CN101473032A

CN101473032A - 脱浆和煮炼方法

Info

Publication number: CN101473032A
Application number: CNA2007800229269A
Authority: CN
Inventors: 刘继银; 桑加·萨蒙; 吴桂芳
Original assignee: Novo Nordisk AS; Novozymes North America Inc
Current assignee: Novo Nordisk AS; Novozymes North America Inc
Priority date: 2006-06-21
Filing date: 2007-06-06
Publication date: 2009-07-01
Anticipated expiration: 2027-06-06
Also published as: PT2041278T; BRPI0713389A2; EP2041278A2; US20090286302A1; CN101473032B; EP2495316A3; WO2007149699A2; EP2495316A2; EP2041278B1; WO2007149699A3

Abstract

本发明涉及在织物制造过程中将含有淀粉或淀粉衍生物的上浆织物进行组合的脱浆和煮炼的方法，所述方法包括将所述上浆的织物在pH 1－7的处理水溶液中温育，所述处理水溶液包含酸性淀粉酶和促进所述其它织物处理步骤的至少一种其它的酸性酶。本发明进一步涉及在所述方法中使用的组合物和所述组合物的用途。

Description

脱浆和煮炼方法

参考序列表

本申请含有计算机可读形式的序列表。将所述计算机可读形式通过引用并入本文。

发明领域

本发明涉及在新织物(new fabrics)的制造过程中使用酸性淀粉酶和其它的酶例如纤维素酶、果胶酶、脂肪酶、木聚糖酶、蛋白酶等的组合的脱浆和煮炼的方法(combined desizing and scouring processes)。

发明背景

将纤维(fabric)例如纤维素材料(cellulosic material)加工成服装工业备用材料涉及几个步骤：将纤维纺成纱线(yarn)；从纱线制造纺织的(woven)或编织的(knit)织物；和后续的预制(preparation)、染色和整理(finishing)操作。预制过程产生适合于染色或整理的织物，该过程可以包括脱浆(对于纺织物品)、煮炼和漂白。

WO 2006/002034(Novozymes)描述同时脱浆和煮炼的方法，包括用碱性α-淀粉酶和碱性煮炼酶来处理织物。使用碱性α-淀粉酶作为脱浆方法中的助剂(auxiliary)以促进在纺织过程中用作纱线上的保护性涂层的含淀粉浆料的去除。

在纺织之后将浆料涂层完全去除对于在后续过程中确保最佳结果是重要的，在所述后续过程中通常对织物进行煮炼、漂白、染色和/或印刷。

在脱浆步骤之后，包括去矿质步骤(demineralization step)从而去除金属离子如Mn²⁺、Fe²⁺/Fe³⁺、Cu²⁺等通常是理想的，如果在织物上存在所述金属离子，可能在稍后的工艺步骤中导致不均匀的漂白，或者甚至可能在漂白的织物中造成小孔。去矿质通常通过酸沉淀来完成，并且通常涉及添加酸例如乙酸或硫酸。

需要改进的方法，用于同时的与其它织物处理步骤组合的脱浆，例如组合的脱浆和煮炼，组合的脱浆和生物抛光，组合的脱浆和摩蚀(abrasion)，以及组合的脱浆和碳化等。

发明简述

本发明涉及提供在酸性条件下特别是新织物的制造过程中使上浆织物脱浆的方法。

在一个方面，本发明涉及在织物制造过程中组合对含有淀粉或淀粉衍生物的上浆织物进行组合的脱浆和其它织物处理步骤的方法，所述方法包括在具有pH1-7，优选1-5，特别是1-4的处理水溶液中温育所述上浆织物，所述处理水溶液包含酸性淀粉酶和促进所述其它织物处理步骤的至少一种其它酸性酶。

优选地，促进所述其它织物处理步骤的所述其它酸性酶是酸性纤维素酶、酸性果胶酶、酸性脂肪酶、酸性木聚糖酶和/或酸性蛋白酶。更优选地，促进所述其它织物处理步骤的酶是酸性果胶酶。

优选地，酸性淀粉酶是细菌或真菌来源的，例如丝状真菌来源的。

优选地，酸性淀粉酶源自曲霉属(Aspergillus)，优选地黑曲霉(Aspergillusniger)、泡盛曲霉(Aspergillus awamori)、米曲霉(Aspergillus oryzae)或川地曲霉(Aspergillus kawachii)的菌株(SEQ ID NO：37)；或根毛霉属(Rhizomucor)，优选微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)的菌株；或多孔菌属(Meripilus)的菌株，优选巨多孔菌(Meripilus giganteus)的菌株。更优选地，曲霉属酸性淀粉酶是SEQ IDNO：38中公开的酸性黑曲霉α-淀粉酶，或它的变体。甚至更优选地，酸性淀粉酶是SEQ ID NO：48中公开的微小根毛霉α-淀粉酶，或它的变体。

优选地，细菌酸性淀粉酶源自芽孢杆菌属(genus Bacillus)的菌株，优选源自芽孢杆菌属菌种(Bacillus sp.)的菌株，更优选地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或芽孢杆菌属菌种，例如芽孢杆菌属菌种NCIB 12289、NCIB 12512、NCIB 12513、DSM 9375、DSMZ 12648、DSMZ 12649、KSM AP1378、KSM K36或KSM K38的菌株。

杂合α-淀粉酶也能够用于本发明中。优选地，杂合α-淀粉酶可以是由微小根毛霉α-淀粉酶与黑曲霉葡糖淀粉酶接头和SBD组成的淀粉酶，其作为V039公开在共同悬而未决的国际申请no.PCT/US05/46725的表5中。

优选地，酸性α-淀粉酶以1-3,000AFAU/kg织物，优选10-1,000AFAU/kg织物，特别是100-500AFAU/kg织物的浓度存在，或以1-3,000AFAU/L处理溶液，优选10-1,000AFAU/L处理溶液，特别是100-500AFAU/L处理溶液的浓度存在。

优选地，α-淀粉酶是SEQ ID NO：48中显示的杂合α-淀粉酶，其包含来自微小根毛霉α-淀粉酶的催化域(CD)，具有来自黑曲霉的糖结合域(CBD)。

通常而言存在三种类型的果胶酶(pectic enzyme)：果胶酯酶(pectesterase)、解聚酶(depolymerising enzyme)和原果胶酶(protopectinase)。优选地，所述酸性果胶酶是酸性果胶酸裂合酶、酸性果胶裂合酶、酸性多聚半乳糖醛酸酶和/或酸性多聚半乳糖醛酸裂合酶(acid polygalacturonate lyase)。更有选地，酸性果胶酶是Pectinex BEE XXL、Pectinex Ultra；Pectinex Yield Mash、PectinexXXL、Pectinex Smash XXL或它们的混合物。

优选地，酸性果胶酶来自曲霉属(genus Aspergillus)。

优选地，可以在添加酸性淀粉酶之前、同时或之后将酸性果胶酶添加至溶液中。

优选地，将所述方法在5-90℃，特别是20-90℃范围的温度进行。更优选地，将所述方法在25-60℃的温度进行一段合适的时间，优选2-24小时。

优选地，pH的范围是pH2-4。

优选地，织物是由天然或人造来源的纤维、棉织物、粗斜纹棉布(denim)、亚麻织物(linen)、苎麻(ramie)、粘胶纤维(viscose)、溶解性纤维(lyocell)或乙酸纤维素制造。

优选地，织物由来自动物来源的纤维，特别是丝和毛料(wool)制造。

优选地，织物由人造或天然来源的聚酯纤维，如聚(对苯二甲酸乙二醇酯)或聚(乳酸)或尼龙、丙烯酸纤维(acrylic fiber)或聚氨酯的纤维制造。织物优选是含聚酯织物基本上由100％聚酯组成的或衣物。聚酯织物是聚酯混纺物(polyester blend)，如聚酯和纤维素混纺物(cellulosic blend)，包括聚酯和棉混纺物；聚酯和毛料混纺物；聚酯和丝混纺物；聚酯和丙烯酸纤维混纺物；聚酯和尼龙混纺物；聚酯、尼龙和聚氨酯混纺物；聚酯和聚氨酯混纺物，人造纤维(rayon)(粘胶纤维)，乙酸纤维素和天丝(tencel)。

在另一个方面，本发明涉及包含酸性淀粉酶和酸性煮炼酶的组合物。酸性淀粉酶优选源自黑曲霉或微小根毛霉或它们的混合物。煮炼酶优选选自下组：酸性纤维素酶、酸性果胶酶、酸性脂肪酶、酸性木聚糖酶和/或酸性蛋白酶，和它们的组合。

优选地，所述酸性果胶酶是

BE XXL、 BE Colour、

Ultra；Pectinex^TM Ultra SP-L、

Yield Mash、

XXL、

Smash XXL、

Smash和/或Pectinex^TMAR。所述酸性果胶酶优选源自曲霉属的菌株。所述组合物进一步包含稳定剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、多价螯合剂(sequestering agent)或乳化剂，或它们的组合。

在第三个方面，本发明涉及如上所述的组合物用于同时的脱浆和煮炼的用途。

本发明的发明人已经发现：当进行如权利要求中限定的本发明的同时脱浆和生物煮炼方法时，不需要去矿质。去矿质与上浆织物的脱浆和生物煮炼同时和/或在其后发生在相同的处理溶液中。与包括酸性脱浆步骤和去矿质步骤的传统方法相比，避免了pH调节步骤。本发明的另一个优势在于节省/降低了过程时间，因为脱浆、生物煮炼和去矿质可以同时进行。即使不将组合的脱浆和生物煮炼以及去矿质作为一步法进行，即同时进行，也会节省/降低例如酸和添加酸的人工的成本，因为避免了传统酸性脱浆步骤和去矿质步骤之间的pH调节步骤。与在碱性条件下的同时脱浆和生物煮炼相比，在酸性条件下的同时脱浆和生物煮炼能够在去掉去矿质步骤的同时而无额外的去矿质过程。

在本发明的上下文中，术语“处理”的意思是提供易化处理(facilitatedprocessing)的酶的组合，如组合的脱浆和煮炼、组合的脱浆和生物抛光、组合的脱浆和磨蚀等。

在本发明的上下文中，术语“生物抛光”是对纱线表面的特殊处理，其改进织物在手感(handle)和外观方面的质量而不损失织物润湿性。生物抛光最重要效果的特征可能在于较少起毛(fuzz)和起球(pilling)，增加的光彩/光泽(gloss/luster)，改进的织物手感，增加的持久柔软性和改进的吸水性。

在本发明的上下文中，术语“组合的”或“组合”的意思是所述组合的方法步骤，或所述组合在一个浴(bath)(即，相同的处理溶液)中顺序或同时进行。在优选的实施方式中，组合的方法或组合在一个浴(即，相同的处理溶液)中同时进行。

在本发明的上下文中，术语“织物”可与术语“纺织品(textile)”互换使用，意思是与“使用过的”洗衣织物相对的新制造的，优选未染色的织物、衣物、纤维、纱线或其它类型的加工织物。可以通过纺织、编织或无纺织(non-woven)操作从纤维制造织物。纺织和编织需要纱线作为输入(input)，而无纺织物是随机连接纤维的结果(可以把纸张看作无纺织的)。

纺织织物(woven fabric)是在织机上通过在以纵向拉直的(stretched)经纱(warp yarn)之间纺织“纬纱(filling)”或纬纱线(weft yarn)制造。纺织前经纱必须上浆，以润滑和保护它们免于纺织过程中在高速插入纬纱(filling yarn)时的磨损。所述纬纱可以穿过经纱以“上一个-下一个(over one-under the next)”的方式纺织(平织(plain weave))，或以“上一个-下两个(over one-under two)”(斜纹织(twill))或任何其它无数种变换(permutation)。力度、纹理和图案不仅与纱线的类型/质量相关，还与纺织的类型相关。通常，衣服(dress)、衬衫、裤子、被单类(sheeting’s)、毛巾、帏帐/衣饰(draperies)等从纺织织物产生。

编织(knitting)是通过将连锁的纱线环连接到一起形成织物。与由两种类型的纱线制造并且具有许多“末端”(ends)的纺织相反，编织织物是从单根连续的纱线生产的。与纺织一样，有许多不同的方式把纱线环编到一起，并且最终织物的特性依赖于纱线和编织的类型。内衣、针织衫(sweater)、袜子、运动衫、汗衫(sweat shirt)等是从编织织物得到的。

无纺织物是通过以机械的、热的、化学的或溶剂介导的方法连接和/或连锁纤维和纤丝(filament)而制造的织物片。所得织物可以是以网状结构、层压材料(laminates)或膜的形式。典型实例是一次性婴儿尿布、毛巾、抹布、手术服(surgical gown)、“环境友好”(environmental friendly)型纤维、过滤介质、寝具、屋顶材料、二维织物的背衬(backing)和许多其它。

根据本发明，所述方法可以应用于本领域中已知的任何上浆织物(纺织的、编织的和无纺织的)。与在洗衣洗涤过程中待洗的经使用的和/或沾污的织物相反，将所述方法应用于新制造的上浆织物。在实施方式中，所述织物由天然和/或人造来源的纤维制造。在另一个实施方式中，所述织物由动物来源的纤维制造。具体而言，本发明的方法可以应用于含纤维素的织物或纤维素织物，例如棉、粘胶纤维、人造纤维、苎麻、亚麻织物、乙酸纤维素、粗斜纹棉布、溶解性纤维(Tencel^TM，由Courtaulds Fibers制造)，或它们的混合物，或任何这些纤维与合成纤维(例如聚酯、聚酰胺、丙烯酸类或聚氨酯、尼龙、聚(对苯二甲酸乙二醇酯)或聚(乳酸))一起的混合物，或与其它天然纤维，例如毛料和丝一起的混纺物，如粘胶纤维/棉混纺物、溶解性纤维/棉混纺物、粘胶纤维/毛料混纺物、溶解性纤维/毛料混纺物、棉/毛料混纺物；亚麻(亚麻织物)、苎麻和基于纤维素纤维的其它织物，包括含纤维素纤维与其它纤维如毛料、聚酰胺、丙烯酸纤维和聚酯纤维的全部混纺物，例如，粘胶纤维/棉/聚酯混纺物、毛料/棉/聚酯混纺物、亚麻/棉混纺物等。所述方法也可以用于合成织物，例如，分别由基本上100％聚酯、聚酰胺、尼龙组成的合成织物。术语“毛料”的意思是任何商业上有用的动物毛发产品，例如，来自绵羊、骆驼、兔子、山羊、美洲驼(lama)的毛料，以及被称为美利奴羊毛(merino wool)、设得兰羊毛(Shetland wool)、开士米羊毛/山羊绒(cashmere wool)、羊驼毛(alpaca wool)、马海毛等的毛料，并且包括毛料纤维和动物毛发。本发明所述方法可以与毛料或动物毛发材料一起，以毛条(top)、纤维、纱线或纺织或编织织物的形式使用。

根据本发明的方法使用的α-淀粉酶可以是任何酸性α-淀粉酶，但是优选细菌或真菌来源的。

优选酸性α-淀粉酶源自丝状真菌，特别是曲霉属、根毛霉属或多孔菌属的菌株。

术语“酸性α-淀粉酶”的意思是在50℃的温度，在1-7，优选1-5范围的pH具有最优活性的α-淀粉酶(E.C.3.2.1.1)。

术语“脱浆”意欲以常规方式理解，即，从织物如纺织织物中的经纱降解和/或去除上浆剂。

术语“含有淀粉或淀粉衍生物的织物”意欲表示含有淀粉或淀粉衍生物的任何类型的织物，特别是从含纤维素的材料制备的纺织织物。所述织物通常是未染色的，并且由棉、胶粘纤维、亚麻等制造。织物上存在的淀粉或淀粉衍生物的主要部分通常是浆料，在纺织之前用它来包覆纱线，通常而言用它来包覆经纱。

术语“糖结合模块(CBM)”，或常常称为“糖结合域(CBD)”，是优先结合于多糖或寡糖(碳水化合物)，通常但并非必然地与它们的水不溶性(包括晶体)形式优先结合的多肽氨基酸序列。

即使没有具体提及与本发明的方法相关，也应该理解的是以“有效量”使用所述酶或剂。术语“有效量”指这样的量，例如，能够提供期望效果的α-淀粉酶量，所述效果即与未用所述酶处理的织物相比使所述织物脱浆。

发明详述

本发明涉及提供在制造特别是新织物的过程中使上浆织物脱浆的方法。

在优选的实施方式中，在本发明的脱浆步骤之后是煮炼步骤，优选酶煮炼步骤，优选使用煮炼酶，如果胶酶例如果胶裂合酶、脂肪酶、蛋白酶或它们的组合；和漂白步骤，优选涉及使用过氧化氢和/或过氧化氢生成剂的漂白。相关的煮炼方法在美国专利No.5,578,489、美国专利No.5,912,407和美国专利No.6,630,342中描述。相关的漂白方法在美国专利No.5,851,233、美国专利No.5,752,980和美国专利No.5,928,380中描述。相关的组合的煮炼和漂白方法在WO 2003/002810(Novozymes)和WO 2003/002705(Novozymes)中描述。

根据本发明，织物可以在相同的处理水溶液(即，一个浴)中同时脱浆和去矿质，或在相同的或两个单独的处理溶液(即，一个或两个浴)中相继脱浆和去矿质。在优选的实施方式中，脱浆和去矿质在相同的处理溶液(即，一个浴)中同时进行。可以使用传统上浆/脱浆设备，例如，浸轧系统(pad system)、J-箱(J-box)、喷射器(jet)、卷染机(jigger)等进行本发明的方法。通常，不需要额外的处理设备。

根据本发明，通过在具有pH1-7的处理水溶液中温育上浆织物来进行同时脱浆和去矿质，所述处理水溶液包含酸性α-淀粉酶。在优选的实施方式中，温育过程中的pH是1-4，特别是2-4的范围。

纺织物品(woven good)是织物制造的普遍形式。纺织方法要求使经纱“上浆”来保护其免受磨损。未改性的和改性的淀粉、聚乙烯醇(PVA)、羧甲基纤维素(CMC)、蜡和丙烯酸类粘合剂，以及它们的混合物是通常使用的上浆剂的实例。根据本发明所述上浆剂可以是基于淀粉的或基于淀粉衍生物的上浆剂，但是也可以含有一种或几种不基于淀粉或淀粉衍生物的上浆剂。通常在作为制造纺织物品中的第一步的纺织方法之后去除上浆剂。

在本发明的脱浆方法过程中可以存在一种或几种其它的剂，包括稳定剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、多价螯合剂或乳化剂，或它们的组合。允许将上浆织物在处理水溶液中温育足够长的时间以完成上浆织物的脱浆。最佳的时间依赖于加工方案(processing regime)的类型和温度，并可从约15分钟变化至几天，例如48小时。依赖于加工方案，本发明的方法优选在5-90℃，特别是20-90℃范围的温度进行。

加工方案可以是分批的或连续的用含水处理流(aqueous treating stream)接触平幅的(open width)或绳状形式(rope form)的织物。

连续操作可以使用饱和器(saturator)，由此根据织物的重量将近似于相等重量的处理溶液应用于该织物，接着是化学反应在其中发生的加热留置室(heated dwell chamber)。其后洗涤部件为下个加工步骤制备织物。为了保证高的白度或良好的润湿性及因而得到的可染性，必需彻底去除脱浆酶和其它剂。

分批方法可以在一个浴(处理溶液)中进行，从而将织物与例如其重量的约8-15倍的处理水溶液接触。在温育期之后，排干处理水溶液，漂洗织物，并开始下一个加工步骤。不连续的PB方法(即轧染堆置(pad-batch)方法)包括饱和器，由此根据织物的重量将近似于相等重量的处理水溶液应用于该织物，其后是留置期，在CPB方法(即，冷轧染堆置方法)的情况下所述留置期可能是一天或几天。例如，CPB方法可以在pH1-7，优选约pH1-4，特别是pH2-4，在20-40℃进行8-24小时或更久。此外，PB方法可以在pH1-7，优选约pH1-5，更优选pH1-4，特别是pH2-4，在40-90℃进行1-6小时。

在一个实施方式中，可以使用有效量的α-淀粉酶，优选酸性α-淀粉酶和酸如乙酸或硫酸等来进行本发明的脱浆方法。

酶

α-淀粉酶

本发明的方法中使用的α-淀粉酶可以是任何α-淀粉酶，优选细菌或真菌来源的。在优选的实施方式中，α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶，如WO 2005/003311(其通过引用并入本文)中公开的α-淀粉酶或杂合α-淀粉酶。

在优选的实施方式中，α-淀粉酶包括如WO 2005/003311中定义的糖结合模块(CBM)，优选如WO 2005/003311中定义的家族20 CBM。

特别预期的CBM包括选自下组的CBM：SEQ ID NO：2中公开的川地曲霉；SEQ ID NO：5中公开的黄热芽孢杆菌(Bacillus flavothermus)；SEQ ID NO：6中公开的芽孢杆菌属菌种；SEQ ID NO：7中公开的嗜碱芽孢杆菌(Bacillusalcalophilus)；SEQ ID NO：8中公开的Hormoconis resinae；SEQ ID NO：9中公开的香菇(Lentinula edodes)；SEQ ID NO：10中公开的粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)；SEQ ID NO：11中公开的Talaromyces byssochlamydiodes；SEQ ID NO：12中公开的Geosmithia cylindrospora；SEQ ID NO：13中公开的Scorias spodiosa；SEQ ID NO：14中公开的路德正青霉(Eupenicillium ludwigii)；SEQ ID NO：15中公开的日本曲霉(Aspergillus japonicus)；SEQ ID NO：16中公开的米舒青霉(Penicillium cf.miczynskii)；SEQ ID NO：17中公开的Mzl青霉属菌种；SEQ ID NO：18中公开的Thysanospora sp.；SEQ ID NO：19中公开的灰色腐质霉thermoidea变体(Humicola grisea var.thermoidea)；SEQ ID NO：20中公开的黑曲霉；或SEQ ID NO：21中公开的罗耳阿太菌(Althea rolfsii)。

真菌α-淀粉酶

在实施方式中，真菌α-淀粉酶是酵母的或丝状真菌来源的。在优选的实施方式中，真菌α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶。

优选的α-淀粉酶包括，例如，可以从曲霉属菌种，特别是从黑曲霉、米曲霉和泡盛曲霉、川地曲霉获得的α-淀粉酶，如作为SWISSPROTP56271公开，或在WO 89/01969(实施例3)中更详细描述的酸性α-淀粉酶。成熟酸性α-淀粉酶具有如SEQ ID NO：4的22-511所示的氨基酸序列，其由SEQ ID NO：3中显示的DNA序列编码；或具有SEQ ID NO：38中所示的氨基酸序列。还优选的是分别与SEQ ID NO：4或38中所示氨基酸序列具有高于50％，如高于60％，高于70％，高于80％或高于90％，高于95％，高于96％，高于97％，高于98％，或甚至高于99％同一性的α-淀粉酶序列。

在另一个优选的实施方式中，α-淀粉酶序列源自米曲霉酸性α-淀粉酶。更优选地，α-淀粉酶序列与SEQ ID NO：39中显示的氨基酸序列具有高于50％，如高于60％，高于70％，高于80％或高于90％，高于95％，高于96％，高于97％，高于98％，或高于99％同一性。

在一个实施方式中，α-淀粉酶是SEQ ID NO：37中公开的川地曲霉α-淀粉酶，其以野生型形式含有同样显示于SEQ ID NO：2中的糖结合域(CBD)。

在优选的实施方式中，α-淀粉酶是分别与SEQ ID NOS：43、44、46或47中显示的氨基酸序列具有多于50％，如多于60％，多于70％，多于80％或多于90％，多于95％，多于96％，多于97％，多于98％，或甚至多于99％同一性的α-淀粉酶。

α-淀粉酶可以以1-3,000AFAU/kg织物，优选10-1,000AFAU/kg织物，特别是100-500AFAU/kg织物的浓度存在；或以1-3,000AFAU/L处理溶液，优选10-1,000AFAU/L处理溶液，特别是100-500AFAU/L处理溶液的浓度存在。

细菌α-淀粉酶

在实施方式中，α-淀粉酶是细菌来源的。在优选的实施方式中，细菌α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶。

细菌α-淀粉酶优选源自芽孢杆菌属的菌株，如地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或其它芽孢杆菌属菌种，例如芽孢杆菌属菌种NCIB 12289、NCIB 12512(WO 95/26397)、NCIB 12513(WO95/26397)、DSM 9375(WO 95/26397)、DSMZ 12648(WO 00/60060)、DSMZ12649(WO 00/60060)、KSMAP 1378(WO 97/00324)、KSM K36或KSM K38(EP1,022,334)。优选的是WO 95/26397中分别作为SEQ ID NOS.1和2公开的芽孢杆菌属菌种α-淀粉酶，WO 00/60060中作为SEQ ID NO：2公开的AA560α-淀粉酶(即，本文的SEQ ID NO：40)，和Tsukamoto等，Biochemical and Biophysical Research Communications，151，第25-31页(1988)公开的#707α-淀粉酶。

在本发明的实施方式中，细菌α-淀粉酶是WO 95/26397中作为SEQ ID NO：2公开的SP722 α-淀粉酶，或AA560 α-淀粉酶(本文的SEQ ID NO：40)。

在优选的实施方式中，亲本α-淀粉酶在以下位置或相应于以下位置具有一个或多个缺失：D183和G184，优选其中所述α-淀粉酶变体进一步在位置195或对应于位置195具有取代N195F(使用SEQ ID NO：40编号方式)。

在另一个优选的实施方式中，亲本α-淀粉酶具有以下缺失/取代中的一个或多个或对应于以下缺失/取代中的一个或多个：Delta(R81-G182)；Delta(D183-G184)；Delta(D183-G184)+N195F；R181Q+N445Q+K446N；Delta(D183-G184)+R181Q、Delta(D183-G184)和以下取代中的一个或几个或对应于：R118K、N195F、R320K、R458K，特别是其中所述变体具有以下突变：Δ(D183+G184)+R118K+N195F+R320K+R458K(使用SEQ ID NO：40编号方式)。

在另一个优选的实施方式中，α-淀粉酶是SEQ ID NO：40中显示的AA560 α-淀粉酶，其进一步包含以下取代中的一个或几个：M9L、M202L、V214T、M323T、M382Y、E345R；或者是具有全部以下取代的A560 α-淀粉酶：M9L、M202L、V214T、M323T、M382Y或者M9L、M202L、V214T、M323T和E345R。

商业上可用的α-淀粉酶产品或包含α-淀粉酶的产品包括以如下商品名出售的产品：NATALASE^TM、STAINZYME^TM(Novozymes A/S)，Bioamylase-D(G)、BIOAMYLASE^TML(Biocon India Ltd.)，KEMZYM^TM AT 9000(Biozym Ges.m.b.H，Austria)，PURASTAR^TM ST、PURASTAR^TM HPAmL、PURAFECT^TMOxAm、RAPIDASE^TM TEX(Genencor Int.Inc，USA)，KAM(Kao，Japan)。

所述α-淀粉酶可以以约0.05-150KNU/L处理溶液，优选1-100KNU/L处理溶液，特别是2-20KNU/L处理溶液的浓度存在，或者以0.05-150KNU/Kg织物，优选1-100KNU/kg织物，特别是2-20KNU/kg织物的浓度存在。

杂合酶

在优选的实施方式中α-淀粉酶可以是包含糖结合域(CBD)的α-淀粉酶。这种含CBD的α-淀粉酶可以是野生型酶(参见例如，上面的川地曲霉)或在下文将详述的杂合酶(融合蛋白)。本文所指的杂合酶或遗传修饰的野生型酶包括以下种类，该种类包含与含有糖结合域(CBD)的氨基酸序列连接的(即，共价结合的)α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)的氨基酸序列。

含CBD的杂合酶，以及对其制备和纯化的详细描述是本领域已知的[参见，例如，WO 90/00609、WO 94/24158和WO 95/16782，以及Greenwood等，Biotechnology and Bioengineering，1994，44：1295-1305]。它们可以例如通过如下制备：将DNA构建体转化至宿主细胞中，所述DNA构建体至少包含编码糖结合域的DNA的片段，该片段通过或不通过接头与编码感兴趣的酶的DNA序列连接；和培养转化的宿主细胞以表达该融合基因。所得重组产物(杂合酶)——本领域中通常称为“融合蛋白”可以用以下通式描述：

A-CBD-MR-X

在后面的通式中，A-CBD是本身至少包含糖结合域(CBD)的氨基酸序列的N-末端或C-末端区。MR是中间区(“接头”)，而X是由DNA序列编码的多肽的氨基酸残基序列，所述DNA序列编码待与CBD连接的酶(或其它蛋白)。

部分A可为缺失的(使得A-CBD是CBD本身，即，除了构成CBD的那些氨基酸残基之外不包含氨基酸残基)，或可为一个或几个(或多个)氨基酸残基的序列(作为CBD本身的末端延伸发挥功能)。接头(MR)可以是键，或短的连接基团，其包含约2至约100个碳原子，特别是2-40个碳原子。然而，MR优选是约2至约100个氨基酸残基，更优选2-40个氨基酸残基，如2-15个氨基酸残基的序列。

部分X可以构成整个杂合酶的C-末端区或者N-末端区。

因此从上文显而易见的是所讨论的类型的杂合酶中的CBD可以位于该杂合酶的C-末端、N-末端或内部。

接头序列

接头序列可以是任何合适的接头序列。在优选实施方式中，接头序列源自罗耳阿太菌葡糖淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、川地曲霉α-淀粉酶，如选自下组中的一个或多个接头序列：黑曲霉葡糖淀粉酶接头：TGGTTTTATPTGSGSVTSTSKTTATASKTSTSTSSTSA(SEQ ID NO：22)，川地曲霉α-淀粉酶接头：TTTTTTAAATSTSKATTSSSSSSAAATTSSS(SEQ ID NO：23)，罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头：GATSPGGSSGS(SEQ ID NO：24)，和PEPT接头：PEPTPEPT(SEQ ID NO：25)。在另一个优选的实施方式中，杂合酶在不多于10个位置、不多于9个位置，不多于8个位置，不多于7个位置，不多于6个位置，不多于5个位置，不多于4个位置，不多于3个位置，不多于2个位置，或甚至不多于1位置中具有不同于SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24或SEQ ID NO：25中所示氨基酸序列的接头序列。

糖结合域

糖结合域(CBD)，或通常称为糖结合模块(CBM)，是优先结合于多糖或寡糖(碳水化合物)，通常但并非必然地与它们的水不溶性(包括晶体)形式优先结合的多肽氨基酸序列。

源自淀粉降解酶的CBD通常称为淀粉结合域(SBD)或淀粉结合模块(SBM)。SBD是可能存在于特定淀粉分解酶如特定葡糖淀粉酶中的CBD，或是存在于酶例如环糊精葡聚糖转移酶(cyclodextrin glucanotransferase)或α-淀粉酶中的CBD。同样，CBD的其它亚类可以包括，例如，纤维素结合域(来自纤维素分解酶的CBD)，壳多糖结合域(通常存在于壳多糖酶中的CBD)，木聚糖结合域(通常存在于木聚糖酶中的CBD)，甘露聚糖结合域(通常存在于甘露聚糖酶中的CBD)。

发现CBD是由两个或几个多肽氨基酸序列区组成的大多肽或蛋白的整体的组成部分(integral part)，特别是在水解酶(hydrolytic enzyme)(水解酶(hydrolase))中，所述水解酶通常包含含有用于底物水解的活性位点的催化域和用于结合所讨论的糖底物的糖结合域(CBD)。这些酶可以包含多于一个催化域和一个、两个或三个CBD，以及任选地还包含将所述CBD与所述催化域连接的一个或多个多肽氨基酸序列区，后一种类型的区通常被表示为“接头”。包含CBD的水解酶的实例(其中某些已在上文提及)是纤维素酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、乙酰酯酶和壳多糖酶。也已经在藻类中，例如在红藻紫红紫菜(Porphyrapurpurea)中以非水解多糖结合蛋白的形式发现了CBD。

在存在CBD的蛋白/多肽(例如，酶，通常为水解酶)中，CBD可以位于N或C末端或位于内部位置。

组成CBD本身的多肽或蛋白(例如，水解酶)的那个部分通常由多于约30个并少于约250个氨基酸残基组成。

在本发明的上下文中将“家族20的糖结合模块”或CBM-20模块定义为约100个氨基酸的序列，其与Joergensen等(1997)在Biotechnol.Lett.19：1027-1031的图1中公开的多肽的糖结合模块(CBM)具有至少45％同源性。CBM包含所述多肽的最后102个氨基酸，即，从氨基酸582至氨基酸683的亚序列。在本公开中应用的糖苷水解酶家族的编号方式遵循以下文献中的概念：Coutinho，P.M.& Henrissat，B.(1999)CAZy-Carbohydrate-Active Enzymesserver，在URL：http://afmb.cnrs-mrs.fr/～cazy/CAZY/index.html或者CoutiP.M.& Henrissat，B.1999；The modular structure of cellulases and othercarbohydrate-active enzymes：an integrated database approach.于＂Genetics，Biochemistry and Ecology of Cellulose Degradation＂中，K.Ohmiya，K.Hayashi，K.Sakka，Y.Kobayashi，S.Karita和T.Kimura编，Uni Publishers Co.，Tokyo，第15-23页，和Bourne，Y.& Henrissat，B.2001；Glycoside hydrolases andglycosyltransferases：families and functional modules，Current Opinion inStructural Biology 11：593-600。

适用于本发明上下文中的包含CBD的酶的实例是α-淀粉酶、产麦芽糖α-淀粉酶、纤维素酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、乙酰酯酶和壳多糖酶。与本发明相关的感兴趣的其它CBD包括源自葡糖淀粉酶(EC3.2.1.3)或源自CGT酶(EC 2.4.1.19)的CBD。

源自真菌、细菌或植物来源的CBD将通常适用于本发明的上下文。优选的是真菌来源的CBD，更优选来自曲霉属菌种、芽孢杆菌属菌种、克雷伯氏菌属菌种(Klebsiella sp.)或根霉属菌种(Rhizopus sp.)。就此而论，适于分离相关基因的技术是本领域熟知的。

优选用于本发明的是糖结合模块家族20的CBD。适用于本发明的糖结合模块家族20的CBD可以源自泡盛曲霉(SWISSPROT Q12537)、川地曲霉(SWISSPROT P23176)、黑曲霉(SWISSPROT P04064)、米曲霉(SWISSPROTP36914)的葡糖淀粉酶，源自川地曲霉(EMBL：#AB008370)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)(NCBI AAF17100.1)的α-淀粉酶，源自蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的β-淀粉酶(SWISSPROT P36924)，或源自环状芽孢杆菌的CGT酶(SWISSPROT P43379)。优选的是来自川地曲霉的α-淀粉酶(EMBL：#AB008370)的CBD以及与川地曲霉的α-淀粉酶(EMBL：#AB008370)的CBD具有至少50％、60％、70％、80％或甚至至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的CBD，即，与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％或甚至至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的CBD。对于本发明还优选的是具有SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7中所示并在PCT申请no.PCT/DK2004/000456(或丹麦专利申请PA 200300949)中分别作为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3公开的氨基酸序列的糖结合模块家族20的CBD。其它优选的CBD包括：来自Hormoconissp.如来自Hormoconis resinae(同物异名木馏油(Creosote)真菌或树脂暗膜菌(Amorphotheca resinae)的葡糖淀粉酶的CBD，如SWISSPROT：Q03045中的CBD(SEQ ID NO：8)；来自香菇属菌种(Lentinula sp.)如来自香菇(什塔克菇(shiitake mushroom))的葡糖淀粉酶的CBD，如SPTREMBL：Q9P4C5的CBD(SEQ ID NO：9)；来自脉孢菌属菌种如来自粗糙脉孢菌的葡糖淀粉酶的CBD，如SWISSPROT：P14804的CBD(SEQ ID NO：10)；来自踝节菌属菌种(Talaromyces sp.)如来自丝衣霉状踝节菌(Talaromyces byssochlamydioides)的葡糖淀粉酶的CBD，如来自NN005220的CBD(SEQ ID NO：11)；来自Geosmithiasp.如来自Geosmithia cylindrospora的葡糖淀粉酶的CBD，如NN48286的CBD(SEQ ID NO：12)；来自胶壳炱属菌种(Scorias sp.)如来自海绵胶壳炱(Scoriasspongiosa)的葡糖淀粉酶的CBD，如NN007096的CBD(SEQ ID NO：13)；来自正青霉属菌种(Eupenicillium sp.)如来自路德正青霉的葡糖淀粉酶的CBD，如NN005968的CBD(SEQ ID NO：14)；来自曲霉属菌种如来自日本曲霉的葡糖淀粉酶的CBD，如来自NN001136的CBD(SEQ ID NO：15)；来自青霉属菌种(Penicillium sp.)如来自米舒青霉的葡糖淀粉酶的CBD，如NN48691的CBD(SEQ ID NO：16)；来自Mz1青霉属菌种的葡糖淀粉酶的CBD，如NN48690的CBD(SEQ ID NO：17)；来自Thysanophora sp.的葡糖淀粉酶的CBD，如NN48711的CBD(SEQ ID NO：18)；和来自腐质霉属菌种如灰色腐质霉thermoidea变体的葡糖淀粉酶的CBD，如SPTREMBL：Q12623的CBD(SEQ ID NO：19)。最优选的CBD包括：来自曲霉属菌种如黑曲霉的葡糖淀粉酶的CBD，如SEQ ID NO：20；和来自阿太菌属菌种如来自罗耳阿太菌的葡糖淀粉酶的CBD，如SEQ ID NO：21。根据本发明还优选的是与任何前述CBD氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％或甚至至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的任何CBD。

其它合适的糖结合模块家族20的CBD可以在URL：http://afmb.cnrs-mrs.fr/～cazy/CAZY/index.html找到。

一旦以cDNA或染色体DNA的形式鉴定了编码底物结合(糖结合)区的核苷酸序列，那么就可以以多种方式对它进行操作以将它与编码感兴趣的酶的DNA序列融合。其后通过或不通过接头将编码糖结合氨基酸序列的DNA片段和编码感兴趣的酶的DNA连接。然后可以以多种方式操作所得的连接的DNA以实现表达。

在实施方式中，杂合体(hybrid)中包含的α-淀粉酶是在上文的“α-淀粉酶”部分描述的α-淀粉酶。在优选的实施方式中，所述α-淀粉酶是真菌来源的。在更优选的实施方式中，所述α-淀粉酶是酸性α-淀粉酶。

在优选的实施方式中，糖结合域和/或接头序列是真菌来源的。糖结合域可源自α-淀粉酶，但是也可以源自蛋白质，例如，具有葡糖淀粉酶活性的酶。

在实施方式中，α-淀粉酶源自曲霉属或阿太菌属的菌株。在实施方式中，α-淀粉酶源自米曲霉或黑曲霉的菌株。在具体实施方式中，α-淀粉酶是SEQ IDNO：39中公开的米曲霉酸性α-淀粉酶。在具体实施方式中，接头序列可以源自曲霉属的菌株，例如川地曲霉α-淀粉酶(SEQ ID NO：23)或罗耳阿太菌葡糖淀粉酶(SEQ ID NO：24)。在实施方式中，CBD源自曲霉属或阿太菌属的菌株。在具体实施方式中，CBD是SEQ ID NO：1中所示的川地曲霉α-淀粉酶或SEQ IDNO：21中所示的罗耳阿太菌葡糖淀粉酶。

优选的是实施方式，其中杂合酶包含：具有SEQ ID NO：38中所示序列的源自黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域的α-淀粉酶序列；和/或SEQ ID NO：23中所示的源自川地曲霉α-淀粉酶或SEQ ID NO：24中所示源自罗耳阿太菌葡糖淀粉酶的接头序列；和/或SEQ ID NO：2中所示源自川地曲霉α-淀粉酶的CBD、SEQ ID NO：21中所示源自罗耳阿太菌葡糖淀粉酶的CBD或SEQ ID NO：22中所示源自黑曲霉葡糖淀粉酶的CBD。

在优选的实施方式中，杂合酶包含：具有SEQ ID NO：38中所示序列的黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域，SEQ ID NO：23中所示的川地曲霉α-淀粉酶接头，和SEQ ID NO：2中所示的川地曲霉α-淀粉酶CBD。

在优选实施方式中，杂合酶是：SEQ ID NO：28(黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-黑曲霉葡糖淀粉酶CBD)、SEQ ID NO：30(黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD)或SEQ ID NO：32(米曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-川地曲霉α-淀粉酶CBD)、或SEQ ID NO：34(黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD)、或SEQ ID NO：36(米曲霉酸性α-淀粉酶催化域-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD)中所示氨基酸序列的成熟部分；或由黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域(分别为SEQ ID NO：4或38)-川地曲霉葡糖淀粉酶接头(SEQ ID NO：23)-川地曲霉葡糖淀粉酶CBD(SEQ ID NO：2)组成的杂合体；或具有与任何前述氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％或甚至至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的杂合酶。

在另一个优选的实施方式中，杂合酶在不多于10个位置，不多于9个位置，不多于8个位置，不多于7个位置，不多于6个位置，不多于5个位置，不多于4个位置，不多于3个位置，不多于2个位置，或甚至不多于1位置具有不同于下列氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO：28(黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-黑曲霉葡糖淀粉酶CBD)、SEQ ID NO：30(黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD)、SEQ ID NO：32(米曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-川地曲霉α-淀粉酶CBD)、SEQ ID NO：34(黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD)或SEQ ID NO：36(米曲霉酸性α-淀粉酶催化域-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD)中所示的氨基酸序列；或由黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域(分别为SEQ ID NOS：4或38)-川地曲霉葡糖淀粉酶接头(SEQ ID NO：23)-川地曲霉葡糖淀粉酶CBD(SEQ ID NO：2)组成的杂合体。

优选地，杂合酶包含与SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20 or SEQ ID NO：21中所示的任何氨基酸序列具有至少50％、60％、70％、80％或甚至至少90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的CBD序列。甚至更优选的是杂合酶包含具有SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所示氨基酸序列的CBD序列。在另一个优选的实施方式中，CBD序列在不多于10个氨基酸位置，不多于9个位置，不多于8个位置，不多于7个位置，不多于6个位置，不多于5个位置，不多于4个位置，不多于3个位置，不多于2个位置或甚至不多于1个位置上具有不同于下列氨基酸序列的氨基酸序列：SEQ ID NO：5、SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所示的氨基酸序列。

在最优选的实施方式中，杂合酶包含源自罗耳阿太菌的葡糖淀粉酶的CBD，如来自美国专利No.4,727,026中公开的罗耳阿太菌AHU 9627的葡糖淀粉酶。

酸性煮炼酶

根据本发明可以使用任何酸性煮炼酶。酸性煮炼酶可以是选自下组中一种或多种的酸性酶：果胶酶、纤维素酶、脂肪酶、蛋白酶、木葡聚糖酶、角质酶(cutinase)和它们的混合物。当在同时脱浆和煮炼的过程中存在的条件下最优pH是7以下，如1-7，优选5以下，如1-5，特别是4以下，如1-4时，则在本发明的上下文中煮炼酶是“酸性”的。

多种煮炼酶称为：

多聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.15)催化果胶酸(pectate)和其它聚半乳糖醛酸(galacturonan)中1，4-α-D-半乳糖苷醛酸键(1，4-α-D-galactosiduronic linkage)的随机水解。其它名称的实例是：果胶解聚酶；果胶酶；内聚半乳糖醛酸酶(endopolygalacturonase)；内-聚半乳糖醛酸酶(endo-polygalacturonase)；和内半乳糖醛酸酶(endogalacturonase)。系统名称是聚(1，4-α-D-半乳糖醛酸苷)溶菌酶(poly(1，4-α-D-galacturonide)glycanohydrolase)。

果胶裂合酶(EC 4.2.2.10)催化(1，4)-α-D-聚半乳糖醛酸甲基酯((1，4)-α-D-galacturonan methyl ester)的消除性切割以产生在它们的非还原端具有4-脱氧-6-O-甲基-α-D-半乳-4-硬脂酰基(4-deoxy-6-O-methyl-α-D-galact-4-enuronosylgroup)的寡糖。其它名字的实例是：果胶酸反式消除酶(Pectin trans-eliminase)；聚甲基半乳糖醛酸反式消除酶(polymethylgalacturonic transeliminase；和果胶甲基反式消除酶(pectin methyltranseliminase)。系统名称是(1，4)-6-O-甲基-α-D-聚半乳糖醛酸裂合酶((1，4)-6-O-methyl-α-D-galacturonan lyase)。

果胶酸裂合酶(EC 4.2.2.2)催化(1，4)-α-D-聚半乳糖醛酸的消除性切割以产生在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-半乳-4-硬脂酰基的寡糖。其它名称的实例是：果胶酸反式消除酶；多聚半乳糖醛酸反式消除酶；和内果胶甲基反式消除酶(endopectin methyltranseliminase)。系统名称是(1，4)-α-D-聚半乳糖醛酸裂合酶。

果胶酯酶(EC 3.1.1.11)催化反应：果胶+n H₂O＝n甲醇+果胶酸。其它名称的实例是：果胶脱甲氧基酶；果胶甲基酯酶(pectin methylesterase)；和果胶甲基酯酶(pectin methyl esterase)。系统名称是果胶果胶酰水解酶(pectinpectylhydrolase)。

果胶酸二糖裂合酶(pectate dissaccharide-lyase)(EC 4.2.2.9)催化从果胶酸的还原末端消除性切割4-(4-脱氧-α-D-半乳-4-硬脂酰)-D-半乳糖醛酸酯(4-(4-deoxy-alpha-D-galact-4-enuronosyl)-D-galacturonate)，即，去酯化果胶。其它名称的实例是：果胶酸外裂合酶(pectate exo-lyase)；外果胶酸反式消除酶；外果胶酸裂合酶；和外多聚半乳糖醛酸-反式-消除酶。系统名称是(1-4)-α-D-聚半乳糖醛酸还原端-二糖-裂合酶。

EC编号方式是根据Recommendations of the Nomenclature Committee ofthe International Union of Biochemistry and Molecular Biology on theNomenclature and Classification of Enzyme-Catalysed Reactions公开在EnzymeNomenclature 1992(Academic Press，San Diego，California)中，及Supplement1(1993)、Supplement 2(1994)、Supplement 3(1995)、Supplement 4(1997)和Supplement 5(分别于Eur.J.Biochem.1994，223：1-5；Eur.J.Biochem.1995，232：1-6；Eur.J.Biochem.1996，237：1-5；Eur.J.Biochem.1997，250：1-6和Eur.J.Biochem.1999，264：610-650中)。

在优选的实施方式中，酸性果胶酶是果胶酸裂合酶、果胶裂合酶、多聚半乳糖醛酸酶或多聚半乳糖醛酸裂合酶。

术语“果胶酶”意欲包括任何酸性果胶酶。果胶酶是一组水解果胶物质(主要是聚-1，4-α-D-半乳糖醛酸苷(poly-l，4-α-D-galacturonide)及其衍生物)的糖苷键的酶(见参考文件Sakai等，Pectin，pectinase and pro pectinase：production，properties and applications，于：Advances in Applied Microbiology，Vol.39，pp.213-294(1993))，应将所述酶理解为包括它的成熟蛋白或前体形式，或它的功能片段，其基本上具有全长酶的活性。此外，术语果胶酶意欲包括这些酶的同源物(homologue)或类似物。

优选地，所述酸性果胶酶是通过反式消除催化也称为多聚半乳糖醛酸的果胶酸中α-1，4-糖苷键的随机切割的酶，如酶类别多聚半乳糖醛酸裂合酶(EC4.2.2.2)(PGL)，也称为聚(1，4-α-D-半乳糖醛酸苷)裂合酶，也称为果胶酸裂合酶。还优选的是催化果胶酸中α-1，4-糖苷键的随机水解的果胶酶，如酶类别多聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.15)(PG)，也称为内切-PG。还优选的是果胶酶如聚甲基半乳糖醛酸裂合酶(EC 4.2.2.10)(PMGL)，也称为内切-PMGL，也称为聚(甲氧基半乳糖醛酸苷)裂合酶，也称为果胶裂合酶，其催化果胶中α-1，4-糖苷键的随机切割。其它优选的果胶酶是半乳聚糖酶(EC 3.2.1.89)、阿拉伯聚糖酶(EC 3.2.1.99)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)和甘露聚糖酶(EC 3.2.1.78)。

就本发明而言，包括果胶裂合酶、果胶酸裂合酶和果胶酯酶的上述酶的来源不重要，例如，所述酶可以获得自植物、动物或微生物如细菌或真菌，例如，丝状真菌或酵母。所述酶可以例如通过使用本领域已知的重组DNA技术从这些来源获得。所述酶可以是天然的或野生型酶，或显示相关的酶活性的它们的任何突变体、变体或片段，以及合成酶，如改组的酶(shuffledenzyme)，和共有酶(consensus enzyme)。能够如本领域通常所知，例如，通过定点诱变，通过PCR(使用含有期望突变的PCR片段作为PCR反应中的引物之一)，或通过随机诱变来制备这些遗传工程的酶。共有蛋白的制备在例如EP897985中描述。

果胶酶可以是由给定微生物产生的酶系统中存在的成分，如主要包含几种不同的果胶酶成分的酶系统，所述果胶酶成分包括以上确定的那些。

或者，果胶酶可以是单一成分的，即，基本上不含可存在于由给定微生物产生的酶系统中的其它果胶酶的成分，所述单一成分通常是重组成分，即，通过克隆编码该单一成分的DNA序列，随后用该DNA序列转化细胞并在宿主中表达来产生。这些有用的重组酶，特别是果胶酶、果胶裂合酶和多聚半乳糖醛酸酶在例如WO 93/020193、WO 02/092741、WO 03/095638和WO2004/092479(来自Novozymes A/S)中详细描述，将它们以包括序列表的完整形式通过引用并入本文。宿主优选是异源宿主，但是在某些情况下宿主也可以是同源宿主。

在优选的实施方式中，根据本发明使用的果胶酶源自曲霉属。

在更优选的实施方式中，果胶酶是具有JP 11682877的SEQ ID NO：1的氨基酸序列的原果胶酶；或是具有通过在所述氨基酸序列中缺失、取代或插入一个氨基酸或几个氨基酸而生成的氨基酸序列，并且与具有JP 11682877的SEQ ID NO：1的氨基酸序列的原果胶酶的活性水平相比具有相同水平或更高水平的活性的原果胶酶。

果胶酶，如特别是果胶酸裂合酶，可优选以范围在1-1,500APSU/kg织物，优选10-1,200APSU/kg织物，特别是100-1,000APSU/kg织物的浓度存在。

根据本发明，商业上可用的酸性果胶酸结合酶包括来自Novozymes A/S，Denmark的

BE XXL、

BE Colour、

Ultra；Pectinex^TM Ultra SP-L、

Yield Mash、

XXL、

SmashXXL、

Smash、Pectinex^TM AR。

蛋白酶

可以使用适用于酸溶液的任何蛋白酶。合适的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些。微生物来源是优选的。包括化学或遗传修饰的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶，优选酸性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。酸性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)，特别是源自芽孢杆菌属，优选迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)或克劳氏芽孢杆菌(Bacillus clausii)的那些，如枯草杆菌蛋白酶Novo，枯草杆菌蛋白酶Carlsberg，枯草杆菌蛋白酶309，枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(在WO 89/06279中描述)。

优选的商业上可用的蛋白酶包括以如下商品名出售的那些：ALCALASE^TM、SAVINASE^TM 16L Type Ex、PRIMASE^TM、DURAZYM^TM和ESPERASE^TM(Novozymes A/S，Denmark)，由Genencor International Inc.，(USA)以如下商品名出售的那些：OPTICLEAN^TM、OPTIMASE^TM、PROPARASE^TM、PURAFECT^TM、PURAPECT^TM MA和PURAPECT^TM OX、PURAFECT^TM OX-1和PURAFECT^TM OX-2。

在本发明的方法的实施方式中，蛋白酶可以以0.001-10KNPU/L，优选0.1-1KNPU/L，特别是约0.3KNPU/L或者0.001-10KNPU/kg织物，优选0.1-1KNPU/kg织物，特别是约0.3KNPU/kg织物的浓度存在。

脂肪酶

可以使用适用于酸溶液的任何脂肪酶。合适的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。有用的脂肪酶的实例包括代表性酸性脂肪酶，包括由Novo Industri A/S商业上可获得的Lipolase.TM.、Lipolase.TM.Ultra、Palatase.TM.A、Palatase.TM.M和Lipozyme.TM.。这些酸性脂肪酶是1，3-特异性脂肪酶，其水解三酰甘油1和3位的脂肪酸。另一种代表性的酸性脂肪酶是酵母脂肪酶BCC，其由Bio-Cat，Inc商业上可获得。这种酶源自柱状念珠菌(Candida cylindracea)的选择菌株(select strain)，是水解三酰甘油全部三个位置的脂肪酸的非特异性脂肪酶。

在本发明的方法的实施方式中，脂肪酶可以以0.01-100LU/L处理溶液，优选1-10LU/L处理溶液，特别是约1LU/L处理溶液或者0.01-100LU/kg织物，优选1-10LU/kg织物，特别是约1LU/kg织物的浓度存在。

纤维素酶

在本发明的上下文中，术语“纤维素酶”或“纤维素分解酶”指这样的酶，其催化纤维素降解为葡萄糖、纤维二糖、三糖(triose)和其它纤维寡糖。纤维素是葡萄糖通过β-1，4-糖苷键连接的聚合物。纤维素链形成众多的分子内和分子间氢键，这些氢键导致不溶性纤维素微原纤维的形成。纤维素成为葡萄糖的微生物水解涉及以下三种主要类型的纤维素酶：内-1，4-β-葡聚糖酶(EC3.2.1.4)，其随机切割整个纤维素分子中的β-1，4-糖苷键；纤维二糖水解酶(EC3.2.1.91)(外切葡聚糖酶)，其自非还原端消化纤维素；和β-葡糖苷酶(EC3.2.1.21)，其水解纤维二糖和低分子量纤维糊精以释放葡萄糖。大多数纤维素酶由通过接头分开的纤维素结合域(CBD)和催化域(CD)组成，所述接头富含脯氨酸和羟基氨基酸残基。在本说明书和权利要求书中，术语“内切葡聚糖酶”意欲表示具有纤维素分解活性特别是内-1，4-β-葡聚糖酶活性的酶，所述酶根据Enzyme Nomenclature(酶命名法)(1992)分类为EC 3.2.1.4，并且能够催化纤维素、地衣淀粉和谷类β-D-葡聚糖中1，4-β-D-糖苷键的(内)水解，包括也含有1，3-键的β-D-葡聚糖中1，4-键的(内)水解。可以使用适用于酸溶液的任何纤维素酶。合适的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学或遗传修饰的突变体。合适的纤维素酶在美国专利No.4,435,307中公开，其公开了从特异腐质霉(Humicola insolens)产生的真菌纤维素酶。特别合适的纤维素酶是具有颜色保护(colour care)益处的纤维素酶。这些纤维素酶的实例是欧洲专利申请No.0 495 257、WO 91/17243和WO 96/29397中描述的纤维素酶。

对由醋酸杆菌属(Acetobacter)细菌产生的多聚纤维素的水解有特异性的酸性纤维素酶可以源自里氏木霉(Trichoderma reesei)或黑曲霉的特定菌株，或天然或人工诱导的它们的突变体或变体。如在本文中使用，里氏木霉表示该名称所指的微生物，以及归类于长枝木霉(Trichoderma longibrachiatum)和绿色木霉(Trichoderma viride)名下的那些微生物。可以使用对由醋酸杆菌属细菌产生的纤维素的水解有特异性的任何纤维素酶或酶复合物。

代表性酸性纤维素酶是Cellulase Tr Concentrate(纤维素酶Tr浓缩物)多酶酸性纤维素酶复合物，其由Solvay Enzymes，Inc商业上可以获得。Cellulase TrConcentrate是食品级的纤维素酶复合物，其通过里氏木霉的选择菌株的受控发酵获得。这种酶复合物由直接攻击(attack)天然纤维素、天然纤维素衍生物和可溶性纤维素衍生物的内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶两者组成。这种酶复合物特异性水解细菌纤维素(特别是由醋酸杆菌属细菌产生的多聚细菌纤维素)以及它的寡聚物和衍生物的β-D，4-糖苷键(美国专利No.5,975,095)。

由Solvay Enzymes，Inc.商业上可获得的另一种代表性纤维素酶是Cellulase TRL(纤维素酶TRL)多酶液态纤维素酶复合物。Cellulase TRL纤维素酶复合物以与Cellulase Tr Concentrate酶复合物相同的方式由里氏木霉得到，但是以液体形式制备和出售。已经证明它针对细菌纤维素的活性与Cellulase Tr Concentrate酶复合物的等同。

用于本发明的其它合适的酶包括Celluzyme Acid P酶和Celluclast 1.5L，二者由Novo Nordisk商业上可获得；Multifect.TM.Cellulase 300酶，其由GenencorInternational商业上可获得；和Rapidase.RTM.Acid Cellulase酶，其由Gist-Brocades B.V.商业上可获得。还有其它纤维素酶或纤维素酶复合物适用于本发明，只要它们针对特征为多聚细菌纤维素的β-糖苷键显示特定的水解活性，所述多聚细菌纤维素由微生物如醋酸杆菌属细菌产生(美国专利No.5,975,095)。

在本发明的方法的实施方式中，纤维素酶可以以如下范围的浓度使用：0.001-10g酶蛋白/L处理溶液，优选0.005-5g酶蛋白/L处理溶液，特别是0.01-3g酶蛋白/L溶液，或者0.001-10g酶蛋白/kg织物，优选地0.005-5g酶蛋白/kg织物，特别是0.01-3g酶蛋白/kg织物。在实施方式中，以0.1-1,000ECU/g织物，优选0.5-200ECU/g织物，特别是1-500ECU/g织物的浓度使用纤维素酶。

角质酶

角质酶(cutinase)是能够降解角质的酶，参考，例如Lin T S & KolattukudyP E，J.Bacteriol.，1978，133(2)：942-951，Cutinases，例如，其与经典脂肪酶的不同之处在于在三丁酸甘油酯底物的临界胶束浓度(CMC)附近没有观察到可测量的活化。同样，认为角质酶属于丝氨酸酯酶类。角质酶也可以是WO96/13580中公开的源自特异腐质霉的角质酶。角质酶可以是变体，如WO00/34450和WO 01/92502中公开的那种或变体，将其通过引用并入本文。

角质酶的实例是源自以下菌种的那些：特异腐质霉(美国专利No.5,827,719)；镰孢属(Fusarium)菌株，例如，大刀粉红镰孢(F.roseum culmorum)，或者特别是豌豆腐皮镰孢(F.solani pisi)(WO 90/09446；WO 94/14964，WO94/03578)。角质酶也可以源自丝核菌属(Rhizoctonia)，例如立枯丝核菌(R.solani)的菌株，或链格孢属(Alternaria)，例如芸苔链格孢(A.brassicicola)的菌株(WO94/03578)，或它们的变体，如WO 00/34450或WO 01/92502中描述的那些。角质酶也可以是细菌来源的，如假单胞菌属(Pseudomonas)，优选WO 01/34899中公开的门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的菌株。

角质酶可以以0.001-25,000微克酶蛋白/g织物，优选0.01-10,000微克酶蛋白/g织物，特别是0.05-1,000微克酶蛋白/g织物的浓度添加。

木葡聚糖酶

木葡聚糖酶是能够催化木葡聚糖溶解成木葡聚糖寡糖的木葡聚糖特异性酶。根据IUBMB Enzyme Nomenclature(IUBMB酶命名法)(2003)将木葡聚糖酶归类为EC 3.2.1.151。Pauly等(Glycobiology，1999，9：93-100)公开来自棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的木葡聚糖特异性内-β-1，4-葡聚糖酶。根据本发明使用的木葡聚糖酶可源自微生物如真菌或细菌。有用的木葡聚糖酶的实例是家族12水解木葡聚糖的内切葡聚糖酶，特别是从例如棘孢曲霉获得的家族12水解木葡聚糖的内切葡聚糖酶，如WO 94/14953中所述。另一种有用的实例是由木霉属产生的木葡聚糖酶，特别是EGIII。木葡聚糖酶还可以源自芽孢杆菌属的细菌，包括地衣芽孢杆菌、Bacillus agaradharens或坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)。木葡聚糖酶还可以是具有木葡聚糖酶活性并且对于不溶性纤维素活性低且对于可溶性纤维素活性高的内切葡聚糖酶，例如，家族7内切葡聚糖酶，其从例如特异腐质霉获得。

木葡聚糖酶可以以0.001-25,000微克酶蛋白/克织物，优选0.01-10,000微克酶蛋白/g织物，更优选0.05-1,000微克酶蛋白/g织物，特别是0.5-500微克酶蛋白/克织物的浓度添加。

本发明的组合物

在第二个方面，本发明涉及适用于本发明的方法的组合物。所述组合物可以是固体或液体(含水的)组合物，并且可以是浓缩的组合物或即用型组合物(ready-to-use composition)。

因此，在此方面中本发明涉及包含酸性α-淀粉酶和酸性煮炼酶的组合物。

包含的酶可以优选地是上文“酶”部分中提到的那些。

在优选的实施方式中，酸性α-淀粉酶源自芽孢杆菌属菌种菌株，优选源自地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、芽孢杆菌属菌种NCIB12289、NCIB 12512、NCIB 12513或DSM 9375或DSMZ no.12649、KSMAP1378或KSM K36或KSM K38的菌株。

芽孢杆菌属α-淀粉酶可以是分别在位置D183和G184具有一个或几个缺失的变体，并且可以进一步在位置N195F具有取代(使用SEQ ID NO：4编号方式)。芽孢杆菌属α-淀粉酶变体还可以是在位置D183和G184具有一个或几个缺失的变体，并且还可以进一步具有以下取代中的一个或几个：R118K、N195F、R320K、R458K(使用SEQ ID NO：6编号方式)。

具体地，芽孢杆菌属变体可以在位置D183和G184具有双缺失，并且还包含以下取代：R118K+N195F+R320K+R458K(使用SEQ ID NO：6编号方式)。

酸性煮炼酶选自下组中的一种或多种：酸性果胶酶、纤维素酶、脂肪酶、蛋白酶、角质酶、木葡聚糖酶和它们的混合物。

在优选的实施方式中，酸性果胶酶是果胶酸裂合酶，优选源自芽孢杆菌属菌株，优选地衣芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、假嗜碱芽孢杆菌(Bacilluspseudoalcalophilus)和克氏芽孢杆菌(Bacillus clarkia)，特别是地衣芽孢杆菌菌种的菌株的果胶酸裂合酶。

可以将适合于所述待实施方法的其它剂分开添加或包含在本发明的组合物中。这些剂的实例包括稳定剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、多价螯合剂或乳化剂，以及它们的组合(mixture)。

尽管酸性α-淀粉酶和酸性煮炼酶可以照此添加，但是优选配制成合适的组合物。因此，所述酶可以以下述的形式使用：颗粒，优选无粉尘颗粒(non-dustinggranulate)，液体，特别是稳定化的液体，浆料，或以保护的形式(protected form)。可以例如如美国专利No.4,106,991和4,661,452(均授予Novozymes A/S)中公开的产生无粉尘颗粒，并且可以任选地通过本领域已知的方法涂覆。

液体酶制备物可以例如根据已确定的方法通过添加多元醇例如丙二醇、糖或糖醇或乙酸来稳定化。其它酶稳定剂是本领域已知的。保护的酶可以根据EP 238 216中公开的方法制备。

理论上，包含酸性α-淀粉酶和煮炼酶的本发明的组合物可以含有待用于本发明的组合方法的任何其它的剂。

在优选的实施方式中本发明的组合物包含选自下组的至少一种其它成分：稳定剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、多价螯合剂和乳化剂。全部这些适合于纺织品用途的其它成分是本领域熟知的。

合适的表面活性剂包括上文“洗涤剂”部分中提到的种种。湿润剂用来改进纤维的润湿性，由此可获得迅速和均匀的脱浆和煮炼。乳化剂用来将存在于纤维上的疏水杂质乳化。分散剂用来防止提取出的(extracted)杂质再沉积于织物上。多价螯合剂用来去除对所述方法具有负面影响的离子如Ca、Mg和Fe，优选的实例包括苛性钠(氢氧化钠)和苏打灰(碳酸钠)。

本发明的组合物的用途

在第三个方面，本发明涉及本发明的组合物在同时脱浆和煮炼方法，优选本发明的方法中的用途。在优选的实施方式中，将本发明的组合物用于本发明的方法中。

本文描述和要求保护的发明意欲不限于由在此公开的特定实施方式的范围，因为这些实施方式旨在说明本发明的几个方面。任何等同的实施方式应该包括在本发明的范围内。事实上，除了本文显示和描述的之外，根据前文所述对本发明的多种修饰对于本领域技术人员将是显而易见的。这些修饰也意欲落入所附权利要求的范围。在冲突的情况下，以包括定义的本公开为准。

本文引用了多种参考文献，将这些参考文献以它们的完整形式通过引用并入。

材料和方法

酶

-酸性淀粉酶A：SEQ ID NO：38中公开的源自黑曲霉的野生型酸性α-淀粉酶。

-酸性淀粉酶B：SEQ ID NO：48中显示的杂合α-淀粉酶，其包含来自微小根毛霉α-淀粉酶的催化域(CD)，具有来自黑曲霉的糖结合域(CBD)。

-酸性果胶酶A(Pectinex BEE XXL，Novozymes A/S)：由曲霉属菌种产生的溶果胶液体酶制备物。

-酸性果胶酶B(Pectinex Ultra；Novozymes A/S)：高活性的溶果胶酶制备物，其含有一定范围的半纤维素分解活性，由棘孢曲霉的选择菌株产生。

-酸性果胶酶C(Pectinex Yield Mash，Novozymes A/S)

-酸性果胶酶D(Pectinex XXL，Novozymes A/S)

-酸性果胶酶E(Pectinex Smash XXL，Novozymes A/S)。

在本说明书以及权利要求书中所提及的酶分类号(EC号)与Recommendations(1992)of the Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology，Academic Press Inc，1992中一致。

织物

-460U Interlock Knits(460U连锁编织物)(Testfabrics，Inc.)

-Vlisco织物(来自Vlisco Helmond B.V.)

缓冲剂

柠檬酸缓冲液

1)10mM柠檬酸缓冲液(pH3.0)

将1.954g的柠檬酸单水合物(Citric acid monohydrate)和0.206g二水合柠檬酸钠(Sodium Citrate dihydrate)溶于1L去离子水中。

2)10mM柠檬酸缓冲液(pH4.0)

将1.376g柠檬酸单水合物和1.015g二水合柠檬酸钠溶于1L去离子水中。

方法：

同源性的测定

就本发明而言，将同源性程度测定为如通过Clustal方法(Higgins，1989，CABIOS5：151-153)测定的两个氨基酸序列之间的同一性程度，所述方法使用MEGALIGN^TM软件(DNASTAR，Inc.，Madison，WI)及同一性表和以下多重比对参数：缺口罚分(gap penalty)为10，和缺口长度罚分(gap length penalty)为10。配对比对参数是K元组(Ktuple)＝1，缺口罚分＝3，窗口＝5和对角线＝5。

酸性α-淀粉酶活性(AFAU测定法)

当根据本发明使用时，任何酸性α-淀粉酶活性可以以AFAU(酸性真菌α-淀粉酶单位)为单位测量，其相对于酶标准品来测定。将1AFAU定义为在以下描述的标准条件下每小时降解5.260mg淀粉干物质的酶量。

酸性α-淀粉酶、内-α-淀粉酶(1，4-α-D-葡聚糖-葡聚糖-水解酶(1，4-α-D-glucan-glucano-hydrolase)，E.C.3.2.1.1)水解淀粉分子内部区域中的α-1，4-糖苷键以形成具有不同链长的寡糖和糊精。与碘形成的颜色强度与淀粉浓度成正比。使用反向比色法(reverse colorimetry)测定在特定分析条件下淀粉浓度的降低作为淀粉酶活性。

λ＝590nm

蓝色/紫色 t＝23秒脱色

标准条件/反应条件：

底物：可溶淀粉，约0.17g/L

缓冲液：柠檬酸盐(Citrate)，约0.03M

碘(I₂)： 0.03g/L

CaCl₂： 1.85mM

pH： 2.50±0.05

温育温度： 40℃

反应时间： 23秒

波长： 590nm

酶浓度： 0.025AFAU/mL

酶工作范围： 0.01-0.04AFAU/mL

更详细描述这种分析方法的文件夹EB-SM-0259.02/01可以根据向Novozymes A/S，Denmark要求而获得，通过引用将该文件夹包括在本文中。

α-淀粉酶活性(FAU)

可以使用(4，6-亚乙基(G7)-p-硝基苯基(G1)-α，D-麦芽七糖苷(4，6-ethylidene(G7)-p-nitrophenyl(G1)-α，D-maltoheptaoside)(亚乙基-G7PNP)作为底物测定淀粉分解活性。此方法基于亚乙基-G7PNP通过酶分解为葡萄糖和黄色的对硝基苯酚。对硝基苯酚的形成速率可以通过Konelab 30观察。这是对反应速率的表示，因此也是对酶活性的表示。

相对于酶标准品测定酶活性。将1FAU定义为在下述标准条件下每小时降解5.260mg淀粉干物质的酶量。

更详细描述这种分析方法的文件夹EB-SM-0216.02-D可以根据向Novozymes A/S，Denmark要求而获得，通过引用将该文件夹包括在本文中。

果胶反式消除酶活性(UPTE)的测定

可以通过在如下给出的条件下降解Obipectin溶液相对于酶标准品来测定酸性果胶酶活性。

反应：

底物浓度： 0.5％Obipectin

温度： 30℃

pH ： 5.4

反应时间： 10分钟

吸光度： 238nm

将1果胶反式消除酶单位(UPTE)定义为在标准条件下每分钟使吸光度上升0.01吸光度单位的酶量。

更详细描述这种分析方法的文件夹EB-SM-0368.02/01可以根据向Novozymes A/S，Denmark要求而获得，通过引用将该文件夹包括在本文中。

多聚半乳糖醛酸酶活性(PGU)的测定

可以通过在如下给出的条件下降解多聚半乳糖醛酸相对于酶标准品来测定酸性果胶酶的活性：

在多聚半乳糖醛酸降解时，粘度将降低，其与未知样品中多聚半乳糖醛酸酶活性成比例。

更详细描述这种分析方法的文件夹EB-SM-0615.02可以根据向Novozymes A/S，Denmark要求而获得，通过引用将该文件夹包括在本文中。

脱浆(Tegewa方法)

通过将碘染色的织物样块(fabric swatch)与标度1-9的标准照片组进行比较来目测确定淀粉大小的残余物，其中1是深蓝，而9为没有颜色沾染。通过如下制备碘染色溶液：将10g KI溶解在10ml水中，添加0.635g I₂并将200mL乙醇添加至去离子水，制成总共1L溶液。切割织物样品，并浸入所述碘溶液中60秒，再于去离子水中清洗约5秒。在挤出样品中多余的水之后，由至少两位专业人员来为织物样品评级。给出平均数。方法和标准标度(scale)可从Verband TEGEWA，Karlstrasse 21，Frankfurt a.M.，Germany获得。

果胶去除

定量测定织物上的果胶残余物。原理是钌红与多聚阴离子化合物如未甲基化的果胶结合。织物上果胶的水平与棉织物上钌红的浓度成比例，其与Kulbelka-Munk函数成线性比例(which is linearly proportional toKulbelka-Munk function)(即，K/S)。在540nm(Macbeth比色计，Model #CE-7000)测量钌红染色的织物的颜色反射(R)，并且如下自动计算成K/S值：

K/S＝(1-R)²/2R)。

使用以下公式计算果胶去除％：

％-果胶去除＝1-％残余果胶＝1-100*(K/S-K/S₀)/(K/S₁₀₀-K/S₀)

其中K/S₁₀₀来自具有100％果胶的织物，通常是原始未处理的织物，而K/S₀来自具有0％残余果胶的织物，通常是剧烈(heavily)煮炼并漂白的织物。基于来自John H.Luft并在文章“Ruthenium red and Violet I.Chemistry”1971中描述的信息，如下制备染色溶液：将0.2g/l钌红、1.0g/l氯化铵、2.5ml/l28％氢氧化铵溶液、1.0g/l Silwet L-77和1.0g/l Tergitol 15-S-12溶解在蒸馏水中以制备总共1升的溶液。每日在使用之前制备所述溶液。在染色过程中，将100mL染料溶液用于1克织物。将织物样块在钌红溶液中在室温温育15分钟。在滤器(strainer)中清洗所述样品，其后在蒸馏水(100ml/l克织物)中在60℃清洗10分钟。干燥后测量颜色反射。

织物润湿性

根据AATCC试验方法79-1995使用点滴试验(drop test)方法测量织物润湿性。使一滴水从固定高度(1cm)落到测试样本的整洁表面(taut surface)。测量水滴的镜面反射消失所需的时间，并记录为湿润时间。

毛细作用试验

纺织品的毛细升高值(wicking height)是吸收性的指标之一。切割矩形织物样块25cm(经纱和纬纱方向) X 4cm。如果样品不可以这样的大小进行试验，则调整方法以适应样品。使用防水/防染料笔(waterproof/dye-proof pen)横穿样品上部在距样块顶部1.5cm和距样品底部3cm处画线。在距样块底部19cm处画一条穿过样品的线。将有重量的纸夹附接在织物底部。将样块的顶部置于温度计夹(thermometer clamp)中央，从而使线在夹子的底部。将1g/L染料溶液(例如，活性蓝)注入烧杯至大约半满(在玻璃杯底之上至少5cm)。调节夹子和布块直至染料溶液液面与织物底部的线平齐。样块一旦就位即启动计时器。测量染料溶液在30分钟之后从染料溶液液面毛细上升的高度。取出样块并使其在平面上风干。

实施例

实施例1

用酸性果胶酶A煮炼棉织物

100％ 460U棉织物购自Test Fabrics。将织物样块切割成每块约2g。

为这项研究制备了两种缓冲液。通过将1.954g柠檬酸单水合物和0.206g二水合柠檬酸钠溶于1升去离子水来制备缓冲液pH3。通过将1.376g柠檬酸单水合物和1.015g二水合柠檬酸钠溶于1升去离子水来制备缓冲液pH4。用Lab-O-Mat进行煮炼。将40ml缓冲液和两片预先切割的织物装入烧杯。

1.预清洗：将湿润剂Leophan添加至缓冲液至浓度为0.25g/L。其后将温度提高至40℃来预清洗。10分钟之后，排干液体。

2.生物煮炼：向装有预清洗的织物的烧杯注入40ml缓冲液。按照说明向每个烧杯添加酸性果胶酶。同时，添加(dose)第二湿润剂Keirlon Jet B至浓度为1g/L。将温度提升至55℃并保持30分钟。

3.失活：在到达所需时间之后，在机器/烧杯中添加Dekol NS，其后将温度提升至95℃并运行15分钟，将温度降低至70℃，排干。

4.热清洗：注入水并在70℃温育10分钟。

5.冷清洗：注入冷水并清洗10分钟。

6.旋转甩掉(spin off)织物上的水并风干。

7.测量经处理织物的残余果胶和湿润时间。

试验结果示于表1。

实施例2

用酸性果胶酶B煮炼织物

如实施例1制备相同的织物样块和缓冲液。酸性果胶酶B与酸性果胶酶A相比具有不同的酶组成。果胶酶去除性能示于表1。两种酶在酸性pH均显示了良好的性能。

表1

pH	酶类型	酶剂量	果胶去除(％)(平均值)
pH	酶类型	酶剂量	果胶去除(％)(平均值)	4	无酶酸性果胶酶A酸性果胶酶A酸性果胶酶B酸性果胶酶B	09UPTE/g织物90UPTE/g织物13PGU/g织物130PGU/g织物	24.746.861.860.495.6
3	无酶酸性α-淀粉酶B	0130PGU/g织物	24.091.2	4	无酶酸性果胶酶A酸性果胶酶A酸性果胶酶B酸性果胶酶B	09UPTE/g织物90UPTE/g织物13PGU/g织物130PGU/g织物	24.746.861.860.495.6

(ml/kg)	0	0.5	5.00
(ml/kg)	0	0.5	5.00	，pH4	24.7％	46.8％	61.8％
Pectinex Yield Mash，pH4	24.7％	47.2％	79.8％	，pH4	24.7％	46.8％	61.8％
Pectinex Yield Mash，pH4	24.7％	47.2％	79.8％	Pectinex Ultra，pH4	24.7％	60.4％	95.6％
Pectinex XXL，pH4	24.7％	30.4％	69.5％	Pectinex Ultra，pH4	24.7％	60.4％	95.6％
Pectinex XXL，pH4	24.7％	30.4％	69.5％	Pectinex Smash XXL，pH4	24.7％	32.9％	88.9％
Pectinex BE XXL，pH3	24.0％		91.2％	Pectinex Smash XXL，pH4	24.7％	32.9％	88.9％

实施例3

使用酸性淀粉酶A和酸性果胶酶A的冷轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

Vilisco织物(100％棉)来自Vlisco并切割成5cm*15cm。遵循实施例1中所述方法制备缓冲液pH3和pH4。向烧杯添加100ml缓冲液，添加KeirlonJet B至浓度为2g/L。将酶添加至浸渍溶液(impregnation solution)中(剂量列于表2)并充分混合。用一对镊子固定2块来自相同织物的样块。将样块浸入浸渍浴30秒并将其用轧机(padder)(Mathis Inc，U.S.A.)浸轧。再重复一次浸渍和挤压以确保提出100％水分。将样块置于双层塑料袋中，压出空气并将袋子放置在室温。24小时之后，将样品从塑料袋中取出。将样品用镊子固定，并将它们在90℃水浴中浸渍30秒，再用轧机挤压。重复浸渍和挤压两次。在冷自来水(cold tap water)中清洗织物至少60秒，并用手挤掉水。其后风干织物并测量TEGEWA、残余果胶、湿润时间和毛细作用试验。试验结果示于表2。

实施例4

使用酸性淀粉酶A和酸性果胶酶A轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

使用与实施例3相同的织物和相同的缓冲体系。向每个烧杯中添加100ml浸渍溶液，并且将它们放置在Lab-o-Mat中，将该溶液加热至60℃。取出烧杯，根据表2向浸渍溶液添加酶并充分混合。用一对镊子固定2块来自相同织物的样块。将样块浸入浸渍浴30秒并将其用轧机浸轧。再重复一次浸渍和挤压以确保提出100％水分。将样块置于双层塑料袋中，压出空气并将袋子置于预设至60℃的水浴。2小时之后，将样品从塑料袋中取出。将样品用镊子固定，并将它们在90℃水浴中浸渍30秒，再用轧机挤压。重复浸渍和挤压两次。在冷自来水中清洗织物至少60秒，并用手挤掉水。其后风干织物并测量TEGEWA、残余果胶、湿润时间和毛细作用试验。试验结果示于表2。

表2

	淀粉酶A	果胶酶A	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)
	淀粉酶A	果胶酶A	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)	原始织物(raw fabric)	0	0	1	0	>60s	NA
冷轧染堆置(pH3)；25℃	50AFAU/L	36000UPTE/L	7	72.6％	5	9	原始织物(raw fabric)	0	0	1	0	>60s	NA
冷轧染堆置(pH3)；25℃	50AFAU/L	36000UPTE/L	7	72.6％	5	9	冷轧染堆置(pH4)；25℃			7	68.2％	6	9
轧染堆置(pH3)，60℃			9	73.3％	6	9	冷轧染堆置(pH4)；25℃			7	68.2％	6	9
轧染堆置(pH3)，60℃			9	73.3％	6	9	轧染堆置(pH4)，60℃			6.5	69.9％	4	9

实施例5

使用酸性淀粉酶A和酸性果胶酶B的冷轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

除了使用酸性果胶酶B之外，方法与实施例3中所述相同。试验结果示于表3。

实施例6

使用酸性淀粉酶A和酸性果胶酶B的轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

除了使用酸性果胶酶B之外，方法与实施例4中所述相同。试验结果示于表3。

表3

	淀粉酶A	果胶酶B	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)
	淀粉酶A	果胶酶B	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)	冷轧染堆置(pH3)，25℃	50AFAU/L	52000PGU/L	7	76.5％	5	10
冷轧染堆置(pH4)，25℃			8	75.4％	2	10	冷轧染堆置(pH3)，25℃	50AFAU/L	52000PGU/L	7	76.5％	5	10
冷轧染堆置(pH4)，25℃			8	75.4％	2	10	轧染堆置(pH3)，60℃			8	75.4％	5	11
轧染堆置(pH4)，60℃			6.5	72.6％	4	9.5	轧染堆置(pH3)，60℃			8	75.4％	5	11

实施例7

使用酸性淀粉酶B和酸性果胶酶A的冷轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

除了用酸性淀粉酶B取代酸性淀粉酶A之外，方法与实施例3中所述相同。测试结果示于表4。

实施例8

使用酸性淀粉酶B和酸性果胶酶A的轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

除了用酸性淀粉酶B取代酸性淀粉酶A之外，方法与实施例4中所述相同。测试结果示于表4。

表4

	淀粉酶B	果胶酶A	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)
	淀粉酶B	果胶酶A	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)	冷轧染堆置(pH3)，25℃	50FAU/L	36000UPTE/L	9	69.9％	6	9.5
冷轧染堆置(pH4)，25℃			9	58.1％	5	8.5	冷轧染堆置(pH3)，25℃	50FAU/L	36000UPTE/L	9	69.9％	6	9.5
冷轧染堆置(pH4)，25℃			9	58.1％	5	8.5	轧染堆置(pH3)，60℃			8.5	71.1％	10	10
轧染堆置(pH4)，60℃			9	62.1％	5	10	轧染堆置(pH3)，60℃			8.5	71.1％	10	10

实施例9

使用酸性淀粉酶B和酸性果胶酶B的冷轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

除了用酸性淀粉酶B取代酸性淀粉酶A并用酸性果胶酶B取代酸性果胶酶A之外，方法与实施例3中所述相同。试验结果示于表5。

实施例10

使用酸性淀粉酶B和酸性果胶酶B的轧染堆置同时脱浆和生物煮炼

除了用酸性淀粉酶B取代酸性淀粉酶A并用酸性果胶酶B取代酸性果胶酶A之外，方法与实施例4中所述相同。试验结果示于表5。

表5

	淀粉酶B	果胶酶B	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)
	淀粉酶B	果胶酶B	脱浆(TEGEWA)	果胶去除	湿润时间(秒)	毛细作用(cm)	冷轧染堆置(pH3)，25℃	50FAU/L	52000PGU/L	8	74.5％	13	9.5
冷轧染堆置(pH4)，25℃			8.5	65.7％	2	10	冷轧染堆置(pH3)，25℃	50FAU/L	52000PGU/L	8	74.5％	13	9.5
冷轧染堆置(pH4)，25℃			8.5	65.7％	2	10	轧染堆置(pH3)，60℃			9	75.2％	4	9.5
轧染堆置(pH4)，60℃			7.25	69.4％	9	9	轧染堆置(pH3)，60℃			9	75.2％	4	9.5

实施例11

用野生型酸性α-淀粉酶A将棉织物脱浆

100％棉织物(270g/m²)来自

Kungsfors AB，Sweden。它在2003年以Cupper 3/1结构制成。所述织物含有28线/cm经纱和14线/cm纬纱。经纱具有Ne 11，而纬纱具有Ne 8。两种纱线均为开放式末端。经纱的干浆料提取量(drysize pick up)为8％。浆料主要包含Kollotex 5、Solvitose XO和含有乳化剂的牛脂蜡(beef tallow wax)。Kollotex 5是低粘度马铃薯淀粉酯。SolvitoseXO是高粘度淀粉酯，具有约0.07的DS。将织物样块切割成每块约25g。

通过如下制备缓冲液pH3：将11.53g85％磷酸溶于4.5升纯水中，用5NNaOH滴定至pH2.95，再加水至5升。在缓冲液中添加2g/l非离子表面活性剂(湿润剂)之后，测量在25℃的缓冲pH为3.05。如表6所列添加酶剂量。

脱浆处理在Lab-o-mat(Werner Mathis)中进行。在每个烧杯中添加250mL缓冲溶液。添加给定量的α-淀粉酶。在每个烧杯中放置一件织物样块(25g)。将烧杯封闭并放置在Lab-o-mat中。通过Lab-o-mat内配备的红外加热系统以每分钟5℃将烧杯加热至50℃。在50℃以30rpm旋转烧杯45分钟。在酶处理之后，相继在相同的烧杯中分别在95、75和40℃用水洗涤织物样块。

在空气中干燥过夜后，用碘溶液染色织物样块。将染色的织物样品在视觉上与标度1-9的TEGEWA标准照片比较，其中1是深色，而9没有颜色沾染。因此较高的数值表示较好的淀粉去除。视觉评估由至少三位专业人士完成，并且为每个织物样品给出平均TEGEWA值。结果示于表6。

还评估了织物上的金属离子残余物。首先将织物用Thomas-Wiley轧机(mill)通过1mm筛切割。将织物碎块(fabric mash)4.00(+/-0.01)g与80mL1g/L EDTA溶液混合。将所述混合物在摇床(新Brunswick Scientific Co.Inc，Series25)中在70℃和200rpm温育15小时。冷却约30分钟之后，在20℃以2500rpm将混合物离心10分钟。收集上清用于以Perkinelmer原子吸收分光光度计进行金属含量分析。

表6

n/a＝未测(not measured)。

序列表

<110>诺维信北美公司(Novozymes North America，Inc.)

诺维信公司(NOVOZYMES A/S)

<120>脱浆和煮炼方法

<130>10939-WO

<160>48

<170>PatentIn version 3.4

<210>1

<211>396

<212>DNA

<213>川地曲霉(Aspergillus kawachii)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(396)

<223>川地曲霉CBD

<400>1

<210>2

<211>131

<212>PRT

<213>川地曲霉

<4D0>2

<210>3

<211>1533

<212>DNA

<213>黑曲霉(Aspergillus niger)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1533)

<223>黑曲霉酸性α-淀粉酶

<220>

<221>成熟肽

<222>(64)..(1533)

<400>3

<210>4

<211>511

<212>PRT

<213>黑曲霉

<400>4

<210>5

<211>102

<212>PRT

<213>黄热曲霉(Bacillus flavothermus)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(102)

<223>CBD

<400>5

<210>6

<211>99

<212>PRT

<213>曲霉属菌种(Bacillus sp.)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(99)

<223>CBD

<400>6

<210>7

<211>102

<212>PRT

<213>嗜碱曲霉(Alcaliphilic Bacillus)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(102)

<223>CBD

<400>7

<210>8

<211>112

<212>PRT

<213>Hormoconis resinae

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(112)

<223>CBD

<400>8

<210>9

<211>95

<212>PRT

<213>香菇(Lentinula edodes)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(95)

<223>CBD

<400>9

<210>10

<211>107

<212>PRT

<213>粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(107)

<223>CBD

<400>10

<210>11

<211>115

<212>PRT

<213>丝衣霉状踝节菌(Talaromyces byssochlamydioides)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(115)

<223>CBD

<400>11

<210>12

<211>115

<212>PRT

<213>Geosmithia cylindrospora：

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(115)

<223>CBD

<400>12

<210>13

<211>139

<212>PRT

<213>海绵胶壳炱(Scorias spongiosa)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(139)

<223>CBD

<400>13

<210>14

<211>126

<212>PRT

<213>路德正青霉(Eupenicillium ludwigii)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(126)

<223>CBD

<400>14

<210>15

<211>116

<212>PRT

<213>日本曲霉(Aspergillus japonicus)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(116)

<223>CBD

<400>15

<210>16

<211>133

<212>PRT

<213>米舒青霉(Penicillium cf.miczynskii)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(133)

<223>CBD

<400>16

<210>17

<211>116

<212>PRT

<213>Mzl青霉属菌种(Mzl Penicillium sp.)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(116)

<223>CBD

<400>17

<210>18

<211>114

<212>PRT

<213>Thysanophora sp

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(114)

<223>CBD

<400>18

<210>19

<211>111

<212>PRT

<213>灰色腐质霉thermoidea变体(Humicola grisea var.thermoidea)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(111)

<223>CBD

<400>19

<210>20

<211>108

<212>PRT

<213>黑曲霉

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(108)

<223>CBD

<400>20

<210>21

<211>97

<212>PRT

<213>罗耳阿太菌(Althea rolfsii)

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(97)

<223>CBD

<400>21

<210>22

<211>38

<212>PRT

<213>黑曲霉

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(38)

<223>接头

<400>22

<210>23

<211>31

<212>PRT

<213>川地曲霉

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(31)

<223>接头

<400>23

<210>24

<211>11

<212>PRT

<213>罗耳阿太菌

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(11)

<223>接头

<400>24

<210>25

<211>8

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>人工的

<220>

<221>结构域

<222>(1)..(8)

<223>接头

<400>25

<210>26

<211>498

<212>PRT

<213>米曲霉(Aspergillus oryzae)

<220>

<221>信号

<222>(1)..(20)

<220>

<221>成熟肽

<222>(20)..(498)

<400>26

<210>27

<211>1860

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>人工的

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1860)

<223>由黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域和川地曲霉α-淀粉酶接头-黑曲霉葡糖淀粉酶CBD

组成的杂合体

<400>27

<210>28

<211>619

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成构建体

<400>28

<210>29

<211>1827

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>人工的

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1827)

<223>含有黑曲霉酸性α-淀粉酶催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD

的杂合体

<400>29

<210>30

<211>608

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成构建体

<400>30

<210>31

<211>1863

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>人工的

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1863)

<223>由米曲霉催化域-川地曲霉α-淀粉酶接头-川地曲霉α-淀粉酶CBD组成的杂合体

<400>31

<210>32

<211>620

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成构建体

<400>32

<210>33

<211>1767

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>人工的

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1767)

<223>由黑曲霉酸性α-淀粉酶-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶CBD

组成的杂合体

<400>33

<210>34

<211>588

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成构建体

<400>34

<210>35

<211>1767

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>人工的

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1767)

<223>由米曲霉α-淀粉酶-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头-罗耳阿太菌葡糖淀粉酶接头

组成的杂合体

<400>35

<210>36

<211>588

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成构建体

<400>36

<210>37

<211>640

<212>PRT

<213>川地曲霉

<220>

<221>成熟肽

<222>(22)..(640)

<400>37

<210>38

<211>505

<212>PRT

<213>黑曲霉

<220>

<221>成熟肽

<222>(22)..(505)

<400>38

<210>39

<211>476

<212>PRT

<213>米曲霉

<220>

<221>成熟肽

<222>(1)..(476)

<400>39

<210>40

<211>1455

<212>DNA

<213>曲霉属菌种

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1455)

<223>AA560

<220>

<221>成熟肽

<222>(1)..()

<400>40

<210>41

<211>485

<212>PRT

<213>曲霉属菌种

<400>41

<210>42

<211>1350

<212>DNA

<213>微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1350)

<400>42

<210>43

<211>450

<212>PRT

<213>微小根毛霉

<400>43

<210>44

<211>558

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>杂合体

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(461)

<223>微小根毛霉α-淀粉酶

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(462)..(558)

<223>CBD

<400>44

<210>45

<211>1398

<212>DNA

<213>巨多孔菌(Meripilus giganteus)

<220>

<221>CDS

<222>(1)..(1398)

<400>45

<210>46

<211>466

<212>PRT

<213>巨多孔菌

<400>46

<210>47

<211>574

<212>PRT

<213>巨多孔菌

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(477)

<223>巨多孔菌α-淀粉酶

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(478)..(574)

<223>CBD

<400>47

<210>48

<211>583

<212>PRT

<213>微小根毛霉

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(438)

<223>微小根毛霉α-淀粉酶

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(482)..(583)

<223>SBD

<400>48

Claims

1.一种用于在织物制造过程中将含有淀粉或淀粉衍生物的上浆织物进行组合的脱浆和煮炼的方法，所述方法包括将所述上浆织物在pH1-7的处理水溶液中温育，所述处理水溶液包含酸性淀粉酶和至少一种酸性煮炼酶。

2.权利要求1的方法，其中所述处理水溶液的pH为1-5，优选1-4。

3.权利要求1或2的方法，其中所述煮炼酶是酸性纤维素酶、酸性果胶酶、酸性脂肪酶、酸性木聚糖酶和/或酸性蛋白酶或它们的混合物。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述酸性淀粉酶是细菌或真菌来源的，例如丝状真菌来源。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中所述酸性淀粉酶源自曲霉属的菌株，优选黑曲霉、泡盛曲霉、米曲霉或川地曲霉的菌株，或根毛霉属的菌株，优选微小根毛霉的菌株，或多孔菌属的菌株，优选巨多孔菌的菌株。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述曲霉属酸性淀粉酶是SEQ IDNO：38中公开的酸性黑曲霉α-淀粉酶，或它的变体。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述根毛霉酸性淀粉酶是SEQ IDNO：48中公开的微小根毛霉α-淀粉酶，或它的变体。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述酸性淀粉酶，优选酸性真菌α-淀粉酶，以1-3,000AFAU/kg织物，优选10-1,000AFAU/kg织物，特别是100-500AFAU/kg织物或1-3,000AFAU/L处理溶液，优选地10-1,000AFAU/L处理溶液，特别地100-500AFAU/L处理溶液的浓度存在。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述细菌酸性淀粉酶源自芽孢杆菌属的菌株，优选源自芽孢杆菌属菌种的菌株，更优选源自地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或芽孢杆菌属菌种，例如芽孢杆菌属菌种NCIB12289、NCIB12512、NCIB12513、DSM9375、DSMZ12648、DSMZ12649、KSM AP1378、KSM K36或KSM K38的菌株。

10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述α-淀粉酶是SEQ ID NO：48中所示的杂合α-淀粉酶，其包含来自微小根毛霉α-淀粉酶的催化域(CD)，具有来自黑曲霉的糖结合域(CBD)。

11.权利要求3的方法，其中所述酸性果胶酶是酸性果胶酸裂合酶、酸性果胶裂合酶和酸性多聚半乳糖醛酸酶和/或酸性多聚半乳糖醛酸裂合酶。

12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述酸性果胶酶是

BEXXL、

BE Colour、

Ultra；Pectinex^TM Ultra SP-L、

Yield Mash、 XXL、

Smash XXL、

Smash、Pectinex^TM AR或任何它们的混合物。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述酸性果胶酶源自曲霉属或芽孢杆菌属。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述酸性果胶酶在添加酸性淀粉酶之前、同时或之后添加。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述方法在5-90℃，特别是20-90℃的温度进行。

16.权利要求15的方法，其中所述方法在25-60℃的温度进行一段合适的时间，优选2-24小时。

17.权利要求1-16中任一项的方法，其中所述pH的范围是pH2-4。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述织物由天然或人造来源的纤维制造。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述织物是棉织物、粗斜纹棉布、亚麻织物、苎麻、粘胶纤维、溶解性纤维或乙酸纤维素。

20.权利要求1-19中任一项的方法，其中所述织物由动物来源的纤维，特别是丝或毛料制造。

21.权利要求1-20中任一项的方法，其中所述织物由人造或天然来源的聚酯纤维，例如聚(对苯二甲酸乙二醇酯)或聚(乳酸)制造。

22.权利要求1-21中任一项的方法，其中所述织物由尼龙、丙烯酸纤维或聚氨酯纤维制造。

23.权利要求1-22中任一项的方法，其中所述织物是含有聚酯的织物或由基本上100％的聚酯组成的衣物。

24.权利要求1-23中任一项的方法，其中所述聚酯织物是聚酯混纺物，如聚酯和纤维素混纺物，包括聚酯和棉混纺物；聚酯和毛料混纺物；聚酯和丝混纺物；聚酯和丙烯酸纤维混纺物；聚酯和尼龙混纺物；聚酯、尼龙和聚氨酯混纺物；聚酯和聚氨酯混纺物，人造纤维(粘胶纤维)、乙酸纤维素和天丝混纺物。

25.一种组合物，其包含酸性淀粉酶和酸性煮炼酶。

26.权利要求25的组合物，其中所述细菌酸性淀粉酶源自芽孢杆菌属的菌株，优选源自芽孢杆菌属菌种的菌株，更优选地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或芽孢杆菌属菌种例如芽孢杆菌属菌种NCIB12289、NCIB12512、NCIB12513、DSM9375、DSM[Z12648、DSM[Z12649、KSM AP1378、KSM K36或KSM K38的菌株。

27.权利要求25或26的组合物，其中所述酸性淀粉酶源自黑曲霉或微小根毛霉，或它们的混合物。

28.权利要求25或26的组合物，其中所述酸性煮炼酶选自下组中的一种或多种：酸性纤维素酶、酸性果胶酶、酸性脂肪酶、酸性木聚糖酶和/或酸性蛋白酶，和它们的混合物。

29.权利要求25-28中任一项的组合物，其中所述酸性果胶酶源自曲霉属或芽孢杆菌属的菌株。

30.权利要求25-29中任一项的组合物，其中所述酸性果胶酶是

BE XXL、

BE Colour、

Ultra；Pectinex^TM Ultra SP-L、

Yield Mash、

XXL、 Smash XXL、

Smash和/或Pectinex^TM AR。

31.权利要求25-30中任一项的组合物，其中所述组合物还包含稳定剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、多价螯合剂或乳化剂，或它们的组合。

32.权利要求25-31中任一项的组合物用于同时脱浆和煮炼的用途。