CN102988980A - 一种增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液的使用方法，所述的稀释液为1％黄芪多糖注射液，使用该稀释液稀释猪瘟兔化弱毒疫苗，稀释成每头份1毫升，可明显的促进免疫猪的淋巴细胞转化，和免疫猪的免疫球蛋白的产生，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液及其使用方法，属疫苗免疫增强剂领域。
背景技术
猪瘟(slassicalswinefever，CFS)以出血和发热为主要特征，呈急性或慢性经过，是一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局(OfficeofInternationaldesE′pizooties，OIE)列为A类动物传染病。在世界许多国家和地区，传统疫苗接种是控制猪瘟的重要手段。目前使用的弱毒疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE疫苗和法国的Thireval疫苗。我国的猪瘟兔化弱毒疫苗性能稳定、安全、免疫效果好，且无残留能力，是国际公认的唯一安全有效的弱毒疫苗，亦是国内唯一应用的弱毒疫苗。生产实践中，使用猪瘟疫苗免疫时，一般使用生理盐水或注射用水做疫苗稀释液。如果使用一种能够增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液是生产和科学发展的需要。
黄芪多糖经过大量的科学实验证明对机体特异性免疫与非特异性免疫都有着广泛的影响！中华人民共和国药典规定中药黄芪(Radix A stragali，RA)为豆科黄芪属植(Genus A stragal.)蒙古黄芪(A stragalusmembranaeeus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bg-e.)Hsiao)或膜荚黄芪(A stragalus memb-rallaceus(Fisch.)Bge.)的干燥根，在我国主要分布于东北和华北，在传统医学中有着广泛的应用。中医认为其性甘，微温，归脾、肺经，具有补气升阳、益卫固表、托毒生肌、利水退肿之功效。近年来的研究发现黄芪含有多种生物活性成分，如多糖、皂甙、黄酮、氨基酸、微量元素、核黄素、叶酸、香豆素、有机酸、胆碱等，其中最主要的活性成分是多糖、皂甙、黄酮类、氨基酸和微量元素。其中以黄芪多糖(APS)的研究为多。大量的科学实验证明APS对机体特异性免疫与非特异性免疫有广泛的影响。其具有促进免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗衰老、抗寄生虫等多种生物活性，对疾病预防和保健都具有明显的促进和增强作用。
那么，黄芪多糖能不能做为猪瘟疫苗稀释液与猪瘟兔化弱毒疫苗一起使用？黄芪多糖有抗病毒作用，对猪瘟兔化弱毒疫苗有没有抗病毒作用？能不能应用其免疫增强作用来增强猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫效果？本发明证明，黄芪多糖注射液是一种能增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液。
发明内容
本发明用市售的1％黄芪多糖注射液(农业部兽药质量标准)做为猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋或细胞苗)的稀释液，稀释疫苗，每只兔、每头猪注射1％的黄芪多糖注射液1毫升，结果表明，黄芪多糖通过增强机体的免疫功能可以增强猪瘟疫苗的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫，能够增强猪瘟疫苗的免疫效果，是一种能增强猪瘟疫苗免疫效果的疫苗稀释液。使用方法是用1％黄芪多糖注射液按猪瘟疫苗瓶签标注头份稀释猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋或细胞苗)，稀释成每头份1毫升，每头猪肌肉注射1毫升。该稀释液具有特异性与非特异性增强机体免疫反应的功能，具有效果显著、易于生产、成本低廉、使用方便等特点。市售的1％黄芪多糖注射液做为增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液是本发明人新发现的新用途。
实施例一
选择健康的无猪瘟抗体的2.5公斤的青紫蓝肉兔50只，随机分为5组，每组10只，一组注射用1％黄芪多糖注射液稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋)，每只1毫升；一组注射用1％黄芪多糖注射液稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(细胞)，每只1毫升；一组注射用生理盐水稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋)，每只1毫升；一组注射用生理盐水稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(细胞)，每只1毫升；空白对照组不做任何处理；分别于免疫后7、14、21天检测各组的淋巴转化试验、细胞因子、免疫抗体，结果分别见表1、表2、表3如下：
表1.1％黄芪多糖注射液对猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗免疫兔的淋巴转化试验结果
从表1可看出，在ConA诱导的淋巴细胞转化实验中，第7、14、21天时淋巴细胞活性均是1％黄芪多糖注射液组＞生理盐水组＞完全空白对照组，并且各组之间都差异显著(P＜0.05)。
在LPS诱导的淋巴细胞转化实验中，第7、14、21天时黄芪多糖注射液组的细胞活性也均高于其它两组并且差异显著(P＜0.05)。
说明1％黄芪多糖稀释液可明显的促进免疫兔的淋巴细胞转化，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫效果。
表2.1％黄芪多糖稀释液对猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫兔细胞因子试验结果
从表2可看出：
血清中IL-2含量：免疫后第7、14、21、28天，1％黄芪多糖注射液组＞生理盐水组＞完全空白对照组，并且各组之间都差异显著；免疫后第46天，1％黄芪多糖注射液组血清中IL-2的含量显著低于生理盐水组，但显著高于完全空白对照组。
血清中IL-6含量：免疫后第7、14、21、28天，1％黄芪多糖注射液组＞生理盐水组＞完全空白对照组，并且各组之间都差异显著；免疫后第46天，1％黄芪多糖注射液组血清中IL-6的含量与生理盐水组以及完全空白对照组均差异不显著。
血清中IFN-γ含量：免疫后第7、14、21天，1％黄芪多糖注射液组＞生理盐水组＞完全空白对照组，并且各组之间都差异显著；免疫后第28天，1％黄芪多糖注射液组血清中IFN-γ的含量与生理盐水组差异不显著，显著高于完全空白对照组；免疫后第46天，1％黄芪多糖注射液组＞生理盐水组＞完全空白对照组，且各组间差异显著。
血清中Npt含量：免疫后第7、14、21、28、46天，1％黄芪多糖注射液组血清中Npt的含量显著高于生理盐水组以及完全空白对照组，且各组间差异显著。
说明1％黄芪多糖稀释液可显著的提高免疫兔的IFN-γ、IL-2和IL-6含量，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的细胞免疫效果。
表3.1％黄芪多糖稀释液对猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫兔抗体检测试验结果
从表3可看出，ELISA法检测猪瘟抗体水平实验中，第7、14、21、28、46天时1％黄芪多糖组显著高于生理盐水组；因此，可以做为猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的稀释液使用。
实施例二
选择健康的无猪瘟抗体的2025公斤的仔猪50头，随机分为5组，每组10头，一组注射用1％黄芪多糖注射液稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋)，每头1毫升；一组注射用1％黄芪多糖注射液稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(细胞)，每头1毫升；一组注射用生理盐水稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(脾淋)，每头1毫升；一组注射用生理盐水稀释的猪瘟兔化弱毒疫苗(细胞)，每头1毫升；对照不做处理。分别检测各组的淋巴转化试验、细胞因子、免疫抗体，结果如下：
表1.1％黄芪多糖稀释液对猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫猪淋巴转化试验结果
在ConA诱导的淋巴细胞转化实验中，第13、20、27天时淋巴细胞活性均是1％黄芪多糖注射液组＞生理盐水组＞完全空白对照组，并且各组之间都差异显著(P＜0.05)。
在LPS诱导的淋巴细胞转化实验中，第13、20、27天时1％黄芪多糖注射液组的细胞活性也均高于其它两组并且差异显著(P＜0.05)。
说明1％黄芪多糖稀释液可明显的促进免疫猪的淋巴细胞转化，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫效果。
表2.1％黄芪多糖稀释液对猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫猪免疫球蛋白检测试验结果
从表2看出：
免疫后第13、20、27天，1％黄芪多糖注射液组血清中IgM含量显著高于生理盐水组和空白对照组(P＜0.05)。
免疫后第13、20、27天，1％黄芪多糖注射液组血清中IgA1含量显著高于生理盐水组和空白对照组；(P＜0.05)。
免疫后第13、20、27天，1％黄芪多糖注射液组血清中IgA2含量显著高于生理盐水组和完全空白对照组(P＜0.05)。
免疫后第13、20、27天，1％黄芪多糖注射液组血清中IgG1含量显著高于生理盐水组和完全空白对照组(P＜0.05)。
免疫后第13、20、27天，1％黄芪多糖注射液组血清中IgG含量显著高于生理盐水组和完全空白对照组(P＜0.05)。
说明1％黄芪多糖稀释液可明显的促进免疫猪的免疫球蛋白的产生，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的体液免疫效果
表3.1％黄芪多糖稀释液对猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的免疫猪ELISA抗体检测试验结果
从表3可看出，ELISA法检测猪瘟抗体水平实验中，第13、20、27天时黄芪多糖组均显著高于生理盐水组与空白对照组(P＜0.05)。从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗脾淋苗和细胞苗的体液免疫效果。
综上所述，1％黄芪多糖注射液是一种能增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液。该稀释液具有特异性与非特异性增强机体免疫反应的功能，具有效果显著、易于生产、成本低廉、使用方便等特点。
Claims (4)
1.一种增强猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的疫苗稀释液的使用方法，其特征在于，所述的稀释液为1％黄芪多糖注射液，使用该稀释液稀释猪瘟兔化弱毒疫苗，稀释成每头份1毫升。
2.根据权利要求1所述的使用方法，其特征在于，所述的猪瘟兔化弱毒疫苗为脾淋或细胞苗。
3.根据权利要求2所述的使用方法，其特征在于，1％黄芪多糖稀释液明显的促进免疫猪的淋巴细胞转化，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫效果。
4.根据权利要求2所述的使用方法，其特征在于，1％黄芪多糖稀释液明显的促进免疫猪的免疫球蛋白的产生，从而增强猪瘟兔化弱毒疫苗的体液免疫效果。
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