CN102115725B - 一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法 - Google Patents

一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102115725B
CN102115725B CN201010588951.7A CN201010588951A CN102115725B CN 102115725 B CN102115725 B CN 102115725B CN 201010588951 A CN201010588951 A CN 201010588951A CN 102115725 B CN102115725 B CN 102115725B
Authority
CN
China
Prior art keywords
water
level
students
substratum
reduction
Prior art date
Application number
CN201010588951.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102115725A (zh
Inventor
刘浩
唐智伟
刘军
刘彬彬
赵冰
项娇
Original Assignee
武汉昌宝环保工程有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 武汉昌宝环保工程有限公司 filed Critical 武汉昌宝环保工程有限公司
Priority to CN201010588951.7A priority Critical patent/CN102115725B/zh
Publication of CN102115725A publication Critical patent/CN102115725A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102115725B publication Critical patent/CN102115725B/zh

Links

Abstract

本发明公开了一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤:A、Ⅰ、Ⅱ级菌种培养:(1)培养基;(2)Ⅰ级种子培养;(3)Ⅱ级种子培养;B、Ⅲ级种子:(1)、溶藻菌Ⅲ级种子:(2)、减负复合菌剂Ⅲ级种子:C、规模化生产方法:(1)培养基:(2)溶藻菌规模化发酵生产;(3)减负复合菌剂规模化发酵生产;(4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装。方法易行,操作简便,降低了富营养化水体,控制了蓝藻水华爆发。该菌剂易于培养,成本底,适宜工厂化生产。本发明溶藻减负复合生物菌剂易于培养,成本底,适宜工厂化生产。对水体无污染。具有环境、社会效益。

Description

一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法
技术领域
[0001 ] 本发明属于环保生物工程领域,更具体涉及一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法。该菌剂易于培养,适宜工业化生产,适用于降低富营养化水体、控制蓝藻水华爆发。
背景技术
[0002] 蓝藻是地球上最早出现的光合自养生物,在长期的进化过程中,这类生物发展了一套独特的形态和生理生化机制,能够在各种不同生境中生衍,使其具有一定的竞争优势。在环境条件适宜时,某些蓝藻能快速生长,当达到一定生物量时,这些藻类在水体表层大量聚集,形成肉眼可见的藻类聚集物,即蓝藻水华。蓝藻水华引起的一系列环境和健康问题,正受到全世界各国的高度重视。藻类过度繁殖是导致湖泊水环境恶化的关键环节,有害藻类的过度增殖,尤其产毒素蓝藻给人类健康构成了潜在的威胁。针对我国湖泊面临的严重富营养化及其灾害问题,在湖内污染源、流域点源与面源污染控制需要投入巨大资金且短期内难以取得成效的情况下,探索浮游藻类生物量的控制、抑制“水华”发生、改善湖泊水质的有效途径是非常必要的。藻类的控制技术可归结为物理方法、化学方法和生物方法。物理方法主要是电磁场、机械除藻等,可作为蓝藻水华控制的辅助性措施,但处理能力有限,局限于水处理工程应用。化学除藻的方法主要包括施用除草剂、杀藻剂及金属盐等。化学药剂除藻技术虽有快速高效的优点,但会带来水体的二次污染问题,直接在作为饮用水源的湖泊、水库等的应用受到限制或必须慎用。生物学控藻技术是利用藻类的天敌及其产生的生长抑制物质对藻类的生长、繁殖进行抑制,从而达到控制藻类数量、防治富营养化带来的各种危害,目前正处在研究发展的初期阶段。溶藻细菌(algae-lysing bacteria)
,作为水生生态系统生物种群结 构和功能的重要组成部分,对维持藻的生物量平衡具有非常重要的作用。溶藻细菌,作为水华防治的生物,已经引起越来越多人的关注。我国已经成为水华的多发国度,其造成的环境和经济问题日益引起重视,寻求有效的水华防治途径势在必行。复合微生物制剂是由多种有益微生物组合成,能促进水体中有机污染物分解,降低B0D、C0D,净化水质等高效。本发明采用溶藻菌和复合微生物制剂相结合,制成的溶藻减负复合生物制剂,喷施在湖泊、水库及河道等富营养化水体后,能调整水体生态环境,能效地降低富营养化水体的营养成分;增加水体的溶氧量,促进水体中氮、磷、有机污染物的分解,降低B0D、C0D,净化水质,消除环境恶臭;保持水体的生态平衡;从而达到控制富营养化湖泊蓝藻水华发生的目的。
发明内容
[0003] 本发明的目的是在于提供了一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,方法易行,操作简便,降低了富营养化水体,控制了蓝藻水华爆发。该菌剂易于培养,成本底,适宜工厂
化生产。
[0004] 为了达到上述的目的,本发明采取溶藻菌和减负复合菌分别生产,混合应用的技术措施是:[0005] 1、菌种来源:
[0006] A溶藻菌为专利菌种(专利号:ZL2004100129324,菌种名为:肠杆菌;拉丁文是Enterobacteriaceae.sp,保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心,保藏号为M204010。)
[0007] B减负生物制剂是由多种复合微生物组成,主要是以乳酸菌类、光合菌类、酵母菌类、丝状菌类、革兰氏阳性放线菌类等复合在同一种液体中以活性状态共同存在。
[0008] 一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤是:
[0009] 其主要构思是:A、I级、II级菌种实验室培养;B、III级种子(母液扩大培养);C、规模化生产。
[0010] 、1、II级菌种(实验室)培养:
[0011] ⑴培养基:
[0012] ①溶 藻菌培养基:
[0013]牛肉膏 l_5g、蛋白胨 8-12g、氯化钠 3-7g、水 1000ml、琼脂 1.5-2.5%、pH=7.0-7.8
[0014] ②减负复合菌剂培养基:
[0015]红糖 80-120g、磷酸氢二钾 0.01-0.05g、硫酸镁和 0.01-0.03g、水 1000ml、pH=6.8-7.4
[0016] (2) I级种子培养(试管斜面培养):
[0017] ①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开,灭菌Ih。
[0018] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行。
[0019] ③培养:菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养,温度控制在25-29。。。
[0020] II级种子培养(三角瓶液体培养):
[0021] ①无菌室消毒:同I级种子培养中的第一步①;
[0022] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒过的工作服和工作帽,接种前手先用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作,接种针或环必须在酒精灯上烧红3次,才能进行接种,将试管斜面或在培养皿平板培养好的I级菌种,用接种针和接种环,将菌种转接到三角瓶液体中,操作时接种物在酒精灯的火焰边进行,接种完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶;
[0023] ③培养:a、溶藻菌II级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养,温度控制在25-29°C,如没有恒温摇床可以培养架上或生物培养箱内培养,每天应摇动2-3次为宜。B、减负复合菌剂II级菌种接种后室温(20-25°C以下相同)静置培养。
[0024] ④II级菌种培养约5-7天后即可生长好,即可进行III级种子(母液扩大)培养。
[0025] 、111级种子(母液扩大培养):
[0026] (I)溶藻菌III级种子(母液扩大培养)
[0027] ①培养基配制:先用40-60°C的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,加干净的井水,然后加入氯化钠,其中按每升牛肉膏l_5g、蛋白胨8_12g、氯化钠3_7g的比列在混合器中搅拌均匀,再分别装入25L的清洗干净的塑料壶中。
[0028] ②接种:待本步骤第一步①培养基融化后,冷却到29_31°C,再加入250_350mL II级溶藻菌菌种,然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎。
[0029] ③发酵:在壶口插上通气和出气管各一支,在28_32°C条件下通气发酵培养。一般5-7天后发酵完成,可以作为规模化生产的种子。
[0030]减负复合菌剂III级种子(母液扩大培养):
[0031] ①培养基配制:先烧开10000ml的水(温度控制在90-100°C),加800_1200g的红
糖,把红糖融化开,把红糖里面的有害菌消除。然后分别加0.1-0.3g硫酸镁和0.2-0.4g磷
酸氢二钾。
[0032] ②接种:待本步骤第一步①培养基融化后,冷却到29_31°C,然后接种1000g II级减负复合菌剂菌种。
[0033] ③发酵:后把1000Og的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中,要密封发酵,不能漏气。不要装的太满,在发酵过程中会产生气体,装满容易涨破塑料壶。6-8天后,温度低于15°C要多发酵4-5天,使发酵时间达到10~13天。打开瓶口,有气体产生。闻到酸甜闻到就证明发酵成功。
[0034] C、规模化生产方法:
[0035] (I)培养基:
[0036] ①溶藻菌培养基:
[0037]牛肉膏 1000-2000g 蛋白胨 4000_6000g 氯化钠 3000_7000g 水 I m3pH=7.0-7.8
[0038] ②减负复合菌剂培养基:
[0039]红糖 400000-600000g 磷酸氢二钾 1000_5000g 硫酸镁 1000_3000g 水10m3。pH=6.8-7.4
[0040] (2)溶藻菌规模化发酵生产:
[0041] 先用40_60°C的温水,将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,然后加入氯化钠,其中分别以每方牛肉膏1000-2000g、蛋白胨4000-6000g和氯化钠3000-7000g的量在混合器中搅拌均匀,再放入1-1Om3的培养池中,加溶藻菌III级种子(母液)0.1-1m3,然后加井水至1-1Om3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般6-8天后即可。
[0042] 减负复合菌剂规模化发酵生产:
[0043] 先用开水(温度控制在90-10(TC)将400000-600000g红糖溶化,加井水500L,然后以每10 m3加入红糖400000-600000g,硫酸镁1000_3000g和磷酸氢二钾1000_5000g的
量,在混合器中搅拌均匀,再放入10-20 m3的培养池中,加溶藻减负复合菌l-2m3,然后加井水至10-20m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般6_8天后即可。
[0044] 溶藻减负复合生物制剂配比与包装:
[0045] I)将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照3:7的比例混合。然后进行收获与包装。
[0046] 2)产品用50L-lm3塑料桶包装。贴上带有产品说明书和生产日期的标签。
[0047] 3)抽样对产品按照企业标准进行检查,检查合格后贴上检验合格证。
[0048] 本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:
[0049] 方法易行,操作简单,无污染,安全性高。细菌溶解蓝藻是位于实际应用的前沿。相比杀蓝藻的如硫酸铜等化学物质具有明显的优点。使用细菌清除蓝藻不会带来第二次污染。在较大的水体中形成一种新的生态平衡。溶藻减负复合生物菌剂制按1/10000浓度喷洒在蓝藻爆发初期的湖泊、水库及河道等富营养化水体后,能调整水体生态环境,能效地降低富营养化水体的营养成分;增加水体的溶氧量,促进水体中氮、磷、有机污染物的分解,降低BOD、COD,净化水质,消除环境恶臭;保持水体的生态平衡;从而达到控制富营养化湖泊等水体蓝藻水华发生的目的。本发明溶藻减负复合生物菌剂易于培养,成本底,适宜工厂化生产。对水体无污染。具有环境、社会效益。
附图说明
[0050] 图1为一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法方框示意图
[0051] 其中:溶藻菌原种A、减负复合菌菌种B、I 一III级种子(溶藻菌)C、I 一III级种子(减负复合菌)D、发酵池大规模生产E、发酵池大规模生产F、溶藻减负复合生物制剂G、富营养化湖泊应用或其他水体应用H。
具体实施方式
[0052] 1、II级菌种(实验室)培养:
[0053] 菌种分为母种(I级种)、原种(II级种)。
[0054] I级菌种:将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成.可以繁殖原种,也适宜菌种保藏。
[0055] II级菌种:母种菌丝在固体培养基上繁殖而成.这一过程增强菌丝对培养环境的适应性,又起到扩繁的作用.[0056] I)培养基:
[0057] ①溶藻菌培养基:
[0058] 牛肉膏l_5g 蛋白胨8-12g 氯化钠3_7g 水1000ml琼脂L 5-2% pH=pH=7.0-7.8
[0059] ②减负复合菌剂培养基
[0060]红糖 80-120g 磷酸氢二钾 0.01-0.05g 硫酸镁和 0.01-0.03g 水 1000mlpH=6.8-7.4
[0061] 一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤是:
[0062] 溶藻菌原种A:
[0063] ①称量:按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏l_5g、蛋白胨8_12g、氯化钠3-7g放入烧杯中。牛肉膏l-5g常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水(40°C~60°C) 500mL溶化后倒入烧杯。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。
[0064] ②溶化:在上述步骤①的烧杯中可先加入少于500 mL的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热500°C使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积1000mL。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热到大概300°C溶化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
[0065] ③调pH至7.6在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7.6。反之,则用lmol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
[0066] ④分装:将配制的培养基分装入试管内,分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。试管装量不超过管高的1/5。
[0067] ⑤加塞:培养基分装完毕后,在试管口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能。
[0068] ⑥包扎:加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。
[0069] ⑦灭菌:灭菌在菌种的培养中,是十分重要的一个环节。溶藻菌种转接、溶藻菌培养基制备,任何一个环节都必须使用灭菌的器械,否则都会造成杂菌污染。培养所需要的三角瓶、试管、培养皿,灭菌前洗净,三角瓶可以用牛皮纸内衬粗滤纸来包住瓶口,用棉线缠紧;或者自做棉塞,外部再加上牛皮纸包住;试管必须和棉塞或者试管塞一起用牛皮纸包好灭菌。培养皿可以5-10个一起用牛皮纸包好灭菌。移液管、滴管、接种环都可以分别用牛皮纸包好,在高压灭菌锅内,以1.05kg/cm2 (15磅/英寸2),121.3°C,30分钟高压蒸汽灭菌。所有灭菌后的器皿、培养基只能在超净台上打开使用。将上述培养基如因特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
[0070] ⑧搁置斜面:将灭菌的试管培养基冷至50°C左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的三分之一为宜。
[0071] ⑨无菌检查:将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24— 48小时,以检查灭菌是否彻底。得到无菌的溶藻菌培养基。
[0072] 减负复合菌菌种B:
[0073] 减负复合菌是一种新型的复合微生物制剂,呈棕色半透明液体,pH值在3.5~4.5之间,不含任何有害物质,无毒副作用,不污染环境。主要是乳酸菌类、光合菌类、酵母菌类、丝状菌类、革兰氏阳性放线菌类等复合在同一种液体中以活性状态共同存在。目前世界上已有一百多个国家和地区,在生活垃圾、污水处理、治理河流和湖泊甚至日常生活、保健医疗等领域广泛应用。它可以降低水体富营养,抑制腐败病原菌的滋生,消除环境恶臭,净化水质,循环利用资源等等。
[0074] I 一III级种子(溶藻菌)C:
[0075] I级种子培养(试管斜面培养):
[0076] ①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开,灭菌Ih。
[0077] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒过的工作服和工作帽,接种前手先用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作。接种针或环必须在酒精灯上烧红3次,才能进行接种;用接种针和接种环,将菌种挑到斜面试管和平板上划线接种,操作时接种物应在酒精灯的火焰边进行。接种完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上培养皿盖。
[0078] ③培养:菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养,温度控制在25_29°C,每天应摇动2-3次为宜。菌种要定期更换,(试管)斜面和平板三个月换一次;液体试管或小三角瓶夏季保种20天左右,冬季一个月换一次培养基。
[0079] II级种子培养(三角瓶液体培养):[0080] ①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开,灭菌Ih。
[0081] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒过的工作服和工作帽,接种前手先用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作。接种针或环必须在酒精灯上烧红3次,才能进行接种。将试管斜面或在培养皿平板培养好的I级菌种,用接种针和接种环,将菌种转接到三角瓶液体中。操作时接种物应在酒精灯的火焰边进行,接种完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶。
[0082] ③培养:II级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养,温度控制在25-29°C,如没有恒温摇床可以培养架上或生物培养箱内培养,每天应摇动2-3次为宜。
[0083] ④II级菌种培养约5-7天后即可生长好,生长好的II级菌种可以进行III级种子(母液扩大)培养。
[0084] III级种子(母液扩大培养):
[0085] ①先用温水(40°C _60°C)将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠分别溶化,按照1000ml井水加入l-5g牛肉膏、8-12g蛋白胨、3-7g氯化钠的比例进行配置,在Im3的混合器中搅拌均匀,再分装入25L的清洗干净的塑料壶中。
[0086] ②待上述培养基融化后,冷却到29-31 °C,在再加入250— 350ml溶藻菌菌种。
[0087] ③然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎,在壶口插上通气和出气管各一支,在28—32°C条件下通气发酵培养。
[0088] ④条件适宜时一般5天左右发酵完成,可以作为规模化生产的种子。
[0089] I 一III级种子(减负复合菌剂)D
[0090] I级种子培养
[0091] I)培养工具的消毒方法
[0092] 1.加热消毒法:利用高温杀死微生物的方法。
[0093] (1)直接灼烧:此法可直接把微生物烧死,灭菌彻底,但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。
[0094] (2)煮沸消毒:一般煮沸5~10分钟,适用于小型容器、工具的消毒。
[0095] (3)烘干箱消毒:亦称为恒温干燥箱消毒法。
[0096] 2.化学药品消毒法:适用在批量培养中,大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。
[0097] (I)酒精:体积分数为75%的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹,10-12分钟后,清水冲洗即可。
[0098] (2)高锰酸钾:按300ppm配成高锰酸钾溶液,把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5-6分钟,取出,再用清水冲洗2次~3次即可。
[0099])培养方法
[0100] 培育室及用具:暗室一间。5L的塑料桶(最好用红色)、量筒、PH试纸。
[0101] 原料:复合菌种、培养基。
[0102] 复合菌培养液配制比例:复合菌种:培养基:水=10:1:90。
[0103] 生产工艺流程:
[0104] (1)将塑料桶、量筒等用具经灭菌消毒处理备用。
[0105] (2)在每个桶中放入培养基,倒入无菌的35°温水(深井水),搅拌直到融化,然后加入复合菌种搅拌1-5分钟,其中加入培养基、无菌水和复合菌种的重量比为1:90:10,最后盖上桶盖、半密封;将桶置于暗室内让其在半密封状态下发酵。
[0106] (3)室温保持在25—35°C,发酵进行到第2天时,将桶摇晃或用经消毒的塑料棒搅拌2-5分钟。第三天时水面会出现泡沫,再搅拌2-5分钟促进有益微生物的生成;第8天时,泡沫慢慢消失,水面浮起一片白色的悬浮物;到第10天时,发酵结束。
[0107] (4)复合菌种在25— 35°C之间,8-10天即成;在15_25°C之间,13-15天即成,15°C以下需17-19天才成,培育的复合菌符合以下规定方可使用:①其颜色为棕或黄褐色;(有较浓的甜酸味或酸味;⑧用量筒取少量倒人矿泉水瓶中,拧紧瓶盖并摇晃几下,产生大量泡沫;④测试PH值在3.5以下
[0108] II级种子培养 [0109] 取上述一级复合菌种一级种子活菌制剂10g、红糖100g (红糖先用温度控制在90-100°C的热开水溶化),加入1000g无菌的井水中。注:(先把水加热到90-100° C后加入红塘,而后继续加热5分钟。冷却到40° C时加入一级种子),密闭发酵(35° C — 37° C温度)3-5天,打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。可以作为液体III级菌种使用。
[0110] III级种子(母液扩大培养):
[0111] ①先用开水(温度控制在90-100°C)IOLJp 1000g的红糖,把红糖融化开,把红糖里面的有害菌消除。然后分别加入0.01-0.03g硫酸镁和0.01-0.05g磷酸氢二钾。
[0112] ②待上述培养基融化后,冷却到29_31°C,在再加入1000g减负复合菌种。
[0113] ③然后把1000Og的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中,要密封发酵,不能漏气。不要装的太满,在发酵过程中会产生气体,装满容易涨破塑料壶。
[0114] ④发酵7-12天左右,如果温度低于15°C要多发酵几天,大概15天,打开瓶口,有气体产生。闻到酸甜闻到就证明发酵成功。
[0115] ⑤发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完,就用小瓶子分装密封保存。使用一瓶打开一瓶。
[0116] ⑥菌种的储存:减负复合菌要求常温避光条件下,25度左右保存最为适宜。底部稍有沉淀或浮有些微白沫均属正常,若出现腐臭即已变质,勿用。
[0117] 发酵池大规模生产E、发酵池大规模生产F:
[0118] I)培养基:
[0119] ①溶藻菌培养基:
[0120]牛肉膏 1000-2000g 蛋白胨 4000_6000g 氯化钠 3000_7000g 水 I m3pH=7.0-7.8
[0121] ②减负复合菌剂培养基
[0122]红糖 400000-600000g 磷酸氢二钾 1000_5000g 硫酸镁 1000_3000g 水IOm3 pH=6.8-7.4
[0123] 2 )溶藻菌规模化发酵生产:
[0124] 先用40°C -60°C的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,加井水500L,然后加入氯化钠,其中牛肉膏、蛋白胨和氯化钠以每方分别1000-2000g、4000-6000g、3000-7000g在混合器中搅拌均匀,再放入10 m3的培养池中,加溶藻菌III级种子(母液)lm3,然后加井水至10m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般7天左右即可。[0125] 步骤I原料准备:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、干净的水(深井水)
[0126] 步骤2发酵池:10m3 ;配制(消毒液跟整个容积比)5% “84”消毒液,喷洒在发酵池壁和底部,24h后,用干净的深井水清洗发酵池。然后把发酵池灌入50-70%干净的深井水。
[0127] 步骤3培养基配制:①取0.8-1 m3干净的深井水加热融化氯化钠;②取5L干净的温水(40°C -60°C)水2份,分别溶化牛肉膏和蛋白胨過溶化后营养液分别倒进步骤2中的发酵池内。
[0128] 步骤4接种:溶藻菌种:水按1:10比例加入发酵池中,均匀搅拌菌液,同时用干净的深井水加入到发酵池中IOm3刻度,然后用塑料薄膜密封发酵池。
[0129] 步骤5温度控制在28— 32°C之间发酵7天左右。如果温度在23—25°C之间,发酵时间为12天。(这五步就是整个溶藻菌剂的生产过程)。
[0130])减负复合菌剂规模化发酵生产:
[0131] 先用开水(温度控制在90-10(TC)将红糖溶化,加井水500L,加入硫酸镁和磷酸氢二钾,其中以每IOm3加入红糖500000g,硫酸镁1000_3000g和磷酸氢二钾1000_5000g的量,在混合器中搅拌均匀在混合器中搅拌均匀,再放入IOm3的培养池中,加减负复合菌lm3’,再加 井水至10 m3刻度, 其中减负复合菌主要菌种包括芽孢菌、酵母菌、乳酸菌等有益菌类。,然后加井水至10m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般7天左右即可。
[0132] 步骤I原料准备:红糖400000-600000g,硫酸镁1000_3000g,磷酸氢二钾1000-5000g,无菌干净的水(深井水)水IOm3
[0133] 步骤2发酵池:10-15 m3 ;配制5% (消毒液跟整个容积比)“84”消毒液,喷洒在发酵池壁和底部,24h后,用干净的深井水清洗发酵池。然后把发酵池灌入50-70%干净的深井水。
[0134] 步骤3培养基配制:①取0.8-lm3干净的深井水加热融化400000-600000g红糖,
②取IOL干净的深井水2份,分别溶化硫酸镁1000-3000g,磷酸二氢钾1000-5000g ;③溶化后营养液分别倒进步骤2中的发酵池内。
[0135] 步骤4接种:减负复合菌菌种:水按1:10比例加入发酵池中,均匀搅拌菌液,同时用干净的深井水加入到发酵池中IOm3刻度,然后用塑料薄膜密封发酵池。(说明:如果是15 m3的发酵池,营养液和菌种增加1.5倍。)
[0136] 步骤5温度控制在28— 32°C之间发酵7天左右。如果温度在23—25°C之间,发酵时间为12天。
[0137] 步骤6 5天后打开容器测试PH值,PH值在3.5— 5范围内,即发酵成功,也可以取些发酵原液口尝,酸香后即发酵成功。一般发酵时间为7天后效果更好。(这六步就是整个减负复合菌剂的生产过程)
[0138] 溶藻减负复合生物制剂G:
[0139] 4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装:
[0140] I)将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照3:7的比例混合。然后进行收获与包装。
[0141] 2)产品用50L塑料桶包装。将采收泵排气阀打开,注入发酵好的溶菌减负复合生物制剂产品到包装桶内,发酵液注到50L刻度时关闭阀门,立即将桶盖盖上拧紧。
[0142] 3)用抹布檫干包装桶上的发酵液,贴上带有产品说明书和生产日期的标签。[0143] 4)抽样对产品按照企业标准进行检查,检查合格后贴上检验合格证。
[0144] 富营养化湖泊应用或其他水体应用H:
[0145] 5)应用:
[0146] 溶藻减负复合生物制剂主要用于控制富营养化水体中,水华蓝藻的发生。
[0147] I)细菌的喷洒:成品按照一定浓度(1/10000)喷洒在蓝藻发生的湖泊、水库、河道、池塘等富营养化水体中。
[0148] 2监控:建立的监控条件和标准为是蓝藻水体的颜色的变化,叶绿素含量下降,蓝藻优势度减少,水体富营养化程度降低、水体的透明度上升。
[0149] 用途说明:本发明与现有的除藻技术相比,具有以下优点:方法容易,操作简单,无污染,安全性高。细菌溶解蓝藻是位于实际应用的前言。相比杀蓝藻的如硫酸铜等化学物质具有明显的优点。使用细菌清 除蓝藻不会带来第二次污染。在较大的水体中形成一种新的生态平衡。

Claims (1)

1.一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤是: A、1、II级菌种培养: (1)培养基: ①溶藻菌培养基: 牛肉膏 l_5g、蛋白胨 8-12g、氯化钠 3-7g、水 1000ml、琼脂 1.5-2.5%、ρΗ=7.0-7.8 ; ②减负复合菌剂培养基: 红糖 80-120g、磷酸氢二钾 0.01-0.05g、硫酸镁 0.01-0.03g、水 1000ml、pH=6.8-7.4 ; (2)溶藻菌的I级种子培养 ①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工作台内的紫外灯同时打开,灭菌; ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行; ③培养:菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养,温度控制在25-29°C,获得I级溶藻菌种子; (3)溶藻菌的II级种子培养 ①无菌室消毒:同I级种子培养中的第一步①; ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒过的工作服和工作帽,接种前手用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作,接种针或环必须在酒精灯上烧红3次,进行接种,将试管斜面或在培养皿平板培养好的I级菌种,用接种针或接种环,将菌种转接到三角瓶液体中,操作时接种物在酒精灯的火焰边进行,接种完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶; ③培养:溶藻菌I级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养,温度控制在25-29°C,每天摇动2-3次; ④I级菌种培养5-7天后,获得II级种子; 所述的二级种子培养基即为不加琼脂的步骤(1)①的溶藻菌培养基; (4)减负复合菌剂I级种子培养 ①将塑料桶、量筒经灭菌消毒处理备用; ②在每个桶中放入培养基,倒入无菌的35°C温水,搅拌直到融化,然后加入减负复合菌种搅拌1-5分钟,接种量为1%,最后盖上桶盖、半密封,将桶置于暗室内让其在半密封状态下发酵; ③室温保持在25—35°C,发酵进行到第2天时,将桶摇晃或用经消毒的塑料棒搅拌2-5分钟;第3天时水面会出现泡沫,再搅拌2-5分钟促进有益微生物的生成;第8天时,泡沫慢慢消失,水面浮起一片白色的悬浮物;到第10天时,发酵结束;减负复合菌种在25—35°C之间,8-10天即成;在15-25°C之间,13-15天即成,15°C以下需17-19天即成,获得减负复合菌剂I级种子; (5)减负复合菌剂II级种子培养; 取上述减负复合菌剂I级种子活菌制剂10g、红糖100g,加入到1000g无菌的井水中;先把水加热到90-100°C后加入红塘,而后继续加热5分钟,冷却到40°C时加入一级种子;密闭发酵35°C—37°C 3-5天,打开容器口闻到有酸甜味即活化成功,获得II级种子; B、III级种子培养:(1)、溶藻菌III级种子培养: ①培养基配制:先用40-60°C的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,加井水,然后加入氯化钠,其中按每升牛肉膏l_5g、蛋白胨8-12g、氯化钠3-7g的比例在混合器中搅拌均匀,再装入25L的清洗干净的塑料壶中; ②接种:待本步骤第一步①培养基冷却到29-31°C,再加入250-350mL II级溶藻菌菌种,然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎; ③发酵:在壶口插上通气和出气管各一支,在28-32°C条件下通气发酵培养,5-7天后发酵完成,生产III级种子,获得III级种子; (2)、减负复合菌剂III级种子培养: ①培养基配制:先烧开1000Oml的水,温度在90-100°C,加1000g的红糖,把红糖融化开,把红糖里面的有害菌消除,然后分别加入0.01-0.03g硫酸镁和0.01-0.05g磷酸氢二钾; ②接种:待本步骤第一步①培养基冷却到29-31°C,然后接种1000g II级减负复合菌剂菌种;③发酵:把1000Og的菌水整体装进容器中,密封发酵,6-8天后,打开瓶口,闻到酸甜发酵成功,获得III级种子; C、规模化生产方法: (1)培养基: ①溶藻菌培养基:` 牛肉膏 1000-2000g,蛋白胨 4000-6000g,氯化钠 3000_7000g,水 Im3, ρΗ=7.5 ; ②减负复合菌剂培养基: 红糖 400000-600000g、磷酸氢二钾 1000_5000g、硫酸镁 1000_3000g、水 IOm3 ; (2)溶藻菌规模化发酵生产: 先用40~60°C的温水,将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,然后加入氯化钠,其中牛肉膏、蛋白胨和氯化钠以每立方米分别1000-2000g、4000-6000g、3000-7000g的比例在混合器中搅拌均匀,再放入1-1Om3的培养池中,加溶藻菌III级种子0.1-lm3,然后加井水至l_10m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养; (3)减负复合菌剂规模化发酵生产: 先用开水,温度控制在90-100°C,将红糖溶化,加井水500L,然后按每IOm3加入红糖400000-600000g,硫酸镁1000_3000g和磷酸氢二钾1000_5000g的量,加入红糖,硫酸镁和磷酸二氢钾;再放入10-20m3的培养池中,加减负复合菌III级种子l_2m3,然后加井水至10-20m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养; (4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装: 1)将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照体积比为3:7的比例混合; 2)产品用50L-lm3塑料桶包装; 3)抽样对产品按照企业标准进行检查,检查合格后贴上检验合格证; 所述的溶藻菌为肠杆菌菌株,保藏编号为=CCTCC N0.M204010 ; 所述的减负复合菌剂,其是由多种复合微生物组成,主要是以乳酸菌类、光合菌类、酵母菌类、丝状菌类、革兰氏阳性放线菌类复合在同一种液体中以活性状态共同存在。
CN201010588951.7A 2010-12-15 2010-12-15 一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法 CN102115725B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010588951.7A CN102115725B (zh) 2010-12-15 2010-12-15 一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010588951.7A CN102115725B (zh) 2010-12-15 2010-12-15 一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102115725A CN102115725A (zh) 2011-07-06
CN102115725B true CN102115725B (zh) 2014-03-12

Family

ID=44214651

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201010588951.7A CN102115725B (zh) 2010-12-15 2010-12-15 一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102115725B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105002110B (zh) * 2015-06-25 2018-09-11 北京致清源环保科技有限公司 复合微生物制剂及其在水华爆发水体处理中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563355A (zh) * 2004-03-27 2005-01-12 中国科学院水生生物研究所 一种肠杆菌及其制备方法和应用
CN101082029A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 净水菌的制备和修复水产养殖环境的方法
CN101607762A (zh) * 2009-07-09 2009-12-23 东莞圣源环保科技有限公司 河流水体生态修复方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101082028A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 调水菌的制备和修复水产养殖环境的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563355A (zh) * 2004-03-27 2005-01-12 中国科学院水生生物研究所 一种肠杆菌及其制备方法和应用
CN101082029A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 净水菌的制备和修复水产养殖环境的方法
CN101607762A (zh) * 2009-07-09 2009-12-23 东莞圣源环保科技有限公司 河流水体生态修复方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
叶建锋.第七章 第一节 EM在水处理中的研究.《废水生物脱氮处理新技术》.化学工业出版社,2006,166. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN102115725A (zh) 2011-07-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
St. Martin et al. Compost and compost tea: Principles and prospects as substrates and soil-borne disease management strategies in soil-less vegetable production
WO2016026237A1 (zh) 一种冬虫夏草寄主昆虫蝙蝠蛾的人工低海拔饲养方法
CN102100152B (zh) 一种蛹虫草子实体的人工培养方法及其培养基
CN103981102B (zh) Dse菌株24l-4及其在铁皮石斛生产上的应用
CN103627662B (zh) 一种花生慢生根瘤菌及其用途
CN102747017B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN102676398B (zh) 银杏内生真菌
CN1724481B (zh) 利用废弃菇渣生产微生物活性有机肥方法
CN1951197B (zh) 一种采用根瘤菌防治大豆根部病害的新方法
CN101875571B (zh) 增强型液体微生物有机肥料的制备方法
CN107446847A (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌gt11及其应用
CN102643148B (zh) 一种生物防病、防虫型花卉专用栽培基质及其制备方法
CN105462872B (zh) 一种复合微生态制剂及其制备方法
CN101985608B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN104651239B (zh) 一种促进齿瓣石斛种子萌发形成幼苗的菌株及其应用
CN102978132B (zh) 一种能防治番茄青枯病的微生物植物疫苗
CN101376605B (zh) 一种利用活菌发酵活化肥料的制备方法
Pugliese et al. Selection of antagonists from compost to control soil-borne pathogens
CN101967455B (zh) 防治小麦根部病害的解淀粉芽孢杆菌ea19及其制剂
CN103966149B (zh) 一种生活垃圾和污泥腐熟菌剂及其应用和所制腐熟基质
CN101507409A (zh) 抗病、抗线虫育苗基质及其生产方法
CN102533579B (zh) 一种产芽孢培养基及其优化过程与应用
CN104823714A (zh) 一种北冬虫夏草的规模化培育方法
CN102719382B (zh) 解淀粉芽孢杆菌株b-1619及其在防治茄科蔬菜土传病害中的应用
CN104805019B (zh) 一株能促进千年桐营养元素吸收的内生真菌

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
C06 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C10 Entry into substantive examination
GR01 Patent grant