CN103044240A - 一种从蜂王浆中提取10-羟基-2-癸烯酸的工艺 - Google Patents
一种从蜂王浆中提取10-羟基-2-癸烯酸的工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公布了大孔吸附树脂法从蜂王浆中提取10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)的工艺。蜂王浆溶于95%乙醇,经超声提取;提取液加去离子水稀释后用大孔吸附树脂X-5吸附提取液中的10-HAD;吸附后的树脂装入层析柱,以75%~95%的乙醇解吸,收集含10-HAD的解吸液;洗脱液蒸发浓缩、冷冻干燥获得纯度≥92.5%的10-HAD。
Description
技术领域
本发明涉及一种从蜂王浆中提取10-羟基-2-癸烯酸的工艺,特别是一种大孔吸附树脂吸附层析法提取癸烯酸的工艺。
背景技术
蜂王浆又名蜂皇浆,是由11~21日龄的青年工蜂下咽头腺和大颚腺分泌的,主要用于饲喂蜂王和幼虫,呈乳白色、淡黄色或浅橙色半透明为粘稠浆状,具有特殊香味、味酸、涩、辛、略甜,富含蛋白质、糖类、脂肪酸、维生素、游离氨基酸等生理活性物质。蜂王浆具有活化细胞、促使伤口愈合、促进内分泌、增加食欲、增强体力、防治骨质疏松、防衰老、安神、抗菌、抗癌、抗辐射等多种生理活性作用,具有极高的医药和保健价值。10-羟基-2-癸烯酸(10-Hydroxy-2-Decenoic acid,10-HDA)又称王浆酸,是蜂王浆中主要的活性成分,是德国科学家D.J朗格于1921年首次在工蜂上颚腺中发现的。1957年,A.Butenandt首先报道从蜂王浆中分离得到10-HAD。此后,国内外学者从性质、结构、药理及测定方法等方面对10-HAD进行了较为深入的研究。10-HAD是一种不饱和脂肪酸,分子式为HO-CH2-(CH2)6-CH=CH-COOH(C10H18O3),分子量186.25,白色絮状结晶或针状结晶,不易吸潮,在高温条件下易变为油状或焦化,低温冷冻干燥时不易升华。熔点为64℃,溶于甲醇、乙醇、乙醚和氯仿,微溶于丙酮,难溶于水。对石蕊试纸显酸性,能使溴水和高锰酸钾溶液迅速褪色,对三氯化铁不显紫色。
研究表明,10-HAD对人和动物具有多方面的药理作用。第一,抑菌杀菌作用,10-HAD对金黄葡萄球菌、链球菌、变形杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、结核杆菌星状癣菌、表皮癣菌等具有抑菌杀菌作用,10-HAD对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄葡萄球菌的最低以菌浓度(MIC)分别为0.625mg/mL、1.25mg/mL、2.5mg/mL;第二,抗癌、抗肿瘤作用,10-HAD可通过刺激环状-腺磷苷的合成,使蛋白质螺旋结构和氨基酸序列正常化,从而使受肿瘤破坏的结构正常化,因而对癌细胞具有抑制作用;第三,抗辐射作用,10-HAD具有保护和修复蛋白质、DNA、RNA的作用,所以它能对急性辐射损伤起到防治作用;第四,降血脂作用,10-HAD能减少饭后脂肪堆积,防止脂类物质的合成,是改善血液中脂肪含量的一部分因素,对高血脂症具有良好的治疗作用。
10-HAD作为一种拥有显著生理活性的物质,不仅可以直接作为药物使用,而且还是食品、化妆品的添加剂,还可以用于合成香料和医药中间体,市场需求极大。迄今为止,已报道的10-HAD的提取方法主要有乙醇提取法、乙醚提取法、溶液沉淀结晶法、醇中沉淀结晶法及高效液相色谱法(HPLC)等。有机溶剂提取法不但过程复杂、工序繁琐、回收率较低,而且获得的10-HAD纯度不高。HPLC法虽然可获得纯度较高的10-HAD,但是该方法不适于工业化生产。大孔吸附树脂具有选择性好、回收率高、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点。本发明利用大孔吸附树脂提取蜂王浆中的10-HAD,获得的10-HAD纯度高,而且具有回收率高、工艺流程简单、对生物活性无损等特点,适用于10-HDA的工业化大规模生产。
发明内容
本发明提供一种利用大孔吸附树脂快速、无损的从蜂王浆中提取高纯度10-HAD的方法。
为了达到上述目的,本发明采用的技术方案为,用95%乙醇将蜂王浆稀释适当倍数后,超声振荡提取,去离子水稀释;提取液经大孔吸附树脂静态吸附;吸附树脂装柱,乙醇动态洗脱,收集洗脱液中含10-HDA的组份;经蒸发浓缩、冷冻干燥获得纯度≥92.5%的10-HDA。其具体过程如下:
a、将蜂王浆与一定比例的95%乙醇混合、振荡混匀,置于超声波中超声提取15min,3000r/min离心5min,取上清。
b、将a步骤中获得的上清液用4~5倍体积的去离子水稀释后与大孔吸附树脂X-5按一定比例混合,150r/min振荡吸附3h~4h。
c、将吸附后的大孔吸附树脂X-5装入层析柱,先用3倍柱体积20%乙醇洗脱,去除部分杂质,然后用浓度为75%~95%的乙醇解吸10-HDA,流速为1mL/min,核酸蛋白检测器检测波长为245nm,根据解吸曲线收集含10-HAD组份的解吸液。
d、将收集到的解吸液蒸发浓缩、然后冷冻干燥,所得到的干物即为10-HAD。
其中:
步骤a中所述的蜂王浆与95%乙醇的比例为1∶3(m/v)。
步骤b中上清液与大孔吸附树脂X-5的比例为1∶10(m/v)。
本发明具有如下优点:
(1)利用95%的乙醇超声提取10-HAD条件温和、回收率高。
(2)本发明采用的大孔吸附树脂X-5对10-HAD选择性良好,吸附、解吸速度快,吸附容量大,所用试剂可回收利用,且工艺流程简单,适于工业生产。
(3)本发明所提取的10-HAD纯度高,并且自然状态下可保持原有的生理活性。
具体实施方式
实施例1:
(1)95%乙醇超声提取10-HAD:将蜂王浆与95%乙醇按1∶3(m/v)的比例混合、振荡混匀,置于超声波中超声提取15min,3000r/min离心5min,取上清。
(2)大孔吸附树脂吸附10-HAD:将上清液用4~5倍体积的去离子水稀释后与大孔吸附树脂X-5按1∶10(m/v)比例混合,150r/min振荡混匀4h,弃去吸附后的残液,收集树脂,用蒸馏水洗涤树脂3次。
(3)解吸剂解吸10-HAD:吸附后的大孔吸附树脂X-5装入层析柱,先用3倍柱体积20%乙醇洗脱,去除部分杂质,然后用浓度为75%的乙醇解吸10-HDA,流速为1mL/min根据解吸曲线收集含10-HAD的解吸液。
(4)10-HAD的获得及纯度测定:将收集的解吸液蒸发浓缩、冷冻干燥后获得的白色物质即10-HAD。经HPLC外标法测定其回收率为81%,纯度为95%。
实施例2:
(1)95%乙醇超声提取10-HAD:将蜂王浆与95%乙醇按1∶3(m/v)的比例混合、震荡混匀,置于超声波中超声提取15min,3000r/min离心5min,取上清。
(2)大孔吸附树脂吸附10-HAD:将上清液4~5倍体积的蒸馏水稀释后与大孔吸附树脂X-5按1∶10(m/v)比例混合,150r/min振荡混匀4h,弃去吸附后的残液,收集树脂,用蒸馏水洗涤树脂3次。
(3)解吸剂解吸10-HAD:吸附后的大孔吸附树脂X-5装入层析柱,先用3倍柱体积20%乙醇洗脱,去除部分杂质,然后用浓度为95%的乙醇解吸10-HDA,流速为1mL/min根据解吸曲线收集含10-HAD的解吸液。
(4)10-HAD的获得及回收率、纯度测定:将收集的解吸液蒸发浓缩、冷冻干燥后获得的白色物质即10-HAD。经HPLC内标法测定其回收率为87%,纯度为92.5%。
Claims (6)
1.一种大孔吸附树脂法从蜂王浆中提取10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)的方法,该方法包括以下工艺步骤:
(1)蜂王浆经95%乙醇溶解后,超声提取;
(2)提取液用去离子水稀释后与大孔吸附树脂按一定比例混合,150r/min振荡吸附3h~4h;
(3)吸附后树脂装柱;先以20%的乙醇洗脱杂质,然后以75%~95%的乙醇洗脱10-HAD;
(4)将收集到的洗脱液蒸发浓缩、冷冻干燥所得白色物质即为10-HAD。
2.根据权利要1所述的10-HDA提取工艺,其特征在于,所述步骤(1)蜂王浆与95%乙醇比例为1∶3(m/v)。
3.根据权利要1所述的10-HDA提取工艺,其特征在于,所述步骤(2)提取液用4~5倍体积的蒸馏水稀释。
4.根据权利要1所述的10-HDA提取工艺,其特征在于,所述步骤(2)大孔吸附树脂为X-5树脂。
5.根据权利要1所述的10-HDA提取工艺,其特征在于,所述步骤(2)提取液与大孔树脂X-5的比例为1∶10(m/v)。
6.根据权利要1所述的10-HDA提取工艺,其特征在于,所述步骤(3)解吸液为75%~95%的乙醇。
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