CN101869608B - 一种药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物及其应用。该组合物包括总生物碱和总甙。其中总生物碱是从延胡索中提取的，所述的总甙是从芍药中提取的。延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶50——10∶1，优选1∶2.2——1∶35.2，更优选1∶2.2——1∶17.6，最优选1∶2.2——1∶8.8，其中以1∶4.4为最佳。该药物组合物与相应的辅料可制成临床上接受的药物剂型，包括针剂、粉针剂、输液剂、脂肪乳剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂、膏剂或胶囊剂。该药物组合物可用于制备治疗子宫内膜异位、痛经、月经不调等妇科疾病的药物，可明显缩小异位内膜体积，对子宫内膜异位、痛经、月经不调等妇科疾病疗效显著，无毒副作用。

Description

一种药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其应用，尤其涉及延胡索总生物碱和芍药总甙的药物组合物及其应用，属于药物制剂领域。

背景技术

众所周知，子宫内膜异位症(endometriosis，EM)是雌激素依赖的妇科常见病，对于EM的发病机制存在多种学说，且一直有较多争议，影响了该疾病的临床诊断和治疗的进展。

子宫内膜异位所致行经前腰、腹部重坠胀痛、行经期经行不畅、经量或多或少。目前对子宫内膜异位症的治疗主要有：口服西药，手术治疗和中医治疗。口服西药西医一般采用激素疗法，但是，激素疗法副作用太大，治疗有其局限性，而手术治疗对生育年龄的妇女来说，很难接受。一般手术的复发率在80％以上，而且手术本身的创伤，就容易使子宫内膜产生异位，对腹部手术后肠粘连、皮肤斑痕，慢性阑尾炎等症是临床多见症状。中药治疗，中药治疗历史已经很久，常采取活血破结、行瘀止痛、理气化积的手段对其进行治疗，且疗效显著。由于中药独有的用药安全性、无创伤性和治疗效果好而受到患者的欢迎。申请号为200410024553.7的中国专利申请公开了治疗子宫内膜异位的中药，所述中药的组份按重量比为杜仲10～15G、山茱萸10～15G、桃仁10～15G、益母草10～15G、红花10～15G、乌药3～5G、小茴香3～5G、败酱草15～20G、桂枝9～12G、鳖甲10～15G、田三七粉9～12G、土鳖虫9～12G、甘草3～6G，上述诸药配伍使用对有效治疗子宫内膜异位有独特功效，治疗时间短，效果显著，而且无任何副作用。

申请号为200610165484.0的中国专利申请涉及一种中药组合物，特别涉及一种用于子宫内膜异位、卵巢囊肿等疾病的中药组合物，按照重量配比，它由：三棱7.5～30份，莪术7.5～30份，炮山甲5～20份，山慈菇5～20份，乳香5～20份，没药5～20份，川芎7.5～30份，红花7.5～30份。

申请号为200510054682.5的中国专利申请涉及一种治疗妇女子宫内膜异位症的药物及其制备工艺。其主要原料由制香附、肉桂粉、莪术、赤芍、川芎、陈皮组成，各组分严格按照重量配比组合，经煎煮取汁，喷雾干燥，填入硬胶囊而成。

但在实践中，发现由于许多中药具有起效慢、疗程长等缺点，严重影响其临床应用。且上述中药组合物所用中药成分多，组配复杂，制备工艺复杂。

延胡索，又名元胡，收载于《中华人民共和国药典》(2005版)一部，为罂栗科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎。夏初茎叶枯萎时采挖，除去须根，洗净，置沸水中煮至恰无白心时，取出，晒干。味辛、苦，性温。归肝、脾经。活血，利气，止痛。用于胸胁、腕腹疼痛，经闭痛经，产后瘀阻，跌扑肿痛，为止痛良药。现代研究表明，延胡索具有镇痛、抗心肌缺血、抗心律失常、降压、抗血栓、扩张冠状动脉、增加冠脉流量、该晒心机供氧等药理作用，具有治疗冠心病、心绞痛的功效。(绿清文，丛雅勤，延胡索药理作用及临床应用浅议，内蒙古中医药，2005年第1期，p26)。

延胡索中主要含有生物碱类化合物，其中属叔胺类者含量约0.65％，属季胺类者约0.3％，已分离得到近20个生物碱。

芍药(Paeonia Lactflora Pall)分为白芍和赤芍两种，始于宋《太平圣慧方》。其主要有效成分为芍药甙，芍药内酯甙，羟基芍药甙，苯甲酰芍药甙等单萜类化合物，简称芍药总甙。现代植物化学认为，芍药总苷是芍药中的活性成分，主要存在于芍药的根皮部。传统医学认为，赤芍能够清热凉血，散瘀止痛，临床上，以赤芍或以赤芍为君药组方治疗缺血性心脑血管等疾病。药效学研究表明，其具有镇痛、镇静、解痉、抗炎、抗溃疡、扩张冠状动脉、对抗急性心肌缺血，以及抑制血小板凝聚等诸多方面的药效，且安全范围大。

检索与延胡索和芍药有关已申请的专利及相关文献资料中，还没有提及用从延胡索中提取的总生物碱和从芍药中提取的芍药总甙组成的药物组合物，药效试验证明，含有延胡索总生物碱和芍药总甙的药物组合物能够明显缩小异位内膜体积，对子宫内膜异位、痛经、月经不调、月经异常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外内异症、卵巢囊肿等妇科疾病都有一定的疗效。有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种药物组合物，该药物组合物能够明显缩小异位内膜体积，对子宫内膜异位、痛经、月经不调、月经异常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外内异症、卵巢囊肿等妇科疾病都有一定的疗效。

本发明的第二目的在于提供一种含有本发明的药物组合物的药物制剂，该药物制剂能够明显缩小异位内膜体积，对子宫内膜异位、痛经、月经不调、月经异常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外内异症、卵巢囊肿等妇科疾病都有一定的疗效。

本发明的第三目的在于提供本发明所述的药物组合物或药物制剂在制备治疗妇科疾病，包括子宫内膜异位、痛经、月经不调、月经异常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外内异症、卵巢囊肿等妇科疾病的药物中的应用。

为实现本发明的第一目的，本发明采用如下技术方案：

一种药物组合物，其中，所述的药物组合物包括总生物碱和总甙。

根据前述的药物组合物，其中，所述的总生物碱是从植物延胡索中提取的，所述的总甙是从植物芍药中提取的。

根据前述的药物组合物，其中所述的芍药为白芍或赤芍等本领域技术人员公知的植物芍药。

根据前述的药物组合物，其中，所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶50——10∶1，优选所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶2.2——1∶35.2，更优选所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶2.2——1∶17.6，最优选所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶2.2——1∶8.8，以所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶4.4时最佳。

根据前述的药物组合物，其中，所述的药物组合物与相应的辅料制成临床上可接受的药物剂型，包括针剂、粉针剂、输液剂、脂肪乳剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂、膏剂或胶囊剂。

为实现本发明的第二目的，本发明采用如下技术方案：

一种含有本发明所述的药物组合物的药物制剂，其中，该药物制剂是由本发明所提供的药物组合物与药学上可接受的药用辅料制成临床上可接受的药物剂型。

根据前述的药物制剂，其中所述的药物剂型为针剂、粉针剂、输液剂、脂肪乳剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂、膏剂或胶囊剂。

本发明所述的药物制剂是采用本领域技术人员常用的方法制备的。

根据前述的药物制剂，其中所述的药物组合物中包括总生物碱和总甙。

根据前述的药物制剂，其中，所述的总生物碱是从植物延胡索中提取的，所述的总甙是从植物芍药中提取的。

根据前述的药物制剂，其中所述的芍药为白芍或赤芍等本领域技术人员公知的植物芍药。

根据前述的药物制剂，其中，所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶50——10∶1，优选所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶2.2——1∶35.2，更优选所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶2.2——1∶17.6，最优选所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶2.2——1∶8.8，其中以所述的延胡索总生物碱与芍药总甙的重量比为1∶4.4时最佳。

为实现上述本发明的第三目的，本发明采用如下技术方案：

一种本发明所述的药物组合物或上述的药物制剂在制备治疗妇科疾病的药物中的应用。

根据前述的应用，其中，所述的妇科疾病包括子宫内膜异位、痛经、月经不调、月经异常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外内异症或卵巢囊肿。

本发明人将大鼠子宫内膜异位症模型进行复制，取内异症模型大鼠90只，随机等分为十二组。根据本发明中得出的延胡索总生物碱和芍药总皂苷最佳作用剂量范围，利用四因素三水平正交设计表，设计二因素三水平正交实验，从而制定出延胡索总生物碱和芍药总皂苷一系列不同的配比，发现相同剂量下，延胡索总生物碱和芍药总皂苷的不同配比可明显缩小异位内膜体积，且尤以1∶4.4配比作用最佳。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明所提供的药物组合物可明显缩小异位内膜体积，从而能够应用在制备子宫内膜异位、痛经、月经不调、月经异常、盆腔疼痛、急性腹痛、盆腔外内异症、卵巢囊肿等妇科疾病的药物中，为这些疾病的治疗提供了新的药物选择。

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的描述。

附图说明

图1为模型对照组(子宫内膜生长状态良好，间质比较多，可见多个腺体)；

图2为丹莪妇康膏(子宫内膜生长状态欠佳，间质明显减少，只见一个扩张的腺腔)；

图3为1:4.4组(未见明显内膜组织，腺体消失)；

图4为1:2.2组(子宫内膜呈萎缩状态，间质少，只有一个扩张的腺腔)；

图5为1:8.8组(子宫内膜生长状态欠佳，间质明显减少，只见一个扩张的腺腔)。

具体实施方式

以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。

实施例1

制备延胡索总生物碱和芍药总皂苷水针剂。

将延胡索总生物碱和芍药总皂苷按照1∶50的质量比混合后溶于100L注射用水中，配成溶液，调节pH值至6.5。经微孔滤膜超滤后，补充注射用水至规定量，灌装于安瓿瓶中，熔封灭菌，经检验合格后，包装即得。

实施例2

制备延胡索总生物碱和芍药总甙粉针剂。

将延胡索总生物碱和芍药总甙按照10∶1的质量比溶于100L注射用水中，加入计量的药用辅料，配成溶液，调节pH值至7.0，经微孔滤膜超滤后，真空干燥得延胡索总生物碱和芍药总甙无菌粉，无菌粉分装于西林瓶中，轧盖，经检验合格后，包装即得。

实施例3

将延胡索总生物碱和芍药总皂苷按照质量比为1∶2.2的质量比混合后溶于5倍量注射用水中，加入计量的注射液用水溶性药用辅料，配成溶液，调节pH值至6.0，装于安瓿瓶中，每支10ml，经冷冻干燥后，熔封，检验合格后，包装即得。

实施例4

制备延胡索总生物碱和芍药总皂苷脂肪乳剂。

将延胡索总生物碱和芍药总皂苷按照1∶4.4的质量比混合后溶于100L注射用脂肪溶剂(由注射用水和乳化剂组成)中，配成溶液，调节pH值至7.2。经微孔滤膜超滤后，分装于安瓿中，检验合格后，包装即得。

实施例5

制备延胡索总碱和芍药总甙片剂。

取1g延胡索总碱和35.2g芍药总甙，加入药用淀粉27.8g，糖粉7.2g，微粉硅胶4.8g，过16目筛混合制粒，干燥，过12目筛整粒，加入2.4g硬脂酸镁混合压片，制成1000片。

实施例6

制备延胡索总生物碱和芍药总皂苷口服液。

取4g延胡索总生物碱，加入注射用水2.5L注射用水，调节pH值至4.5，加入吐温80-100ml，加入35.2g芍药总皂苷，混合均匀，过滤，灌装，灭菌，制成1000支口服液。

实施例7

制备延胡索总生物碱和芍药总皂苷胶囊。

取2g延胡索总生物碱和35.2g芍药总皂苷，加入药用淀粉26.8g，糖粉6.0g，羧甲基纤维素钠4.5g，混合均匀，加入淀粉浆，混合，过14目筛混合制粒，干燥，过12目筛整粒，装囊，制成1000粒。

以下涉及本发明的药效学试验。

试验例1

延胡索总生物碱急性毒性试验

该试验例中给小鼠一次灌胃15.00％、12.00％、9.60％、7.70％、6.15％、4.90、3.95％浓度的延胡索总生物碱溶液20ml/kg，剂量分别为3.00、2.40、1.92、1.54、1.23、0.98、0.79g/kg，给药后动物的死亡率分别为100％、70％、50％、40％、10％、10％、0％。采用SPSS11.0软件，按概率单位法计算，其LD₅₀为1.893g/Kg，LD₅₀的95％平均可信限为1.664～2.183g/Kg。其目的是根据预实验结果，观察动物一次给予延胡索总生物碱，所产生的毒性反应和死亡情况，并计算LD₅₀。

(1)实验材料

(1.1)药物

延胡索总生物碱，由北京大学天然药物和仿生药物国家重点实验室提供，批号：060320。试验前用蒸馏水配制成15.00％、12.00％、9.60％、7.70％、6.15％、4.90、3.95％等一系列浓度的溶液备用。

(1.2)动物

昆明种小白鼠，体重19～21g，雌雄各半，购自长春生物制品所，合格证号2006-0001。

(2)方法与结果

取小鼠70只，禁食不禁水16小时，给小鼠一次灌胃15.00％、12.00％、9.60％、7.70％、6.15％、4.90、3.95％浓度的延胡索总生物碱溶液20ml/kg，剂量分别为3.00、2.40、1.92、1.54、1.23、0.98、0.79g/kg。观察给药后2周内动物的饮食、活动、粪便、体重、皮毛光泽度及存亡情况，同时观察鼻、眼、口腔有无异常分泌物，并对死亡动物及时解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器的病理变化情况，如有异常须做病理组织学检查。结果见表1。

表1.延胡索总生物碱LD₅₀的测定

由表1结果可见，动物于给药5分钟后，开始出现中毒症状并陆续死亡，给药后竖毛，死亡前挣扎、跳跃，直至呼吸停止，心跳停止于呼吸停止之后。解剖死亡动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾均未见明显病理改变。存活小鼠饮食、活动、粪便、皮毛光泽度均正常。2周后处死，解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾均无异常变化。采用SPSS11.0软件，按概率单位法计算，其LD₅₀为1.893g/Kg，LD₅₀的95％平均可信限为1.664～2.183g/Kg。

(3)结论

实验结果表明，给小鼠一次灌胃延胡索总生物碱溶液20ml/kg，剂量分别为3.000、2.400、1.920、1.540、1.230、0.980、0.790g/kg。给药后动物死亡率分别为100％、70％、50％、40％、10％、10％、0％。存活小鼠饮食、活动、粪便、皮毛光泽度均正常，2周后处死、解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾均未见明显病理改变。采用SPSS11.0软件，按概率单位法计算，其LD₅₀为1.893g/Kg，LD₅₀的95％平均可信限为1.664～2.183g/Kg。

试验例2

芍药总皂苷急性毒性试验

该试验例中给小鼠一次灌胃39.7％、34.9％、30.7％、27.0％、23.8％、20.9％浓度的芍药总皂苷溶液30ml/kg，剂量分别为11.9、10.5、9.24、8.13、7.15、6.29g/kg。给药后动物的死亡率分别为100％、90％、80％、40％、20％、0％。采用SPSS11.0软件，按概率单位法计算，其LD50为8.8869g/Kg，LD₅₀的95％平均可信限为8.2457～9.5931g/Kg。其目的是根据预实验结果，观察动物一次给予芍药总皂苷后，所产生的毒性反应和死亡情况，并计算LD₅₀。

(1)实验材料

(1.1)药物

芍药总皂苷，由北京大学天然药物和仿生药物国家重点实验室提供，批号：060927。试验前用蒸馏水配制成39.7％、34.9％、30.7％、27.0％、23.8％、20.9％等一系列浓度的溶液备用。

(1.2)动物

昆明种小白鼠，体重19～21g，雌雄各半，购自吉林大学基础医学院动物实验中心，合格证号2003-0001。

(2)方法与结果

取小鼠60只，禁食不禁水16小时，给小鼠一次灌胃39.7％、34.9％、30.7％、27.0％、23.8％、20.9％浓度的芍药总皂苷溶液30ml/kg，剂量分别为11.9、10.5、9.24、8.13、7.15、6.29g/kg。观察给药后2周内动物的饮食、活动、粪便、体重、皮毛光泽度及存亡情况，同时观察鼻、眼、口腔有无异常分泌物，并对死亡动物及时解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器的病理变化情况，如有异常须做病理组织学检查。结果见表2。

表2.芍药总皂苷LD₅₀的测定

由表1结果可见，动物于给药30分钟后，开始出现中毒症状并陆续死亡：给药后多数动物安静少动，死亡前翻正反射消失，呼吸停止，心跳停止于呼吸之后。动物死亡率分别为100％、80％、60％、30％、20％、0％。解剖死亡动物，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾均未见明显病理改变。存活小鼠饮食、活动、粪便、皮毛光泽度均正常，2周后处死，解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾均无异常变化。采用SPSS11.0软件，按概率单位法计算，其LD₅₀为8.8869g/Kg，LD₅₀的95％平均可信限为8.2457～9.5931g/Kg。

(3)结论

实验结果表明，给小鼠一次灌胃芍药总皂苷溶液30ml/kg，剂量分别为11.9、10.5、9.24、8.13、7.15、6.29g/kg。给药后动物死亡率分别为100％、80％、60％、30％、20％、0％。存活小鼠饮食、活动、粪便、皮毛光泽度均正常，2周后处死、解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾均未见明显病理改变。采用SPSS11.0软件，按概率单位法计算，其LD50为8.8869g/Kg，LD₅₀的95％平均可信限为8.2457～9.5931g/Kg。

试验例3

延胡索总生物碱和芍药总皂苷

对实验性大鼠子宫内膜异位症的影响

该试验例通过制备“大鼠子宫内膜移位症模型”，观察了延胡索总碱和芍药总苷及其在有效剂量范围内不同配比对内移症的影响。实验结果表明，延胡索总碱和芍药总苷均能明显减小大鼠异位内膜组织的体积，抑制内膜组织生长。病理组织学检查各给药组可见腺体数目明显减少、上皮细胞萎缩，其对大鼠内异症有显著的治疗作用。其有效剂量范围分别为芍药总皂苷为220-880mg/Kg、延胡索总碱为25-100mg/Kg。同时采用四因素三水平正交设计表，设计二因素三水平正交实验证明，在相同剂量下，二者1∶4.4配比作用最佳，考虑实际生产投料方便，将其最佳配比定为1∶5。芍药总皂苷220、110mg/Kg和丹莪妇康煎膏对血清E2含量均有一定的降低作用，由此初步推测二者可能通过抑制卵巢合成或分泌E2而达到抑制移位内膜增生的，芍药总皂苷作用机制拟与丹莪妇康煎膏相似。延胡索总碱尚能显著减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，延长热刺激疼痛反应时间，兼有明显的镇痛作用。预示二者联用可起到相互协同或作用相加的综合作用，可达到“标本兼治”的目的，对治疗“内异症”具有良好前景。

实验目的是按照中药新药研究指南要求，根据延胡索总生物碱和芍药总皂苷的功能主治，选择适当的动物模型和试验方法，对该药的有效性做出科学的评价，为其临床研究提供药理学依据。

实验材料

药物  延胡索总生物碱，含量：82％，315.1g生药/g；芍药总皂苷，含量83％，23.3g生药/g，由北京大学天然药物和仿生药物国家重点实验室提供，批号：060320。实验前用蒸馏水配制成不同浓度的溶液，置4℃冰箱保存备用。孕三烯酮胶囊，2.5mg/粒，由北京紫竹药业有限公司生产，批号：53080101。实验前用0.5％羧甲纤维素钠配制成所需浓度；丹莪妇康煎膏，100g/瓶，昆明滇虹药业有限公司产品，批号：070902。实验前加适量蒸馏水配制成所需浓度的溶液，置4℃冰箱保存备用。己烯雌酚，0.5mg/片，合肥久联制药有限公司产品，批号：070303；庆大霉素，8万单位/2ml，天津药业集团新郑股份有限公司产品，批号：070816；阿司匹林肠溶片，批号：0712231，神威药业有限公司产品。

试剂  E2放射免疫分析药盒：购自北京市福瑞生物工程公司，批号：20080401。

动物  Wistar大鼠，体重180～200g，雌性；KM小鼠，体重19～21g，雌性，均购自吉林大学基础医学院动物实验中心。小鼠合格证号：SCXK 2003-0001大鼠合格证号：。

仪器  GC-2010r放射免疫计数器，科大创新股份有限公司中佳分公司生产。GJ-8402型热板测痛仪，浙江宁海白石电子医疗仪器厂。

统计学方法  使用spss13.0统计软件，计量资料采用t检验，计数资料采用秩和检验。

方法与结果

一、延胡索总碱和芍药总皂苷对实验性大鼠子宫内膜异位症的影响

取健康雌性未孕大鼠120只，按文献方法，取其中110只于造模前24h，ig己烯雌酚0.2mg/100g(20ml/Kg)，在无菌条件下，ip2％戊巴比妥钠40mg/kg麻醉，固定大鼠四肢及头部于鼠板上，下腹部翦毛并以碘酒、酒精常规消毒皮肤。于下腹正中线翦开腹壁，开口长约1.5cm，暴露腹腔，找出左侧子宫，在距离卵巢1cm处结扎1.5-2cm长中段子宫两端，翦取中间约1cm一段子宫。将子宫置盛有生理盐水的培养皿上，将子宫上皮层与肌层分离，切取5mmx5mm大小子宫内膜组织片断，上皮层对着腹腔用缝线固定与大鼠右前腹壁内侧面。术后分层缝合肌肉与皮肤，连续7天ip庆大霉素注射液，每只0.1ml。另取10只动物做假手术(不移植子宫内膜，其它手术过程相同)。所有动物在24-28℃，通风良好的条件下常规饲养，每周称体重一次。4周后开腹检查，选取出现移植物体积增大、液体积聚、可见白色透明或暗红色小囊肿的动物，做为“子宫内膜异位症(简称内异症)”模型复制成功动物用于试验。

取内异症模型大鼠110只，随机等为分十一组，第一组为假手术组，第二组为内异症模型组，第三、四组分别为阳性对照药孕三烯酮0.5mg/Kg、丹莪妇康煎膏5.4g/Kg，第五、六、七、八组分别为延胡索总碱200、100、50、25mg/Kg，第九、十、十一、十二组分别为芍药总皂苷880、440、220、110mg/Kg。ig给药，体积均为20ml/kg，模型组及假手术组均给予蒸馏水，每日1次，连续4周。每天观察给药后动物外观、行为活动、排便情况，每周称体重一次记录体重变化。末次给药后24h，以3％水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉，腹主动脉取血，分离血清，采用放免法测定雌二醇(E2)含量。剥离腹壁移植内膜组织，在光学显微镜下以卡尺测量其长、宽、高并计算体积，同时用10％福尔马林固定，做病理组织学检查。

(一)、对内移症大鼠异位内膜体积的影响

表3.对大鼠异位内膜体积的影响(

n＝9)

组别	剂量(mg/Kg)	病灶体积(mm3)
			模型组	-	61.90±21.83
孕三烯酮	0.5	40.26±11.56*
			丹莪妇康煎膏组	5400	37.67±15.62*
延胡索总碱	200	34.44±16.21**
			延胡索总碱	100	38.56±14.78*
延胡索总碱	50	40.63±15.83*
			延胡索总碱	25	42.11±15.06*
芍药总皂苷	880	35.60±12.24**
			芍药总皂苷	440	40.88±15.70*
芍药总皂苷	220	41.11±12.25*
			芍药总皂苷	110	43.67±15.51

注：与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。

由表1结果可见，各给药组病灶体积与模型组比较均明显减小，且具有一定的量效关系，药物能明显减小异位内膜体积有效剂量范围：芍药总皂苷为220-880mg/Kg、延胡索总碱为25-100mg/Kg。芍药总皂苷880mg/Kg和延胡索总碱为200mg/Kg作用强于阳性对照药孕三烯酮和丹莪妇康煎膏，表明芍药总皂苷和延胡索总碱对内异症均有明显的抑制作用。

(二)、对内异症大鼠异位子宫内膜形态学的影响

肉眼可见异位内膜组织为隆起的小囊肿，给药后囊肿减小，并且粘连比模型组轻。光镜下，假手术组可见粘膜上皮完整，上皮细胞为柱状上皮，可见腺体、血管、间质等正常组织。子宫内膜异位模型组，可见移植的内膜组织生长，其被覆柱状上皮结构清晰，可见腺体，间质有中性粒细胞。各给药组异位内膜组织成抑制状态，与模型组比较可见腺体及间质有不同程度的减少，上皮细胞呈萎缩状态。其中延胡索总碱200、100、50mg/kg和芍药总苷880、440、220mg/kg组最明显，抑制作用较强，多数动物腺体消失，间质明显减少，上皮细胞成萎缩状态。其作用优于孕三烯酮组和丹娥妇康煎膏。

表4.病理检查各组大致情况

组别	光镜下内膜形态
		假手术对照组	黏膜上皮完整，上皮细胞为柱状上皮，可见腺体、血管、间质等正常。
模型对照组	可见移植的内膜组织生长，其被覆柱状上皮结构清晰，可见腺体较多，腺体排列不规则，间质有中性粒细胞。
		孕三烯酮组	异位内膜组织成抑制状态，腺体、间质明显减少、个别动物腺体消失，腺体排列规则，上皮细胞成萎缩状态。
丹娥妇康煎膏组	异位内膜组织成抑制状态，腺体及间质明显减少，个别动物腺体消失，上皮细胞变薄。
		延胡索总碱200mg/kg	异位内膜组织成抑制状态，多数动物腺体消失，间质明显减少，上皮细胞成萎缩状态。
胡索总碱100mg/kg	异位内膜组织成抑制状态，部分动物腺体消失及间质明显减少，上皮细胞成萎缩状态。
		延胡索总碱50mg/kg组	异位内膜组织成抑制状态，部分动物腺体及间质明显减少。上皮细胞变薄。
延胡索总碱25mg/kg组	异位内膜组织成抑制状态，个别腺体及间质较模型组减少，上皮细胞变薄。
		芍药总苷880mg/kg组	异位内膜组织成抑制状态，多数腺体消失，间质明显减少，上皮细胞成萎缩状态。
芍药总苷440mg/kg组	异位内膜组织成抑制状态，部分动物腺体消失及间质明显减少，上皮细胞成萎缩状态。
		芍药总苷220mg/kg组	异位内膜组织成抑制状态，腺体及间质明显减少，个别动物腺体消失，上皮细胞成萎缩状态。

(三)、对内异症大鼠雌二醇含量的影响

末次给药后24h，以3％水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉，腹主动脉取血，分离血清，采用放免法测定雌二醇(E₂)含量，结果见表5。

表5、对内异症大鼠雌二醇含量的影响(n＝9)

组别	剂量(mg/Kg)	E2(pg/ml)
			假手术组		7.41±3.49
模型组		7.91±7.44
			孕三烯酮	0.5	10.18±8.84
丹莪妇康煎膏	5400	4.81±2.86
			延胡索总碱	200	14.08±12.48
延胡索总碱	100	9.44±4.85
			延胡索总碱	50	11.74±7.04
延胡索总碱	25	12.17±7.51
			芍药总皂苷	880	7.81±7.59
芍药总皂苷	440	7.28±4.93
			芍药总皂苷	220	4.15±2.79
芍药总皂苷	110	4.82±2.10

由表5结果可见，芍药总皂苷220、110mg/Kg组和丹莪妇康煎膏对E2均有一定的抑制作用。由此初步推测二者可能通过抑制卵巢合成或分泌E2而达到抑制移位内膜增生的。其他各组对内异症大鼠雌二醇含量影响则无规律变化，此可能与雌性大鼠性周期性变化有关。

二、延胡索总碱与芍药总皂苷不同配比对实验性大鼠子宫内膜异位症的影响

大鼠子宫内膜异位症模型的复制同前，取内异症模型大鼠90只，随机等为分十二组。根据上述延胡索总碱和芍药总皂苷最佳作用剂量范围，利用四因素三水平正交设计表，设计二因素三水平正交实验，从而制定出延胡索总碱和芍药总皂苷一系列不同的配比为1∶35.2、1∶17.6、1∶8.8、1∶4.4、1∶2.2。并增设芍药总皂苷、延胡索总碱组及丹莪妇康煎膏5.4g/Kg组。按表2所示剂量分组ig给药，剂量均为300mg/kg，体积均为20ml/kg，模型组给予等体积蒸馏水，每日1次，连续4周。每天观察给药后动物外观、行为活动、排便情况，每周称体重一次记录体重变化。于末次给药后24h，以3％水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉，腹主动脉取血，分离血清，采用放免法测定雌二醇(E₂)含量。剥离腹壁移植内膜组织，在光学显微镜下以卡尺测量其长、宽、高并计算体积，同时用10％福尔马林固定，做病理组织学检查。

(一)、对内移症大鼠异位内膜体积的影响

表6、对大鼠异位内膜体积的影响(

n＝10)

组别	剂量(mg/Kg)	病灶体积mm3
			模型对照组		35.60±10.52
丹莪妇康煎膏	5400	25.75±7.76*
			1∶2.2	300	21.61±5.35**
1∶4.4	300	18.56±3.28***
			1∶8.8	300	23.75±4.25**
1∶17.6	300	24.90±7.83*
			1∶35.2	300	26.21±6.51*
芍药总皂苷	300	23.05±9.18*
			延胡索总碱	300	28.05±6.65

注：与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。

由表6可见，在相同剂量下，延胡索总碱和芍药总皂苷的不同配比及单用芍药总皂苷均可明显缩小异位内膜体积，且尤以1∶4.4配比作用最佳。延胡索总碱虽有一定的作用，但无明显统计学差异，可能是由于其用药剂量超出有效剂量范围所致。

(二)、对内异症大鼠异位子宫内膜形态学的影响

肉眼可见异位内膜组织为隆起的小囊肿，给药后囊肿减小，并且粘连比模型组轻。光镜下，假手术组可见粘膜上皮完整，上皮细胞为柱状上皮，可见腺体、血管、间质等正常组织。子宫内膜异位模型组，可见移植的内膜组织生长，其被覆柱状上皮结构清晰，可见腺体，间质有中性粒细胞。可见各给药组异位内膜组织成抑制状态，与模型组比较可见腺体及间质有不同程度的减少或消失，上皮细胞变薄或成萎缩状态。其中1∶4.4作用最佳，抑制作用较强，多数动物腺体消失，间质明显减少，上皮细胞成萎缩状态，其作用优于丹娥妇康煎膏。病理检查分级标准：

+++表示异位生长的子宫内膜生长状态良好，间质比较多，可见多个腺体；++表示异位生长的子宫内膜生长状态欠佳，间质明显减少，只见一个扩张的腺腔；+表示异位生长的子宫内膜呈萎缩状态，间质少(只有++的1/2左右)，只有一个扩张的腺腔；-表示未见明显内膜组织，腺体消失。结果见表7及病理照片。

表7.病理等级资料统计学结果

组别	+++	++	+	-	与模型组比较P值
						模型对照组	3	6		1
丹莪妇康煎膏		2	5	3	＜0.01
						1∶8.8	1	4		5	＞0.05

1∶2.2		1	4	5	＜0.01
						1∶4.4		1	3	6	＜0.01

由表7结果可见，延胡索总碱和芍药总皂苷1∶4.4比例减轻异位内膜病理改变作用最佳，其中10只动物有6只内膜组织、腺体消失，3只为轻度，1只为中度，此结果于病灶体积测定结果基本一致。同时考虑实际生产投料方便，将其最佳配比定为1∶5。

二、延胡索总碱的镇痛作用

(一)对醋酸所至小鼠扭体反应次数的影响

取小鼠60只，随机等分为六组，每组10只，第一组为正常对照组，第二组为阳性药阿司匹林20mg/Kg，第三、四、五、六组分别为延胡索总碱192、96、48、24mg/Kg。灌胃给药，体积均为20ml/kg，每日1次，连续3日，正常对照组给予等体积蒸馏水。于末次给药后1小时，腹腔注射0.6％冰醋酸，观察并记录注射冰醋酸5分钟后10分钟内的扭体次数。结果见表8。

表8.对醋酸所致小鼠扭体反应次数的影响(n＝10)

组别	剂量(mg/Kg)	扭体次数(次/10min)	抑制百分率(％)
				正常对照组		34.9±11.3
阿司匹林	20	15.9±7.9***	54.4
				延胡索总碱	192	20.1±10.0**	42.4
延胡索总碱	96	22.3±12.4*	36.1
				延胡索总碱	48	22.5±10.5*	35.5
延胡索总碱	24	23.8±10.3*	31.8

注：与正常对照组比较*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。

由表8结果可见，延胡索总碱各给药组及阿司匹林组均可明显减少小鼠扭体反应次数，且有一定的量效关系。表明延胡索总碱对小鼠扭体反应具有明显的抑制作用。

(二)对小鼠热板痛阈值的影响

选取合格(痛阈值在5-30s范围内)雌性小鼠60只，随机等分六组，每组10只，第一组为正常对照组，第二组为阳性药阿司匹林20mg/Kg，第三、四、五、六组分别为延胡索总碱192、96、48、24mg/Kg。灌胃给药，体积均为20ml/kg，每日1次，连续3日，正常对照组给予等体积蒸馏水。于末次给药后1、2、3h各测小鼠痛阈值一次。结果见表9。

表9.对小鼠热板痛阈值的影响(

n＝10)

注：与正常对照组比较*P＜0.05。

由表9结果可见，延胡索总碱192、96mg/Kg，于给药后1、2、3小时均可明显延长热刺激所致小鼠疼痛反应时间，其作用强度与阳性药阿司匹林20mg/Kg相似；48mg/Kg于药后2、3小时亦具明显作用；而24mg/Kg痛阈值虽有所延长，但无统计学意义。表明延胡索总碱在48-192mg/kg剂量范围内对热刺激所致疼痛反应有明显抑制作用。

结论

本实验成功复制出“大鼠子宫内膜异位症模型”，并利用该模型观察了延胡索总碱和芍药总苷及其在有效剂量范围内不同配比对异位内膜体积、病理组织学改变和血清E2含量的影响。实验结果表明，延胡索总碱和芍药总苷均能明显减小大鼠异位内膜组织的体积，抑制内膜组织生长，其有效剂量范围：芍药总皂苷为220-880mg/Kg、延胡索总碱为25-100mg/Kg，且芍药总皂苷880mg/Kg和延胡索总碱为200mg/Kg作用强于阳性对照药孕三烯酮和丹莪妇康煎膏。病理组织学检查各给药组可见腺体数目明显减少、上皮细胞萎缩，其对大鼠内异症有显著的治疗作用。同时采用四因素三水平正交设计表，设计二因素三水平正交实验证明，在相同剂量下，二者不同配比及单用延胡索总碱和芍药总苷均能明显缩小异位内膜体积，减轻移位内膜病理组织学改变，尤以1∶4.4配比作用最佳，其中有60％动物内膜组织、腺体消失。考虑实际生产投料方便，将其最佳配比定为1∶5。芍药总皂苷220、110mg/Kg和丹莪妇康煎膏对血清E2含量均有一定的降低作用，由此初步推测二者可能通过抑制卵巢合成或分泌E2而达到抑制移位内膜增生的，芍药总皂苷作用机制拟与丹莪妇康煎膏相似。延胡索总碱尚能显著减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，延长热刺激疼痛反应时间，具有明显的镇痛作用，这对内移症时的痛经具有良好的改善症状作用。由此可见，将二者有机结合研制成药物，其不仅具有治疗内移症的作用，同时兼有减轻疼痛的效果，最终达到“标本兼治”的目的。

(1)本组方体现了中医复方用药的优势，即二药合用，具有“协同作用”或“相加作用”。同时采用现代药理学进行药效评价的有效部位的组合，药理作用明确。

(2)同时处方原料药为有效部位，主要成分明确，质量可控，有利于保证药品质量，也符合中药现代化的要求，促进中医药走向国际市场，创造更大的经济效益。

试验例4

延胡索总生物碱和白芍总苷胶囊治疗实验性痛经的研究

摘要  延胡索总生物碱和白芍总苷胶囊中延胡索总生物碱50～300mg/kg与白芍总苷50～600mg/kg对缩宫素所致小鼠“痛经”的扭体反应有明显的抑制作用，明显延长小鼠扭体潜伏期，最佳剂量为延胡索总碱200、100、50mg/kg与白芍总苷100、50mg/kg；延胡索总碱25～300mg/kg与白芍总苷50～600mg/kg可明显延长小鼠热疼痛反应时间，显著提高小鼠痛阈值，起效最快的是延胡索总碱50、25mg/kg与白芍总苷100、50mg/kg；延胡索总碱100～300mg/kg与白芍总苷50～200mg/kg能明显减轻醋酸所致小鼠扭体反应，作用最好的是延胡索总碱200mg/kg与白芍总苷100mg/kg；延胡索总碱50～200mg/kg与白芍总苷200～400mg/kg对二甲苯所致的小鼠耳肿胀有良好的抑制作用，作用最强的是延胡索总碱100mg/kg与白芍总苷400mg/kg；延胡索总碱20～100ug/ml与白芍总苷400～1000ug/ml对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度抑制明显，且延胡索总碱有良好的量效关系。结果表明，延胡索总生物碱200、100、50mg/kg和白芍总苷200、100、50mg/kg在最佳口服剂量可选配比范围内。说明延胡索总生物碱与白芍总苷有较好的抗炎和镇痛作用。

试验目的  根据中药新药研究指南要求，研究延胡索总生物碱和白芍总苷胶囊中的延胡索总生物碱和白芍总苷的主要药理作用，明确其有效剂量范围，筛选二者最佳配比，为确定延胡索总生物碱和白芍总苷胶囊处方提供科学依据。

材料

药物  延胡索总生物碱(总碱≥78％)，批号：070601；白芍总苷(总苷≥80％)，批号：070301。二者均由北京大学天然药物和仿生药物国家重点实验室提供。实验前以适宜溶剂配成相应浓度备用。己烯雌酚，由合肥久联制药有限公司生产，批号：20090316。苯甲酸雌二醇注射液，由上海通用药业股份有限公司生产，批号：090601。缩宫素注射液，由上海禾丰制药有限公司生产，批号：081203。氯化钠注射液，由长春豪邦药业有限公司生产，批号：08121806。氯化钠，由北京化工厂生产，批号：20071220。氯化钾，由北京化工厂生产，批号：20070716。碳酸氢钠，由北京化工厂生产，批号：20090425。无水葡萄糖，由广东汕头市西陇化工厂生产，批号：060111。二水合氯化钙，由广东汕头市西陇化工厂生产，批号：080107。冰醋酸，由北京化工厂生产，批号：20070728。二甲苯，由北京化工厂生产，批号：20000330。

动物  昆明种小白鼠，体重19～21g或20～22g，雌性。由吉林大学实验动物中心提供，合格证号2008-0005。Wistar大鼠，体重200～250g，由吉林大学实验动物中心提供，合格证号2008-0005。

仪器  BL-420E⁺生物机能实验系统，成都泰盟科技有限公司。HW-400SE恒温平滑肌槽，成都泰盟科技有限公司。GJ-8402型热板测痛仪。

方法与结果

一、对缩宫素所致小鼠“痛经模型”的影响

取130只雌性小鼠，随机等分为13组。按表1所示剂量ig或sc给药。除正常对照组外，其余各组动物均每日上午ig乙烯雌酚2mg/kg，连续12天(苯甲酸雌二醇模型组上午sc苯甲酸雌二醇，连续10天，第1、10天每天sc0.5mg/d，其余8天每天均0.2mg/d)。于ig乙烯雌酚第6日或sc苯甲酸雌二醇第4日开始，各组动物均每日下午ig给药，连续7天，正常对照组与模型对照组ig蒸馏水，体积均为20ml/kg。第13日ig相应药物1h后，各组均ip缩宫素20U/kg，记录30min内扭体次数和扭体反应潜伏期，30min内无扭体反应的潜伏期以30min计算。结果见表10。

表10、对小鼠痛经模型的影响(n＝10，

)

组别	剂量(mg/kg)	扭体次数	扭体潜伏期(s)
				正常对照组		0.50±0.707***	26.1±6.37***
己烯雌酚模型组	2	33.3±17.1	3.90±1.45
				苯甲酸雌二醇模型组		33.5±16.4	3.70±2.11
延胡索总碱	300	17.9±8.77*	12.1±8.82**
				延胡索总碱	200	7.80±3.97***	12.0±9.89*
延胡索总碱	100	7.40±3.95***	12.4±9.43*
				延胡索总碱	50	4.30±4.16***	20.1±10.1*
延胡索总碱	25	26.7±11.6	10.5±8.02*

白芍总苷	600	11.6±8.90***	12.6±7.21***
				白芍总苷	400	11.7±8.79***	16.9±8.74***
白芍总苷	200	11.4±8.68***	13.0±8.37***
				白芍总苷	100	7.00±5.87***	18.2±8.88***
白芍总苷	50	5.60±5.74***	14.7±11.1***

注：与己烯雌酚模型对照组比较*p＞0.05，**p＞0.01，***p＞0.001(下表同)。

由表10结果可见，延胡索总碱200、100、50mg/kg与白芍总苷100、50mg/kg作用最强，可明显减少缩宫素所致小鼠扭体反应次数、延长扭体潜伏期，对小鼠痛经模型有明显抑制作用，与模型组比较有显著差异。有效剂量范围延胡索总碱为50～300mg/kg，白芍总苷为50～600mg/kg。

二、镇痛作用

1、对热刺激所致小鼠痛阈值的影响

采用“热板法”，选取合格(痛域值＜5s或＞30s或易跳跃者剔除)雌性小鼠110只，，随机等分为11组，按表2所示剂量ig给药，正常对照组给予蒸馏水，体积均为20ml/kg，每日1次，连续7天。于末次给药后1、2、4h各测痛阈值一次。以动物投入热板至出现舔后足的时间为该鼠的痛阈值，超过60秒以60秒计算。结果见表11。

表11、对热刺激所致小鼠痛阈值的影响(n＝10，

)

由表11结果可见，延胡索总碱与白芍总苷各剂量在给药后均可明显延长小鼠热刺激引起的疼痛反应时间，并可持续4h以上，与模型对照组比较有显著差异。其中延胡索总碱50、25mg/kg与白芍总苷100、50mg/kg于药后1h即可明显延长小鼠热刺激引起的疼痛反应时间，起效最快。有效剂量范围延胡索总碱为25～300mg/kg，白芍总苷为50～600mg/kg。

三、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

采用“醋酸扭体法”，取雌性小鼠110只，随机等分为11组，按表3所示剂量ig给药，模型对照组给予蒸馏水，体积均为20ml/kg，每日1次，连续7日。于末次给药后1小时，每只鼠ip0.7％冰醋酸溶液0.1ml/10g，记录注射后5～15分钟内的扭体反应次数。结果见表12。

表12、对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(n＝10，)

组别	剂量(mg/kg)	扭体次数
			模型对照组		20.3±6.24
延胡索总碱	300	11.0±6.70**
			延胡索总碱	200	10.9±7.03**

延胡索总碱	100	12.1±6.77*
			延胡索总碱	50	19.7±8.31
延胡索总碱	25	16.7±11.2
			白芍总苷	600	15.3±8.83
白芍总苷	400	16.7±11.3
			白芍总苷	200	11.6±8.95*
白芍总苷	100	8.70±5.38***
			白芍总苷	50	10.7±8.67*

由表3结果可见，延胡索总碱300、200、100mg/kg与白芍总苷200、100、50mg/kg均可明显减少小鼠扭体次数，对醋酸引起的小鼠扭体反应有显著的抑制作用。其中延胡索总碱200mg/kg与白芍总苷100mg/kg作用最强。有效剂量范围延胡索总碱为100～300mg/kg，白芍总苷为50～200mg/kg。

四、对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

小鼠90只，雌性，随机分9组，如表4所示剂量ig给药，模型组给予蒸馏水，每日一次，体积均为20ml/kg，连续10日。末次给药后1小时，将二甲苯0.05ml均匀涂于小鼠左耳前后两面，涂后2小时将小鼠处死，沿耳廓基线剪下两耳，用9mm直径打孔器，分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，左耳重量减去右耳重量即为肿胀程度。结果见表13。

表13、对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(n＝10，

)

组别	剂量(mg/kg)	肿胀程度(mg)	肿胀率(％)
				模型对照组		17.2±7.36	0.746±0.334
延胡索总碱	200	8.27±5.57**	0.403±0.273*

延胡索总碱	100	8.13±5.91**	0.370±0.263*
				延胡索总碱	50	10.3±6.96*	0.476±0.349
延胡索总碱	25	14.3±6.03	0.647±0.274
				白芍总苷	400	6.62±4.55***	0.307±0.223***
白芍总苷	200	9.66±8.16*	0.415±0.353*
				白芍总苷	100	10.4±10.0	0.460±0.443
白芍总苷	50	14.6±6.32	0.654±0.297

由表13结果可见，延胡索总碱200、100、50mg/kg与白芍总苷400、200mg/kg均可明显减轻小鼠耳肿胀程度，对二甲苯所致小鼠耳肿胀有显著的抑制作用。其中延胡索总碱100mg/kg与白芍总苷400mg/kg作用最强。有效剂量范围延胡索总碱为50～200mg/kg，白芍总苷为200～400mg/kg。

五、对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响

实验前48、24小时按2mg/kg体重给大鼠ig乙烯雌酚，人工地促其处于动情期或动情前期，以提高子宫平滑肌对药物的敏感性。将大鼠击毙，迅速剪开腹腔，剪取2cm长之子宫，结扎阴道端，并固定于盛有洛氏液(NaCl 9.0、KCl 0.42、CaCl₂0.24、NaHCO₃0.2、Glucose 1.0g/L)的恒温平滑肌槽的L型通气钩上，另一端与肌力换能器相连，浴皿内保持工作温度37±0.5℃，并不断向营养液中通入O₂(60～80个气泡/分)。先记录10min正常收缩曲线，然后加入不同药物，观察10min，记录给药前后子宫平滑肌收缩变化，分别对收缩频率、收缩幅度的变化百分率作统计学处理进行比较。结果见表14、15。

表14.对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩频率的影响(n＝6，

)

组别	剂量(ug/ml)	药前(次/10分)	药后收缩频率及其变化率(％)(次/10分)
				生理盐水		9.33±0.827	8.00±0.632-13.89±8.48

延胡索总碱	5	9.33±1.50	9.17±2.23-1.66±18.8
				延胡索总碱	10	8.17±1.47	7.67±1.50-6.13±6.85
延胡索总碱	20	7.33±1.63	7.00±0.632-0.741±22.7
				延胡索总碱	40	8.67±1.50	8.00±2.45-8.15±21.6
延胡索总碱	60	7.50±2.43	6.00±2.19-11.1±36.0
				延胡索总碱	80	8.67±1.97	8.50±2.34-1.11±32.4
延胡索总碱	100	7.17±1.17	5.67±1.86-22.1±15.7
				白芍总苷	200	8.67±3.26	8.00±2.68-6.69±7.35
白芍总苷	400	8.00±1.67	6.00±2.37-22.7±30.0
				白芍总苷	600	7.33±1.21	5.33±1.50-27.0±15.8

白芍总苷	800	7.33±0.816	5.17±2.04-30.4±23.1
				白芍总苷	1000	7.33±1.75	4.33±3.67-41.3±41.0

与生理盐水组比较*p＞0.05，**p＞0.01，***p＞0.001，下表同。

由表14结果可见，延胡索总碱和白芍总苷各剂量对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩频率有抑制趋势，但无明显统计学意义。

表15.对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度的影响(n＝6，

)

组别	剂量(ug/ml)	药前(g)	药后收缩幅度及其变化率(％)(g)
				生理盐水		2.24±0.263	2.19±0.236-1.63±5.58
延胡索总碱	5	2.27±0.218	2.19±0.325-3.83±7.92
				延胡索总碱	10	2.49±0.177	2.32±0.157-6.84±2.75
延胡索总碱	20	2.24±0.193	1.95±0.315-13.1±8.67*
				延胡索总碱	40	2.02±0.162	1.69±0.205-16.7±5.22***

延胡索总碱	60	2.23±0.820	1.76±0.700-21.6±4.95***
				延胡索总碱	80	1.87±0.212	1.37±0.106-25.9±10.4***
延胡索总碱	100	2.45±0.282	1.50±0.414-39.3±10.9***
				白芍总苷	200	2.26±0.246	2.13±0.240-5.76±2.87
白芍总苷	400	2.30±0.397	1.96±0.167-13.7±9.37*
				白芍总苷	600	2.30±0.236	1.90±0.357-17.4±12.4*
白芍总苷	800	2.18±0.060	1.88±0.257-13.8±10.2*
				白芍总苷	1000	2.22±0.120	1.87±0.310-15.7±11.4*

由表15结果可见，延胡索总碱20～100ug/ml对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度有明显抑制作用，并与剂量呈正相关性。白芍总苷400～1000ug/ml对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度亦有明显抑制作用。

结论

实验结果表明，延胡索总生物碱和白芍总苷胶囊中延胡索总生物碱和白芍总苷均可显著抑制缩宫素所致小鼠“痛经”模型的扭体反应，明显延长小鼠扭体潜伏期，有效剂量范围延胡索总碱为50～300mg/kg，白芍总苷为50～600mg/kg，最佳剂量为延胡索总碱200、100、50mg/kg与白芍总苷100、50mg/kg；明显延长小鼠热疼痛反应时间，显著提高小鼠痛域值，并可持续4h以上。有效剂量范围延胡索总碱为25～300mg/kg，白芍总苷为50～600mg/kg。其中延胡索总碱50、25mg/kg与白芍总苷100、50mg/kg于药后1h即可明显起效；可显著抑制醋酸引起的小鼠扭体反应，有效剂量范围延胡索总碱为100～300mg/kg，白芍总苷为50～200mg/kg。其中延胡索总碱200mg/kg与白芍总苷100mg/kg作用最佳；对二甲苯所致的小鼠耳肿胀有良好的抑制作用，有效剂量范围延胡索总碱为50～200mg/kg，白芍总苷为200～400mg/kg，作用最强的为延胡索总碱100mg/kg与白芍总苷400mg/kg；延胡索总碱对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度抑制明显，有效剂量范围为20～100ug/ml，并有良好的量效关系；白芍总苷对正常大鼠离体子宫平滑肌收缩幅度的抑制亦有显著作用，有效剂量范围为400～1000ug/ml。

综上所述，延胡索总生物碱200、100、50mg/kg和白芍总苷200、100、50mg/kg为口服最佳有效剂量范围；并能显著抑制正常大鼠离体子宫平滑肌的收缩幅度。表明延胡索总碱与白芍总苷具有明显的镇痛与抗炎作用。二者的最佳配比还有待进一步正交实验研究。

Claims (6)

1.一种药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物由总生物碱和总甙组成，所述的总生物碱是从植物延胡索中提取的，所述的总甙是从植物芍药中提取的，其中总生物碱与总甙的重量比为1∶4.4。

2.一种含有权利要求1所述药物组合物的药物制剂，其特征在于：所述的药物制剂由所述的药物组合物与药学上可接受的药用辅料制成临床上可接受的药物制剂。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于：所述的药物制剂为针剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液体制剂、膏剂或胶囊剂。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于：所述的针剂为粉针剂、输液剂或脂肪乳剂。

5.权利要求1所述的药物组合物或权利要求2-4任意一项所述的药物制剂在制备治疗子宫内膜异位、痛经以及镇痛与抗炎的药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的子宫内膜异位为盆腔外内异症。

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