CN101835481A - 用于治疗慢性伤口的草药提取物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从草木犀属(黄香草木犀)制备草药提取物的方法,优选包括通过高频脉冲电磁场进行处理。所述草药提取物任选包括硒和/或尿素和/或果糖和/或甘油磷酸(或其钠盐),可用于治疗慢性伤口、特别是与正常的伤口修复能力减弱的状况有关的慢性伤口,优选用于治疗糖尿病足溃疡和/或褥疮。
Description
技术领域
本发明涉及从黄香草木犀(Melilotus officinalis)制备草药提取物的方法,所述方法任选包括通过脉冲电磁场进行处理。本发明还涉及通过所述方法制备任选包括尿素、果糖、硒和/或甘油磷酸或其钠盐的草药提取物,以及涉及其用于治疗慢性伤口的用途,所述伤口优选是糖尿病足溃疡和/或褥疮。本发明还涉及药物组合物和药盒。
背景技术
几个世纪以来,糖尿病是人类的主要问题之一。这种疾病特征在于胰腺β-细胞的胰岛素分泌缺失和/或外周细胞表面上的胰岛素受体受损;二者都表现出血流中临床异常的高葡萄糖浓度。
仅在美国,估计1820万人(人口的6.3%)患有糖尿病,影响终生的严重状况。其中,已经确诊了1300万例。约520万人还没有确诊。每年,在20岁以上,大约有130万人被诊断患有糖尿病。
糖尿病是世界上公认的死亡和残疾的诱因之一。在2000年,其在美国是第六主要死亡原因。然而,作为死亡证上的潜在死亡原因,糖尿病可能被少报。患有糖尿病的人中约65%的死亡被归因于心脏病和中风。
糖尿病涉及影响几乎每个身体部分的长期并发症。该疾病经常引起失明、心血管疾病、中风、肾衰竭、截肢、和神经损伤。未经控制的糖尿病可以使妊娠变复杂,并且在患有糖尿病的妇女所生育的婴儿中更常见先天缺陷。
在2002年,在美国的糖尿病花费总计1320亿美元。包括残废救济金、丧失的工作时间、和早亡在内的间接费用总计为400亿美元;包括住院、医疗护理、和辅助治疗在内的糖尿病护理的直接医疗费用总计为920亿美元。
糖尿病具有短期不利影响以及长期不利影响。控制血糖水平是用于减少和推迟糖尿病的长期不利影响的最佳预防性处理,但这并不总是可能的,且取决于几个因素,包括高血糖水平的持续时间、患者的生理学和种族以及疾病的严重程度,经常会出现长期的不利影响。三个主要的长期不利影响是视网膜病、肾病和神经病。视网膜病影响视网膜并在该疾病的最终阶段引起失明。肾病影响肾并使其机能失常,而神经病会引起四肢感觉丧失,主要是足的感觉丧失。作为继发的不利影响,足神经的神经病引起伤口的产生,该伤口通常被细菌感染和被其它机会致病菌感染。这些伤口的治疗通常不成功,并最终导致足的部分或完全截肢。
在截肢之后,糖尿病患者是残废人,另外还会由糖尿病产生若干其它问题。残疾对人类来说具有社会性和经济上的副面影响。
在患有糖尿病的人中,15%会在其生命中经历足溃疡;足溃疡是糖尿病患者未来下肢截肢的主要预报因子。实际上,患有足溃疡的人有约14-24%需要截肢。因此,糖尿病是非创伤性下肢截肢的主要原因也就不足为奇了。尽管在最近十年为了预防截肢进行了很多努力,但是患糖尿病的人的下肢截肢的发生率仍然在上升。因此,可以降低截肢比例的适当的伤口护理技术对于预防策略来说是必须的。
诸如糖尿病性溃疡或褥疮的慢性伤口的愈合是重要的临床课题。加速慢性伤口愈合的已知方法包括:
-压力释放(Armstrong DG等人,“Off-loading the diabetic footwound,a randomized clinical trial”,Diabetes Care 2001,24,1019-1022;Ha Van G等人,“Nonremovable,windowed,fibroglasscast boot in the treatment of diabetic plantar ulcers:Efficacy,safety,and compliance”,Diabetes Care 2003,26,2848-2852;Mueller MJ等人,“Effect of Achilles tendon lengthening onneuropathic plantar ulcers.A randomized trial”,J.Bone JointSurg.2003,85A,1436-1445;Moffat CJ.等人,“Randomized trialof four-layer and two-layer bandage system in the managementof chronic venous ulceration”,Wound Rep.Reg.2003,11,166-171),
-水疗,
-超声波处理,
-电刺激(Peters EJ等人,“Electric stimulation as an adjunctto heal diabetic foot ulcers:a randomized clinical trial”,Arch.Phys.Med.Rehabil.2001,82,721-725),
-高压氧合作用,
-真空辅助的闭合治疗,
-皮肤移植和人造皮肤替换,以及组织工程学领域的方法(MarstonWA等人,“The efficacy and safety of Dermagraft in improvingthe healing of chronic diabetic foot ulcers”,Diabetes Care2003,26,1701-1705),
-手术静脉康复(Bianchi C等人,“Subfascial endoscopicperforator vein surgery combined with saphenous vein ablation:Results and critical analysis”,J.Vasc.Surg.2003,38,67-71),
-基因治疗(Yamasaki K等人,“Reversal of Impaired WoundRepair in iNOS-deficient Mice by Topical Adenoviral-mediatediNOS Gene Transfer”,J.Clin.Invest.,Vol.101,No.5,March1998,967-971),
-使用调节蛋白酶的伤口敷料(Cullen B等人,“Mechanism ofaction of Promogran,a protease modulating matrix,for thetreatment of diabetic foot ulcers”,Wound Rep.Reg.2002,10,16-25),
-使用装载生长因子的凝胶剂,诸如PDGF-BB(Regranex)或EGF(Tsang MW等人,“Human Epidermal Growth Factor enhanceshealing of diabetic foot ulcers”,Diabetes Care 2003,26,1856-1861),
-和最后的局部应用释放NO的水凝胶(Bohl Masters KS等人,“Effect of nitric oxide releasing poly(vinyl alcohol)hydrogeldressings on dermal wound healing in diabetic mice”,Wound Rep.Reg.2002,10,286-294)。
然而,用于治疗慢性伤口的已知方法具有某些不利和缺点。也就是说,他们中有一些非常昂贵并因此通常不实用,有一些要求对于患者来说是非常困难或痛苦的方案,并且相当常见的是它们是不充分有效的,因为慢性伤口的特征在于非常高的复发率。
尽管慢性伤口的治疗有大的进展,但是仍需要允许以相对低的复发率完全治愈慢性伤口的治疗方法。
因此,需要提供以降低的复发率加速治愈慢性伤口的可供选择的、改进的和优异的药学方法,它允许避免任何手术干预。
因此,本发明的目的是提供用于治疗慢性伤口的有用的药学方法,所述伤口优选是糖尿病足溃疡和/或褥疮,所述方法是有效的(即,具有最小的复发危险)且易于给药。
令人惊讶的是,本发明的草药提取物可以治疗这类慢性伤口,诸如糖尿病足溃疡、神经性溃疡,包括神经性足底(forefoot)溃疡、糖尿病性褥疮或糖尿病性静脉溃疡。
此外,本发明的草药提取物还可以用于治疗褥疮,褥疮影响由于任何原因而长时间停留在一个地方的人。
一般说来,本发明提供的草药提取物能够用于治疗与诸如糖尿病、以及老年患者或处于类固醇治疗过程的患者中正常伤口愈合能力严重削弱的状态有关的任何慢性伤口。
有利地,本发明的草药提取物提供伴随加速伤口闭合的完全治愈,并且出乎意料的是,它还在愈合伤口中改善组织的质量,伴随疤痕上非常有效的毛发生长。获得健康的瘢痕组织确保了将来溃疡复发的较低比例。
在现有技术中,草木樨(Melilotus)也称为甜的草木樨(sweetclover),已知其在内部或外部给药时对一些病症有益。
德国专利申请DE102004022746描述了用于治疗血栓形成的口服给药的片剂形式的几种组分的干燥组合物,所述组分包括阿司匹林和草木樨(melilot)叶、七叶树(horse chestnut)种子和假叶树(ruscus)根的干提取物。
欧洲专利EP 1 214 084描述了用于口服给药的包括银杏的双黄酮提取物、白矢车菊苷元、草木犀和/或七叶树提取物,积雪草提取物和墨角藻提取物的多组分抗氧化组合物,其可用于治疗循环问题,诸如静脉炎、静脉曲张、动脉硬化、痔疮和高血压,以及特别是男性的局部肥胖问题(所谓的“肥膘”),当然也用于妇女(蜂窝组织),即用于治疗脂肪过剩。
欧洲专利EP 1 214 085描述了包括银杏的双黄酮提取物、白矢车菊苷元、草木犀和/或七叶树提取物、和积雪草提取物的用于口服给药的多组分抗氧化组合物,其可用于治疗由对血管内皮、细胞外基质或对动脉、静脉或淋巴系统的周围组织的损害、以及高血压所引起的循环和慢性退化问题。
欧洲专利申请EP 1 426 030描述了供外用的化妆品或皮肤病学组合物,包括草木犀提取物以及其它许多植物提取物,可用于预防或改善皮肤的老化。
日本专利申请JP 2001322943描述了尤其和任选地包括草木犀提取物的多草药治疗剂,可用于治疗丘疹。
美国专利申请US 2004/0156873描述了包括草木犀提取物作为多种血液微循环改善剂之一的多组分局部用组合物,用于治疗诸如粉刺和酒糟鼻等的皮肤问题。
国际公开WO 98/51291描述了包括尤其是以香豆素和/或草木樨和芦丁提取物作为活性化合物的药物组合物,其作用于患者的线粒体膜蛋白质复合物,可用于治疗缺血和/或与缺血或能量不足有关的疾病。
然而,现有技术文献中没有一个提出使用草木犀属的草药提取物来治疗慢性伤口,特别是用来治疗糖尿病足溃疡和/或褥疮。
发明内容
本发明的目的通过如下的用于制备草药提取物的方法得以解决,所述方法包括以下步骤:
(a)提供衍生自草木犀属(Melilotus sp.)的植物材料;
(b)干燥所述植物材料;
(c)添加有机溶剂;
(d)将植物材料和有机溶剂的混合物孵育;和
(e)获得草药提取物。
在一个实施方案中,所述植物材料衍生自黄香草木犀。
优选地,衍生自黄香草木犀的植物材料包括叶子和/或小的茎。
在一个实施方案中,步骤(b)中的干燥在大约20-50℃的温度范围内进行,优选大约37-45℃,最优选大约42℃。
优选地,步骤(b)中的干燥进行大约3-4天的时间。
在一个实施方案中,所述有机溶剂是乙醇,优选约60-96%(v/v),更优选为约80-96%(v/v),最优选为约96%(v/v)。
在一个实施方案中,步骤(d)中的孵育进行约10-40天的时间,优选约22-38天,最优选约25-35天。
在一个实施方案中,步骤(d)中的孵育在大约20-50℃的温度范围内进行,优选大约37-45℃,最优选大约42℃。
在一个实施方案中,所述方法另外包括以下步骤:
(f)添加尿素。
在一个实施方案中,所述方法另外包括以下步骤:
(g)添加果糖。
在一个实施方案中,所述方法另外包括以下步骤:
(h)添加甘油磷酸和/或其钠盐。
在一个实施方案中,所述方法另外包括以下步骤:
(i)添加硒和/或其有机盐或无机盐。
优选地,硒或其盐以约1-100mg/l的游离硒的浓度添加,优选约5-50mg/l,最优选约10-20mg/l。
在一个实施方案中,所述方法另外包括以下步骤:
(j)使草药提取物暴露于脉冲电磁场中。
在一个实施方案中,电磁场脉冲具有正弦、矩形和/或随机的形状。
在一个实施方案中,脉冲电磁场具有约5-750kHz的频率,优选约50-350MHz的频率,最优选约250MHz的频率。
在一个实施方案中,脉冲电磁场具有约10-200瓦的功率,优选约20-100瓦的功率,最优选约45瓦的功率。
在一个实施方案中,脉冲电磁场具有100-150微特斯拉的磁场强度。
在一个实施方案中,步骤(j)中的暴露进行大约3-5分钟的时间。
在一个实施方案中,步骤(j)中的暴露重复进行,优选进行三次。
本发明的另一个目的通过可通过本发明的方法得到的草药提取物来解决。
本发明的另一个目的通过本发明的或通过本发明方法制备的草药提取物用于治疗受试者的慢性伤口的用途来解决。
本发明的另一个目的通过本发明的或通过本发明方法制备的草药提取物用于制备药物组合物的用途来解决,所述药物组合物用于治疗受试者的慢性伤口。
在一个实施方案中,所述慢性伤口涉及其中正常的伤口修复能力减弱的状况。
在一个实施方案中,所述慢性伤口与诸如糖尿病的状况有关和/或发生在老龄患者中、或发生在进行类固醇治疗过程中的患者中。
在一个实施方案中,慢性伤口为糖尿病足溃疡,神经性溃疡,包括神经性足底溃疡、糖尿病性压迫性溃疡或糖尿病性静脉溃疡,与长期残疾有关的褥疮或压迫性溃疡。
在一个实施方案中,所述慢性伤口是糖尿病足溃疡。
在一个实施方案中,所述慢性伤口是褥疮。
在用途的一个实施方案中,受试者是脊椎动物,优选哺乳动物,最优选是人。
在一个实施方案中,受试者没有怀孕。
本发明的另一个目的通过药物组合物来解决,所述药物组合物包括本发明的或通过本发明方法制备的草药提取物。
在一个实施方案中,所述药物组合物另外包括药学可接受的载体。
在一个实施方案中,药物组合物配制为用于注射给药。
在一个实施方案中,药物组合物配制为用于口服给药。
在一个实施方案中,药物组合物配制为用于局部给药。
本发明的另一个目的通过药盒来解决,所述药盒包括本发明的药物组合物。
本文使用的术语“慢性伤口”是指如下的临床状况,该临床状况具有伤口长期不愈合并经常有很强的复发倾向的特征性症状。慢性伤口通常与正常伤口愈合能力减弱的状况有关,诸如糖尿病、老龄患者、活动能力有限的患者、或类固醇治疗过程中的患者。因此,患有这种愈合不良的伤口的患者是那些罹患糖尿病性溃疡(包括糖尿病足溃疡)、糖尿病性神经性溃疡(包括神经性足底溃疡)、糖尿病性压迫性溃疡或糖尿病性静脉溃疡的患者,以及受褥疮困扰的活动能力受限的患者。褥疮通常影响由于任何原因而长时间呆在一个地方的人。
术语“随机的形状”在本文中是指电磁场脉冲呈噪音的形式。优选地,电磁场脉冲是矩形形状的并且与内部正弦波相组合。脉冲电磁场的“功率”(瓦)是指例如有效功率。脉冲电磁场的“磁场强度”值(特斯拉)表示例如正负峰间距离。
本文使用的术语“药物组合物”意在包括本发明的草药提取物。还考虑了包括本发明草药提取物的至少一种药学活性成分和/或所述活性成分的至少一种衍生物或类似物及其相应的盐的药物组合物。
所述药物组合物可以是例如液体形式,例如为溶液、糖浆、酏剂、乳液、和悬浮液,或者为固体形式,例如胶囊、囊片、片剂、丸剂、粉末、和栓剂。还考虑了颗粒或半固体形式和软胶囊。在药物组合物是液体或粉末时,剂量单位任选地通过例如茶匙来测量。除了草药提取物或药学活性成分之外,药物组合物可以包括例如调味剂、甜味剂、染料、防腐剂、稳定剂、着色剂、稀释剂、助悬剂、制粒剂、润滑剂、粘结剂和崩解剂。片剂可以是例如包衣的。可注射的液体应该是无菌的。还考虑了透皮递送系统和脂质体系统。提及的所有制剂都可以用于直接释放、定时释放和持续释放药物。
本文使用的术语“药学可接受的”是指至少是无毒的。如本公开中所示的,“药学可接受的载体”可以为各种形式,取决于期望的给药途径。该术语包括常规的药学稀释剂(诸如,水或乙醇)和常规的压片成分或包囊成分(诸如,玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙、明胶胶囊或树胶)。
本发明的药物组合物可以通过不同的途径给药,诸如,经口、舌下、非肠道、静脉内、腹膜内、经鼻、经阴道、经直肠、皮下、真皮内、肌内和局部给药。剂量单位可以一天、一周或一个月给药一次或数次。递药还可以连续地进行,例如通过输注或通过透皮持续释放系统。
因此,本发明提供了任选地通过电磁场辐射处理的得自黄香草木犀的草药提取物。临床资料显示了所述提取物对于治疗慢性伤口的有利作用,所述慢性伤口诸如糖尿病足溃疡和/或褥疮。在体外和在实验动物模型中进行的研究显示,所述提取物不产生毒性、诱变性、或致癌性。然而,妊娠是禁忌症。
附图说明
图1示出了患者在治疗开始时、治疗一个月后和治疗两个月后的平均溃疡面积(cm2)图。每两者之间的差异都是统计学上显著的(P值为0.0001、0.002和0.009)。所述草药提取物通过注射或者作为局部用膏剂对人类患者给药。
图2-5显示在对糖尿病大鼠模型的皮肤伤口进行的本发明的草药提取物的体内试验过程中拍摄的照片。所述草药提取物以覆盖试验组动物伤口的包含草药提取物溶液的敷料形式施用。
图2提供了在治疗第1天拍摄的试验组大鼠的照片。
图3提供了在治疗第22天拍摄的试验组大鼠的照片。所述伤口完全愈合并有新的、长的皮毛覆盖整个疤痕区域。看不到先前伤口的迹象。
图4提供了在试验第1天拍摄的对照组大鼠的照片。
图5提供了在试验第22天拍摄的对照组大鼠的照片。所述伤口闭合,但是疤痕仍然显著地开裂并完全裸露。
图6-13示出了对人类受试者的糖尿病足溃疡进行的本发明草药提取物的临床试验过程中拍摄的照片。
图6提供了在治疗开始时拍摄的得自草药提取物的口服形式组的糖尿病足溃疡的照片。
图7提供了在治疗结束时拍摄的得自草药提取物口服形式组的上述患者的糖尿病足溃疡的照片。
图8提供了在治疗开始时拍摄的得自草药提取物的局部给药形式组的另一个糖尿病足溃疡的照片。
图9提供了在治疗结束时拍摄的得自草药提取物局部给药形式组的上述患者的糖尿病足溃疡的照片。
图10提供了在治疗开始时拍摄的得自口服和局部给药草药提取物的联合形式组的糖尿病足溃疡的照片。
图11提供了在治疗结束时拍摄的得自口服和局部给药草药提取物的联合形式组的上述患者的糖尿病足溃疡的照片。
图12提供了在治疗开始时拍摄的得自草药提取物的静脉注射形式组的另一个糖尿病足溃疡的照片。
图13提供了在治疗结束时拍摄的得自草药提取物静脉注射形式组的上述患者的糖尿病足溃疡的照片。
具体实施方式
下面通过以下实施例更详细地描述本发明,所述实施例意在用于举例说明本发明。然而,所示实施例不具有对权利要求的主题或对保护范围的任何限制作用。
实施例1:粗草药提取物的制备
从野地收集黄香草木犀的叶子和小的茎。在分离有用部分和进行最初的清理之后,将材料在木制的网状结构上在暗处干燥3-4天。在经过干燥的条件下,植物材料应该是绿色的,颜色没有任何变化,叶子和茎应该是易碎的。对于提取,使用气密的玻璃容器。将经过干燥的植物材料打碎为小片(2-5cm)并置于玻璃容器中,使得不留下空间。在压紧(压缩)之后,添加EtOH(96%v/v),直到容器完全填满。将容器置于孵育箱(37-45℃,优选42℃)中,持续10-40天,直到出现深绿色溶液。
在10-40天之后,在植物材料为无色时,向每升的黄香草木犀提取物分别添加50mg尿素、700mg果糖、16mg硒和1000mg的甘油磷酸钠盐。然后,将容器再次密封并在孵育箱中在42℃保持24小时。通过使用布滤器将提取物从植物材料中分离来收集提取物。
实施例2:电磁处理
在孵育之后,将装有实施例1提取物的各容器暴露于电磁场四次,每次三分钟,之后将它们合并在一起。使得到的提取物分别依次通过5、0.45和0.22μm的滤膜,并分配到无菌小瓶中。在贴标签和包装之后,草药提取物随时可用。
粗提取物所暴露的电磁场是脉冲的、大功率的和单极的,因为在磁脉冲发生器(MI G)装置中生成的电流方向不会改变。脉冲磁场具有5kHz-750kHz的非常高的频率。在本实施例中,使用矩形形状的脉冲。然而,同样考虑了正弦形状或随机形状。优选地,电磁场脉冲是矩形形状的并且与内部正弦波组合。猜测所产生的脉冲的特定种类引起分子中原子的物理构造和/或分子的排列产生了某些变化,并由此导致化学性质的改变。
将草药提取物暴露于电磁场3次,每次2-5分钟,优选5分钟。所使用的脉冲的电功率为约20-100瓦,在使用45瓦时得到最佳效果。
实施例3:临床前研究-关于毒性的试验
在临床前研究中,考查了实施例2的本发明草药提取物的急性毒性和慢性毒性。为了研究药物急性毒性,向BALB/c小鼠和Wistar大鼠进行单次的i.m.(肌内)注射。药物慢性毒性在Wistar大鼠中研究3个月的时间,在狗中研究1个月。还研究了草药提取物的可能的诱变性、胚胎毒性、致畸、变应原性、免疫毒性性质,以及其对生殖功能的影响。
关于毒性的结论:
总结实施例2的草药提取物的毒性研究的结果,我们可以注意到,在对实验动物单次i.m.注射草药提取物时,制备物是无毒的,并且制备物在i.m.注射过程中被Wistar大鼠和狗充分耐受。
该研究表明,以每只小鼠(BALB/c小鼠)0.5-1.0ml的剂量单次i.m.注射1∶10稀释在生理盐水中的草药提取物不会引起动物的中毒和死亡。将给药剂量提高到每只小鼠1.5-2.0ml(75-100ml/kg)时,导致动物运动活动减少和抑郁,但是没有观察到死亡。
对BALB/c小鼠肌内注射1∶5溶解在生理盐水中的草药提取物后,观察到动物的疼痛、深度抑郁和死亡。对BALB/c小鼠肌内注射和腹膜内注射接近LD50的剂量时,发生动物的抑郁、麻醉和睡眠。在小鼠中,LD50的草药提取物的中毒模式与作为媒介物存在于草药提取物中的乙醇的中毒相似。根据毒性指数,证明草药提取物在以LD50水平(42-52ml/kg)对BALB/c小鼠和Wistar大鼠肌内注射和腹膜内注射给药时是低毒性的。没有观察到给定动物种类对制备物的毒性作用的敏感性方面的特异性差异和与性别相关的差异。另外,在BALB/c小鼠中,在肌肉内和腹膜内给药方式之间没有显著性差异。
通过在Wistar大鼠中每天肌肉注射0.07和0.21ml/kg的制备物持续三个月和在狗中每天肌肉注射0.07ml/kg的草药提取物持续1个月来进行慢性毒性实验。在注射之前将所提及的制备物的剂量在无菌生理盐水中1∶10稀释。
研究结果表明,在Wistar大鼠中进行的为期3个月的慢性实验中的0.07和0.21ml/kg剂量的草药提取物、和在狗中进行的为期1个月的慢性实验中的0.07ml/kg剂量的草药提取物被动物充分耐受,并且不影响试验用动物的血液学指数、主要器官的功能状态(根据所用的生化试验数据和ECG)。在慢性毒性实验结束时,在这些动物组中没有观察到内脏的病理形态学变化或毒性变应原性反应。在Wistar大鼠中以0.07和0.21ml/kg和在狗中以0.07ml/kg的剂量长期i.m.注射1∶10稀释在生理盐水中的制备物没有表现出局部刺激作用。
根据Pharmacological State Committee of Ministry of PublicHealth的要求,进行了关于草药提取物的诱变性质的研究。
研究了制备物在埃姆斯试验中诱导指示物微生物鼠伤寒沙门氏菌基因突变的能力、在杂交的F1代(CBA*C57B16)小鼠中诱导骨髓细胞染色体畸变的能力、在小鼠胚胎细胞中引起显性致死突变的能力、以及在SOS显色检测中大肠杆菌PQ 37的DNA修复系统。
这些研究的结果显示,草药提取物不具有任何诱变性质。
在所有的妊娠期过程中,与对照组相比较,对怀孕的Wistar大鼠肌肉注射0.21ml/kg剂量的草药提取物不影响怀孕雌鼠的体重增加。与对照组相比较,实验动物的孕期、活胎数、着床位置、黄体和胚胎体重未显示显著差异。实验组的着床前死亡系数没有显著变化,而与对照组相比较,实验组的着床后死亡有所减少。
在对胎畜的标准部分进行的肉眼检查和显微研究中,在产前期接受0.21ml/kg草药提取物影响的胎畜中,观察到所有动物中有6.7%的胎畜发育不全。这种影响可以被评价为胚胎发育缺陷。
对产前期暴露于0.21ml/kg草药提取物的大鼠胎畜进行的用于研究骨系统发育的茜素染色制备部分的分析未显示骨骼发育的缺陷。但是,同时观察到大部分钙化点的骨化延迟。
在妊娠的第1天至第20天接受的0.21ml/kg草药提取物肌肉注射的影响下,与对照组相比较,观察到新生大鼠的数量减少和死胎大鼠的数量增加。在产前过程中暴露于草药提取物的大鼠体重低于对照组的体重指数。关于后代发育的实验结果显示出身体发育的延迟。
因此,该实验旨在证实在妊娠的第1天到第20天肌肉注射0.21ml/kg草药提取物对于暴露于草药提取物的动物具有胚胎毒性和致畸作用。因此,妊娠可以被认为是草药提取物的禁忌症。
在对雄性大鼠为期10周和对雌性大鼠为期2周的每天肌肉注射0.21ml/kg草药提取物时,没有证实制备物对动物生殖功能的影响。
对豚鼠进行的草药提取物的变应原性质的研究表明,用于敏化过程的以1天间隔给药5次的0.07和0.14ml/kg剂量的草药提取物的肌肉注射、以及在敏化之后在第14天和第21天进行0.14ml/kg确定剂量的草药提取物的腹膜内注射时,制备物不引起过敏性休克。
所研究的草药提取物剂量和敏化时间表对于豚鼠没有迟发型超敏反应的变应原作用,在小鼠的腘淋巴结反应中也没有变应原作用。
0.07ml/kg和0.18ml/kg的草药提取物剂量对于脾中的抗体形成细胞和包含细胞核的细胞的数量没有影响,并且在小鼠中不引起迟发型超敏反应。所述数据是草药提取物对于体液和细胞免疫没有负面影响的证明,并由此是制备物没有免疫毒性的证明。
基于在检验本发明的草药提取物的毒性所进行的临床前试验中的所有试验和所得到的结果,推荐草药提取物用于临床试验,但是孕妇忌用。
实施例4:草药提取物溶液对糖尿病大鼠的皮肤伤口愈合的影响
概述
诸如糖尿病性溃疡的慢性伤口的愈合是重要的临床问题。加速愈合的方法包括使用负载生长因子的凝胶、高压氧、移植、和人造皮肤替换。这项研究考查了对包括本发明草药提取物的新的天然混合物的体内响应。对伤口愈合不良的糖尿病大鼠模型进行了初步动物试验,将本发明的草药提取物与蒸馏水相比较。结果,草药提取物治疗组的伤口完全闭合的时间更短。从第9天开始,伤口愈合的差异是明显的。用草药提取物治疗的动物具有减少的瘢痕组织并且毛皮生长完全,而用水处理的动物中明显有毛皮生长受损的疤痕。这项研究结果表明,这种新的草药提取物的经皮施用具有调节伤口愈合和刺激毛皮生长的能力。
引言
诸如压迫性溃疡、糖尿病足溃疡、和静脉溃疡的慢性伤口占所有皮肤创伤的大约70%。象这样的慢性伤口引起巨大的花费且损害数百万人的生活质量。大约每5名糖尿病足溃疡中就有1名最终导致截肢。伤口如果不以有序序列或时间序列愈合,或者愈合过程不产生结构完整性,则认为该伤口是慢性的或未愈的。不恰当地愈合的伤口不可能具有所需的机械完整性来保持愈合。
考虑到自由基在糖尿病的发病机理中的作用以及所述新的草药提取物的非常高的清除自由基的能力及其抗氧化能力(BiomedPharmacother.2005 Aug;59(7):365-73.Review.),我们的目的在于考查这种草药提取物的经皮暴露如何可以促进糖尿病性伤口的大鼠模型中的愈合。
方法
用于新的草药提取物(实施例2)的体内试验的动物模型是糖尿病大鼠的背部皮肤的全层伤口。使用得自PSRC/TUMS动物房的体重200-250g的Wistar大鼠。将动物关在单独的笼子中。通过给予链脲霉素(Sigma-Aldrich,UK)诱导糖尿病。链脲霉素以55mg/kg的剂量腹膜内给药。在链脲霉素给药前,测定大鼠的基线血糖。在48小时之后,再次测量血糖,以确保大鼠患有糖尿病。如果血糖水平加倍则证实糖尿病的诱导成功。用血糖测量仪(Infopia Co.,Korea)测定葡萄糖。连续5天进行血糖的测定,以确保糖尿病的存在。关于链脲霉素诱导的糖尿病的存在,将体重损失过多和变得虚弱的动物以及血糖水平不确定的动物排除在研究之外。总共使用14只大鼠,对照组和试验组分配相同数量的大鼠。试验组使用包括本发明草药提取物的0.5ml溶液,对照组敷用蒸馏水。在时间=第0天,产生全层的圆形的15mm直径伤口(根据Wound Rep.Reg.2002,10:286-294)。通过腹膜内给药戊巴比妥(55mg/kg)将大鼠麻醉,并使用聚维酮碘准备背部皮肤的手术。使用手术剪产生伤口。在时间=第0天,将所制备的敷料直接放置在伤口上。将伤口用无菌的气体覆盖并小心地包裹。在手术后的每2-3天,在大鼠麻醉的情况下为伤口再敷用新的对照或试验敷料。伤口用无菌盐水冲洗以除去杂物和清理伤口区域。使用数码相机拍摄伤口的照片。对照片从伤口大小和新上皮细胞出现方面进行伤口愈合的检查。在拍照后,将新鲜的敷料置于伤口上并将伤口再次覆盖。如下实现偏见的控制,为实验组的每只动物指定编码。研究者对于每个组的身份是不知情的,且试验组和对照组具有相似的外观。在最终的4周分析结束后将编码破坏。所有的动物实验以由UMDNJ IACUC顾问委员会批准的适当操作规程进行。
图2-5显示了在对糖尿病大鼠模型的皮肤伤口进行的本发明草药提取物的体内试验过程中拍摄的照片。所述草药提取物以覆盖试验组动物伤口的包含草药提取物溶液的敷料形式施用。
图2和3提供了分别在治疗的第1天和第22天拍摄的试验组(用草药提取物处理的)大鼠的照片。在试验组中,在治疗的第15天,伤口完全闭合并有新的短的毛皮覆盖疤痕区域。在治疗的第22天,伤口完全愈合并有新的长的毛皮覆盖整个疤痕区域。看不到先前伤口的迹象。
图4和5分别提供了在治疗的第1天和第22天拍摄的对照组(未经处理的)大鼠的照片。在对照组中,在试验的第15天,伤口仍未闭合。在试验的第22天,伤口闭合,但是疤痕仍然是显著地裂开并完全裸露。
草药提取物对伤口愈合的体内作用
如图中所示,在试验组和对照组中的伤口面积和周长是相似的,然而,在试验组中具有更快闭合的趋势,特别是在第15天,伤口面积和周长的差异是最显著的。用草药提取物治疗的动物的伤口完全闭合的时间更短。在对照组和试验组中,伤口面积都是在第9天开始减小并在第15天首次出现大致完全的伤口闭合(除了七只大鼠中的一只)。到第22天,在两个组中伤口基本上闭合,但是与用水治疗的组相比,草药提取物治疗组的毛皮生长特别地完整。
结论
这项研究结果表明,包括本发明草药提取物的经皮制剂具有增强伤口愈合的能力。然而,与其说加速伤口闭合,倒不如说草药提取物在这项研究中似乎是在愈合伤口时改善组织性质,因为其毛皮生长与对照组相比更有效。慢性伤口的特征不仅在于不能适时愈合,而且在于在愈合后不能保持闭合,因此,闭合时间可能不是治疗效力的唯一相关终点或唯一基础。
在用草药提取物治疗的试验组动物中得到的更健康的瘢痕组织允许预期更低的复发率。
实施例5:在糖尿病足溃疡的患者中评价草药提取物的最大耐受剂量(MTD)(I期临床试验)
对糖尿病足的治疗的主要目标是愈合溃疡。提出了许多疗法用于治疗糖尿病足,但是它们都在溃疡改善和预防截肢方面具有不完全的作用。需要更有效的疗法。因此,已经将实施例2的可注射的草药提取物引入愈合糖尿病足的治疗和进程中。这项研究的主要目标是评价用于治疗糖尿病足溃疡的静脉内注射的这种提取物的最大耐受剂量。
以公开的标记、两阶段的设计进行I期临床试验,不使用对照组。6名18岁以上的男性糖尿病患者,在签署知情同意书之后无排除条件地参与。
对患者用1小时时间静脉内给药在100ml氯化钠0.9%溶液中稀释的实施例2的草药提取物来进行治疗。最初的剂量是每天2mL,持续28天,在随后的阶段逐步提高剂量。
对所有6名患者进行本发明提取物的DLT(剂量极限毒性)的评价。
根据临床和实验室评价,在提取物剂量逐步提高(分别为每天2ml、4ml、6.7ml和10ml)的4名患者中,在持续28天时没有观察到副作用。
在草药提取物的逐步提高的剂量的第5个水平(每天13.5ml),患者在治疗的第8天在注射部位出现静脉炎。在改变注射部位之后,在相同剂量下继续发生静脉炎,在将剂量降低到6.7ml之后,静脉炎消失。
在剂量增加到13.5ml/天的水平的第二名患者中再次观察到静脉炎,因此将提取物以6.7ml/天继续治疗。使用13.5ml/天的剂量没有观察到其它副作用。
表1:治疗组和观察到的副作用
患者姓名 | 日剂量 | 剂量限制性副作用(DLT) |
M.B. | 2ml | 无 |
Z.M. | 4ml | 无 |
M.H. | 6.7ml | 无 |
Gh.A. | 10ml | 无 |
M.H. | 13.5ml | 静脉炎 |
D.N. | 13.5ml | 静脉炎 |
从2ml/天开始以逐步提高的剂量治疗6名患者。直到10ml/天的剂量易于被耐受,没有观察到副作用或DLT。两个病例在13.5ml/天的剂量下表现出静脉炎,其被修正为给予降低到6.7ml/天的剂量的提取物。其它临床和实验室评价证明直到10ml/天的剂量没有副作用。推断10ml/天的剂量是最大耐受剂量(MTD),且DLT仅是注射部位的局部静脉炎。
实施例2的草药提取物是一种安全的药物,除了静脉炎之外没有其它副作用,可以以高的可靠度用于糖尿病足溃疡患者。
实施例6:草药提取物对糖尿病足溃疡的药理学作用(II期临床试验)
患者和方法
本研究在伊朗的Shiraz的Shiraz医药大学的内分泌和代谢研究中心进行。如果患者满足以下录入标准则患者适合于本研究:18岁以上,患糖尿病足溃疡至少30天的持续时间和至少1cm2的溃疡面积(最大长度×最大宽度)。主要的排除标准包括如下:感染的临床征兆;目标伤口具有暴露的骨;可能妨碍伤口愈合的并存疾病或病症(例如,癌、血管炎、结缔组织疾病、或免疫系统病症);已知的正在滥用酒精或其它药物或接受透析、皮质类固醇、免疫抑制剂、放射治疗、或化学疗法,已知的任何药物过敏;非卧床患者不愿意或不能被装备适当的鞋袜(shoe gear)或卸载(off-loading)装置。
在知情同意之后,在基线/初访时,获得并记录患者现状的完整病历和鉴定。还记录伴随的药物和它们的适应症。通过目前的活动水平、不卧床状态、和溃疡或截肢历史来记录患者的糖尿病状况(包括持续时间、类型、和处理)。
血液检查结果包括糖基化血红蛋白、葡萄糖、白蛋白、肌酸酐、血清尿素氮、和碱性磷酸酶的水平;肝功能;和育龄妇女的人绒毛膜促性腺素水平。在基线测量目标伤口的最大长度和宽度。将目标伤口在基线拍照,随后每月拍照。在清洗和/或清创术局部感染之前和之后评价目标伤口并评价伤口状态(改善、稳定、或恶化)。在必要时,在初访和随访中对所研究的溃疡进行健康组织的手术清创。
通过面积法测定伤口面积(最大长度×最大宽度,长度和宽度以厘米计)。在换药时用等渗氯化钠溶液清洗伤口。指导患者和/或医疗保健提供者进行换药操作。对所有的患者告知极限承重、必要活动中的极限移动。
药物使用方案
将实施例2的草药提取物每天慢速i.m.注射使用(0.4ml/天)。
随访评价
每两周进行随访评价。在每次随访中,研究人员评价并记录以下内容:被研究的伤口、药物使用的依从性、鞋袜和/或卸载装置的使用、和是否存在不良反应。
结果
得到的结果作为在治疗开始时、一个月之后和两个月之后的平均溃疡面积(cm2)图提供在图1中。每两者之间的差异都是统计学上显著的(P值为0.0001、0.002和0.009)。
研究了10名满足录入标准的个体(7名男性和3名女性)。溃疡的平均表面积为治疗开始(12.32±11cm2)、一个月之后(9.55±9cm2)和两个月之后(6.96±6cm2),p<0.05。
在我们的患者中没有发现不良反应。在用上述药物治疗之后,包括葡萄糖、白蛋白、肌酸酐、血清尿素氮、碱性磷酸酶和肝功能在内的实验室数据显示没有显著变化。
实施例7:随机临床试验:评价本发明草药提取物的口服、局部给药和联合治疗对糖尿病足溃疡患者的治疗效果
糖尿病足溃疡是糖尿病患者发病和致死的主要原因之一。
它在糖尿病患者中流行并且据报告其发病率为大约4.6%-12%。令人遗憾的是,许多糖尿病足患者需要足或下肢截肢。
最近的治疗对于伤口愈合和预防截肢具有不完全的作用。非常需要更有效的药物。本次临床试验的目标是评价本发明草药提取物的口服形式、局部给药形式以及口服和局部给药的联合形式对糖尿病足的治疗效果,其可以为这种并发症的治疗引入新的方法。
在口服组,用包装为胶囊形式的草药提取物的干燥形式来治疗患者,每个胶囊包含100mg活性物质。提取物的施用剂量是每天2个胶囊(分为两个分开的剂量),持续45天。
在局部给药组,用以凡士林作为基质制备为3%浓度的软膏形式的草药提取物来治疗患者。提取物的施用剂量是在溃疡床上的膏剂薄层和其周围的厚层,每天施用两次,每次为溃疡去掉敷料的时间至少为1个小时,持续60天。
在联合给药组中,患者同时接受如上所述的草药提取物的口服形式和局部给药形式的联合治疗45天。
所有患者都在治疗过程中每两周进行随访,并在治疗过程结束之后两个月进行随访。
根据需要,用标准方法处理患者。在所有研究组中适用标准治疗和指导原则,诸如聚维酮碘浴、必要时的抗生素治疗;伤口清创、减荷(off-loading)、足畸形的校正等。所有患者在签署知情同意书之后参与试验。
在试验中招募了18名患者(每个治疗组6名),并且它们全部成功地结束了治疗周期。
所有患者为38至69岁,患有2型糖尿病。与基线相比较,在治疗结束时和治疗后两个月的伤口大小的平均和标准偏差(SD)分别是:口服组211±210和333±296,局部给药组192±210和529±442,联合给药组为500±404和779±477。所有上述比较和每组中的伤口大小减小都是统计学上显著的(p<0.05)。在三个治疗组之间的伤口愈合和伤口大小的减小没有显著性差异(p>0.15)。
作为结论,这18名患者的结果证明了药物的口服形式、局部形式和这两种形式的联合形式的所有类型对于愈合糖尿病足溃疡和肉芽组织形成都是完全有效的。
大部分患者的溃疡完全闭合且其它患者的溃疡直径显著减小。实际上,所有患者(除了一名之外)具有合适到优异的治疗响应,且在治疗后的两个月,溃疡的平均大小减小超过80%。在治疗过程中,在临床检查、实验室分析和其它评价方面没有观察到副作用。
一些结果显示在图6-11中。
根据本试验的结果可以推断,本发明的草药提取物具有如下的优于现有治疗的许多优点:
--在通常的剂量下是完全安全的(在通常的有效剂量下没有观察到副作用)。
--对于糖尿病足溃疡是完全有效的(在大部分患者中完全改善)。
--适用于所有患有糖尿病足的患者(所有的患者都对本发明提取物有响应)。
--治疗效果在短时间内出现(2周内)。
--减少住院时间和快速改善溃疡,显著减少直接和间接费用。
实施例8:多中心随机临床试验:评价本发明草药提取物对糖尿病足溃疡患者的治疗效果(III期临床试验)
糖尿病的长期并发症是糖尿病患者发病和致死的主要原因之一。
糖尿病患者的糖尿病足的发病率据报告是大约4.6%-12%。令人遗憾的是,许多糖尿病足患者需要足截肢或下肢截肢。
最近的疗法对于伤口愈合和预防截肢具有不完全的作用。非常需要更有效的药物。本次临床试验的目标是评价本发明草药提取物的注射形式对糖尿病足的治疗效果,所述治疗可以为这种并发症的治疗引入新的方法。
通过静脉注射在0.9%氯化钠溶液中稀释的实施例2的草药提取物处理患者。提取物的施用剂量是每天4ml,在100ml生理盐水中以0.5小时输注,持续28天。在治疗期间,对所有患者进行随访。
在对照组中,对患者进行标准方法处理。在两个研究组中适用标准治疗和指导原则,诸如聚维酮碘浴、必要时的抗生素治疗;伤口清创、减荷、足畸形的校正等。所有的患者在签署知情同意书之后参与研究。
26名患者(干预组15名,对照组11名)结束了治疗周期,提供的结果是阶段性的分析。这26名患者的初步结果证明了,在用新的草药提取物治疗的15名患者中,药物对于糖尿病足溃疡的改善、肉芽组织形成、微血管循环的改善和防止截肢是完全有效的。
大部分患者的溃疡完全闭合且其它患者的溃疡直径显著减小。在标准治疗开始之后的一个月,对照中的溃疡平均大小的减小少于12%(p<0.05)。在治疗过程中,在临床检查、实验室分析和其它评价方面没有观察到副作用。
一些结果显示在图12-13中。
根据初步分析的结果显示,本发明的草药提取物具有如下的优于现有治疗的许多优点:
--在通常的剂量下是完全安全的(在通常的有效剂量下没有观察到副作用)。
--对于糖尿病足溃疡是完全有效的(在大部分患者中完全改善)。
--适用于所有患有糖尿病足的患者(所有的患者都对本发明提取物有响应)。
--治疗效果在短时间内出现(2周内)。
--减少住院时间和快速改善溃疡,显著减少直接和间接费用(在伊朗,糖尿病足溃疡的平均住院时间是大约3.8周,但是在本研究中,患者住院大约8天)。
--在许多情况中,本发明提取物可以预防截肢(经历治疗的2个病例是截肢的候选者,但在治疗之后,不再需要截肢。在对照组中,一名患者具有相同的情况,他在5天之后进行了截肢)。
实施例9:随机临床试验:确定静脉给药本发明草药提取物对褥疮患者的作用
主要目标是确定实施例2的草药提取物静脉内给药时对褥疮患者的治疗作用,并将其与标准治疗相比较。
患者包括患有褥疮的成年男性和女性受试者(年龄超过18岁)。包括所有患有由如下原因引起的溃疡的患者:脊髓并发症(意外或先天的)、下肢截肢、慢性疾病例如脑血管病症或由骨质疏松症引起的骨折。它们的溃疡大小必须至少为1cm2(最大长度×最大宽度),且溃疡必须在至少2周前发生。
18名患者完成试验,其中干预组9名,对照组9名。干预组的平均年龄是44.7±19岁,对照组的平均年龄为46.7±22.7岁,每个组中的男女比例为7∶2。在治疗开始时,干预组的溃疡面积是35.1±30.1cm2,其在治疗后变为12.2±19(P=0.004)。对照组的溃疡面积在治疗开始时是17.6±17.3,在治疗期结束时为14.8±14.5(P=0.205)。
表2:在干预组和对照组之间的褥疮愈合对比
令人遗憾的是,对于没有手术的褥疮或手术清创之后的褥疮没有完全的和理想的治疗效果。显然需要可以以最小的副作用诱导伤口愈合的药物。根据对18名患者进行的目前研究的结果,治疗组的溃疡愈合百分比明显高于对照组中的其它患者。本试验的结果证明了本发明的草药提取物可以认为是用于治疗褥疮的新的和有效的药物并且可以显著地改善患者的生活质量。由此,减少了对于广泛清创和移植相关的需要。最后,推断本发明的草药提取物可以显著地改善褥疮的治疗,因此可用作治疗褥疮和压迫性溃疡的新的和有效的药物。
在前述说明书中、权利要求和附图中所公开的特征可以分别地和以任何形式组合作为用于以多种形式实现本发明的素材。
Claims (36)
1.制备草药提取物的方法,包括以下步骤:
(a)提供衍生自草木犀属的植物材料;
(b)干燥所述植物材料;
(c)添加有机溶剂;
(d)将植物材料和有机溶剂的混合物孵育;和
(e)得到所述草药提取物。
2.权利要求1的方法,其中植物材料衍生自黄香草木犀。
3.权利要求1或2的方法,其中衍生自黄香草木犀的植物材料包括叶子和/或小的茎。
4.前述权利要求中任一项的方法,其中步骤(b)中的干燥在大约20-50℃的温度范围内进行,优选大约37-45℃,最优选大约42℃。
5.前述权利要求中任一项的方法,其中步骤(b)中的干燥进行大约3-4天的时间。
6.前述权利要求中任一项的方法,其中所述有机溶剂是乙醇,优选约60-96%(以体积计),更优选为约80-96%(以体积计),最优选为约96%(以体积计)。
7.前述权利要求中任一项的方法,其中步骤(d)中的孵育进行约10-40天的时间,优选约22-38天,最优选约25-35天。
8.前述权利要求中任一项的方法,其中步骤(d)中的孵育在约20-50℃的温度范围内进行,优选大约37-45℃,最优选大约42℃。
9.前述权利要求中任一项的方法,其中所述方法另外包括以下步骤:
(f)添加尿素。
10.前述权利要求中任一项的方法,其中所述方法另外包括以下步骤:
(g)添加果糖。
11.前述权利要求中任一项的方法,其中所述方法另外包括以下步骤:
(h)添加甘油磷酸和/或其钠盐。
12.前述权利要求中任一项的方法,其中所述方法另外包括以下步骤:
(i)添加硒和/或其有机盐或无机盐。
13.权利要求12的方法,其中硒或其盐以约1-100mg/l的游离硒的浓度添加,优选约5-50mg/l,最优选约10-20mg/l。
14.前述权利要求中任一项的方法,其中所述方法另外包括以下步骤:
(j)使草药提取物暴露于脉冲电磁场中。
15.权利要求14的方法,其中所述电磁场的脉冲具有正弦、矩形和/或随机的形状。
16.权利要求14或15的方法,其中所述脉冲电磁场具有约5-750kHz的频率,优选约50-350MHz的频率,最优选约250MHz的频率。
17.权利要求14-16中任一项的方法,其中所述脉冲电磁场具有约10-200瓦的功率,优选约20-100瓦的功率,最优选约45瓦的功率。
18.权利要求14-17中任一项的方法,其中所述脉冲电磁场具有100-150微特斯拉的磁场强度。
19.权利要求14-18中任一项的方法,其中步骤(j)中的暴露进行约3-5分钟的时间。
20.权利要求14-19中任一项的方法,其中重复步骤(j)中的暴露,且优选进行三次。
21.可通过权利要求1-20中任一项的方法获得的草药提取物
22.权利要求21的或通过权利要求1-20的方法制备的草药提取物用于治疗受试者的慢性伤口的用途。
23.权利要求21的或通过权利要求1-20的方法制备的草药提取物用于制备药物组合物的用途,所述药物组合物用于治疗受试者的慢性伤口。
24.权利要求22或23的用途,其中所述慢性伤口涉及其中正常的伤口修复能力减弱的状况。
25.权利要求22-24中任一项的用途,其中所述慢性伤口与诸如糖尿病的状况有关,和/或发生在老龄或类固醇治疗过程中的患者中。
26.权利要求22-25中任一项的用途,其中所述慢性伤口是糖尿病足溃疡,神经性溃疡,包括神经性足底溃疡、糖尿病性压迫性溃疡或糖尿病性静脉溃疡,与长期残疾有关的褥疮或压迫性溃疡。
27.权利要求22-26中任一项的用途,其中所述慢性伤口是糖尿病足溃疡。
28.权利要求22-26中任一项的用途,其中所述慢性伤口是褥疮。
29.权利要求22-28中任一项的用途,其中所述受试者是脊椎动物,优选哺乳动物,最优选为人。
30.权利要求22-29中任一项的用途,其中所述受试者没有怀孕。
31.药物组合物,包括权利要求21的或通过权利要求1-20的方法制备的草药提取物。
32.权利要求31的药物组合物,另外包括药学可接受的载体。
33.权利要求31或32的药物组合物,配制为用于注射给药。
34.权利要求31或32的药物组合物,配制为用于口服给药。
35.权利要求31或32的药物组合物,配制为用于局部给药。
36.药盒,包括权利要求31-35中任一项的药物组合物。
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