CN101461882A - 一种瓜蒌皮和薤白的提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种瓜蒌皮和薤白的提取物及其制备方法,该组合物将瓜蒌皮和薤白按2∶1~1∶1的重量比例混合后,加水或浓度小于50%的C1-3醇提取,提取液经过离子交换树脂提取和大孔吸附树脂提取,取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分50-90重量份,瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分10-50重量份混合即得。本发明提取物应用于制备治疗心血管系统疾病的药物,疗效确切,达到了减少服用量而不降低药效的目的,具有良好的应用前景。

Description

一种瓜蒌皮和薤白的提取物及其制备方法
技术领域
本发明属于中药制药领域,具体涉及一种用于治疗心血管系统疾病的瓜萎皮和薤白的提取物及其制备方法。
背景技术
冠心病属中医的“胸痹”、“心悸”等范畴,中医辨证为气滞血瘀,胸阳不振,痰浊内生,使心脉痹阻而致病。“瓜蒌薤白(白酒)汤”是东汉名医张仲景《金匮要略》中胸痹心痛短气篇的首方,由瓜蒌一枚,薤白半升,白酒七升(适量)组成,主治“胸痹病,临床表现为胸背痛、喘息咳唾、短气、脉沉弦等症状,即现在的冠心病心绞痛。历经几千年临床实践的考验,“瓜蒌薤白(白酒)汤”成为中医宣痹通阳法治疗胸痹的经典方,临床上治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞等疾病取得了良好的疗效。本方由瓜蒌、薤白两味中药组成,其中主药瓜蒌(栝楼)是中医治疗胸痹之要药,性寒、味甘,具有清热涤痰、宽胸散结之功效,主要用于痰热咳嗽,胸痹心痛。辅药薤白味辛、苦,性温,无毒,具有宽胸、通阳、散结、理气止痛之功效,中医长期用于治疗胸闷刺痛、泻痢后重、肺气喘急等疾病。瓜蒌薤白两药合用,一除痰结,一通气机,相辅相成,为治疗胸痹之要药。
瓜蒌皮PERICARPIUM TRICHOSANTHIS为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowiiMaxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms的干燥成熟果皮。秋季采摘成熟果实,剖开,除去果瓤及种子,阴干。瓜蒌皮性甘,寒,归肺、胃经。具有清化热痰,利气宽胸之功效,用于痰热咳嗽,胸闷胁痛。现代研究表明瓜蒌皮主要含挥发油、有机酸、生物碱、皂苷、黄酮、多糖以及精氨酸、赖氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甘氨酸等17种氨基酸成分。具有扩张冠状动脉、增加冠脉流量、保护缺血心肌、抗心率失常、提高耐缺氧能力、抑制血小扳聚集等多种作用。薤白BULBUS ALLII MACROSTEMONIS为百合科葱属植物小根蒜Album macrostemon Bunge和薤Album clzinese G.Don的干燥鳞茎,为常用中药。薤白性温,味辛、苦,归肺、胃、大肠经。无毒,具有理气、宽胸、通阳、散结之功效,中医长期用于治疗胸闷刺痛、泻痢后重、肺气喘急等疾病。薤白含有挥发油、氨基酸、皂苷、含氮化合物等成分,具有抗菌消炎、解痉平喘、抗血小板聚集和耐缺氧、镇痛、抗氧化作用、降低血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等多种药理作用。
中药复方是是中医辨证论治的集中体现和中医治法治则在组方用药上的具体应用,其君臣佐使等配伍的独特规律及效用的优越性已为数千年的临床实践所证明。复方不等于复方中各个单味药的简单混合,药理作用也不等于各药材作用的简单叠加。在复方中药物成分之间会发生增溶,助溶,减毒,增效,产生新的化学成分等各种不同情况,导致复方的药效与单味药间有很大差异,甚至产生新的药理作用。中药复方的开发利用也应在注重传统和科学的基础上进行。
我们进行了瓜蒌薤白汤合煎与单独提取后混合的药理作用比较,药效学实验证明,合煎提取的作用优于单独药材提取物,以及药材提取物的混合物。传统的合煎确实有其科学性和合理性,并且从化学成分上看,瓜蒌薤白中的有效成分基本均为水溶性成分,以水混合煎煮可以将主要有效成分提取完全。
瓜蒌薤白汤具有良好的作用,在临床上也有大量的应用。但是瓜蒌薤白汤还没有作为药物开发,临床都是以水煎剂使用。传统中药使用有许多不便之处:(1)传统中药多数采取水煎煮,需要专用的煎药工具,操作麻烦,工艺不稳定,而且水溶液也不利于长期保存,一般都是临用临煎,严重制约了临床的使用。(2)传统中药服用量大,以常规水煎煮方法提取以后,即使做成制剂,也需要几克甚至几十克。病人服用的顺应性差。(3)传统中药对于药材的来源仅仅进行真伪鉴别,而对其质量没有明确的控制手段,难以保障药材质量的好坏,也影响了药物的疗效。
我们在对于瓜蒌、薤白化学成分性质充分了解的情况下,首先以水煎煮,再经现代树脂纯化技术,将有效成分浓缩,得到瓜蒌皮和薤白提取物的药物组合物。该药物组合物为固体,可以开发片剂、胶囊、颗粒剂、口服液等多种剂型,该工艺简单可操作性强,提取效率高,最终产品的服用量小,质量可控,药效作用明显优于原方水煎液。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种疗效确切、质量稳定可控、服用量小的瓜蒌皮和薤白的提取物。
本发明的另一目的是提供一种工艺稳定,重现性好的该提取物的制备方法。
本发明的另一目的是提供该提取物在制备治疗心血管系统疾病药物中的应用,特别是在制备治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血等心血管系统疾病药物中的应用。
本发明为达上述目的采用以下技术措施:
一种瓜蒌皮和薤白的提取物,其特征在于该提取物是按以下方法制备得到的:瓜蒌皮与薤白药材按2:1~1:1的重量比例混合,混合药材加水或浓度小于50%的C1-3醇提取后,所得药液再上离子交换树脂柱,将离子交换树脂提取液浓缩、干燥,粉碎后得到离子交换树脂提取组分;经离子交换树脂柱的流出液再上大孔树脂柱提取,将得到的大孔树脂提取液浓缩、干燥,粉碎得到大孔树脂提取组分;取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分50-90重量份,瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分10-50重量份混合即得。
本发明优选瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分60-80重量份,瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分20-40重量份混合。
上述提取物直接或加入药学上可接受的赋形剂制成临床可接受的散剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂或口服液等各种药物制剂,应用于治疗心血管系统疾病。
本发明瓜蒌皮和薤白的提取物的制备方法,其特征在于该方法按包括以下步骤:瓜蒌皮与薤白药材按2:1~1:1的重量比例混合,混合药材加水或浓度小于50%的C1-3醇提取后,所得药液再上离子交换树脂柱,将离子交换树脂提取液浓缩、干燥,粉碎后得到离子交换树脂提取组分;经离子交换树脂柱的流出液再上大孔树脂柱提取,将得到的大孔树脂提取液浓缩、干燥,粉碎得到大孔树脂提取组分;取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分按比例混合即得。
本发明瓜蒌皮和薤白的提取物的制备方法包括下列步骤:
a、瓜蒌皮和薤白药液的提取:将瓜蒌皮和薤白按比例混合,加水或C1-3醇提取,提取液过滤,滤液浓缩至无醇味,再加水稀释至每kg生药1000-4000ml药液;
b、瓜蒌皮和薤白提取液上离子交换树脂柱吸附及洗脱-1:所得药液上阳离子交换树脂柱,收集流出液-1待用,用去离子水洗涤至洗脱液接近无色,弃去洗脱液,然后用1-10%的NH4OH作洗脱剂,洗脱至无色,洗脱液回收,浓缩至1ml回收液相当于0.5-2g生药;冷却,浓缩液置于0-5℃冷藏24小时以上;
c、瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分的制备:所得浓缩液再过滤,浓缩,干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分;
d、瓜蒌皮和薤白流出液再上大孔树脂柱吸附及洗脱-2:将瓜蒌皮和薤白提取液经离子交换树脂所得流出液-1,再上大孔吸附树脂柱,弃去流出液-2,用去离子水洗涤至流洗脱液为淡黄色,弃去水洗脱液,然后用5-20%的C1-3醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡黄色,弃去洗脱液,再用50-80%的C1-3醇洗脱,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去C1-3醇,浓缩至1ml回收液相当于0.5-2g生药,冷却;
e、瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分的制备:将步骤d所得浓缩液过滤,浓缩,低温干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分;
f、按照上述的重量比例分别取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
本发明瓜蒌皮和薤白的提取物的制备方法具体包括下列步骤:
a、瓜蒌皮和薤白药液的提取:将瓜蒌皮和薤白按比例混合,加水或浓度小于50%的C1-3醇提取三次,体积倍数分别为药材质量的10倍、8倍、8倍,第一次提取3小时,第二次提取2小时,第三次提取2小时,合并三次提取液,过滤,滤浓缩至无醇味,再加水稀释至1ml药液相当于0.5-2g生药;
b、瓜蒌皮和薤白提取液上离子交换柱吸附及洗脱-1:所得药液以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速上阳离子交换树脂柱,收集流出液-1待用,用去离子水以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗涤至流出液接近无色,弃去洗脱液,然后用1-10%的NH4OH作洗脱剂,以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗脱至无色,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去NH3,浓缩至1ml浓缩液相当于0.5-2g生药,冷却,浓缩液置于0-5℃冷藏24小时以上;
c、瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分的制备:步骤b所得浓缩液再过滤,浓缩,低温干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分;
d、瓜蒌皮和薤白流出液再上大孔树脂柱吸附及洗脱-2:将瓜蒌皮和薤白提取液经离子交换树脂所得流出液-1以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速再上大孔吸附树脂柱,弃去洗脱液,用去离子水以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗涤至洗脱液为淡黄色,弃去洗脱液;然后用浓度为5-20%的C1-3醇作洗脱剂,以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗脱至洗脱液为淡黄色,弃去洗脱液;再用浓度为50-80%的C1-3醇,以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗脱至淡黄色,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去C1-3醇,浓缩至1ml浓缩液相当于0.5-2g生药,冷却;
e、瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分的制备:所得浓缩液过滤,浓缩,低温干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分;
f、按照上述的重量比例分别取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
上述百分含量均为重量百分含量。
上述的离子交换树脂可以为强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂(001×7型,别名732型)或D001型大孔强酸性苯乙烯阳离子交换树脂,Amberrlite IR-120 Dowex-50(美国),DiaonSK-1(日本);上述的大孔吸附树脂可以为D101,HPD-100(沧州宝恩化工有限公司),HPD-300(沧州宝恩化工有限公司)或AB-8(蚌埠市辽源新材料有限公司)大孔吸附树脂。
上述瓜蒌皮和薤白的提取物在制备治疗心血管系统疾病药物中应用,特别在制备治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血药物中应用。
本发明瓜蒌皮和薤白的提取物在制备治疗心血管系统疾病方面药物的应用时,该组合物的每日用量为50至400mg,优选每日100至200mg。
本发明的有益效果:本发明组合物与传统原方汤剂相比较服用量由原来的20g生药缩减为50至400mg,缩减为原来的1/50至1/400。按照本发明方法制备得到的瓜蒌皮和薤白的提取物为固体粉末,质量稳定,使用方便,可制备多种口服药物制剂。并且本发明方法工艺稳定,重现性好;药理实验证明该提取物对于大鼠垂体后叶素致急性心肌缺血具有保护作用,对于冠脉结扎所致犬心肌缺血具有保护作用。并且本发明提取物与同类治疗心血管系统疾病药品比较,疗效确切,安全无明显毒副作用,本发明提取物制备的药物组合物在治疗心血管系统疾病中有良好的应用前景。另外,本发明瓜蒌皮和薤白的提取物在药效上优于瓜蒌薤白汤原方以及瓜蒌、薤白单味药材提取物的混合物,且比单味药材提取步骤简化,达到了减少服用量而不降低药效的目的。
瓜蒌皮和薤白提取物的总氨基酸含量测定方法:分别取0.4mg/ml精氨酸对照品1ml,2mg/1ml瓜蒌皮和薤白提取物样品1ml,加入2%茚三酮溶液1ml,PH8.0磷酸盐缓冲液1ml,沸水浴中显色15min,流水冷却,加蒸馏水定容至25ml。以溶剂对照为空白,用紫外分光光度计在570nm处,测定对照品和样品的吸收值,计算含量。磷酸盐缓冲液的配制:95ml1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液+5ml1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液(PH=8.0)。2%茚三酮溶液的配制:水合茚三酮20.g,加水50ml,0.080g氯化亚锡搅拌溶解,于暗处静置过夜,过滤后,加水定容至100ml。(避光保存)。
瓜蒌皮和薤白提取物的总皂苷含量测定方法:分别取1mg/ml的薯蓣皂苷对照品溶液200μl,1mg/ml的瓜蒌皮和薤白提取物样品溶液200μl置于10ml具塞试管中,水浴蒸干,加入0.5%茴香醛-5%浓硫酸-乙醇溶液1ml,100℃水浴15min,取出,迅速置于冰水浴中冷却10min,加甲醇定容至5ml。以溶剂对照为空白,用紫外分光光度计在429nm处,测定对照品和样品的测定吸收值,计算含量。
具体实施方式
实施例1:
瓜蒌皮和薤白提取物的制备
将瓜蒌皮和薤白药材按1:1的比例混合,置于提取罐内,加水沸腾提取三次,每次加水体积分别为总药材质量的10倍、8倍、8倍,第一次提取3小时,第二次提取2小时,第三次提取2小时,合并三次提取液,以筛网过滤,滤液置于减压蒸馏锅中80℃减压浓缩至适量(每kg生药浓缩至2500ml药液),趁热加入90-95%的乙醇,边加边搅拌,加至含醇量为65%(按乙醇比重计),静置36小时,使其充分沉淀,滤取上清液,沉淀离心,合并上清液;将上清液减压回收乙醇,浓缩至1ml回收液相当于1g生药,过滤,滤液以每分钟相当于树脂体积的1-2%流速上732型阳离子交换树脂柱(树脂和药材的质量比为1:1),吸附有效成分,流出液收集备用,上柱结束;用去离子水适量洗涤至流出液接近无色,弃去洗脱液,然后用5%的NH4OH作洗脱剂洗脱至无色,收集有颜色的洗脱液,洗脱液减压回收除去NH3,浓缩至1ml回收液相当于2g生药,冷却,浓缩液置于4℃冷藏24小时以上。浓缩液过滤,滤液浓缩至干,置真空干燥箱中60℃减压干燥成块状,将干燥的块状物粉碎,得到瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分。
将瓜蒌皮和薤白提取液上离子交换树脂的流出液,以每分钟相当于树脂体积的1-2%流速上D101型大孔吸附树脂柱(树脂和药材的质量比为1:1),弃去流出液,上柱结束;用去离子水适量洗涤至流出液为淡黄色,弃去流出液;然后用5%的乙醇作洗脱剂洗脱至流出液为淡黄色,弃去流出液;再用50%的乙醇洗脱至流出液为淡黄色,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去乙醇,浓缩至1ml回收液相当于2g生药,冷却;浓缩液过滤,滤液浓缩至干,置真空干燥箱中60℃减压干燥成块状,将干燥的块状物粉碎,得到瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分;
取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分按照60:40的重量比例,配制瓜蒌皮和薤白的提取物,测定瓜蒌皮和薤白提取物的总氨基酸含量为55%,总皂苷含量为46%。
将上述提取物按常规工艺加糊精等常规药用辅料混匀制成颗粒剂。
实施例2:
瓜蒌皮和薤白提取物的制备
将瓜蒌皮和薤白药材按1.5:1比例混合,置于提取罐内,加20%乙醇加热回流提取三次,每次溶剂体积分别为药材质量的10倍、8倍、8倍。第一次加热提取3小时,第二次提取2小时,第三次提取2小时,合并三次提取液,以筛网过滤,滤液置于减压蒸馏锅中减压浓缩至适量(每kg生药浓缩至1500ml药液),趁热加入90-95%的乙醇,边加边搅拌,加至含醇量为75%(按乙醇比重计),静置48小时,使其充分沉淀,滤取上清液,沉淀离心,合并上清液;将上清液减压回收乙醇,浓缩至1ml回收液相当于0.5g生药,过滤,滤液以每分钟相当于树脂体积的1-2%流速上732型阳离子交换树脂柱(树脂和药材的质量比为1:1),吸附有效成分,流出液收集待用,上柱结束;用去离子水适量洗涤至流出液接近无色,弃去洗脱液,然后用10%的NH4OH作洗脱剂,洗脱至无色,收集有颜色的洗脱液,洗脱液减压回收除去NH3,浓缩至1ml回收液相当于1g生药,冷却,浓缩液置于0℃冷藏48小时;浓缩液过滤,滤液浓缩至干,置真空干燥箱中60℃减压干燥成块状,将干燥的块状物粉碎,得到瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分。
将瓜蒌皮和薤白提取液上离子交换树脂的流出液,以每分钟相当于树脂体积的1-2%流速上HPD-300型大孔吸附树脂柱(树脂和药材的质量比为1:1),弃去流出液,上柱结束。用去离子水适量洗涤至流出液为淡黄色,弃去流出液,然后用20%的乙醇作洗脱剂洗脱至流出液为淡黄色,弃去流出液。再用80%的乙醇洗脱至流出液为淡黄色,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去乙醇,浓缩至1ml回收液相当于1.5g生药,冷却;浓缩液过滤,滤液浓缩至干,置真空干燥箱中60℃减压干燥成块状,将干燥的块状物粉碎,得到瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分。
取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分按照80:20重量比例,配制瓜蒌皮和薤白的提取物,测定瓜蒌皮和薤白提取物的总氨基酸含量为61%,总皂苷含量为40%。
将上述提取物按照常规工艺加淀粉等药学常用辅料压制成片剂。
实施例3:
将瓜蒌皮和薤白药材按2:1的重量比例混合,置于提取罐内,加45%乙醇加热回流提取三次,瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分的制备其余制备方法同实施例1,取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分按照50:50重量比例,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
将上述提取物按照常规工艺加水溶解滤过再加入适量炼蜜制成口服液。
实施例4:
瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分的制备方法同实施例2,取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分按照90:10重量比例,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
将上述提取物按常规方法加淀粉混匀制成颗粒、再加适量硬脂酸镁按规格制成胶囊剂。
实施例5:
瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分的制备方法同实施例2,取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分按照70:30重量比例,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
将上述提取物按常规方法加淀粉混匀制成散剂。
实施例6:瓜蒌皮和薤白的提取物对麻醉犬冠脉结扎致心肌缺血的影响的研究
实验药物:本发明的瓜蒌皮和薤白的提取物(按照实施例1方法制备得到)以及瓜蒌皮提取物和薤白提取物的药物组合物(按申请号200810019026.5的实施例1方法制备得到)均由江苏吴中苏药医药开发有限公司提供)。实验中加蒸馏水按所需剂量配制。
实验动物  家犬48只,雌雄兼用,体重7.0~10.0kg。
实验分组  随机将家犬48只均分为八组。分别为①伪手术组;②模型对照组;③阳性对照复方丹参滴丸组,给予复方丹参滴丸14mg/kg;④组为瓜蒌皮薤白汤原方水煎液72mg/kg。⑤⑥⑦组为瓜蒌皮和薤白的提取物高、中、低剂量组剂量组,分别给与瓜蒌皮和薤白的提取物12、6、3mg/kg。⑧瓜蒌皮提取物和薤白提取物的药物组合物10mg/kg。伪手术组:给予等量生理盐水;模型对照组:给予等量生理盐水;其他各组给药时均将药物按所需剂量溶解于生理盐水(5ml/kg)中15min内由股静脉滴注至麻醉犬体内。
实验方法犬用3%戊巴比妥钠以1ml/kg剂量前肢静脉麻醉后,仰卧位固定在手术台上,剪去颈、胸、腹部和右后肢内侧的毛。用3%碘酊和75%乙醇消毒剪毛区。分离右侧股动脉、股静脉。插股动脉插管,并用充满25U/ml的肝素钠生理盐水的导管与压力换能器相连。由八导生理记录仪记录收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心率(HR)。股静脉插管用于给药;颈正中切口,分离颈外静脉,插管采集心房血。分离气管,接人工呼吸机(通气量5000ml/min)。人工呼吸机下,于左侧第四、五肋问开胸,暴露心脏,剪开心包膜,缝于胸壁,做成心包摇篮。在左冠状动脉前降支中上1/3处游离一小段,并穿0号线,以备结扎。正常对照组只穿线不结扎。选择梗死区附近位置12个标测点,并在远离梗死区选一对照点,均以龙胆紫标记;用手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测,经传感器、放大器,用八导生理记录仪记录心外膜电图(EECG),结扎同时给药。记录缺血前,给药后第5,15,30,60,120,180min的EECG、SBP、DBP和HR值。心外膜电图观察指标:统计各标测点EECG的sT段与结扎前抬高的差值Δ∑-sT以及sT段比结扎前升高2mv的ΔN-sT。
梗死范围(MIS)测定实验结束后,立即取出心脏,用生理盐水洗去血液,称取左心室重量,并把左心室横切成5片,置于37℃水浴,0.25%四氮唑蓝(NBT)溶液中染色15min,剪去各心肌片被染色的非梗死区,把未染色的梗死区心肌称重并除以左心室重得到梗死区占心室的百分比,即心肌梗死范围。
生化指标检测各组分别在冠状动脉结扎并给药前与给药后60、120、180min颈外静脉取血,血液标本以3000r/min速度离心10min分离出血浆,置于-20℃冷冻保存待测。按试剂盒说明书测血浆中的MDA含量和SOD活性。
统计学方法数据用x±s表示,采用t检验进行组间差异显著性检验,P<0.05认为有显著性差异。
实验结果见下表1-4。
各表数据表明:模型组与对照组比较差异显著(P<0.01)。与模型组相比,本发明的瓜蒌皮和薤白的提取物各剂量组均能显著地降低实验犬的Δ∑-sT水平;缩小心肌缺血范围,降低ΔN-sT值(P<0.001),作用可持续180min;显著减少心肌梗死范围(MIS);显著减少血浆中MDA含量,增加SOD含量。并且瓜蒌皮和薤白的提取物作用优于阳性对照药复方丹参滴丸,也显著优于瓜蒌皮提取物和薤白提取物的混合物。说明其具有良好的抗心肌缺血作用。
Figure A200910028024D00151
实施例7:瓜蒌皮和薤白的提取物对盐酸异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血损伤的保护作用
实验药物:本发明的瓜蒌皮和薤白的提取物(按照实施例1方法制备得到)以及瓜蒌皮提取物和薤白提取物的药物组合物(按申请号200810019026.5的实施例1方法制备得到)均由江苏吴中苏药医药开发有限公司提供)。实验中加蒸馏水按所需剂量配制。
实验动物:SD大白鼠80只,雌雄各半,体重227-287g。
实验分组:SD大白鼠按体重随机分为8组,每组10只,雌雄各半。分别为①空白组;②模型对照组;③阳性对照复方丹参滴丸组,给予复方丹参滴丸4.7mg/kg;④组为瓜蒌皮薤白汤原方水煎液24mg/kg。⑤⑥⑦组为瓜蒌皮和薤白的提取物高、中、低剂量组剂量组,分别给予瓜蒌皮和薤白的提取物4、2、1mg/kg。⑧组为瓜蒌皮提取物和薤白提取物的药物组合物5mg/kg。空白组、模型对照组:给予等量生理盐水;其他各组给药时均将药物按所需剂量溶解于生理盐水中,各组给药容积均为0.44ml/100g。
实验方法:除正常对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(ISO,10mg/kg),造成大鼠急性心肌缺血模型,采用BL-410生物机能实验系统记录注射ISO后第10、15、20、25和30min时的心电图。观察各组注射ISO后30min内每组出现sT段异常偏移的动物sT段偏移总数(mV,∑ST)及sT段偏移均值(II sT)。30min之后将动物麻醉,腹主动脉取血,按试剂盒方法测定血清LDH、CK水平与血浆SOD活性、MDA量。数据以x±s表示,组间采用t检验进行显著性分析,结果见表5、6。
表5 瓜蒌皮和薤白提取物对ISO致大鼠心肌缺血模型sT段的影响(x±s)
Figure A200910028024D00171
#P<0.05,##P<0.01vs对照组;*P<0.05,**P<0.01vs模型组
Figure A200910028024D00181

Claims (8)

1、一种瓜蒌皮和薤白的提取物,其特征在于该提取物是按以下方法制备得到的:
瓜蒌皮与薤白药材按2:1~1:1的重量比例混合,混合药材加水或浓度小于50%的C1-3醇提取后,所得药液再上离子交换树脂柱,将离子交换树脂提取液浓缩、干燥,粉碎后得到离子交换树脂提取组分;经离子交换树脂柱的流出液再上大孔树脂柱提取,将得到的大孔树脂提取液浓缩、干燥,粉碎得到大孔树脂提取组分;取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分50-90重量份,瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分10-50重量份混合即得。
2、根据权利要求1所述的一种瓜蒌皮和薤白的提取物,其特征在于取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分60-80重量份,瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分20-40重量份混合。
3、一种权利要求1或2所述的瓜蒌皮和薤白的提取物的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
瓜蒌皮与薤白药材按2:1~1:1的比例混合,混合药材加水或浓度小于50%的C1-3醇提取后,所得药液再上离子交换树脂柱,将离子交换树脂提取液浓缩、干燥,粉碎后得到离子交换树脂提取组分;经离子交换树脂柱的流出液再上大孔树脂柱提取,将得到的大孔树脂提取液浓缩、干燥,粉碎得到大孔树脂提取组分;取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分按比例混合即得。
4、根据权利要求3所述的瓜蒌皮和薤白的提取物的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤:
a、瓜蒌皮和薤白药液的提取:将瓜蒌皮和薤白按2:1~1:1重量比例混合加水或浓度小于50%的C1-3醇提取,提取液过滤,滤液浓缩至无醇味,再加水稀释至每kg生药1000-4000ml药液;
b、瓜蒌皮和薤白药液上离子交换树脂柱吸附及洗脱-1:所得药液直接上阳离子交换树脂柱,收集流出液-1待用,用去离子水洗涤至洗脱液接近无色,弃去水洗脱液,然后用1-10%的NH4OH作洗脱剂,洗脱至无色,洗脱液回收,浓缩至1ml回收液相当于0.5-2g生药;冷却,浓缩液置于0-5℃冷藏24小时以上;
c、瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分的制备:所得浓缩液再经过滤,浓缩,干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分;
d、瓜蒌皮和薤白流出液再上大孔树脂柱吸附及洗脱-2:将瓜蒌皮和薤白提取液经离子交换树脂所得流出液-1,再上大孔吸附树脂柱,弃去流出液-2,用去离子水洗涤至流洗脱液为淡黄色,弃去水洗脱液,然后用5-20%的C1-3醇作洗脱剂洗脱至洗脱液为淡黄色,弃去洗脱液,再用50-80%的C1-3醇洗脱,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去C1-3醇,浓缩至1ml回收液相当于0.5-2g生药,冷却;
e、瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分的制备:将步骤d所得浓缩液过滤,浓缩,低温干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分;
f、按重量比例分别取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
5、根据权利要求4所述的提取物的制备方法,其特征在于该方法具体包括下列步骤:
a、瓜蒌皮和薤白药液的提取:将瓜蒌皮和薤白按比例混合,加水或浓度小于50%的C1-3醇提取三次,体积倍数分别为药材质量的10倍、8倍、8倍,第一次提取3小时,第二次提取2小时,第三次提取2小时,合并三次提取液,过滤,滤浓缩至无醇味,再加水稀释至1ml药液相当于0.5-2g生药;
b、瓜蒌皮和薤白提取液上离子交换柱吸附及洗脱-1:所得药液以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速上阳离子交换树脂柱,收集流出液-1待用,用去离子水以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗涤至流出液接近无色,弃去洗脱液,然后用1-10%的NH4OH作洗脱剂,以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗脱至无色,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去NH3,浓缩至1ml浓缩液液相当于0.5-2g生药,冷却,浓缩液置于0-5℃冷藏24小时以上;
c、瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分的制备:步骤b所得浓缩液再过滤,浓缩,低温干燥成块状,将块状物粉碎得到瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分;
d、瓜蒌皮和薤白流出液再上大孔树脂柱吸附及洗脱-2:将瓜蒌皮和薤白提取液经离子交换树脂所得流出液-1以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速再上大孔吸附树脂柱,弃去洗脱液,用去离子水以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗涤至洗脱液为淡黄色,弃去洗脱液;然后用浓度为5-20%的C1-3醇作洗脱剂,以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗脱至洗脱液为淡黄色,弃去洗脱液;再用浓度为50-80%的C1-3醇,以每分钟相当于树脂体积的0.1-2%流速洗脱至淡黄色,收集洗脱液,洗脱液减压回收除去C1-3醇,浓缩至1ml浓缩液相当于0.5-2g生药,冷却;
e、瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分的制备:所得浓缩液过滤,浓缩,低温干燥,粉碎得到瓜蒌皮和薤白的大孔树脂提取组分;
f、按照上述的重量比例分别取瓜蒌皮和薤白的离子交换树脂提取组分和大孔树脂提取组分,配制瓜蒌皮和薤白的提取物。
6、根据权利要求4或5所述的提取物的制备方法,其特征在于所述的阳离子交换树脂为732型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂、D001型大孔强酸性苯乙烯阳离子交换树脂Amberrlite IR-120 Dowex-50或DiaonSK-1;所述的大孔吸附树脂为D101,HPD-100,HPD-300或AB-8型大孔吸附树脂。
7、权利要求1或2所述的瓜蒌皮和薤白的提取物在制备治疗心血管系统疾病药物中的应用。
8、根据权利要求7所述的应用,其特征在于该提取物在制备治疗冠心病、心绞痛、心肌缺血药物中的应用。
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