CN102503803B - 一种有机酸化合物及其提取方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种有机酸化合物及其提取方法与应用,其提取方法包括以下步骤:1)将苦蘵的茎、叶、果粉碎,用溶剂浸泡提取,得浸泡液,除去浸泡液中的溶剂,得浸膏;2)粉碎浸膏,用石油醚或环己烷充分溶解浸膏中的可溶部分,过滤;重复溶解,过滤过程5-8次,合并滤液,再除去滤液中的有机溶剂,得固形物;3)将上步得到的固形物用石油醚溶解,固形物的质量与石油醚体积比为1g∶2-4ml,再向固形物溶液中加入柱层析硅胶拌样,固形物与拌样硅胶的质量比为1∶1-1.5,待石油醚挥发完后,干法上装柱硅胶,用石油醚-乙酸乙酯溶剂进行梯度洗脱,TLC检测,收集2,2-二癸基十二酸洗脱液部份,再除去溶剂即可。本发明提取的有机酸化合物具有消炎活性,脂溶性较好。
Description
技术领域
本发明涉及一种有机酸化合物及其提取方法与应用。
背景技术
炎症反应是机体对物理、化学、免疫或生物因素所引起组织细胞损伤的重要防御机制之一,也是多种疾病发生发展的基本病理过程,许多疾病的发病过程都有炎症介质的参与,一些炎症性疾病(如类风湿性关节炎、风湿热、骨关节炎) 、哮喘、慢性阻塞性肺部疾患、创伤、烧伤、内毒素休克、阿尔茨海默病,甚至心衰等都有炎症介质的参与。
抗炎药物分为甾体(肾上腺皮质激素类)和非甾体抗炎药(NSAIDs)两大类,肾上腺皮质激素是肾上腺皮质所分泌的激素的总称,属甾体类化合物。可分为①盐皮质激素。②糖皮质激素等。其中糖皮质激素作用广泛而复杂,其主要药理作用包括抗炎、免疫抑制、抗休克等。糖皮质激素类药主要应用之一是治疗严重感染或炎症,如中毒性菌痢、暴发型流行性脑膜炎、中毒性肺炎等。但用后可降低机体的防御能力而使感染扩散;糖皮质激素类药物不良反应多,包括:①长期大量应用导致物质代谢和水盐代谢紊乱。易引起类肾上腺皮质功能亢进综合征;②诱发或加重感染;③消化系统并发症:可诱发或加剧胃、十二指肠溃疡,甚至造成消化道出血或穿孔。④长期应用可引起高血压和动脉粥样硬化;⑤引起骨质疏松、肌肉萎缩、伤口愈合迟缓。⑥长期使用这类药物会产生依赖性。
非甾体抗炎药是更为常用的药物之一。其结构与作用机制均不同于肾上腺皮质激素类药, 但具有解热、镇痛、抗炎等功效, 所以称之为非甾体抗炎药。NSAIDs 在临床上广泛用于治疗骨关节炎、类风湿性关节炎和多种免疫功能紊乱的炎症性疾病及各种疼痛症状的缓解, 是全世界范围内使用最广泛的一类药物。应用广泛,市场巨大。美国每年有6千万张NSAIDs处方;国内7.55%的门诊处方含NSAIDs。既往的NSAIDs以阿司匹林为代表。近几十年来,不同化学结构和剂型的NSAIDs大量涌现,NSAIDs按化学结构分为以下几类: (1)甲酸类也称水杨酸类, 代表药物有阿司匹林、二氟尼柳。(2)乙酸类, 代表药物有双氯芬酸、吲哚美辛(消炎痛)、舒林酸等。(3)丙酸类, 代表药物有布洛芬、酮洛芬、芬布芬、萘普生等。(4)昔康类, 代表药物有吡罗昔康、美洛昔康、替诺昔康等。(5)COX2特异性抑制剂昔布类, 代表药物有塞来昔布(西乐葆)、罗非昔布。(6)吡唑酮类, 代表药物有安乃近、氨基比林、保泰松等。(7)其他类, 如尼美舒利等。
NSAIDs由于①前列腺素(PG)合成受抑制,血流减少;②药物直接损伤;③血小板凝集功能改变;④过敏反应;⑤与药物代谢酶的遗传多态性有关等诸多原因,产生一些列不良反应主要有:胃肠道损害表现为上腹疼痛、恶心、消化不良、食管炎及结肠炎,最严重的是胃十二指肠糜烂、溃疡及威胁生命的胃肠穿孔和出血;肝损害,几乎所有的NSAIDs均有肝损害(从轻度的肝脏酶升高到严重的肝细胞坏死)。对乙酰氨基酚大剂量长期使用可导致严重的肝毒性,尤以肝坏死最常见;肾损伤表现为急性肾功能不全、间质性肾炎、镇痛药性肾炎、肾乳头坏死、水钠储留、高血钾等;血液系统及心血管系统表现为血细胞减少、凝血功能障碍、心肌梗塞、心脏猝死和中风的危险增加;中枢神经系统表现为头痛、头晕、耳鸣、耳聋、视力改变、嗜睡、失眠、感觉异常、麻木以及无菌性脑膜炎等;过敏反应表现为各种皮疹、瘙痒、哮喘等。
许多药物通过与细胞表面的受体结合作用于细胞膜表面或者通过特殊的转运系统进入细胞内。然而,也有许多药物作用于细胞内,例如通过改变核酸的功能、作用于细胞内酶功能影响细胞内微管、溶酶体的行为而作用于细胞内,但这些药物不易穿透细胞膜,这是因为它们不能与受体或适宜的转运系统结合而进入细胞内。
存在于身体中的所有屏障,细胞膜、细胞间膜、血脑屏障、皮肤有一重要的共性就是其本质上由脂质组成,这意味着水溶性的药物无法通过,因此药效大大降低,相反脂溶性的物质无须任何特殊的受体或转运系统即可容易通过这些屏障,一个典型的例子是,前列腺腺管外包覆一层坚硬的脂质膜,水溶性消炎药物难以突破这层障碍,而脂溶性的消炎药可以渗透进入前列腺病灶,起到一定的疗效作用。概括来说,身体中的脂质膜具有较为明显的“亲脂憎水”特性,增加药物活性成分的亲脂性可改善药物在体内的药动学行为,这在抗炎药物(甾体或非甾体)、细胞毒药物、抗病毒药物等等表现得更为典型。
发明内容
本发明的目的是提供一种有机酸化合物及其提取方法与应用。
本发明所采取的技术方案是:
一种有机酸化合物其结构式为:
一种有机酸化合物的提取方法,包括以下步骤:
1)将苦蘵的茎、叶、果粉碎,用溶剂浸泡提取,得浸泡液,除去浸泡液中的溶剂,得浸膏;
2)粉碎浸膏,用石油醚或环己烷充分溶解浸膏中的可溶部分,过滤;重复溶解,过滤过程5-8次,合并滤液,再除去滤液中的有机溶剂,得固形物;其中,每次溶解过程中,浸膏质量与溶剂体积比为1g:2-4ml;
3)将上步得到的固形物用石油醚溶解,固形物的质量与石油醚体积比为1g:2-4ml,再向固形物溶液中加入柱层析硅胶拌样,固形物与拌样硅胶的质量比为1:1-1.5,待石油醚挥发完后,干法上装柱硅胶,固形物与装柱硅胶的质量比为1:30-40,用石油醚-乙酸乙酯溶剂进行梯度洗脱,TLC检测,收集2,2-二癸基十二酸洗脱液部份,再除去溶剂即可。
步骤1)中,溶剂为85-95vol%的乙醇,浸泡提取的重复次数为3次,每次的浸泡时间为7-10天,所述的除去浸泡液中的溶剂的方法为利用旋转蒸发仪减压回收乙醇,再蒸发除去水分。
步骤2)中,除去有机溶剂的方法为利用旋转蒸发仪减压回收有机溶剂。
步骤3)中,除去洗脱液部份中的溶剂的方法为利用旋转蒸发仪减压回收溶剂。
一种有机酸化合物,在制备消炎药物中的应用。
本发明的有益效果是:本发明从植物中提取了一种有机酸化合物,具有消炎活性。本发明提取的有机酸化合物具有较好的脂溶性,与水溶性的药物相比,其易于被人体吸收。
附图说明
图1为提取物的紫外光谱。
图2为提取物的红外光谱。
图3为提取物的质谱图谱。
图4为提取物的1HNMR图谱。
具体实施方式
一种有机酸化合物的提取方法,包括以下步骤:
1)将苦蘵的茎切碎、经过干燥的叶和果粉碎,室温下,用85-95vol%的乙醇浸泡提取,浸泡提取3次,合并浸泡液,再用旋转蒸发仪减压回收酒精,再蒸发除去水分,得到浸膏;其中,每次浸泡提取的时间为7-10天,每次浸泡提取操作中,植物材料的质量与乙醇体积比为1g:10-12ml;
2)粉碎浸膏,用石油醚或环己烷充分溶解浸膏中的可溶部分,过滤;重复溶解,过滤过程5-6次,合并滤液,再除去滤液中的有机溶剂,得固形物;其中,每次溶解过程中,浸膏质量与溶剂体积比为1g:2-4ml;
3)将上步得到的固形物用石油醚溶解,固形物的质量与石油醚体积比为1g:2-4ml,再向固形物溶液中加入300-400目柱层析硅胶拌样,固形物与拌样硅胶的质量比为1: 1-1.5,待石油醚挥发完后,干法上装柱硅胶,固形物与装柱硅胶的质量比为1:30-40,用石油醚-乙酸乙酯溶剂进行梯度洗脱,TLC检测,收集2,2-二癸基十二酸洗脱液部份,再利用旋转蒸发仪减压回收溶剂即可。
本发明的有机酸化合物可与药学可接受的辅料组合制成片剂、滴丸、颗粒剂、贴剂、注射剂、胶囊、混悬液、缓释片。
药学上可接受的辅料包括羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、丙烯酸树脂、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、甘露醇、十六醇、十八醇、
滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶。
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明:
实施例1:
一种有机酸化合物的提取方法,包括以下步骤:
1)将10kg苦蘵的茎、经过干燥的叶、果粉碎,室温下,用85-95vol%的乙醇浸泡提取,浸泡提取3次,合并浸泡液,再用旋转蒸发仪减压回收酒精,得浓缩液,再将浓缩液倒至蒸发皿中,蒸发皿置于水浴上,浓缩至干,得到206.5g浸膏;其中,每次浸泡提取的时间为7天,每次浸泡提取操作中,所用的酒精体积为20L;
2)将浸膏研磨碾碎,然后全部倒入广口锥形瓶,首先将600ml石油醚倒入广口锥形瓶,振摇使石油醚充分溶解浸膏中可溶部分,静置几分钟,待上层液澄清后倒出石油醚溶解液过滤至另一锥形瓶中,重复操作5次,直至石油醚溶解液颜色不变浅为止,合并石油醚溶解液,利用旋转蒸发仪减压回收石油醚,得固形物;
3)取50g上步得到的固形物用150ml石油醚溶解,用滴管吸入梨形瓶中,称取300-400目柱层析硅胶50g也倒入梨形瓶中,在旋转蒸发仪中拌样;直至石油醚蒸干为止,拌样部分放入干燥器中干燥过夜,用300-400目柱层析硅胶1750g装填好中压制备柱后,将固形物上样,用石油醚:乙酸乙酯(体积比)=100:0洗脱,流速50ml/min,系统压力设定为20.0bar,系统实际压力8.7bar左右,以每50ml收集一份洗脱液,将洗脱液进行硅胶薄层层析。如可见光下无斑点显示,可将薄层层析板放入碘缸中以碘蒸气熏显色或紫外灯下观察斑点,合并组分一致的部分。硅胶薄层层析检测,当石油醚洗脱液中无样品洗脱出来时,提高乙酸乙酯的比例,加大洗脱液的极性,依次使油醚:乙酸乙酯(体积比)=100:1,50:1,30:1,25:1,20:1,10:1,5:1,3:1,2:1,1:1使化学成分按极性由小到大逐渐被洗脱下来,收集2,2-二癸基十二酸洗脱液部份,利用旋转蒸发仪减压回收溶剂即可。
实施例2
取有机酸化合物150g、加入羧甲基纤维素150g、十六醇150g、硬脂酸镁5g、聚维酮K3045g,混合均匀,压片,制成缓释片(1000片)。
单体化合物抗炎活性研究
1、材料与动物
1.1 实验材料、供试品与对照品
供试品:化合物自制,实验前用1%羧甲基纤维素钠配成6mg/ml的混悬液供动物灌胃用。
对照品:消炎痛片,用药前放在研钵中边加蒸馏水边研磨,制成一定浓度的混悬液;
羧甲基纤维素钠:SANYO-22649,进口分装。
实验动物
种系:昆明种小鼠。
动物体重和性别:昆明种小鼠26~35g,雌雄各半。
动物等级和来源: 昆明种小鼠为SPF级动物,合格证号为:粤监证字2008A022。
饲养条件:SPF级动物实验室,室温23~25℃,相对湿度40~70%,每小时换新风9次。广东省实验动物使用许可证号为SYXK(粤)2004-0021。标准饲养笼内喂养, 笼内保持清洁干燥。
检疫过程:新购进的动物检疫期至少一周, 在检疫期间观察动物饮水、摄食和健康状况, 确认动物健康无病, 方能使用。
饲料:广东省医学实验动物中心提供。
饮水:纯化水灌装聚乙烯塑料瓶,供动物自由饮用,每天换水一次。
、实验方法
取26~35g昆明种小鼠50只,雌雄各半。随机分成4组,每组10只。分别为单体化合物(供试品)高、低剂量组,小鼠分别灌胃20mg/kg和10mg/kg、阳性对照药组灌胃10mg/kg消炎痛药液,空白对照组灌胃等容积1%羧甲基纤维素钠液0.6ml/只,同时,各组小鼠右侧耳壳滴入二甲苯约0.03ml/耳致炎,左侧耳壳不滴入任何药物作为对照。1小时后,将各组小鼠拉颈处死,沿耳基线剪下双耳,在每只小鼠的左、右耳用直径7mm的打孔器在双耳相同部位打下圆形耳片,然后放在用JN-B型精密扭力天枰上称重,以右耳圆片重量减去左耳圆片重量之差值(mg)作为为肿胀度,比较各组间差异,结构见表1。
、实验结果:
上表结果显示,单体化合物高、低剂量组小鼠耳肿胀度明显低于1%羧甲基纤维素钠组(P小于0.05),表明单体化合物对二甲苯致小鼠耳肿胀具有明显的抑制作用。
单体化合物的化学结构鉴定
采用光谱和波谱法进行结构鉴定。其中紫外光谱可提供化学结构中生色基团、助色基团以及不饱和基团的共轭信息;红外光谱提供结构中化学基团的信息;质谱提供化合物的相对分子量信息;核磁共振氢谱提供结构中氢原子所处的化学环境信息,通过紫外、红外、质谱、核磁共振氢谱综合解析,鉴定得出化合物的结构。
、单体化合物的理化性质
为白色固体粉末状物质,熔点(mp)为147.6~148.2℃。
、单体化合物的结构鉴定
紫外光谱λmax203nm(见附图1)。红外光谱 [IR(KBr) λmax]显示有羟基(3336cm-1)。羰基(1620cm-1)(见附图2)。
质谱(EI-MS)显示463的离子峰,结合红外及核磁共振氢谱,推测分子式为C32H64O2, 463的峰为[M-OH](见附图3)。
核磁共振氢谱[1HNMR,400MHz,DMSO为溶剂],在δ=0.841处积分为3.00的三重峰,δ=1.220处积分为18.34的大峰,δ=3.31、2.49分别为水峰和氘代溶剂峰。由此提示分别有-CH3、-CH2×9的基团(见附图4),结合红外、紫外、质谱推导化合物的结构为:2,2-二癸基十二酸
本发明所提取的活性物质为脂肪酸类活性物质,具有较好的亲脂性,亲脂性的活性药物可通过淋巴系统吸收,经过肝脏,较少胃肠道的刺激,使得它们易于通过皮肤、细胞膜、血脑屏障这些亲脂性的人体屏障,增加活性分子的亲脂性使其更易通过体内的脂屏障而发挥作用,同时还延长作用时间,降低副作用尤其是胃肠道的副作用。
Claims (3)
2.如权利要求1所述的一种有机酸化合物的提取方法,其特征在于:包括以下步骤:
1)将苦蘵的茎、叶、果粉碎,用溶剂浸泡提取,得浸泡液,除去浸泡液中的溶剂,得浸膏;
2)粉碎浸膏,用石油醚或环己烷充分溶解浸膏中的可溶部分,过滤;重复溶解,过滤过程5-6次,合并滤液,再除去滤液中的有机溶剂,得固形物;其中,每次溶解过程中,浸膏质量与溶剂体积比为1g:2-4ml;
3)将上步得到的固形物用石油醚溶解,固形物的质量与石油醚体积比为1g:2-4ml,再向固形物溶液中加入柱层析硅胶拌样,固形物与拌样硅胶的质量比为1:1-1.5,待石油醚挥发完后,干法上装柱硅胶,固形物与装柱硅胶的质量比为1:30-40,用石油醚-乙酸乙酯溶剂进行梯度洗脱,TLC检测,收集2,2-二癸基十二酸洗脱液部份,再除去溶剂即可;
步骤1)中,溶剂为85-95vol%的乙醇,浸泡提取的重复次数为3次,每次的浸泡时间为7-10天,所述的除去浸泡液中的溶剂的方法为利用旋转蒸发仪减压回收乙醇,再蒸发除去水分;步骤2)中,除去有机溶剂的方法为利用旋转蒸发仪减压回收有机溶剂;步骤3)中,除去洗脱液部份中的溶剂的方法为利用旋转蒸发仪减压回收溶剂。
3.如权利要求1所述的一种有机酸化合物在制备消炎药物中的应用。
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