CN101531992A - 一种越橘组织培养的生根培养基配方 - Google Patents

Abstract

一种越橘组织培养的生根培养基配方，由不同组分及浓度的大量元素、微量元素、铁盐、有机成分等组成，使用该培养基生根效率高，可以达到95％以上；所需生根培养的时间短，20天不到便可移栽，且无需进行炼苗，移栽后管理简单，成活率高于95％。同时，组成培养基的成分来源普通，无特殊形态化合物，培养基配制容易。

Description

一种越橘组织培养的生根培养基配方

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及工厂化育苗过程中一种越橘组织培养的生根培养基配方。

背景技术

越橘是近几年世界上发展最为迅速的新一代水果，具有独特的营养保健功能，可鲜食、加工成果酱果酒等、提取天然花青素以及作为药物的原料。目前已经证明越橘果实内的生物活性物质具有明目、消除眼睛疲劳、增强视力的功能；对多种恶性肿瘤如直肠癌有有明显的治疗作用；具有促进神经系统发育的功能，有儿童增智，预防老年痴呆症的作用；可降低体内胆固醇水平，调节血糖浓度，防治心血管病和II型糖尿病；可以增强人体的免疫功能，延缓衰老。越橘适应温带及亚热带地区气候，在我国南方具有广泛的发展前景，需苗量巨大。越橘的扦插繁殖所需生根时间长，约60天，管理成本高，而且繁殖系数低，因此组织培养工厂化繁殖是一条保证种苗供应的有效途径。目前越橘的组织培养研究资料偶见国内外文献，国内有文献记载组织培养越橘苗采用瓶外扦插生根，但要求的环境条件严格，控制较为困难，生根情况不理想。未见有效的适用于工厂化生产的生根培养基配方的研究报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种越橘组织培养过程中生根培养基配方，以提高越橘的生根率，将其命名为K2培养基。每L该培养基的组分及各组分的含量如下：

*大量元素：KNO₂ 700mg.L^-1；(NH₄)₂SO₄ 400mg.L^-1；MgSO₄ 185mg.L^-1；Ca(NO₂)₂·4H₂O 300mg.L^-1；KH₂PO₄ 85mg.L^-1

*微量元素：MnSO₄·4H₂O 11.1mg.L^-1；Zn SO₄·7H₂O 4.3mg.L^-1；H₂BO₃ 3.1mg.L^-1；KI 0.41mg.L^-1；Na₂MoO₄·2H₂O 0.13mg.L^-1；Cu SO₄·5H₂O 0.013mg.L^-1；CoCl₂·6H₂O 0.013mg.L^-1

*铁盐：Na₂-EDTA 18.7mg.L^-1；FeSO₄ 13.9mg.L^-1

*有机成分：甘氨酸1.0mg.L^-1；V_B6 0.25mg.L^-1；V_B1 0.05mg.L^-1；烟酸0.25mg.L^-1；肌醇50mg.L^-1

*蔗糖15g.L^-1，卡拉胶6.25g.L^-1，吲哚丁酸IBA 0.75mg.L^-1；

其余为水，pH5.5。

本发明越橘工厂化生产过程中生根培养基的配制方法为：

(1)20倍大量元素母液的配制：分别称取KNO₃，28g；(NH₄)₂SO₄，16g；KH₂PO₄，3.4g用纯水溶解后定容至1000ml，配成母液I；称取Ca(NO₂)₂·4H₂O 12g，用纯水溶解后定容至1000ml成为母液II；称取MgSO₄，7.4g用纯水溶解后定容至1000ml为母液III；使用时配制每升培养基取母液I、母液II、母液III各25m；

(2)1000倍的微量元素母液的配制：称取MnSO₄·4H₂O 22300mg；ZnSO₄·7H₂O 8600mg；H₃BO₃ 6200mg；KI 830mg；Na₂MoO₄·2H₂O 250mg；Cu SO₄·5H₂O 25mg；CoCl₂·6H₂O25mg，用纯水溶解后定容至1000ml保存，使用时配制每升培养基取0.5ml；

(3)EDTA-铁盐母液的配制：称取5.57g FeSO₄·7H₂O和7.5g Na-EDTA试剂分别溶解，混合定容至1L；使用时配制每升培养基取2.5ml；

(4)有机成分母液的配置：称取100mg甘氨酸，5mg V_b1，25mg V_b6，25mg烟酸，5000mg肌醇溶解后混合定容至500ml，使用时配制每升培养基取5ml；

(5)激素母液的配置：称取25mg IBA先用少量乙醇溶解，然后加水定容至50ml，使用时配制每升培养基取1.5ml；

(6)按上述1-4项所述各成分用量加入后，再加入卡拉胶6.5g、蔗糖15g，定容至1L，在微波炉内加热3-5分钟使卡拉胶充分熔化，加入IBA母液，用1mol.L^-1HCl调pH至5.5，分装后灭菌。

本发明的K2培养基越橘生根方法为：

将经过增殖培养30天的无菌苗在超净台上接种至配制好的灭菌的生根培养基K2上，在光照强度<1000Lex的条件下培养7-10天，再转移至光照强度>1500Lex的条件下培养1周即可进行移栽，生根率达到95％以上，平均根数3-8条，根系长度0.5-2厘米。培养条件为：温度25-30℃，光暗周期各为12小时。

越橘增殖培养方法及培养基为现有技术(本发明申请人同时申请了专利，并要求了提前公开，发明名称为：一种越橘组织培养中的增殖培养基配方)。

本发明的优点是：

1.组成培养基的成分来源普通，无特殊形态化合物。

2.培养基配制容易。

3.生根效率高，可以达到95％以上；所需生根培养的时间短，20天不到便可移栽，且无需进行炼苗，移栽后管理简单，成活率高于95％。

4.生根培养时无需专门管理。

具体实施方式：

实施例1：

将经过增殖培养30天的越橘sharpblue(目前生产用品种)的3-4cm高的增殖苗在超净工作台内切去下部愈伤，接种至配制好的灭菌k2培养基上，每瓶接种20根左右，置弱光下(光照强度<1000Lex)培养7-10天，即可见到95％以上增殖苗长出2-5根白色须根，根长0.2-1cm，然后再将培养瓶转移至光照强度超过1500Lex的培养架上进行光照培养，7天后白色须根长度0.5-2cm，明显增粗，叶色浓绿，此时即可将生长健壮的生根苗取出移栽，此前无需炼苗。

实施例2：

将经过增殖培养30天的越橘Darrow(目前生产用品种)的3-4cm高的增殖苗在超净工作台内切去下部愈伤，接种至配制好的灭菌k2培养基上，每瓶接种20根左右，置弱光下(光照强度<1000Lex)培养7-10天，即可见到95％以上增殖苗长出2-5根白色须根，根长0.2-1cm，然后再将培养瓶转移至光照强度超过1500Lex的培养架上进行光照培养，7天后白色须根长度0.5-2cm，明显增粗，叶色浓绿，此时即可将生长健壮的生根苗取出培养瓶移栽，此前无需炼苗。

Claims (1)

1、一种越橘组织培养的生根培养基配方，其特征在于，每L该培养基的组分及各组分的含量如下：

*大量元素：KNO₃700mg.L^-1；(NH₄)₂SO₄ 400mg.L^-1；MgSO₄185mg.L^-1；Ca(NO₃)₂·4H₂O 300mg.L；KH₂PO₄85mg.L^-1

*微量元素：Mn SO₄·4H₂O 11.1mg.L^-1；Zn SO₄·7H₂O 4.3mg.L^-1；H₃BO₃ 3.1mg.L^-1；KI 0.41mg.L^-1；Na₂MoO₄·2H₂O 0.13mg.L^-1；CuSO₄·5H₂O 0.013mg.L^-1；CoCl₂·6H₂O 0.013mg.L^-1

*铁盐：Na₂-EDTA 18.7mg.L^-1；FeSO₄ 13.9mg.L^-1

*有机成分：甘氨酸1.0mg.L^-1；V_B6 0.25mg.L^-1；V_B1 0.05mg.L^-1；烟酸0.25mg.L^-1；肌醇50mg.L^-1

*蔗糖15g.L^-1，卡拉胶6.25g.L^-1，吲哚丁酸IBA0.75mg.L^-1；

其余为水，pH5.5。