CN102702070A - 包含(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的固体形式、其组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了包含(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的固体形式、包含该固体形式的组合物、制备该固体形式的方法、及其使用方法。该方法包括可通过降低TNF-α水平或抑制PDE4来改善的病症的治疗和/或预防方法。

Description

包含(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的固体形式、其组合物及其用途

1.发明领域 

本发明提供的是包含(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的固体形式、包含该固体形式的组合物、制备该固体形式的方法、以及使用它们治疗各种疾病和/或病症的方法。 

2．发明背景 

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种针对免疫刺激物产生应答而主要由单核吞噬细胞释放的细胞因子。TNF-α能够增强大部分细胞生理过程，例如分化、募集、增殖和蛋白降解。在低水平时，TNF-α产生对抗感染试剂、肿瘤和组织损伤的保护作用。但是，TNF-α也在许多疾病中发挥作用。当对患者施用时，TNF-α会引起或加剧炎症、发热、心血管效应、出血、凝血、以及与急性感染和休克状态期间所见的类似的急性期反应。许多疾病和医学病症都涉及增强的或不受控制的TNF-α产生，例如，癌症，例如固体肿瘤和血源性肿瘤；心脏病，例如充血性心力衰竭；以及病毒性、遗传性、炎性、过敏性和自体免疫性疾病。 

腺苷3',5'-环单磷酸(cAMP)也在许多疾病和病症中发挥作用，例如但不限于哮喘和炎症，以及其它病症(Lowe和Cheng，Drugs of the Future，17(9)，799-807，1992)。已经表明，cAMP在炎性白细胞中升高会抑制它们的激活和 炎性介质包括TNF-α和NF-κB的随后释放。cAMP水平升高还会导致气道平滑肌松弛。 

相信cAMP失活的主要细胞机制是cAMP被一类称作环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的同工酶分解(Beavo和Reitsnyder，Trends in Pharm.，11，150-155，1990)。现有十一个已知的PDE家族。已经认识到，例如，抑制PDE IV型在抑制炎性介质释放和气道平滑肌的松弛两者中都特别有效(Verghese等，JPharm.Exper.Therapeut.，272(3)，1313-1320，1995)。因此，抑制PDE4(PDEIV)的化合物可以特异性地抑制炎症并帮助气道平滑肌松弛，同时使不需要的副作用，例如心血管或抗血小板效应最小化。目前使用的PDE4抑制剂在可接受的治疗剂量下缺乏选择作用。 

癌症是一种特别具有破坏性的疾病，而且癌症的患病风险和扩散涉及TNF-α血水平的增加。通常，在健康的个体中，癌细胞不能在循环系统中存活，其中一个原因是血管内壁起到了阻碍肿瘤细胞外渗的作用。但是，已经表明细胞因子水平的增加在体外显著地增加了癌细胞与内皮的粘附。一种解释是细胞因子例如TNF-α刺激了称为ELAM-1(内皮白细胞粘附分子)的细胞表面受体的生物合成和表达。ELAM-1是已知称作LEC-CAM的钙依赖性细胞粘附受体家族的成员，该家族包括LECAM-1和GMP-140。在炎性反应期间，内皮细胞上的ELAM-1作为白细胞的“归巢受体”发挥作用。最近，显示内皮细胞上的ELAM-1介导结肠癌细胞与用细胞因子处理的内皮的粘附的增加(Rice等，1989，Science 246:1303-1306)。 

炎性疾病例如关节炎、相关的关节炎病症(例如骨关节炎和类风湿性关节炎)、炎性肠病(例如节段性肠炎和溃疡性结肠炎)、败血症、银屑病、特应性皮炎、接触性皮炎、慢性阻塞性肺病和慢性炎症性肺病也是广为流行的疑难 病症。TNF-α在炎性反应中发挥主要作用，而且在炎性疾病的动物模型中施用其拮抗剂阻碍了慢性和急性反应。 

病毒性、遗传性、炎症性、过敏性和自体免疫性疾病涉及增强的或不受控制的TNF-α产生。这样的疾病的实例包括但不限于：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎性疾病；哮喘；皮炎；囊性纤维化；感染性休克；败血症；内毒素性休克；血流动力学休克；败血症综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维化疾病；恶病质；移植排斥；自体免疫性疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性肠炎；溃疡性结肠炎；炎性肠病；多发性硬化；全身性红斑狼疮；麻风病中的ENL；辐射损伤；哮喘；和高氧肺泡损伤。Tracey等，1987，Nature 330:662-664和Hinshaw等，1990，Circ.Shock30:279-292(内毒素性休克)；Dezube等，1990，Lancet，335:662(恶病质)；Millar等，1989，Lancet 2:712-714和Ferrai-Baliviera等，1989，Arch.Surg.124:1400-1405(成人呼吸窘迫综合征)；Bertolini等，1986，Nature 319:516-518，Johnson等，1989，Endocrinology 124:1424-1427，Holler等，1990，Blood75:1011-1016，和Grau等，1989，N.Engl.J.Med.320:1586-1591(骨吸收疾病)；Pignet等，1990，Nature，344:245-247，Bissonnette等，1989，Inflammation13:329-339和Baughman等，1990，J.Lab.Clin.Med.115:36-42(慢性肺部炎性疾病)；Elliot等，1995，Int.J.Pharmac.17:141-145(类风湿性关节炎)；von Dullemen等，1995，Gastroenterology，109:129-135(节段性肠炎)；Duh等，1989，Proc.Nat.Acad.Sci.86:5974-5978，Poll等，1990，Proc.Nat.Acad.Sci.87:782-785，Monto等，1990，Blood 79:2670，Clouse等，1989，J.Immunol.142，431-438，Poll等，1992，AIDS Res.Hum.Retrovirus，191-197，PoIi等1990， Proc.Natl.Acad.Sci.87:782-784，Folks等，1989，PNAS 86:2365-2368(HIV和HIV导致的机会性感染)。 

可以阻断某些细胞因子包括TNF-α的活性或抑制其产生的药物化合物可成为有利的治疗剂。已经表明许多小分子抑制剂具有治疗或预防与TNF-α有关的炎性疾病的能力(综述参见Lowe，1998Exp.Opin.Ther.Patents 8:1309-1332)。一类这样的分子是在美国专利号6,020,358中描述的取代的苯乙基砜。 

考虑到固体形式的变化可能影响各种物理和化学性质，而这些性质可能会对加工、配制、稳定性和生物利用度、以及其它重要的药物特性产生益处或弊端，因此药物化合物的固体形式的制备和选择是复杂的。潜在的药物固体包括结晶固体和无定型固体。无定型固体的特征是缺乏长距离的结构次序，而结晶固体的特征是结构周期性。药物固体的所需类别取决于具体应用，有时基于例如增强的溶出度特征选择无定型固体，而结晶固体可能因为物理或化学稳定性等性质而适合需要(参见，例如，S.R.Vippagunta等，Adv.Drug.Deliv.Rev.，(2001)48:3-26；L.Yu，Adv.Drug.Deliv.Rev.，(2001)48:27-42)。 

不管是结晶还是无定型，药物化合物的潜在固体形式包括单一成分和多成分的固体。单一成分固体基本由药物化合物组成，不含其它化合物。单一成分结晶材料中可以潜在地出现变种，例如多晶型现象，在多晶型现象中特定的药物化合物存在多种三维排列(参见，例如，S.R.Byrn等，Solid State  Chemistry of Drugs，(1999)SSCI，West Lafayette)。Ritonavir，一种被配制为软明胶胶囊的HIV蛋白酶抑制剂，的例子强调了研究多晶型物的重要性。该产品投产约两年后，在制剂中一种新的较难溶的多晶型物的未曾预料到的沉淀迫使产品从市场上撤回，直到可以开发出一种具一致性的制剂(参见S.R.Chemburkar等，Org.Process Res.Dev.，(2000)4:413-417)。 

药物化合物的潜在固体形式中可以出现其它的多样性，例如，多成分固体的可能性。包含两种或多种离子种类的结晶固体可以被称作盐(参见例如， Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use，P.H.Stahl和C.G.Wermuth编辑，(2002)，Wiley，Weinheim)。可以为药物化合物或其盐潜在地提供其它性质改善的多成分固体的额外类型包括例如水合物、溶剂化物、共晶和包合物等(参见例如，S.R.Byrn等，Solid State Chemistry of Drugs，(1999)SSCI，West Lafayette)。此外，多成分晶型可潜在地易于成为多晶型，其中指定的多成分组合物可以多种三维结晶排列存在。固体形式的制备在开发安全、有效、稳定且可出售的药物化合物中是极其重要的。 

本发明提供的是符合对化学名称为(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的化合物(“化合物A”)的固体形式的需求的实施方案，该化合物公开在2003年3月19日提交的美国申请号10/392,195(作为美国专利号6,962,940被授权)、以及2002年3月20日提交的美国临时申请系列号60/366,515和2003年1月7日提交的60/438,450中。 

3．发明概述 

本发明涉及利用取代的苯乙基砜化合物的对映体及其药学上可接受的溶剂化物、水合物、共晶、包合物、前药和多晶型物治疗疾病和病症的方法，以及在哺乳动物中降低细胞因子及其前体水平的方法。本发明也涉及药物组合物，其含有2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体和药学上可接受的载体。本发明进一步涉及基本不含其(-)对映体的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体。 

本发明具体地涉及2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体。相信该化合物与其外消旋物2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮相比具有增加的效力和其它益处。 

本发明包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体用于在哺乳动物中治疗或预防可通过抑制TNF-α产生来改善的疾病或病症的用途。在某些实施方案中，这种治疗包括减少或避免不良作用。这种病症包括但不限于癌症，包括但不限于：头、甲状腺、颈、眼、皮肤、口、喉、食道、胸、骨、血、骨髓、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏、肾上腺、皮下组织、淋巴结、心脏、及其组合的癌症。通过这种方法可以治疗的具体癌症有多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性胶质瘤、白血病和固体肿瘤。 

本发明也包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体在治疗或预防心脏病，包括但不限于：充血性心力衰竭、心肌病、肺水肿、内毒素介导的感染性休克、急性病毒性心肌炎、心脏异体移植排斥和心肌梗塞中的用途。 

本发明也包括使用2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体来治疗可通过抑制PDE4来改善的疾病或病症。例如，本发明的化合物和组合物可用于治疗或预防病毒性、遗传性、炎症性、过敏性和自体免疫性疾病。这样的疾病的实例包括但不限于：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎性疾病；皮炎；炎症性皮肤疾病、特应性皮炎、囊性纤维化；感染性休克； 败血症；内毒素性休克；血流动力学休克；败血症综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维化疾病；恶病质；移植排斥包括移植物抗宿主病；自体免疫性疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性肠炎；溃疡性结肠炎；炎性肠病；多发性硬化；全身性红斑狼疮；麻风病中的麻风结节性红斑(ENL)；辐射损伤；哮喘；和高氧肺泡损伤。 

在又一实施方案中，2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的立体异构纯的(+)对映体在治疗或预防微生物感染或微生物感染的症状中也是有用的，包括但不限于细菌感染、真菌感染、疟疾、分枝杆菌感染、和HIV导致的机会性感染。 

本发明进一步包括药物组合物和单一单位剂型，其包含2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体及其药学上可接受的多晶型物、前药、水合物、包合物和溶剂化物。 

在一单独的实施方案中，本发明包括2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体。 

在一进一步的实施方案中，本发明包括制备2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的立体异构纯的(+)对映体的方法，其包括使1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙胺与手性氨基酸接触，并使第一步的产物与N-(1,3-二氧-1,3-二氢-异苯并呋喃-4-基)-乙酰胺接触。在一相关的实施方案中，本发明包括1-(3-乙氧基-4-甲氧基-苯基)-2-甲烷磺酰基-乙胺的手性盐。 

本发明的实施方案提供了固体形式，其包含化学名称为(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的化合物 (“化合物A”)。化合物A可以基于本文的教导，依照任何对本领域技术人员显而易见的方法，包括在下面实施例中描述的方法合成或获得。化合物A也可以依照在2005年11月8日授权的美国专利号6,962,940中描述的方法来制备，其其全文通过引用并入本文。 

在某些实施方案中，固体形式是化合物A的单一成分晶型。在某些实施方案中，固体形式是多成分晶型，包括但不限于包含化合物A的共晶和/或溶剂化物(包括水合物)。在其它实施方案中，固体形式是化合物A的单一成分无定型形式。在其它实施方案中，固体形式是多成分无定型形式。不希望受限于任何特定的理论，本发明提供的某些新型固体形式具有特定的有利物理和/或化学性质，使得其对例如制备、加工、配制和/或贮存有用，同时也具有特别有利的生物性质，例如如生物利用度和/或生物活性。 

在具体实施方案中，本发明提供的固体形式包括包含化合物A的固体形式，包括但不限于包含化合物A的单一成分和多成分固体形式。在某些实施方案中，本发明提供的固体形式包括包含化合物A的多晶型物、溶剂化物(包括水合物)、和共晶。本发明的某些实施方案提供了制备、分离和/或表征本发明提供的固体形式的方法。 

本发明提供的固体形式可用作活性药物成分用于制备在患者中使用的制剂。因此，本发明的实施方案包括这些固体形式作为最终药物产品的用途。某些实施方案提供了在制备最终剂型中有用的、且具有改善的性质，例如粉末流动性质、压实性质、压片性质、稳定性性质和赋形剂兼容性性质等制备、加工、配制和/或贮存最终药物产品所需要的性质的固体形式。本发明的某些实施方案提供了药物组合物，其含有包含化合物A的单一成分晶型、多成分晶型、单一成分无定型形式和/或多成分无定型形式，以及药学上可接受的稀 释剂、赋形剂或载体。本发明提供的固体形式和最终药物产品可用于例如治疗、预防或控制本发明所提供的疾病和病症。 

本发明的某些实施方案提供了使用本发明所提供的固体形式在哺乳动物中治疗、预防或控制可通过抑制TNF-α产生来改善的疾病或病症的方法，例如：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎性疾病；哮喘；皮炎；囊性纤维化；感染性休克；败血症；内毒素性休克；血流动力学休克；败血症综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维化疾病；恶病质；移植排斥；自体免疫性疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如银屑病关节炎、类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性肠炎；溃疡性结肠炎；炎性肠病；多发性硬化；全身性红斑狼疮；皮肤红斑狼疮；肺结节病；麻风病中的ENL；辐射损伤；哮喘；和高氧肺泡损伤。这种病症进一步包括但不限于癌症，包括但不限于：头、甲状腺、颈、眼、皮肤、口、喉、食道、胸、骨、血、骨髓、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏、肾上腺、皮下组织、淋巴结、心脏、及其组合的癌症。通过这种方法可以治疗的具体癌症有多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性胶质瘤、白血病和固体肿瘤。在某些实施方案中，使用本发明所提供的固体形式的方法包括减少或避免某些不良作用。 

本发明的某些实施方案提供了在心脏病的治疗或预防中使用本发明所提供的固体形式的方法，包括但不限于：充血性心力衰竭、心肌病、肺水肿、内毒素介导的感染性休克、急性病毒性心肌炎、心脏异体移植排斥和心肌梗塞。 

本发明的某些实施方案提供了使用本发明所提供的固体形式来治疗可通 过抑制PDE4来改善的疾病或病症的方法。例如，本发明所提供的固体形式可用于治疗或预防病毒性、遗传性、炎症性、过敏性和自体免疫性疾病。这种疾病的实例包括但不限于：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎性疾病；皮炎；炎症性皮肤疾病；特应性皮炎；囊性纤维化；感染性休克；败血症；内毒素性休克；血流动力学休克；败血症综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维化疾病；恶病质；移植排斥包括移植物抗宿主病；自体免疫性疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性肠炎；溃疡性结肠炎；炎性肠病；多发性硬化；全身性红斑狼疮；麻风病中的麻风结节性红斑(ENL)；辐射损伤；哮喘；和高氧肺泡损伤。 

本发明的某些实施方案提供了在治疗或预防微生物感染或微生物感染的症状中使用本发明所提供的固体形式的方法，包括但不限于细菌感染、真菌感染、疟疾、分枝杆菌感染、和HIV导致的机会性感染。 

本发明的具体实施方案提供了在疾病的治疗或预防中使用本发明所提供的固体形式的方法，这些疾病包括：银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、慢性皮肤肉样瘤、巨细胞动脉炎、帕金森症、结节性痒疹、扁平苔藓、复杂性口疮病、白塞病、狼疮、肝炎、葡萄膜炎、干燥综合征、抑郁(包括重性抑郁)、间质性膀胱炎、外阴痛、前列腺炎、骨关节炎、弥漫性大B细胞淋巴瘤、多肌炎、皮肌炎、包涵体肌炎、侵蚀性骨关节炎、间质性膀胱炎、肝炎、子宫内膜异位、神经根病、和坏疽性脓皮病。 

本发明的某些实施方案提供了包含一种或多种本发明所提供的固体形式的药物组合物和单一单位剂型。 

3.1附图的简要描述 

图1提供了化合物A的形式A的典型X射线粉末衍射(“XRPD”)图。 

图2提供了化合物A的形式A的典型差示扫描量热法(“DSC”)图。 

图3提供了化合物A的形式A的典型热失重分析(“TGA”)图。 

图4提供了化合物A的形式A的典型动态气相吸附(“DVS”)图。 

图5提供了化合物A的形式B的典型XRPD图。 

图6提供了化合物A的形式B的典型DSC图。 

图7提供了化合物A的形式B的典型TGA图。 

图8提供了化合物A的形式B的典型DVS图。 

图9提供了化合物A的形式C的典型XRPD图。 

图10提供了化合物A的形式C的典型DSC图。 

图11提供了化合物A的形式C的典型TGA图。 

图12提供了化合物A的形式C的典型DVS图。 

图13提供了化合物A的形式D的典型XRPD图。 

图14提供了化合物A的形式D的典型DSC图。 

图15提供了化合物A的形式D的典型TGA图。 

图16提供了化合物A的形式D的典型DVS图。 

图17提供了化合物A的形式E的典型XRPD图。 

图18提供了化合物A的形式E的典型DSC图。 

图19提供了化合物A的形式E的典型TGA图。 

图20提供了化合物A的形式E的典型DVS图。 

图21提供了化合物A的形式F的典型XRPD图。 

图22提供了化合物A的形式F的典型DSC图。 

图23提供了化合物A的形式F的典型TGA图。 

图24提供了化合物A的形式F的典型DVS图。 

图25提供了化合物A的形式G的典型XRPD。 

图26提供了化合物A的形式G的典型DSC图。 

图27提供了化合物A的形式G的典型TGA图。 

图28提供了化合物A的形式G的典型DVS图。 

图29显示了2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体的制备。 

图30显示了在清醒雪貂的肺中，化合物A对LPS诱导的中性白细胞增多的效果。 

图31显示了在患有重度斑块型银屑病的患者中评估化合物A的临床研究中，在第29天全部15位个体中表皮厚度的百分比变化。 

图32显示了在患有重度斑块型银屑病的患者中评估化合物A的临床研究中，在第29天损害皮肤的活检标本中平均iNOS(标准化的hARP)的变化。 

图33显示了在患有重度斑块型银屑病的患者中评估化合物A的临床研究中，在第29天可评价的患者中总银屑病区域和严重程度指数(PASI)评分从基线的百分比变化。 

3.2定义

本发明使用的术语“化合物A”指对映异构纯的(+)-2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮，当柱为150mm×4.6mm Ultron手性ES-OVS手性HPLC柱(Agilent Technology)，洗脱液是pH 3.5的15:85乙醇:20mM KH₂PO₄，且观测波长为240nm时，它在约25.4 分钟从该HPLC柱分离。化合物A的¹H NMR谱基本如下：δ(CDCl₃)；1.47(t，3H)；2.26(s，3H)；2.87(s，3H)；3.68-3.75(dd，1H)；3.85(s，3H)；4.07-4.15(q，2H)；4.51-4.61(dd，1H)；5.84-5.90(dd，1H)；6.82-8.77(m，6H)；9.46(s，1H)。化合物A的¹³C NMR谱基本如下：δ(DMSO-d₆)；14.66；24.92；41.61；48.53；54.46；55.91；64.51；111.44；112.40；115.10；118.20；120.28；124.94；129.22；131.02；136.09；137.60；148.62；149.74；167.46；169.14；169.48。溶解在甲醇中的化合物A向(+)方向旋转平面偏振光。 

不受限于理论，相信化合物A是S-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮}，其具有以下结构： 

本发明使用的术语“患者”指哺乳动物，特别是人。 

本发明使用的术语“药学上可接受的盐”指由药学上可接受的无毒酸或碱，包括无机酸和碱以及有机酸和碱制备的盐。 

除非另外指出，本发明使用的术语“前药”指化合物的衍生物，其可以水解、氧化、或以其他方式在生物条件(体外或体内)下反应以提供该化合物。前药的实例包括但不限于化合物A的包含可生物水解的部分，例如可生物水解的酰胺、可生物水解的酯、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸酯、可生物水解的酰脲、和可生物水解的磷酸盐类似物的衍生物和代谢物。前药通常可以使用熟知的方法制备，例如Burger′s Medicinal Chemistry and Drug  Discovery，172-178，949-982(Manfred E.Wolff编辑，第五版1995)描述的那些方法。 

除非另外指出，本发明使用的术语“可生物水解的酰胺”、“可生物水解的酯”、“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸酯”、“可生物水解的酰脲”、“可生物水解的磷酸盐”分别指化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、酰脲或磷酸盐，其1)不干扰化合物的生物活性，但可以在体内赋予该化合物有利特性，例如摄取、作用的持续、或作用的起始；或2)不是生物活性的，但在体内转换成生物活性化合物。可生物水解的酯的实例包括但不限于：低级烷基酯、烷氧基酰氧基酯、烷基酰基氨基烷基酯和胆碱酯。可生物水解的酰胺的实例包括但不限于低级烷基酰胺、α-氨基酸酰胺、烷氧基酰基酰胺和烷基氨基烷基羰基酰胺。可生物水解的氨基甲酸酯的实例包括但不限于：低级烷基胺、取代的乙二胺、氨基酸、羟烷基胺、杂环和芳杂环胺、以及聚醚胺。 

除非另外指出，本发明使用的术语“立体异构纯”指组合物包含化合物的一种立体异构体并且基本不含该化合物的其它立体异构体。例如，具有一个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物将基本不含该化合物的相反对映体。具有两个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物将基本不含该化合物的其它非对映异构体。典型的立体异构纯的化合物包含大于约80%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约20%重量的该化合物的其它立体异构体，更加优选地大于约90%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约10%重量的该化合物的其它立体异构体，甚至更加优选地大于约95%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约5%重量的该化合物的其它立体异构体，和最优选地大于约97%重量的该化合物的一种立体异构体和小于约3%重量的该化合物的其它立体异构体。 

除非另外指出，本发明使用的术语“对映异构纯”指具有一个手性中心的化合物的立体异构纯的组合物。 

本发明使用的术语“不良作用”包括但不限于胃肠、肾脏和肝脏毒性，白细胞减少，由于例如血小板减少而导致的出血时间增加，以及妊娠延长，恶心，呕吐，嗜睡，虚弱，眩晕，致畸，锥体外症状，静坐不能，心脏毒性包括心血管紊乱、炎症、男性性功能障碍、和血清肝酶水平升高。术语“胃肠毒性”包括但不限于胃肠溃疡和糜烂。术语“肾脏毒性”包括但不限于状况例如乳头坏死和慢性间质性肾炎。 

除非另外指出，本发明使用的词组“减少或避免不良作用”指减少一种或多种本发明锁定义的不良作用的严重程度。 

应当注意到，如果描述的结构和对该结构给出的名称之间存在不一致，则以描述的结构为准。另外，如果结构或结构部分的立体化学没有用例如粗线或虚线表示，则该结构或结构部分应被理解为包括其所有立体异构体。 

除非另外指定，本发明使用的术语“固体形式”及相关术语指并非主要处于液态或气态的物理形式。除非另外指定，本发明使用的术语“固体形式”及相关术语当在本发明中用来指化合物A时，指并非主要处于液态或气态的包含化合物A的物理形式。固体形式可以是结晶、无定型或其混合物。在具体实施方案中，固体形式可以是液态结晶。包含化合物A的“单一成分”固体形式基本由化合物A组成。包含化合物A的“多成分”固体形式包含在固体形式中的显著量的一个或多个额外种类，例如离子和/或分子。例如，在具体实施方案中，包含化合物A的结晶多成分固体形式进一步在晶格中包含一个或多个非共价地键合在有规律的位置的种类。包含化合物A的多成分固体形式包括化合物A的共晶、溶剂化物(例如水合物)和包合物。在具体实施方案中，术语“包 含化合物A的固体形式”和相关术语包括包含化合物A的单一成分和多成分固体形式。在具体实施方案中，“包含化合物A的固体形式”和相关术语包括包含化合物A的晶型、包含化合物A的无定型形式、及其混合物。 

除非另外指定，本发明使用的术语“结晶”及本发明使用的相关术语，当用来描述化合物、物质、修饰、材料、成分或产品时，除非另外指定，指该化合物、物质、修饰、材料、成分或产品通过X射线衍射测定基本为结晶。参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Lippincott，Williams and Wilkins，Baltimore，MD (2005)；The United States Pharmacopeia，第23版，1843-1844(1995)。 

除非另外指定，本发明使用的术语“晶型”、“结晶形式”及本文的相关术语，指结晶的固体形式。晶型包括单一成分晶型和多成分晶型，而且包括但不限于：多晶型物、溶剂化物、水合物、和/或其它分子配合物。在某些实施方案中，物质的晶型可以基本不含无定型形式和/或其它晶型。在某些实施方案中，物质的晶型可以包含约1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%重量的一种或多种无定型形式和/或其它晶型。在某些实施方案中，物质的晶型可以是物理和/或化学纯的。在某些实施方案中，物质的晶型可以是约99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%或90%物理和/或化学纯的。 

除非另外指定，本发明使用的术语“多晶型物”、“多晶型形式”及本文的相关术语指基本由相同分子和/或离子组成的两种或多种晶型。和不同的晶型一样，作为分子和/或离子在晶格中排列或构象的结果，不同的多晶型物可以具有不同的物理性质，例如如熔化温度、熔化热、溶解度、溶出度性质和/或振动光谱。物理性质的不同可以影响药物参数，例如贮存稳定性、可压性和密 度(在配方和产品制备中很重要)、以及溶出速率(生物利用度中的重要因素)。稳定性的不同可以由化学反应性的变化(例如不同的氧化使得剂型在包含一种多晶型物时比包含另一种多晶型物时更快地变色)或机械变化(例如，因为动力学优选的多晶型物转化成热力学更稳定的多晶型物，片剂在贮存中崩裂)或两者(例如，一种多晶型物的片剂更易于在高湿度分解)引起。作为溶解度/溶出度差异的结果，在极端情况下，一些固态转变可能导致效力缺失，或者，处于另一个极端，导致毒性。另外，在加工中物理性质可能是重要的(例如，一种多晶型物可能更容易形成溶剂化物、或可能不容易过滤和洗涤出杂质，而且颗粒形状和粒度分布在多晶型物之间可能是不同的)。 

除非另外指定，本发明使用的术语“溶剂化物”和“溶剂化的”指物质的包含溶剂的晶型。术语“水合物”和“水合的”指其中溶剂包含水的溶剂化物。“溶剂化物的多晶型物”指特定的溶剂化物组合物存在多种晶型。类似地，“水合物的多晶型物”指特定的水合物组合物存在多种晶型。本发明使用的术语“去溶剂化的溶剂化物”指可以通过从溶剂化物中移走溶剂而制备的物质的晶型。 

除非另外指定，本发明使用的术语“无定型”、“无定型形式”和本发明使用的相关术语，指谈及的物质、成分或产物通过X射线衍射测定基本不是结晶。具体地，术语“无定型形式”描述了无序的固体形式，即缺乏长距离的结晶次序的固体形式。在某些实施方案中，物质的无定型形式可以基本不含其它无定型形式和/或晶型。在其它实施方案中，物质的无定型形式可以包含低于约1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%重量的一种或多种其它无定型形式和/或晶型。在某些实施方案中，物质的无定型形式可以是物理和/或化学纯的。在某些实施方案中，物质的无定型形式是约99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%或90%物理和/ 或化学纯的。 

供表征晶型和无定型形式的技术包括但不限于：热失重分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)、X射线粉末衍射法(XRPD)、单晶X射线衍射法、振动光谱例如红外(IR)和拉曼光谱、固态和溶液核磁共振(NMR)光谱、光学显微镜、热台光学显微镜、扫描电子显微镜(SEM)、电子晶体学和定量分析、粒度分析(PSA)、表面积分析、溶解度测量、溶出度测量、元素分析和Karl Fischer分析。特征性的晶胞参数可以使用一种或多种技术测定，例如但不限于X射线衍射和中子衍射，包括单晶衍射和粉末衍射。可用于分析粉末衍射数据的技术包括轮廓精修，例如Rietveld精修，它可以用来例如在包含超过一种固相的样本中分析单一相相关的衍射峰。可用于分析粉末衍射数据的其它方法包括晶胞检索，其允许本领域技术人员从包含结晶粉末的样本测定晶胞参数。 

除非另外指定，本发明使用的术语“约”和“大约”与提供来表征特定固体形式的数值或值范围，例如具体温度或温度范围，例如如描述DSC或TGA热事件，包括例如熔化、脱水、去溶剂化或玻璃化转变事件的具体温度或温度范围；质量变化，例如作为温度或湿度的函数的质量变化；溶剂或水的含量，单位为例如质量或百分比；或峰位置，例如在通过IR或拉曼光谱或XRPD分析中的峰位置相连使用时，指该值或值范围可以偏离本领域普通技术人员认为合理的范围，但仍然描述该特定固体形式。例如，在具体实施方案中，除非另外指定，在这一上下文中使用的术语“约”和“大约”，指该数值或值范围可以在陈述的值或值范围的25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1.5%、1%、0.5%或0.25%内变化。 

除非另外指定，本发明使用的包含“基本纯”(例如基本不含其它固体形式和/或其它化学化合物)的特定晶型或无定型形式的样本，在具体实施方案中， 包含重量比低于约25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.75%、0.5%、0.25%或0.1%百分比的一种或多种其它固体形式和/或其它化学化合物。 

除非另外指定，本发明使用的“基本不含”一种或多种其它固体形式和/或其它化学化合物的样本或组合物，指该组合物包含，在具体实施方案中，重量比低于约25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.75%、0.5%、0.25%或0.1%百分比的一种或多种其它固体形式和/或其它化学化合物。 

除非另外指定，本发明使用的术语“治疗”指根除或改善疾病或病症、或者该疾病或病症相关的一种或多种症状。在某些实施方案中，该术语指向患有这样的疾病或病症的患者施用一种或多种预防或治疗剂以使得该疾病或病症的扩散或恶化最小化。在一些实施方案中，该术语指在特定疾病的症状发作后，伴随或不伴随其它额外活性剂，施用本发明所提供的化合物。 

除非另外指定，本发明使用的术语“预防”指预防疾病或病症、或其一种或多种症状的发作、复发或扩散。在某些实施方案中，该术语指在症状发作前，特别是对具有本发明所提供的疾病或病症风险的患者，伴随或不伴随其它额外的活性化合物，施用本发明所提供的化合物或用其治疗。该术语包含抑制或减轻特定疾病的症状。在某些实施方案中，尤其是具有疾病的家族史的患者为预防方案的候选人。另外，具有症状复发史的患者也是预防的潜在候选人。就这点而言，术语“预防”可以与术语“预防性治疗”互换使用。 

除非另外指定，本发明使用的术语“控制”指预防或减缓疾病或病症、或其一种或多种症状的进展、扩散或恶化。大多数情况下，患者从预防和/或治疗剂得到的有益效果不会使得疾病或病症治愈。就这点而言，术语“控制”包含治 疗曾患有特定疾病的患者，以试图预防或最小化疾病的复发。 

除非另外指定，本发明使用的化合物的“治疗有效量”是在疾病或病症的治疗或控制中足以提供治疗益处，或者延迟或最小化疾病或病症相关的一种或多种症状的量。化合物的治疗有效量指治疗剂的量，其单独或与其他治疗联合，在疾病或病症的治疗或控制中提供治疗益处。术语“治疗有效量”可包含改善总体治疗、减少或避免疾病或病症的症状或起因、或者增强另一种治疗剂的治疗效果的量。 

除非另外指定，本发明使用的化合物的“预防有效量”是足以预防疾病或病症或预防其复发的量。化合物的预防有效量指治疗剂的量，其单独或与其他药剂联合，在疾病的预防中提供预防益处。术语“预防有效量”可包含改善总体预防或增强另一种预防剂的预防效果的量。 

本发明使用的术语“组合物”将包含含有指定成分(如果指出的话，以指定量含有)的产品，以及任何直接或间接地由指定成分以指定量组合而产生的产品。“药学上可接受的”是指稀释剂、赋形剂或载体必须与制剂的其它成分相容，而且对其接受者无害。 

4．发明详细描述 

本发明涉及立体异构纯的化合物A，它是2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体，基本不含其(-)对映体，以及使用立体异构纯的化合物A和/或包含化合物A的固体形式的新方法和包含其的组合物。例如，本发明包括化合物A的体外和体内使用，以及将化合物A加入到在各种疾病和病症的治疗和预防中有用的药物组合物和单一单位剂型中。可通过降低TNF-α水平或抑制PDE4来改善的疾病和病症 是本领域熟知的，并在本发明中有描述。本发明的具体方法减少或避免了用作TNF-α抑制剂的化合物相关的不良作用。本发明的其它具体方法减少或避免了使用外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮相关的不良作用。 

本发明的具体方法包括治疗或预防疾病和病症，包括但不限于固体肿瘤、血源性肿瘤和炎性疾病的方法。 

包含化合物A或其药学上可接受的多晶型物、前药、包合物、溶剂化物或水合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)的本发明的药物和剂型可以在本发明的方法中使用。 

不受限于理论，相信化合物A，包括包含化合物A的固体形式，可以抑制TNF-α产生。因此，本发明的第一实施方案涉及抑制TNF-α产生的方法，其包括使表现出异常TNF-α产生的细胞与有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)接触。在一个具体实施方案中，本发明涉及抑制TNF-α产生的方法，其包括使表现出异常TNF-α产生的哺乳动物细胞与有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)接触。 

本发明也涉及在患者中治疗、预防或控制可通过降低TNF-α水平来改善的病症的方法，其包括向需要这种治疗或预防的患者施用治疗或预防有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)。在具体实施方案中，在哺乳动物中可通过抑制TNF-α产生 来改善的疾病或病症包括但不限于：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎性疾病；哮喘；皮炎；囊性纤维化；感染性休克；败血症；内毒素性休克；血流动力学休克；败血症综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维化疾病；恶病质；移植排斥；自体免疫性疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症，例如银屑病关节炎、类风湿性关节炎和骨关节炎；骨质疏松症；节段性肠炎；溃疡性结肠炎；炎性肠病；多发性硬化；全身性红斑狼疮；皮肤红斑狼疮；肺结节病；麻风病中的麻风结节性红斑(ENL)；辐射损伤；哮喘；和高氧肺泡损伤。这种病症进一步包括但不限于癌症，包括但不限于：头、甲状腺、颈、眼、皮肤、口、喉、食道、胸、骨、血、骨髓、肺、结肠、乙状结肠、直肠、胃、前列腺、乳房、卵巢、肾、肝、胰腺、脑、肠、心脏、肾上腺、皮下组织、淋巴结、心脏、及其组合的癌症。通过这种方法可以治疗的具体癌症有多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性胶质瘤、白血病和固体肿瘤。 

本发明的进一步的实施方案涉及在患者中治疗或预防癌症，包括但不限于固体肿瘤、血源性肿瘤、白血病，特别是多发性骨髓瘤的方法，其包括对需要这种治疗或预防的患者施用治疗有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)；具体地，其中的患者是哺乳动物。 

在另一实施方案中，本发明涉及抑制PDE4的方法，其包括使细胞(例如哺乳动物细胞)中的PDE4与有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)接触。 

本发明的进一步的实施方案涉及在患者中治疗或预防可通过抑制PDE4来改善的疾病或病症的方法，其包括对需要这种治疗或预防的患者施用治疗或预防有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)。可通过抑制PDE4来改善的病症包括但不限于哮喘、炎症(例如由再灌注引起的炎症)、慢性或急性阻塞性肺病、慢性或急性肺部炎性疾病、炎性肠病、节段性肠炎、白塞病、或结肠炎。 

在另一实施方案中，本发明涉及控制细胞中的cAMP水平的方法，其包括使细胞与有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)接触。本发明使用的术语“控制cAMP水平”包括预防或降低腺苷3',5'-环单磷酸(cAMP)在细胞中的分解速率或增加细胞中存在的腺苷3',5'-环单磷酸的量，优选地为哺乳动物细胞，更优选地为人类细胞。在具体方法中，与没有与本发明的化合物接触的同类细胞中的速率相比，cAMP分解速率降低了约10、25、50、100、200或500%。 

本发明的进一步的实施方案涉及在患者中治疗或预防抑郁、哮喘、炎症(例如接触性皮炎、特应性皮炎、银屑病、类风湿性关节炎、骨关节炎、炎症性皮肤疾病、由再灌注引起的炎症)、慢性或急性阻塞性肺病、慢性或肺部炎性疾病、炎性肠病、节段性肠炎、白塞病或结肠炎的方法，其包括对需要这种治疗或预防的患者施用治疗或预防有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的前药、代谢物、多晶型物、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)；具体地，其中患者是哺乳动物。 

本发明的一单独的实施方案包括治疗或预防骨髓增生异常综合征(MDS)的方法，其包括对需要这种治疗或预防的患者施用治疗或预防有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)。MDS指一组不同的造血干细胞病症。MDS的特征是细胞骨髓具有损害的形态和成熟(异常骨髓增生)，外周血血细胞减少，和进展到急性白血病的可变风险，其由无效血细胞产生引起。参见The Merck Manual 953(第17版，1999)和List等，1990，J.Clin.Oncol.8:1424。 

本发明的一单独的实施方案包括治疗或预防骨髓增殖性疾病(MPD)的方法，其包括对需要这种治疗或预防的患者施用治疗或预防有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)。骨髓增殖性疾病(MPD)指一组特征为造血干细胞克隆异常的病症。参见例如， Current Medical Diagnosis & Treatment，499页(第37版，Tierney等编辑，Appleton & Lange，1998)。 

本发明也包括治疗、预防或控制疼痛包括但不限于复杂区域性疼痛综合征的方法，其包括向需要这种治疗、预防或控制的患者施用治疗或预防有效量的立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物或前药(其中具体实施方案包括如本发明所描述的包含化合物A的固体形式)。在一具体的实施方案中，施用在旨在减少或避免复杂区域性疼痛综合征的症状的手术或物理治疗之前、期间或之后在患者中进行。 

在本发明的具体方法中，立体异构纯的化合物A或其药学上可接受的多晶型物、前药、溶剂化物、水合物或包合物(其中具体实施方案包括如本发明 所描述的包含化合物A的固体形式)用至少一种额外治疗剂辅助施用。额外治疗剂的实施例包括但不限于：抗癌药、抗炎药、抗组胺剂和减充血剂。 

4.1.包含化合物A的固体形式

本发明的某些实施方案提供了固体形式，其包含具有上面显示的化学结构的化合物A。外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮使用美国专利号6,020,358中的方法可轻易制备，其通过引用并入本文。化合物A是2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的(+)对映体，它可以依照对本领域技术人员显而易见的任何方法制备，包括美国专利号6,962,940中描述的方法，其通过引用并入本文。 

包含化合物A的固体形式包括单一成分和多成分的形式，包括晶型和无定型形式，而且包括但不限于多晶型物、溶剂化物、水合物、共晶和包合物。本发明的具体实施方案提供了化合物A的单一成分无定型固体形式。本发明的具体实施方案提供了化合物A的单一成分结晶固体形式。本发明的具体实施方案提供了包含化合物A的多成分无定型形式。本发明的具体实施方案提供了包含化合物A的多成分结晶固体形式。本发明提供的多成分固体形式包括可以用术语盐、共晶、水合物、溶剂化物、包合物和/或多晶型物描述的固体形式，也包括可以用一个或多个这些术语描述的固体形式。 

包含化合物A的固体形式可以通过本文描述的方法包括下面实施例中描述的方法或本领域已知的技术制备，包括加热、冷却、冷冻干燥、冻干、熔化淬冷、快速溶剂蒸发、缓慢溶剂蒸发、溶剂重结晶、反溶剂添加、浆重结晶、由熔化结晶、去溶剂化、在受限空间例如纳米孔或毛细管中重结晶、在 表面或模板例如聚合物上重结晶、在添加剂例如共晶配位分子的存在下重结晶、去溶剂化、脱水、快速冷却、缓慢冷却、暴露于溶剂和/或水、干燥包括例如真空干燥、蒸汽扩散、升华、研磨(包括例如冷研磨、溶剂滴落研磨或液体辅助研磨)、微波诱导沉淀、超声波降解诱导沉淀、激光诱导沉淀和由超临界流体沉淀。得到的固体形式的粒度可以变化(例如纳米级到毫米级)，这可以通过例如改变结晶条件例如结晶速率和/或结晶溶剂体系来控制，或通过粒度降低技术例如研磨、碾磨、微粉化或超声波降解来控制。 

尽管不希望受限于任何特定的理论，某些固体形式的特征在于适合药物和治疗剂型的物理性质例如稳定性、溶解度和溶出速率。此外，尽管不希望受限于任何特定的理论，某些固体形式的特征在于影响特定过程(例如产量、过滤、洗涤、干燥、碾磨、混合、压片、流动性、溶出度、配制、和冻干)的物理性质(例如密度、可压性、硬度、形态、解离、粘性、溶解度、水分吸收、电性质、热行为、固态反应性、物理稳定性、和化学稳定性)，这使得某些固体形式适合制备固体剂型。这样的性质可以使用如本文描述和本领域已知的具体分析化学技术测定，包括固态分析技术(例如X射线衍射、显微镜、光谱和热分析)。 

本发明的某些实施方案提供了包含一种或多种固体形式的组合物。某些实施方案提供了一种或多种固体形式与其它活性成分组合的组合物。某些实施方案提供了在疾病和病症的治疗、预防或控制中使用这些组合物的方法，包括但不限于本发明提供的疾病和病症。 

除包含化合物A的固体形式之外，本发明还提供了包含化合物A的前药的固体形式。 

本发明提供的固体形式也可以在化合物A中的一个或多个原子处包含非 天然的原子同位素部分。例如，化合物可以用放射性同位素来放射标记，例如如氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)、硫-35(³⁵S)、或碳-14(¹⁴C)。放射标记的化合物可用作治疗剂例如癌症治疗剂、研究试剂例如结合试验试剂、和诊断剂例如体内显像剂。化合物A的所有同位素变种，无论是否是放射性的，都被包含在本发明提供的实施方案的范围内。 

4.1.1.化合物A的形式A

本发明的某些实施方案提供化合物A的形式A晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式A可由各种溶剂获得，包括但不限于包含丙酮、乙醇及其混合物的溶剂体系。在某些实施方案中，形式A可以使用快速冷却结晶过程获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式A可以通过X射线粉末衍射分析来表征。化合物A的形式A的典型XRPD图在图1中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式A的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：8.1、14.4、15.2、17.4、18.4、19.2、20.5、22.8、23.2、23.6、24.5、25.1度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式A的特征是与图1中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式A的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰与本发明所提供的典型形式A图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式A可以通过热分析来表征。化合物A的形式A的典型DSC图在图2中显示。在某些实施方案中，形式A的特征是包含起始温度约145°C的吸热事件的DSC图。在某些实施方案中，形式A 的特征是进一步包含起始温度约155°C的吸热事件的DSC图。化合物A的形式A的典型TGA图在图3中显示。在某些实施方案中，形式A的特征是当从约25°C加热到约140°C时，包含低于样本总质量的约1%，例如约0.05%的质量损失的TGA图。在某些实施方案中，化合物A的形式A在晶格中不包含大量的水或其它溶剂。在某些实施方案中，形式A是未溶剂化的。在某些实施方案中，形式A是无水的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式A可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图4中显示。在某些实施方案中，当相对湿度(“RH”)从约0%增加到约95%RH，形式A表现出低于样本起始质量的约1%，例如约0.4%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。因此，在某些实施方案中，形式A是基本不吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式A材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式A对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式A可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式A材料是稳定的，例如当暴露于高温时，当暴露于高湿度时，当暴露于一种或多种溶剂时，和/或在压力下，其XRPD图保持基本不变。在某些实施方案中，例如，暴露于约40°C环境和约75%RH环境约四星期后，形式A是稳定的。在某些实施方案中，在约40°C暴露于一种或多种包含例如乙醇、水和/或庚烷的溶剂体系至少约四星期后，形式A是稳定的。在某些实施方案中，当暴露于包括但不限于甲苯的溶剂四星期时，形式A转化成化合物A的形式C。在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟，形式A是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式A可以通过颗粒分析来表征。在某 些实施方案中，形式A的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式A的样本包含具有片状形态的颗粒。在某些实施方案中，形式A的样本包含D₉₀值低于约18μm的颗粒。(本发明使用的D₉₀值，代表通过长度测量的粒度分布的百分位数为90；即90%的颗粒具有该值的长度或更短)。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式A。本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式A，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如，如本发明提供的包含化合物A的形式B、C、D、E、F、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式A是包含化合物A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明提供的包含化合物A的形式B、C、D、E、F、G和无定型固体形式。 

4.1.2.化合物A的形式B

本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式B晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式B可由各种溶剂获得，包括但不限于包含2-丙醇、丙酮、乙腈、乙醇、乙酸乙酯、庚烷、甲醇、甲基乙基酮、甲基叔丁醚、二氯甲烷、正丁醇、乙酸正丁酯、四氢呋喃、甲苯、水、以及包含其两种或多种的混合物的溶剂体系。例如，在某些实施方案中，形式B可以通过从包含1:1乙醇:水的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括在约25°C蒸发1:1乙醇:水的溶剂体系，接着分离形式B的过程来获得。例如，在某些实施方案中，形式B可以通过从包含1:1丙酮:乙醇的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括在约25°C在1:1丙酮:乙醇中浆化包含化合物A的固体形式约2天，接着分离形式B的过程来获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式B可以通过X射线粉末衍射分析来 表征。化合物A的形式B的典型XRPD图在图5中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式B的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：10.1、12.4、13.5、15.7、16.3、18.1、20.7、22.5、24.7、26.2、26.9、29.1度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式B的特征是与图5中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式B的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰与本发明提供的典型形式B图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式B可以通过热分析来表征。化合物A的形式B的典型DSC图在图6中显示。在某些实施方案中，形式B的特征是包含起始温度约154°C的吸热事件的DSC图。化合物A的形式B的典型TGA图在图7中显示。在某些实施方案中，形式B的特征是当从约25°C加热到约140°C时，包含低于样本总质量的约1%，例如约0.25%的质量损失的TGA图。在某些实施方案中，化合物A的形式B在晶格中不包含大量的水或其它溶剂。在某些实施方案中，形式B是无水的。在某些实施方案中，形式B是未溶剂化的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式B可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图8中显示。在某些实施方案中，当RH从约0%增加到约95%RH，形式B表现出低于样本起始质量的约1%，例如约0.6%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。在某些实施方案中，形式B是基本不吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式B材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式B对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式B可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式B材料是稳定的，例如当暴露于高温时，当暴露于高湿度时，当暴露于一种或多种溶剂时，和/或在压力下，其XRPD图保持基本不变。在某些实施方案中，例如，暴露于约40°C环境和约75%RH环境约四星期后，形式B是稳定的。在某些实施方案中，在约40°C暴露于包含例如乙醇、水或庚烷的溶剂体系至少约四星期后，形式B是稳定的。在某些实施方案中，暴露于包含例如甲苯的溶剂体系约四星期时，形式B转化成化合物A的形式C。在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟后，形式B是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式B可以通过颗粒分析来表征。在某些实施方案中，形式B的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式B的样本包含具有薄片样形态的颗粒。在某些实施方案中，形式B的样本包含D90值低于约12μm的颗粒。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式B。本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式B，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如，如本发明提供的包含化合物A的形式A、C、D、E、F、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式B是包含化合物A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、C、D、E、F、G和无定型固体形式。 

4.1.3.化合物A的形式C

本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式C晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式C可由各种溶剂体系获得，包括但不限于包含丙酮、乙 腈、乙醇、庚烷、甲醇、甲基乙基酮、四氢呋喃、甲苯、水、以及包含其两种或多种的混合物的溶剂体系。例如，在某些实施方案中，形式C可以通过从包含甲苯的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括使用甲苯作为反溶剂，接着分离形式C的过程来获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式C可以通过X射线粉末衍射分析来表征。化合物A的形式C的典型XRPD图在图9中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式C的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：7.5、11.3、15.3、16.4、17.8、21.4、22.6、23.5、24.8、25.5、26.4、27.6度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式C的特征是与图9中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式C的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰与本发明所提供的典型形式C图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式C可以通过热分析来表征。化合物A的形式C的典型DSC图在图10中显示。在某些实施方案中，形式C的特征是包含起始温度约138°C的吸热事件的DSC图。在某些实施方案中，特征性的形式CDSC图进一步包含一种或多种额外事件，例如如起始温度约166°C的吸热事件。化合物A的形式C的典型TGA图在图11中显示。在某些实施方案中，形式C的特征是当从约25°C加热到约140°C时，包含低于样本总质量的约10%，例如约5.9%的质量损失的TGA图。在某些实施方案中，如通过例如TG-IR分析显示的，TGA质量损失事件包含溶剂甲苯的损失。在某些实施方案中，化合物A的形式C是溶剂化的。在某些实施方案中，形式C是甲苯溶剂化物。在某些实施方案中，形式C的晶格每摩尔化合物A包含约三 摩尔甲苯。 

在某些实施方案中，化合物A的形式C可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图12中显示。在某些实施方案中，当RH从约0%增加到约95%RH，形式C表现出低于样本起始质量的约1%，例如约0.5%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。在某些实施方案中，形式C是基本不吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式C材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式C对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式C可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式C材料是稳定的，例如当暴露于高温时，当暴露于高湿度时，当暴露于一种或多种溶剂时，和/或在压力下，其XRPD图保持基本不变。在某些实施方案中，例如，暴露于约40°C环境和约75%RH环境约四星期后，形式C是稳定的。在某些实施方案中，在约40°C暴露于包含例如乙醇、水、庚烷或甲苯的溶剂体系至少约四星期后，形式C是稳定的。在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟后，形式C是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式C可以通过颗粒分析来表征。在某些实施方案中，形式C的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式C的样本包含具有片状形态的颗粒。在某些实施方案中，形式C的样本包含D₉₀值低于约12μm的颗粒。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式C。本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式C，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如，如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、D、E、F、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式C是包含化合物 A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、D、E、F、G和无定型固体形式。 

4.1.4.化合物A的形式D

本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式D晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式D可由各种溶剂获得，包括但不限于包含二氯甲烷的溶剂体系。例如，在某些实施方案中，形式D可以通过从包含二氯甲烷的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括蒸发二氯甲烷，接着分离形式D的过程来获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式D可以通过X射线粉末衍射分析来表征。化合物A的形式D的典型XRPD图在图13中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式D的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：7.5、9.6、11.3、13.9、16.3、17.7、20.5、23.2、24.6、25.2、26.0、28.8度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式D的特征是与图13中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式D的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰与本发明所提供的典型形式D图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式D可以通过热分析来表征。化合物A的形式D的典型DSC图在图14中显示。在某些实施方案中，形式D的特征是包含起始温度约100°C的吸热事件的DSC图。化合物A的形式D的典型TGA图在图15中显示。在某些实施方案中，形式D的特征是当从约25°C加热到约110°C时，包含低于样本总质量的约10%，例如约6.5%的质量损失 的TGA图。在某些实施方案中，如通过例如TG-IR分析显示的，TGA质量损失事件包含溶剂二氯甲烷(即亚甲基二氯)的损失。在某些实施方案中，化合物A的形式D是溶剂化的。在某些实施方案中，形式D是二氯甲烷溶剂化物。在某些实施方案中，形式D的晶格每摩尔化合物A包含约2.5摩尔二氯甲烷。 

在某些实施方案中，化合物A的形式D可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图16中显示。在某些实施方案中，当RH从约0%增加到约95%RH，形式D表现出低于样本起始质量的约3%，例如约1.5%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。因此，在某些实施方案中，形式D是轻微吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式D材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式D对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式D可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式D材料是稳定的，例如在压力下其XRPD图保持基本不变。例如，在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟后，形式D是稳定的。在某些实施方案中，暴露于约40°C环境和约75%RH环境约四星期后，形式D是稳定的，尽管在某些实施方案中，形式D的XRPD图得到的峰强度下降。在某些实施方案中，XRPD峰强度的这种下降是因为形成了包含化合物A的无定型材料。在某些实施方案中，在约40°C暴露于包含例如庚烷、乙醇和/或水的溶剂体系约四星期时，形式D转化成化合物A的形式B。在某些实施方案中，在约40°C暴露于包含甲苯的溶剂体系约四星期时，形式D转化成化合物A的形式C。 

在某些实施方案中，化合物A的形式D可以通过颗粒分析来表征。在某些实施方案中，形式D的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式D的样 本包含具有薄片样形态的颗粒。在某些实施方案中，形式D的样本包含D₉₀值低于约18μm的颗粒。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式D。本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式D，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、E、F、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式D是包含化合物A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、E、F、G和无定型固体形式。 

4.1.5.化合物A的形式E

本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式E晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式E可由各种溶剂获得，包括但不限于包含丙酮、乙腈、庚烷、二氯甲烷、以及包含其两种或多种的混合物的溶剂体系。例如，在某些实施方案中，形式E可以通过从包含乙腈的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括蒸发乙腈，接着分离形式E的过程来获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式E可以通过X射线粉末衍射分析来表征。化合物A的形式E的典型XRPD图在图17中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式E的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：7.6、9.2、11.4、15.5、16.5、17.9、19.6、20.5、21.6、22.8、23.8、26.6度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式E的特征是与图17中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式E的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰 与本发明所提供的典型形式E图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式E可以通过热分析来表征。化合物A的形式E的典型DSC图在图18中显示。在某些实施方案中，形式E的特征是包含起始温度约95°C的吸热事件的DSC图。化合物A的形式E的典型TGA图在图19中显示。在某些实施方案中，形式E的特征是当从约25°C加热到约110°C时，包含低于样本总质量的约8%，例如约4.0%的质量损失的TGA图。在某些实施方案中，如通过例如TG-IR分析显示的，TGA质量损失事件包含溶剂乙腈的损失。在某些实施方案中，化合物A的形式E是溶剂化的。在某些实施方案中，形式E是乙腈溶剂化物。在某些实施方案中，形式E的晶格每摩尔化合物A包含约2.5摩尔乙腈。 

在某些实施方案中，化合物A的形式E可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图20中显示。在某些实施方案中，当RH从约0%增加到约95%RH，形式E表现出低于样本起始质量的约10%，例如约5.1%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。在某些实施方案中，形式E是吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式E材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式E对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式E可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式E材料是稳定的，例如在压力下其XRPD图保持基本不变。例如，在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟后，形式E是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式E可以通过颗粒分析来表征。在某些实施方案中，形式E的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式E的样 本包含具有薄片样形态的颗粒。在某些实施方案中，形式E的样本包含D₉₀值低于约18μm的颗粒。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式E。本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式E，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、F、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式E是包含化合物A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、F、G和无定型固体形式。 

4.1.6.化合物A的形式F

本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式F晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式F可由各种溶剂获得，包括但不限于包含丙酮、乙醇、水、以及包含其两种或多种的混合物的溶剂体系。例如，在某些实施方案中，形式F可以通过从包含乙醇和/或水的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括使包含化合物A的固体形式与包含乙醇和/或水的溶剂体系接触，接着分离形式F的过程来获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式F可以通过X射线粉末衍射分析来表征。化合物A的形式F的典型XRPD图在图21中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式F的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：8.1、8.6、15.6、17.3、19.3、21.4、22.8、24.6、25.4、25.9、26.6、27.7度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式F的特征是与图21中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式F的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰与本发明所提供的典型形式F图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式F可以通过热分析来表征。化合物A的形式F的典型DSC图在图22中显示。在某些实施方案中，形式F的特征是包含起始温度约145°C的吸热事件的DSC图。化合物A的形式F的典型TGA图在图23中显示。在某些实施方案中，形式F的特征是当从约25°C加热到约180°C时，包含低于样本总质量的约1%，例如约0.1%的质量损失的TGA图。在某些实施方案中，化合物A的形式F在晶格中不包含大量的水或其它溶剂。在某些实施方案中，形式F是未溶剂化的。在某些实施方案中，形式F是无水的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式F可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图24中显示。在某些实施方案中，当RH从约0%增加到约95%RH，形式F表现出低于样本起始质量的约1%，例如约0.2%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。在某些实施方案中，形式F是基本不吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式F材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式F对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式F可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式F材料是稳定的，例如在压力下其XRPD图保持基本不变。例如，在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟后，形式F是稳定的。在某些实施方案中，在约25°C暴露于包含例如乙醇、丙酮或其混合物的溶剂体系约两天后，形式F是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式F可以通过颗粒分析来表征。在某 些实施方案中，形式F的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式F的样本包含具有薄片样形态的颗粒。在某些实施方案中，形式F的样本包含D₉₀值低于约18μm的颗粒。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式F。本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式F，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式F是包含化合物A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、G和无定型固体形式。 

4.1.7.化合物A的形式G

本发明的某些实施方案提供了化合物A的形式G晶型。在某些实施方案中，化合物A的形式G可由各种溶剂获得，包括但不限于包含乙酸乙酯的溶剂体系。例如，在某些实施方案中，形式G可以通过从包含乙酸乙酯的溶剂体系中结晶来获得，例如通过包括将包含化合物A的固体形式与包含乙酸乙酯的溶剂体系接触，接着分离形式G的过程来获得。 

在某些实施方案中，化合物A的形式G可以通过X射线粉末衍射分析来表征。化合物A的形式G的典型XRPD图在图25中提供。在某些实施方案中，化合物A的形式G的特征是位于以下近似位置中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一或十二个位置处的XRPD峰：7.9、9.5、11.7、15.7、16.8、18.1、19.7、21.8、22.8、25.1、25.8、26.7度2θ。在某些实施方案中，化合物A的形式G的特征是与图25中显示的图相匹配的XRPD图。在某些实施方案中，化合物A的形式G的特征是具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个峰与本发明所提供的典型形式G图中的峰相匹配的XRPD图。 

在某些实施方案中，化合物A的形式G可以通过热分析来表征。化合物A的形式G的典型DSC图在图26中显示。在某些实施方案中，形式G的特征是包含起始温度约109°C的吸热事件的DSC图。化合物A的形式G的典型TGA图在图27中显示。在某些实施方案中，形式G的特征是当从约25°C加热到约110°C时，包含低于样本总质量的约8%，例如约3.8%的质量损失的TGA图。在某些实施方案中，如通过例如TG-IR分析显示的，TGA质量损失事件包含溶剂乙酸乙酯的损失。在某些实施方案中，化合物A的形式G是溶剂化的。在某些实施方案中，形式G是乙酸乙酯溶剂化物。在某些实施方案中，形式G的晶格每摩尔化合物A包含约三摩尔乙酸乙酯。 

在某些实施方案中，化合物A的形式G可以通过水分吸附分析来表征。典型的水分吸附等温图在图28中显示。在某些实施方案中，当RH从约0%增加到约95%RH，形式G表现出低于样本起始质量的约1%，例如约0.4%的质量变化。在某些实施方案中，当RH降回到约0%RH，由吸附获得的质量消失。在某些实施方案中，形式G是基本不吸湿的。在某些实施方案中，吸附/解吸附分析后形式G材料的XRPD图基本不变。在某些实施方案中，形式G对于湿度是稳定的。 

在某些实施方案中，化合物A的形式G可以通过其稳定性特征来表征。在某些实施方案中，形式G材料是稳定的，例如其XRPD图在压力下保持基本不变。例如，在某些实施方案中，在压力约2000psi的压力下约一分钟后，形式F是稳定的。在某些实施方案中，在约25°C暴露于包含例如乙醇、丙酮或其混合物的溶剂体系约两天时，形式G转化成形式B。 

在某些实施方案中，化合物A的形式G可以通过颗粒分析来表征。在某些实施方案中，形式G的特征是白色粉末。在某些实施方案中，形式G的样本包含具有薄片样形态的颗粒。在某些实施方案中，形式G的样本包含D₉₀值低于约18μm的颗粒。 

本发明的某些实施方案提供了基本纯的化合物A的形式G。本发明的某些实施方案提供化合物A的形式G，其基本不含其它包含化合物A的固体形式，包括例如如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、F和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供的形式G是包含化合物A的固体形式的混合物，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、F和无定型固体形式。 

4.2.治疗方法

本发明包括在患者中治疗、预防和控制可通过降低TNF-α水平来改善的疾病或病症的方法，其包括向需要这种治疗、预防或控制的患者施用治疗或预防有效量的一种或多种包含化合物A的固体形式，例如如，如本发明所提供的化合物A的形式A、化合物A的形式B、化合物A的形式C、化合物A的形式D、化合物A的形式E、化合物A的形式F、化合物A的形式G、或化合物A的无定型形式。 

可通过抑制TNF-α来改善的病症包括但不限于：心脏病，例如充血性心力衰竭、心肌病、肺水肿、内毒素介导的感染性休克、急性病毒性心肌炎、心脏异体移植排斥、和心肌梗塞；固体肿瘤，包括但不限于肉瘤、癌、纤维肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、骨源性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、Ewing's肿瘤、 平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、肾母细胞瘤、子宫颈癌、睾丸肿瘤、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、Kaposi's肉瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、成神经细胞瘤、和视网膜母细胞瘤；以及血源性肿瘤，包括但不限于急性成淋巴细胞性白血病“ALL”、急性成淋巴细胞性B细胞白血病、急性成淋巴细胞性T细胞白血病、急性原始粒细胞性白血病“AML”、急性早幼粒细胞性白血病“APL”、急性成单核细胞性白血病、急性红白血病性白血病、急性成巨核细胞性白血病、急性粒单核细胞性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、急性未分化性白血病、慢性粒细胞性白血病“CML”、慢性淋巴细胞性白血病“CLL”、毛细胞白血病、多发性骨髓瘤、和急性和慢性白血病，例如成淋巴细胞性、骨髓性、淋巴细胞性、和粒细胞性白血病。 

本发明的具体方法进一步包括施用额外的治疗剂(即化合物A之外的治疗剂)。额外治疗剂的实施例包括但不限于抗癌药，例如但不限于：烷化剂、氮芥、乙烯亚胺、甲基三聚氰胺、烷基磺酸盐、亚硝基脲、三氮烯、叶酸类似物、嘧啶类似物、嘌呤类似物、长春花生物碱、表鬼臼毒素、抗生素、拓扑异构酶抑制剂和抗癌疫苗。 

具体的额外治疗剂包括但不限于：阿西维辛、阿柔比星、盐酸阿考达唑、阿克罗宁、阿多来新、阿地白介素、六甲蜜胺、安波霉素、醋酸阿美蒽醌、氨鲁米特、安吖啶、阿那曲唑、安曲霉素、门冬酰胺酶、曲林菌素、阿扎胞苷、阿扎替派、阿佐霉素、巴马司他、苯佐替派、比卡鲁胺、盐酸比生群、 二甲磺酸双奈法德、比折来新、硫酸博来霉素、布喹那钠、溴匹立明、白消安、放线菌素C、卡普睾酮、卡醋胺、卡贝替姆、卡铂、卡莫司汀、盐酸卡柔比星、卡折来新、西地芬戈、苯丁酸氮芥、西罗霉素、顺铂、克拉屈滨、甲磺酸克立那托、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、盐酸柔红霉素、地西他滨、右奥马铂、地扎胍宁、甲磺酸地扎胍宁、地吖醌、多西紫杉醇、多柔比星、盐酸多柔比星、屈洛昔芬、柠檬酸屈洛昔芬、丙酸屈他雄酮、达佐霉素、依达曲沙、盐酸依氟鸟氨酸、依沙芦星、恩洛铂、恩普氨酯、依匹哌啶、盐酸表柔比星、厄布洛唑、盐酸依索比星、雌莫司汀、雌莫司汀磷酸钠、依他硝唑、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氯苯乙嘧胺、盐酸法倔唑、法扎拉滨、芬维A胺、氟尿苷、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟西他滨、磷喹酮、福司曲星钠、吉西他滨、盐酸吉西他滨、羟基脲、盐酸伊达比星、异环磷酰胺、伊莫福新、白细胞介素II(包括重组的白细胞介素II或rIL2)、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β-Ia、干扰素γ-Ib、异丙铂、盐酸依立替康、醋酸兰瑞肽、来曲唑、醋酸亮丙瑞林、盐酸利阿唑、洛美曲索钠、洛莫司汀、盐酸洛索蒽醌、马索罗酚、美登素、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、醋酸美仑孕酮、美法仑、美诺立尔、巯嘌呤、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤钠、氯苯氨啶、美妥替哌、米丁度胺、米托克星、丝裂红素、米托洁林、米托马星、丝裂霉素、米托司培、米托坦、盐酸米托蒽醌、麦考酚酸、诺考达唑、诺拉霉素、奥马铂、奥昔舒仑、紫杉醇、培门冬酶、培利霉素、奈莫司汀、硫酸培洛霉素、培磷酰胺、哌泊溴烷、哌泊舒凡、盐酸吡罗蒽醌、普卡霉素、普洛美坦、卟吩姆钠、泊非霉素、泼尼莫司汀、盐酸丙卡巴肼、嘌罗霉素、盐酸嘌罗霉素、吡唑呋喃菌素、利波腺苷、罗谷亚胺、沙芬戈、盐酸沙芬戈、司莫司汀、辛曲秦、磷乙酰天冬氨酸钠、司帕霉素、盐酸锗螺胺、 螺莫司汀、螺铂、链黑菌素、链佐星、磺氯苯脲、他利霉素、替可加兰钠、替加氟、盐酸替洛蒽醌、替莫泊芬、替尼泊苷、替罗昔隆、睾内酪、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤、塞替派、噻唑呋林、替拉扎明、柠檬酸托瑞米芬、醋酸曲托龙、磷酸曲西立滨、三甲曲沙、三甲曲沙葡糖醛酸盐、曲普瑞林、盐酸妥布氯唑、乌拉莫司汀、乌瑞替派、伐普肽、维替泊芬、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春地辛、硫酸长春地辛、硫酸长春匹定、硫酸长春甘酯、硫酸长春罗新、酒石酸长春瑞滨、硫酸长春罗定、硫酸长春利定、伏氯唑、折尼铂、净司他丁、盐酸佐柔比星。其它抗癌药包括但不限于：20-表-1,25二羟基维生素D3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙；阿柔比星；酰基富烯；腺环戊醇；阿多来新；阿地白介素；全TK拮抗剂；六甲蜜胺；氨莫司汀；2,4二氯苯氧乙酸；氨磷汀；氨基乙酰丙酸；氨柔比星；安吖啶；阿那格雷；阿那曲唑；穿心莲内酯；血管生成抑制剂；拮抗剂D；拮抗剂G；安雷利克斯；抗背部化形态发生蛋白-1；抗雄激素，前列腺癌；抗雌激素；抗瘤酮；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素；凋亡基因调节剂；凋亡调节剂；脱嘌呤核酸；ara-CDP-DL-PTBA；精氨酸脱氨酶；9-[2-甲氧基-4-(甲基磺酰基氨基)苯基氨基]-N,5-二甲基-4-吖啶甲酰胺；阿他美坦；阿莫司汀；axinastatin 1；axinastatin2；axinastatin 3；阿扎司琼；阿扎毒素；重氮酪氨酸；浆果赤霉素III衍生物；巴兰醇(balanol)；巴马司他；BCR/ABL拮抗剂；苯并绿素类；苯甲酰基星孢菌素；β内酰胺衍生物；β-alethine；贝塔克拉霉素(betaclamycin)B；白桦脂酸；bFGF抑制剂；比卡鲁胺；比生群；二氮丙啶基精胺；双奈法德；二枸橼酸环己噻卓酯A；比折来新；布福雷(breflate)；溴匹立明；布度钛；丁硫氨酸亚砜胺；卡泊三醇；calphostin C；喜树碱衍生物；金丝雀痘IL-2；卡培他滨；甲酰胺-氨基-三唑；羧基氨基三唑；CaRest M3；CARN 700；源自软骨的抑制剂； 卡折来新；casein激酶抑制剂(ICOS)；栗精胺；杀菌肽B；西曲瑞克；绿素类；磺胺氯喹喔啉；西卡前列素；顺式卟啉；克拉屈滨；氯米芬类似物；克霉唑；考利丝霉素(collismycin)A；考利丝霉素B；考布他汀A4；考布他汀类似物；conagenin；crambescidin 816；克立那托；自念珠藻环肽8；自念珠藻环肽A衍生物；curacin A；环戊蒽醌；环铂(cycloplatam)；赛可霉素(cypemycin)；阿糖胞苷十八烷基磷酸钠；细胞裂解因子；磷酸己烷雌酚；达昔单抗；地西他滨；脱氢的环羧酚酸肽(dehydrodidemnin)B；地洛瑞林；地塞米松；右异环磷酰胺；右雷佐生；右维拉帕米；地吖醌；环羧酚酸肽(didemnin)B；3,4-二羟基苯并氧肟酸(didox)；二乙基去甲精胺；二氢-5-氮杂胞苷；二氢泰素，9-；二草霉素；联苯基螺莫司汀；多西紫杉醇；二十二烷醇；多拉司琼；去氧氟尿苷；屈洛昔芬；屈大麻酚；多卡霉素(duocarmycin)SA；依布硒；依考莫司汀；依地福新；依决洛单抗；依氟鸟氨酸；榄香烯乳；乙嘧替氟；表柔比星；爱普列特；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑；磷酸依托泊苷；依西美坦；法倔唑；法扎拉滨；芬维A胺；非格司亭；非那雄胺；夫拉平度；氟卓斯汀；荧蒽固酮；氟达拉滨；盐酸氟道诺霉素；福酚美克；福美坦；福司曲星；福莫司汀；得克萨菲啉钆；硝酸镓；加洛他滨；加尼瑞克；明胶酶抑制剂；吉西他滨；谷胱甘肽抑制剂；氨基磺酸1,7庚烷二基酯；heregulin；六亚甲基二乙酰胺；金丝桃素；伊班膦酸；伊达比星；碘昔芬；伊决孟酮；伊莫福新；伊洛马司他；咪唑并吖啶酮；咪喹莫特；免疫刺激剂多肽；胰岛素样生长因子-1受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰素；白细胞介素；碘苄胍；碘多柔比星；甘薯醇，4-；伊罗普拉；伊索拉定；异邦格唑(isobengazole)；isohomohalicondrin B；伊他司琼；jasplakinolide；kahalalide F；三乙酸片螺素-N；兰瑞肽；雷那霉素(leinamycin)；来格司亭；硫酸香菇多糖； leptolstatin；来曲唑；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙瑞林+雌激素+孕酮；亮丙瑞林；左旋咪唑；利阿唑；线形聚胺类似物；亲油的二糖肽；亲油的铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂；蚯蚓氨酸；洛美曲索；氯尼达明；洛索蒽醌；洛伐他汀；洛索立宾；勒托替康；得克萨菲啉镥；1-((R)-5-羟基己基)可可碱；裂解多肽；美坦新；mannostatin A；马立马司他；马索罗酚；maspin；基质溶解素抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；美诺立尔；美巴龙；美替瑞林；蛋氨酸酶；甲氧氯普胺；MIF抑制剂；米非司酮；米替福新；米立司亭；错配的双链RNA；米托胍腙；二溴卫矛醇；丝裂霉素类似物；米托萘胺；mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素；米托蒽醌；莫法罗汀；莫拉司亭；单克隆抗体，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰基脂质A+分支杆菌细胞壁sk；莫哌达醇；多药抗性基因抑制剂；基于多肿瘤抑制剂1的治疗；甘露莫司汀抗癌剂；印度洋海绵B；分枝杆菌细胞壁提取物；myriaporone；N-乙酰基地那林；N-取代苯甲酰胺；那法瑞林；nagrestip；纳洛酮+镇痛新；napavin；萘萜二醇；那托司亭；奈达铂；奈莫柔比星；奈立膦酸；中性肽链内切酶；尼鲁米特；尼沙霉素(nisamycin)；一氧化氮调节剂；硝基氧抗氧化剂；nitrullyn；O6-苄基鸟嘌呤；奥曲肽；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮；昂丹司琼；昂丹司琼；双氯非那胺；口服的细胞因子诱导剂；奥马铂；奥沙特隆；奥沙利铂；奥克萨霉素(oxaunomycin)；紫杉醇；紫杉醇类似物；紫杉醇衍生物；帕劳胺；棕榈酰根瘤菌素；帕米膦酸；人参三醇；帕诺米芬；六配位儿茶胺铁螯合剂副菌铁素；帕折普汀；培门冬酶；培得星；戊聚糖聚硫酸钠；喷司他丁；盘托唑(pentrozole)；潘氟隆；培磷酰胺；芥子醇；吩嗪霉素(phenazinomycin)；苯乙酸；磷酸酶抑制剂；溶链菌；盐酸匹鲁卡品；吡柔比星；吡曲克辛；placetin A；placetin B；纤溶酶原激活剂的抑制剂；铂复合物；铂化合物；铂-三胺复合物；卟吩姆钠； 泊非霉素；泼尼松；丙基二-吖啶酮；前列腺素J2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白A的免疫调节剂；蛋白激酶C抑制剂；蛋白激酶C抑制剂，微藻；蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；羟基茜草素；吡唑啉吖啶；血红蛋白吡醇羟乙酯聚氧乙烯共轭物；raf拮抗剂；雷替曲塞；雷莫司琼；ras法呢基蛋白转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-GAP抑制剂；去甲基瑞替普汀；依替膦酸铼Re 186；根瘤菌素；核酶；RII维A胺；罗谷亚胺；罗希吐碱；罗莫肽；罗喹美克；rubiginone B1；ruboxyl；沙芬戈；saintopin；SarCNU；萨科叶绿醇(sarcophytol)A；沙莫司亭；Sdi1模仿物；司莫司汀；源自衰老的抑制剂1；正义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；西佐喃；索布佐生；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明；膦门冬酸；斯拜可霉素(spicamycin)D；螺莫司汀；脾脏五肽；CD-螺环缩酮前体δ-内酯1；鲨胺；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；stipiamide；基质溶解素抑制剂sulfinosine；强效的血管活性肠肽拮抗剂；suradista；舒拉明；苦马豆碱；合成的糖胺聚糖；他莫司汀；他莫昔芬甲碘化物；牛磺莫司汀；他扎罗汀；替可加兰钠；替加氟；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫泊芬；替莫唑胺；替尼泊苷；十氧化四氯；四氮胺(tetrazomine)；唐松草碱；噻可拉林；血小板生成素；血小板生成素模仿物；胸腺法新；胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南；促甲状腺激素；乙基锡初紫红素；替拉扎明；二氯钛烯；海洋生物碱topsentin；托瑞米芬；全能的干细胞因子；转译抑制剂；维A酸；三乙酰基尿苷；曲西立滨；三甲曲沙；曲普瑞林；托烷司琼；妥罗雄脲；酪氨酸激酶抑制剂；酪氨酸磷酸化抑制剂tyrphostins；UBC抑制剂；乌苯美司；源自泌尿生殖窦的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；伐普肽；variolin B；载体系统，红细胞基因治疗；维拉雷琐；藜芦胺；verdins； 维替泊芬；长春瑞滨；长春磷汀；维他辛(vitaxin)；伏氯唑；扎诺特隆；折尼铂；亚苄维C；和净司他丁斯酯。 

本文的实施方案进一步包括在患者中治疗或预防可通过抑制PDE4来改善的疾病或病症的方法，其包括向需要这种治疗或预防的患者施用一种或多种包含化合物A的固体形式。可通过抑制PDE4来改善的病症包括但不限于哮喘、炎症、慢性或急性阻塞性肺病、慢性或急性肺部炎性疾病、炎性肠病、节段性肠炎、白塞病、结肠炎、溃疡性结肠炎、和关节炎、或由再灌注引起的炎症。在一个优选的实施方案中，待治疗或预防的疾病或病症是慢性阻塞性肺病。 

本发明的具体方法可以包括施用额外的治疗剂，例如但不限于抗炎药、抗组胺剂和减充血剂。这样的额外治疗剂的实例包括但不限于：抗组胺剂，包括但不限于乙醇胺、乙二胺、哌嗪和吩噻嗪；抗炎药；非类固醇抗炎药(NSAIDS)，包括但不限于阿司匹林、水杨酸盐、对乙酰氨基酚、吲哚美辛、舒林酸、依托度酸、芬那酯、托美丁、酮咯酸、双氯芬酸、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、酮洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦、吡罗昔康、美洛昔康、吡唑啉酮衍生物；以及类固醇，包括但不限于皮质类固醇和肾上腺皮质类固醇。 

本发明的具体方法避免或降低了在这样的病症的治疗中使用的药剂(包括外消旋的取代的苯基乙基砜)相关的药物间相互作用和其它不良作用。不受限于任何理论，某些包含化合物A的固体形式可相对于外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮，包括其固体形式进一步提供总体改善的治疗效果或治疗指数。 

如上所述，某些包含化合物A的固体形式可以用于治疗或预防各种疾病和病症。在疾病或病症的急性或慢性控制中，本发明的特定活性成分的预防 或治疗剂量的量可以随疾病或病症的性质和严重程度、以及活性成分的施用途径而变化。剂量也许还有给药频率，也将依照个体患者的年龄、体重和反应而变化。合适的给药方案可以由本领域技术人员考虑到这些因素而轻而易举地选择。一般来说，对本本发明所述的病症，推荐的每日剂量为每天约1mg到约1,000mg，在一天内作为单一的一日一次剂量给予，优选地作为分开的剂量给予。更具体地，每日剂量以等份的分开剂量每天两次给予。特别地，每日剂量范围可以为每天约5mg到约500mg，更加特别地在每天约10mg和约200mg。特别地，每日剂量可以以5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg或100mg的剂型施用。在控制患者时，治疗应当从较低剂量开始，可能为约1mg到约25mg，而且取决于患者的整体反应，如果有必要的话，增加到每天约200mg到约1,000mg，作为单一剂量或分开的剂量。或者，每日剂量从0.01mg/kg到100mg/kg。 

在一些情况下，在本发明所公开的剂量范围外使用活性成分可能是必要的，这对本领域普通技术人员将是显然的。此外应注意到，临床医师或治疗医生结合个体患者的反应，将懂得怎样和何时中断、调整或终止治疗。 

本发明使用的词组“治疗有效量”、“预防有效量”和“治疗或预防有效量”，包括上述给药量和给药频率时间表。不同的治疗有效量可以被应用于不同疾病和病症，这是本领域普通技术人员将轻易了解的。类似地，足以治疗或预防这样的病症，但不足以引起或足以减少与外消旋的2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮相关的不良作用的量，也包括在上述给药量和给药频率时间表中。 

4.3.药物组合物

本文提供了包含一种或多种包含化合物A的固体形式的药物组合物和单一单位剂型。本发明也提供了包含一种或多种包含化合物A的固体形式的药物组合物和单一单位剂型的制备方法。例如，在某些实施方案中，包含本发明所提供的固体形式或使用本发明所提供的固体形式制备的分开剂型可以适于口服、黏膜(包括直肠、鼻或阴道)、肠胃外(包括皮下、肌肉内、推注、动脉内、或静脉内)、舌下、透皮、口腔、或局部施用。 

在某些实施方案中，本发明所提供的药物组合物和剂型含有一种或多种包含化合物A的固体形式。本发明的某些实施方案提供了含有包含化合物A的固体形式，例如如，如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、F、G或无定型固体形式的药物组合物和剂型，其中包含化合物A的固体形式是基本纯的。本发明的某些实施方案提供了含有包含化合物A的固体形式，例如，如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、F、G或无定型固体形式的药物组合物和剂型，其基本不含包含化合物A的其它固体形式，包括例如，如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、F、G和/或无定型固体形式。本发明的某些实施方案提供了含有包含化合物A的固体形式的混合物的药物组合物和剂型，包括例如包含以下一种或多种的混合物：如本发明所提供的包含化合物A的形式A、B、C、D、E、F和无定型固体形式。本发明所提供的药物组合物和剂型通常也包含一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。 

被这一实施方案包含的具体药物组合物含有一种或多种包含化合物A的固体形式和至少一种额外治疗剂。额外治疗剂的实例包括但不限于抗癌药和抗炎症治疗剂，包括但不限于本发明所提供的那些。 

本发明的单一单位剂型适于口服、黏膜(例如鼻、舌下、阴道、口腔或直 肠)、肠胃外(例如皮下、静脉内、推注、肌肉内或动脉内)、或透皮给予患者。剂型的实例包括但不限于：片剂；囊片；胶囊例如软弹性明胶胶囊；扁囊剂；糖锭；锭剂；分散剂；栓剂；油膏；糊剂(泥罨剂)；膏剂；粉末；敷料；乳膏；膏药；溶液；贴片；气溶胶(例如鼻喷雾剂或吸入剂)；凝胶；适合对患者口服或黏膜施用的液体剂型，包括悬浮液(例如水或非水液体的悬浮液、水包油乳液、或油包水液体乳剂)、溶液和酏剂；适合对患者肠胃外施用的液体剂型；和无菌固体(例如结晶或无定形固体)，其可以被重配以提供适合对患者肠胃外施用的液体剂型。 

本发明的剂型的组合物、形状和类型将通常取决于其用途而变化。例如，和用于同一疾病的慢性治疗的剂型相比，用于炎症或相关病症的急救治疗的剂型可以包含更大量的一种或多种活性成分。类似地，和用于治疗同一疾病或病症的口服剂型相比，肠胃外剂型可以包含更少量的一种或多种活性成分。本发明所包括的具体剂型的这些和其他方式的彼此变化，对本领域技术人员将是显而易见的。参见，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。 

典型的药物组合物和剂型包含一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是制药领域技术人员熟知的，而且合适的赋形剂的非限制性实例在本发明中有提供。具体赋形剂是否适合加入到药物组合物或剂型取决于本领域熟知的多种因素，包括但不限于将剂型施用于患者的方式。例如，口服剂型例如片剂可以包含不适合在肠胃外剂型中使用的赋形剂。具体赋形剂的适合性也可以取决于剂型中的具体活性成分。 

本发明的不含乳糖的组合物可以包含本领域熟知的和在例如美国药典(USP)SP(XXI)/NF(XVI)中列出的赋形剂。一般来说，不含乳糖的组合物包含 药学上相容且药学上可接受量的活性成分、粘合剂/填充剂、以及润滑剂。优选的不含乳糖的剂型包含活性成分、微晶纤维素、预胶化淀粉、和硬脂酸镁。 

因为水可以促进一些化合物的降解，因此本发明进一步包括包含活性成分的无水药物组合物和剂型。例如，为了确定例如保质期或制剂随时间的稳定性等特性，加水(例如5%)是药学领域广泛接受的模拟长期贮存的手段。参见，例如，Jens T.Carstensen，Drug Stability:Principles & Practice，第2版，Marcel Dekker，NY，NY，1995，379-80页。实际上，水和热量会加速一些化合物的分解。因此，水对制剂的作用可以具有重要意义，因为在制剂的制备、处理、包装、贮存、运输和使用期间经常会遇到水分和/或湿气。 

本发明的无水药物组合物和剂型可以使用无水的或低水分含量的成分，在低水分或低湿度条件下制备。如果预期在制备、包装和/或贮存期间会与水分和/或湿气有实质性接触，则包含乳糖和至少一种含有伯胺或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型优选地是无水的。 

无水的药物组合物应该被制备和贮存得使其无水性质被保持。因此，无水组合物优选地使用已知防止暴露于水的材料包装，使得它们可以被包含在合适的配方试剂盒中。合适的包装的实例包括但不限于密封铝箔、塑料、单位剂量容器(例如小瓶)、泡罩包装和条带包装。 

本发明进一步包括药物组合物和剂型，其包含一种或多种降低活性成分分解速率的化合物。这样的化合物在本文中被称作“稳定剂”，其包括但不限于抗氧化剂例如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂。 

与赋形剂的量和类型一样，剂型中的活性成分的量和具体类型可以取决于各种因素而不同，例如但不限于向患者施用的途径。但是，本发明所提供的典型剂型在每天约1mg到约1,000mg范围内，作为单一的一日一次剂量在 早上给予，但优选地作为分开的剂量在一天内给予。更加特别地，每日剂量每天以等份的分开剂量两次施用。特别地，每日剂量范围可以为每天约5mg到约500mg，更加特别地为每天约10mg到约200mg。在控制患者时，治疗可以从较低剂量开始，可能为约1mg到约25mg，而且取决于患者的整体反应，如果有必要的话，增加到每天约200mg到约1,000mg，为单一剂量或分开的剂量。 

4.3.1.口服剂型

适于口服施用的本发明的药物组合物可以作为离散剂型存在，例如但不限于片剂(例如可咀嚼的片剂)、囊片、胶囊和液体(例如调味糖浆)。这样的剂型包含预定量的活性成分，而且可以通过本领域技术人员熟知的制药方法制备。一般参见Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)。 

通过将活性成分与至少一种赋形剂依照常规药学混合技术充分混合来制备本发明的典型口服剂型。根据施用所需的制剂形式，赋形剂可以具有各种广泛形式。例如，适用于口服液体或气溶胶剂型的赋形剂包括但不限于水、乙二醇、油、醇、调味剂、防腐剂和着色剂。适用于固体口服剂型(例如粉末、片剂、胶囊和囊片)的赋形剂的实例包括但不限于淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂和崩解剂。 

因为施用方便，使用固体赋形剂的片剂和胶囊代表了最有利的口服剂量单位形式。如果需要，片剂可以通过标准的水性或非水性技术包衣。这样的剂型可以通过任何制药方法制备。一般来说，通过将活性成分与液体载体、精细固体载体、或两者均匀充分地混合来制备药物组合物和剂型，然后如果 有必要的话，把产品制成所需的形状。 

例如，可以通过压制或模制来制备片剂。可以通过在合适的机器中压制任选地与赋形剂混合的处于自由流动形式(例如粉末或颗粒)的活性成分来制备压制的片剂。可以通过在合适的机器中模制被惰性液体稀释剂润湿的粉末化合物的混合物来制备模制的片剂。 

可以在本发明的口服剂型中使用的赋形剂的实例包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂。适合在药物组合物和剂型中使用的粘合剂包括但不限于：玉米淀粉、土豆淀粉、或其它淀粉、明胶、天然和合成的胶例如阿拉伯树胶、藻酸钠、海藻酸、其它藻酸盐、粉末黄蓍胶、瓜尔豆胶、纤维素及其衍生物(例如乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠)、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预胶化淀粉、羟丙甲基纤维素(例如2208、2906、2910号)、微晶纤维素、及其混合物。 

适合在本发明所公开的药物组合物和剂型中使用的填充剂的实例包括但不限于：滑石、碳酸钙(例如颗粒或粉末)、微晶纤维素、粉末纤维素、葡聚糖、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预胶化淀粉、及其混合物。本发明的药物组合物中的粘合剂或填充剂通常以药物组合物或剂型的约50到约99%重量存在。 

微晶纤维素的合适形式包括但不限于作为AVICEL-PH-101^TM、AVICEL-PH-103^TM、AVICEL RC-581^TM、AVICEL-PH-105^TM(可从FMC Corporation，American Viscose Division，Avicel Sales，Marcus Hook，PA得到)出售的材料，及其混合物。具体的粘合剂是作为AVICEL RC-581^TM出售的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的混合物。合适的无水或低水分的赋形剂或添加剂包括AVICEL-PH-103^TM和淀粉1500LM^TM。 

在本发明的组合物中使用崩解剂以提供在暴露于水性环境时崩解的片剂。包含过多崩解剂的片剂可能在贮存中崩解，而包含过少崩解剂的片剂可能不能以所需的速率崩解，或不能在所需的条件下崩解。因此，应该使用足量的崩解剂来形成本发明的固体口服剂型，该量不过多也不过少，不会有害地改变活性成分的释放。使用的崩解剂的量基于制剂的类型而变化，而且是本领域普通技术人员容易识别的。典型的药物组合物包含约0.5到约15%重量的崩解剂，特别是约1到约5%重量的崩解剂。 

可以在本发明的药物组合物和剂型中使用的崩解剂包括但不限于：琼脂、海藻酸、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮、波拉克林钾、羟基乙酸淀粉钠、土豆或木薯淀粉、预胶化淀粉、其他淀粉、粘土、其他褐藻胶、其他纤维素、胶、及其混合物。 

可以在本发明的药物组合物和剂型中使用的润滑剂包括但不限于：硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、其他乙二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油(例如花生油、棉籽油、葵花籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、及其混合物。额外的润滑剂包括例如syloid硅胶(AEROSIL200^TM，W.R.Grace公司，Baltimore，MD制备)、合成二氧化硅的凝固气溶胶(Degussa公司，Piano，TX销售)、CAB-O-SIL^TM(Cabot公司，Boston，MA出售的高热制成的二氧化硅产品)，及其混合物。如果完全使用，润滑剂通常以占包含其的药物组合物或剂型的少于约1%重量的量使用。 

4.3.2.延时释放剂型

可以通过控释装置或本领域普通技术人员熟知的递送装置来施用本发明 所提供的包含化合物A的固体形式。实例包括但不限于在美国专利号3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123，以及4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,566中描述的那些，其各自通过引用并入本文。可以使用这样的剂型来对一种或多种活性成分提供缓慢或控制释放，其使用不同比例的例如羟丙基甲基纤维素、其他聚合物基质、凝胶、可渗透的膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球体、或其组合来提供所需的释放特征。可以容易地选择本领域普通技术人员已知的合适的控释制剂(包括本发明所描述的那些)，以用于与本发明的活性成分一起使用。因此，本发明包括适于口服施用的单一单位剂型，例如但不限于适合控释的片剂、胶囊、软胶囊和囊片。 

所有控释的药物产品都具有共同目标，即相对于其非控释等同物改善所能达到的药物治疗。理想地，在医学治疗中使用最佳设计的控释制剂的特征在于使用最小量的药物在最短的时间内治愈或控制病症。控释制剂的优点包括延长的药物活性、降低的给药频率，和增加的患者依从性。另外，控释制剂可被用来影响作用起效的时间或其他特征，例如药物的血浓度，并因此可以影响副作用(例如不良作用)的发生。 

大多数控释制剂被设计为最初释放一定量的药物(活性成分)，其迅速地产生所需的治疗效果，并逐步和连续地释放其他量的药物，以在延长的时间段内维持这个水平的治疗或预防效果。为了在体内保持药物的该恒定水平，药物必须从剂型中以一定速率释放，该速率将会替换被新陈代谢和从体内排出的药物量。活性成分的控释可以通过各种条件刺激，包括但不限于pH、温度、酶、水、或其他生理条件或化合物。 

4.3.3.肠胃外剂型

肠胃外剂型可以通过各种途径向患者施用，包括但不限于皮下、静脉内(包括推注)、肌肉内和动脉内。因为肠胃外剂型的施用通常绕开了患者对污染物的天然防御，因此它们优选地是无菌的或能够在向患者施用前被灭菌。肠胃外剂型的实例包括但不限于注射用溶液、适于在药学上可接受的运载体中溶解或悬浮以供注射的干粉产品、注射用悬浮液、和乳液。 

可以用来提供本发明的肠胃外剂型的合适的运载体是本领域技术人员熟知的。实例包括但不限于：USP注射用水；水性运载体例如但不限于氯化钠注射液、林格注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化钠注射液、和乳酸盐林格注射液；易与水混合的运载体例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性运载体例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯甲酯。 

也可以向本发明的肠胃外剂型中加入提高本发明所公开的一种或多种活性成分的溶解度的化合物。 

4.3.4.透皮、局部和黏膜剂型

本发明的透皮、局部和黏膜剂型包括但不限于眼用溶液、喷雾剂、气溶胶、乳膏、洗液、油膏、凝胶、溶液、乳液、悬浮液、或其它本领域技术人员已知的形式。参见，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第16和18版，Mack Publishing，Easton PA (1980&1990)；和Introduction to Pharmaceutical  Dosage Forms，第4版，Lea & Febiger，Philadelphia(1985)。适合治疗口腔内的黏膜组织的剂型可以被配制为漱口剂或口服凝胶。此外，透皮剂型包括“储存型”或“基质型”贴片，它们可以被应用于皮肤，并附着一段特定时间，以允 许所需量的活性成分渗透。 

合适的赋形剂(例如载体和稀释剂)和其它可以用来提供本发明包含的透皮、局部和黏膜剂型的材料是制药领域技术人员熟知的，而且取决于给定的药物组合物或剂型将应用于的具体组织。考虑到这个事实，典型的赋形剂包括但不限于水、丙酮、乙醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、矿物油、及其混合物，以形成无毒的且药学上可接受的洗液、酊剂、乳膏、乳液、凝胶或油膏。如果需要。还可以向药物组合物和剂型中加入保湿剂或润湿剂。这样的附加成分的实例是本领域熟知的。参见，例如 Remington's Pharmaceutical Sciences，第16和18版，Mack Publishing，Easton PA(1980&1990)。 

取决于待治疗的具体组织，可以在用本发明的活性成分治疗之前、同时或之后使用额外的成分。例如，渗透增强剂可以用来辅助向组织递送活性成分。合适的渗透增强剂包括但不限于：丙酮；各种醇例如乙醇、油醇和四氢呋喃甲醇；烷基亚砜例如二甲基亚砜；二甲基乙酰胺；二甲基甲酰胺；聚乙二醇；吡咯烷酮例如聚乙烯吡咯烷酮；不同等级的Kollidon(聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮)；脲；和各种水可溶或不溶的糖酯，例如Tween 80^TM(聚山梨醇酯80)和Span 60^TM(山梨聚糖单硬脂酸酯)。 

也可以调节药物组合物或剂型的pH值，或者药物组合物或剂型所应用的组织的pH值，以改善一种或多种活性成分的递送。类似地，可以调节溶剂载体的极性、其离子强度或张力以改善递送。化合物例如硬脂酸盐也可以被加入到药物组合物或剂型中，以有利地改变一种或多种活性成分的亲水性或亲脂性，从而改善递送。在这点上，硬脂酸盐可以充当制剂的脂质运载体、乳化剂或表面活性剂、以及递送提高或渗透增强剂。包含活性成分的不同固体 形式可以被用来进一步调节得到的组合物的性质。 

4.3.5.试剂盒

本发明包含试剂盒，其在被执业医师使用时，可以简化适量的活性成分对患者的施用。 

本发明的典型试剂盒包含单位剂型的化合物A或其药学上可接受的固体形式或前药，和单位剂型的第二活性成分。第二活性成分的实例包括但不限于本发明所列出的那些。 

本发明的试剂盒可以进一步包含用来施用活性成分的装置。这样的装置的实例包括但不限于注射器、滴液袋、贴片和吸入器。 

本发明的试剂盒可以进一步包含可用于施用一种或多种活性成分的药学上可接受的运载体。例如，如果活性成分以必需重新配制以供肠胃外施用的固体形式提供，那么试剂盒可以包含一密封容器的合适运载体，活性成分可以在其中溶解以形成适合肠胃外施用的无微粒的无菌溶液。药学上可接受的运载体的实施例包括但不限于：USP注射用水；水性运载体例如但不限于氯化钠注射液、林格注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化钠注射液、和乳酸盐林格注射液；易与水混合的运载体例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性运载体例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苯甲酯。 

5.实施例

本申请将美国专利号6,962,940(2005年11月8日授权)的全文通过引用并入本文，包括其中提供的实施例。 

5.1.实施例1：2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的合成

将1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙胺(1.0g，3.7mmol)和3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐(751mg，3.66mmol)在醋酸(20mL)中的搅拌溶液在回流下加热15h。在真空中移除溶剂，产出油。得到的油经色谱产出产物，为黄色固体(1.0g，产率59%)：mp，144°C；¹H NMR(CDCl₃)δ：1.47(t，J=7.0Hz，3H，CH₃)，2.26(s，3H，CH₃)，2.88(s，3H，CH₃)，3.75(dd，J=4.4，14.3Hz，1H，CH)，3.85(s，3H，CH3)，4.11(q，J=7Hz，2H，CH₂)，5.87(dd，J=4.3，10.5Hz，1H，NCH)，6.82-6.86(m，1H，Ar)，7.09-7.11(m，2H，Ar)，7.47(d，J=7Hz，1H，Ar)，7.64(t，J=8Hz，1H，Ar)，8.74(d，J=8Hz，1H，Ar)，9.49(br s，1H，NH)；¹³C NMR(CDCl₃)δ：14.61，24.85，41.54，48.44，54.34，55.85，64.43，111.37，112.34，115.04，118.11，120.21，124.85，129.17，130.96，136.01，137.52，148.54，149.65，167.38，169.09，169.40；C₂₂H₂₄NO₇S的分析计算值：C，57.38；H，5.25；N，6.08。观测值：C，57.31；H，5.34；N，5.83。 

5.2.实施例2：(+)2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰基氨基异吲哚啉-1,3-二酮的合成

3-氨基邻苯二甲酸的制备 

将10%Pd/C(2.5g)、3-硝基邻苯二甲酸(75.0g，355mmol)和乙醇(1.5L)在氮保护气氛下装到2.5L Parr氢化器中。向反应容器中充填氢气，达到55psi。混合物振荡13小时，同时保持氢气压力在50和55psi之间。释放氢气，用 氮气吹洗混合物3次。悬浮液通过硅藻土床过滤，并用甲醇冲洗。滤液在真空中浓缩。得到的固体在乙醚中重新浆化，并通过真空过滤分离。固体在真空中干燥至恒重，提供54g(产率84%)3-氨基邻苯二甲酸，为黄色产物。 ¹H-NMR(DMSO-d6)δ：3.17(s，2H)，6.67(d，1H)，6.82(d，1H)，7.17(t，1H)，8-10(br，s，2H)；¹³C-NMR(DMSO-d6)δ：112.00，115.32，118.20，131.28，135.86，148.82，169.15，170.09。 

3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐的制备 

向配备了机械搅拌器、温度计和冷凝器的1L 3-颈圆底烧瓶中装入3-氨基邻苯二甲酸(108g，596mmol)和乙酸酐(550mL)。反应混合物加热回流3小时，冷却到约25°C，并进一步冷却到0-5°C，维持另外的1小时。通过真空过滤收集结晶固体，并用乙醚洗涤。固体产物在室温下在真空中干燥至恒重，得到75g(产率61%)3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐，为白色产物。¹H-NMR(CDCl₃)δ：2.21(s，3H)，7.76(d，1H)，7.94(t，1H)，8.42(d，1H)，9.84(s，1H)。 

2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺的重溶解 

向配备了机械搅拌器、温度计和冷凝器的3L 3-颈圆底烧瓶中装入2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺(137.0g，500mmol)、N-乙酰基-L-亮氨酸(52g，300mmol)和甲醇(1.0L)。搅拌的浆加热回流1小时。让搅拌的混合物冷却至室温，并在室温下持续搅拌另外3小时。过滤浆，并用甲醇(250L)洗涤。风干固体，然后在室温下在真空中干燥至恒重，得到109.5g(产率98%)粗产物(85.8%ee)。将粗制的固体(55.0g)和甲醇(440mL)回流1小时，冷却至室温，并在室温下搅拌另外3小时。过滤浆，用甲醇(200mL)洗涤滤饼。风干固体，然后在30°C在真空中干燥至恒重，产出49.6g(回收率90%)(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺-N-乙酰基-L-亮氨酸盐 (98.4%ee)。手性HPLC(1/99EtOH/20mM KH₂PO₄pH 7.0，Ultron手性ES-OVS，来自Agilent Technologies，150mm×4.6mm，0.5mL/分，240nm)：18.4分钟(S-异构体，99.2%)，25.5分钟(R-异构体，0.8%)。 

化合物A的制备 

将500mL 3-颈圆底烧瓶配备机械搅拌器、温度计和冷凝器。在反应容器中装入(S)-2-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-1-(甲基磺酰基)-乙-2-基胺N-乙酰基-L-亮氨酸盐(25g，56mmol，98%ee)、3-乙酰氨基邻苯二甲酸酐(12.1g，58.8mmol)、和冰醋酸(250mL)。混合物回流过夜，然后冷却到<50°C。在真空中移除溶剂，残余物在乙酸乙酯中溶解。得到的溶液用水(250mL×2)、饱和NaHCO₃水溶液(250mL×2)、和盐水(250mL×2)洗涤，并用硫酸钠干燥。在真空中蒸发溶剂，残余物用含乙醇(150mL)和丙酮(75mL)的双重溶剂重结晶。固体通过真空过滤分离，并用乙醇(100mL×2)洗涤。产物在60°C在真空中干燥至恒重，提供19.4g(产率75%)S-{2-[1-(3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-甲基磺酰基乙基]-4-乙酰氨基异吲哚啉-1,3-二酮}，98%ee。手性HPLC(15/85EtOH/20mM KH₂PO₄pH 5，Ultron手性ES-OVS，来自Agilent Technology，150mm×4.6mm，0.4mL/分，240nm)：25.4分钟(S-异构体，98.7%)，29.5分钟(R-异构体，1.2%)。¹H-NMR(CDCl₃)δ：1.47(t，3H)，2.26(s，3H)，2.87(s，3H)，3.68-3.75(dd，1H)，3.85(s，3H)，4.07-4.15(q，2H)，4.51-4.61(dd，1H)，5.84-5.90(dd，1H)，6.82-8.77(m，6H)，9.46(s，1H)；¹³C-NMR(DMSO-d6)δ：14.66，24.92，41.61，48.53，54.46，55.91，64.51，111.44，112.40，115.10，118.20，120.28，124.94，129.22，131.02，136.09，137.60，148.62，149.74，167.46，169.14，169.48。 

图29提供了显示化合物A的(+)对映体的制备的反应方案。 

5.3.实施例3：TNF-α抑制

人全血中LPS诱导的TNF-α试验 

除了使用新鲜抽取的全血替代PBMC之外，基本采用如下文所述的人PBMC中的LPS诱导的TNF-α试验一样来测量化合物抑制人全血LPS诱导的TNF-α产生的能力。(Muller等，1999，Bioorg.&Med.Chem.Lett.，9:1625-1630。)对化合物A，人全血LPS诱导的TNF-αIC₅₀=294nM。 

小鼠中LPS诱导的血清TNF-α抑制 

化合物依照先前描述的方法(Corral等，1996，MoI.Med.，2:506-515)，在这一动物模型中测试。对化合物A，小鼠中LPS诱导的血清TNF-α抑制(ED₅₀，mg/kg，口服)=0.05。 

LPS诱导的TNF-α产生 

脂多糖(LPS)是由革兰氏阴性菌例如大肠杆菌(E.coli)生产的内毒素，它诱导了许多促炎性细胞因子包括TNF-α的产生。在外周血单核细胞(PBMC)中，作为对LPS的应答而产生的TNF-α源自单核细胞，其组成了总PBMC的大约5-20%。如先前的描述一样测试化合物抑制人PBMC的LPS诱导的TNF-α产生的能力(Muller等，1996，J.Med.Chem.，39:3238)。来自正常供体的PBMC通过Ficoll Hypaque(Pharmacia，Piscataway，NJ，USA)密度离心法获得。细胞在补充了10%AB±人血清(Gemini Bio-products，Woodland，CA，USA)、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、和100μg/ml链霉素(Life Technologies)的RPMI(Life Technologies，Grand Island，NY，USA)中培养。 

将PBMC(2×10⁵个细胞)接种到96孔平底Costar组织培养板(Corning，NY，USA)中，每式三份。细胞在化合物缺乏或存在下用100ng/ml LPS(Sigma， St.Louis，MO，USA)刺激。将化合物(Celgene Corp.，Warren，NJ，USA)溶解在DMSO(Sigma)中，并在使用前立即在培养基中进一步稀释。所有样本中的终DMSO浓度是0.25%。在LPS刺激前一小时，将化合物添加到细胞中。细胞在37°C在5%CO₂下培养18-20小时，然后收集上清液，用培养基稀释，并通过ELISA(Endogen，Boston，MA，USA)测试TNF-α水平。对化合物A，LPS诱导的TNF-αIC₅₀=77nM。 

IL-1β诱导的TNF-α生产 

在炎性疾病的过程期间，TNF-α产生经常被细胞因子IL-1β刺激，而不被细菌源的LPS刺激。如上述LPS诱导的TNF-α产生一样测试化合物抑制人PBMC的IL-1β诱导的TNF-α产生的能力，不同之处在于PBMC是从源白细胞单位(Sera-Tec Biologicals，North Brunswick，NJ，USA)通过用Ficoll-Paque Plus(Amersham Pharmacia，Piscataway，NJ，USA)离心而分离的，并以3×10⁵个细胞/孔接种到96孔组织培养板中的包含10%热灭活的胎牛血清(Hyclone)、2mM L-谷氨酰胺、100U/ml青霉素、和100mg/ml链霉素(完全培养基)的RPMI-1640培养基(BioWhittaker，Walkersville，Maryland，USA)中，用10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0μM化合物，每式两份，终DMSO浓度为0.1%，在37°C在潮湿的培养箱中在5%CO₂下预处理一小时，然后用50ng/ml重组的人IL-1β(Endogen)刺激18小时。对化合物A，IL-β诱导的TNF-αIC₅₀=83nM。 

5.4.实施例4：PDE选择性

PDE1、2、3、5和6酶试验 

化合物对PDE4的特异性通过在单一浓度(10μM)下针对牛PDE1、人 PDE2、PDE3、和来自人血小板的PDE5(Hidaka和Asano，1976，Biochem.Biophys.Acta，429:485，以及Nicholsen等，1991，Trends Pharmaco.Sci.，12:19)、以及来自牛视网膜圆柱细胞外段的PDE6(Baehr等，1979，J.Biol.Chem.，254:11669，和Gillespie等，1989，MoI.Pharm.，36:773)测试来评估。结果在表1中列举。 

PDE7酶试验 

PDE7是cAMP选择性PDE，主要在T细胞和骨骼肌中表达。T细胞源的细胞因子例如IL-2和IFN-γ潜在地可通过PDE7抑制来调节。PDE7如先前描述般通过阴离子交换色谱从Hut78人T细胞纯化(Bloom和Beavo，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93:14188-14192)。如表1中对PDE4描述的，化合物针对在10nM cAMP存在下配制的PDE7来测试。 

5.5.实施例5：PDE4抑制

PDE4(源自U937细胞)酶试验 

PDE4酶如先前描述通过凝胶过滤色谱从U937人单核细胞纯化(Muller等，1998，Bioorg.&Med.Chem.Lett.8:2669-2674)。在30°C在50mM Tris HClpH 7.5、5mM MgCl₂、1μM cAMP、10nM[³H]-CAMP中进行磷酸二酯酶反应30分钟，通过煮沸终止，用1mg/ml蛇毒处理，使用AG-IXS离子交换树脂(BioRad)如描述般(Muller等，1998，Bioorg.& Med.Chem.Lett.8:2669-2674)分离。反应消耗了小于15%的可用底物。结果在表1中列举。 

表1.PDE特异性 

*化合物B是化合物A的(-)对映体。 

5.6.实施例6：人T细胞试验

SEB诱导的IL-2和IFN-γ产生 

葡萄球菌肠毒素B(SEB)是源自革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的超抗原。SEB特异性对表达特定T细胞受体Vβ链的T细胞提供便利的生理刺激。人PBMC(由大约50%的T细胞组成)从源白细胞单位如上所述分离，并以3×10⁵个细胞/孔接种到96孔组织培养板中的完全培养基中，用10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0μM化合物，每式两份，终DMSO浓度为0.1%，在37°C在潮湿的培养箱中在5%CO₂下预处理1小时，然后用100ng/ml SEB(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO，USA)刺激18小时。通过ELISA(R&D Systems，Minneapolis，MN，USA)测量IL-2和IFN-γ水平。对化合物A，IL-2IC₅₀=291nM。对化合物A，IFN-γIC₅₀=46nM。 

5.7.实施例7：cAMP提升试验

PGE₂诱导的cAMP提升 

前列腺素E₂(PGE₂)与单核细胞、T细胞和其它白细胞上的前列腺素类受体结合，并因此提升了细胞内的cAMP水平，从而导致细胞反应的抑制。PGE₂和PDE4抑制剂的组合在这些细胞类型中协同提升cAMP水平，而且在PGE₂存在下，PDE4抑制剂引起的cAMP在PBMC中的提升与该PDE4抑制剂的抑制活性成正比。在人PBMC中，细胞内的cAMP如下测量：PBMC如上所述分离，并以1×10⁶个细胞每孔接种到96孔板中的RPMI-1640中。细胞在终浓度2%的DMSO中，用100、10、1、0.1、0.01和0μM化合物，每式两份，在37°C在潮湿的培养箱中在5%CO₂下预处理一小时。然后细胞用PGE₂(10μM)(Sigma)刺激1小时。细胞用HCl裂解，终浓度0.1N，以抑制磷酸二酯酶活性，并且将板在-20°C冷冻。生产的cAMP使用cAMP(低pH)免疫测定试剂盒(R&D Systems)测量。对于外消旋物，PBMC cAMP EC₅₀是3.09μM。对化合物A，PBMC cAMP EC₅₀是1.58μM。 

人嗜中性粒细胞中的cAMP提升如下测量。通过用Ficoll-Paque Plus(Amersham Pharmacia)离心，从源白细胞(Sera-Tec Biologicals)中移走PBMC。得到的红细胞/多形核细胞(PMN)团在Hank's平衡盐溶液(BioWhittaker)中重悬，并与等体积的0.9%盐水中的3%DextranT-500(Amersham Pharmacia)混合。使红细胞沉淀20分钟，移走PMN，并在4°C在120rpm离心8分钟。剩下的红细胞在冷的0.2%盐水中裂解30秒，加入等体积1.6%盐水，让细胞恢复等渗。PMN在4°C在1200rpm离心8分钟，然后在RPMI-1640中重悬，并如上针对PBMC所述测试cAMP的提升。通过在FACSCalibur(Becton Dickinson，San Jose，CA，USA)上执行流式细胞术，发现PMN为大约74%CD18/CD11b⁺、71%CD16⁺CD9⁺嗜中性粒细胞。结果在表2中显示。 

fMLF诱导的LTB4生产 

N-甲酰基-蛋氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLF)是细菌源的多肽，其激活嗜中性粒细胞的快速去颗粒化、迁移、粘附到内皮细胞上并释放白细胞三烯LTB4，其是花生四烯酸代谢产物且自身是嗜中性粒细胞化学引诱物。如先前所述(Hatzelmann和Schudt，2001，J.Pharm.Exp.Ther，297:267-279)并作以下改变，测试化合物阻碍fMLF诱导的嗜中性粒细胞LTB4产生的能力。嗜中性粒细胞如上述分离，在不含钙或镁的磷酸盐缓冲液(Bio Whittaker)中重悬，该缓冲液包含10mM HEPES，pH为7.2，并以浓度1.7×10⁶个细胞/孔接种到96孔组织培养板中。细胞在37°C 5%CO₂用50μM硫柳汞(Sigma)/1mM CaCl₂/1mM MgCl₂处理15分钟，然后用1000、200、40、8、1.6、0.32、0.064和0nM化合物，终DMSO浓度为0.01%，每式两份，处理10分钟。嗜中性粒细胞用1μM fMLF刺激30分钟，然后通过加入甲醇(终浓度20%)裂解，并在干冰/异丙醇浴中冷冻10分钟。裂解产物在-70°C贮存，直到通过竞争性LTB4ELISA(R&D Systems)测量LTB4含量。结果在表2中显示。 

酵母聚糖诱导的IL-8生产 

酵母聚糖A或热杀死的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)与嗜中性粒细胞表面上的粘附分子Mac-1结合并引发吞噬作用、细胞活化和IL-8产生。酵母聚糖诱导的IL-8产生如先前所述(Au等，1998，Brit.J.Pharm.，123:1260-1266)进行测量并作以下改变。人嗜中性粒细胞如上所述纯化，以3×10⁵个细胞/孔接种到96孔组织培养板中的完全培养基中，用10、2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064和0μM化合物，每式两份，终DMSO浓度为0.1%，在37°C 5%CO₂处理1小时。然后嗜中性粒细胞用未经调理素作用的煮过的酵母聚糖A(Sigma)以2.5×10⁵个微粒/孔刺激18小时。收获上清液，并通过ELISA(R&D Systems) 测试IL-8。结果在表2中显示。 

fMLF诱导的CD18/CD11b表达 

嗜中性粒细胞的CD18/CD11b(Mac-1)表达如先前所述(Derian等，1995，J.Immunol.，154:308-317)测量，并作以下改变。嗜中性粒细胞如上所述分离，然后在完全培养基中以1×10⁶个细胞/ml重悬，用10、1、0.1、0.01和0μM化合物，每式两份，终DMSO浓度为0.1%，在37°C 5%CO₂预处理10分钟。细胞然后用30nM fMLF刺激30分钟，然后冷却到4°C。细胞用兔IgG(Jackson ImmunoResearch Labs，West Grove，PA，USA)(10μg/1x10⁶个细胞)处理，以阻断Fc受体，用CD18-FITC和CD11b-PE(Becton Dickinson)染色，并在FACSCalibur上通过流式细胞术分析。从所有样本中减去刺激不存在时的CD18/CD11b表达(平均荧光)，以获得抑制曲线并计算IC₅₀值。结果在表2中显示。 

fMLF诱导的对HUVEC的粘附 

人脐静脉内皮细胞(HUVEC)如先前所述(Derian等，1995，J.Immunol.，154:308-317)用作嗜中性粒细胞粘附的底物，并作以下改变。HUVEC细胞由Anthrogenesis(Cedar Knolls，NJ，USA)获得，而且嗜中性粒细胞没有用细胞松弛素B处理。细胞用10、1、0.1、0.01、0.001和0μM化合物处理10分钟，终DMSO浓度为0.1%，每式两份；用500nM fMLF刺激30分钟，并用PBS洗涤两次后，在FLX800读板器(Bio-Tek Instruments，Winooski，VT，USA)上测量荧光。结果在表2中显示。 

表2.试验结果 

人嗜中性粒细胞试验(所有值以nM计)	外消旋化合物	化合物A
			PGE2诱导的cAMP EC50	12589	4570
fMLF诱导的LTB4IC50	20.1	2.48

[0283] 

酵母聚糖诱导的IL-8IC50	ND	94
			fMLF诱导的CD18表达IC50	ND	390
fMLF诱导的CD11b表达IC50	ND	74
			fMLF诱导的对HUVEC的粘附IC50	ND	150

5.8.实施例8：水溶解度

平衡溶解度在pH 7.4的缓冲溶液中测量。pH 7.4的缓冲液通过用10NNaOH将0.07M NaH₂PO₄溶液的pH调节到7.4来制备。溶液的离子强度是0.15。将至少1mg粉末与1ml缓冲液结合，以制备>1mg/ml的混合物。这些样本振荡>2小时，并让其在室温下静置过夜。然后通过先用样本饱和的0.45μm尼龙注射器过滤器过滤样本。滤液连续取样两次。在50%甲醇中制备标准，通过HPLC测试滤液。化合物A的水溶解度比外消旋的混合物大3.5倍。测量的溶解度：化合物A=0.012mg/mL；外消旋的混合物=0.0034mg/mL。 

5.9.实施例9：LPS诱导的肺中性白细胞增多雪貂模型

使用清醒雪貂模型来调查通过口服(p.o.)途径施用时PDE4抑制剂的抗炎、催吐和行为效应。通过这些实验，可以测定各种PDE4抑制剂的治疗指数(TI)。TI通过引起催吐发作和行为改变的阈剂量除以抗炎剂量(引起LPS诱导的中性白细胞增多的50%抑制的剂量)来计算。 

动物饲养 

雄性雪貂(Mustela Pulorius Euro，重1-2kg)。雪貂由Bury Green Farm或Misay Consultancy供应。在运输后，让动物在储存室中适应一段不少于7天的时间。食物包括无限给予的SDS diet C丸状食物和每星期给予三次的Whiskers^TM猫食。水是经巴氏灭菌的动物级饮用水，而且每天更换。 

给予PDE4抑制剂 

口服(p.o.)施用PDE4抑制剂，初始剂量为1-10g/kg，但为了确定TI是否为10或更高，随后上升到30mg/kg，和/或以较低剂量施用，以确定引起中性白细胞增多的50%抑制的最小剂量。雪貂禁食过夜，但让其自由饮水。使用从喉后部探入到食道中的15cm给药针，向动物口服给予运载体或PDE4抑制剂。给药后，动物返回到安装了有机玻璃门的储存笼中以便于观察，并让其自由饮水。给药后，不断观察动物并记录任何呕吐或行为改变。口服给药后60到90分钟，让动物饮食。 

暴露于LPS 

口服给予化合物或对照运载体后三十分钟，将雪貂放置到密封有机玻璃容器中，并暴露于LPS气溶胶(100μg/ml)10分钟。LPS气溶胶通过喷雾器(DeVilbiss，USA)生成，并导入有机玻璃暴露室中。10分钟暴露期后，动物返回储存笼，让其自由饮水，并在较晚时期让其自由饮食。口服给药后，观察持续至少2.5小时的时间，并记录催吐发作和行为改变。 

支气管肺泡灌洗 

LPS暴露后六小时，通过腹腔内过量施用戊巴比妥钠杀死动物。然后向气管中插入聚丙烯管，用20ml肝素化的(10单位/ml)磷酸盐缓冲液(PBS)灌洗肺脏两次。 

血液取样/组织移除 

通过经胸心脏穿刺，移走末端血样本(10ml)。血液在2,500rpm旋转15分钟，移走血浆并在-20°C贮存。同样移走大脑并在-20°C冷冻，供化合物含量分析。 

细胞计数 

支气管肺泡灌洗(BAL)样本在1,500rpm离心5分钟。移除上清液，得到的细胞团在1ml PBS中重悬。制备重悬液体的细胞涂片，并用Leishmans染色法染色，以允许细胞分类计数。使用剩下的重悬样本作总细胞计数。由此测定BAL中的嗜中性粒细胞总量。 

测量的参数 

1.LPS诱导的肺中性白细胞增多的抑制百分比。 

2.催吐发作–计数呕吐和干呕的量。 

3.行为改变-注意以下行为效应：流涎、气促、口腔抓挠、平伏姿势、共济失调、身体后屈和倒退行走。任何行为改变都使用严重程度评级(轻度、中度或重度)来半量化。 

4.计算TI，为发现的不引起催吐发作的最高剂量除以发现的50%或更多地抑制肺中性白细胞增多的最低剂量。 

在清醒雪貂的肺中，化合物A对LPS诱导的中性白细胞增多的效果在图30中说明。 

呕吐和行为改变 

PDE4口服给药后，观察雪貂至少两小时，并记录催吐发作(呕吐和干呕)和行为改变。 

在经口服相关运载体(丙酮/cremophor/蒸馏水)预处理的雪貂中，没有观察到催吐发作(干呕或呕吐)。在一小部分对照处理的动物(7/22)中，见到轻度行为改变(舔嘴唇和倒退行走)。 

化合物A(0.1-3mg/kg，口服)没有引起催吐发作(干呕和呕吐)。观察到一些行为改变(平伏姿势、舔嘴唇和倒退行走)，并归类为轻度。在10mg/g，在2/6雪貂中，观察到一些干呕但没有明显呕吐，伴随流涎和行为改变(评定为轻 度或中度)。在测试的最高剂量(30mg/kg)，在3/4动物中观察到中度到明显的呕吐，伴随明显的行为改变。这些数据在表3中概述。 

表3.清醒雪貂：口服施用化合物A后的催吐发作和行为改变 

观察动物直到给药后三小时。圆括号中的数字表示有反应的动物数目。每组中的动物数目范围从4到22。 

治疗指数计算 

由这些实验，通过用诱导催吐发作的阈剂量除以抑制肺中性白细胞增多的ED₅₀值，为每种化合物测定治疗指数(TI)。TI计算在表4中概述。化合物A具有的TI为12，在1mg/kg的抗炎剂量不引起催吐发作。 

表4.对LPS诱导的肺中性白细胞增多的抑制(ED₅₀)和诱导呕吐的有效剂量以及源自这些值的治疗指数概述 

5.10.实施例10：化合物A在患有重度斑块型银屑病患者中的生物活性 

化合物A是在人细胞模型中下调促炎性细胞因子的产生的新型口服药剂。化合物A已经显示降低TNF-α、IL-12和IFN-γ的产生，并提升IL-10的产生。银屑病与细胞因子和趋化因子的调节异常是强烈相关的，这允许用免疫调节化合物进行潜在治疗。这个2期、开放标记的、单臂试验性研究被设计来在重度斑块型银屑病患者中评估化合物A的生物活性。进行临床结果的额外评估，以评估化合物A在治疗重度斑块型银屑病中的潜在疗效。 

口服施用化合物A，每天20mg，共29天，伴有额外28天对患者安全的观察跟踪期。在基线、第15天和第29天获得靶向斑块的皮肤穿刺活检标本(6mm)。同样在基线取无损害皮肤活检。主要药效终点是第29天表皮厚度从基线的百分比变化。由盲的审查者执行表皮皮肤厚度测量和免疫组织化学分析，以评估CD11c、CD83、K16、ICAM-1、HLA-DR和fillagrin。通过RT-PCR分析活检标本，分析对象为：TNF-α、p40-IL12/IL23、IL-10、IFN-γ、IP10、IL-2、IL-8、iNOS、p19-IL23、K16、CD83和hARP。在研究的29天治疗期期间，执行PASI、PGA和BSA测量来研究临床疗效。不良事件报告、临床实验室评估、体检、ECG和生命体征测量评估安全性。总计19位患者参加：15位患者具有全套的可评价活检，而17位患者具有完整的疗效评估。 

这一研究中表皮厚度变化评估是主要终点。十九位患者参与到研究中，其中15位在基线和第29天具有全套的可评价活检。19位个体中的十七位在基线和第29天测量了临床疗效参数。在基线和第29天具有可评价活检的15位患者中，有八位(53.3%)显示了表皮皮肤厚度下降了20%。在基线和第29天，具有可评价活检的全部15位个体中，表皮厚度的平均下降是20.5% (p=0.015)。图31显示了具有可评价活检的个体中从基线到第29天表皮厚度的变化。 

在活检标本中评估关键炎症性标记，包括表皮和真皮T细胞、CD83+和CD11c细胞。8位有反应的患者的结果显示应答者中表皮和真皮T细胞分别下降了42.56%和28.79%(≥20%表皮厚度下降)。应答者中表皮和真皮CD83+细胞从基线的平均下降分别是32.50%和25.86%。在应答者的表皮和真皮中，CD11c细胞下降了40.16%和18.50%。表5列举了应答者和无应答者中关键皮肤活检炎症性标记的下降。另外，一位在基线具有异常K16的患者在第29天具有正常K16。三位在基线具有异常ICAM-1的患者在第29天具有正常ICAM-1。两位具有异常HLA-DR的患者在第29天具有正常HLA-DR，而且三位在基线具有异常fillagrin的患者在第29天具有正常fillagrin。 

表5.第29天关键炎症性标记的下降百分比 

细胞		表皮	真皮
				T细胞	应答者	-42.56%	-28.79%
	无应答者	+8.74%	-17.34%
				CD83+	应答者	-32.50%	-25.86%
	无应答者	-16.31%	+0.46%
				CD11c	应答者	-40.16%	-18.50%
	无应答者	-2.54%	-21.19%

活检标本通过RT-PCR评估关键炎症性标记的mRNA基因表达，包括：TNFα、p40-IL12/IL23、IL-10、IFNγ、IP10、IL-2、IL-8、iNOS、p19-IL23、K16和CD83。用化合物A治疗29天后，损害皮肤中iNOS的mRNA表达降低了66.5%(p=0.025)。其它炎症性标记的mRNA表达的降低和增加，显示了总体的改善倾向。图32图示了研究期间iNOS表达的变化。 

19位参加的个体中，总共17位完成了29天治疗期并具有完整的临床疗效评估。19位参加的个体中，在第29天，有十四位(73.7%)显示了其PASI改 善，这些患者中的3位(15.8%)显示了其总银屑病区域和严重程度指数(PASI)评分从基线>50%的下降。图33显示第29天可评价的患者中PASI评分从基线的百分比变化。另外，用化合物A治疗29天后，17位可评价的患者中，有9位(52.9%)显示了静态医师整体评估(sPGA)的改善，而且17位可评价的患者中有10位(58.8%)显示其银屑病体表面积(BSA)从基线下降。在治疗和跟踪期期间通过监控不良事件、ECGs、实验室测试、体检和生命体征来评估安全性。没有报告死亡，也没有任何患者因为不良事件而过早退出。最常见的与治疗相关的不良事件包括头痛(26.3%)和恶心(15.8%)。 

在这一临床研究中，每日一次口服化合物A 20mg共29天在患有重度斑块型银屑病的个体中是安全的。随着15位个体中有8位(53.3%)在第29天达到表皮厚度的20%下降，达到主要终点。在皮肤活检中注意到关键炎症性标记的下降，包括真皮和表皮的T细胞、CD83+和CD11c细胞。RT-PCR分析显示，第29天皮肤活检中iNOS mRNA在统计上显著下降了66.5%。用化合物A治疗29天后，注意到阳性的临床疗效信号。在第29天，参与的患者的73.7%显示其银屑病症状的改善，这些患者的15.8%显示其PASI评分从基线>50%下降。在第29天，参与的患者的47.4%显示其sPGA的改善，而且参与的患者的52.6%显示其银屑病体表面积(BSA)从基线下降。 

5.11.实施例11：证明化合物A在患有中度至重度银屑病的个体中的疗效和安全性的2期研究 

这个2期、多中心的、随机、双盲、安慰剂对照、平行组、剂量比较研究评估了化合物A在患有中度至重度斑块型银屑病的个体中的疗效和安全性，这些个体是全身治疗的候选人。 

这一研究包括12个星期的治疗期，接着是4星期的观察跟踪期。总计260 位个体随机接受化合物A 20mg每日二次、化合物A 20mg每日一次或安慰剂，共12星期。这一研究的主要终点是，用化合物A治疗的个体在第12星期/最后一次治疗其银屑病区域和严重程度指数评分基于基线访问达到75%下降(“PASI-75”)的百分比。最后一次治疗被定义为在12个星期的治疗期期间完成的最后一次PASI评估。 

在第12星期/最后一次治疗，与安慰剂组(10%；P=0.023)比较，显著较高比例的用20mg每日二次治疗的个体(24%)达到了PASI-75。对接受20mg每日二次或安慰剂的个体，在第12星期/最后一次治疗，达到PASI-50的比例分别是57%和23%；而达到PASI-90的比例分别是14%和6%。在第12星期/最后一次治疗，20mg每日二次和安慰剂组的个体的PASI分别从基线达到了52%和17%的平均下降。接受化合物A的个体继续随时间而改善，在第12星期显示了PASI评分的最高的平均百分比下降。总的来说，在所有三个治疗组，不良事件特征是类似的。报告的多数不良事件是轻度的。在这一研究中，没有报告与研究药物相关的严重不良事件。在20mg每日二次组中，在观察跟踪期期间，没有个体经历银屑病加剧。 

在这一临床研究中，化合物A显示在患有中度至重度斑块型银屑病的个体中被很好地耐受，而且是安全的。12星期治疗后，PASI达到50%、75%和90%改善的个体比例说明了化合物A的临床活性。 

5.12.实施例12：固体形式筛选研究

5.12.1.实验方法

溶解度研究。经称重的化合物A样本(约100mg)用约2mL测试溶剂处理。使用的溶剂是试剂级或HPLC级的。得到的混合物在约25°C搅拌至少24小 时。当通过肉眼观察到所有固体溶解时，计算预估的溶解度。通过这些实验基于用来得到溶液的溶剂总体积估算出溶解度。由于使用大量的溶剂或溶出的速率缓慢，因此实际溶解度可能大于那些计算值。如果实验期间不存在溶出，则溶解度通过测定重量来测量。将已知体积的滤液蒸发至干燥，并测量残余物的重量。 

溶液蒸发研究。对其中化合物A的溶解度大于约50mg/mL的溶剂执行溶液蒸发，例如丙酮、乙腈、二氯甲烷和四氢呋喃。通过在约25°C或约50°C在氮气中在开口小瓶中缓慢蒸发溶剂，获得固体样本。 

平衡研究。平衡实验通过向约2mL测试溶剂中添加过量化合物A来进行。得到的混合物在约25°C或约50°C搅拌至少24小时。达到平衡时，移走饱和溶液，并让其分别在约25°C或约50°C在氮气中在开口小瓶中缓慢蒸发。由平衡得到的浆被过滤，并在空气中干燥。 

冷却结晶研究。进行冷却结晶研究。将固体在升高的温度约65°C在溶剂中溶解，并让其冷却到约25°C。将在约25°C没有结晶的样本放置在冰箱(约0-5°C)中。固体通过倾析分离，并让其在空气中干燥。 

溶剂/反溶剂沉淀研究。沉淀通过溶剂/反溶剂组合进行。固体在其中化合物A具有相对高溶解度的溶剂中溶解，然后将选择的化合物A在其中具有相对低溶解度的溶剂(即反溶剂)添加到溶液中。在一些溶剂/反溶剂体系中，沉淀立即形成。如果沉淀没有立即出现，将得到的混合物在冰箱(约0-5°C)中冷却，直到形成沉淀。然后沉淀通过倾析分离，并让其在空气中干燥。 

互变研究。互变实验通过在饱和溶剂中制备固体形式的浆来进行。浆在约25°C搅拌至少2天。通过过滤，移走饱和溶液，并在空气中干燥固体。 

压力研究。压力测试通过用Carver Mini C加压机在2000psi的力下压样 本至少一分钟来进行。然后通过XRPD分析样本。 

吸湿性研究。各种固体形式的吸湿性使用表面测量系统DVS仪器来研究。通常将约10-50mg之间的样本量装载到DVS仪器样本盘中，样本在约25°C在DVS自动化吸附分析仪上分析。相对湿度由约0%增加到约95%RH，间隔约10%。然后相对湿度以类似方式下降，以完成完整的吸附/解吸附循环。实验期间，以定时间隔记录质量。 

5.12.2.表征方法

通常通过X射线粉末衍射(XRPD)分析如在固体形式筛选中所述生成的样本。XRPD在Thermo ARL X’TRA^TM X射线粉末衍射计上实施，使用Cu Kα辐射， 

仪器配备了细焦X射线管。X射线发生器的电压和安培数分别设置在45kV和40mA。发散片设置在4mm和2mm，而测量片设置在0.5mm和0.2mm。衍射的放射线通过peltier冷却的Si(Li)固态检测器检测。通常以2.40°/分(0.5秒/0.02°每步)从1.5°2θ到40°2θ进行θ-2θ连续扫描。使用烧结的氧化铝标准来核对峰位置。一般来说，对通过约±0.2°2θ的测量基准测量，预期XRPD峰位置独立变化。一般来说，如本领域理解的，如果第一张图的特征峰与第二张图的特征峰位于大致相同的位置，那么这两张XRPD图彼此匹配。如本领域理解的，确定两张XRPD图是否匹配或两张XRPD图中的独立峰是否匹配，可能需要考虑独立变量和参数例如但不限于优选的方向、相杂质、结晶度、粒度、衍射计仪器设置的变化、XRPD数据收集参数的变化、和/或XRPD数据处理的变化等。确定两图是否匹配可以通过肉眼和/或计算机分析来执行。使用这些方法和参数收集和分析的XRPD图的实例在本发明中有提供，例如如图1、图5、图9、图13、图17、图21和图25。 

差示扫描量热法(DSC)分析在TA仪器Q 1000^TM上执行。将约5mg样本放置到已配衡的DSC盘中，并精确记录样本重量。通常，样本在氮气中以约10°C/分速率从约25°C加热到终止温度约200°C。通常，热事件被记录为推算的起始温度。使用这些方法和参数收集和分析DSC温度记录图的实例在本发明中有提供，例如如图2、图6、图10、图14、图18、图22和图26。 

热重量分析(TGA)在TA仪器Q500^TM上执行。使用草酸钙校准。将约10mg样本放置在盘上，精确称重，并装入TGA炉中。样本在氮气中以约10°C/分速率从约25°C加热到终止温度约200°C。使用这些方法和参数收集和分析TGA温度记录图的实例在本发明中有提供，例如如图3、图7、图11、图15、图19、图23和图27。 

溶剂化了的溶剂通过TG-IR实验识别和定量，使用连接了Thermo Nicolet AEM Fourier变换IR分光光度计的TA仪器Q500^TMTGA。通常，样本量约20-50mg，称重到铝盘中，并加热到约200°C。TGA运行期间，蒸汽通过热输送线路输送给小室。输送线路和小室的温度都设置在约225°C。每重复10秒时间，收集IR光谱。挥发物通过搜索Aldrich气相光谱库识别，而且存在库匹配结果显示所识别的蒸汽。 

样本的形态和粒度分析使用Olympus显微镜进行。仪器用USP标准校准。使用Image Plus-Material Plus软件测定D90值。D90值代表通过长度测量的粒度分布的百分位数为90；即90%的颗粒具有该值的长度或更短。 

5.12.3.固体形式筛选研究结果

在固体形式筛选研究期间制备的包含化合物A的固体形式包括形式A、B、C、D、E、F、G和无定型形式。形式A、B、C、D、E、F和G各自的典 型XRPD图、DSC图、TGA图和DVS图在本发明中提供为图1-图28。 

溶解度研究。测定化合物A的形式B在约25°C在各种溶剂中的近似溶解度。结果在表6中显示。发现形式B在丙酮、乙腈、二氯甲烷、甲基乙基酮和四氢呋喃中最可溶(大于约50mg/mL)，接着是在乙酸乙酯中(约30.15mg/mL)。也发现形式B在数种溶剂中具有低溶解度，包括正丁醇、庚烷、2-丙醇、甲苯和水(低于约1mg/mL)。 

溶液蒸发研究。在约25°C和约50°C进行的溶液蒸发研究的结果在表7中概述。 

平衡研究。在约25°C和约50°C进行的平衡研究的结果在表8中概述。 

冷却结晶研究。冷却结晶研究的结果在表9中概述。冷却结晶研究从许多溶剂中产出结晶材料，包括丙酮、乙腈、乙酸正丁酯、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、甲基乙基酮(MEK)和四氢呋喃(THF)。获得的结晶材料通常通过XRPD、DSC和TGA表征。 

溶剂/反溶剂沉淀研究。溶剂/反溶剂沉淀研究的结果在表10中概述。当将庚烷、水和甲苯在约40°C添加到形式B在THF中的溶液中时，立即形成沉淀。当将庚烷、甲基叔丁醚(MTBE)、甲苯和水分别在约25°C添加到形式B在乙腈中的溶液中时，形成澄清溶液或混合物。搅拌过夜后，从MTBE/乙腈、水/乙腈和甲苯/乙腈获得结晶材料。但对庚烷/乙腈混合物，没有结晶出现。当将水在约50°C添加到形式B在甲醇中的溶液中时，立即形成沉淀，而当将庚烷和甲苯分别在约50°C添加到形式B在甲醇中的溶液中时，形成澄清溶液或混合物。搅拌过夜后，从甲苯/甲醇和庚烷/甲醇中获得结晶材料。当将甲苯在约25°C添加到形式B在二氯甲烷中的溶液中时，立即形成沉淀，而当将MTBE在约25°C添加到形式B在二氯甲烷中的溶液中时，获得澄清溶液。搅拌过夜 后，从MTBE/二氯甲烷中获得结晶材料。但是，当将庚烷添加到形式B在二氯甲烷中的溶液中时，没有结晶出现。当将庚烷在约50°C添加到形式B在MEK中的溶液中时，立即形成沉淀，而当将MTBE和甲苯分别在约50°C添加到形式B在MEK中的溶液中时，获得澄清溶液。搅拌过夜后，从MTBE/MEK和甲苯/MEK中获得结晶材料。当将庚烷在约50°C添加到形式B在乙酸正丁酯中的溶液中时，立即形成沉淀，而当将MTBE和甲苯分别在约50°C添加到形式B在MEK中的溶液中时，获得澄清溶液。搅拌过夜后，从MTBE/乙酸正丁酯和甲苯/乙酸正丁酯中获得结晶材料。当将水和甲苯分别在约40°C添加到形式B在丙酮中的溶液中时，立即形成沉淀，而当将乙醇和2-丙醇分别在约40°C添加到形式B在丙酮中的溶液中时，获得澄清溶液。搅拌过夜后，从乙醇/丙酮和2-丙醇/丙酮中获得结晶材料。获得的结晶材料通过XRPD、DSC、TGA鉴定。 

稳定性研究。稳定性研究的结果在表11中概述。通过将固体样本暴露于40°C/75%RH应力状态下四星期，研究形式A、B、C和D的稳定性。此外，形式A、B、C和D在不同溶剂中的稳定性通过在40°C在不同溶剂中平衡四星期来研究。然后过滤浆，并在空气中干燥。由稳定性实验获得的固体样本通过XRPD和DSC分析。 

互变研究。互变研究的结果在表12中概述。 

压力研究。对化合物A的形式A、B、C、D、E、F和G进行压力试验。如通过XRPD分析观察到的，发现被研究的每个形式都是基本物理稳定的。 

吸湿性研究。对形式A、B、C、D、E、F和G进行吸湿性(水分吸附/解吸附)研究。在DVS系统中经历完整的吸附/解吸附循环后，各个固体样本通过XRPD分析。XRPD结果指出，作为DVS分析的结果，分析的形式中没有 一个经历过实质性的固态转化。 

表6.形式B的溶解度研究 

溶剂体系	近似溶解度(mg/ml)
		丙酮	>50
乙腈	>50
		正丁醇	>0.72
乙酸正丁酯	9.75
		无水乙醇	1.38
乙酸乙酯	30.15
		庚烷	0.41
二氯甲烷	>50
		甲基乙基酮	>50
甲醇	4.05
		甲基叔丁醚	1.17
2-丙醇	0.81
		四氢呋喃	>50
甲苯	0.90
		水	0.69
乙醇:水(1:1)	2.86

表7.溶液蒸发研究

表8.平衡研究 

表9.冷却结晶研究 

起始形式	溶剂体系	XRPD分析	DSC热事件
				B	丙酮	形式E
B	乙腈	形式E	95.42°C
				B	乙酸正丁酯	形式B
B	乙酸乙酯	形式B
				B	二氯甲烷	形式D	100.90°C
B	甲醇	形式B
				B	甲基乙基酮	形式B
B	THF	形式H

表10.溶剂/反溶剂沉淀研究 

^*缩写：MEK=甲基乙基酮；DCM=二氯甲烷(即亚甲基二氯)；MtBE=甲基叔丁醚 

表11.稳定性研究 

表12.互变研究 

5.13.实施例13：200MG剂量胶囊

表13说明了在0#号胶囊中包含200mg包含化合物A的固体形式(即约40%重量比)的单一剂量单位的批量配方和单一剂量配方。 

表13.200mg胶囊的配方 

使预胶化的玉米淀粉(SPRESS^TMB-820)和化合物A成分通过710μm筛，然后装入带挡板插入的扩散混合器中，混合15分钟。使硬脂酸镁通过210μm筛，添加到扩散混合器中。然后使用Dosator型胶囊充填机将混合物装入0#号胶囊中，500mg/胶囊(生产批量8400粒胶囊)。 

5.14.实施例14：100MG口服剂型

表14说明了包含100mg包含化合物A的固体形式的批量配方和单一剂 量单位配方。 

表14.100mg片剂的配方 

使微晶纤维素、交联羧甲纤维素钠和化合物A成分通过#30目筛(约430μ到约655μ)。使Pluronic 

(由JRH Biosciences，Lenexa公司，KS制备)表面活性剂通过#20目筛(约457μ到约1041μ)。将Pluronic 

表面活性剂和0.5kg交联羧甲纤维素钠装入16夸脱双壳翻滚搅拌机中，混合约5分钟。然后将混合物转移到3立方英尺双壳翻滚搅拌机中，加入微晶纤维素，混合约5分钟。加入包含化合物A的固体形式，混合另外25分钟。该预混物通过排放处附有锤式粉碎机的滚筒压实机，并移回翻滚搅拌机中。剩下的交联羧甲纤维素钠和硬脂酸镁加入到翻滚搅拌机中，混合约3分钟。最终混合物在旋转式压片机上压制为250mg/片(生产批量200,000片)。 

尽管本发明已经对具体实施方案作了描述，但本领域技术人员将显而易见地可以不背离权利要求中所定义的本发明的主旨和范围进行各种改变和修饰。这样的修饰也落在所附的权利要求范围内。 

Claims (11)

1.包含对映异构纯的式(I)化合物的固体形式：

其X射线粉末衍射图在约10.1、12.4、13.5、15.7、16.3、18.1、20.7、22.5、24.7、26.2、26.9和29.1度2θ处包含峰。

2.如权利要求1所述的固体形式，其差示扫描量热法图包含起始温度约154°C的吸热事件。

3.如权利要求1所述的固体形式，当从约25°C加热到约140°C时，其热失重分析图包含低于约1%的质量损失。

4.如权利要求1所述的固体形式，当从约25°C加热到约140°C时，其热失重分析图包含低于约0.25%的质量损失。

5.如权利要求1所述的固体形式，当经历从约0%相对湿度增加到约95%相对湿度时，其显示低于约1%的质量增加。

6.如权利要求1所述的固体形式，当经历从约0%相对湿度增加到约95%相对湿度时，其显示低于约0.6%的质量增加。

7.如权利要求4所述的固体形式，当暴露于约40°C和约75%相对湿度约4星期时，其是稳定的。

8.包含权利要求1-7中任一项所述的固体形式的药物组合物。

9.权利要求1-7中任一项所述的固体形式在制备用于治疗可通过抑制TNF-α产生来改善的疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症选自银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、慢性皮肤肉样瘤、巨细胞动脉炎、帕金森病、结节性痒疹、扁平苔藓、复杂性口疮病、白塞病、狼疮、肝炎、葡萄膜炎、干燥综合征、抑郁、间质性膀胱炎、外阴痛、前列腺炎、骨关节炎、弥漫性大B细胞淋巴瘤、多肌炎、皮肌炎、包涵体肌炎、侵蚀性骨关节炎、间质性膀胱炎、肝炎、子宫内膜异位、神经根病、和坏疽性脓皮病。

10.权利要求1-7中任一项所述的固体形式在制备用于治疗可通过抑制PDE4来改善的疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症选自：HIV；肝炎；成人呼吸窘迫综合征；骨吸收疾病；慢性阻塞性肺病；慢性肺部炎性疾病；皮炎；炎症性皮肤疾病、特应性皮炎、囊性纤维化；感染性休克；败血症；内毒素性休克；血流动力学休克；败血症综合征；缺血后再灌注损伤；脑膜炎；银屑病；纤维化疾病；恶病质；移植排斥；移植物抗宿主病；自体免疫性疾病；类风湿性脊椎炎；关节炎病症；类风湿性关节炎；骨关节炎；骨质疏松症；节段性肠炎；溃疡性结肠炎；炎性肠病；多发性硬化；全身性红斑狼疮；麻风病中的麻风结节性红斑；辐射损伤；哮喘；和高氧肺泡损伤。

11.权利要求1-7中任一项所述的固体形式在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症选自多发性骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性胶质瘤、白血病和实体瘤。

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