CN102119659A - 红萍品种保存方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种红萍品种保存方法,所述的方法为:将用茎尖培养保存的无菌红萍转接至半固体培养基,在0~10℃温度进行保存;所述用茎尖培养保存的无菌红萍的培养方法为:切取0.8~1.2mm的红萍茎尖,用0.01%HgCl2浸泡10分钟,用无菌水冲洗干净,然后接到高压灭菌过的液体培养基中,待长成萍体后,即为茎尖培养的无菌红萍。根据本发明方法保存的红萍品种资源,保存的时间可达到12个月,比原来的保存3-4个月时间,延长了8-9个月,大大减轻红萍品种资源保存的工作量,节约保存成本。

Description

红萍品种保存方法
技术领域
[0001] 本发明属于农业技术领域,具体涉及红萍品种资源的保存方法,尤其涉及红萍组 培保存过程中温度选择的新方法。
背景技术
[0002] 红萍又名满江红,学名holla,是一种蕨藻共生的绿肥植物。由于红萍不易形成孢 子果,因此红萍品种资源保存以其营养体为主,目前我们采用的方法是茎尖组培培养保存、 温室培养保存和网室培养保存。其中保存时间最长的为红萍茎尖半固体培养保存,一次培 养保存时间为3-4个月,这个时间仍然太短。现有红萍品种资源保存工作量大,保存成本 高。严重制约了红萍利用的发展。
发明内容
[0003] 本发明的目的是提供一种红萍品种资源保存新方法,使红萍品种资源的保存时间 延长到1年,比原来红萍品种资源保存的最长时间长8-9个月,从而减轻红萍品种资源保存 的工作量,节约保存成本。
[0004] 发明人发现在低温的条件下,能够延长红萍的保存时间,因此把原来保存的温度 20-25°C改为0-10°C,可大大延长其保存时间,又能够不影响其存活。
[0005] 本发明采用的技术方案是:
一种红萍品种保存方法,所述的方法为:将用茎尖培养保存的无菌红萍转接至半固体 培养基,在0〜10°C温度进行保存;所述用茎尖培养保存的无菌红萍的培养方法为:切取 0. 8^1. 2mm的红萍茎尖,用0. 01%HgCl2浸泡10分钟,用无菌水冲洗干净,然后接到高压灭菌 过的液体培养基中,待长成萍体后,即为茎尖培养的无菌红萍。
[0006] 所述液体培养基中各成分的浓度为:CaSO4. 2H20(0. 17g/L)、MgSO4. 7H20(0. 41g/ L)、KH2PO4 (0. 04g/L)、KCl (0. 02g/L)、EDTA-Na2 (0. 004g/L)、FeSO4. 7H20(0. 003g/L)、 H3BO3 (0. 0015g/L)、Na2MoO4. 2H20 (0. 0019g/L)、NaNO3 (0. 06g/L);其中 Ca 浓度为 0. 04g/L、 Mg浓度为0. 04g/L、P浓度为0. 02g/L、K浓度为0. 04g/L、Fe浓度为0. 0005g/L、B浓度为 0. 0002g/L、Mo浓度为0. 00015g/L、Na浓度为0. 01g/L。首先配成上述浓度的液体培养液, 调PH到6. 0,经高压灭菌即为液体培养基;液体培养基加入琼脂配成半固体培养基;配成半 固体培养基时琼脂的用量为每升培养液中加入琼脂5g。
[0007] 所述液体培养液的pH值用稀HCl或稀NaOH调为6. 0,其中稀HCl的浓度通常为 0. Γ0. 2mol/L,所述稀 NaOH 浓度通常为 0. Γθ. 2mol/L
根据本发明方法保存的红萍品种资源,保存的时间可达到12个月,比原来的保存3-4 个月时间,延长了 8-9个月,大大减轻红萍品种资源保存的工作量,节约保存成本。
具体实施方式
[0008] 实施例1 :
3一、材料:卡州萍3001
培养液配方见表1 表1培养液配方
Figure CN102119659AD00041
其中EDTA-Na2为乙二胺四乙酸二钠。配好的培养液用0. lmol/L的稀HCl调pH值到 6. 0,高压灭菌锅中进行高压,121°C下灭菌40分钟,即为高压灭菌过的液体培养基。
[0009] 二、步骤
1.培养基制备:按照表1培养液配方配制培养液,然后按每升液体培养基中加入琼脂 5g的量加入琼脂配成半固体培养基,装入IOOml的三角瓶中。
[0010] 2.高压灭菌:将装好半固体培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中进行高压,121°C 下灭菌40分钟。
[0011] 3.接种:将用茎尖培养保存的无菌红萍转接至配好的半固体培养基中。其中,无 菌红萍的具体制作方法为:切取Imm左右大小的红萍茎尖,用0. 01%HgCl2浸泡10分钟,用 无菌水冲洗干净,然后接到高压灭菌过的液体培养基,待长成萍体后,即为茎尖培养的无菌 红萍。
[0012] 4.培养保存:在温度为2°C进行培养保存。
[0013] 比较例1
材料和步骤同实施例1,所不同的是,在步骤4,培养保存在温度20-25°C进行保存。
[0014] 结果
红萍培养保存的时间见表2。
[0015] 表2实施例1保存方法与对比例1保存方法的保存时间表
Figure CN102119659AD00051
从表2可见采用新保存方法,保存时间可以延长260天。
[0016] 实施例2:
一、材料:卡州萍3001
培养液配方见表1
二、步骤
1.培养基制备:按照表1培养液配方配制培养液,然后按每升液体培养基中加入琼脂 5g的量加入琼脂配成半固体培养基,装入IOOml的三角瓶中。
[0017] 2.高压灭菌:将装好半固体培养基的三角瓶放入高压灭菌锅中进行高压,121°C 下灭菌40分钟。
[0018] 3.接种:将用茎尖培养保存的无菌红萍转接至配好的半固体培养基中。其中,无 菌红萍的具体制作方法为:切取Imm左右大小的红萍茎尖,用0. 01%HgCl2浸泡10分钟,用 无菌水冲洗干净,然后接到高压灭菌过的液体培养基中,待长成萍体后,即为茎尖培养的无 菌红萍。
[0019] 4.培养保存:在温度为8°C进行培养保存。
[0020] 比较例2
材料和步骤同实施例2,所不同的是,在步骤4,培养保存在温度20-25°C进行保存。
[0021] 结果
红萍培养保存的时间见表3。
[0022] 表3实施例2保存方法与对比例2保存方法的保存时间表
红萍品种 保存时间(天) 延长时间(天) 新保存方法 对照 卡州萍3001 356 100 256
从表3可见采用新保存方法,保存时间可以延长256天。
5

Claims (3)

1. 一种红萍品种保存方法,其特征在于所述的方法为:将用茎尖培养保存的无菌红萍 转接至半固体培养基,在0〜10°C温度进行保存;所述用茎尖培养保存的无菌红萍的培养 方法为:切取0. 8^1. 2mm的红萍茎尖,用0. 01%HgCl2浸泡10分钟,用无菌水冲洗干净,然后 接到高压灭菌过的液体培养基中,待长成萍体后,即为茎尖培养的无菌红萍。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述液体培养基的成分为:CaS04.2H20 0. 17g/L、MgSO4. 7Η20 0· 41 g/L、KH2PO4 0· 04g/L、KCl 0· 02g/L、EDTA-Na2 0. 004g/L、 FeSO4. 7H20 0. 003g/L、H3BO3 0. 0015g/L, Na2MoO4. 2H20 0. 0019g/L、NaNO3 0. 06g/L ;pH 值为 6. 0 ;所述液体培养基加入琼脂配成半固体培养基;所述琼脂的用量为每升液体培养基中 加入5g。
3.如权利要求2所述的方法,其特征在于配液体培养基时用稀HCl或NaOH调PH为 6. 0,所述稀HCl的浓度为0. Γ0. 2mol/L,所述稀NaOH浓度为0. Γθ. 2mol/L。
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