CN101389766A - 脂蛋白传感器 - Google Patents

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Abstract

根据本发明，提供了生物传感器，其包括含有生物化学分析物的底物、酶系统、低分子量乙二醇醚和检测工具。所述生物化学分析物是低密度脂蛋白。所述酶系统含有胆固醇酶，诸如胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶。

Description

脂蛋白传感器
本发明涉及乙二醇醚在传感器中的用途。具体地，本发明涉及乙二醇醚在生物传感器中的用途，该生物传感器在与胆固醇中的高密度脂蛋白具有最小相互作用的条件下，选择性地增溶胆固醇中的低密度脂蛋白(LDL)，由此可以检测LDL。
胆固醇在正常身体功能中扮演重要角色。它对细胞组织的发育、细胞膜的再生、激素起作用，并提供其它功能。然而，血液中高水平的胆固醇增加冠心病的风险，冠心病可以导致心脏病发作。另外，已知它与增大的中风风险相关。患有高水平血液胆固醇的患者被认为患有高胆固醇血症。
身体中存在两个主要的胆固醇来源。第一个主要来源是来自身体本身。另一个主要来源是来自食物，诸如肉类、家禽、鱼和乳制品。饱和脂肪高的食物促进身体增加胆固醇的产生。
通过特定载体，已知为脂蛋白，将胆固醇传递到和传递出细胞。这是因为它在血液中是不可溶的。存在两种主要类型的脂蛋白。它们是低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。已知LDL是“坏的”胆固醇载体形式；而已知HDL是“好的”胆固醇载体形式。LDL胆固醇倾向于在动脉内壁中堆积，导致能阻塞动脉的斑块沉积，从而引起增大的心脏病发作或中风风险。血液中理想的LDL胆固醇水平是约100mg/dl。较高的水平(高于160mg/dl)表示增大的心脏病风险。
认为HDL胆固醇保护身体以避免所述增加的心脏病风险。认为HDL将胆固醇运出动脉，并返回到肝。另外，HDL还可以从动脉中已经存在的斑块沉积中去除过量的胆固醇。
因此，已经尽力开发能够区别血液中LDL胆固醇和HDL胆固醇的量的传感器。
传统地，利用差速超速离心法确定低密度脂蛋白中胆固醇的量。然而，这需要特殊的设备，且会花费很长时间来获得所需的测量。
更近期，开发了更易于使用并提供更可靠结果的传感器。这样的传感器一般称为生物传感器。
生物传感器是将生物化学识别成分或传感要素与物理转换器组合的分析工具。它们在如个人健康监控、环境筛选和监控、生物过程监控以及在食品和饮料工业内的不同领域中具有广泛的应用。
生物传感要素可以是酶、抗体、DNA序列或甚至是微生物。生物化学成分用于选择性催化反应或促进结合作用。生物化学识别作用的选择性容许生物传感器在复杂样品基质，即体液中的操作。所述转换器将生物化学作用转化为可测量的信号，由此提供用于检测它的方法。可测量的作用涵盖从光谱的变化到生物化学络合作用时的质量变化，其中所述光谱的变化是由于酶反应产物/底物的产生或消耗。通常，转换器采用许多形式，且它们指示将要测量的物理化学参数。因此，转换器可以是基于光学的，测量如光学吸收、荧光或折射率的变化。它可以是基于质量的，测量与生物来源的结合反应相伴的质量变化。另外，它可以是基于热的(测量焓(热)的变化)或基于阻抗的(测量电性质的变化)，其伴随着分析物/生物-识别层相互作用，或是基于电化学的。
生物传感器提供分布式测量的方便性和简易性，即，使该检验实现关注或护理目的的潜能。适当设计和制造的生物传感器装置可以方便地大规模生产。然而，生物传感器的使用存在若干限制。这些限制包括转换器对于结垢和干扰的易损性。
基于酶的生物传感器广泛用于检测临床、环境、农业和生物技术应用中的分析物。在人体的流体的临床检验中可以测量的分析物包括，例如葡萄糖、乳酸、胆固醇、胆红素和氨基酸。这些分析物在生物流体，如血液中的水平对于疾病的诊断和监控是重要的。
将通常在基于酶的系统中使用的传感器提供为为了护理目的或非处方可出售的装置。它们可以用于测试新鲜未改性的全手指采血样品，从而在将样品加入到装置后的例如1-2分钟内(注意该时间是不固定的且可以进行显著的变化)，确定全部胆固醇、甘油三酸酯、HDL和LDL的浓度。临床上证明了这4种参数，结合起来，为成年人心脏病的风险提供非常好的适应证。众所周知，高胆固醇是无症状的。因此，建议每位成年人应该进行测试以评估其风险。如果发现其风险高，则通过单独地正确控制饮食，或与治疗药物相结合，可以显著减少所述风险。
在这样一种基于酶的生物传感器的一个实例中，利用电化学检验以检测所讨论的分析物。该用途是由介体氧化态的改变造成的，所述介体与酶相互作用，所述酶与待确定的分析物反应。选择介体的氧化态，以使该氧化态仅处于这样的状态，所述状态将在添加底物时与酶相互作用。分析物通过酶与介体反应。这引起该介体被氧化或被还原(根据酶反应)，并且可以通过确定电化学信号，例如在给定电压下产生的电流，测量介体水平中的这种改变。
可以使用常规微电极，典型地具有工作微电极和参比电极。工作电极通常由钯、铂、金或碳构成。对电极典型地是碳、Ag/AgCl、Ag/Ag2SO4、钯、金、铂、Cu/CuSO4、Hg/HgO、Hg/HgCl2、Hg/HgSO4或Zn/ZnSO4。
工作电极可以位于形成所述微电极的容器孔中。其中可以使用的微电极实例是WO03/097860中公开的那些，将其全部内容通过参考结合于此。
现有技术教导了许多检测样品如血液、血清或血浆中LDL胆固醇的方法。这些用于检测胆固醇浓度的现有技术方法中的许多是基于多种性质，如颜色变化的评估。
EP 1 434 054，WO 03/102596和JP 2004-354284公开了使用聚乙二醇醚的生物传感器。美国专利号6 762 062公开了用于确定低密度脂蛋白中的胆固醇的方法。该方法是基于测量样品中的胆固醇总水平和非LDL级分(HDL，VLDL和乳糜微粒)中的胆固醇水平为基础。然后可以通过简单地从一个量中减去另一个量而确定LDL胆固醇的量。美国专利号6342364和JP 2001-343348也公开了基于电化学电池的使用的LDL检测系统。
因此，拥有能够简单使用但产生一致可靠结果且不需要颜色的变化作为检测方法部分的检测系统将是有利的。
按照本发明的第一方面，提供了生物传感器，其包括含有生物化学分析物的底物、酶系统、低分子量乙二醇醚和检测工具。
典型地，所述底物是生物流体，如血液或血浆。从所述生物流体中确定的生物化学分析物可以是脂蛋白，通常是低密度脂蛋白。
所述酶系统可以包含胆固醇酶，如胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶。
所述低分子量乙二醇醚可以选自具有1-4个重复的直链或支链烷撑二醇基团的组，通常所述亚烷基是1，2-亚乙基、1，2-亚丙基及其异构体、亚丁基及其异构体、亚戊基(pentylene)及其异构体，或其组合。乙二醇醚可以被烷基，如C1-C5烷基取代。低分子量乙二醇醚可以选自2-甲氧基乙醇、三丙二醇甲基醚、二甘醇丙基醚、二甘醇丁基醚、二甘醇戊基醚、1-甲氧基-2-丙醇、双丙甘醇丁基醚、三丙二醇丁基醚、甘油乙氧基化物-共-丙氧基化物三元醇、新戊二醇乙氧基化物、丙氧基乙醇(propxyethanol)、三甘醇甲基醚、丙二醇丙基醚、1-叔-丁氧基-2-丙醇、双丙甘醇丙基醚、三丙二醇丙基醚或双丙甘醇叔-丁基醚。
生物传感器可以进一步包括水性缓冲溶液。该缓冲溶液典型地具有pH5-10。更优选地，pH范围可以是7-10。
可以增大生物传感器溶液的离子强度或盐强度，以便改善对低密度脂蛋白的选择性。离子强度可以通过添加盐而增大，所述盐选自由下列各项组成的组：氯化钾、硫酸镁、氯化六胺钌、氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化镧、硫酸钠或硫酸镁。
所述检测工具可以是以电化学电池的形式。
按照本发明的第二方面，提供用于测量样品中生物化学分析物的量的检测系统，其包括下列步骤：
a)提供低分子量乙二醇醚的溶液和酶混合物的混合物；
b)加入待测样品的溶液；
c)在产生可测量信号变化的条件下培育所得到的混合物；
d)测量所得到的变化；和
e)利用校准曲线在原始样品中确定分析物的量或确定HDL和LDL之间的差别。
所述分析物可以是低密度脂蛋白。
典型地，所述可测量的信号是电化学信号、比色信号、热信号、压电信号或光谱信号。
可以在使用前干燥生物分析物和试剂。可以冷冻干燥分析物和试剂。
按照本发明的第三方面，提供低分子量乙二醇醚用于增溶生物化学分析物的用途。
低分子量乙二醇醚可以选自具有1-4个重复的直链或支链烷撑二醇基团的组，通常所述亚烷基是1，2-亚乙基、1，2-亚丙基及其异构体、亚丁基及其异构体、亚戊基及其异构体，或其组合。乙二醇醚可以被烷基，如C1-C5烷基取代。低分子量乙二醇醚可以选自2-甲氧基乙醇、三丙二醇甲基醚、二甘醇丙基醚、二甘醇丁基醚、二甘醇戊基醚、1-甲氧基-2-丙醇、双丙甘醇丁基醚、三丙二醇丁基醚、甘油乙氧基化物-共-丙氧基化物三元醇、新戊二醇乙氧基化物、丙氧基乙醇、三甘醇甲基醚、丙二醇丙基醚、1-叔-丁氧基-2-丙醇、双丙甘醇丙基醚、三丙二醇丙基醚或双丙甘醇叔-丁基醚。
乙二醇醚可以用于增溶脂蛋白，如低密度脂蛋白胆固醇。
在本发明的第四方面中，溶液的离子强度帮助在HDL和LDL胆固醇之间获得的区别。已经发现液体的离子强度或盐浓度的改变影响这两种胆固醇的相对反应程度。因此，提供了盐用于增大含有低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和乙二醇醚的溶液的离子强度或盐浓度的用途，其中所述溶液离子强度的增大调节低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的相对溶解度。
典型地，所述盐增大离子强度或盐浓度的用途增大了低密度脂蛋白相对于高密度脂蛋白的溶解度。
可以通过添加的盐控制溶液的离子强度或盐浓度，并在实施例中将氯化钾、硫酸镁或氯化六胺钌用于改变溶液的离子强度或盐浓度。然而，可以使用其它盐，例如氯化钾、硫酸镁、氯化六胺钌、氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化镧、硫酸钠或硫酸镁。
当用于本文时，下列定义限定所述术语：
术语“二醇”指二羟基醇。术语“乙二醇醚”指二羟基醇或三羟基醇的一烷基醚。
术语“烷基”包括直链或支链的饱和脂肪族烃。烷基的实例包括甲基、乙基、正-丙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、叔-丁基等。除非另外说明，术语“烷基”包括烷基和环烷基基团。
“生物流体”是其中可以测量分析物的任何体液或体液衍生物，例如，血、尿、间质液、血浆、皮液、汗和泪。
“电化学传感器”是设置为经由电化学氧化或还原反应，检测在样品中的分析物的存在或测量其浓度或量的装置。
“氧化还原介体”是电子传递试剂，其用于在分析物或分析物还原的酶或分析物氧化的酶、辅因子或其他氧化还原活性种和电极之间，直接地或经由一种或多种另外的电子传递试剂运送电子。
除非另外指出，术语“参比电极”包括以下二者：a)参比电极和b)还可以作为对电极起作用的参比电极(即，对电极/参比电极)。
除非另外指出，术语“对电极”包括以下二者：a)对电极和b)还可以作为参比电极起作用的对电极(即，对-参比电极)。
术语“可测量的信号”意指可以容易地测量的信号，如电流、电压、荧光、吸收光谱、发光、光散射、NMR、IR、质谱、热交换或压电改变。
术语“生物化学分析物”包括任何可以在生物流体中存在的可测量的化学或生物化学物质，且还包括任何的酶、抗体、DNA序列或微生物。
可以按照本发明使用的已知生物传感器可以由例如具有4个试剂孔和1个共同参考的条带组成；其中每个孔具有其自身的微带工作电极，如管状微带电极。通过干燥不同的，具体而言是配制的试剂而提供所述条带的传感组分，所述试剂包括至少一种酶和在每个孔中与试样中的特定分析物相互作用的介体。由于，潜在地，可以向每个孔添加和干燥不同的试剂，所以显然可以利用单一试样完成多分析物的测试。孔的数量是可变的，因而特定测试的数量也是可变的，例如可以使用利用1-6孔的传感器。
可以使用常规微电极，典型地具有工作微电极和参比电极。工作电极通常由钯、铂、金或碳构成。对电极典型地是碳、Ag/AgCl、Ag/Ag2SO4、钯、金、铂、Cu/CuSO4、Hg/HgO、Hg/HgCl2、Hg/HgSO4或Zn/ZnSO4。
在优选的微电极中，工作电极位于形成所述微电极的容器中。可以按照本发明使用的微电极实例是WO2003097860中公开的那些。
现仅参考下列附图，通过实施例描述本发明的实施方案，其中：
图1和2图解说明了当使用二甘醇一戊基醚时优先于HDL而选择性增溶LDL所获得的结果(实施例1)。
图3和4图解说明了当使用二甘醇一丁基醚时优先于HDL而选择性增溶LDL所获得的结果(实施例1)。
图5显示来自实施例2的结果。(其中E2C4是二甘醇丁基醚)。每个时间点的梯度用于计算由LDL和HDL的测量所获得的％差别。
图6显示来自实施例3的结果。每个时间点的梯度用于计算由LDL和HDL的测量所获得的％差别。
图7显示来自实施例4的结果。每个时间点的梯度用于计算由LDL和HDL测量所获得的％差别。
图8显示来自实施例5的结果。在第一时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。
图9显示来自实施例6的结果。每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。
图10显示来自实施例7的结果。每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。
图11a-d显示来自实施例8的第一个时间点0秒的结果。每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL之间所获得的％差别。
图12显示利用E2C4，血浆LDL(实心圆圈)和HDL(空心圆圈)的差别(实施例9)。
图13显示利用P2C4，血浆LDL(实心圆圈)和HDL(空心圆圈)的差别(实施例9)。
图14显示用于计算LDL和HDL的测量之间％差别的每个时间点的梯度(实施例10)。
实施例1
LDL缓冲液#1(Tris缓冲液-5％甘氨酸pH9.0)
将Trizma Pre-Set Crystals，pH9.0(Sigma(西格玛)，T-1444)溶解在950ml dH2O(dH2O＝去离子水)中，并记录pH。随后，将50g甘氨酸(Sigma(西格玛)，G-7403)加入到该tris缓冲液中，并记录pH。利用10M氢氧化钾(Sigma(西格玛)，P-5958)将pH调节到8.8-9.2之内，并且用dH2O将该溶液制备为1000ml，并记录最终的pH(pH9.1)。将该溶液保存在4℃。
乙二醇醚溶液
利用LDL缓冲液#1制备两倍强度的乙二醇醚溶液。
二甘醇一戊基醚(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)，32285)
大约2.5％(0.0218g在872μl LDL缓冲液#1中)
二甘醇一丁基醚(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)，537640)
大约10％(0.0640g在640μl LDL缓冲液#1中)
Scipac LDL和HDL样品
利用脱脂质的血清(Scipac，S 139)，将LDL(Scipac，P232-8)和HDL(Scipac，P233-8)样品制成10倍所需浓度(由于在最终测试混合物中的1：10的稀释)。然后利用空间临床分析仪(Space clinical analyzer)(Schiappanelli Biosystems Inc)分析该样品。
酶混合物
利用LDL缓冲液#1将酶混合物制成2倍强度
160mM氯化六胺钌(III)(阿法埃莎(Alfa Aesar)，10511)
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(东方酵母公司(Oriental YeastCo))
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶(生物催化剂(Biocatalysts))
6.7mg/ml胆固醇酯酶(Sorachim/Toyobo，COE-311)
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶(安满能(Amano)，CHDH-6)
测试方案
将9μl两倍强度的1，2-乙二醇溶液与9μl酶混合物相混合。在T＝-30秒时，将2μl样品(10倍浓缩的LDL或HDL，或脱脂质血清)与所得到的乙二醇醚：酶混合物混合，将9μl所得到的溶液置于电极上。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在5个时间点(10，32，63，90和110秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份进行试验。
分析
连同由空间分析仪获得的LDL、HDL和脱脂质血清浓度一起分析这些数据。将每个时间点的HDL和LDL响应的梯度用于计算由LDL和HDL的测量所获得的％差别。
图1和2图解说明了当使用二甘醇一戊基醚时所获得的优于HDL的选择性增溶LDL的结果。
图3和4图解说明了当使用二甘醇一丁基醚时所获得的优于HDL的选择性增溶LDL的结果。
结论
二甘醇一丁基醚(5％)显示出对LDL>35％的优先差别。二甘醇一戊基醚(1.25％)也显示出对LDL的优先差别，但是达到>20％的较小程度。
实施例2：健赞(Genzyme)胆固醇酯酶对比健赞(Genzyme)脂肪酶溶液
RuAcAc＝[RuIII(acac)2(py-3-COOH)(py-3-COO)]
30mM Ruacac溶液是利用含有0.1M KCl，Tris pH 9.0，5％甘氨酸的缓冲液制成的。
二甘醇丁基醚溶液：10％乙二醇醚溶液是利用RuAcac溶液制成的。
酶混合物是利用Ruacac溶液制成的：
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶
6.7mg/ml胆固醇酯酶或6.7mg/ml脂肪酶
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶
利用脱脂质血清(Scipac，S139)，制备LDL(Scipac，P232-8)和HDL(Scipac，P233-8)样品。然后利用空间临床分析仪(SchiappanelliBiosystems Inc)分析该样品。
测试方案
将9μl两倍强度的乙二醇醚溶液(或不含乙二醇醚的Ruacac溶液)与9μl酶混合物混合。在T＝-30秒时，将2μl样品(LDL或HDL，或脱脂质血清)与所得到的乙二醇醚：酶混合物混合，并且将9μl所得到的溶液置于电极上。该电极记述在WO200356319中。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在7个时间点(0，28，56，84，112，140和168秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份测试。
结果
其中E2C4是二甘醇丁基醚。
每个时间点的梯度用于计算由LDL和HDL的测量所获得的％差别，并显示在图5中。
结论
在5％二甘醇丁基醚的存在下，利用胆固醇酯酶或脂肪酶赋予LDL在酶混合物上的差别，尽管在利用胆固醇酯酶的条件下，对LDL的差别是最高的。
这些数据表明使用脂肪酶引起的差别通过添加二甘醇丁基醚，从HDL差别转换为LDL差别。这显示出二甘醇丁基醚具有比胆固醇酯水解酶更强的对LDL差别的影响。
实施例3：确定选择性增溶LDL的二甘醇丁基醚的最佳浓度
本实验的目的是滴定二甘醇一丁基醚，从而为了检测LDL的目的，确定在与HDL具有最小相互作用的条件下选择性增溶LDL的最佳浓度。
溶液：
RuAcAc溶液：30mM RuAcac是利用含有Tris pH9.0，10％蔗糖和0.1MKCl的缓冲液制成的。
在上述Ruacac溶液中将乙二醇醚溶液制成为12％，10％，8％，6％，4％和2％二甘醇丁基醚。
酶混合物(含有胆固醇酯酶)和LDL和HDL样品是按照与实施例2中相同的配方制成的。
方法：
按照试验2中所述的方法进行该试验和分析。
结论
随着二甘醇丁基醚浓度的增加，对LDL的响应梯度增大。这导致对LDL的差别在6％二甘醇丁基醚时是最高的。
实施例4：确定对选择性增溶LDL的双丙甘醇丁基醚的最佳浓度
本实验的目的是改变双丙甘醇一丁基醚的浓度，从而为了检测LDL的目的，确定在与HDL具有最小相互作用的条件下选择性增溶LDL的最佳浓度。
溶液
如实施例2中所述制备30mM Ruacac缓冲液，酶溶液(含有胆固醇酯酶)和HDL或LDL Scipac样品。
乙二醇醚溶液是通过在前述Ruacac溶液中使用3.5％，3％，2.5％.2％.1.5％和1％双丙甘醇丁基醚制成的。
方法：
如实施例2所述进行该试验。将结果显示在图7中。
结论
因为双丙甘醇丁基醚浓度增加，所以获得了对LDL响应梯度的增加。这导致对LDL差别的增加。在1.5和1.75％双丙甘醇丁基醚，获得最高差别。
实施例5：确定显示对LDL增加的选择性的试剂
本实验的目的是为了检测LDL的目的而确定在与HDL具有最小相互作用的条件下显示出对LDL的选择性的试剂。
溶液
乙二醇醚溶液：每种乙二醇醚溶液是利用Tris缓冲液，pH9.0，5％甘氨酸制成的。下列量生成两倍强度的乙二醇醚溶液。请注意，由于称重上的微小变化，百分比仅为近似值：
2-甲氧基乙醇(Aldrich(奥德里奇)185469)
10％(0.0477g在477μl缓冲液中)
三甘醇甲基醚(Fluka 90450)
10％(100μl+900μl缓冲液)
二甘醇丙基醚(Aldrich(奥德里奇)537667)
10％(0.0947g在947μl缓冲液中)
二甘醇丁基醚(Aldrich(奥德里奇)537640)
10％(0.0640g在640μl缓冲液中)
二甘醇戊基醚(Fluka 32285)
2.5％(0.0218g在872μl缓冲液中)
1-甲氧基-2-丙醇(Aldrich(奥德里奇)65280)
10％(0.0459g在459μl缓冲液中)
双丙甘醇丁基醚(Aldrich(奥德里奇)388130)
2.5％(0.0121g在484μl缓冲液中)
三丙二醇甲基醚(Aldrich(奥德里奇)30,286-4)
10％(0.0463g在463μl缓冲液中)
三丙二醇丁基醚(Aldrich(奥德里奇)48,422-9)
2.5％(0.0176g在704μl缓冲液中)
甘油乙氧基化物-共-丙氧基化物三元醇(Aldrich(奥德里奇)40，918-9)
5％(0.0534g在1.068ml缓冲液中)
新戊二醇乙氧基化物(Aldrich(奥德里奇)410276)
10％(0.0619g在619μl缓冲液中)
丙二醇丙基醚(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)424927)
10％(0.0444g在444μl缓冲液中)
1-叔-丁氧基-2-丙醇(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)433845)
10％(0.0470g在470μl缓冲液中)
双丙甘醇丙基醚(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)484210)
10％(0.0458g在458μl缓冲液中)
三丙二醇丙基醚(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)469904)
10％(0.0435g在435μl缓冲液中)
双丙甘醇叔-丁基醚(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)593346)
10％(0.0417g在417μl缓冲液中)
2-丙氧基乙醇(Sigma-Aldrich(西格玛-奥德里奇)82400)
10％(0.0444g在444μl缓冲液中)
Scipac LDL和HDL样品：LDL和HDL样品是利用脱脂质血清制成的。
酶混合物
酶混合物是利用上述Tris缓冲液pH9.0，5％甘氨酸制成的，其含有：
160mM氯化六胺(III)钌
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶
6.7mg/ml胆固醇酯酶
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶
测试方案
将9μl乙二醇醚溶液与9μl酶混合物相混合。在T＝-30秒时，将2μl样品(LDL，HDL，或脱脂质血清)与所得到的乙二醇醚：酶混合物混合，并且将9μl所得到的溶液置于电极上。该电极描述在WO200356319中。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在5个时间点(10，32，63，90和110秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份测试。
结果
分析数据，将第一时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。将结果显示在图8中。
实施例6：KCl滴定500-1500mM
本实验的目的是研究在二甘醇一丁基醚存在下增大的离子强度对LDL和HDL响应的影响。
溶液
30mM Ruacac溶液：30mM RuAcac，Tris pH9.0，5％甘氨酸，5％二甘醇丁基醚
在3M，2M，1.5M和1M KCl的KCl溶液在上述Ruacac溶液中制成。
酶混合物在上述Ruacac溶液中制成：
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶
6.7mg/ml胆固醇酯酶
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶
在脱脂质血清中制成Scipac LDL和HDL样品。
测试方案
将9μl KCl溶液与9μl酶混合物混合。在T＝-30秒时，将2μl样品与所；得到的KCl：酶混合物混合，并且将9μl所得到的溶液置于电极上。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在7个时间点(0，32，64，96，128，160和192秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份进行试验。
分析数据，将每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。将结果显示在图9中。
结论
通过增加对HDL响应的梯度，将KCl浓度增至非常高的浓度(1.5M)减少了对LDL的差别。在500，750和1M KCl时，获得了对LDL的高差别。
实施例7：KCl滴定0-500mM
本实验的目的是研究在二甘醇丁基醚存在下离子强度对LDL和HDL响应的影响。
溶液
30mM Ruacac溶液在含有Tris pH9.0，5％甘氨酸，5％二甘醇丁基醚溶液的缓冲液中制成。
KCl溶液在上述Ruacac溶液中制成1M，500mM和100mM KCl的浓度。
利用Ruacac溶液将酶混合物制成两倍强度：
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(东方酵母公司(Oriental YeastCo))
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶(生物催化剂(Biocatalysts))
6.7mg/ml胆固醇酯酶(健赞(Genzyme))
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶(安满能(Amano)，CHDH-6)
Scipac LDL和HDL样品在来自Scipac的脱脂质血清中制成。
测试方案
将9μl KCl溶液或Ruacac溶液(空白)与9μl酶混合物混合。在T＝-30秒时，将2μl样品(10x浓缩的LDL或HDL，或脱脂质血清)与所得到的KCl：酶混合物混合，并且将9μl所得到的溶液置于电极上。该电极描述在WO200356319中。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在7个时间点(0，32，64，96，128，160和192秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份进行试验。
结果
分析数据，将每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。将结果显示在图10中。
结论
在0-500mM范围内增加KCl的浓度导致随着KCl浓度的增加对LDL更高的差别，其原因在于对LDL响应的梯度增加。
实施例8：研究离子强度对LDL选择性增溶的影响
本实验的目的是为了检测LDL的目的，通过改变氯化六胺钌介体浓度来研究在与HDL具有最小相互作用的条件下离子强度对LDL的选择性增溶的影响。
溶液
含有12％二甘醇一丁基醚的乙二醇醚溶液是在Tris缓冲液(pH9.0，5％甘氨酸)中制成的。
利用Scipac脱脂质血清将Scipac LDL和HDL制成多种浓度。
利用Tris缓冲液pH9.0，5％甘氨酸将酶混合物制成两倍强度。
制备了4种单独的酶混合物，其含有80，160，240或480mM氯化六胺钌：
80，160，240或480mM氯化六胺钌
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶
6.7mg/ml胆固醇酯酶
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶
测试方案
将9μl两倍强度的乙二醇醚溶液与9μl酶混合物混合。在T＝-30秒时，将2μl样品(10x浓缩的LDL或HDL，或脱脂质血清)与所得到的乙二醇醚：酶混合物混合，并且将9μl所得的溶液置于电极上(该电极描述在WO200356319中)。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在5个时间点(0，28，56，84和112秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份进行试验。
分析
分析数据，并且将每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL之间所获得的％差别。将第一时间点0秒的结果显示在表图11a-d中。
结论
用80mM氯化六胺钌获得对LDL最高的差别。
虽然不希望受到任何具体理论限制，但是可以假定存在的离子水平的变化改变共溶剂对胆固醇的相对的溶剂化能力，直到离子强度或离子浓度达到溶解度受限的水平。
实施例9：利用二甘醇丁醚或双丙甘醇丁醚的血浆校准
本实验的目的是研究在二甘醇一丁基醚(E2C4)或双丙甘醇一丁基醚(P2C4)存在下对血浆LDL和HDL的响应的响应。
溶液
KCl缓冲液：Tris缓冲液pH9.0，5％甘氨酸，0.2M KCl
40mM Ruacac是利用上述KCl缓冲液制成的。
3M KCl溶液是在上述Ru acac溶液中制成的。
酶混合物：酶混合物(无共溶剂)是利用Ruacac溶液制成的：
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶
6.7mg/ml胆固醇酯酶
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶
含有12％E2C4的酶混合物：将0.0304g E2C4(Sigma-Aldrich)溶解在253μl酶混合物中。
含有3.5％P2C4的酶混合物：将0.0075g P2C4(Sigma-Aldrich)溶解在250μl酶混合物中。
血浆样品：对冷冻血浆样品进行至少30分钟的解冻，随后进行5分钟离心。然后利用空间临床分析仪(Schiappanelli Biosystems Inc)分析该样品。
测试方案
对于含有E2C4的酶混合物，将1.5μl3M KCl溶液与7.5μl酶混合物混合。在T＝-30秒时，将9μl样品(血浆，或脱脂质血清)与所得到的KCl：酶混合物混合，并且将9μl所得到的溶液置于电极上。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在7个时间点(0，32，64，96，128，160和192秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份进行试验。
对于含有P2C4的酶混合物，在T＝-30秒时，将9μl酶混合物与9μl样品(血浆，或脱脂质血清)混合。将9μl所得到的溶液置于电极上，并在T＝0秒时，如上述对E2C4启动计时电流分析试验。
分析
分析数据。每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL的测量之间所获得的％差别。
结果
利用E2C4，在时间t＝0秒时，对血浆LDL的差别是103％(图12-由空心圆圈表示的HDL，由实心圆圈表示的LDL)。利用P2C4，在时间t＝96秒时，对血浆LDL的差别是91％(图13-由空心圆圈表示的HDL，由实心圆圈表示的LDL)。
结论
用E2C4或P2C4获得了对血浆LDL的高差别。
实施例10：为了检测LDL的目的而确定在与HDL具有最小相互作用的条件下选择性增溶LDL的试剂的试验
溶液
0.1M KCl缓冲液＝Tris缓冲液，pH9.0，5％甘氨酸，0.1M KCl
乙二醇醚溶液
利用0.1M KCl溶液制备两倍强度的乙二醇醚溶液：
二甘醇丁基醚(Aldrich 537640)
10％(0.0958g在958μl KCl缓冲液中)
酶混合物：
利用0.1M KCl制备酶混合物，且其含有：
40mM RuAcac
17.7mM硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸
8.4mg/ml假单孢氧还蛋白还原酶
6.7mg/ml胆固醇酯酶
44.4mg/ml胆固醇脱氢酶，无明胶
Scipac LDL和HDL样品：
利用脱脂质血浆(Scipac，S139)制备LDL(Scipac，P232-8)和HDL(Scipac，P233-8)样品为10x所需浓度。然后利用空间临床分析仪(Schiappanelli Biosystems Inc)分析该样品。
测试方案
将9μl乙二醇醚溶液与9μl酶混合物混合。在T＝-30秒时，将2μl样品(LDL或HDL，或脱脂质血清)与所得到的乙二醇醚：酶混合物混合，将9μl所得到的溶液置于电极上(该电极描述在WO200356319中)。在T＝0秒时，启动计时电流分析试验。在0.15mV，在5个时间点(0，35，63，90，118，145和172秒)测量氧化电流，在-0.45mV，在最终时间点测量还原电流。将每个样品一式两份进行试验。
分析
连同由空间分析仪获得的LDL、HDL和脱脂质血清的浓度一起分析这些数据。每个时间点的梯度用于计算在LDL和HDL测量之间所获得的％差别。将结果显示在图14中。
结论
用二甘醇丁基醚获得了对LDL的高差别。

Claims (30)

1.一种生物传感器，所述生物传感器包括含有生物化学分析物的底物、酶系统、低分子量乙二醇醚和检测工具。
2.权利要求1中所述的生物传感器，其中所述底物是生物流体，诸如血、血清或血浆。
3.权利要求2中所述的生物传感器，其中从所述生物流体所确定的生物化学分析物是脂蛋白。
4.权利要求3中所述的生物传感器，其中所述脂蛋白是低密度脂蛋白。
5.在前权利要求的任一项中所述的生物传感器，其中所述酶系统含有胆固醇酶，诸如胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶或胆固醇脱氢酶。
6.在前权利要求的任一项中所述的生物传感器，其中所述低分子乙二醇醚选自具有1-4个重复的直链或支链亚烷基的组。
7.权利要求6中所述的生物传感器，其中所述亚烷基是1，2-亚乙基、1，2-亚丙基及其异构体、亚丁基及其异构体、或亚戊基及其异构体，或其组合。
8.在前权利要求的任一项中所述的生物传感器，其中所述乙二醇醚由烷基取代，所述烷基任选地由一个或多个烷氧基取代。
9.权利要求8中所述的生物传感器，其中所述烷基基团是C1-C5烷基。
10.权利要求6-9的任一项中所述的生物传感器，其中将所述亚烷基或烷基用1-4个烷氧基取代。
11.权利要求11中所述的生物传感器，其中所述1-4个烷氧基是1-4个乙氧基。
12.在前权利要求的任一项中所述的生物传感器，其中所述低分子量乙二醇醚是2-甲氧基乙醇、三丙二醇甲基醚、二甘醇丙基醚、二甘醇丁基醚、二甘醇戊基醚、1-甲氧基-2-丙醇、双丙甘醇丁基醚、三丙二醇丁基醚、甘油乙氧基化物-共-丙氧基化物三元醇、新戊二醇乙氧基化物、丙氧基乙醇(propxyethanol)、三甘醇甲基醚、丙二醇丙基醚、1-叔-丁氧基-2-丙醇、双丙甘醇丙基醚、三丙二醇丙基醚或双丙甘醇叔-丁基醚。
13.在前权利要求的任一项中所述的生物传感器，其中所述生物传感器还包括水性缓冲溶液。
14.权利要求13中所述的生物传感器，其中所述缓冲溶液典型地具有碱性pH。
15.权利要求1-14的任一项中所述的生物传感器，其中增加所述溶液的离子强度，以便改善对低密度脂蛋白的选择性。
16.权利要求15中所述的生物传感器，其中通过添加选自由下列各项组成的组中的盐增加所述溶液的离子强度：氯化钾、硫酸镁、氯化六胺钌、氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化镧、硫酸钠或硫酸镁。
17.在前权利要求的任一项中所述的生物传感器，其中所述检测工具是以电化学电池的形式。
18.一种用于测量样品中生物化学分析物的量的检测系统，所述检测系统包括下列步骤：
a)提供低分子量乙二醇醚溶液与酶混合物的混合物；
b)加入待测样品的溶液；
c)在引起可测量信号变化的条件下培育所得到的混合物；
d)测量所得到的变化；和
e)利用校准曲线在原始样品中确定分析物的量或确定HDL和LDL之间的差别。
19.权利要求18中所述的检测系统，其中所述分析物是低密度脂蛋白。
20.权利要求18或19中所述的检测系统，其中所述可测量信号是电化学信号、比色信号、热信号、压电信号或光谱信号。
21.权利要求18-20的任一项中所述的检测系统，其中所述低分子量乙二醇醚如权利要求6-12的任一项中所限定。
22.权利要求18-21的任一项中所述的检测系统，其中在使用前干燥所述生物分析物和试剂。
23.低分子量乙二醇醚用于增溶生物化学分析物的用途。
24.权利要求23中所述的用途，其中所述低分子量乙二醇醚如权利要求6-12的任一项中所限定。
25.权利要求23或权利要求24的任一项中所限定的用途，其中所述乙二醇醚用于增溶脂蛋白，如低密度脂蛋白胆固醇。
26.盐用于增加含有低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和乙二醇醚的溶液离子强度的用途，其中所述溶液离子强度的增加调节所述低密度脂蛋白和所述高密度脂蛋白的相对溶解度。
27.权利要求26中所述的用途，其中所述离子强度的增加增大了所述低密度脂蛋白相对于所述高密度脂蛋白的溶解度。
28.权利要求26或权利要求27的任一项中所述的用途，其中所述盐选自由氯化钾、硫酸镁、氯化六胺钌、氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化镧、硫酸钠或硫酸镁组成的组。
29.权利要求26-28的任一项中所述的用途，其中所述盐的浓度在0.1M-1M的范围内。
30.权利要求26-28的任一项中所述的用途，其中所述溶液的离子强度在0.5M-1.5M的范围内。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104865392A (zh) * 2015-05-02 2015-08-26 王贤俊 一种ldl-c定量检测方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7910378B2 (en) * 2007-12-14 2011-03-22 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. Methods for detection of hydrophobic drugs
US10107825B2 (en) * 2014-06-19 2018-10-23 Life Technologies Corporation System and method incorporating solid buffer
CN104970806B (zh) * 2015-07-12 2017-08-04 北京泱深生物信息技术有限公司 一种用于癌症复发实时动态监测的智能设备

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4378429A (en) * 1979-08-23 1983-03-29 Modrovich Ivan Endre Enzymatic method and stabilized solutions for determining total cholesterol in human serum
DE3021457A1 (de) * 1980-06-06 1982-01-07 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und mittel zur aufloesung von chylomikronen in waessrigem mediums
US4503146A (en) * 1980-10-01 1985-03-05 Technicon Instruments Corporation Method for eliminating turbidity in a biological fluid and reagent therefor
US5217873A (en) * 1982-04-02 1993-06-08 Ivan Endre Modrovich Time-stable liquid cholesterol assay compositions
JP3441993B2 (ja) * 1999-01-27 2003-09-02 松下電器産業株式会社 コレステロールセンサ
US6342364B1 (en) * 1999-11-22 2002-01-29 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Cholesterol sensor and method of determining cholesterol
JP3686326B2 (ja) * 2000-11-08 2005-08-24 アークレイ株式会社 高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片
JP3856438B2 (ja) * 2001-06-14 2006-12-13 松下電器産業株式会社 バイオセンサ
JP2003329634A (ja) * 2002-05-15 2003-11-19 Toto Ltd 酵素電極の製造方法
EP1434054A1 (en) * 2002-12-25 2004-06-30 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Biosensor for determining low density cholesterol
JP2004215657A (ja) * 2002-12-25 2004-08-05 Matsushita Electric Ind Co Ltd バイオセンサ
WO2004058992A1 (en) * 2002-12-31 2004-07-15 Council Of Scientific And Industrial Research Method for preparing lactate biosensing strip

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104865392A (zh) * 2015-05-02 2015-08-26 王贤俊 一种ldl-c定量检测方法

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