CN102246878A - 一种五花茶及其制备方法和抗氧化值的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种五花茶及其制备方法和抗氧化值的检测方法。本发明五花茶组成为：金银花10-25份、木棉花10-25份、槐花10-25份、葛花10-25份和菊花10-25份，经过配伍调制，制得具有良好抗氧化能力的五花茶。通过优化配方，可以使该茶达到最佳抗氧化效果。利用本方法提供的“CUPRAC-BCS酶标仪法”测定抗氧化值，可以对其抗氧化能力进行评价。
Description
技术领域
本发明属于凉茶领域，涉及一种五花茶及其制备方法和抗氧化值的检测方法。
背景技术
凉茶是具有岭南特色的中国民间传统饮品，近年来广东凉茶以其独特的文化内涵和卓越的保健功效越来越受到现代饮料市场的关注。广东凉茶具有“清热解毒、下火去湿”的功效与其富含多酚类化合物，具有抗氧化活性，与维持机体抗氧化防御系统的平衡有关。目前市场上凉茶种类繁多，但关于产品功能方面还缺少一个基本的判别标准。
研究表明食品抗氧化能力与其清除自由基及提高人体免疫力有很大的关系，选择抗氧化能力作为五花茶等凉茶的功效判别之一具有一定的实用价值及科学意义。
目前测定抗氧化能力的方法虽然很多，但还没有统一的标准，其中DPPH法和Fe3+还原能力法的反应环境与人体生理环境有较大差异，不能有效反映功能物质在体内的抗氧化效果。铜离子还原能力（CUPRAC）法是一种简单、低成本、广泛适用的抗氧化活性测定方法，被用于测定多酚、VC、VE等抗氧化物的活性。一般的CUPRAC法以新亚铜试剂（Nc）为Cu+的螯合剂，近来有报道指可用BCS（Bathocuproinedisulfonic acid disodium salt）代替Nc作为螯合剂应用于CUPRAC法，原理是抗氧化物质把反应体系中的Cu2+还原成Cu+, BCS与Cu+螯合生成在480-490nm处有强吸收的有色产物。本方法在此基础上将酶标仪应用到Cu( 
)-BCS体系抗氧化测定方法（CUPRAC-BCS法）中，并进一步优化了CUPRAC-BCS法的各项测定参数，建立一个快速、准确、高通量，能用于测定凉茶等食品抗氧化能力的新方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种具有抗氧化能力的五花茶及其制备方法，并进一步优化了CUPRAC-BCS法的各项测定参数，建立一个快速、准确、高通量，能用于测定凉茶等食品抗氧化能力的检测方法。
本发明目的通过以下技术方案来实现：
一种五花茶，其配方包括：金银花10-25份、木棉花10-25份、槐花10-25份、葛花10-25份和菊花10-25份。
一种五花茶的制备方法：按配方称取金银花、木棉花、槐花、葛花和菊花，加入相当于原料总重量15倍的水，煮沸后，在100℃保温1h，立即过滤，滤液在75℃灭菌30min。
本发明的另一目的在于，提供一种检测五花茶的抗氧化值的方法，包括以下步骤；
（1）将1 mM Trolox 溶液，稀释后得到浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mM的Trolox溶液，在-70℃储存备用；
（2）在30μL 浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mM的Trolox溶液中，均加入30μL、1mM的CuSO4溶液和30μL、2mM的BCS溶液，最后加入210μL、50mM、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，振荡10s，反应20min，490nm处用酶标仪检测吸光值，绘制标准曲线；
（3）取30μL经过稀释的凉茶，然后加入30μL、1mM的CuSO4溶液与30μL、2mM的BCS溶液，最后加入210μL、50mM、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，振荡10s，反应20min，490nm处检测吸光值，根据标准曲线计算凉茶的Trolox的浓度，单位：μmol TE/L。
单位的含义是每升凉茶相当于多少μmol的Trolox，TE是Trolox equivalents的英文缩写，每升样液中的抗氧化值是以相当于多少μmol 的Trolox的抗氧化能力来表示的。比如：50μmol TE/L是指每升样液的抗氧化性相当于 50 μmol Trolox的抗氧化能力。
BCS（Bathocuproinedisulfonic acid disodium salt (2,9-Dimethyl-4,7-diphenyl-1,10- phenantrolinedisulfonic aciddisodium salt, BCS) 购于美国Alfa公司）
步骤（2）所述CuSO4溶液和BCS溶液均用双蒸水配制。
所述1 mM Trolox 溶液是称取25 mg Trolox，用pH 7.4磷酸盐缓冲液溶解并定容至 100 mL得到的。
本发明相对于现有技术所具有的优点及有益效果：
（1）采用优选的配方制得的五花茶具有良好的抗氧化能力，去火去湿的功效更优，还可根据消费者的习惯调制不同的口味。
（2）本方法建立的“CUPRAC-BCS酶标仪法”测定凉茶样液的抗氧化值，测定结果与总酚含量（TPC）、DPPH、Fe3+还原能力法的相关性均达到显著水平(P＜0.05)。本方法反应稳定、简单快捷、结果准确, 测定条件接近人体生理环境，可用于大批量样品的检测，可很好地反映凉茶抗氧化值效果。
附图说明
图1为本发明的标准曲线。
具体实施方式
为更好理解本发明，下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例表示的范围。
实施例1
称取金银花10g、木棉花10kg、槐花10g、葛花10kg、菊花10kg于烧杯中。加15倍水，煮沸，100℃保温1h。取出，趁热过滤，收集滤液于玻璃瓶中，封盖，75℃，30min灭菌，常温保存。摇匀后吸取30μL用于抗氧化值检测，测得结果为274 μmol TE/L。
实施例2
称取金银花10kg、木棉花15kg、槐花15kg、葛花15kg、菊花15kg于烧杯中。加15倍水，煮沸，100℃保温1h。取出，趁热过滤，收集滤液于玻璃瓶中，封盖，75℃，30min灭菌，常温保存。摇匀后吸取30μL用于抗氧化值检测，测得结果为146 μmol TE/L。
实施例3
称取金银花20kg、木棉花15kg、槐花25kg、葛花20kg、菊花10kg于烧杯中。加15倍水，煮沸，100℃保温1h。取出，趁热过滤，收集滤液于玻璃瓶中，封盖，75℃，30min灭菌，常温保存。摇匀后吸取30μL用于抗氧化值检测，测得结果为450 μmol TE/L。
实施例4
称取金银花25kg、木棉花25kg、槐花10kg、葛花20kg、菊花15kg于烧杯中。加15倍水，煮沸，100℃保温1h。取出，趁热过滤，收集滤液于玻璃瓶中，封盖，75℃，30min灭菌，常温保存。摇匀后吸取30μL用于抗氧化值检测，测得结果为415 μmol TE/L。
本发明凉茶的制作步骤如下：
①称样：分别按一定比例称取干的金银花、木棉花、槐花、葛花、菊花，置于烧杯中。加15倍水，煮沸，100℃保温1h。具体配伍组成见表1。
②取出，趁热过滤，收集滤液于玻璃瓶中，封盖，75℃，30min灭菌，常温保存。
表1 凉茶配方
3、抗氧化能力检测
①、试剂的配制
Trolox 溶液 准确称取25 mg Trolox，用pH 7.4磷酸盐缓冲液溶解并定容至 100 mL, 即为1 mM Trolox 溶液，分装于1.5mL离心小管中，储存于-70℃超低温冰箱中备用，用时稀释。其他无特别说明的溶液均用双蒸水配制。
②、凉茶抗氧化能力检测
在96孔酶标板中分别加入30μL不同浓度Trolox溶液（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mM ），然后各孔加入30μL CuSO4溶液（1mM）与30μL BCS溶液（2mM），最后加入210μL pH7.4磷酸盐缓冲溶液（50mM）。振荡10s, 反应20min, 490nm处检测吸光值。绘制标准曲线如图1所示。取30μL经过稀释的凉茶，然后加入30μL、1mM的CuSO4溶液与30μL、2mM的BCS溶液，最后加入210μL、50mM、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，振荡10s，反应20min，490nm处检测吸光值，根据标准曲线得到凉茶的Trolox的浓度，计算凉茶抗氧化值CUPRAC-BCS(μmol TE/L)。
不同配伍凉茶抗氧化值检测结果见表2。
总酚含量采用Folin-Ciocalteu法测定，参考文献Singleton VL, Orthofer r, & Lamuela-Raventos RM. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent [J]. Method in Enzymology, 1999, 299: 152–178.记载的测定方法。根据预实验，凉茶原液稀释10倍。以没食子酸为标准物绘制标准曲线（25-200 mg/L）。结果以没食子酸当量(gallic acid equivalents)表示,单位为mg GAE/ L。
与DPPH法、ORAC法、Fe3+还原能力法的比较，分别取不同的凉茶样液，用DPPH法、ORAC法、Fe3+还原能力法检测抗氧化活性,并与BCS法进行相关性分析。
与DPPH法、ORAC法、Fe3+还原能力法比较,结果见表3。计算表3结果发现，CUPRAC-BCS法与总酚（TPC）、DPPH、Fe3+还原能力法的相关性均达到显著水平(P＜0.05)，其中最高为TPC/CUPRAC-BCS（0.997），达到了极显著的水平，其次是DPPH/CUPRAC-BCS（0.7436），最低为Fe3+还原能力/CUPRAC-BCS（0.7415）。ORAC与CUPRAC-BCS法之间的相关性不显著（R2=0.3081）。本方法反应稳定、简单快捷、结果准确, 测定条件接近人体生理环境，可用于大批量样品的检测，可很好地反映凉茶抗氧化值效果。
表2 凉茶样品的抗氧化性
表3
| ORAC(mmol TE/L) | 配方 | |
| 凉茶1 | 2.89±0.17 | 桑叶、胖大海、桔梗、紫苏、菊花、淡竹叶、玉竹、陈皮、甘草 |
| 凉茶2 | 4.57±0.38 | 凉粉草、金银花、鸡蛋花、布渣叶、菊花、甘草、茅根 |
| 凉茶3 | 3.59 ±0.20 | 金银花 |
| 凉茶4 | 2.62 ±0.14 | 凉粉草、菊花、金银花、鸡蛋花、甘草 |
| 凉茶5 | 2.09 ±0.04 | 淡竹叶、菊花、甘草 |
| 凉茶6 | 3.38 ±0.038 | 凉粉草、菊花、金银花、甘草 |
| 凉茶7 | 2.36 ±0.04 | 清凉茶 |
| 凉茶8 | 2.72 ±0.06 | 菊花 |
| 凉茶9 | 2.57 ±0.12 | 菊花 |
| 凉茶10 | 2.89 ±0.12 | 菊花、甘草 |
表3中的数据是对市面上销售的一些凉茶产品测定的ORAC值，由表2可以得出采用本发明配方制得的五花茶具有更好的抗氧化能力，与表3中其他配方的凉茶相比具有更好的抗氧化性。
Claims (5)
1.一种五花茶，其特征在于，其组成包括：金银花10-25份、木棉花10-25份、槐花10-25份、葛花10-25份和菊花10-25份。
2.权利要求1所述五花茶的制备方法，其特征在于，按配方称取金银花、木棉花、槐花、葛花和菊花，加入相当于原料总重量15倍的水，煮沸后，在100℃保温1h，立即过滤，滤液在75℃灭菌30min。
3.一种检测权利要求1五花茶的抗氧化值的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将1 mM Trolox 溶液，稀释后得到浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mM的Trolox溶液，在-70℃储存备用；
（2）在30μL 浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mM的Trolox溶液中，均加入30μL、1mM的CuSO4溶液和30μL、2mM的BCS溶液，最后加入210μL、50mM、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，振荡10s，反应20min，490nm处用酶标仪检测吸光值，绘制标准曲线；
（3）取30μL经过稀释的凉茶，然后加入30μL、1mM的CuSO4溶液与30μL、2mM的BCS溶液，最后加入210μL、50mM、pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，振荡10s，反应20min，490nm处检测吸光值，根据标准曲线计算凉茶的Trolox的浓度，单位：μmol TE/L。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述CuSO4溶液和BCS溶液均用双蒸水配制。
5.根据权利要求3或或4所述的方法，其特征在于，所述1 mM Trolox 溶液是称取25 mg Trolox，用pH 7.4磷酸盐缓冲液溶解并定容至 100 mL得到的。
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