钼、铁等元素，还包含对生长发育起促进和调节作用的有机物质及植物激素等。不同的培养基由于所含无机盐的量不同，对试验质料的反映也不会完全一样。MS培养基是常用的基本培养基，其无机盐与离子的浓度较高，是较为稳定的平衡培养液。因为MS培养基的硝酸盐含量较高，所以被广泛的用于植物器官、花药、细胞核原生质体培养。而1/2MS培养基是通过将MS的大量元素减半，其他元素不变，而配置得到的培养基。MS培养基的特点主要是无机盐浓度有所降低，作用和MS大致相同。在实际操作中，通常是根据不同植物的生长需要来选择MS培养基或者1/2MS培养基。金丝楠木的组织培养需要控制培养基中的无机盐浓度，因此本发明以1/2改良MS进行生根培养前的驯化，保证之后的生根分化率。

金丝楠木组培的一个难点，在于如何使金丝楠木组织适应从室外（室内）环境转移到室内（室外）环境的变化。本发明采用诱导培养和生根培养相结合，提高了金丝楠木组织培养的成功率。如步骤（2）中的驯化可辅助金丝楠木组织在之后的生根培养中提高生根率，使组织生根加快分化。步骤（6）中的炼苗移栽也是使金丝楠木组培苗更好地适应外界环境变化的过程。

金丝楠木组织在离体培养条件下往往缺乏合成生长素和细胞分裂素的能力，因此为了达到促进细胞生长、分裂的效果，在多数情况下需要同时使用生长素和细胞分裂素等生长调节剂。下面通过增殖阶段的培养基成分、培养条件的选择实验，和生根阶段的培养基成分的选择实验来阐述本发明的有益效果。

试验1生根阶段培养基的选择试验：

1.1试验方法

以1/2改良MS为基本培养基，向其中添加TBA、NAA和IAA；其中TBA的质量浓度设置为：0.2，0.6，1.0mg/L，NAA（萘乙酸）的质量浓度设置为：0.2，0.6，1.0mg/L，IAA（吲哚乙酸）的质量浓度设置为：0.2，0.6，1.0mg/L，作预试验，3次重复，每处理30瓶中的苗，经20d后统计生根率，观察根生长情况。不同浓度生长调节剂组合对生根培养结果的影响如表1所示。

1.2结果与分析

表1不同浓度生长调节剂组合对生根培养结果的影响

表中数据代表平均值±标准偏差。

由表1可以看出，金丝楠木组织（步骤（2）中采用的金丝楠木幼苗茎段、步骤（5）中增殖得到的不定丛芽）在不同浓度生长调节剂组合的培养基上生根效果有差别。当TBA、NAA、IAA浓度都为0.6时，生根效果最好，平均生根率达到93%，根数多，根系长而粗壮；当TBA、NAA、IAA浓度都＞0.6mg/L时，随着浓度的增加，生根率降低，并且生根速度慢，根数少，根系细短。实验中观察到，生根培养4周后，金丝楠木幼苗根分化率达到40%以上，且根系粗壮。由此得出，金丝楠木生根培养时，添加TBA、NAA、IAA的最适浓度组合为：1/2改良MS+0.6mg/LTBA+0.6mg/LNAA+0.6mg/LIAA，能达到良好的生根效果。通常，组培快繁苗由于体内积累了较多的激素，或者对激素的敏感性变化，少部分苗会在后期发根后呈现出一些残留激素效应，因此，适宜的激素组合配比十分重要。本发明所采用的培养基激素配比科学合理，有利于金丝楠木组织的生根培养。

试验2增殖阶段培养基的选择试验：

2.1试验方法

以NH₄NO₃的浓度降为825mg/L的改良MS培养基为基本培养基，分别添加激素BA（6-苄氨基嘌呤）0，1.0，2.0，3.0mg/L，进行预试验，3次重复，每处理接种20瓶，30d后对增殖系数，观察芽的生长状况，并调查幼苗的苗高生长量、增殖系数等，筛选出适合丛生芽增殖的最适激素配比。观察结果如表2所示。

2.2结果与分析

表2不同浓度BA增殖培养结果

表中增殖系数代表平均值±标准偏差。+：长势一般；++：长势良好；+++长势优，无+：长势不明显。

由表2可以看出，当BA浓度为1.0时，不定丛芽长势最好，不定丛芽数量多，生长旺盛，平均增殖系数达到3.4；加入的BA浓度为0时，增殖系数最低，不定丛芽无明显长势；当BA浓度＞1.0时，随着BA浓度的增大，不定丛芽长势降低，增殖系数也降低。因此，实验结果表示适宜于金丝楠木组织培养不定丛芽增殖的最佳培养基为：改良MS+825mg/LNH₄NO₃+1.0mg/LBA，可提高金丝楠木组培不定丛芽的增殖系数。

试验3增殖阶段培养条件的选择试验：

3.1试验方法

采用本发明步骤（4）中的增殖培养基，进行金丝楠木组培不定丛芽的增殖培养，开展温度、光照强度和光照时间的因素试验，筛选最佳培养条件，其中温度设置为22，25，28℃这3个处理，光照时间设置为11、13、15h，光照强度采取1500、2500、3000LX这3个处理，重复3次，每处理30瓶，经30d后观察苗生长状况，记录不同的因素组合对应的分化系数，筛选出最适合增殖培养的因素组合。不同的温度、光照强度和光照时间因素组合对试管苗分化的影响试验结果如表3所示。

3.2结果与分析

表3不同的因素组合对增殖分化的影响

由表3可以看出，温度、光照强度和光照时间因素对金丝楠木组织的增殖分化影响也很大。采用三因子三水平正交设计，试验结果表示，在9组试验中以第5组效果最好；分化系数达到4.2；从各平均值分析可知最优因素组合为：温度25℃、光照强度2500LX、光照时间15h。当光照强度为2500LX和3000LX时，分化系数较高。试验说明金丝楠木组织的增殖分化需要较强的光照，较长的光照时间，以及适中的温度。本发明采用的增殖培养条件符合金丝楠木培养条件的需要，有利于金丝楠木组织的分化。

4.1试验方法

采用与生根培养前的驯化培养基成分（MS+BA1.0mg/L+白糖2%的1/2改良MS）相同的培养基，根据本发明步骤（2）所述，培养金丝楠木幼苗茎段，其中，培养基pH值设置为5.4，5.5，5.6，5.7，5.8，5.9，6.0，进行驯化，再进行生根培养，观察组织培养生根情况，统计不同pH值对应的分化系数和生根率，得到的结果如表4所示。

4.2结果与分析

表4pH值对金丝楠木茎段驯化和分化的影响

由表4可知，pH值对金丝楠木幼苗茎段组织的分化系数影响较大，pH值为5.7±1时，生根分化效果较好。当pH值＜5.6时，影响琼脂的凝固，无法接种，对植株的生长不利；pH值在5.6～5.8之间时，培养基硬度适中，有利于组培苗的生长，分化系数高。pH值高于5.8，分化系数逐渐下降，但比pH值较低时的分化系数要高。多次的试验结果表明，金丝楠木的生根前驯化以pH值5.7最好，生根率和分化系数最高。

试验5循环取材试验

5.1试验方法

取本发明中经生根培养得到的金丝楠木试管苗作为试验材料，按照本发明步骤（2）、（3）、（4）、（5）、（6）中所述，截取试管苗的幼嫩萌条和试管苗的茎段，进行金丝楠木的培养；以野生金丝楠木幼嫩苗为对照试验材料，在同等条件下进行组织培养试验，每处理10株，3次重复，观察金丝楠木组培情况，统计生根培养的平均生根率和炼苗移栽后的平均成活率。循环取材试验结果如表5所示。

5.2结果与分析

表5不同试验材料组织培养的生根率和成活率

如表5所示，采用本发明生根培养获得的试管苗茎段和幼嫩萌条作为组培材料，其生根率和成活率明显高于以野生幼嫩苗茎段和野生苗幼嫩萌条为组培材料进行组培的生根率和成活率。因此，循环采用本发明组培得到的幼嫩苗和幼嫩萌条为组培材料，可提高金丝楠木组培快繁的生根率和成活率。

本发明的有益效果：采用幼苗茎段组织生根培养，和不定丛芽诱导增殖培养相结合，合理驯化，循环取材，最大程度的保留了金丝楠木的完整基因组，提高了金丝楠木的成活率和品质，加快了金丝楠木的生长速度。采用金丝楠木试管苗循环培养的金丝楠木幼苗无病毒，生长健壮，叶片浓绿，可改善植株品质，提高成活率；繁殖快，对金丝楠木新品种的推广有利，解决了新品种材料少、在生产中推广速度慢的问题。金丝楠木组织培养快速繁殖不受季节影响，一年四季均可进行。在人工控制的条件下，可工厂化育苗，根据生产需要为生产提供种苗。炼苗移栽40天后有新叶长茁，此时统计移栽成活率为80%以上。

具体实施例方式

下面以金丝楠木组织培养的具体实施例来对本发明作进一步说明，以支撑本发明的权利要求，但并不构成对本发明权利要求保护范围的限定。

实施例1

（2）取新生的幼嫩苗切段进行驯化后再进行生根培养：

取幼嫩苗，流水冲洗半小时，切成约1.5cm长，带2个节的茎段，0.15%升汞溶液做表面消毒15min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA1.0mg/L+白糖2%，pH值5.6的1/2改良MS的驯化瓶中进行驯化，再放入培养基成分为1/2改良MS+0.6mg/LTBA+0.6mg/LNAA+0.6mg/LIAA的生根培养基上进行生根培养，培养温度为24℃，光照强度为2500LX，获得金丝楠木试管苗；

（3）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养：

（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养：

从步骤（4）中增殖培养获得的不定丛芽中选择生长健壮、株高1.8cm的芽切割下来，转接到步骤（3）中所述的生根培养基中，按照步骤（3）所述条件进行生根培养，获得金丝楠木试管苗；

（6）炼苗与移栽：

将步骤（2）、（5）中生根培养基瓶里的金丝楠木苗移栽至炼苗棚内进行炼苗，7d后将其从瓶中小心取出，洗净根部培养基，用0.1%高锰酸钾浸泡处理5min，清洗，沾取25mg/L的ABT生根粉移栽入备好草炭、消毒剂的基质中，移栽后做好棚内苗床温度管理，加盖塑料膜保温，加盖遮阴率80%，每7d喷撒一次800倍杀菌药液，所述杀菌药液为75%多菌灵或25%甲基托布，交替使用。

组培苗经过炼苗后，用温水洗净根系附着的培养基，移栽到经过高锰酸钾灭菌的基质（珍珠岩、腐殖土、苔藓、甘蔗渣）中，移到温室中进行培养，先用遮荫网遮光1个月后，可解开遮阳网，每天喷雾3次，移栽后7d，叶面喷施杀菌液，以后每隔7d喷施1次，并进行病虫害防治。

选择四周排水良好的土地建设大棚，棚内双层遮阳网，自动喷灌系统，补光系统，苗床宽1.3～1.6m，铺上厚25～35cm的腐殖土，种植穴规格42厘米×42厘米×42厘米，每穴施复合肥220克，回填表土时拌匀肥料。为保持根系湿润，应随起苗随打浆，泥浆中应加入3%～5%的钙镁磷肥。移栽时做到苗根舒展、苗身端正、栽深适度。金丝楠木幼苗初期生长缓慢，喜阴湿，宜选择日照时间短、排灌方便、肥沃湿润的土壤作圃地。土质黏重，排水不良，易发生烂根；土壤干燥缺水，则幼苗生长不良，又易造成灼伤。8～10月为金丝楠木幼苗速生期，在此期间，应加强苗圃水肥管理，以加速苗木生长，提高苗木质量。11月份还有部分植株抽梢生长，因此在苗圃后期管理中，要注意避免幼苗越冬时遭受冻害。

实施例2

（2）取新生的幼嫩苗切段进行驯化后再进行生根培养：

取幼嫩苗，流水冲洗半小时，切成约1.5cm长，带2个节的茎段，0.15%升汞溶液做表面消毒15min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA1.0mg/L+白糖2%，pH值5.7的1/2改良MS的驯化瓶中进行驯化，再放入培养基成分为1/2改良MS+0.6mg/LTBA+0.6mg/LNAA+0.6mg/LIAA的生根培养基上进行生根培养，培养温度为25℃，光照强度为2800LX，获得金丝楠木试管苗；

（3）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养：

（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养：

从步骤（4）中增殖培养获得的不定丛芽中选择生长健壮、株高2.0cm的芽切割下来，转接到步骤（3）中所述的生根培养基中，按照步骤（3）所述条件进行生根培养，获得金丝楠木试管苗；

（6）炼苗与移栽：

将步骤（2）、（5）中生根培养基瓶里的金丝楠木苗移栽至炼苗棚内进行炼苗，7d后将其从瓶中小心取出，洗净根部培养基，用0.1%高锰酸钾浸泡处理5min，清洗，沾取25mg/L的ABT生根粉移栽入备好草炭、消毒剂的基质中，移栽后做好棚内苗床温度管理，加盖塑料膜保温，加盖遮阴率85%，每7d喷撒一次800倍杀菌药液，所述杀菌药液为75%多菌灵或25%甲基托布，交替使用。

以所述步骤（2）、（5）（6）中培养得到的金丝楠木幼嫩苗和幼嫩萌条为材料，重复步骤（2）、（3）、（4）、（5）、（6）的操作，进行金丝楠木组织的循环培养。

实施例3

（2）取新生的幼嫩苗切段进行驯化后再进行生根培养：

取幼嫩苗，流水冲洗半小时，切成约1.5cm长，带2个节的茎段，0.15%升汞溶液做表面消毒15min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA1.0mg/L+白糖2%，pH值5.8的1/2改良MS的驯化瓶中进行驯化，再放入培养基成分为1/2改良MS+0.6mg/LTBA+0.6mg/LNAA+0.6mg/LIAA的生根培养基上进行生根培养，培养温度为26℃，光照强度为3000LX，获得金丝楠木试管苗；

（3）取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养：

（4）将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养：

从步骤（4）中增殖培养获得的不定丛芽中选择生长健壮、株高2.2cm的芽切割下来，转接到步骤（3）中所述的生根培养基中，按照步骤（3）所述条件进行生根培养，获得金丝楠木试管苗；

（6）炼苗与移栽：

将步骤（2）、（5）中生根培养基瓶里的金丝楠木苗移栽至炼苗棚内进行炼苗，7d后将其从瓶中小心取出，洗净根部培养基，用0.1%高锰酸钾浸泡处理5min，清洗，沾取25mg/L的ABT生根粉移栽入备好草炭、消毒剂的基质中，移栽后做好棚内苗床温度管理，加盖塑料膜保温，加盖遮阴率90%，每7d喷撒一次800倍杀菌药液，所述杀菌药液为75%多菌灵或25%甲基托布，交替使用。

Claims

1.一种金丝楠木组织培养的快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选种，预处理、浸泡后放入基质中萌发，待胚分化后转移培养：

选择饱满、无伤的金丝楠木种子，用800倍多菌灵容液进行预处理，再将种子放入20ppm的生根剂中浸泡30min漏出后，放入珍珠岩基质中，以4cm×4cm的距离安放，然后喷水浇湿，待种子萌发，胚进行分化后有小根生长时，再将种子移到已消毒的苗床中进行培养，得到幼嫩苗和幼嫩萌条；

(2)取新生的幼嫩苗切段进行驯化后再进行生根培养：

取幼嫩苗，流水冲洗半小时，切成1.5cm长，带2个节的茎段，0.15％升汞溶液做表面消毒15min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA1.0mg/L+白糖2％，pH值5.7±0.1的驯化瓶中进行驯化，再放入培养基成分为1/2改良MS+0.6mg/LTBA+0.6mg/LNAA+0.6mg/LIAA的生根培养基上进行生根培养，培养温度为25±1℃，光照强度为2500～3000LX，获得金丝楠木试管苗；

(3)取幼嫩萌条作为外植体进行芽诱导培养：

用800倍多菌灵溶液对幼嫩萌条进行预处理，预处理3天后将幼嫩萌条放入生根剂溶液中浸泡处理15min，之后冲洗30min，置于操作台上，剪成带1至2个节间的茎段，接着用75％乙醇处理15s，再用0.1％升汞浸泡处理10min，无菌水清洗8次，接种于培养基成分为MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L的芽驯化瓶中；

(4)将不定丛芽接种到增殖培养基中进行增殖培养：

待步骤(3)芽驯化瓶中产生不定丛芽后，接种到增殖培养基中，获得更多的不定丛芽；所述增殖培养基以改良MS培养基为基本培养基，所述改良MS培养基的成分中NH₄NO₃的浓度降为825mg/L，所述增殖培养基成分为：改良MS+1.0mg/LBA；

(5)将增殖培养获得的不定丛芽接种到生根培养基中进行生根培养：

从步骤(4)中增殖培养获得的不定丛芽中选择生长健壮、株高1.8～2.2cm的芽切割下来，转接到步骤(2)中所述的生根培养基中，按照步骤(2)所述条件进行生根培养，获得金丝楠木试管苗；

(6)炼苗与移栽：

将步骤(2)、(5)中生根培养基瓶里的金丝楠木试管苗移栽至炼苗棚内进行炼苗，7d后将其从瓶中小心取出，洗净根部培养基，用0.1％高锰酸钾浸泡处理5min，清洗，沾取25mg/L的ABT生根粉移栽入备好草炭、消毒剂的基质中，移栽后做好棚内苗床温度管理，加盖塑料膜保温，加盖遮阴率80％～90％，每7d喷撒一次800倍杀菌药液，所述杀菌药液为75％多菌灵或25％甲基托布，交替使用。

2.根据权利要求1所述的金丝楠木组织培养的快繁方法，其特征在于，以所述步骤(2)、(5)(6)中培养得到的金丝楠木幼嫩苗和幼嫩萌条为材料，重复步骤(2)、(3)、(4)、(5)、(6)的操作，进行金丝楠木组织的循环培养。