CN101566574B

CN101566574B - 水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法及其检测盒

Info

Publication number: CN101566574B
Application number: CN2008100250459A
Authority: CN
Inventors: 张根华; 詹月华; 张海芸; 尹凡; 丁建英
Original assignee: Changshu Institute of Technology
Current assignee: JIANGSU TRIGIANT TECHNOLOGY Co.,Ltd.
Priority date: 2008-04-25
Filing date: 2008-04-25
Publication date: 2012-07-11
Anticipated expiration: 2028-04-25
Also published as: CN101566574A

Abstract

一种水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法，属于水体及水产品中的残留物检测技术领域。其是将待测样品和提取剂I振荡混合均匀后，加入提取剂II振荡混合后静置，取上清液加入到富集柱中，观察富集柱中最下层的显色剂颜色变化，若形成绿色环带，则判断待测样品中含有孔雀石绿或无色孔雀石绿；提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸的混合液；提取剂II为二氧化铅和酸性氧化铝的混合物；待测样品为待检测水体样品或待检测水产品样品。优点：具有操作简单并且步骤少，不需要使用昂贵的仪器设备，能体现对现场检测的方便、灵活性。

Description

水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法及其检测盒

技术领域

本发明属于水体及水产品中的残留物检测技术领域，具体涉及一种水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法。

背景技术

孔雀石绿(Malachite green，MG)又名碱性绿、孔雀绿、苯胺绿、维多利亚绿或中国绿，是一种具有金属光泽的翠绿色结晶体，属三苯甲烷类染料，它既是杀菌剂又是染色剂，广泛应用于真丝、羊毛、皮革、棉布、麻制品和陶瓷制品等的染色。它易溶于水、乙醇和甲醇，其水溶液呈蓝绿色。孔雀石绿进入人体或动物机体后，可以通过生物转化，还原代谢成脂溶性的隐性孔石绿(Leucomalachitegreen，LMG)。孔雀石绿作为一种杀菌剂、杀虫剂、消毒剂，具有价廉、易得、高效、用量少的特点，对防治各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等有较好的效果，因而被广泛用于水产养殖中。但近年来的科学研究发现：孔雀石绿及其代谢产物隐性孔雀石绿具有高残留、致癌、致畸和致突变等毒副作用。LMG由于不溶于水，其残留毒性比MG更强。鉴于孔雀石绿的危害性，国际上一些发达国家如美国、日本、英国)已宣布禁止其在经济鱼类(观赏鱼除外)养殖过程中使用。我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》，禁止用于所有食品动物。

目前，国内外已建立的测定孔雀石绿和隐性孔雀石绿检测方法包括高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法。这几种检测方法都比较繁琐，前处理操作步骤多，耗时较长，特别是质谱法所用仪器较昂贵，无法实现快速检测，更无法实现现场检测。

孔雀石绿和无色孔雀石绿残留对水体及水产品的危害大，严重影响了水产品的加工出口和消费，危害了消费者的身体健康，运用可以在现场进行快速检测的技术，是今后的发展方向。

发明内容

本发明的任务在于提供一种水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法。该方法操作步骤少、检测时间短、无需借助于昂贵的仪器设备并且能进行现场检测。

本发明的任务还在于提供一种检测盒，以保障现场检测。

本发明的任务是这样来完成的，一种水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法，其是将待测样品和提取剂I振荡混合均匀后，加入提取剂II振荡混合后静置，取上清液加入到富集柱中，观察富集柱中最下层的显色剂颜色变化，若形成绿色环带，则判断待测样品中含有孔雀石绿或无色孔雀石绿；

所述的提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸的混合液，其中：乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比为1∶1∶1～3∶2∶1，而对甲苯磺酸与乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液的体积比为1∶10；

所述的提取剂II为二氧化铅和酸性氧化铝的混合物，二氧化铅和酸性氧化铝的质量比为1∶5～10；

所述的待测样品为待检测水体样品或待检测水产品样品；

所述的富集柱包括设在富集柱柱腔中的第一、第二、第三挡板和推杆以及富集柱顶盖，其中，第一挡板与第二挡板之间填充有填充物，而第二挡板与第三挡板之间填充有显色剂，推杆与富集柱的富集柱柱腔相配合，富集柱顶盖盖配在富集柱的顶部；所述的显色剂为硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂混合物，硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂的质量比为4∶5∶1；所述的填充物为脱脂棉和无水硫酸钠。

在本发明的一个具体的实施例中，所述的待检测水体样品与提取剂I的体积比为1∶1～5；待检测水体样品的体积和提取剂II的质量比为10∶1。

在本发明的另一个具体的实施例中，所述的待检测水产品样品质量与提取剂I的体积比为1∶5～9；待检测水产品样品和提取剂II的质量比为5∶1。

本发明的还一任务是这样来完成的，一种检测盒，它包括配置在盒内的提取剂I、提取剂II、富集柱3和孔雀石绿标品，所述的提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸混合液体，其中：乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比为1∶1∶1～3∶2∶1，而对甲苯磺酸与乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液的体积比为1∶10；所述的提取剂II为二氧化铅和酸性氧化铝的混合物，二氧化铅和酸性氧化铝的质量比为1∶5；所述的富集柱包括设在富集柱柱腔中的第一、第二、第三挡板和推杆以及富集柱顶盖，其中，第一挡板与第二挡板之间填充有填充物，而第二挡板与第三挡板之间填充有显色剂，推杆与富集柱的富集柱柱腔相配合，富集柱顶盖盖配在富集柱的顶部；所述的显色剂为硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂混合物，硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂的质量比为4∶5∶1；所述的填充物为脱脂棉和无水硫酸钠。

在本发明的再一个具体的实施例中，所述的检测盒还包括配置在盒内的待测样品管、上清液吸管、吸耳球、取样刀和取样勺。

在本发明的又一个具体的实施例中，所述的装填的显色剂的质量为1～2.5g；所述的第一、第二、第三挡板的材料为高分子材料。

在本发明的进而一个具体的实施例中，所述的无水硫酸钠敷置在脱脂棉上，其量为0.8～2.5g。

在本发明的又更而一个具体的实施例中，所述的高分子材料为聚氯乙烯、聚氨酯或醋酸纤维素中的任意一种。

本发明所提供的技术方案具有操作简单并且步骤少，不需要使用昂贵的仪器设备，能体现对现场检测的方便、灵活性。

附图说明

图1为本发明所述的配备于检测盒中的富集柱的一个实施例示意图。

图2为本发明的检测方法示意图。

具体实施方式

见图1，在该图中给出了配置于检测盒中的富集柱3的直径为15mm，柱体长度为85mm，容量为10ml，并且在柱体上有刻度。很显然，富集柱3的容量是不受本实施例的图示的限制的，其大小可以随着待检样品的不同而改变，其容量可以是1mL，3mL，5mL，6mL，10mL，20mL，25mL，50mL等不同的规格，柱体的直径和长度可以变化，柱体的长度不能太小，长度要求不小于65mm，直径不小于3mm，否则对富集柱3造成装填难。关于对富集柱3的装填，申请人作如下叙述：在富集柱3的柱腔最下端安装第三挡板33，第三挡板33与柱腔腔壁之间联接比较紧密，防止所填的显色剂随提取剂流出，在第三挡板33上面添加富集显色用的显色剂1～2.5g，然后轻敲富集柱3的柱体，使得显色剂填充均匀平实；装入第二挡板32，在第二挡板32上面装入少量的脱脂棉，在脱脂棉之上填充无水硫酸钠(Na₂SO₄)，轻轻敲实，脱脂棉要填充平实，藉以防止无水硫酸钠粉末流入到显色剂中，无水硫酸钠(Na₂SO₄)的作用主要是吸附掉上清液中的少量水分。最后安装第一挡板31，防止无水硫酸钠(Na₂SO₄)粉末倒出。在不使用状态下，将富集柱顶盖35盖置在富集柱3上，推杆34放置在检测盒中，在检测盒中还配备有样品管、上清液吸管、吸耳球、取样品刀和取样勺以及孔雀石绿标品。

在检测样品时，为了控制上清液流经显色剂层的速度，用推杆34从富集柱上口加压，加快流速，建议检测水产品时提取液3mL通过富集柱3的时间为0.2～0.7min；水体样品提取液10mL样液通过富集柱3的时间为0.8～2.0min。富集柱3中的显色剂层在检测样品之前，要用提取剂I进行活化，活化时用的乙腈、二氯甲烷与正己烷的的混合液，乙腈、二氯甲烷与正己烷体积比＝2∶1∶1。

实施例1：

水体中总孔雀石绿残留的检测。

用提取剂I活化富集柱中的由硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂按重量份比为4∶5∶1所混合而成的显色剂，装填的显色剂质量为1g，活化时用的乙腈、二氯甲烷与正己烷的混合液10mL，乙腈、二氯甲烷与正己烷体积比＝2∶1∶1；填充的无水硫酸钠(Na₂SO₄)的质量为0.8g。

取待检测水体样品于样品管中，加入提取剂I和提取剂II，提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸混合液体，其中乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比为1∶1∶1，对甲苯磺酸1.0mol/L的溶液，乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液与对甲苯磺酸溶液体积比＝10∶1；提取剂II为二氧化铅(PbO₂)和酸性氧化铝(pH4～4.5)的混合物，二氧化铅(PbO₂)和酸性氧化铝的质量比为1∶5。待检测水体样品与加入提取剂I的体积比为1∶1，待检测水体样品的体积和提取剂II的质量比为10∶1。充分振荡10min，静置5min，待有机相和水相分层之后，用吸管取有机相中的上清液于图1或图2所示的50mL富集柱3中；

将样品管中的有机相上清液分次全部加入富集柱3中，每次最大加液量为10mL，用推杆34从富集柱上口加压，加快流速，建议10mL样液通过柱子的时间为1min。让样液流至与富集柱3最上层筛板平齐，停止推动推杆34。

观察结果：观察富集柱3中最下层显色剂剂颜色变化，若该显色剂逐渐形成绿色环带，可初步判断待测水体样品中含有孔雀石绿或是无色孔雀石绿。

实施例2：

仅将富集柱中装填显色剂的质量改为1.5g；将填充的无水硫酸钠(Na₂SO₄)的质量改为为1.4g，其余同对实施例1的描述。

实施例3：

仅将富集柱中装填显色剂的质量改为2.5g；将填充的无水硫酸钠(Na₂SO₄)的质量改为为2.5g，其余同对实施例1的描述。

实施例4：

仅将乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比改为2∶2∶1，其余同对实施例1的描述。

实施例5：

仅将乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比改为3∶2∶1，其余同对实施例1的描述。

实施例6：

仅将水体样品与加入提取剂I的体积比改为1∶4.5，其余同对实施例1的描述。

实施例7：

仅将水体样品与加入提取剂I的体积比改为1∶4.5，其余同对实施例4的描述。

实施例8：

仅将水体样品与加入提取剂I的体积比改为1∶4.5，其余同对实施例5的描述。

实施例9：

仅将水体样品与加入提取剂I的体积比改为1∶5，其余同对实施例1的描述。

实施例10：

仅将水体样品与加入提取剂I的体积比改为1∶5，其余同对实施例4的描述。

实施例11：

仅将水体样品与加入提取剂I的体积比改为1∶5，其余同对实施例5的描述。

实施例12：

水产品中总孔雀石绿残留的检测。

取待检测水产品样品可食部分充分绞碎后，将待检测水产品样品置于样品管中，分别加入提取剂I和提取剂II，提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸混合液体，其中乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比＝1∶1∶1，对甲苯磺酸1.0mol/L的溶液，乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液与对甲苯磺酸溶液体积比＝10∶1；提取剂II为二氧化铅(PbO₂)和酸性氧化(pH4～4.5)的混合物，二氧化铅(PbO₂)和酸性氧化铝的质量比＝1∶5，振摇10min，静置2min后，取上清液于图1或图2所示的10mL的富集柱3中；

将样品管中的提取样液分次全部加入富集柱3中，每次最大加液量为3mL，按图2所示用推杆34从富集柱3的上口加压，加快流速，建议3mL样液通过柱子的时间为0.5min。让样液流至与上层挡板板平齐，停止推动推杆34。

观察结果：观察富集柱3中最下层显色剂剂颜色变化，若该显色剂逐渐形成绿色环带，可初步判断样品中含有孔雀石绿。

实施例13：

仅将富集柱中装填显色剂的质量改为1.5g；将填充的无水硫酸钠(Na₂SO₄)的质量改为1.4g，其余同对实施例12的描述。

实施例14：

仅将富集柱中装填显色剂的质量改为2.5g；将填充的无水硫酸钠(Na₂SO₄)的质量改为为2.5g，其余同对实施例12的描述。

实施例15：

仅将乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比改为2∶2∶1，其余同对实施例12的描述。

实施例16：

仅将乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比改为3∶2∶1，其余同对实施例12的描述。

实施例17：

仅将待测水产品样品质量与加入提取剂I的体积比改为1∶7，其余同对实施例12的描述。

实施例18：

仅将待测水产品样品质量与加入提取剂I的体积比改为1∶7，其余同对实施例15的描述。

实施例19：

仅将待测水产品样品质量与加入提取剂I的体积比改为1∶7，其余同对实施例16的描述。

实施例20：

仅将待测水产品样品质量与加入提取剂I的体积比改为1∶9，其余同对实施例12的描述。

实施例21：

仅将待测水产品样品质量与加入提取剂I的体积比改为1∶9，其余同对实施例15的描述。

实施例22：

仅将待测水产品样品质量与加入提取剂I的体积比改为1∶9，其余同对实施例16的描述。

由上述实施例可知，本发明方法是通过提取剂I将待检样品中的孔雀石绿提取出来，然后通过提取剂II衍生化，将无色孔雀石绿氧化成孔雀石绿，静置后，取上清液到富集柱中，通过显色剂的不断将上清液中的孔雀石绿吸附富集，使得显色剂显色。检测水产品中的孔雀石绿时，取水产品的可食用部分，检测水体样品时，直接取水样，然后通过提取剂提取衍生化之后，经富集柱吸附富集，可以直接通过富集柱中最底层的显色剂的颜色变化，判断待检测样品中是否含有孔雀石绿，如果显色剂层形成绿色环带，则说明待测样品中含有孔雀石绿或是无色孔雀石绿。

Claims

1.一种水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法，其特征在于其是将待测样品和提取剂I振荡混合均匀后，加入提取剂II振荡混合后静置，取上清液加入到富集柱(3)中，观察富集柱(3)中最下层的显色剂颜色变化，若形成绿色环带，则判断待测样品中含有孔雀石绿或无色孔雀石绿；

所述的待测样品为待检测水体样品或待检测水产品样品；

所述的富集柱(3)包括设在富集柱柱腔中的第一、第二、第三挡板(31、32、33)和推杆(34)以及富集柱顶盖(35)，其中，第一挡板(31)与第二挡板(32)之间填充有填充物，而第二挡板(32)与第三挡板(33)之间填充有显色剂，推杆(34)与富集柱(3)的富集柱柱腔相配合，富集柱顶盖(35)盖配在富集柱(3)的顶部；所述的显色剂为硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂混合物，硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂的质量比为4∶5∶1；所述的填充物为脱脂棉和无水硫酸钠。

2.根据权利要求1所述的水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法，其特征在于所述的待检测水体样品与提取剂I的体积比为1∶1～5。

3.根据权利要求2所述的水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法，其特征在于所述的待检测水产品样品和提取剂II的质量比为5∶1。

4.一种如权利要求1所述水体及水产品中孔雀石绿残留检测方法所用的检测盒，其特征在于它包括配置在盒内的提取剂I、提取剂II、富集柱(3)和孔雀石绿标品，所述的提取剂I为乙腈、二氯甲烷、正己烷和对甲苯磺酸混合液体，其中：乙腈、二氯甲烷与正己烷的体积比为1∶1∶1～3∶2∶1，而对甲苯磺酸与乙腈、二氯甲烷和正己烷的混合液的体积比为1∶10；所述的提取剂II为二氧化铅和酸性氧化铝的混合物，二氧化铅和酸性氧化铝的质量比为1∶5；所述的富集柱(3)包括设在富集柱柱腔中的第一、第二、第三挡板(31、32、33)和推杆(34)以及富集柱顶盖(35)，其中，第一挡板(31)与第二挡板(32)之间填充有填充物，而第二挡板(32)与第三挡板(33)之间填充有显色剂，推杆(34)与富集柱(3)的富集柱柱腔相配合，富集柱顶盖(35)盖配在富集柱(3)的顶部；所述的显色剂为硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂混合物，硅胶、中性氧化铝和732阳离子树脂的质量比为4∶5∶1；所述的填充物为脱脂棉和无水硫酸钠。

5.根据权利要求4所述的检测盒，其特征在于所述的检测盒还包括配置在盒内的待测样品管、上清液吸管、吸耳球、取样刀和取样勺。

6.根据权利要求4所述的检测盒，其特征在于所述的装填的显色剂的质量为1～2.5g；所述的第一、第二、第三挡板(31、32、33)的材料为高分子材料。

7.根据权利要求4所述的检测盒，其特征在于所述的无水硫酸钠敷置在脱脂棉上，其量为0.8～2.5g。

8.根据权利要求6所述的检测盒，其特征在于所述的高分子材料为聚氯乙烯、聚氨酯或醋酸纤维素中的任意一种。