CN102115725A - 一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法 - Google Patents

一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤:A、Ⅰ、Ⅱ级菌种培养:(1)培养基;(2)Ⅰ级种子培养;(3)Ⅱ级种子培养;B、Ⅲ级种子:(1)、溶藻菌Ⅲ级种子:(2)、减负复合菌剂Ⅲ级种子:C、规模化生产方法:(1)培养基:(2)溶藻菌规模化发酵生产;(3)减负复合菌剂规模化发酵生产;(4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装。方法易行,操作简便,降低了富营养化水体,控制了蓝藻水华爆发。该菌剂易于培养,成本低,适宜工厂化生产。本发明溶藻减负复合生物菌剂易于培养,成本低,适宜工厂化生产。对水体无污染。具有环境、社会效益。

Description

一种溶藻减负复合生物制剂的制备方法
技术领域
[0001 ] 本发明属于环保生物工程领域,更具体涉及一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方 法。该菌剂易于培养,适宜工业化生产,适用于降低富营养化水体、控制蓝藻水华爆发。
背景技术
[0002] 蓝藻是地球上最早出现的光合自养生物,在长期的进化过程中,这类生物发展了 一套独特的形态和生理生化机制,能够在各种不同生境中生衍,使其具有一定的竞争优势。 在环境条件适宜时,某些蓝藻能快速生长,当达到一定生物量时,这些藻类在水体表层大量 聚集,形成肉眼可见的藻类聚集物,即蓝藻水华。蓝藻水华引起的一系列环境和健康问题, 正受到全世界各国的高度重视。藻类过度繁殖是导致湖泊水环境恶化的关键环节,有害藻 类的过度增殖,尤其产毒素蓝藻给人类健康构成了潜在的威胁。针对我国湖泊面临的严重 富营养化及其灾害问题,在湖内污染源、流域点源与面源污染控制需要投入巨大资金且短 期内难以取得成效的情况下,探索浮游藻类生物量的控制、抑制“水华”发生、改善湖泊水 质的有效途径是非常必要的。藻类的控制技术可归结为物理方法、化学方法和生物方法。 物理方法主要是电磁场、机械除藻等,可作为蓝藻水华控制的辅助性措施,但处理能力有 限,局限于水处理工程应用。化学除藻的方法主要包括施用除草剂、杀藻剂及金属盐等。化 学药剂除藻技术虽有快速高效的优点,但会带来水体的二次污染问题,直接在作为饮用水 源的湖泊、水库等的应用受到限制或必须慎用。生物学控藻技术是利用藻类的天敌及其产 生的生长抑制物质对藻类的生长、繁殖进行抑制,从而达到控制藻类数量、防治富营养化 带来的各种危害,目前正处在研究发展的初期阶段。溶藻细菌(algae-lysing bacteria)
,作为水生生态系统生物种群结构和功能的重要组成部分,对维持藻的生物量平衡具有非 常重要的作用。溶藻细菌,作为水华防治的生物,已经引起越来越多人的关注。我国已经 成为水华的多发国度,其造成的环境和经济问题日益引起重视,寻求有效的水华防治途径 势在必行。复合微生物制剂是由多种有益微生物组合成,能促进水体中有机污染物分解,降 低B0D、C0D,净化水质等高效。本发明采用溶藻菌和复合微生物制剂相结合,制成的溶藻减 负复合生物制剂,喷施在湖泊、水库及河道等富营养化水体后,能调整水体生态环境,能效 地降低富营养化水体的营养成分;增加水体的溶氧量,促进水体中氮、磷、有机污染物的 分解,降低B0D、C0D,净化水质,消除环境恶臭;保持水体的生态平衡;从而达到控制富营 养化湖泊蓝藻水华发生的目的。
发明内容
[0003] 本发明的目的是在于提供了一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,方法易行, 操作简便,降低了富营养化水体,控制了蓝藻水华爆发。该菌剂易于培养,成本底,适宜工厂
化生产。
[0004] 为了达到上述的目的,本发明采取溶藻菌和减负复合菌分别生产,混合应用的技 术措施是:1、菌种来源:
A溶藻菌为专利菌种(专利号:ZL2004100U9324,菌种名为:肠杆菌;拉丁文是 Enterobacteriaceae. sp,保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心,保藏号为M204010。) B减负生物制剂是由多种复合微生物组成,主要是以乳酸菌类、光合菌类、酵母菌类、 丝状菌类、革兰氏阳性放线菌类等复合在同一种液体中以活性状态共同存在。
[0005] 一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤是:
其主要构思是:A、I级、II级菌种实验室培养;B、III级种子(母液扩大培养);C、规模化 生产。
[0006] 、I、II级菌种(实验室)培养:
(1)培养基:
①溶藻菌培养基:
牛肉膏l-5g、 蛋白胨8-12g、氯化钠3-7g、水1000ml、琼脂1. 5-2. 5%、 pH=7. 0-7. 8
②减负复合菌剂培养基:
红糖 80-120g、磷酸氢二钾 0. 01-0. 05g、硫酸镁和 0. 01-0. 03g、水 1000ml、 pH=6. 8-7. 4
(2) I级种子培养(试管斜面培养):
①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工 作台内的紫外灯同时打开,灭菌lh。
[0007] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行。
[0008] ③培养:菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养,温度控制在 25-¾ °C。
[0009] II级种子培养(三角瓶液体培养):
①无菌室消毒:同I级种子培养中的第一步①;
②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒过 的工作服和工作帽,接种前手先用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作,接种针或环必 须在酒精灯上烧红3次,才能进行接种,将试管斜面或在培养皿平板培养好的I级菌种,用 接种针和接种环,将菌种转接到三角瓶液体中,操作时接种物在酒精灯的火焰边进行,接种 完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶;
③培养:a、溶藻菌II级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养,温度控制在 25-29°C,如没有恒温摇床可以培养架上或生物培养箱内培养,每天应摇动2-3次为宜。B、 减负复合菌剂II级菌种接种后室温(20-25°C以下相同)静置培养。
[0010] ④II级菌种培养约5-7天后即可生长好,即可进行III级种子(母液扩大)培养。
[0011] 、III级种子(母液扩大培养):
(1)溶藻菌III级种子(母液扩大培养)
①培养基配制:先用40-60°C的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,加干净的井水,然后 加入氯化钠,其中按每升牛肉膏l-5g、蛋白胨8-12g、氯化钠3-7g的比列在混合器中搅拌均 勻,再分别装入25L的清洗干净的塑料壶中。
[0012] ②接种:待本步骤第一步①培养基融化后,冷却到^_31°C,再加入250_350mL II级溶藻菌菌种,然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎。
[0013] ③发酵:在壶口插上通气和出气管各一支,在观_321:条件下通气发酵培养。一 般5-7天后发酵完成,可以作为规模化生产的种子。
[0014] 减负复合菌剂III级种子(母液扩大培养):
①培养基配制:先烧开10000ml的水(温度控制在90-100°C),加800_1200g的红糖, 把红糖融化开,把红糖里面的有害菌消除。然后分别加0. 1-0. 3g硫酸镁和0. 2-0. 4g磷酸 氢二钾。
[0015] ②接种:待本步骤第一步①培养基融化后,冷却到^-31°C,然后接种IOOOg II级 减负复合菌剂菌种。
[0016] ③发酵:后把IOOOOg的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中,要密封 发酵,不能漏气。不要装的太满,在发酵过程中会产生气体,装满容易涨破塑料壶。6-8天 后,温度低于15°C要多发酵4-5天,使发酵时间达到10〜13天。打开瓶口,有气体产生。 闻到酸甜闻到就证明发酵成功。
[0017] C、规模化生产方法:
(1)培养基:
①溶藻菌培养基:
牛肉膏 1000-2000g 蛋白胨 4000-6000g 氯化钠 3000_7000g 水 1 m3 pH=7. 0-7. 8
②减负复合菌剂培养基:
红糖 400000-600000g 磷酸氢二钾 1000_5000g 硫酸镁 1000-3000g 水 10m3。 pH=6. 8-7. 4
(2)溶藻菌规模化发酵生产:
先用40-60°C的温水,将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,然后加入氯化钠,其中分别 以每方牛肉膏1000-2000g、蛋白胨4000-6000g和氯化钠3000_7000g的量在混合器中搅拌 均勻,再放入I-IOm3的培养池中,加溶藻菌III级种子(母液)0. 1-lm3,然后加井水至l_10m3, 最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般6-8天后即可。
[0018] 减负复合菌剂规模化发酵生产:
先用开水(温度控制在90-100°C)将400000-600000g红糖溶化,加井水500L,然后以 每10 m3加入红糖400000-600000g,硫酸镁1000-3000g和磷酸氢二钾1000_5000g的量, 在混合器中搅拌均勻,再放入10-20 m3的培养池中,加溶藻减负复合菌Ι-aii3,然后加井水 至10-20m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般6_8天后即可。
[0019] 溶藻减负复合生物制剂配比与包装:
1)将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照3 :7的比例混合。然后进行收获与包装。
[0020] 2)产品用50L_lm3塑料桶包装。贴上带有产品说明书和生产日期的标签。
[0021] 3)抽样对产品按照企业标准进行检查,检查合格后贴上检验合格证。
[0022] 本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:
方法易行,操作简单,无污染,安全性高。细菌溶解蓝藻是位于实际应用的前沿。相比 杀蓝藻的如硫酸铜等化学物质具有明显的优点。使用细菌清除蓝藻不会带来第二次污染。在较大的水体中形成一种新的生态平衡。溶藻减负复合生物菌剂制按1/10000浓度喷洒在 蓝藻爆发初期的湖泊、水库及河道等富营养化水体后,能调整水体生态环境,能效地降低富 营养化水体的营养成分;增加水体的溶氧量,促进水体中氮、磷、有机污染物的分解,降低 BOD, COD,净化水质,消除环境恶臭;保持水体的生态平衡;从而达到控制富营养化湖泊等 水体蓝藻水华发生的目的。本发明溶藻减负复合生物菌剂易于培养,成本底,适宜工厂化生 产。对水体无污染。具有环境、社会效益。
附图说明
[0023] 图1为一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法方框示意图
其中:溶藻菌原种A、减负复合菌菌种B、I 一III级种子(溶藻菌)C、I 一III级种子(减 负复合菌)D、发酵池大规模生产E、发酵池大规模生产F、溶藻减负复合生物制剂G、富营养 化湖泊应用或其他水体应用H。
具体实施方式
[0024] I、II级菌种(实验室)培养:
菌种分为母种(I级种)、原种(II级种)。
[0025] I级菌种:将纯菌丝体或孢子在试管培养基中繁殖而成.可以繁殖原种,也适宜 菌种保藏。
[0026] II级菌种:母种菌丝在固体培养基上繁殖而成.这一过程增强菌丝对培养环境的 适应性,又起到扩繁的作用.
1)培养基: ①溶藻菌培养基:
牛肉膏l-5g 蛋白胨8-12g 氯化钠3-7g 水IOOOml琼脂1. 5-2% pH= pH=7. 0-7. 8
②减负复合菌剂培养基
红糖 80-120g 磷酸氢二钾 0.01-0. 05g 硫酸镁和 0. 01-0. 03g 水 1000ml pH=6. 8-7. 4
一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤是: 溶藻菌原种A :
①称量:按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏l_5g、蛋白胨8-12g、氯化钠3-7g 放入烧杯中。牛肉膏l_5g常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水(40°C〜 600C ) 500mL溶化后倒入烧杯。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。
[0027] ②溶化:在上述步骤①的烧杯中可先加入少于500 mL的水量,用玻棒搅勻, 然后,在石棉网上加热500°C使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积 1000mL。如果配制固体培养基,将称好的琼脂放入已溶化的药品中,再加热到大概300°C溶 化,在琼脂溶化的过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。
[0028] ③调pH至7. 6在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值,如果pH 偏酸,用滴管向培养基中逐滴加入lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值, 直至PH达7. 6。反之,则用lmol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响培养基内各离子的浓度。
[0029] ④分装:将配制的培养基分装入试管内,分装过程中注意不要使培养基沾在管 口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。试管装量不超过管高的1/5。
[0030] ⑤加塞:培养基分装完毕后,在试管口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养 基内而造成污染,并保证有良好的通气性能。
[0031] ⑥包扎:加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭 菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。
[0032] ⑦灭菌:灭菌在菌种的培养中,是十分重要的一个环节。溶藻菌种转接、溶藻菌 培养基制备,任何一个环节都必须使用灭菌的器械,否则都会造成杂菌污染。培养所需要的 三角瓶、试管、培养皿,灭菌前洗净,三角瓶可以用牛皮纸内衬粗滤纸来包住瓶口,用棉线缠 紧;或者自做棉塞,外部再加上牛皮纸包住;试管必须和棉塞或者试管塞一起用牛皮纸包 好灭菌。培养皿可以5-10个一起用牛皮纸包好灭菌。移液管、滴管、接种环都可以分别用 牛皮纸包好,在高压灭菌锅内,以1.05kg/cm2 (15磅/英寸2),121. 3°C,30分钟高压蒸汽 灭菌。所有灭菌后的器皿、培养基只能在超净台上打开使用。将上述培养基如因特殊情况 不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。
[0033] ⑧搁置斜面:将灭菌的试管培养基冷至50°C左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁 置的斜面长度以不超过试管总长的三分之一为宜。
[0034] ⑨无菌检查:将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24— 48小时,以检查灭菌 是否彻底。得到无菌的溶藻菌培养基。
减负复合菌菌种B:
减负复合菌是一种新型的复合微生物制剂,呈棕色半透明液体,PH值在3. 5〜4. 5之 间,不含任何有害物质,无毒副作用,不污染环境。主要是乳酸菌类、光合菌类、酵母菌类、丝 状菌类、革兰氏阳性放线菌类等复合在同一种液体中以活性状态共同存在。目前世界上已 有一百多个国家和地区,在生活垃圾、污水处理、治理河流和湖泊甚至日常生活、保健医疗 等领域广泛应用。它可以降低水体富营养,抑制腐败病原菌的滋生,消除环境恶臭,净化水 质,循环利用资源等等。
[0035] I 一III级种子(溶藻菌)C : I级种子培养(试管斜面培养):
①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工 作台内的紫外灯同时打开,灭菌lh。
[0036] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消 毒过的工作服和工作帽,接种前手先用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作。接种针或 环必须在酒精灯上烧红3次,才能进行接种;用接种针和接种环,将菌种挑到斜面试管和平 板上划线接种,操作时接种物应在酒精灯的火焰边进行。接种完毕后立即用棉塞将试管封 口或立即盖上培养皿盖。
[0037] ③培养:菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养,温度控制在25_29°C, 每天应摇动2-3次为宜。菌种要定期更换,(试管)斜面和平板三个月换一次;液体试管或 小三角瓶夏季保种20天左右,冬季一个月换一次培养基。
[0038] II级种子培养(三角瓶液体培养):①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超 净工作台内的紫外灯同时打开,灭菌lh。
[0039] ②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消 毒过的工作服和工作帽,接种前手先用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作。接种针或 环必须在酒精灯上烧红3次,才能进行接种。将试管斜面或在培养皿平板培养好的I级菌 种,用接种针和接种环,将菌种转接到三角瓶液体中。操作时接种物应在酒精灯的火焰边进 行,接种完毕后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶。
[0040] ③培养:II级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养,温度控制在25-29°C,如 没有恒温摇床可以培养架上或生物培养箱内培养,每天应摇动2-3次为宜。
[0041] ④II级菌种培养约5-7天后即可生长好,生长好的II级菌种可以进行III级种子 (母液扩大)培养。
III级种子(母液扩大培养):
①先用温水(40°C-6(TC)将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠分别溶化,按照IOOOml井水加入 l_5g牛肉膏、8-12g蛋白胨、3-7g氯化钠的比例进行配置,在Im3的混合器中搅拌均勻,再 分装入25L的清洗干净的塑料壶中。
[0042] ②待上述培养基融化后,冷却到四_311:,在再加入250— 350ml溶藻菌菌种。
[0043] ③然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎,在壶口插上通气和出气管 各一支,在条件下通气发酵培养。
[0044] ④条件适宜时一般5天左右发酵完成,可以作为规模化生产的种子。
[0045] I 一III级种子(减负复合菌剂)D I级种子培养
1)培养工具的消毒方法
1.加热消毒法:利用高温杀死微生物的方法。
[0046] (1)直接灼烧:此法可直接把微生物烧死,灭菌彻底,但只适用于小型金属或玻璃 工具的消毒。
[0047] (2)煮沸消毒:一般煮沸5〜10分钟,适用于小型容器、工具的消毒。
[0048] (3)烘干箱消毒:亦称为恒温干燥箱消毒法。
[0049] 2.化学药品消毒法:适用在批量培养中,大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。
[0050] (1)酒精:体积分数为75%的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容 器、工具的表面涂抹,10-12分钟后,清水冲洗即可。
[0051] (2)高锰酸钾:按300ppm配成高锰酸钾溶液,把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中 浸泡5-6分钟,取出,再用清水冲洗2次〜3次即可。
[0052])培养方法
培育室及用具:暗室一间。5L的塑料桶(最好用红色)、量筒、PH试纸。
[0053] 原料:复合菌种、培养基。
[0054] 复合菌培养液配制比例:复合菌种:培养基:水=10 :1 :90。
[0055] 生产工艺流程:
(1)将塑料桶、量筒等用具经灭菌消毒处理备用。
[0056] (2)在每个桶中放入培养基,倒入无菌的35°温水(深井水),搅拌直到融化,然后加入复合菌种搅拌1-5分钟,其中加入培养基、无菌水和复合菌种的重量比为1:90:10,最 后盖上桶盖、半密封;将桶置于暗室内让其在半密封状态下发酵。
[0057] (3)室温保持在25—35°C,发酵进行到第2天时,将桶摇晃或用经消毒的塑料棒搅 拌2-5分钟。第三天时水面会出现泡沫,再搅拌2-5分钟促进有益微生物的生成;第8天 时,泡沫慢慢消失,水面浮起一片白色的悬浮物;到第10天时,发酵结束。
[0058] (4)复合菌种在25— 35°C之间,8-10天即成;在15_25°C之间,13-15天即成, 15°C以下需17-19天才成,培育的复合菌符合以下规定方可使用:①其颜色为棕或黄褐色; (有较浓的甜酸味或酸味;⑧用量筒取少量倒人矿泉水瓶中,拧紧瓶盖并摇晃几下,产生 大量泡沫;④测试PH值在3. 5以下
II级种子培养
取上述一级复合菌种一级种子活菌制剂10g、红糖IOOg (红糖先用温度控制在 90-100°C的热开水溶化),加入IOOOg无菌的井水中。注:(先把水加热到90-100° C后加 入红塘,而后继续加热5分钟。冷却到40° C时加入一级种子),密闭发酵(35° C—37° C 温度)3-5天,打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。可以作为液体III级菌种使用。
[0059] III级种子(母液扩大培养):
①先用开水(温度控制在90-100°C)10L,加IOOOg的红糖,把红糖融化开,把红糖里面 的有害菌消除。然后分别加入0. 01-0. 03g硫酸镁和0. 01-0. 05g磷酸氢二钾。
[0060] ②待上述培养基融化后,冷却到^_31°C,在再加入IOOOg减负复合菌种。
[0061] ③然后把IOOOOg的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中,要密封发 酵,不能漏气。不要装的太满,在发酵过程中会产生气体,装满容易涨破塑料壶。
[0062] ④发酵7-12天左右,如果温度低于15°C要多发酵几天,大概15天,打开瓶口,有 气体产生。闻到酸甜闻到就证明发酵成功。
[0063] ⑤发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完,就用小瓶子分装密封保存。使 用一瓶打开一瓶。
[0064] ⑥菌种的储存:减负复合菌要求常温避光条件下,25度左右保存最为适宜。底部 稍有沉淀或浮有些微白沫均属正常,若出现腐臭即已变质,勿用。
[0065] 发酵池大规模生产E、发酵池大规模生产F :
1)培养基:
①溶藻菌培养基:
牛肉膏 1000-2000g 蛋白胨 4000-6000g 氯化钠 3000_7000g 水 1 m3 pH=7. 0-7. 8
②减负复合菌剂培养基
红糖 400000-600000g 磷酸氢二钾 1000_5000g 硫酸镁 1000-3000g 水 IOm3 pH=6. 8-7. 4
2)溶藻菌规模化发酵生产:
先用40°C -60°C的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,加井水500L,然后加入 氯化钠,其中牛肉膏、蛋白胨和氯化钠以每方分别1000-2000g、4000-6000g、3000-7000g在 混合器中搅拌均勻,再放入10 m3的培养池中,加溶藻菌III级种子(母液)lm3,然后加井水至 IOm3,最后用塑料薄膜密封,28-32 V发酵培养。一般7天左右即可。[0066] 步骤1原料准备:牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、干净的水(深井水)
步骤2 发酵池:10m3 ;配制(消毒液跟整个容积比)5% “84”消毒液,喷洒在发酵池壁 和底部,24h后,用干净的深井水清洗发酵池。然后把发酵池灌入50-70%干净的深井水。
[0067] 步骤3 培养基配制:①取0. 8-1 m3干净的深井水加热融化氯化钠;②取5L干 净的温水(40°C -60°C)水2份,分别溶化牛肉膏和蛋白胨;③溶化后营养液分别倒进步骤2 中的发酵池内。
[0068] 步骤4 接种:溶藻菌种:水按1 :10比例加入发酵池中,均勻搅拌菌液,同时用 干净的深井水加入到发酵池中IOm3刻度,然后用塑料薄膜密封发酵池。
[0069] 步骤5温度控制在观一321:之间发酵7天左右。如果温度在23— 25°C之间,发 酵时间为12天。(这五步就是整个溶藻菌剂的生产过程)。
[0070])减负复合菌剂规模化发酵生产:
先用开水(温度控制在90-10(TC)将红糖溶化,加井水500L,加入硫酸镁和磷酸氢二 钾,其中以每IOm3加入红糖500000g,硫酸镁1000_3000g和磷酸氢二钾1000_5000g的量, 在混合器中搅拌均勻在混合器中搅拌均勻,再放入IOm3的培养池中,加减负复合菌lm3’,再 加井水至10 m3刻度,其中减负复合菌主要菌种包括芽孢菌、酵母菌、乳酸菌等有益菌类。, 然后加井水至10m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养。一般7天左右即可。
[0071] 步骤1 原料准备:红糖400000-600000g,硫酸镁1000-3000g,磷酸氢二钾 1000-5000g,无菌干净的水(深井水)水IOm3
步骤2发酵池:10-15 m3 ;配制5% (消毒液跟整个容积比)“84”消毒液,喷洒在发酵 池壁和底部,24h后,用干净的深井水清洗发酵池。然后把发酵池灌入50-70%干净的深井 水。
[0072] 步骤3 培养基配制:①取0. 8-lm3干净的深井水加热融化400000-600000g红 糖,②取IOL干净的深井水2份,分别溶化硫酸镁1000-3000g,磷酸二氢钾1000-5000g ;③ 溶化后营养液分别倒进步骤2中的发酵池内。
[0073] 步骤4 接种:减负复合菌菌种:水按1 :10比例加入发酵池中,均勻搅拌菌液, 同时用干净的深井水加入到发酵池中IOm3刻度,然后用塑料薄膜密封发酵池。(说明:如果 是15 m3的发酵池,营养液和菌种增加1. 5倍。)
步骤5温度控制在观一321:之间发酵7天左右。如果温度在23—25°C之间,发酵时 间为12天。
[0074] 步骤6 5天后打开容器测试PH值,PH值在3.5 — 5范围内,即发酵成功,也可以 取些发酵原液口尝,酸香后即发酵成功。一般发酵时间为7天后效果更好。(这六步就是整 个减负复合菌剂的生产过程)
溶藻减负复合生物制剂G :
4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装:
1)将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照3 :7的比例混合。然后进行收获与包装。
[0075] 2)产品用50L塑料桶包装。将采收泵排气阀打开,注入发酵好的溶菌减负复合生 物制剂产品到包装桶内,发酵液注到50L刻度时关闭阀门,立即将桶盖盖上拧紧。
[0076] 3)用抹布檫干包装桶上的发酵液,贴上带有产品说明书和生产日期的标签。
[0077] 4)抽样对产品按照企业标准进行检查,检查合格后贴上检验合格证。[0078] 富营养化湖泊应用或其他水体应用H : 5)应用:
溶藻减负复合生物制剂主要用于控制富营养化水体中,水华蓝藻的发生。
[0079] 1)细菌的喷洒:成品按照一定浓度(1/10000)喷洒在蓝藻发生的湖泊、水库、河 道、池塘等富营养化水体中。
[0080] 2监控:建立的监控条件和标准为是蓝藻水体的颜色的变化,叶绿素含量下降,蓝 藻优势度减少,水体富营养化程度降低、水体的透明度上升。
[0081] 用途说明:本发明与现有的除藻技术相比,具有以下优点:方法容易,操作简单, 无污染,安全性高。细菌溶解蓝藻是位于实际应用的前言。相比杀蓝藻的如硫酸铜等化学 物质具有明显的优点。使用细菌清除蓝藻不会带来第二次污染。在较大的水体中形成一种 新的生态平衡。

Claims (1)

1. 一种溶藻减负复合生物菌剂的制备方法,其步骤是:A、I、II级菌种培养:(1)培养基:①溶藻菌培养基:牛肉膏l-5g、 蛋白胨8-12g、氯化钠3-7g、水1000ml、琼脂1. 5-2. 5%、 pH=7. 0-7. 8 ;②减负复合菌剂培养基:红糖 80-120g、磷酸氢二钾 0. 01-0. 05g、硫酸镁和 0. 01-0. 03g、水 1000ml、 pH=6. 8-7. 4 ;(2) I级种子培养:①无菌室消毒:接种应在无菌室内的超净工作台上进行,接种前将无菌室内和超净工 作台内的紫外灯同时打开,灭菌;②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行;③培养:菌种接种后应放在培养架上或生物培养箱内培养,温度控制在;(3) II级种子培养:①无菌室消毒:同I级种子培养中的第一步①;②接种:试管、平板和三角瓶接种应在超净工作台内进行,操作人员必须穿戴消毒 过的工作服和工作帽,接种前手用体积分数75%的酒精消毒后再开始操作,接种针或环必 须在酒精灯上烧红3次,进行接种,将试管斜面或在培养皿平板培养好的I级菌种,用接种 针和接种环,将菌种转接到三角瓶液体中,操作时接种物在酒精灯的火焰边进行,接种完毕 后立即用棉塞将试管封口或立即盖上三角瓶;③培养:a、溶藻菌II级菌种接种后应放在恒温摇床上振动培养,温度控制在 25-29°C,每天摇动2-3次;B、减负复合菌剂II级菌种接种后室温静置培养;④II级菌种培养5-7天后,进行III级种子培养;B、III级种子:(1)、溶藻菌III级种子:①培养基配制:先用40-60°C的温水将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,加井水,然后加入氯 化钠,其中按每升分别将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠的比列在混合器中搅拌均勻,再分别装入 25L的清洗干净的塑料壶中;②接种:待本步骤第一步①培养基融化后,冷却到^_31°C,再加入250-350mL II级溶 藻菌菌种,然后把接种好的菌水塑料壶用棉塞或牛皮纸包扎;③发酵:在壶口插上通气和出气管各一支,在观_321:条件下通气发酵培养,5-7天后 发酵完成,生产种子;(2),减负复合菌剂III级种子:①培养基配制:先烧开10000ml的水,温度在90-100°C,加IOOOg的红糖,把红糖融化 开,把红糖里面的有害菌消除,然后分别加入0. 01-0. 03g硫酸镁和0. 01-0. 05g磷酸氢二 钾;②接种:待本步骤第一步①培养基融化后,冷却到^_31°C,然后接种IOOOg II级减负 复合菌剂菌种;③发酵:后把IOOOOg的菌水整体装进容器中,密封发酵,6-8天后,打开瓶口,闻到酸 甜发酵成功;C、规模化生产方法:(1)培养基:①溶藻菌培养基:牛肉膏1000-2000g 蛋白胨4000-6000g 氯化钠②减负复合菌剂培养基: 红糖 400000-60000g、磷酸氢二钾 1000-5000g、(2)溶藻菌规模化发酵生产: 先用40〜60°C的温水,将牛肉膏、蛋白胨分别溶化,然后加入氯化钠,其中牛肉膏、蛋白胨和氯化钠以每方分别1000-2000g、4000-6000g、3000-7000g在混合器中搅拌均 勻,再放入I-IOm3的培养池中,加溶藻菌III级种子0. I-Im3,然后加井水至l_10m3,最后用塑 料薄膜密封,28-32°C发酵培养;(3)减负复合菌剂规模化发酵生产:先用开水,温度控制在90-100°C,将红糖溶化,加井水500L,然后按每10 m3加入红糖, 硫酸镁和磷酸氢二钾的量,在混合器中搅拌均勻,再放入10-20m3的培养池中,加溶藻减 负复合菌l_2m3,然后加井水至10-20m3,最后用塑料薄膜密封,28-32°C发酵培养;(4)溶藻减负复合生物制剂配比与包装:1)将发酵生产好的溶藻菌和减负复合菌按照3 :7的比例混合;2)产品用50L-lm3塑料桶包装;3)抽样对产品按照企业标准进行检查,检查合格后贴上检验合格证。3000-7000g 水 Im3 pH=7. 5 ; 硫酸镁 1000-3000g 、水 IOm3 ;
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105002110A (zh) * 2015-06-25 2015-10-28 北京致清源环保科技有限公司 复合微生物制剂及其在水华爆发水体处理中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563355A (zh) * 2004-03-27 2005-01-12 中国科学院水生生物研究所 一种肠杆菌及其制备方法和应用
CN101082029A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 净水菌的制备和修复水产养殖环境的方法
CN101082028A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 调水菌的制备和修复水产养殖环境的方法
CN101607762A (zh) * 2009-07-09 2009-12-23 东莞圣源环保科技有限公司 河流水体生态修复方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1563355A (zh) * 2004-03-27 2005-01-12 中国科学院水生生物研究所 一种肠杆菌及其制备方法和应用
CN101082029A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 净水菌的制备和修复水产养殖环境的方法
CN101082028A (zh) * 2006-06-01 2007-12-05 上海泓宝绿色水产科技发展有限公司 调水菌的制备和修复水产养殖环境的方法
CN101607762A (zh) * 2009-07-09 2009-12-23 东莞圣源环保科技有限公司 河流水体生态修复方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《废水生物脱氮处理新技术》 20060331 叶建锋 第七章 第一节 EM在水处理中的研究 化学工业出版社 166 , *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105002110A (zh) * 2015-06-25 2015-10-28 北京致清源环保科技有限公司 复合微生物制剂及其在水华爆发水体处理中的应用
CN105002110B (zh) * 2015-06-25 2018-09-11 北京致清源环保科技有限公司 复合微生物制剂及其在水华爆发水体处理中的应用

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