CN101611060A

CN101611060A - 鼻内递送肽和蛋白质

Info

Publication number: CN101611060A
Application number: CNA2007800481014A
Authority: CN
Inventors: 帕斯卡尔·热拉尔·梅谢尔; 希尔德·阿迪·皮埃雷特·勒韦茨
Original assignee: Ablynx NV
Current assignee: Ablynx NV
Priority date: 2006-10-27
Filing date: 2007-10-25
Publication date: 2009-12-23

Abstract

本发明涉及鼻内递送包含纳米抗体^，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb”的治疗多肽和蛋白质。本发明提供包含治疗有效量的所述多肽或蛋白质并且还包含药用鼻用载体的组合物。本发明还涉及用于治疗受试者的方法，所述方法包括向所述受试者通过鼻途径递送所述多肽和蛋白质。

Description

鼻内递送肽和蛋白质

发明领域

本发明涉及鼻内递送多肽和蛋白质。更具体地，本发明涉及鼻内递送包含纳米抗体(Nanobody)

、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的多肽和蛋白质。[注意：纳米抗体(Nanobody)

、纳米抗体(Nanobodies)

和纳米克隆(Nanoclone)

是埃博灵克斯股份有公司(Ablynx N.V.)的商标]。本发明提供适合用于鼻内递送所述多肽和蛋白质的组合物和递送装置。本发明还涉及用于治疗受试者的方法，所述方法包括将所述多肽和蛋白质通过经鼻途径递送到所述受试者。

本发明的其它方面、实施方案、优势和应用将通过本文进一步的描述而变得清楚。

背景技术

通过非侵入性的途径施用常规低分子量药物已经成为非常成熟的实践操作。然而，治疗肽和蛋白质通常是不稳定的，它们具有较大分子量并且在性质上是极性的。这些性质导致它们通过生物膜的渗透性较差。例如，当通过口服施用时，它们易于在胃肠道中被蛋白水解分解并且仅能非常困难地进入体液。为此，迄今为止，治疗肽和蛋白质通常以注射或输注方式进行给药。

然而，注射总是不方便的，当施用以常规间隔进行并且用于较长时期的治疗时，它会导致较明显的疼痛和对于患者的不适。发现可行的备选施用途径将因此是理想的，所述备选施用途径不会对患者造成较大不便并且优选地容许容易的自我施用，同时获得有效治疗的足够功效。开发治疗肽和蛋白质的方便、非侵入性、备选的给药途径将代表着肽和蛋白质疗法中显著的进步，所述备选的给药途径与肠胃外注射的药物代谢动力学性能相当。

鼻内递送是无需用针、对患者友好的施用途径。因为没有针的介入，这种递送药物的方法实际上是无痛的。对于惧怕注射的患者而言，鼻内递送提供了更可接受的备选方法。另外，经鼻递送的简便性可以容许在家庭环境中自我施用。这种途径明显地优于肠胃外给药，肠胃外给药通常在医疗监督下进行给药。鼻内递送的其它优点包括鼻上皮细胞的高渗透性，这是因为鼻腔相当大的表面积和相当高的血流量、快速吸收所导致。与其它非注射施用，诸如口服制剂相比，经鼻递送以其避免肝首过(first-pass)效应、快速起效(on set action)和较高的生物利用度的特征成为具有吸引力的途径(Hussain，Adv.Drug Deliv.Rev(药物递送进展综述).1998年1月5日；29(1-2)：39-49；Illum，J.Control Release(控制释放杂志)2003年2月21日；87(1-3)：187-98)。

然而，通过鼻黏膜吸收各种较大的肽和蛋白质对于在血流中获得足量的这些肽从而提供有效治疗而言通常是不足的。从鼻腔吸收肽的第一个步骤是通过黏液(Khanvilkar等，Adv.Drug Deliv.Rev(药物递送进展综述)2001；28：173-193)。黏蛋白是黏液中的主要的蛋白，具有结合溶质的潜力，阻止扩散。另外，黏液层的结构改变随环境改变(即，pH，温度等)是可能的。在通过黏液后，存在通过黏膜吸收的几种机制(Marttin等，Charm.Res.(药物研究)1997；14：631-637)。这些包括穿过细胞或通过膜的简单扩散，通过细胞间运动的细胞旁路(paracellular)转运，和通过囊泡载体的胞转(McMartin等，J.Pharm.Sci.(药物科学杂志)1987；76：535-540)。在鼻黏膜表面上在细胞旁和上皮细胞中存在几种蛋白水解酶，其可以导致治疗肽和蛋白质的降解(Sarkar，Pharm.Res.(药物研究)1992；9：1-9；Yamamoto等，LifeSci.(生命科学)1990；47：2465)。除了它们通过鼻黏膜过程中的阻碍以外，对肽和蛋白质吸收的另一个障碍因此是它们在到达系统循环之前可能的代谢和它们在体腔中的有限的存活时间。因而，治疗肽和蛋白质在经鼻给药后的生物利用度倾向于较低，这主要是由于它们较大的分子大小使得它们容易通过以及由于快速的酶降解所导致。当氨基酸的数量增加超过约20，生物利用度会非常低(Wearly，Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.(治疗药物载体系统评论综述)1991；8：331-394)。

因此，尽管经鼻递送具有许多优点，但是通过鼻途径递送治疗肽和蛋白质仍旧较少研究，并且被认为没有通过注射有效，这主要是由于其固有的较差渗透性和代谢导致。即使是这样，一些肽产品已经成功作为鼻内制剂上市，尽管作为简单制剂，其由于鼻黏膜导致的渗透障碍而具有较低的生物利用度(Illum，The nasal route for delivery of polypeptides.In：Peptideand Protein Drug Delivery.(用于递送多肽的经鼻途径。在：肽和蛋白质药物递送中)编辑.Frokjaer，S.，Christrup，L.，Krogsgaard-Larsen，P.，Munksgaard，Copenhagen 1990，p 157-170)。FDA批准的实例包括

Miacalcin^TM(降钙素)和Synarel^TM(那法瑞林)。临床实验已经证实流感(三价)和白喉毒素(CRM-197)可以通过鼻递送，同时具有良好效果(Davis，Adv.Drug Del.Rev.(药物递送进展综述)2001；51：21-42)。Larsen等(Eur.J.Clin.Pharmacol.(欧洲临床药理学杂志)1987；33：155-159)得出结论：低分子量多肽布舍瑞林的鼻内给药代表着一种可靠的给药方式。在Costantino等(www.ondrugdelivery.com，2005；Sakr，Int.J.Pharmaceutics 1996，132：189-194；O’Hagan等，Pharm.Res.(药物研究)1990，7：772-776；Cefalu，Diabetes Care(糖尿病护理)2004，27：239-245；Zhang等，Biol.Pharm.Bull(生物药理学公报)2005，28：2263-2267)中讨论了肽如胰岛素、人生长激素、胰高血糖素、水蛭素、人干扰素-β和人甲状旁腺激素的鼻内制剂的其它实例。

本发明人目前已经发现特定类的治疗多肽或蛋白质，即包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的多肽和蛋白质可以通过鼻途径(即通过施加到鼻黏膜中)递送到血流中。而且，可以在以完全在耐受性和实用性范围内的剂量水平进行经鼻给药后获得功能性多肽或蛋白质在血液中的高生物利用度水平。因此，那些多肽和蛋白质可以通过鼻途径，以包含所述多肽或蛋白质和药用鼻用载体的组合物的方式方便地施用给受试者。

发明概述

因此，本发明涉及在没有被失活(即，维持功能性)的情况下递送或施用(给药)(贯穿本发明这两个术语可交换使用)多肽或蛋白质或治疗多肽或蛋白质到受试者的血流和/或其它器官和/或组织(例如，肾、膀胱、肺和/或脑)中的方法，所述方法包括通过鼻途径(即通过经鼻或鼻内，两个术语贯穿本发明可交换使用)将包含所述多肽或蛋白质的组合物施用于所述受试者的步骤。本发明提供(药物)组合物(在下文称为本发明的组合物或药物组合物)，其包含治疗有效量的(治疗)多肽或蛋白质以及另外包含药用鼻用载体。所述(治疗)多肽或蛋白质(下文称为本发明的多肽或蛋白质或本发明的治疗多肽或蛋白质)具有至少包含纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb”的氨基酸序列。在一个优选的实施方案中，本发明的多肽或蛋白质具有基本上由纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或”dAb”组成的氨基酸序列。在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽或蛋白质具有基于上由纳米抗体(其也称为本发明的纳米抗体)组成的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”衍生自V_H或V_HH。如详细描述中所述，本发明的多肽或蛋白质通常包含这样的单氨基酸链，其可以被认为包含“构架序列”或“FR’s”以及“互补性决定区”或“CDR’s”。

也在本发明范围内的是使用本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因和/或衍生物，和/或使用包含其或基本上由其组成的多肽或蛋白质，只要这些适合于本文所预期的应用。所述部分、片段、类似物、突变体、变体、等位基因、衍生物、多肽和/或蛋白质将在本文的进一步描述中描述。

根据具体的但非限制性的实施方案，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的氨基酸序列可以被“人源化”、“骆驼源化”或如本文进一步描述进行修饰。

一般而言，包含单纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由单纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成的多肽或蛋白质在本文被称为“单价”多肽或蛋白质或“单价构建体”。包含两种或多种纳米抗体、结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”或基本上由两种或多种纳米抗体、结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”组成的多肽和蛋白质在本文被称为“多价”多肽或蛋白质，或“多价构建体”，并且这些可以提供与相应的单价纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”相比较的某些优势。

根据一个具体但非限制性实施方案，本发明的多肽或蛋白质包含至少两种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，如两种或三种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，或基本上由至少两种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，如两种或三种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”组成。如本文进一步所述，所述多价构建体可以提供与包含单个纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由其组成的多肽或蛋白质相比的某些优势，如针对其抗原的大大增加的亲和性和/或特异性。基于本发明的公开内容，所述多价构建体对于本领域技术人员而言是清楚的。

根据另一个具体的，但非限制性实施方案，本发明的多肽或蛋白质包含至少一种针对一种表位、抗原、靶标、蛋白质或多肽的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”以及至少一种针对另一种表位、抗原、靶标、蛋白质或多肽的另一种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，或基本上由其组成。所述多肽或蛋白质在本文称为“多特异性”多肽或蛋白质或“多特异性构建体”，并且这些可以提供与相应的单价或单特异性纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb’s”相比的某些优势。基于本文公开内容，所述多特异性构建体对于本领域技术人员而言是清楚的。

根据另一个具体的，但非限制性实施方案，本发明的多肽或蛋白质包含至少一种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，任选地一种或多种另外的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb’s”，以及至少一种其它氨基酸序列(如蛋白质或多肽)，或基本上由其组成，所述其它氨基酸序列给纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或得到的融合蛋白赋予至少一种理想的性质。此外，所述融合蛋白可以提供与相应的单价纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”相比较的某些优势。所述氨基酸序列和所述融合构建体的一些非限制性实例通过本文的进一步描述将是清楚的。在一个具体的实施方案中，所述至少一种其它的氨基酸序列给纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或得到的融合蛋白提供增加的半衰期。在另一个具体的实施方案中，所述至少一种其它的氨基酸序列使纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或得到的融合蛋白定向到、渗透和/或穿过黏膜和/或血脑屏障。

在上述构建体中，一种或多种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”和/或其它氨基酸序列可以直接连接或通过一个或多个接头序列连接。所述接头的一些适合的但非限制性实例将通过本文的进一步描述而清楚。

优选地，本发明的多肽或蛋白质包含任选地通过一个或两个接头连接的一种或多种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，或是多特异性多肽，所述多特异性多肽包含一种或多种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”和至少一种这样的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，其在递送到受试者后提供增加的半衰期，特别是在生理环境中(例如，在鼻黏膜表面，在血流中，和/或在另一个选择的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱、肺和/或脑中)，提供活性状态的延长的代谢持久性。实例是针对血清蛋白质，特别是针对人血清蛋白质，如针对人血清白蛋白的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb’s”又任选地通过一种或多种接头连接。基于本文的公开内容，所述构建体对于本领域技术人员而言是清楚的。

在本发明的一个优选的实施方案中，本发明的多肽或蛋白质包含一种或多种(如两种或优选地一种)纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb’s”，其连接于(任选地通过一种或多种适合的接头序列)于一种或多种(如两种和优选地一种)这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列使得到的本发明的多肽或蛋白质定向到、渗透和/或穿过黏膜或穿过血脑屏障。具体而言，所述容许得到的本发明的多肽穿过血脑屏障的一种或多种氨基酸序列可以是一种或多种(如两种和优选地一种)纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，如在WO 02/057445中所述的纳米抗体，在WO 02/057445中的FC44(SEQ ID NO：35)和FC5(SEQ ID NO：36)是一些优选的非限制性实例。具体而言，所述容许得到的本发明的多肽穿过黏膜的一种或多种氨基酸序列可以是针对黏膜上的上皮跨膜蛋白的一种或多种纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，其中所述纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”在结合于所述上皮跨膜蛋白后穿过黏膜。

在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽或蛋白质包含一种或多种(如两种或优选地一种)纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，其连接(任选地通过一种或多种适合的接头序列)于一种或多种(如两种，优选地一种)这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列在体内赋予本发明的得到的多肽以增加的半衰期，具体而言，其在生理环境中(例如在鼻黏膜表面、在血流中和/或另一种选择的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱、肺和/或脑中)，提供活性状态的延长的代谢持久性。具体而言，所述在体内给本发明的得到的多肽赋予增加的半衰期的氨基酸序列可以是一种或多种(如两种和优选地一种)纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”，并且具体地是针对人血清蛋白质如人血清白蛋白的纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”。针对小鼠或人血清白蛋白的适合的纳米抗体的实例描述在申请WO 03/035694，WO 04/041865和WO 06/122825中。

在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽或蛋白质包含一种或多种(如两种或优选地一种)纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb’s”，一种或多种(如两种和优选地一种)使本发明得到的多肽定向到、渗透和/或穿过黏膜或穿过血脑屏障的氨基酸序列，和一种或多种(如两种和优选的一种)这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列在体内赋予本发明的得到的多肽以增加的半衰期，特别地，其在生理环境中(例如在鼻黏膜表面、在血流中和/或另一种选择的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱、肺和/或脑中)，提供活性状态的延长的代谢持久性(任选地通过一个或多个适合的接头序列连接)。此外，容许本发明的得到的多肽定向到、渗透和/或穿过黏膜或穿过血脑屏障的所述一种或多种氨基酸序列可以是一种或多种(如两种，和优选地一种)纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”(如本文提及)，并且给本发明得到的多肽赋予增加的体内半衰期的所述氨基酸序列可以是一种或多种(如两种和优选地一种)纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb’s”(也如本文提及)。

配制本发明的组合物以局部施用于鼻黏膜。因此，除了上述纳米抗体、多肽或蛋白质之外，本发明的组合物应该还包含药用鼻用载体和任选地其它的治疗成分或药用添加剂和/或试剂。

因此，在另一个方面，本发明涉及包含至少本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和药用鼻用载体的组合物。所述载体可以是液体、半液体、凝胶、乳膏、糊剂、粉末或固体或可以是薄膜或包封物质(微囊剂或纳米胶囊)。鼻用载体的应用是药物领域技术人员公知的。鼻用载体的一些非限制性实例通过本文的进一步描述是清楚的。

任选地，本发明的组合物还包括其它的添加剂和/或试剂。因此，在本发明的另一个实施方案中，提供这样的组合物，其包含本发明的纳米抗体，多肽或蛋白质，药用鼻用载体和一种或多种药用添加剂和/或试剂。添加剂如防腐剂、缓冲剂、抗氧化剂和增粘剂的应用是药物领域技术人员已知的并且在本文进一步描述。用于经鼻给药的组合物的试剂包括递送增强剂，其也是药物领域的技术人员公知的并且在本文进一步描述。

在各种实施方案中，本发明的组合物可以包含一种或多种本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，一种或多种药用鼻用载体和任选地一种或多种添加剂和/或试剂。

在本发明的另一个实施方案中，所述组合物可以另外包含一种或多种其它的治疗成分(或活性物质)。在一个优选的实施方案中，本发明的组合物的活性物质由两种或更多种本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质组成。组合的组合物和疗法的其它的实施方案通过本文进一步的描述是清楚的。

本发明还提供制备本发明的组合物的方法。通过本文进一步描述，那些方法将是清楚的。

本发明还提供递送装置，其适合于经鼻给药本发明的组合物。因此，本发明涉及一种递送装置，其包含本发明的组合物并装备有使能够将所述组合物施用于鼻黏膜的工具。如以滴剂形式、鼻用喷雾剂形式、鼻用液体形式或粉末气溶胶形式、胶囊或鼻用插入物形式提供的递送装置是本领域技术人员已知的并且通过本文进一步的描述是清楚的。

所述递送装置优选地能够(重复地)递送单位剂量的本发明的组合物，和具体地能够(重复地)递送单位剂量的基本上包含适合于经鼻给药的递送量的本发明(即，如本文进一步描述)。

在经鼻给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物到所述受试者后，所述组合物能够在受试者中提供本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的全身治疗或生物学活性。在本发明的实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在本发明的另一个实施方案中，所述本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质达到血流，其Tmax为少于120分钟。在另一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，在少于120分钟内，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml的血液的Cmax。在另一个实施方案中，在经鼻给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，在少于120分钟内，所述本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在本发明的实施方案中，在经鼻给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中的AUC是至少500ng/ml/分钟的纳米抗体、多肽或蛋白质。在本发明的另一个实施方案中，经鼻给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，所述本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中的AUC是至少500ng/ml/分钟的纳米抗体、多肽或蛋白质。在本发明的另一个实施方案中，在经鼻给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，所述本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中的生物利用度是与肠胃外给药所述纳米抗体、多肽或蛋白质相比的至少1％。

在另一个方面中，在经鼻给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物给所述受试者后，本发明的组合物能够在受试者的脑中提供本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的治疗或生物活性。在本发明的实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在脑中的生物利用度是与肠胃外给药所述纳米抗体、多肽或蛋白质相比的至少1％。

本发明还提供在不失活的情况下递送多肽或蛋白质到受试者的血流的方法，所述多肽或蛋白质包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，或基本上由其组成，所述方法包括通过经鼻给药本发明的纳米抗体，多肽，蛋白质或组合物给所述受试者的步骤。本发明还提供递送多肽或蛋白质到受试者的脑中而不使其失活的方法，所述多肽或蛋白质包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由其组成，所述方法包括通过经鼻给药本发明的纳米抗体，多肽，蛋白质或组合物给所述受试者的步骤。

本发明还提供用于预防和/或治疗需要本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者的方法，所述方法包括经鼻给药如上所述的组合物给所述受试者的步骤。本发明组合物的另外的治疗应用在下文详细描述。

附图说明

图1：A，在Wistar大鼠中鼻内给药后2、4和6小时后，^99mTc三羰基和^99mTc-FC44在尿、血液、肝和肾中的生物分布(％ID/g)；B，在Wistar大鼠中静脉内给药后2小时后，^99mTc-FC44在尿、血液、肝和肾中的生物分布(％ID/g)。

图2：在Wistar大鼠中鼻内给药^99mTc-FC44后，尿和肾提取物的SDS-PAGE分析。

图3：在雄性Wistar大鼠中，在鼻内给药^99mTc-FC44后的^99mTc-FC44的血液水平(％ID/g)。

图4：A，在Wistar大鼠中鼻内给药后4小时，^99mTc标记的CEA1，ALB1和TNF1纳米抗体的血液水平(％ID/g)；B，在Wistar大鼠中鼻内给药后4小时，^99mTc标记的CEA1，ALB1和TNF1纳米抗体的尿和肾的水平(％ID/g)。

图5：在鼻内递送或口腔递送^99mTc-FC44即刻后，大鼠的平面γ照相机活性成像。

图6：鼻内和口腔递送^99mTc-FC44后，血液中活性(％ID/g)的比较。

发明详述

通过下文的进一步描述，本发明的上述和其它方面、实施方案和优点将变得清楚，其中：

a)除非另外指明或限定，所用的所有术语具有它们在本领域内的通用意思，其对于熟练的技术人员应该是清楚的。例如，参考标准手册，如Sambrook等，″分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A LaboratoryManual)″(第2版)，卷1-3，冷泉港实验室出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press)(1989)；F.Ausubel等，编，″现代分子生物学方法(Currentprotocols in molecular biology)″，Green Publishing和Wiley Interscience，纽约(1987)；Lewin，“Genes II”，John Wiley&Sons，纽约，纽约州，(1985)；Old等，“基因操作原理：基因工程导言(Principles of Gene Manipulation：AnIntroduction to Genetic Engineering)”，第2版，加利福尼亚大学出版社(University of California Press)，伯克利，CA(1981)；Roitt等，“免疫学(Immunology)”(第6版)，Mosby/Elsevier，Edinburgh(2001)；Roitt等，Roitt基础免疫学(Roitt’s Essential Immunology)，第10版.Blackwell Publishing，英国(2001)；和Janeway等，“免疫生物学(Immunobiology)”(第6版)，Garland Science Publishing/Churchill Livingstone，纽约(2005)，以及本发明所引用的公知背景技术；Rosenfeld G.C.，Loose-Mitchell D.S.，Pharmacology(药理学)(第3版)Lippincott Williams&Wilkins，纽约；Shlafer M.Pharmacology PreTest^TM Self-Assessment和Review(自我评估和综述)(第11版)McGraw-Hill Medical Publishing Division，纽约；Yang K.Y.，Graff L.R.，Caughey A.B.Blueprints Pharmacology，Blackwell出版社。

b)除非另外指明，所有没有具体详细描述的方法、步骤、技术和操作可以以本身已知的方式进行并且已经进行，这对于熟练的技术人员是清楚的。例如，仍旧参考标准手册，参考本发明所提及的公知背景技术，和参考其中所引用的其它参考文献；

c)术语“抗原决定簇”是指抗原上由抗原-结合分子(诸如本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质)并且更特别是所述分子的抗原-结合位点识别的表位。术语“抗原决定簇”和“表位”在本文中还可以互换地使用。

d)对于特定的抗原决定簇、表位、抗原或蛋白(或对于至少其的一部分、片段或表位)可以结合、具有亲和力和/或具有特异性的氨基酸序列(诸如本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，或通常为抗原结合蛋白或多肽或其片段)被认为是“针对(against)”或者“针对(directed against)”所述抗原决定簇、表位、抗原或蛋白。

e)除非另外指明，术语“免疫球蛋白(序列)”——不管其在本文中用来指重链抗体或常规的4-链抗体——用作一般术语，包括完整大小的抗体、其单独的链、以及其所有部分、结构域或片段(包括但不限于抗原-结合结构域或片段，分别诸如V_HH结构域或V_H/V_L结构域)。

f)如本文进一步描述，纳米抗体的氨基酸序列和结构可以被认为-但不限于其-包括四个构架区或“FR’s”，其在本领域和本文中分别被称为“构架1”或“FR1”；“构架2”或“FR2”；“构架3”或“FR3”；以及“构架4”或“FR4”；所述构架区被三个互补决定区或“CDR’s”中断，其在本领域中分别被称为“互补性决定区1”或“CDR1”；“互补性决定区2”或“CDR2”；和“互补性决定区3”或“CDR3”；

g)也如本发明进一步所述，纳米抗体中氨基酸残基总数可以在110-120区间，优选112-115，并且最优选113。然而，应该注意纳米抗体的部分、片段、类似物或衍生物(如本发明进一步所述)不特别局限于它们的长度和/或大小，只要这样的部分、片段、类似物或衍生物满足本发明列出的其他要求，并且还优选地适于本文所述的目的；

h)纳米抗体的氨基酸残基按照Kabat等(“免疫学目的蛋白的序列(Sequence of proteins of immunological interest)”，美国公众健康服务中心(US Public Health Services)，NIH Bethesda，MD，出版No.91)给出的关于V_H结构域的通用编号方式进行编号，这种编号方式在本文引用的Riechmann和Muyldermans的文章中用于来自骆驼科动物的V_HH结构域(Camelid)(例如，参见所述参考文献的图2)。按照这种编号方式，纳米抗体的FR1包括位置1-30的氨基酸残基，纳米抗体的CDR1包括位置31-35的氨基酸残基，纳米抗体的FR2包括位置36-49的氨基酸，纳米抗体的CDR2包括位置50-65的氨基酸残基，纳米抗体的FR3包括位置66-94的氨基酸残基，纳米抗体的CDR3包括位置95-102的氨基酸残基，以及，纳米抗体的FR4包括位置103-113的氨基酸残基。[在这一方面，应该注意——如在本领域内关于V_H结构域和关于V_HH结构域公知的——在每一CDR中的氨基酸残基的总数可以不同，并且可以不与由Kabat编号方式指示的氨基酸残基的总数相对应(即，按照Kabat编号方式的一个或多个位置可能不占据在实际序列中，或者实际序列可能包含比由Kabat编号方式允许的数目更多的氨基酸残基)。这意味着，通常，按照Kabat的编号方式可能或可能不与实际序列中的氨基酸残基的实际编号方式相对应。然而，通常可以认为，按照Kabat的编号方式并且不考虑CDR中的氨基酸残基的数目，按照Kabat编号方式的位置1对应FR1的起点，并且反之亦然，按照Kabat编号方式的位置36对应FR2的起点，并且反之亦然，按照Kabat编号方式的位置66对应FR3的起点，并且反之亦然，以及按照Kabat编号方式的位置103对应FR4的起点，并且反之亦然]。

用于编号V_H结构域的氨基酸残基的备选方法是由Chothia等(自然(Nature)342，877-883(1989))所述的方法，即所谓的“AbM定义”和所谓的“联系定义”，所述方法还可以以类似的方式用于来自骆驼科动物的VHH结构域以及用于纳米抗体；和

i)给出附图和实验部分/实施例只是进一步举例说明本发明，并且不应该被以任何方式解释为或者认为限制本发明和/或后附权利要求的范围，除非本文中另外明确指明。

不限于此，纳米抗体、(单)结构域抗体或“dAb’s”可以衍生自4-链抗体的可变区以及重链抗体的可变区。按照下面参考文献中所用的术语学，在天然存在的重链抗体中存在的可变结构域还叫作“V_HH结构域”，以将它们与在常规的4-链抗体中存在的重链可变结构域(其在下文中叫作“V_H结构域”)区分，以及与在常规4-链抗体中存在的轻链可变结构域(其在下文中叫作“V_L结构域”)区分。

关于重链抗体及其可变结构域的概括描述，其中特别参考下述专利申请，其作为公知背景技术提及：Vrije Universiteit Brussel的WO 94/04678，WO 95/04079和WO 96/34103；Unilever的WO 94/25591，WO 99/37681，WO00/40968，WO 00/43507，WO 00/65057，WO 01/40310，WO 01/44301，EP1134231和WO 02/48193；Vlaams Instituut voor Biotechnologie(VIB)的WO97/49805，WO 01/21817，WO 03/035694，WO 03/054016和WO 03/055527；Algonomics N.V.和申请人的WO 03/050531；加拿大国家研究委员会(National Research Council of Canada)的WO 01/90190；抗体研究所(Institute of Antibodies)的WO 03/025020(＝EP 1433793)；以及申请人的WO 04/041867，WO 04/041862，WO 04/041865，WO 04/041863，WO04/062551和申请人的另外公布的专利申请；

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对于(单)结构域抗体或“dAb’s”的一般描述，参考Ward等(Nature(自然)1989年10月12日；341(6242)：544-6)，EP 0 368 684和Holliger和Hudson(Nature Biot.2005，23：1126-1136)。具体而言，(单)结构域抗体或“dAb’s”的氨基酸序列可以被认为-然而并不限于此-包括四个构架区或“FR’s”以及三个互补决定区或“CDR’s”，如上文关于纳米抗体所述。

因此-但不限于此-本发明的多肽或蛋白质具有这样的氨基酸序列，其包括四个构架区(分别地FR1-FR4)和三个互补性决定区(分别地CDR1-CDR3)或基本上由其组成。所述氨基酸序列优选地包含80-200个氨基酸残基，如90-150个氨基酸残基，如约100-130个氨基酸残基(尽管也可以使用所述氨基酸序列的适合片段-即基本如本文关于本发明的纳米抗体所述或与其等价)，并且优选地是这样的，以致其形成免疫球蛋白折叠或是这样的，以致，在适合的条件下，其能够形成免疫球蛋白折叠(即，通过适合的折叠)。所述氨基酸序列优选地选自纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb’s”并且最优选地是如本文定义的纳米抗体。所述CDR可以是任何适合的CDR，其给多肽或蛋白质提供需要的性质。

关于本发明的纳米抗体，多肽和蛋白质在其最广泛意义上的进一步描述，包括纳米抗体的人源化和/或骆驼源化以及其它修饰、部分或片段，衍生物或“纳米抗体融合物”，多价构建体(包括接头序列的一些非限制性实例)和增加所述纳米抗体、多肽和蛋白质的半衰期的不同的修饰可以见于例如WO 06/040153，WO 06/122825，WO 06/122786，WO 07/042289，WO07/104529和PCT/EP2007/058587中。关于本发明的纳米抗体，多肽和蛋白质的制备的详细描述可以见于例如WO 06/040153，WO 06/122825，WO06/122786，WO 07/042289，WO 07/104529和PCT/EP2007/058587。

在一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质还可以形成容许本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质定向到和/或渗透或进入特定黏膜细胞或所述细胞的部分或区室的序列或信号，和/或容许本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质渗透或穿过生物屏障如黏膜，黏膜的细胞层的序列或信号。

在另一个优选的实施方案中，本发明的多肽或蛋白质是这样的多特异性多肽，其包括针对靶标的至少一种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和至少一种这样的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，其将本发明的多肽或蛋白质定向，和/或容许本发明的多肽或蛋白质渗透或进入特定的黏膜细胞，或所述细胞的部分或区室，和/或容许本发明的多肽或蛋白质渗透或穿过生物屏障如黏膜或所述黏膜的细胞层。所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”的实例包括这样的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”，其定向到黏膜细胞的特定的细胞表面蛋白、标记或表位。

在上下文中，本发明的多肽或蛋白质可以包括针对预期的靶标的一种或多种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”和针对黏膜上的上皮跨膜蛋白的一种或多种配体(也称为穿膜配体(membrane crossingligand))，其中所述多肽或蛋白质在所述配体与所述上皮跨膜蛋白结合后，穿过黏膜。

根据本发明的上皮跨膜蛋白是展示在黏膜上的蛋白质或受体，其在结合于配体后，介导所述配体通过黏膜的转运。

在本发明的一个实施方案中，所述配体是针对黏膜上的上皮跨膜蛋白的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。在所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”结合于所述上皮跨膜蛋白后，所述多肽或蛋白质穿过黏膜。穿过膜的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”可以从肽库中制备，其针对与上皮跨膜蛋白的结合或穿越性质进行筛选。

在另一个实施方案中，所述多肽构建体包括与针对黏膜上的上皮跨膜蛋白的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”共价地或非共价地连接的治疗多肽或试剂。本发明的一个方面是可以将这些纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”作为标记加入本发明的多肽或蛋白质，以穿过或通过黏膜。

在另一个实施方案中，针对预期靶标的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质与上皮跨膜蛋白的另一个配体(例如天然配体)连接。得到的构建体在所述配体与上皮跨膜蛋白结合后，被转运通过所述黏膜。

本发明的另一个实施方案是选择针对上皮跨膜蛋白的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”的方法，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”在结合于所述上皮跨膜蛋白后穿过所述黏膜。所述方法包括用纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”的噬菌体库(天然的或免疫的)淘选(panning)上皮跨膜蛋白-展示膜，并且通过从所述膜回收转运的噬菌体来选择穿过膜的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”。本发明包括这样的选择方法，其使用过度表达上皮跨膜蛋白的细胞系或转染上皮跨膜蛋白基因的细胞系，从而容许容易的选择结合于上皮跨膜蛋白的噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”。这避免了对蛋白质表达和纯化的需要，明显加速了穿过膜的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”的产生。在另一个实施方案中，本发明包括使用细胞的选择方法，其容许选择显示受体介导的内在化的噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”。所述方法包括将噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”加入到细胞中并且从已经经历内在化的细胞回收噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”。在另一个实施方案中，本发明包括使用接种在滤器或在Transwell系统中或Boyden室中的细胞的选择方法，从而容许选择胞转通过细胞单层的噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”。所述方法包括将噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”加入区室1，使噬菌体纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”迁移通过细胞单层并收集迁移在区室2中的噬菌体纳米抗体。

通常，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质可以以本身已知的任何适当的方法配制，所述配制容许所述纳米抗体、多肽或蛋白质经鼻给药，并且关于其的参考文献参见标准手册如Remington’s Pharmaceutical Sciences(雷明顿药物科学)，第18版.，Mack出版公司，USA(1990)或Remington，the Science and Practice of Pharmacy(药物科学与实践)，第21版，LippincottWilliams和Wilkins(2005)。优选地，对于经鼻给药，将本发明的纳米抗体，多肽和蛋白质配制为这样的组合物或药物组合物，其包含至少治疗有效量的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和至少一种药用鼻用载体和任选地一种或多种另外的治疗成分(或活性物质)，药用添加剂和/或试剂。在本发明中定义的“鼻用载体”是适合于通过经鼻途径施用的载体，即适合于施用到鼻黏膜的载体。所述鼻用载体可以是固体、半液体或液体填充剂、稀释剂或包封物质。所述鼻用载体可以以多种形式提供，包括用于直接施用到鼻黏膜的流体或半液体或粘性溶液、凝胶、乳膏、糊剂、粉末、微球体和薄膜。所述鼻用载体应该是“药用的”，其意义为与制剂中的其它成分相容并且不会对受试者造成不可接受的不利影响。优选的鼻用载体是改善纳米抗体、多肽或蛋白质与鼻黏膜接触或促进纳米抗体、多肽或蛋白质从所述组合物向鼻黏膜扩散的那些，例如其延长所述组合物在鼻中的停留时间和/或减少纳米抗体、多肽或蛋白质和黏膜之间的距离，从而增加吸收。适合的鼻用载体在下文进行了描述或另外是药物领域技术人员所熟知的。所述载体可以以本身已知的适合的量使用，基于本文公开的内容和引用的现有技术，这对于本领域技术人员而言是清楚的。

所述载体可以是液体或溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其适合的混合物。其它优选的液体载体是盐水溶液，例如生理盐水或水性缓冲液，例如磷酸盐/柠檬酸缓冲液。其它液体鼻用载体的非限制性实例在WO 04/093917和WO05/120551中进行提供。

如果存在固体载体，其可以是例如不溶于水的，微溶于水的，吸水的，可以水溶胀的，形成凝胶的或水溶性的。对于固体组合物，可以使用常规的非毒性药用载体，其包括药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。其它优选的载体包括聚丙烯酸酯、羧甲基纤维素钠、淀粉和它们的衍生物、海藻酸和盐、透明质酸和盐、果胶酸和盐、明胶及其衍生物、树胶、聚乳酸及其共聚物、聚乙酸乙烯酯、纤维素及其衍生物、包被的纤维素、交联的葡聚糖，更优选地聚乳酸及其共聚物，聚乙酸乙烯酯，纤维素和它们的衍生物，包被的纤维素和交联的葡聚糖。其它固体鼻用载体的非限制性实例描述在EP490806，WO 04/093917和WO 05/120551中。

纳米抗体、多肽或蛋白质的释放可以是通过鼻用载体的扩散或崩解。在一些情况中，所述纳米抗体、多肽或蛋白质分散在用适合的聚合物例如2-氰基丙烯酸异丁酯制备的微囊剂(微球体)或纳米胶囊(纳米球体)中(见，例如，Michael等，J.Pharmacy Pharmacol.(药物药理学杂志)1991；43：1-5)。这些特定的微球体不仅显示黏膜粘附(mucoadhesion)的性质，还防止酶降解。它们还容许控制纳米抗体、多肽或蛋白质释放速率，从而产生在延长时间内的持续递送和生物活性(Morimoto等，Eur.J.Pharm.Sci.(欧洲药物科学杂志)2001年5月；13(2)：179-85)。

旨在增加鼻吸收的另一种技术是使用生物粘附的鼻用载体。这些化合物通过化学或物理结合如范德华相互作用、离子相互作用、氢键或通过聚合物链缠结粘附于鼻黏膜。粘附可以与上皮(细胞)表面或与覆盖表面的黏液发生。这些化合物促进药物与鼻腔中的生物物质的结合，由此延长停留时间并容许吸收增加。常用的生物粘附物质是卡波普、纤维素试剂、淀粉、葡聚糖和脱乙酰壳多糖(Illum，Bioadhesive formulations for nasal peptidedelivery.(用于经鼻肽递送的生物粘附制剂)在：E Mathiowitz，DE ChickeringIII，C Lehr，eds.Bioadhesive Drug Delivery Systems(生物粘附药物递送系统).纽约：Marcel Dekker，1999：507-541；WO 96/03142)中。

为了进一步增加本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的黏膜递送，包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的制剂还可以包含亲水性低分子量化合物作为鼻用载体，基质或赋形剂。所述亲水性低分子量化合物提供通道介质，通过所述介质，水溶性活性剂，如本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质可以通过基质扩散到吸收所述活性纳米抗体、多肽或蛋白质的鼻黏膜。所述亲水性低分子量化合物任选地从黏膜或给药气氛中吸收水分并溶解水溶性活性纳米抗体、多肽或蛋白质。示例性亲水性低分子量化合物在WO05/120551中公开并包括多元醇化合物，如寡糖、二糖和单糖如蔗糖、甘露醇、L-阿拉伯糖、D-赤藓糖(erytrose)、D-核糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、乳果糖、纤维二糖、龙胆二糖、甘油和聚乙二醇。用作所述载体或基质的亲水性低分子量化合物的其它非限制性实例包括N-甲基吡咯烷酮和醇(例如，寡乙烯基醇、乙醇、乙二醇、丙二醇等)。这些亲水性低分子量化合物可以单独使用或彼此组合或与鼻内制剂的其它活性或非活性成分组合使用。

载体还可以包含药用添加剂如酸化剂、碱化剂、抗微生物防腐剂、抗氧化剂、缓冲剂、螯合剂、络合剂、增溶剂、保湿剂、溶剂、悬浮剂和/或粘度增加剂、稳定剂、渗透度调节剂、湿润剂或其它生物相容物质。上述分类中列出的成分列表可以见于U.S.Pharmacopeia National Formulary，1857-1859页，1990。药用防腐剂的实例包括苯扎氯铵、对羟基苯甲酸烷基酯(对羟基苯甲酸酯类)如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯或甲基汞硫代水杨酸钠(硫柳汞)。药用防腐剂的另外的非限制性实例描述在US5,759,565，EP 490806和WO 04/093917中。药用抗氧化剂的实例包括碱金属亚硫酸盐、碱金属亚硫酸氢盐、碱金属焦亚硫酸盐、硫代硫酸钠、硫代二丙酸、游离或盐形式的半胱氨酸如半胱氨酸盐酸盐、抗坏血酸、柠康酸、棓酸甲酯或棓酸乙酯、去甲二氢愈创木酸、丁羟茴醚或甲苯、母育酚。药用抗氧化剂的另外的非限制性实例在EP 490806，WO 04/093917和WO05/120551中提供。药用增粘剂的实例包括甲基纤维素、羟甲基纤维素、PVA，PVP，聚丙烯酸或天然聚合物。增粘剂的另外的非限制性实例描述在EP 490806中。药用稳定剂的实例包括白蛋白例如人血清白蛋白、抑肽酶或ε-氨基己酸。稳定剂的另外的非限制性实例在EP 490806中提供。药用渗透度调节剂的实例包括鼻接受的糖例如葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、核糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖或另一种醛糖或葡糖胺。渗透度调节剂的另外的非限制性实例提供在EP 490806中。所述添加剂可以以本身已知的适合的量进行使用，这基于本文的公开内容和引用的现有技术对于本领域技术人员是清楚的。

如果鼻用载体是液体，如参照作为单位的0.9％(w/v)生理盐水溶液的渗透度所测量的，制剂的渗透度典型地调节为这样的值，在所述值在施用位点在鼻黏膜中没有诱导显著的不可逆的组织损伤。一般地，将溶液的渗透度调节为约1/3到3，更典型地1/2到2和最经常地3/4到1.7的值。本发明的液体组合物还优选地具有轻度酸性的pH，例如从3-6.5，从3.5-6.5，优选地从4.5-6.5从而使对鼻的刺激最小化(Behl等Adv.Drug DeliveryRev.1998；29：89-116)。需要的酸度可以方便地例如通过加入缓冲剂、例如柠檬酸和磷酸氢二钠的混合物，或酸如HCl或另外的适合的矿物质或有机酸例如磷酸获得。固体组合物还可以包括缓冲剂，此时它们通过将缓冲到上述指定pH值的液体组合物冷冻干燥进行制备。药用缓冲剂的非限制性实例在EP 490806，WO 04/093917和WO 05/120551中提供。

本发明的组合物需要的粘度取决于施用的具体形式，例如是通过滴鼻剂的还是鼻喷雾剂的形式施用。对于滴鼻剂，适当的粘度是约2到约40×10^-3Pa s。对于鼻喷雾剂，粘度将适当地是小于2×10^-3Pa s，例如从1至2×10^-3Pa s。

在本发明的固体鼻用组合物中，包括载体、例如纤维素载体的各成分的颗粒大小是从5-500μ，优选地10-250μ，更优选地20-200μ。例如，平均颗粒大小可以在50到100μ的范围内。

备选地，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质还可以本身适当地进行配制以用于鼻内递送，例如以粉末的形式(如冷冻干燥或微粉化的粉末)或喷雾的形式；例如具有本文指定范围的颗粒大小。

本发明的组合物还可以包含一种或多种黏膜递送增强剂。用于本文时，“黏膜递送增强剂”包括这样的试剂，其增加本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质或另外的生物活性成分(例如，从制剂递送介质)的释放或溶解性、扩散速率、渗透能力和时间选择、吸收、停留时间、稳定性、有效半衰期、峰值或持续浓度水平、清除和其它需要的黏膜递送特征(例如，如在递送位点，或在选择的靶活性位点如血流和/或另外的选择的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱、肺和/或脑所测量的)。黏膜递送的增加因此可以通过多种机制的任一种发生，例如通过增加本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的扩散、转运、持续性或稳定性、酶抑制、增加膜的流动性、调节钙和其它调节细胞内或细胞旁的渗透性的离子的利用率或作用、溶解黏膜成分(例如，脂质)、改变黏膜组织中的非蛋白质和蛋白质巯基水平、增加通过黏膜表面的水流量、调节上皮连接生理学、减少覆盖黏膜上皮的黏液的粘度、减少黏膜纤毛的清除率、增加鼻血流和其它的机制。适合的黏膜递送增强剂对于药物领域的技术人员是清楚的并且将在下文进一步描述。所述黏膜递送剂可以以本身已知的适当的量使用，其基于本文的公开内容和引用的现有技术对于本领域技术人员是清楚的。

黏膜递送增强剂包括(a)聚集抑制剂，(b)电荷改性剂，(c)pH控制剂，(d)降解酶抑制剂；(e)黏液溶解剂或黏液清除剂，(f)纤毛静止剂(ciliostaticagents)；(g)膜渗透增强剂，(h)上皮连接生理调节剂，如氧化氮(NO)刺激剂，脱乙酰壳多糖和脱乙酰壳多糖衍生物；(i)血管舒张剂，(j)选择性转运增强剂和(k)稳定递送介质，载体，支持物或形成络合物的种类，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质用其有效组合、缔合、包含、包封或结合从而稳定本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质以增强鼻黏膜递送。作为包含在本发明的组合物中的另外的试剂，这些黏膜递送增强剂进一步例举-而不限于-在EP 037943，EP 094157，EP 173990，EP 214898，EP 215697，EP 327756，EP490806，US 4,476,116，US 5,759,565，WO 04/093917和WO 05/120551中。

在一个实施方案中，将抗聚集剂加入本发明的组合物中。聚集抑制剂包括例如各种官能度的聚合物，如聚乙二醇、葡聚糖、二乙基氨基乙基葡聚糖和羧甲基纤维素，其显著增加与其混合或与其连接的肽和蛋白质的稳定性并且减少固相聚集。在一些情况中，蛋白质的活性或物理稳定性还可以通过将各种添加剂加入纳米抗体、肽或蛋白质药物的水溶液中而得到增加。例如，可以使用添加剂，如多元醇(包括糖)、氨基酸和各种盐。某些添加剂，特别是糖和其它多元醇还给干燥例如冻干的蛋白质赋予明显的生理稳定性。这些添加剂还可以不仅在冷冻干燥的过程，还在以干燥状态贮存过程中用在本发明中以保护蛋白质不聚集。例如蔗糖和聚蔗糖(Ficoll)70(具有蔗糖单位的聚合物)在各种条件下，在固相温育过程中提供防止肽或蛋白质聚集的显著保护。这些添加剂还可以增加包埋在聚合物基质中的固体蛋白质的稳定性。还有其它的添加剂，例如蔗糖，在湿润的气氛以及升高的温度下稳定蛋白质以防止固态聚集，如可能在本发明的某些缓释制剂中存在的。可以将这些添加剂加入聚合融解过程和本发明的组合物中。例如，多肽微粒可以通过将包含各种上述的稳定添加剂的溶液进行简单冷冻干燥或喷雾干燥而制备。未聚集的肽和蛋白质的持续释放由此可以在延长的时期内获得。对于结合在本发明的组合物中，大量非限制性的适合的方法和抗聚集剂是可获得的，如在WO 05/120551，Breslow等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1996；118：11678-11681)，Breslow等(PNAS USA 1997；94：11156-11158)，Breslow等(Tetrahedron Lett.(四面体通讯)1998；2887-2890)，Zutshi等(Curr.Opin.Chem.Biol.1998；2：62-66)，Daugherty等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1999；121：4325-4333)，Zutshi等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1997；119：4841-4845)，Ghosh等(Chem.Biol.(化学生物)1997；5：439-445)，Hamuro等(Angew.Chem.Int.Ed.Engl.1997；36：2680-2683)，Alberg等，Science(科学)1993；262：248-250)，Tauton等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1996；118：10412-10422)，Park等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1999；121：8-13)，Prasanna等(Biochemistrv 1998；37：6883-6893)，Tiley等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1997；119：7589-7590)，Judice等(PNAS USA 1997；94：13426-13430)，Fan等(J.Am.Chem.Soc.(美国化学协会杂志)1998；120：8893-8894)，Gamboni等(Biochemistry(生物化学)1998；37：12189-12194)中所公开的。

在另一个实施方案中，将酶抑制剂加入本发明的组合物中。鼻黏膜包含水解酶，如脂肪酶和蛋白酶，这是必需克服的。这种酶的“障碍”可以通过施用阻止或至少减弱降解程度的酶抑制剂来进行抑制。用在本发明中的酶抑制剂选自宽范围的非蛋白质抑制剂，它们在效力程度和毒性上有所不同(见，例如L.Stryer，Biochemistry(生物化学)，WH：Freeman和Company，NY，NY，1988)。非限制性的实例包括阿马他定和倍司他汀(O’Hagan等，Pharm.Res.(药物研究)1990，7：772-776)。在WO 05/120551中详细描述和例举了各种酶抑制剂，但对于用于本发明的组合物中是非限制性的。抑制降解的另一种方式是用PEG分子来聚乙二醇化(pegylation)，所述PEG分子优选为低分子量的PEG分子(例如2kDa；Lee等，Calcif Tissue Int.2003，73：545-549)。此外，在本发明的范围内还包括针对所述酶的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用作酶抑制剂的应用。因此，本发明还涉及双特异性或多特异性构建体，其包含针对预期靶标的一种或多种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”和针对鼻黏膜的酶的一种或多种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”，或基本上由其组成。

在另一个实施方案中，将黏液溶解剂加入本发明的组合物中从而进一步减少鼻黏膜的粘度。黏液溶解剂描述于WO 04/093917中并包括n-乙酰基-半胱氨酸，棓酸丙酯和半胱氨酸甲硫氨酸二聚体，其通过浓度作用竞争黏液聚合物中的巯基和二硫键。当二硫键被断裂时，黏液的总体粘性显著减少。黏膜中其它形式的二级结构是包括多糖和氨基糖链的协同氢键键合结构。这种协同氢键键合用离液剂还原，并且实际上是氢键键合的有序结构被打乱时，来自其中的增加的熵的自由能有利于在施用包含这些化合物的组合物过程中鼻孔的温暖的愉快感受。

在另一个实施方案中，将膜渗透增强剂加入本发明的组合物中。已经描述了不同的膜渗透增强剂如(i)表面活性剂，(ii)胆盐或胆盐衍生物，(iii)磷脂或脂肪酸添加剂，混合的胶束，脂质体或载体，(iv)醇，(v)烯胺，(vi)NO供体化合物，(vii)长链两亲性分子，(viii)小的疏水性渗透增强剂，(ix)钠或水杨酸衍生物，(x)乙酰乙酸的甘油酯，(xi)环糊精或β-环糊精衍生物，(xii)中链脂肪酸，(xiii)螯合剂(例如，柠檬酸，水杨酸盐)，(xiv)氨基酸或其盐，(xv)N-乙酰基氨基酸或其盐，(xvi)降解选定的膜成分的酶，(xvii)脂肪酸合成的抑制剂，(xviii)胆固醇合成的抑制剂，(xix)阳离子聚合物，或(xx)((i)-(xix))的膜渗透增强剂的任何组合。所述膜渗透增强剂可以选自小的亲水性分子，包括但不限于，二甲亚砜(DMSO)，二甲基甲酰胺，乙醇，丙二醇，和2-吡咯烷酮。备选地，可以使用长链两亲性分子，例如脱酰基甲基亚砜，月桂氮

酮，十二烷基硫酸钠，油酸和胆盐(例如不饱和环状脲和Transcutol)，以增加本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的黏膜渗透。在另外的方面，还将表面活性剂(例如，吐温80，泊洛沙姆188，聚山梨酯；还在EP 490806，US 5,759,565，和WO 04/093917中提供表面活性剂的另外的非限制性实例)用作辅剂化合物、加工剂或制剂添加剂以增加本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的鼻内递送。这些渗透增强剂典型地在包含内衬于鼻黏膜的上皮细胞的脂双层的分子极性头部基团或亲水性尾部区域相互作用(Barry，Pharmacology of the Skin(皮肤药理学)，Vol.1(第1卷)，121-137页，Shroot等，Eds.，Karger，Basel，1987；和Barry，J.Controlled Release(控制释放杂志)1987；6：85-97)。在这些位点的相互作用可能具有破坏脂质分子的堆积，增加双层的流动性和促进本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质转运通过黏膜屏障的作用。膜渗透增强剂的另外的非限制性实例在WO 04/093917，WO 05/120551和Davis和Illum(Clin.Pharmacokinet(临床药物代谢动力学)2003，42：1107-1128)中进行了描述。

在本发明的各种实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质与上述(a)-(k)中例举的一种，两种，三种，四种或更多种黏膜(例如鼻内)递送增强剂组合。这些黏膜递送增强剂可以单独混合或与鼻用载体以及纳米抗体、多肽或蛋白质一起混合，或以另外的方式与其组合在药用制剂或递送介质中。根据本文教导的纳米抗体、多肽或蛋白质与一种或多种的黏膜递送增强剂(任选地包括选自上述(a)-(k)的两种或多种黏膜递送增强剂的任何组合)的制剂在其被递送到受试者的鼻黏膜表面后提供纳米抗体、多肽或蛋白质的增加的生物利用度。

虽然促进吸收的机制可能随不同的本发明的鼻内递送-增强剂而变化，在本文中所用的有效试剂将不会对黏膜组织有明显不利的影响并且将根据特定纳米抗体、多肽或蛋白质或其它活性成分或递送增强剂的物理化学特征进行选择。在上下文中，增加黏膜组织的渗透或渗透性的递送增强剂通常将导致黏膜保护性渗透屏障的一些改变。对于在本发明中有用的一些递送增强剂，通常理想的是在黏膜渗透性中的任何显著改变在适合于药物递送的理想延续时间的期限内是可逆的。而且，长期使用不会带来显著累积的毒性，也不会对黏膜的屏障性质诱导任何持久的有害的改变。

除了本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，鼻用载体和任选地一种或多种另外的添加剂和/或试剂之外，本发明的组合物还可以包含一种或多种另外的治疗成分(或活性物质)。这些治疗成分可以是在受试者中激发合乎需要的活性或治疗或生物反应的任何化合物。在优选的实施方案中，可以组合使用两种或多种本发明的纳米抗体，肽或蛋白质，即作为组合治疗方案。

如上面所指出，本发明的组合物或药物组合物应该包含至少有效量的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质。以其最广泛意义的用在本发明中的“治疗有效量”指能够在接受所述纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者中激发需要的活性或需要的生物学、预防和/或治疗反应的纳米抗体、多肽或蛋白质的量。待施用的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的量以及由此在本发明的组合物中活性成分的量将当然会根据下列因素变化：如化合物的生物利用度，疾病适应症和受试者的特定状态(例如受试者的年龄、尺码、健康状况、症状的程度、敏感性因素等)，靶细胞，肿瘤，组织，移植物或器官，同时施用的其它药物或治疗，以及本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在受试者中激发合乎需要的活性或生物学、预防或治疗反应的具体药理学。可以调节给药方案以提供最佳的活性或生物学、预防或治疗反应。剂量应该根据所施用的制剂的释放速率进行调节(例如，鼻喷雾剂对比粉末)。治疗有效量也指这样的量，其中在临床术语中，治疗有益效果超过本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的任何毒性或有害的副作用。可以与注射途径等同地选择剂量。

在本文中，在经鼻给药本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的绝对生物利用度是通过注射获得的水平的约1，2，3，5，7，10，15，20，25，30，40，50，60，70，80，90，100％或更多的等级。与静脉内施用相比，绝对生物利用度测量在鼻内给药后，活性药物在系统循环中的利用度。本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的绝对生物利用度通过将静脉内(IV)施用后的纳米抗体、多肽或蛋白质的浓度对比时间绘图与鼻内(IN)施用后的纳米抗体、多肽或蛋白质的浓度对比时间绘图进行比较来获得。将本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的绝对生物利用度定义为(AUC_IN x剂量_IN)/(AUC_IV x dose_IV)x 100。

在经鼻给药本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的相对生物利用度是通过注射获得的水平的约1，2，3，5，7，10，15，20，25，30，40，50，60，70，80，，90，100％或更多的等级。当与施用相同药物的另一种形式，如肌内(IM)或皮下(SC)相比时，在鼻内给药后，相对生物利用度测量了活性药物在系统循环中的生物利用度。本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的相对生物利用度通过对纳米抗体、多肽或蛋白质在肌内(IM)或皮下(SC)施用的浓度对比时间绘图和纳米抗体、多肽或蛋白质在鼻内(IN)施用后的浓度对比时间绘图进行比较来确定。将本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的相对生物利用度定义为(AUC_IN x剂量_IN)/(AUC_SC/IM x剂量_SC/IM)x100。因此，为了等效于注射途径，适当地实施经鼻给药从而给出通过注射治疗所需要的剂量的1-100倍，优选地1-50倍，更优选地1-20倍，甚至更优选地1-10倍等级的剂量比率，这也取决于经鼻给药的频率。

一般会选择活性化合物的量从而一旦在施用时立即提供有效治疗。备选地，可以将剂量分成在一天内以一定间隔服用的例如2-4次给药的系列。其分剂量可以进一步被分成例如多次离散间隔的施用；如多次从吹入器吸入或通过多次滴注施用。为了维持本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的更一致或标准化的治疗水平，推荐将本发明的组合物重复施用于受试者的鼻黏膜，例如在24小时时期内1次，2次或更多次，在24小时时期内4次或更多次，在24小时时期内6次或更多次，或在24小时时期内8次或更多次。在下面描述递送装置，其产生脉动式递送以维持纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中的标准化和/或升高的治疗水平。施用方案可以包括长期，每日治疗。所谓“长期”是指至少两周和优选地数周、数月或数年的延续时间。根据本文提及的因素，临床医师将通常能够确定适合的每日剂量。应该清楚的是，在具体的情形中，临床医师可以选择偏离这些量，例如基于上述提及的因素和他的专业判断。

有效剂量的最终确定将基于动物模型研究，随后人的临床试验并且通过确定有效剂量和经鼻给药方案进行指导，所述有效剂量显著减少受试者中靶向的疾病症状或病症的发生或严重性。在该方面适合的模型包括，例如鼠、大鼠、猪、猫、非人灵长类动物和其它的本领域已知的接受的动物模型受试者。最终，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的剂量将由医生、内科医师或临床医师判断。所述剂量还可以在任何并发症的情况中，由每个内科医师判断。

作为非限制性的实例，所述纳米抗体、多肽或蛋白质以这样的量适当地存在于本发明的组合物中，所述量提供约0.1微克到0.1克/kg体重/天的游离纳米抗体、多肽或蛋白质浓度，如1微克到0.1克/kg体重/天，如0.01-100毫克/kg体重/天，如0.05-100毫克，如从0.05-50毫克，0.05到30毫克，0.1到20毫克，或从约1-10或约5-10毫克/kg体重/天，其作为单一每日剂量或作为一天中的多次分剂量施用。

在本发明的鼻用组合物中的每种其它的成分的比例可以根据所用的成分改变。例如，但不限于，鼻用载体的量的范围可以在所述组合物的总重或体积的0.1到99.9重量％。当存在时，表面活性剂的量可以在约0.01到约10％的范围内或更高，和优选地在所述组合物的总体积或重量的约0.05到约1.0重量％，所述量取决于所用的具体表面活性剂。所述量通常保持尽可能地低，因为超过某一水平，不能获得吸收的进一步的增加并且此外，过高的表面活性剂水平可能导致对鼻黏膜的刺激。递送增强剂的量可能是至少0.1％，适当地在所述组合物的总重的约0.5-10％的范围中。如果所述组合物是液体，增强剂可以适当地以总组合物的0.1-5％w/v的量存在。防腐剂可以以所述组合物的总重或体积的约0.002到0.02重量％的量存在。

除了本发明组合物中不同化合物的浓度以外，递送体积也是要考虑的重要因素。递送体积由鼻腔的尺寸限制。适当的递送体积对于药物领域的技术人员而言是清楚的。优选地，在每次经鼻给药时施用的总的组合物的量适当地包括约0.05到0.5ml，优选地约0.07-0.3ml，典型地约0.09-0.1ml。固体组合物可以包括1-30mg载体/剂量，更具体地4-20mg。

本发明还提供制备如上所述的组合物的方法，所述方法包括将包含纳米抗体结构域抗体，单结构域抗体或“dAb”或基本上由其组成的多肽或蛋白质以及药用鼻用载体形成紧密的混合物。

本发明还提供制备如上所述的组合物的方法，所述方法包括将包含纳米抗体

结构域抗体，单结构域抗体或“dAb”或基本上由其组成的多肽或蛋白质，和药用鼻用载体和任选地一种或多种其它的治疗成分和/或药用添加剂和/或试剂一起形成紧密的混合物。

本发明的液体组合物可以通过将液体载体中的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，任选地与其它的成分，添加剂和/或试剂一起形成紧密的混合物来制备。优选地，接着将得到的混合物冷冻干燥并且溶解在水或盐水溶液中以用于本发明所述的液体形式。本发明的固体鼻用组合物可以以常规方式进行制备。本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质可以与载体颗粒，例如聚合物基质或纤维素产品，以及任选地其它成分，添加剂和/或试剂以常规方式混合，所述其它成分，添加剂或试剂如上所述，例如黏膜递送增强剂或表面活性剂如已经公开的。本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质可以以溶液形式例如水溶液或醇溶液形式存在，此时其与载体颗粒混合并且在例如冷冻干燥或喷雾干燥下蒸发溶剂。所述干燥可以在常规条件下实现。备选地，所述混合物可以被压紧或成粒，接着磨成粉和/或筛分。如果需要，可以包被所述颗粒。根据本发明的优选实施方案，鼻用组合物通过冷冻干燥进行制备。制备包含本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和任选地包含如上所述的其它成分，添加剂和/或试剂的均相溶液，优选地水溶液，接着将其以类似于已知冷冻干燥方法的方式进行冷冻干燥并且随后进行干燥。接着，可以将得到的粉末溶解在液体赋形剂或鼻用载体中，之后施用，例如重构鼻滴剂，凝胶或喷雾剂。备选地，可以将其原样以冻干粉末的形式施用或其可以与上述其它的成分，添加剂和/或试剂混合。例如，可以制备包含本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，但不包含任何鼻用载体的冻干粉末，接着将其与需要的鼻用载体或鼻用载体的混合物混合。

可获得多种递送装置用于鼻内给药，如滴注导管、滴管、单位剂量容器、塑料挤瓶泵喷雾器(squeeze bottles pump sprays)、无气和无防腐剂(preservative-fee)的喷雾器、压缩空气喷雾器、定量吸入器、吹入器和加压定量吸入器。装置在递送精确度、剂量重现性、费用和使用的简便性上有所不同。目前，定量系统提供最大的剂量精确性和重现性。用于本发明组合物的适合的递送装置对于药物领域的技术人员是清楚的并且在本文将进一步描述。

本发明包括任何适合于经鼻给药和/或给药如上所述的组合物的递送装置，即装备有将如上所述的组合物定位于鼻黏膜的工具。优选地，所述工具施用定量剂量的组合物。本发明的组合物可以以任何适合的方式或容器包装，只要提供工具来递送(固定或定量剂量的)组合物到鼻黏膜。

所述递送装置优选地能够(重复地)递送单位剂量的本发明的组合物，和具体的(重复地)递送单位剂量的本发明的组合物，其基本上包括适合于经鼻给药的递送体积(即，如本文进一步所述)。

对于以滴剂形式施用液体，例如，所述组合物适当地被置于装备有常规滴管/密封装置的容器，例如包括吸液管等，优选地递送基本上固定体积的组合物/滴剂。

对于施用作为鼻喷雾剂的水溶液，可以将水溶液以喷雾剂形式通过本领域技术人员已知的多种方法分配。例如，所述组合物将被置于适合的雾化装置，例如在泵-雾化器等中。所述雾化装置装备有适合的工具，如用于将水性喷雾剂递送到鼻孔的喷雾剂适配器(spray adaptor)。优选地，其将装备有确保递送基本固定体积的组合物/驱动(即，每个喷雾单位)的工具。鼻喷雾剂的实例包括由Ing.Erich Pfeiffer GmbH，Radolfzell，德国生产的鼻驱动器(见US 4,511,069，US 4,778,810，US 5,203,840，US 5,860,567，US5,893,484，US 6,227,415，和US 6,364,166。另外的气溶胶递送形式可以包括例如压缩空气-、喷气-、超声和压电喷雾器。

备选地，所述喷雾剂可以在压力下装入气溶胶装置。“气溶胶”是在压力下包装的产品并且包含在激活适当的阀门系统后被释放或递送的治疗活性成分。所述推进剂可以是气体或液体(例如，氟化和/或氯化烃)。所述喷雾剂组合物可以悬浮或溶解在液体推进剂中。可以存在稳定剂和/或悬浮剂和/或助溶剂。

可以将干粉容易地分散在如US 6,514,496中所述的吸入装置中。这些干粉组合物包括大量离散的干燥颗粒，其平均颗粒大小在0.4-5μm质量中间粒径范围内，或在20-250μm范围内(Garcia-Arieta等，Biol.Pharm.Bull.2001；24：1411-1416)。

如果需要，可以将粉末或液体填充到软或硬胶囊或适合于经鼻给药的单剂量装置中。所述粉末可以在进行筛分之后填充到胶囊如明胶胶囊中。所述递送装置可以具有打开胶囊的工具。粉状的鼻用组合物可以直接作为粉末用于单位剂型。胶囊或单剂量装置的内容物可以使用例如吹入器进行施用。优选地，其可以装备有确保每次驱动给药基本上固定量的组合物的工具。

在递送力、发射的液滴尺寸或喷雾模式上也存在差异。递送装置不仅对于递送本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，而且对于提供贮存的适当环境也是重要的。这包括针对微生物污染和化学降解提供保护。所述装置和制剂应该是相容的，从而避免可能的浸出或吸附。

所述容器可以包含足量的组合物，以用于单次鼻用剂量或用于供应数次连续的剂量，例如在1天、不同的天数或周数时期内。在上文定义了各个剂量适合的量。优选地，它们能够以约0.05-0.15ml，典型地约0.09-0.1ml的单个固定的量施用所包含的组合物。

所述递送装置可以以本身已知的方式适当地包装。所述递送装置(或其包装)可以任选地带有标记和/或说明书，以用于指示所述组合物应该鼻内给药。

在另一个实施方案中，本发明的组合物作为其中分散有本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的鼻用插入物提供。“鼻用插入物”是这样的装置，其具有一定大小、成一定形状并且适合于放置并停留在鼻孔中；或其意欲插入鼻孔中；或其成形，具有一定形状或以另外的方式适合于插入和/或保留在鼻孔中；或其成一定形状以基本符合鼻孔的内表面；或其与说明书一起提供以实现插入到鼻孔中。所述插入物可以留在鼻孔中，但是被鼻黏液冲洗，并且可以被设计以在鼻孔的相同位置释放本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质。适合的鼻用插入物类型包括鼻栓、鼻塞等。鼻用插入物的另外的实例，它们的特征和制备描述在EP 490806中。

配制本发明的组合物以局部施用于鼻黏膜并能够在受试者中提供纳米抗体、多肽或蛋白质的系统治疗或生物学反应和/或在受试者的脑中提供纳米抗体、多肽或蛋白质的治疗或生物学反应。这意味着，在血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)中和/或在脑中存在的足量的功能性(即，活性或未失活的)本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，从而提供需要的治疗效果(即，在接受所述纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者中激发需要的活性或需要的生物学、预防或治疗反应)。在施用本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)和/或在脑中的生物利用度通过测量本领域技术人员公知的药物代谢动力学参数Cmax(峰值浓度)，AUC(浓度对时间曲线下面积)和/或Tmax(到达最大血液浓度的时间)进行确定(Laursen等，Eur.J.Endocrinology(欧洲内分泌学杂志)，1996；135：309-315)。本发明的纳米抗体、肽或蛋白质的生物利用度可以以任何常规方式，例如通过放射性免疫测定进行确定。

“Cmax”用在本发明中时，指在将单剂量的组合物经鼻给药于受试者后，在血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)中和/或脑中获得的本发明纳米抗体、多肽或蛋白质的平均最大浓度。血液或血流，用于本发明中时，可以是血液的任何形式和/或级分。在不限制的情况下，血液或血流包括血浆和/或血清。在本发明的组合物中包括的纳米抗体、多肽或蛋白质的Cmax可以是任何值，只要所述纳米抗体、多肽或蛋白质在需要所述纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者中提供需要的活性或治疗或生物学反应。在本发明的一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少2，5，10，15，20，30，40，50，100，150，200，300，400，500，750，100ng或更多的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。

在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少2，5，10，15，20，30，40，50，100，150，200，300，400，500，750，100ng或更多的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。

在本发明的另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质后，所述纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到的Cmax是在肠胃外给药相同量的纳米抗体、多肽或蛋白质之后获得的Cmax的至少1％。在另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质后，所述纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到的Cmax是在肠胃外给药相同量的纳米抗体、多肽或蛋白质后获得的Cmax的至少2，3，5，7，10，15，20，25，30，40，50％或更多。

在本发明的另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质后，所述纳米抗体、多肽或蛋白质在脑中达到的Cmax是肠胃外给药相同量的纳米抗体、多肽或蛋白质之后获得的Cmax的至少1％。在另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质后，所述纳米抗体、多肽或蛋白质在脑中达到的Cmax是在肠胃外给药相同量的纳米抗体、多肽或蛋白质后所获得的Cmax的至少2，3，5，7，10，15，20，25，30，40，50％或更多。

“Tmax”，用于本发明中时，指在经鼻给药单剂量的本发明组合物后，在受试者的血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)和/或在脑中达到本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的最大浓度的平均时间。包含在本发明的组合物中的纳米抗体、多肽或蛋白质的Tmax可以具有任何值，只要所述纳米抗体、多肽或蛋白质在需要所述纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者中提供需要的活性或治疗或生物学反应。在本发明的一个实施方案中，纳米抗体、多肽或蛋白质到达血流，Tmax为少于120分钟。在另一个实施方案中，所述纳米抗体、多肽或蛋白质到达血流，Tmax为少于90，60，50，40，30，20，10，或5分钟。在本发明的另一个实施方案中，所述纳米抗体、多肽或蛋白质到达脑，Tmax为少于120分钟。在另一个实施方案中，所述纳米抗体、多肽或蛋白质到达脑，Tmax为少于90，60，50，40，30，20，10，或5分钟。

“浓度对时间曲线”测量在施用一定剂量的本发明的组合物后，纳米抗体、多肽或蛋白质在受试者血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)和/或在脑中对比时间的浓度。

在一个实施方案中，在鼻内给药本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中，在少于120分钟内，达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在少于120分钟内，在血液中达到至少2，5，10，15，20，30，40，50，100，150，200，300，400，500，750，1000ng或更多的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中，在少于90，60，50，40，30，20，10，或5分钟内达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药本发明的组合物后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在少于90，60，50，40，30，20，10，或5分钟内在血液中达到至少2，5，10，15，20，30，40，50，100，150，200，300，400，500，750，1000ng或更多的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。

在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，在少于120分钟内，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中，在少于120分钟内达到至少2，5，10，15，20，30，40，50，100，150，200，300，400，500，750，1000ng或更多的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在少于90，60，50，40，30，20，10，或5分钟内，在血液中达到至少1ng的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中，在少于90，60，50，40，30，20，10，或5分钟内达到至少2，5，10，15，20，30，40，50，100，150，200，300，400，500，750，1000ng或更多的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液的Cmax。

“曲线下面积(AUC)”用于本发明中时，是图中的曲线下面积，所述图是纳米抗体、多肽或蛋白质在血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)中和/或在脑中的浓度针对时间的绘图。数学上，该值是在时间间隔过程中对即时浓度的积分的测量。AUC通常关于从0到无限大的时间间隔给出，并且指定其它的时间间隔(例如，AUC(t₁，t₂)，其中t₁和t₂是时间间隔的起始和终止时间)。明显地，血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)和/或脑纳米抗体、多肽或蛋白质浓度不能关于受试者测量到“无限大”，因此使用数学方法从有限次的浓度测量来估计AUC。将所述AUC(从0-无限大)用于测量由身体吸收的纳米抗体、多肽或蛋白质的总量，而不管吸收率。当试图去确定具有相同剂量的两种施用制剂(例如肠胃外和鼻内)是否释放相同剂量的纳米抗体、多肽或蛋白质到身体时，这是有用的。

包含在本发明的组合物中的纳米抗体、多肽或蛋白质的AUC可以具有任何值，只要所述纳米抗体、多肽或蛋白质在需要所述纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者中提供需要的活性或生物学反应。在本发明的一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，在血液中关于本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的AUC是至少500ng/ml/分钟纳米抗体、多肽或蛋白质。在另一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，在血液中，关于本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的AUC是至少600，700，800，900，ng/ml/分钟或至少1，1.5，2，3，4，5.10或15μg/ml/分钟的纳米抗体、多肽或蛋白质。

在本发明的另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，在血液中关于本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的AUC是至少500ng/ml/分钟的纳米抗体、多肽或蛋白质。在另一个实施方案中，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质后，关于本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的AUC在血液中是至少600，700，800，900ng/ml/分钟或1，1.5，2，3，4，5或10μg/ml/分钟的纳米抗体、多肽或蛋白质/ml血液。

如上所述，在本发明的一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，与所述纳米抗体、多肽或蛋白质的肠胃外给药相比，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中的生物利用度(绝对的或相对的)是至少1％。在另一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，与所述纳米抗体、多肽或蛋白质的肠胃外给药相比，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在血液中的生物利用度是至少2，3，5，7，10，15，20，25，30，40，50，60，70，80，90，100％或更多。

在本发明的另一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，与所述纳米抗体、多肽或蛋白质的肠胃外给药相比，关于本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在脑中的生物利用度(绝对的或相对的)是至少1％。在另一个实施方案中，在鼻内给药包含所述纳米抗体、多肽或蛋白质的组合物后，与所述纳米抗体、多肽或蛋白质的肠胃外给药相比，关于本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在脑中的生物利用度是至少2，3，5，7，10，15，20，25，30，40，50，60，70，80，90，100％或更多。

将一种或多种本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质鼻内给药于受试者产生所述纳米抗体、多肽或蛋白质向血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)和/或脑中的有效递送，从而在受试者中激发需要的活性或治疗或生物学反应。在本发明的优选实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质在所述受试者中提供对选定的疾病或病症的预防和/或治疗。因此，本发明的另一方面涉及预防和/或治疗需要本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者的方法，所述方法包括给所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。

在本发明的上下文中，术语“预防和/或治疗”不仅包括预防和/或治疗所述疾病，一般还包括预防所述疾病的发作，延缓或逆转所述疾病的进展，预防或延缓一种或多种与疾病相关的症状的发作，减轻和/或缓和一种或多种与疾病相关的症状，减轻疾病的严重性和/或延续时间和/或与其相关的任何症状的严重性和/或延续时间，和/或预防疾病严重性的进一步增加和/或与其相关的任何症状严重性的进一步增加，预防、减轻或逆转由所述疾病导致的任何生理损伤，以及一般地对被治疗的患者有益的任何药理学作用。

待治疗的受试者可以是任何温血动物，但是特别是哺乳动物，和更具体地人。如对于本领域技术人员是显而易见的，待治疗的受试者具体地是患有疾病和/或病症，或具有患有疾病和/或病症风险的人。

本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过将本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质施用于遭受所述疾病或病症的受试者来预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。因此，本发明涉及本发明的纳米抗体，多肽，蛋白质或组合物用于预防和/或治疗至少一种可以通过将本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质经鼻给药于受试者来进行预防和/或治疗的疾病或病症。

在另一个实施方案中，本发明涉及免疫治疗的方法，和具体地被动免疫治疗的方法，所述方法包括向遭受这样的疾病和/或症状或有风险患有这样的疾病和/或症状的受试者鼻内给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物，所述疾病和/或症状可以通过用本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质进行的免疫治疗来治愈或缓和。

存在于本发明的组合物中的纳米抗体和基于纳米抗体的多肽或蛋白质可以针对具有治疗或诊断意义的任何适当的靶标。纳米抗体和基于纳米抗体的多肽或蛋白质可以作为激动剂以及拮抗剂发挥功能。实例包括但不限于具有治疗意义的靶标如TNF-α，IgE，IFN-γ，MMP-12，EGFR，CEA，幽门螺杆菌(H.pylori)，结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，流感，β-淀粉状蛋白，vWF，IL-6，IL-6R，PDK1，CD40，OVA，VSG，鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)，轮状病毒，布鲁氏杆菌属(Brucella)，甲状旁腺激素衍生的肽。

本发明提供本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质的系统递送。所述预期靶标可以是在任何生理区室、组织或器官中的靶标。在一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对肾或膀胱中的靶标并且本发明涉及预防和/或治疗需要针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对肾或膀胱中的靶标的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质来预防和/或治疗，所述方法包括给所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗肾或膀胱的疾病或病症的方法，所述方法包括给所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对肾或膀胱中的靶标，用于预防和/或治疗肾或膀胱的疾病或病症。

在另一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对肺中的靶标并且本发明涉及预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对肺中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用本发明的针对肺中靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质来预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗肺疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对肺中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中纳米抗体、多肽或蛋白质针对肺中的靶标，用于预防和/或治疗肺的至少一种疾病或病症。

在另一个优选实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对肿瘤细胞上的靶标并且本发明涉及预防和/或治疗需要针对肿瘤细胞上的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用本发明的针对肿瘤细胞上靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质来预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗肿瘤相关疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对肿瘤上靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中纳米抗体、多肽或蛋白质针对肿瘤细胞中的靶标，用于预防和/或治疗至少一种肿瘤相关的疾病或病症。

本发明还提供将本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质递送到脑中。预期靶标可以是在脑中的任何靶标。在一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对在脑中的靶标(如例如β-淀粉状蛋白)并且本发明涉及预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对脑中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用本发明的针对在脑中靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗脑疾病或病症(如神经遗传学疾病，(例如亨廷顿病和肌营养不良)，发育疾病(例如大脑性瘫痪)，成年人生命中变性疾病(例如，帕金森病和阿尔茨海默病)，代谢疾病(例如，戈谢病)，心血管疾病(例如，中风和血管性痴呆)，外伤(例如，脊髓和头部损伤)，惊厥性疾病(例如癫痫)感染性疾病(例如，AIDS痴呆)，肥胖症，糖尿病，厌食，抑郁，脑肿瘤，具有Lewy小体的痴呆，多系统萎缩，进行性核上性麻痹，额颞性痴呆，血管性痴呆或唐氏综合征)的方法，所述方法包括给所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对在脑中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中所述纳米抗体、多肽或蛋白质针对在脑中的靶标，用于预防和/或治疗至少一种脑疾病或病症(如神经遗传学疾病，(例如亨廷顿病和肌营养不良)，发育疾病(例如大脑性瘫痪)，成年人生命中变性疾病(例如，帕金森病和阿尔茨海默病)，代谢疾病(例如，戈谢病)，心血管疾病(例如，中风和血管性痴呆)，外伤(例如，脊髓和头部损伤)，惊厥性疾病(例如癫痫)感染性疾病(例如，AIDS痴呆)，肥胖症，糖尿病，厌食，抑郁，脑肿瘤，具有Lewy小体的痴呆，多系统萎缩，进行性核上性麻痹，额颞性痴呆，血管性痴呆或唐氏综合征)。

在另一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对TNF并且本发明涉及预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对TNF的纳米抗体、多肽或蛋白质，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用本发明的针对TNF的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗疾病或病症如自体免疫疾病(如例如类风湿性关节炎或炎性肠病)的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对TNF的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中所述纳米抗体、多肽或蛋白质针对TNF，用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症如自体免疫疾病(如例如类风湿性关节炎或炎性肠病)。

在另一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对vWF并且本发明涉及预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对vWF的纳米抗体、多肽或蛋白质，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用本发明的针对vWF的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗涉及血小板介导的聚集的疾病或病症(如例如形成非闭塞性的血栓，形成闭塞性的血栓，动脉血栓形成，急性冠状动脉闭塞，周围动脉闭塞性疾病，再狭窄和由冠状动脉旁路移植物、冠状动脉瓣膜置换术和冠状动脉干预引起的疾病，所述冠状动脉干预如血管成形术、支架术或动脉粥样硬化斑块切除术，血管成形术后的增生，动脉粥样硬化斑块切除术或动脉支架术，在血管系统中的闭塞性综合征或患病动脉的开放性缺乏，血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，短暂性脑缺血发作(transient cerebralischemic attack)，不稳定或稳定的心绞痛，脑梗死，HELLP综合征，颈动脉内膜切除术，颈动脉狭窄，严重肢体缺血(critical limb ischaemia)，心源性脑栓塞(cardioembolism)，外周血管疾病，再狭窄和心肌梗死)的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对vWF的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中纳米抗体、多肽或蛋白质针对vWF，用于预防和/或治疗至少一种涉及血小板介导的聚集的疾病或病症(如例如形成非闭塞性的血栓，形成闭塞性的血栓，动脉血栓形成，急性冠状动脉闭塞，周围动脉闭塞性疾病，再狭窄和由冠状动脉旁路移植物、冠状动脉瓣膜置换术和冠状动脉干预引起的疾病，所述冠状动脉干预如血管成形术、支架术或动脉粥样硬化斑块切除术，血管成形术后的增生，动脉粥样硬化斑块切除术或动脉支架术，在血管系统中的闭塞性综合征或患病动脉的开放性缺乏，血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，短暂性脑缺血发作(transient cerebral ischemic attack)，不稳定或稳定的心绞痛，脑梗死，HELLP综合征，颈动脉内膜切除术，颈动脉狭窄，严重肢体缺血，心源性脑栓塞，外周血管疾病，再狭窄和心肌梗死)。

在另一个实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物并且本发明涉及预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、多肽或蛋白质，所述方法包括给所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、多肽或蛋白质，和/或包含其的组合物。本发明还涉及预防和/或治疗与IL-6R，IL-6和/或与IL-6/IL-6R复合物相关的疾病或病症(如例如，脓毒症，各种形式的癌症如多发性骨髓瘤疾病(MM)，肾细胞癌(RCC)，浆细胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴组织增生性疾病(BLPD)和前列腺癌，骨吸收(骨质疏松症)，恶病质，银屑病，肾小球系膜性增殖性肾小球肾炎，卡波西肉瘤，AIDS-相关的淋巴瘤，炎性疾病和病症如类风湿性关节炎，全身发作的青少年特发性关节炎，高丙球蛋白血症，局限性回肠炎，溃疡性结肠炎，系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化，卡斯尔曼氏病(Castleman’s disease)，IgM丙球蛋白病，心脏粘液瘤，哮喘(特别是变应性哮喘)和自体免疫性胰岛素依赖性糖尿病)的方法，所述方法向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。因此，本发明还涉及本发明的组合物，其中所述纳米抗体、多肽或蛋白质针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物，用于预防和/或治疗至少一种与L-6R，IL-6和/或与IL-6/IL-6R复合物相关的疾病或病症(如例如，脓毒症，各种形式的癌症如多发性骨髓瘤疾病(MM)，肾细胞癌(RCC)，浆细胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴组织增生性疾病(BLPD)和前列腺癌，骨吸收(骨质疏松症)，恶病质，银屑病，肾小球系膜性增殖性肾小球肾炎，卡波西肉瘤，AIDS-相关的淋巴瘤，炎性疾病和病症如类风湿性关节炎，全身发作的青少年特发性关节炎，高丙球蛋白血症，局限性回肠炎，溃疡性结肠炎，系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化，卡斯尔曼氏病(Castleman’s disease)，IgM丙球蛋白病，心脏粘液瘤，哮喘(特别是变应性哮喘)和自体免疫性胰岛素依赖性糖尿病)。

与其它递送方法如口服施用相比，鼻递送是一种有吸引力的途径，这是因为施用的化合物的快速吸收和快速起效。因此，在优选的实施方案中，本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质或包含其的组合物用于预防和或治疗这样的疾病或病症，所述疾病或病症是急性的并且对于其需要快速的递送。因此，本发明还涉及预防和/或治疗急性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的能够缓和所述疾病或病症的症状或治愈所述疾病或病症的纳米抗体、多肽或蛋白质。

根据适合于预防和/或治疗待预防或治疗的疾病或病症的治疗方案，经鼻给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物。临床医师通常能够根据各种因素如待预防或治疗的疾病或病症，待治疗的疾病的严重性和/或其症状的严重性，所用的具体的本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和所用的药物制剂或组合物，受试者的年龄、性别、体重、饮食、一般状况，和临床医师公知的类似因素来确定适合的治疗方案。

一般而言，治疗方案包括以一种或多种治疗有效量或剂量来经鼻给药一种或多种本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质或一种或多种包含其的组合物。可以由临床医生还是根据上述的因素来确定待施用的具体的量或剂量。

还可以将本发明的纳米抗体和多肽与一种或多种其它的治疗成分(或药物活性化合物或成分)组合使用，即作为组合治疗方案，其可以导致或可以不导致协同作用。此外，基于上述因素和他的专业判断，临床医师能够选择这样的另外的化合物或成分，以及适合的组合治疗方案。

当将第二活性物质或成分用作组合治疗方案的部分时，其可以在基本相同的时间或不同的时间(例如，基本同时，连续地或根据交替的方案)通过相同的经鼻给药路径或通过不同的施用路径进行施用。当将所述物质或成分通过相同的经鼻给药途径同时施用时，它们可以作为不同的制剂或组合物，或组合的制剂或组合物的部分进行施用，这是本领域技术人员清楚的。

此外，当将两种或多种活性物质或成分用作组合的治疗方案的部分时，每种物质或成分可以以相同的量并根据与所述化合物或成分单独使用时相同的方案进行施用，所述组合的使用可以导致或可以不导致协同作用。然而，当两种或多种活性物质或成分的组合使用导致协同作用时，其还可以可能减少待施用的一种、多种或全部的物质或成分的量，同时仍旧获得需要的治疗作用。这可以例如用于避免、限制或减少任何与以其常用量使用的一种或多种物质或成分的使用相关的有害的副作用，同时仍旧获得需要的药物作用或治疗效果。

根据本发明使用的治疗方案的有效性可以以任何本身已知的用于涉及的疾病或病症的方式确定和/或推断，这是临床医生所清楚的。当适合时，或依据不同的病例，临床医师还能够改变或改进具体的治疗方案，从而获得需要的治疗效果，以避免、限制或减少有害的副作用，和/或在获得一方面需要理想的治疗效果和另一方面避免、限制或减少不需要的副作用之间的适当的平衡。

一般而言，应当遵从治疗方案直到获得需要的治疗效果和/或只要能维持需要的治疗效果。这也可以由临床医师确定。

本发明还涉及本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种肾或膀胱的疾病或病症的组合物的应用。本发明还涉及本发明的针对肺中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的针对肺中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对肺中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗至少一种肺疾病或病症的组合物的应用。本发明还涉及本发明的针对肿瘤上的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的针对肿瘤上的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对肿瘤上的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种癌症的组合物的应用。本发明还涉及本发明的针对脑中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的针对脑中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对脑中的靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种脑中疾病或病症(如神经遗传学疾病，(例如亨廷顿病和肌营养不良)，发育疾病(例如大脑性瘫痪)，成年人生命中变性疾病(例如，帕金森病和阿尔茨海默病)，代谢疾病(例如，戈谢病)，心血管疾病(例如，中风和血管性痴呆)，外伤(例如，脊髓和头部损伤)，惊厥性疾病(例如癫痫)感染性疾病(例如，AIDS痴呆)，肥胖症，糖尿病，厌食，抑郁，脑肿瘤，具有Lewy小体的痴呆，多系统萎缩，进行性核上性麻痹，额颞性痴呆，血管性痴呆或唐氏综合征)。本发明还涉及本发明的针对TNF的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的针对TNF的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对TNF的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症如自体免疫性疾病(如例如，类风湿性关节炎或炎性肠病)。本发明还涉及本发明的针对vWF的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的针对vWF的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对vWF的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种与血小板介导的聚集相关的疾病或病症(如例如形成非闭塞性的血栓，形成闭塞性的血栓，动脉血栓形成，急性冠状动脉闭塞，周围动脉闭塞性疾病，再狭窄和由冠状动脉旁路移植物、冠状动脉瓣膜置换术和冠状动脉干预引起的疾病，所述冠状动脉干预如血管成形术、支架术或动脉粥样硬化斑块切除术，血管成形术后的增生，动脉粥样硬化斑块切除术或动脉支架术，在血管系统中的闭塞性综合征或患病动脉的开放性缺乏，血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，短暂性脑缺血发作(transient cerebral ischemic attack)，不稳定或稳定的心绞痛，脑梗死，HELLP综合征，颈动脉内膜切除术，颈动脉狭窄，严重肢体缺血，心源性脑栓塞，外周血管疾病，再狭窄和心肌梗死)。本发明还涉及本发明的针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的组合物的应用，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药本发明的针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、多肽或蛋白质进行预防和/或治疗。本发明还涉及本发明针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、多肽或蛋白质用于制备组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种与IL-6，IL-6R和/或与IL-6/IL-6R复合物相关的疾病或病症(如例如，脓毒症，各种形式的癌症如多发性骨髓瘤疾病(MM)，肾细胞癌(RCC)，浆细胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴组织增生性疾病(BLPD)和前列腺癌，骨吸收(骨质疏松症)，恶病质，银屑病，肾小球系膜性增殖性肾小球肾炎，卡波西肉瘤，AIDS-相关的淋巴瘤，炎性疾病和病症如类风湿性关节炎，全身发作的青少年特发性关节炎，高丙球蛋白血症，局限性回肠炎，溃疡性结肠炎，系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化，卡斯尔曼氏病(Castleman’s disease)，IgM丙球蛋白病，心脏粘液瘤，哮喘(特别是变应性哮喘)和自体免疫性胰岛素依赖性糖尿病)。

如上所述，向受试者鼻内给药一种或多种本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质得到了所述纳米抗体、多肽或蛋白质向血液(和/或另一选定的生理区室、组织和/或器官如例如肾、膀胱和/或肺)和/或脑中的有效递送，从而在受试者中激发需要的活性或生物学反应。除了如上讨论的预防和治疗反应以外，本发明的纳米抗体，多肽和蛋白质还可以诱导其它的活性和生物学反应。在优选的实施方案中，本发明还提供本发明的纳米抗体，多肽和蛋白质的诊断应用，例如用于原位或体内标记，如放射性标记和成像。因此，本发明还涉及诊断方法，包括经鼻给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物的步骤。在本发明的一个实施方案中，提供这样的诊断方法，其包括经鼻给药本发明的纳米抗体、多肽或蛋白质和/或包含其的组合物的步骤和原位检测所述纳米抗体、多肽或蛋白质的步骤。检测可以以本领域任何已知的方法进行。

本发明的纳米抗体，多肽和蛋白质可以通过非侵入性的方法原位确定，其包括但不限于SPECT和PET，或如Cortez-Retamozo V.所述的成像方法(Nanobodies：single domain antibody fragments as imaging agents andmodular building blocks for therapeutics(纳米抗体：作为成像剂和治疗剂的分子结构单元的单结构域抗体片段)，PhD Dissertation(博士论文)，VrijeUniversiteit Brussel，Belgium，2004年6月)，Arbit等(Eur.J.Nucl.Med.(欧洲核酸医学杂志)1995；22：419-426.)，Tamada等(Microbiol-Immunol.(微生物免疫学杂志)1995；39：861-871)，Wakabayashi等(Noshuyo-Byori 1995；12：105-110)，Huang等(Clin.Med.J.(临床医学杂志)1996；109：93-96)，Sandrock等(Nucl.Med.Commun.(核酸医学通讯)1996；17：311-316)，和Mariani等(癌症1997；15：2484-2489)。这些体内成像方法可以容许定位并且可能量化特定靶标，例如通过使用标记的纳米抗体，多肽或蛋白质，特异性识别所述靶标。体内多光子显微镜方法(In vivo multiphotonmicroscopy)(Bacskai等，J.Cereb.Blood Flow Metab.2001；22：1035-1041)可以用于显示某一靶标的存在，所述靶标具有标记的特异于所述靶标的纳米抗体、多肽或蛋白质。

在本发明的诊断方法中经鼻给药的纳米抗体、多肽或蛋白质可以用适合的标记进行标记。用在所述方法中的具体的标记或可检测的基团并不是本发明的关键方面，只要其没有明显干扰在所述方法中使用的纳米抗体、多肽或蛋白质的特异性结合。可检测的基团可以是具有可检测的物理或化学性质的任何物质。所述可检测的标记已经在免疫测定领域中充分开发，并且通常几乎在所述方法中所用的任何标记可以用于本发明的方法中。因此，标记是可通过分光镜、光化学、生物化学、免疫化学、电子、光学、放射学或化学方式进行检测的任何组合物。在本发明中有用的标记包括，但不限于磁珠(例如，Dynabeads^TM)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素，德克萨斯红，罗丹明，Cy3，Cy5，Cy5.5，Alexi 647和衍生物)，放射性标记(例如³H，¹²⁵I，³⁵S，¹⁴C，³²P或^99mTc)，酶(例如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶和在ELISA中常用的其它酶)和比色标记如胶体金，有无玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、胶乳等)珠。

所述标记可以根据本领域众所周知的方法直接或间接与纳米抗体、多肽或蛋白质偶联。如上所述，可以使用各种各样的标记，其中标记的选择取决于需要的灵敏性、与化合物缀合的容易性，稳定性需求，可获得的仪器和处理规定。非放射性标记通常通过间接的方式进行连接。用于检测标记的方式是本领域公知的。因此，例如，如果所述标记是放射性标记，用于检测的方式包括闪烁计数器或如在放射自显影中的照相胶片。如果所述标记是荧光标记，其可以通过用适当波长的光激发荧光团和检测得到的荧光进行检测。荧光可以肉眼检测，通过照相胶片的方式，通过使用电子检测器如电荷耦合装置(CCDs)或光电倍增管等检测。

最后，尽管更优选使用本发明的纳米抗体(如本文定义)和包含本发明的所述纳米抗体的多肽和蛋白质，但是基于本文的描述显而易见的是，本领域技术人员还将理解其它的(单)结构域抗体，以及包含所述(单)结构域抗体的多肽和蛋白质(其中术语“结构域抗体”，“单结构域抗体”和“dAb”具有其在本领域中的一般含义)也涵盖在本发明的范围内。

现在，本发明将通过下列非限制性实施例和图进行进一步描述。

实施例

实施例1：鼻内给药纳米抗体FC44获得系统递送

为了评估鼻内给药纳米抗体是否导致系统递送，在鼻内递送后确定放射性标记的纳米抗体FC44的生物分布。所述纳米抗体在his-标签处用^99mTc三羰基进行位点特异性放射性标记。简言之，使用IMAC(固定化金属亲和层析)、大小排阻层析和阴离子交换层析纯化FC44纳米抗体。通过定量产色素鲎变形细胞溶解物测定(BioWhittaker/Cambrex，Verviers，Belgium)确定脂多糖(LPS)的水平，并且发现其低于5EU/mg蛋白质。

使用可商购的Isolink试剂盒(Mallinckrodt，Hazelwood，MO，USA)制备^99mTc三羰基([^99mTc(CO)3(OH2)3])。将100μl FC44(1.1mg/ml)加入400μl的^99mTc(CO)3(OH2)3(30-40mCi)和100μl碳酸盐缓冲液并且在60分钟的过程中在52℃进行温育。通过薄层色谱法确定的标记效率超过90％。一旦证实了质量，将放射性标记的纳米抗体立即用于体内实验。将雄性Wistar大鼠(300g-400g)(n＝5)用游离的^99mTc三羰基或^99mTc-FC44进行鼻内处理并且在2，4，6小时后确定所述标记的生物分布。在0时间点，用荧烷麻醉大鼠并且将50μl的游离放射性标记或放射性标记的FC44施用于大鼠的每个鼻孔。在指定的时间，使用戊巴比妥钠杀死大鼠并且收集组织样品(尿、血液、肝、肾)并称重。同时，用^99mTc-FC44静脉内注射大鼠(n＝2)并在2小时处收集相同的组织样品。使用γ-计数器检测^99mTc水平，并关于放射性衰变校正得到的计数。将结果表示为％注射剂量/g组织(％ID/g)。

如图1A所显示，^99mTc-FC44显示在肾中较强累积，同时在尿中观察到较低水平。而且，在尿和肾中的更高的和相应地低水平的游离^99mTc-三羰基，指示关于^99mTc-FC44观察到的信号来自放射性标记的纳米抗体，而不是来自游离的放射性标记。因为循环中的纳米抗体主要通过肾和尿清除并且因为在鼻腔和肾之间的仅有的转运可能是通过循环进行的，这些结果显示纳米抗体在鼻内给药后是系统递送的。此外，与鼻内递送相比，施用后2小时，对于静脉内注射，仅在肾中检测到稍微更高的纳米抗体水平(图1A和图1B)。

结论是，鼻内给药FC44纳米抗体导致较高的肾和尿水平，着重说明了系统递送。

实施例2：FC44纳米抗体在鼻内递送后仍旧是完整的

如实施例1中所述，纯化FC44纳米抗体并进行^99mTc放射性标记。如实施例1所述，用^99mTc-FC44鼻内处理雄性Wistar大鼠并且在4小时后，收集肾和尿。使用匀浆器在生理血清中制备肾匀浆物。在15％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)上分析两种样品。使用单光子发射计算机化断层显象(SPECT：Siemens ECAM照相机，双头)显现所述^99mTc放射性标记。图2清楚地显示在尿中，检测到与FC44纳米抗体(泳道1)相同大小的信号(泳道2)，说明在鼻内给药和得到系统递送后，至少部分的纳米抗体仍旧是完整的。此外，在肾样品中检测到信号(泳道3)，尽管与尿信号相比，检测的条带更具扩散性。这是由于肾样品的更高粘度造成的。

结论是，在鼻内递送后，完整的纳米抗体可以在尿和肾中检测到。

实施例3：在循环中检测FC44纳米抗体

如实施例1中所述，纯化FC44纳米抗体并进行^99mTc放射性标记。如在实施例1中所述在雄性Wistar大鼠中进行^99mTc-FC44的鼻内和静脉内施用。在0，20，40，60和120分钟收集两只大鼠(No.139和No.140)的血液样品。对于另一只大鼠(No.018)，在0，5，10，15，20和40分钟收集血液样品。在γ计数器中计数血液样品并且关于放射性衰变校正得到的计数。将鼻内给药的结果表示为％注射剂量/克组织(％ID/g)。只要有可能，在1时间点计算^99mTc信号的平均值。将这种平均的％ID/g和单个％ID/g值显示在图3中。最大的纳米抗体水平是0.021％ID/g(Cmax)并且在20分钟后达到(Tmax)。在40分钟内，在循环中观察到纳米抗体的稳态水平，随后该水平开始减少。将0.021％ID/g的值外推，显示在0.1.-0.3mg/kg剂量下的±14.6ng/ml的Cmax和1258ng/ml/分钟的AUC_0-2h。与静脉内注射相比，绝对生物利用度是7.4％。

得出结论为，短存活时间的单价纳米抗体的鼻内给药得到ng/ml范围内的循环水平。

实施例4：多种纳米抗体在鼻内给药后进行系统递送并且仍旧具有功能

如实施例1所述，纯化多种纳米抗体靶向的人CEA(CEA1：8.56mg/ml)，人TNF(TNF1：4mg/ml)和人白蛋白(ALB1：4mg/ml)并且将其进行^99mTc放射性标记。如实施例1所述，将不同的纳米抗体鼻内给药到雄性Wistar大鼠。4小时后，如实施例1所述收集血液、尿和肾。在γ计数器中计数所述样品，并且关于放射性衰变校正所述放射性信号。将数据表示为％ID/g。图4A显示纳米抗体在血液中的水平；图4B显示纳米抗体在尿和肾中的水平。

所有的纳米抗体可以在肾、尿和/或血液中检测到，着重说明了所述纳米抗体的系统递送。而且，ALB1显示与其它纳米抗体相比至少5倍高的血液水平。因为，ALB 1纳米抗体也在循环中与大鼠白蛋白相互作用，纳米抗体采用白蛋白半衰期，导致了与其它单价纳米抗体如CEA1和TNF1相比更长的半衰期。这说明在鼻内给药后纳米抗体在循环中仍旧是具有功能的，并且纳米抗体的鼻内给药途径可以具有治疗上的意义。

实施例5：鼻内给药CEA1纳米抗体，导致对CEA阳性肿瘤的靶向

静脉内递送特异性结合于CEA(癌胚抗原)肿瘤标记的CEA1纳米抗体，已经显示导致了CEA阳性的肿瘤成像(Cortez-Retamozo V.，Nanobodies：single domain antibody fragments as imaging agents and modular buildingblocks for therapeutics(纳米抗体：作为成像剂和治疗剂的分子结构单元的单结构域抗体片段)，PhD Dissertation(博士论文)，Vrije Universiteit Brussel，Belgium，2004年6月)。评价了CEA1的鼻内递送是否也导致CEA阳性肿瘤成像。

将裸鼠(Nu/Nu)在其每个大腿上移植LS174T或A431细胞。LS174T肿瘤细胞表达CEA抗原，同时A431细胞系是CEA阴性的。约10天后，当肿瘤清晰可见时，评估CEA1纳米抗体对肿瘤的靶向。如实施例1中所述，生产、纯化所述CEA1纳米抗体并对其进行放射性标记。将分别携带3个和5个肿瘤的大鼠用^99mTc-CEA1进行静脉内和鼻内处理。施用后3小时，通过分离肿瘤组织确定肿瘤靶向。通过γ计数确定肿瘤中的^99mTc水平，并且关于放射性衰变校正得到的计数。将结果表示为％注射剂量/克组织(％ID/g)。

表1显示：与A431肿瘤相比，静脉内注射CEA1得到对LS174T肿瘤的5倍的特异性靶向(比率LS174T/A431)。类似地，鼻内递送CEA导致2.5倍的特异性累积，再次着重说明了在鼻内递送后功能性纳米抗体向循环中的递送。

表1：CEA1纳米抗体的CEA肿瘤特异性累积。IN：鼻内递送，IV：静脉内递送

实施例6：比较口服递送和鼻内递送

为了检查观察到的PK模式(见实施例3)是由于鼻内还是口服吸收导致，在这2个途径后施用FC44。

如实施例1中所述，纯化FC44纳米抗体并进行^99mTc放射性标记。通过如实施例1所述的鼻内途径(n＝5)或使用胃管饲法通过口服途径(n＝5)，将^99mTc-FC44施用于雄性Wistar大鼠。大鼠的平面γ照相机成像显示放射性标记的纳米抗体实际上定位于施用的各个位点：鼻内递送FC44导致在鼻腔、食道和胃中的分布；口服递送主要导致向食道下段和胃的分布(图5)。在施用后1小时和3小时，收集血液样品并在γ计数器中进行计数。关于放射性衰变校正得到的计数。将结果表示为％注射剂量/克组织(％ID/g)。鼻内递送的血液活性曲线显示早期峰值(10-15min)和晚期峰值(60min)(图6)。口服递送的曲线仅显示晚期峰值(60min)，其与鼻内递送的晚期峰值一致。这提示在鼻内递送后观察到的晚期峰值可以归因于放射性标记的纳米抗体的不需要的胃肠定位和导致的胃肠吸收。这着重说明了在10-15分钟观察到的早期峰值是由于FC44的鼻内吸收。

得出结论为，纳米抗体可以通过快速鼻内吸收进行全身递送。

所用的术语和表述用作说明的术语并且不是限制性的，使用这些术语和表述并不排斥所显示和描述的特征的任何等价物或其部分，要意识到在该实施方案的范围内的各种修改是可能的。

本文中描述的所有的文献通过参考并入本文，特别是上文所引用的教导。

Claims

1.一种组合物，所述组合物包含治疗有效量的包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的多肽或蛋白质，其特征在于所述组合物还包含药用鼻用载体。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述多肽或蛋白质包含单一纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，或基本上由单一纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成。

3.根据权利要求1的组合物，其中所述多肽或蛋白质包含至少两种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”或基本上由至少两种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”组成。

4.根据权利要求3的组合物，其中所述多肽或蛋白质包含针对一种表位、抗原、靶标、蛋白质或多肽的至少一种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和针对另一种表位、抗原、靶标、蛋白质或多肽的至少一种其它纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，或基本上由针对一种表位、抗原、靶标、蛋白质或多肽的至少一种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和针对另一种表位、抗原、靶标、蛋白质或多肽的至少一种其它纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成。

5.根据权利要求1的组合物，其中所述多肽或蛋白质包含与一种或多种氨基酸序列连接的一种或多种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”，所述一种或多种氨基酸序列在递送给所述受试者后，提供增加的半衰期。

6.根据权利要求5的组合物，其中所述一种或多种氨基酸序列是纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。

7.根据权利要求6的组合物，其中所述其它纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对血清蛋白质。

8.根据权利要求1的组合物，其中所述多肽或蛋白质包含与一种或多种氨基酸序列连接的一种或多种纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”，所述一种或多种氨基酸序列容许得到的多肽或蛋白质定向于、渗透和/或穿过黏膜和/或血脑屏障。

9.根据权利要求8的组合物，其中所述一种或多种氨基酸序列是纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。

10.根据权利要求1的组合物，其中所述多肽或蛋白质包含与针对黏膜上的上皮跨膜蛋白的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”连接的治疗多肽或试剂。

11.根据权利要求1-10中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”衍生自V_H或V_HH。

12.根据权利要求11的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”是人源化的V_HH或骆驼化的V_H。

13.根据权利要求1-12中任一项的组合物，其在鼻内给药于受试者后，诱导在所述受试者中的系统治疗或生物学反应。

14.根据权利要求1-13中任一项的组合物，其中，在将所述组合物鼻内给药于受试者后，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述多肽或蛋白质后，所述多肽或蛋白质到达血流，Cmax为至少1ng多肽或蛋白质/ml血液。

15.根据权利要求1-14中任一项的组合物，其中，在将所述组合物鼻内给药于受试者后，所述多肽或蛋白质在血液中达到Cmax，该Cmax是在肠胃外给药相同量的多肽或蛋白质后达到的Cmax的至少1％。

16.根据权利要求1-15中任一项的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于受试者后，所述多肽或蛋白质到达血流，其Tmax为在给所述受试者鼻内给药所述组合物后少于120分钟。

17.根据权利要求1-16中任一项的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于受试者后，所述多肽或蛋白质到达血流，其Cmax为在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述多肽或蛋白质给所述受试者后，在少于120分钟内达到至少1ng多肽或蛋白质/ml血液。

18.根据权利要求1-17中任一项的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于受试者后，在鼻内给药5mg/kg体重的剂量的所述多肽或蛋白质给所述受试者后，所述多肽或蛋白质在血液中的AUC是至少500ng/ml/分钟多肽或蛋白质。

19.根据权利要求1-18中任一项的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于所述受试者后，所述多肽或蛋白质在血液中具有至少1％的绝对和/或相对生物利用度。

20.根据权利要求1-12中任一项的组合物，其在鼻内给药于受试者后，在所述受试者的脑中诱导治疗或生物学反应。

21.根据权利要求20的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于所述受试者后，所述多肽或蛋白质在脑中达到的Cmax是在肠胃外给药相同量的多肽或蛋白质后达到的Cmax的至少1％。

22.根据权利要求20或21中任一项的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于受试者后，所述多肽或蛋白质到达脑，其Tmax为在将所述组合物鼻内给药于所述受试者后少于120分钟。

23.根据权利要求20-22中任一项的组合物，其中在将所述组合物鼻内给药于受试者后，所述多肽或蛋白质在脑中具有至少1％的绝对和/或相对生物利用度。

24.根据权利要求1-23中任一项的组合物，其中所述鼻用载体是液体、半液体、凝胶、乳膏、糊剂、粉末或固体，或可以是薄膜或包封物质。

25.根据权利要求1-24中任一项的组合物，其以滴剂、鼻喷雾剂、鼻液体、粉末气溶胶、胶囊或鼻用插入物的形式存在。

26.根据权利要求1-25中任一项的组合物，其另外包含一种或多种其它的治疗成分。

27.根据权利要求1-26中任一项的组合物，其另外包含一种或多种药用添加剂和/或试剂。

28.用于鼻内给药的递送装置，其包含权利要求1-27中任一项的组合物并装备有能够将所述组合物施用于鼻黏膜的工具。

29.权利要求28所述的递送装置，其以滴剂、鼻喷雾剂、鼻液体、粉末气溶胶、胶囊或鼻用插入物的形式存在。

30.权利要求29所述的递送装置，其是计量给药系统。

31.一种将多肽或蛋白质在不失活的情况下递送到受试者的血流中的方法，所述多肽或蛋白质包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成，所述方法包括将权利要求1-27中任一项的组合物经鼻给药于所述受试者的步骤。

32.一种将多肽或蛋白质在不失活的情况下递送到受试者的脑中的方法，所述多肽或蛋白质包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成，所述方法包括将权利要求1-27中任一项的组合物经鼻给药于所述受试者的步骤。

33.一种制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的方法，所述方法包括将包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成的多肽或蛋白质以及药用鼻用载体形成紧密的混合物。

34.权利要求33所述的方法，所述方法包括另外将一种或多种其它的治疗成分加入所述紧密的混合物中。

35.根据权利要求33或34任一项的方法，其包括将一种或多种添加剂和/或试剂加入紧密的混合物中。

36.一种用于预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或基本上由纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”组成的多肽或蛋白质，所述方法包括将纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物经鼻给药于所述受试者。

37.一种预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物的步骤。

38.一种免疫治疗的方法，所述方法包括向遭受疾病和/或病症或有风险患有疾病和/或病症的受试者鼻内给药治疗有效量的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物，所述疾病和/或病症可以通过用所述纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb”进行免疫治疗来治愈或缓和。

39.纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗。

40.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症，所述疾病或病症可以通过向受试者经鼻给药纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗。

41.一种用于预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对在肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

42.一种预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对在肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

43.一种预防和/或治疗肾或膀胱疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

44.针对肾或膀胱中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种肾或膀胱疾病或病症。

45.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对肾或膀胱中的靶标，用于预防和/或治疗肾或膀胱疾病或病症。

46.一种预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对肺中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

47.一种预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对肺中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

48.一种预防和/或治疗肺疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对肺中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

49.针对肺中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27任一项所述的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种肺疾病或病症。

50.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对肺中的靶标，用于预防和/或治疗至少一种肺疾病或病症。

51.一种用于预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对肿瘤细胞上的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

52.一种用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对肿瘤细胞上的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

53.一种用于预防和/或治疗肿瘤相关疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对肿瘤上的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

54.针对肿瘤上的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种肿瘤相关疾病或病症。

55.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对肿瘤上的靶标，用于预防和/或治疗至少一种肿瘤相关疾病或病症。

56.一种用于预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对脑中的靶标的纳米抗体，结构域抗体，单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

57.一种用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对在脑中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

58.一种预防和/或治疗脑疾病或病症(如神经遗传学疾病，(例如亨廷顿病和肌营养不良)、发育疾病(例如大脑性瘫痪)、成年人生命中变性疾病(例如，帕金森病和阿尔茨海默病)、代谢疾病(例如，戈谢病)、心血管疾病(例如，中风和血管性痴呆)、外伤(例如，脊髓和头部损伤)、惊厥性疾病(例如癫痫)感染性疾病(例如，AIDS痴呆)、肥胖症、糖尿病、厌食、抑郁、脑肿瘤、具有Lewy小体的痴呆、多系统萎缩、进行性核上性麻痹、额颞性痴呆、血管性痴呆或唐氏综合征)的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对在脑中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

59.针对在脑中的靶标的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或”dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种脑疾病或病症(如神经遗传学疾病，(例如亨廷顿病和肌营养不良)、发育疾病(例如大脑性瘫痪)、成年人生命中的变性疾病(例如，帕金森病和阿尔茨海默病)、代谢疾病(例如，戈谢病)、心血管疾病(例如，中风和血管性痴呆)、外伤(例如，脊髓和头部损伤)、惊厥性疾病(例如癫痫)感染性疾病(例如，AIDS痴呆)、肥胖症、糖尿病、厌食、抑郁、脑肿瘤、具有Lewy小体的痴呆、多系统萎缩、进行性核上性麻痹、额颞性痴呆、血管性痴呆或唐氏综合征)。

60.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对在脑中的靶标，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种脑疾病或病症(如神经遗传学疾病，(例如亨廷顿病和肌营养不良)、发育疾病(例如大脑性瘫痪)、成年人生命中的变性疾病(例如，帕金森病和阿尔茨海默病)、代谢疾病(例如，戈谢病)、心血管疾病(例如，中风和血管性痴呆)、外伤(例如，脊髓和头部损伤)、惊厥性疾病(例如癫痫)感染性疾病(例如，AIDS痴呆)、肥胖症、糖尿病、厌食、抑郁、脑肿瘤、具有Lewy小体的痴呆、多系统萎缩、进行性核上性麻痹、额颞性痴呆、血管性痴呆或唐氏综合征)。

61.一种预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对TNF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

62.一种预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对TNF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

63.一种用于预防和/或治疗疾病或病症的方法，所述疾病或病症如自体免疫性疾病(如例如，类风湿性关节炎或炎性肠病)，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对TNF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

64.针对TNF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症，如自体免疫性疾病(如例如，类风湿性关节炎或炎性肠病)。

65.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对TNF，用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症，如自体免疫性疾病(如例如，类风湿性关节炎或炎性肠病)。

66.一种用于预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对vWF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

67.一种预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对vWF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

68.一种预防和/或治疗涉及血小板介导的聚集的疾病或病症(如例如形成非闭塞性的血栓，形成闭塞性的血栓，动脉血栓形成，急性冠状动脉闭塞，周围动脉闭塞性疾病，再狭窄和由冠状动脉旁路移植物、冠状动脉瓣膜置换术和冠状动脉干预引起的疾病，所述冠状动脉干预如血管成形术、支架术或动脉粥样硬化斑块切除术，血管成形术后的增生，动脉粥样硬化斑块切除术或动脉支架术，在血管系统中的闭塞性综合征或患病动脉的开放性缺乏，血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，短暂性脑缺血发作，不稳定或稳定的心绞痛，脑梗死，HELLP综合征，颈动脉内膜切除术，颈动脉狭窄，严重肢体缺血，心源性脑栓塞，外周血管疾病，再狭窄和心肌梗死)的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对vWF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

69.针对vWF的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗至少一种涉及血小板介导的聚集的疾病或病症(如例如形成非闭塞性的血栓，形成闭塞性的血栓，动脉血栓形成，急性冠状动脉闭塞，周围动脉闭塞性疾病，再狭窄和由冠状动脉旁路移植物、冠状动脉瓣膜置换术和冠状动脉干预引起的疾病，所述冠状动脉干预如血管成形术、支架术或动脉粥样硬化斑块切除术，血管成形术后的增生，动脉粥样硬化斑块切除术或动脉支架术，在血管系统中的闭塞性综合征或患病动脉的开放性缺乏，血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，短暂性脑缺血发作，不稳定或稳定的心绞痛，脑梗死，HELLP综合征，颈动脉内膜切除术，颈动脉狭窄，严重肢体缺血，心源性脑栓塞，外周血管疾病，再狭窄和心肌梗死)。

70.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对vWF，用于预防和/或治疗至少一种涉及血小板介导的聚集的疾病或病症(如例如，形成非闭塞性的血栓，形成闭塞性的血栓，动脉血栓形成，急性冠状动脉闭塞，周围动脉闭塞性疾病，再狭窄和由冠状动脉旁路移植物、冠状动脉瓣膜置换术和冠状动脉干预引起的疾病，所述冠状动脉干预如血管成形术、支架术或动脉粥样硬化斑块切除术，血管成形术后的增生，动脉粥样硬化斑块切除术或动脉支架术，在血管系统中的闭塞性综合征或患病动脉的开放性缺乏，血栓性血小板减少性紫癜(TTP)，短暂性脑缺血发作，不稳定或稳定的心绞痛，脑梗死，HELLP综合征，颈动脉内膜切除术，颈动脉狭窄，严重肢体缺血，心源性脑栓塞，外周血管疾病，再狭窄和心肌梗死)。

71.一种用于预防和/或治疗受试者的方法，所述受试者需要针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

72.一种用于预防和/或治疗至少一种疾病或病症的方法，所述疾病或病症可以通过向遭受所述疾病或病症的受试者施用针对IL-6、IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”进行预防和/或治疗，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

73.一种预防和/或治疗与IL-6R，IL-6和/或与IL-6/IL-6R复合物相关的疾病或病症(如例如，脓毒症，各种形式的癌症如多发性骨髓瘤疾病(MM)，肾细胞癌(RCC)，浆细胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴组织增生性疾病(BLPD)和前列腺癌，骨吸收(骨质疏松症)，恶病质，银屑病，肾小球系膜性增殖性肾小球肾炎，卡波西肉瘤，AIDS-相关的淋巴瘤，炎性疾病和病症如类风湿性关节炎，全身发作的青少年特发性关节炎，高丙球蛋白血症，局限性回肠炎，溃疡性结肠炎，系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化，卡斯尔曼氏病，IgM丙球蛋白病，心脏粘液瘤，哮喘(特别是变应性哮喘)和自体免疫性胰岛素依赖性糖尿病)的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的针对IL-6，IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”和/或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物。

74.针对IL-6、IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”用于制备根据权利要求1-27中任一项的组合物的应用，所述组合物用于预防和/或治疗与IL-6R、IL-6相关或与IL-6/IL-6R复合物相关的至少一种疾病或病症(如例如，脓毒症，各种形式的癌症如多发性骨髓瘤疾病(MM)，肾细胞癌(RCC)，浆细胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴组织增生性疾病(BLPD)和前列腺癌，骨吸收(骨质疏松症)，恶病质，银屑病，肾小球系膜性增殖性肾小球肾炎，卡波西肉瘤，AIDS-相关的淋巴瘤，炎性疾病和病症如类风湿性关节炎，全身发作的青少年特发性关节炎，高丙球蛋白血症，局限性回肠炎，溃疡性结肠炎，系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化，卡斯尔曼氏病，IgM丙球蛋白病，心脏粘液瘤，哮喘(特别是变应性哮喘)和自体免疫性胰岛素依赖性糖尿病)。

75.根据权利要求1-27中任一项的组合物，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”针对IL-6、IL-6R和/或IL-6/IL-6R复合物，所述组合物用于预防和/或治疗与IL-6R、IL-6相关或与IL-6/IL-6R复合物相关的至少一种疾病或病症(如例如，脓毒症，各种形式的癌症如多发性骨髓瘤疾病(MM)，肾细胞癌(RCC)，浆细胞白血病，淋巴瘤，B-淋巴组织增生性疾病(BLPD)和前列腺癌，骨吸收(骨质疏松症)，恶病质，银屑病，肾小球系膜性增殖性肾小球肾炎，卡波西肉瘤，AIDS-相关的淋巴瘤，炎性疾病和病症如类风湿性关节炎，全身发作的青少年特发性关节炎，高丙球蛋白血症，局限性回肠炎，溃疡性结肠炎，系统性红斑狼疮(SLE)，多发性硬化，卡斯尔曼氏病，IgM丙球蛋白病，心脏粘液瘤，哮喘(特别是变应性哮喘)和自体免疫性胰岛素依赖性糖尿病)。

76.一种用于预防和/或治疗急性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者经鼻给药治疗有效量的能够缓和所述疾病或病症的症状或治愈所述疾病或病症的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。

77.一种用于选择针对上皮跨膜蛋白的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”的方法，其中所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”在结合于所述上皮跨膜蛋白后穿过黏膜，所述方法包括下列步骤：用纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”的噬菌体库(天然或免疫)淘选上皮跨膜蛋白-展示膜，并且通过从所述膜回收转运的噬菌体来选择穿过膜的纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAbs”。

78.诊断方法，包括下列步骤：向受试者经鼻给药纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”或包含所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”的组合物，和检测所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。

79.根据权利要求78的诊断方法，其中原位检测所述纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。