CN102068653A - 一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物的制备方法，特别是一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法。包括寒水石(煅制)、诃子(去核)、配料、粉碎(研磨)、过筛、混合、灭菌、制粒、干燥、总混、制作成型几个步骤。本发明工艺简单，操作方便，制得的胶囊制剂药效好，适于推广应用。

Description

一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法 

技术领域

本发明涉及一种药物的制备方法，特别是一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法。 

背景技术

目前世界各地各种类型肝病的发病率较高，尤其在发展中国家。每年有超过50万人患病毒性肝炎、酒精性肝炎、肝硬化及肝癌引起的肝区疼痛、肝肿大，据估计目前世界上治疗肝病药物有500种之多，但至今尚无一种能真正根治的。不少肝病患者由于得不到有效的药物治疗，由肝区疼痛及肝肿大发展成结节性肝硬化，有的慢性肝区疼痛及肝肿大长期持续不愈，有些慢性肝区疼痛及肝肿大进一步恶化成肝癌。肝癌患者的肝炎和肝硬化均发生在肝癌之前，说明肝区疼痛及肝肿大治疗的重要性。它不仅能使失去劳动力的肝病患者有所恢复，而且对预防肝癌起积极有效的作用，减少肝癌发病率。肝郁气滞证是慢性肝病常见的证候之一，多因情志伤肝，肝气郁结，疏泻失职，既可横逆犯脾也可气滞血瘀，常表现为肝区作胀作痛，脘腹痞胀、纳差、乏力，可影响病情及患者对治疗的依从性。因此研究确有疗效的肝病药物是当务之急。2003.01.01，中国专利局公开了一种名为“治疗肝病的药物”的发明专利(公告号：CN1387908)，其原料的重量比为：葛根25-45，薄荷20-50，白扁豆20-35，益智仁5-25，陈皮10-35，砂仁5-30。将砂仁、白扁豆、益智仁、陈皮、葛根加工成细粉，将薄荷浸泡制取上清液，将细粉、上清液混合，加入乙醇浸提，制成浸膏半成品再制成胶囊或片剂或冲剂或水剂。该方法制得的药物对肝病临床效果不佳，同时工艺复杂，不适于推广。 

发明内容

本发明为解决现有技术的上述不足，提供一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法，本发明工艺简单，操作方便，所得制剂药效好，适于推广应用。 

为实现上述技术效果，本发明采用如下技术方案： 

一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：具体包含如下步骤： 

a、煅制寒水石：将寒水石砸成小块，置于炉火上或大锅内，煅至酥脆或红透时，取出，放凉，碾碎至10mm以下。 

b、诃子去核：取净诃子，用水将其闷润后去核，干燥。 

c、配料、粉碎过筛：按重量份数计，取寒水石(煅制)92.5～117、檀香7.4～9.3、降香14.8～18.7、沉香9.3～11.7、诃子(去核)18.5～23.4、豆蔻3.7～4.7、红花9.3～ 11.7、天竺黄7.4～9.3、肉豆蔻3.7～4.7、草果3.7～4.7、余甘子14.8～18.7、石榴子11.1～14.0、止泻木子5.6～7.0、荜茇7.4～8.3、木香7.4～9.3、甘青青兰14.8～18.7、獐牙菜1.5～1.9、巴夏嘎9.3～11.7、绿绒蒿14.8～18.7、波棱瓜子7.4～9.3、榜嘎14.8～18.7配料后粉碎，过80目筛； 

d、将体外培育牛黄及人工麝香分别单独研磨细粉，过80目筛。 

e、混匀：按c的重量份数计，取经d处理后的体外培育牛黄1.85～2.34、人工麝香0.93～1.17，并将其与c过筛后的物料，采用等量递增法进行混匀，时间30～45min； 

f、将经e混匀后的物料进行灭菌处理； 

g、制粒：将经f灭菌后的物料，采用湿法制粒，并用CT-C-III热风烘箱机在50℃～60℃环境下干燥4～6小时，干燥后水分小于8％； 

h：总混：将经g制粒干燥后的物料进行总混，时间10～20min； 

i、成型：将总混后的物料根据需要制得成品。 

优选的，所述步骤c中按重量份数计，取寒水石(煅制)100～110、檀香8～9、降香16～18、沉香10～12、诃子(去核)20～22、豆蔻4～5、红花10～12、天竺黄8～9、肉豆蔻4～5、草果4～5、余甘子16～18、石榴子12～14、止泻木子6～8、荜茇8～9、木香8～9、甘青青兰16～18、獐牙菜1.6～1.8、巴夏嘎10～12、绿绒蒿16～18、波棱瓜子8～9、榜嘎16～18、体外培育牛黄2～2.3、人工麝香1～1.1。 

所述步骤e中等量递增法是指先取量少组分，加入等量的量大组分，再取与混合物等量的量大组分混合均匀，如此倍量增加，直至全部混合均匀，色泽一致的混合方法。 

所述步骤g中的湿法制粒具体为将经e混匀后的物料先在高效湿法制粒机中预混，10～20分钟后，加入粘合剂进行搅拌，制成软材，后通过整粒机过筛整粒，形成工艺要求所需要的湿颗粒。 

所述步骤i中的成型可以为胶囊剂，也可以制为片剂、颗粒剂、分散剂。 

本发明所述寒水石别名凝水石、水石、鹊石，拉丁名Calcitum，Gypsum Rubrum。为硫酸盐类矿物的天然晶体。性辛、咸，寒。归心、胃、肾经。功能清热泻火，利窍，消肿。 

檀香为檀香科植物檀香Santalum album L.树干的心材。性味辛、温。归脾、胃、心、肺经。功能行气温中，开胃止痛。 

降香为豆科植物降香Dalbergia odorifera T.Chen树干和根的干燥心材。性味辛、苦、微温。归肝、脾经。功能行气活血，止痛，止血。 

沉香为瑞香科植物白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg含有树脂的木材，性味辛、苦、微温。归脾、胃、肾经。功能行气止痛，温中止呕，纳气平喘。用于胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，肾虚气逆喘急。 

诃子(去核)为使君子科植物诃子Terminalia chebula Retz.或绒毛诃子Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果实。性味苦、酸、 涩、平。归肺、大肠经。功能涩肠敛肺，降火利咽。 

豆蔻为姜科植物白豆蔻Amomum kravanh Pierre ex Gagnep.或爪哇白豆蔻Amomumcompactum Soland ex Maton的干燥成熟果实。性味辛、温。归肺、脾、胃经。功能化湿消痞，行气温中，开胃消食。用于湿浊中阻，不思饮食，湿温初起，胸闷不饥，寒湿呕逆，胸腹胀痛，食积不消。 

红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。性味辛、温。归心、肝经。功能活血通经，散瘀止痛。 

天竺黄为禾本科植物青皮竹Bambusa textilis MeClure或华思劳竹Schizostachyum chinese Rendle等杆内的分泌液干燥后的块状物。性味甘、寒。归心、肝经。功能清热豁痰，凉心定惊。 

肉豆蔻为肉豆蔻科植物肉豆蔻Myristica fragrans Houtt.的干燥种仁。性味辛、温。归脾、胃、大肠经。功能温中行气，涩肠止泻。用于脾胃虚寒，久泻不止，脘腹胀痛，食少呕吐。 

草果为姜科植物草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire的干燥成熟果实。性味辛、温。归脾、胃经。功能燥湿温中，除痰截疟。 

余甘子系藏族习用药材。为大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实。性味甘、酸、涩、凉。归肺、胃经。功能清热凉血，消食健胃，生津止咳。用于血热血瘀，消化不良，腹胀，咳嗽，喉痛，口干。 

荜茇为胡椒科植物荜茇Piper longum L.的干燥近成熟或成熟果穗。性味辛、热。归胃、大肠经。功能温中散寒，下气止痛。 

木香为菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根。性味辛、苦、温。归脾、胃、大肠、三焦、胆经。功能行气止痛，健脾消食。用于胸脘胀痛，泻痢后重，食积不消，不思饮食。 

体外培育牛黄以牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液，加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成。功能清心，豁痰，开窍，凉肝，息风，解读。 

人工麝香性味辛、温。归心、脾经。功能开窍醒神，活血通经，消肿止痛。 

波棱瓜子为葫芦科植物波棱瓜Herpetospermum pedunculosum(Sex.)Baill.的干燥种子。性味寒，苦。功能泻肝火，胆热，解毒。用于治疗赤巴病，肝病，胆病以及消化不良。 

止泻木子为夹竹桃科植物止泻木Holarrhena antidysenterica Wall.ex A.DC.的干燥种子。性味苦、涩，寒。功能清热，利胆，止泻。用于赤巴病，肝胆病，胃肠热病，腹泻，痢疾。 

甘青青兰为唇形科植物甘青青兰Dracocephalum tanguticum Maxim.的干燥地上部分。性味甘、苦，寒。功能清肝热，止血，愈疮，干黄水。用于肝、胃热，黄水类病，血症，疮口不愈。幼苗用于腹水，浮肿。 

石榴子为安石榴科植物安石榴Punica granatum L.的干燥种子。性味酸、甘，温、润。功能主治培根寒症，胃寒症及一切胃病。 

绿绒蒿为罂粟科植物全缘绿绒蒿Meconopsis integrifolia(Maxim.)Franch.及五脉绿绒蒿Meconapsis quintuplinervia Regel、长叶绿绒蒿Meconopsislancifolia(Fra-nch.)Franch.等的干燥全草。性味甘、涩，凉。功能清热，利尿，消炎，止痛。 

獐牙菜为龙胆科植物印度獐牙菜Swertia chirayita(Roxb.ex Flemi)Karsten干燥全草。性味苦，凉、糙。功能清肝利胆，退诸热。 

榜嘎为毛茛科植物船形乌头Aconitum naviculare stapf.或Aconitumtanguticum(Maxim.)Stapf的干燥全草。性味苦、凉。功能清热解毒。 

巴夏嘎为玄参科植物毛果婆婆纳Veronica eriogine H。WinKl.等同属近缘植物的干燥全草。性味苦、寒。功能清热、愈疮、生肌、止血。 

本发明中檀香、降香、沉香、豆蔻、肉豆蔻、草果、木香、荜茇行气止痛；人工麝香、红花活血通经，止痛；寒水石(煅制)、余甘子、天竺黄、诃子(去核)、獐牙菜、甘青青兰、巴夏嘎、绿绒蒿、波棱瓜子、榜嘎、体外培育牛黄、止泻木子清热解毒，凉血热；石榴子主治培根寒症；全方合用，清热解毒，凉血热，化培根痰湿，止痛。本发明以纯天然藏药植物为原料，不添加任何辅料，对人体没有任何副作用，且能有效提高人体生物利用度，提高人体免疫力。 

下面通过临床实验对比本发明制得的胶囊制剂和现有散剂的功效。 

1材料与方法 

1.1病例收集45例患者均来自本院门诊，均符合1991年中国中医药学会肝病专业委员会修订的慢性乙肝辨证分型标准，属肝郁气滞证。主症包括肝区胀闷、肝区疼痛、心情郁闷，次症有脘腹痞胀、纳差、乏力、头晕，具有主症中一项及次症两项者即可诊断。其中男32例，女13例；平均年龄36.6岁，最大55岁，最小21岁；病情属轻度者33例，中度12例。两组具有可比性。 

1.2分设两组治疗组30例，对照组15例。 

1.3治疗方法治疗组予本发明的胶囊制剂，1次4粒，1日2次，口服：对照组予现有散剂，1次1g，1日2次，口服。两组均以2周为1个疗程，病情发生变化时及时记录，2周结束时作出疗效判断。 

1.4观察项目及指标症状、肝功能。症状按无、轻、中、重分别计分0，1，2，3分。 

1.5疗效评定标准显效：自觉基本症状消失，或治疗后积分下降80％以上，肝功能复常； 

有效：觉基本症状减轻，或治疗后积分下降50％以上，肝功能改善；无效：自觉无明显变化，肝功能未改善；恶化：自觉症状加重，肝功能进一步异常。 

2结果 

2.1症状治疗后两组各症状均有较明显的改善，其中以肝区胀闷、肝区疼痛、脘腹痞胀改善较明显。详见表1。 

表1症状改善情况 

表2两组治疗前后证候积分比较(-X，-s) 

2.2肝功能治疗后两组肝功能有一定改善，但治疗前后无显著性差异(P＞0.05)。详见表3。 

表3两组肝功能变化情况(X-，-S) 

2.3疗效治疗后两组疗效均较为满意，治疗组显效4例，有效18例，无效6例，恶化2例，总有效率73.33％对照组显效2例，有效7例，无效5例，恶化1例，总有效率60％。两组间比较无显著性差异(P＞0.05)。 

为表明本发明药物制剂对肝病的治疗效果，对本发明做一系列分析及对比实验分别如下： 

本制剂对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大治疗作用的验证： 

对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大预防和治疗作用，可以通过动物实验分别在以下多方面得到证实，具体内容及过程如下： 

实验动物：清洁级wistar雄性大鼠，210±10g(四川省医学科学院医学实验动物中心提供)。 

药品与试剂：40％四氯化碳菜子油溶液(4℃保存备用)，分析纯四氯化碳由天津市化学试剂一厂生产，菜子油为市售精装人体食用成品油；0.9％医用生理盐水系四川科伦药业股份有限公司生产，批号H 51021157；以及根据本发明制得的制剂；白蛋白、球蛋白、丙氨酸氨基转氨酶、天门冬氨酸氨基转氨酶测定试剂盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供；透明质酸测定试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。 

实验方法：大鼠适应5天后，随机分为对照组(11只)，模型组(75只)，大剂量组(15只)，小剂量组(15只)；前两周每2天的上午除对照组外，其余各组按5ml/kg皮下注射40％四氯化碳菜子油溶液，以后每2天的上午注射剂量改为3ml/kg，对照组以等剂量医用生理盐水代替四氯化碳溶液；各组注射同日的下午，对照组和模型组按0.33ml/kg皮下注射生理盐水，大、小剂量组分别按0.25、0.125g/kg喂服；除对照组饲喂自来水和普通标准饲料外，其余各组饮用10％的乙醇水(体积比)，且前两周饲喂高脂低蛋白饲料(79.5％玉米面+20％猪油+0.5％的胆固醇)，以后改喂低蛋白饲料(99.5％玉米面+0.5％胆固醇)；在预防阶段中，若大鼠体重比上一次下降10％，则停注四氯化碳溶液一次^[5]。两个半月后从模型组随机抽出14只改喂普通标准饲料和自来水进入治疗阶段外，其余大鼠均停食不停水18小时后乙醚麻醉，摘除眼球取血，室温30min后4000r/min离心10min，取血清测定各指标；观察肝脏色泽、形态，肝、脾称重并制作肝脏切片，预防阶段结束。模型组抽出的14只大鼠再随机分成两组进入治疗阶段，每组7只，治疗对照组和治疗组每2天按分别按0.66ml/kg皮下注射生理盐水和0.25g/kg喂服，均饲喂普通标准饲料和自来水，18天后同法处理各组大鼠。 

验证方法： 

血液生化指标测定：白蛋白、球蛋白、天门冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、透明质酸酶测定采用试剂盒。 

肝脏病理：取肝脏大叶，12％福尔马林固定，石蜡包埋，常规切片，H E染色，光镜下观察各组大鼠肝组织病理学变化。 

数据分析：采用STATISTICAL 6.0处理数据，结果以平均值±标准差 

表示，组间比较用t检验，P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为极显著性差异。 

验证结果： 

一、本发明制剂对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大的预防作用 

造模情况：预防阶段结束时，与对照组相比，模型组大鼠毛色灰暗，行动呆板且活动明显减少，反应迟钝，食量、饮水量都明显减少，大鼠肝、脾脏肿大(表3)，肝脏色泽暗淡，表面可见明显结节及白色颗粒状小突起，边缘凹凸不平，其切片在光镜下大多可见假小叶，肝窦变窄甚至消失，肝索排列紊乱。ALT、AST、HA较对照组显著升高(P＜0.01)，A、G显著降低(P＜0.01)(表1)，肝硬化造模成功。 

表1本发明制剂对大鼠肝功生化指标的影响( 

n＝7) 

注：^aP＜0.05，^bP＜0.01与模型组相比；^cP＜0.05与小剂量组相比。 

1.血液生化指标：与对照组比，模型组A、G显著降低(P＜0.01)，ALT、AST、HA显著升高(P＜0.01)，A/G倒置。与模型组相比，大剂量针剂组显著升高A(P＜0.01)和G(P＜0.05)，显著降低ALT、AST(P＜0.01)和HA(P＜0.05)。小剂量组显著降低AST(P＜0.05)外，其余肝功指标与模型组相比无统计学意义。大、小剂量组相比，大剂量组显著升高A(P＜0.05)、显著降低AST(P＜0.05)和ALT(P＜0.05)(表1)。 说明该制剂对肝硬化具有一定的保肝和抗肝肿大作用，大剂量效果好于小剂量。 

2.肝脏病理：肝脏读片及评分标准均由四川大学华西公共卫生学院病理教研室执行，除纤维增生计为0、1、2、3、4分五个等级外，其余指标均计0、1、2、3分四个等级，统计各组不同分值下的大鼠数量。模型组肝脏切片光镜下明显可见假小叶，与模型组相比，大剂量组脂肪变性、纤维增生、肝细胞坏死、肝窦血管化程度明显减轻，无一例出现假小叶。大剂量组除肝细胞水肿外，其余各指标均显著轻于模型组。小剂量组仅肝细胞坏死明显轻于模型组。两剂量组间相比，大剂量组脂肪变性、胞浆凝固、纤维增生、炎细胞浸润程度明显轻于小剂量组(表2)。 

表2大鼠肝脏切片评分情况(n＝7) 

注：肝细胞水肿数目在同一切片三个不同视野中平均数量小于10％计1分，10-15％计2分，15-20％计3分；同法可得脂肪变性细胞数量平均小于25％计1分，25-50％计2分，50-75％计3分；胞浆凝固细胞数量平均小于5％计1分，5-10％计2分，10-20％计3分；肝细胞坏死细胞数量平均小于5％计1分，5-10％计2分，10-20％计3分；纤维增生为可见增生计1分，明显可见增生计2分，视野中未形成全部假小叶的计3分，整个视野全部形成假小叶的计4分。 

3.肝、脾指数及死亡率：与对照组相比，模型组大鼠肝、脾明显肿大，肝、脾指数显著偏高(P＜0.01)。与模型组相比，大剂量组肝指数显著偏低(P＜0.05)。两剂量组相比，大剂量组的肝指数显著低于小剂量组(P＜0.05)。除对照组外其余三组虽然肝、脾均有不同程度的肿大，但是大剂量组肝脏肿大程度明显轻于模型组和小剂量组(P＜ 0.05)，脾指数在三者之间无统计学意义，提示脾肿大可能未受中药影响，死亡率在四组之间两两比较差异较大(表3)。 

表3各组大鼠肝、脾指数及死亡率( 

n＝7) 

注：^aP＜0.05，^bP＜0.01与模型组相比；^cP＜0.05与小剂量组相比。 

二、本发明制剂对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大的治疗作用。 

1.血液生化指标：在治疗的第5、11、18天分别检测了两组大鼠肝功指标。比较表1和表4可以看出，去除病因后，对照组和治疗组大鼠A和G较以前有所升高，AST、ALT和HA较以前显著降低，说明大鼠在去除病因后存在一定的自愈倾向。与同一时期对照组相比，治疗组在第11天G、AST显著降低(P＜0.05)、HA显著升高(P＜0.05)，第18天时治疗组显著降低AST(P＜0.01)和ALT(P＜0.05)，说明本发明制剂具有一定的治疗肝硬化效果，但在治疗过程中治疗组A、G和HA并非持续升高或降低，可能由于治疗时间过短，治疗效果未能充分稳定所致(表4)。 

表4本发明制剂对肝功生化指标的影响( 

n＝7) 

注：*P＜0.05，**P＜0.01与同一时期对照组相比。 

2.肝脏病理：肝脏读片及评分标准仍由四川大学华西公共卫生学院病理教研室执行，评分标准与预防阶段2.3.2肝脏病理完全相同。与对照组相比，治疗组大鼠肝脏表观色泽大多好于对照组，表面白色小颗粒较少，光镜下观察发现，治疗组肝细胞水肿、胞浆凝固、纤维增生和炎细胞浸润程度总体轻于对照组，但两者仍可见假小叶(表5)。 

表5大鼠肝脏切片评分情况(n＝7) 

3.肝、脾指数及死亡率：治疗阶段结束时，两组大鼠均无死亡；对照组肝、脾指数分别为4.16±0.34、3.94±0.48；治疗组肝、脾指数分别为3.98±0.54、3.16±0.21；虽然治疗组肝、脾指数均小于对照组，但无统计学意义。 

以上研究结果表明：本发明制剂对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大预防和治疗作用。 

对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大预防和治疗作用，可以通过动物实验分别在以下多方面得到证实，具体内容及过程如下： 

实验动物：SPF级Balb/c雄性小鼠48只，8周龄，体重20±2g，购于四川省医学科学院医学实验动物中心。实验分为预防和治疗两个阶段。预防阶段，将健康小鼠随机分为4组：模型组24只，阴性对照组、大剂量组、小剂量组各8只。治疗阶段，将预防阶段模型组抽样后剩余的肝纤维化模型小鼠随机分为阴性对照组和药物治疗组，每组各8只。 

药品与试剂：Con A规格为25mg/支，购自Sigma公司。实验时溶于医用生理盐水 配成2.5mg/ml的溶液。白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)测定试剂盒由北京中生北控生物科技股份有限公司提供；丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)由南京建成生物工程研究所提供；透明质酸(HA)测定试剂盒，由上海森雄科技实业有限公司提供；以及本发明制剂。 

实验方法：预防阶段，阴性对照组小鼠按12.5mg/kg的剂量尾静脉注射生理盐水，其余各组等剂量尾静脉注射Con A溶液。每周1次，持续9周。同时，本发明制剂按大(0.25g/kg)、小(0.125g/kg)剂量组喂服给药。阴性对照组和模型组则按6.6ml/kg的剂量皮下注射生理盐水，每3天1次，持续9周。9周后抽样6只模型组小鼠，摘除眼球取血，室温放置30min后以4000r/min离心10min，取血清测定各指标，观察肝脏外表，切取肝大叶，10％福尔马林固定，石蜡包埋，常规切片，HE染色，光镜下观察肝组织病理学变化。确认造模成功后，马上以同样方法处理阴性对照、大、小剂量各组小鼠。 

治疗阶段，阴性对照组小鼠按6.6ml/kg的剂量皮下注射生理盐水，药物治疗组小鼠按0.25g/kg的剂量喂服本发明制剂，持续31天。在此期间每周每组抽样6只小鼠做毛细管穿刺眼眶静脉丛取血，制备血清，测定各项指标，动态观测小鼠的治疗情况。 

验证方法： 

血液生化指标测定：白蛋白、球蛋白、天门冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转氨酶、透明质酸酶测定采用试剂盒。 

肝脏病理：取肝脏大叶，12％福尔马林固定，石蜡包埋，常规切片，H E染色，光镜下观察各组大鼠肝组织病理学变化。 

数据分析：采用STATISTICAL 6.0处理数据，结果以平均值±标准差 

表示，组间比较用t检验，P＜0.05为显著性差异，P＜0.01为极显著性差异。 

验证结果： 

一、本发明制剂对对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大的预防和治疗作用。 

造模情况：预防阶段进行到4周以后，模型组与阴性对组相比明显出现了食欲不振，体毛凌乱，毛色灰暗，反应迟钝等现象。预防阶段结束后取出肝脏肉眼观察也可发现模型组小鼠肝脏色泽暗淡，边缘凹凸不平。血清检测结果(表1)显示模型组ALT，AST，HA较阴性对照组皆极显著偏高(P＜0.01)，G，A/G极显著降低(P＜0.01)。这说明肝纤维化模型的构建是成功的。但是，血清检测中白蛋白这一项模型组与阴性对照组相比并没有出现预期的显著性差异，估计是因为白蛋白的半衰期长达19天^[11]，虽然模型组小鼠在肝损伤后减少了白蛋白的合成，肝损伤之前合成的白蛋白并没有及时的分解掉，造成了检测结果中模型组的暂时性假偏高。值得一提的是，药剂组的白蛋白合成量与模型组、阴性对照组相比偏高，其中小剂量组产生了显著性偏高(P＜0.05)。这个现象说明本发明制剂可以提高肝脏白蛋白的合成能力，可能具有增强机体免疫的功效。 

1、血液生化指标：与模型组相比，小剂量组除能极显著降低A/G(P＜0.01)之外， 还能显著提高A/G(0.05)和显著降低ALT、AST(P＜0.05)，但是大部分指标都与阴性对照组有显著性差异(A、ALT、AST，P＜0.05)。而大剂量组则能显著降低G(P＜0.05)、ALT、AST(P＜0.01)，显著提高A/G(P＜0.01)，而且各项指标都非常接近与阴性对照组(P＞0.05)。与小剂量组相比，大剂量组显著降低ALT、AST(P＜0.05)(表6)。说明此胶囊剂对肝硬化具有一定的保肝作用，且药效具有剂量依赖性。 

表6本发明制剂对小鼠肝功指标的影响( 

n＝6) 

t检验：与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01，与阴性对照相比△P＜0.05，△△P＜0.01，大小剂量组相比，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01 

2.肝脏病理：模型组小鼠肝细胞严重水肿，大量肝细胞坏死，脂肪变性，汇管区内炎细胞浸润严重，局部区域出现明显的纤维增生。与模型组相比，大剂量组细胞坏死，炎细胞浸润，纤维增生的情况已经基本消失，细胞水肿，脂肪变性，胞浆凝集的病变程度也得到极大的缓解。小剂量组虽然也在一定程度上减轻了各种病变，但是其效果远远比不上大剂量组(表7)。这就说明本发明制剂可以有效的保护肝细胞，防止肝细胞的变性坏死。并且，这种效果是有剂量依赖性的。肝脏读片及评分标准均由四川大学华西公共卫生学院病理教研室执行，除纤维增生计为0、1、2、3、4分五个等级外，其余指标均计0、1、2、3分四个等级。 

表7各组小鼠肝脏切片评分情况 

注：肝细胞水肿数目在同一切片三个不同视野中平均数量小于10％计1分，10-15％计2分，15-20％计3分；同法可得脂肪变性细胞数量平均小于25％计1分，25-50％计2分，50-75％计3分；胞浆凝固细胞数量平均小于5％计1分，5-10％计2分，10-20％计3分；肝细胞坏死细胞数量平均小于5％计1分，5-10％计2分，10-20％计3分；纤维增生为可见增生计1分，明显可见增生计2分，视野中未形成全部假小叶的计3分，整个视野全部形成假小叶的计4分。 

二、本发明制剂对对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大的治疗作用。 

1.血液生化指标：在治疗的一个月内对两组小鼠作了4次血样抽查。结果显示，去除病因后，阴性对照组的ALT、HA的发展趋势是降低的，是良性发展的。这说明小鼠有一定的自愈能力。但即便如此，与同一时期阴性对照组相比，药物治疗组依然体现了它愈合在程度方面的显著差异(表8)。而且，ALT、HA在经过31天的治疗后都基本接近下常值。这说明剂量为0.25g/kg的本发明制剂对Con A诱导的肝损伤是有一定治疗效果的。 

表8本发明制剂对小鼠肝功指标的影响( 

n＝6) 

t检验：对照组与治疗组相比，P*＜0.05，P**＜0.01 

2.肝脏病理：光镜观察结果显示，阴性对照组的肝细胞水肿和胞浆凝集的症状已经恶化，其它症状有缓解的趋势，但是其中脂肪变性和肝细胞坏死的症状的缓解情况比较轻微。这种现象说明，小鼠本身是有一定的自愈能力的。与阴性对照组相比，药物治疗组的所有肝脏病变指标都有不同程度的改善，而且部分指标已经趋于正常，其中以肝细胞坏死，肝脏炎性细胞浸润和纤维增生最为显著(表9)。这就说明，本发明制剂对Con A诱导的免疫性肝损伤是有一定治疗效果的，它可以有效的清除坏死的肝细胞，加快降解增生的纤维组织，从而使病变的肝脏趋于正常。 

表9小鼠肝脏切片评分情况 

以上研究结果表明：本发明制剂对对病毒性肝炎、酒精性肝炎以及肝硬化、肝癌引起的肝区疼痛和肝肿大的预防和治疗作用。 

具体实施方式

实施例1 

一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：具体包含如下步骤： 

a、寒水石(煅制)：取净药材1000g，砸成小块，置无烟的炉火上或置适宜的容器内，煅至酥脆或红透时，取出，放凉，碾碎。 

b、诃子(去核)：取净诃子500g，稍浸，闷润，去核，干燥。 

c、配料、粉碎过筛：取寒水石(煅制)100g、檀香8g、降香16g、沉香10g、诃子(去核)20g、豆蔻4g、红花10g、天竺黄8g、肉豆蔻4g、草果4g、余甘子16g、石榴子12g、止泻木子6g、荜茇8g、木香8g、甘青青兰16g、獐牙菜1.6g、巴夏嘎10g、绿绒蒿16g、波棱瓜子8g、榜嘎16g配料后粉碎，并过80目筛； 

d、体外培育牛黄2g、人工麝香1g单独研磨细粉。 

e、混匀：将经c和d粉碎、研磨过筛后的物料，采用等量递增法进行混匀，时间30～45min； 

f、将经e混匀后的物料进行灭菌处理； 

g、制粒：将经f灭菌后的物料，采用50-60％酒精制粒，并用CT-C-III热风烘箱机在50℃～60℃环境下干燥4～6小时，干燥后水分小于8％； 

h、总混：将经g制粒干燥后的物料进行总混，时间15min； 

i、将总混后的物料填充入胶囊中得成品。 

由于此制剂为全生药粉入药，采用纯化水制成颗粒在填充胶囊时，由于纯化水的粘性一般，这样制成的颗粒大，疏松，堆密度不好，因此在填充胶囊时，就会导致胶囊装量差异极不稳定，而如果采用粘性较好的50-60％酒精代替纯化水制粒，制成的颗粒小，堆密度好，在填充胶囊时流动性好，从而保证了装量差异稳定。由于制粒方法的改进，产生的胶囊制剂疗效更好，更加稳定。 

实施例2 

一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：具体包含如下步骤： 

a、寒水石(煅制)：取净药材1000g，砸成小块，置无烟的炉火上或置适宜的容器内，煅至酥脆或红透时，取出，放凉，碾碎。 

b、诃子(去核)：取净诃子500g，稍浸，闷润，去核，干燥。 

c、配料、粉碎过筛：取寒水石(煅制)117g、檀香9.4g、降香18.7g、沉香11.7g、诃子(去核)23.4g、豆蔻4.7g、红花11.7g、天竺黄9.4g、肉豆蔻4.7g、草果4.7g、余甘子18.7g、石榴子14g、止泻木子7g、荜茇9.4g、木香9.4g、甘青青兰18.7g、獐牙菜1.9g、巴夏嘎11.7g、绿绒蒿18.7g、波棱瓜子9.4g、榜嘎18.7g配料后粉碎，并过80目筛； 

d、体外培育牛黄2.34g、人工麝香1.17g单独研磨细粉。 

e、混匀：将经c和d粉碎、研磨过筛后的物料，采用等量递增法进行混匀，时间30～45min； 

f、将经e混匀后的物料进行灭菌处理； 

g、制粒：将经f灭菌后的物料，采用50-60％酒精制粒，并用CT-C-III热风烘箱机在50℃～60℃环境下干燥6小时，干燥后水分小于8％； 

h：总混：将经g制粒干燥后的物料进行总混，时间15min； 

i、将总混后的物料填充入胶囊中得成品。 

实施例3 

一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：具体包含如下步骤： 

a、寒水石(煅制)：取净药材1000g，砸成小块，置无烟的炉火上或置适宜的容器内，煅至酥脆或红透时，取出，放凉，碾碎。 

b、诃子(去核)：取净诃子500g，稍浸，闷润，去核，干燥。 

c、配料、粉碎过筛：取寒水石(煅制)105g、檀香8.4g、降香16.8g、沉香10.5g、诃子法核)21g、豆蔻4.2g、红花10.5g、天竺黄8.4g、肉豆蔻4.2g、草果4.2g、余甘子16.8g、石榴子12.6g、止泻木子6.3g、荜茇8.4g、木香8.4g、甘青青兰16.8g、獐牙菜1.68g、巴夏嘎10.5g、绿绒蒿16.8g、波棱瓜子8.4g、榜嘎16.8g配料后粉碎，并过80目筛； 

d、体外培育牛黄2.1g、人工麝香1.05g单独研磨细粉。 

e、混匀：将经c和d粉碎、研磨过筛后的物料，采用等量递增法进行混匀，时间30～45min； 

f、将经e混匀后的物料进行灭菌处理； 

g、制粒：将经f灭菌后的物料，采用50-60％酒精制粒，并用CT-C-III热风烘箱机在50℃～60℃环境下干燥5小时，干燥后水分小于8％； 

h：总混：将经g制粒干燥后的物料进行总混，时间15min； 

i、将总混后的物料填充入胶囊中得成品。 

Claims (5)

1.一种治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：具体包含如下步骤：

a、煅制寒水石：将纯净的寒水石砸成小块，置于炉火上或锅内，煅至酥脆或红透时，取出，放凉，碾碎至小于或等于10mm。

b、诃子(去核)：取净诃子，用水将其闷润后去核，干燥。

c、配料、粉碎过筛：按重量份数计，取寒水石(煅制)92.5～117、檀香7.4～9.3、降香14.8～18.7、沉香9.3～11.7、诃子(去核)18.5～23.4、豆蔻3.7～4.7、红花9.3～11.7、天竺黄7.4～9.3、肉豆蔻3.7～4.7、草果3.7～4.7、余甘子14.8～18.7、石榴子11.1～14.0、止泻木子5.6～7.0、荜茇7.4～8.3、木香7.4～9.3、甘青青兰14.8～18.7、獐牙菜1.5～1.9、巴夏嘎9.3～11.7、绿绒蒿14.8～18.7、波棱瓜子7.4～9.3、榜嘎14.8～18.7配料后粉碎，过80目筛；

d、体外培育牛黄1.85～2.34g、人工麝香0.93～1.17g单独研磨细粉，过80目筛。

e、混匀：将经c和d粉碎、研磨过筛后的物料，采用等量递增法进行混匀，时间30～45min；

f、将经e混匀后的物料进行灭菌处理；

g、制粒：将经f灭菌后的物料，采用湿法制粒，并用CT-C-III热风烘箱机在50℃～60℃环境下干燥4～6小时，干燥后水分小于8％；

h、总混：将经g制粒干燥后的物料进行总混，时间10～20min；

i、成型：将总混后的物料根据需要制得各种类型成品剂型。

2.根据权利要求1所述的治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：优选的，所述步骤c中按重量份数计，取寒水石(煅制)100～110、檀香8～9、降香16～18、沉香10～12、诃子(去核)20～22、豆蔻4～5、红花10～12、天竺黄8～9、肉豆蔻4～5、草果4～5、余甘子16～18、石榴子12～14、止泻木子6～8、荜茇8～9、木香8～9、甘青青兰16～18、獐牙菜1.6～1.8、巴夏嘎10～12、绿绒蒿16～18、波棱瓜子8～9、榜嘎16～18、体外培育牛黄2～2.3、人工麝香1～1.1。

3.根据权利要求1或2所述的治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤e中等量递增法是指等量递增法是指先取量少组分，加入等量的量大组分，再取与混合物等量的量大组分混合均匀，如此倍量增加，直至全部混合均匀，色泽一致的混合方法。

4.根据权利要求1或2所述的治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤g中的湿法制粒具体为将经e混匀后的物料先在高效湿法制粒机中预混，十五分钟后，加入粘合剂进行搅拌，制成软材，后通过整粒机过筛整粒，形成工艺要求所需要的湿颗粒。

5.根据权利要求1或2所述的治疗肝病的藏药制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤i中的成型为胶囊剂。