CN103444435B - 一种冬虫夏草优质菌种的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种冬虫夏草优质菌种的选育方法，主要解决现在规模化生产冬虫夏草菌丝进行冬虫夏草深层发酵生产过程中，普遍存在缺乏优质菌种的问题。本发明的菌种选育方法包括以下步骤：从冬虫夏草产区采收新鲜冬虫夏草，在经过优选配置的固体培养基中进行组织分离，模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃。采用不同的固体培养基转接2次，进行富营养刺激，实时记录冬虫夏草菌丝形态和生长特点，从中选择优良的冬虫夏草菌株进行工业生产。本发明具有的积极效果：性能好，活力强，发酵物产量高、质量好，能很好满足工业生产要求。
Description
技术领域
本发明属于食用真菌、药用真菌生物技术与发酵生产领域，尤其涉及一种冬虫夏草优质菌种的选育方法。应用于冬虫夏草工业发酵生产中。
背景技术
食药用菌产业是新型的朝阳产业，在我国国民经济中占据重要地位，而食药用菌的发酵是其中最重要的组成部分之一。冬虫夏草是中国传统中药中最著名的一种，它的发酵已经形成了很大的产业。
良好的菌种是微生物发酵工业的基础。在应用食药用菌生产食品、保健品时，首要任务是要挑选出符合需要的优质菌种，从自然界中新分离的野生菌株，应用于工业生产时中往往性能不佳，活力也是比较低，致使发酵物的产量和质量偏低，不能满足工业生产要求，因此需要在人工条件下进行菌种选育。
发明内容
本发明的目的是提供一种冬虫夏草优质菌种的选育方法，性能好，活力强，发酵物产量高、质量好，能很好满足工业生产要求。
本发明的提供的冬虫夏草优质菌种的选育方法包括以下步骤：
（1）新鲜冬虫夏草采收：每年在青藏高原主产区采收新鲜的冬虫夏草，以保证获得生长旺盛的菌种，拉丁学名是Cordyceps sinensis，也写作Ophiocordyceps sinensis；
（2）初始菌种分离：采收的新鲜冬虫夏草用浓度70%的酒精浸泡2-5min，用酒精棉球擦拭表面消毒，取直径0.5-1cm的冬虫夏草的虫子致密组织接入固体培养基上培养；模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；
初始分离固体培养基的优选成分重量配比为：2-4%的粗粮复合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸镁，0.02-0.04%的磷酸二氢钾、0.05-0.10%的维生素B1、0.05-0.10%的维生素B2、1.00-2.00%的琼脂粉，其余为水分；
粗粮复合物为玉米、小米、荞麦、燕麦、黄豆粗制粉同等比例混合而成；
（3）第一次菌种转接：初始分离菌种培养30天后，进行第一次菌种转接，模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；
第一次菌种转接后固体培养基成分重量配比为：2-4%的粗粮复合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸镁，0.02-0.04%的磷酸二氢钾、0.05-0.10%的维生素B1、0.05-0.10%的维生素B2、1.00-2.00%的琼脂粉、0.50-1.50%的粗蛋白粉，其余为水分；
（4）第二次菌种转接：第一次菌种转接培养30天后，进行第二次菌种转接，模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；第二次转接后培养30天，即可获得具有很高活性的优质冬虫夏草菌种，可用于发酵生产。
第二次转接后的固体培养基成分重量配比为：2-4%的粗粮复合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸镁，0.02-0.04%的磷酸二氢钾、0.10-0.20%的复合维生素、1.00-2.00%的琼脂粉、0.50-1.50%的粗蛋白粉，其余为水分；
本发明具有的积极效果：性能好，活力强，发酵物产量高、质量好，能很好满足工业生产要求。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明所涉及的方法做进一步说明：
（1）每年在青藏高原主产区采收新鲜的冬虫夏草，特别挑选虫子粗壮、虫草芽较小的早期草为最佳，以保证获得生长旺盛的菌种。拉丁学名是Cordyceps sinensis，也写作Ophiocordyceps sinensis。
（2）制备初始分离的固体培养基：称取3g粗粮复合物、0.5g胰蛋白胨、0.5g酵母浸出粉、0.04g硫酸镁，0.04g磷酸二氢钾、0.08g维生素B1、0.08g维生素B2、2g琼脂粉，用水定容到100ml。高温高压灭菌后冷却，作为初始分离的固体培养基。
粗粮复合物为玉米、小米、荞麦、燕麦、黄豆粗制粉同等比例混合而成。
（3）初始菌种分离：将采收的新鲜冬虫夏草用浓度70%的酒精浸泡2-5min，用酒精棉球擦拭表面消毒，消毒后的冬虫夏草取直径0.5-1cm虫子致密组织，接入固体培养基上培养，放入光照培养箱中，模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；
30天后菌落直径达到1-2cm，菌落白灰色，深入培养基，显微镜观察确认，菌丝未呈现衰老迹象。
（4）制备转接后固体培养基：称取3g粗粮复合物、0.5g胰蛋白胨、0.5g酵母浸出粉、0.04g硫酸镁，0.04g磷酸二氢钾、0.08g维生素B1、0.08g维生素B2、2g琼脂粉、1g的粗蛋白粉（粗蛋白粉由玉米麸皮、粗蛋白胨、粗豆粉同等比例混合而成），用水定容到100ml。高温高压灭菌后冷却，作为转接后的固体培养基。
（5）此时进行第一次菌种转接，以更好地满足菌种营养要求，刺激菌丝生长，激发冬虫夏草菌丝活性。光照培养箱中模拟天然环境，12小时光照与黑暗间隔培养，温度为10-20℃，30天后菌落直径达到2-4cm，可见第一次转接和富营养刺激后菌丝生长速度，比初始分离菌种有所加快，菌落白灰色，深入培养基，显微镜观察确认，菌丝未呈现衰老迹象。
（6）制备第二次转接后的固体培养基：称取3g粗粮复合物、0.5g胰蛋白胨、0.5g酵母浸出粉、0.04g硫酸镁，0.04g磷酸二氢钾、0.16g复合维生素、2g琼脂粉、1.5g的粗蛋白粉，用水定容到100ml。高温高压灭菌后冷却，作为第二次转接后的固体培养基。上述的复合维生素粉剂由重量比例为1.0-2.0维生素B1、1.0-2.0维生素B2、0.05-0.15核黄素混匀而成。
（7）第一次菌种转接培养30天后，进行第二次菌种转接，以通过进一步富营养，充分激发冬虫夏草菌种活性；光照培养箱中，12小时光照与黑暗间隔培养，温度为10-20℃，30天后菌落直径达到3-6cm，可见第二次转接和进一步的富营养刺激后，菌种生长速度比初始分离菌种进一步加快，菌落白灰色，深入培养基，显微镜观察确认，菌丝未呈现衰老迹象，经过两次转接、富营养刺激和光照黑暗交替刺激，冬虫夏草菌种的活性明显增强，即获得具有很高活性的优质冬虫夏草菌种。本发明可以用在冬虫夏草深层发酵工业生产中。
Claims (1)
1.一种冬虫夏草优质菌种的选育方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）新鲜冬虫夏草采收：每年在青藏高原主产区采收新鲜的冬虫夏草，以保证获得生长旺盛的菌种；
（2）初始菌种分离：采收的新鲜冬虫夏草用浓度70%的酒精浸泡2-5min，用酒精棉球擦拭表面消毒，取直径0.5-1cm的冬虫夏草的虫子致密组织接入固体培养基上培养；模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；
初始分离固体培养基的优选成分重量配比为：2-4%的粗粮复合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸镁，0.02-0.04%的磷酸二氢钾、0.05-0.10%的维生素B1、0.05-0.10%的维生素B2、1.00-2.00%的琼脂粉，其余为水分；
粗粮复合物为玉米、小米、荞麦、燕麦、黄豆粗制粉同等比例混合而成；
（3）第一次菌种转接：初始分离菌种培养30天后，进行第一次菌种转接，模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；
第一次菌种转接后固体培养基成分重量配比为：2-4%的粗粮复合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸镁，0.02-0.04%的磷酸二氢钾、0.05-0.10%的维生素B1、0.05-0.10%的维生素B2、1.00-2.00%的琼脂粉、0.50-1.50%的粗蛋白粉，其余为水分；
（4）第二次菌种转接：第一次菌种转接培养30天后，进行第二次菌种转接，模拟天然环境采用12小时光照与12小时黑暗间隔培养，培养温度为10-20℃，期间测量菌丝生长速度，用显微镜观察菌丝特点；第二次转接后培养30天，即可获得具有很高活性的优质冬虫夏草菌种，可用于发酵生产；
第二次转接后的固体培养基成分重量配比为：2-4%的粗粮复合物、0.30-0.60%的胰蛋白胨、0.30-0.60%的酵母浸出粉、0.02-0.04%的硫酸镁，0.02-0.04%的磷酸二氢钾、0.10-0.20%的复合维生素、1.00-2.00%的琼脂粉、0.50-1.50%的粗蛋白粉，其余为水分。
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