CN101304756A - 用于炎性病症的草药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新的包含植物绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物的草药组合物。所述绒毛戴星草的提取物包含作为生物活性标志物的化合物3a－羟基－5a，9－二甲基－3－亚甲基－3a，4，5，5a，6，7，8，9b－八氢－3H－萘并[1，2－b]呋喃－2－酮(7－羟基－4，11(13)－桉叶烷二烯－12，6－内酯)(化合物1)。本发明还涉及包含3a－羟基－5a，9－二甲基－3－亚甲基－3a，4，5，5a，6，7，8，9b－八氢－3H－萘并[1，2－b]呋喃－2－酮(化合物1)作为活性成分的组合物。本发明还涉及制备所述组合物的方法。本发明还涉及给需要治疗炎性病症的对象施用所述组合物的方法。本发明还涉及所述组合物的肿瘤坏死因子－α(TNF－α)和白细胞介素(IL－1、IL－6、IL－8)抑制活性。本发明涉及所述组合物对细胞间粘附分子1(ICAM－1)、血管细胞粘附分子1(VCAM－1)和E－选择蛋白的表达的抑制作用。所述组合物可任选地包含至少一种抗炎剂或可与至少一种抗炎剂组合使用。

Description

用于炎性病症的草药组合物
技术领域
本发明涉及一种新的草药组合物，其含有植物绒毛戴星草(Sphaeranthus indicus)的头状花序(flowering head)和头状果序(fruiting head)的提取物。本发明还涉及含有从绒毛戴星草的头状花序和果序所得之提取物的草药组合物，其包含作为生物活性标志物的化合物3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(7-羟基-4，11(13)-桉叶烷二烯-12，6-内酯(化合物1)，以及任选地一种或多种其它活性剂，用于有效治疗炎性病症。本发明还涉及用于治疗炎性病症的药物组合物，其包含作为活性成分的3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)和药学可接受载体。本发明还涉及制备所述组合物的方法。本发明的所述组合物适于治疗炎性病症。本发明还涉及所述组合物的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)抑制活性。本发明还涉及所述组合物对细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白的表达的抑制。
本发明还公开了施用所述组合物用于治疗炎性病症的方法。任选地，所述提取物或包含所述提取物的组合物或包含化合物1的组合物可与至少一种其它抗炎剂联合使用。
背景技术
炎症在宿主防御和免疫介导疾病的进程中发挥基础作用。在对损伤(例如外伤、缺血和外来颗粒)和感染(例如细菌或病毒感染)的应答中，由多种事件(包括化学介导物(例如细胞因子和前列腺素)和炎症细胞(例如白细胞))启动了炎症反应。其特征在于流向组织的血液流动增加，引起发热、红斑、硬化和疼痛。
在炎性反应中体液免疫和细胞免疫因子之间的精巧、良好平衡的相互作用能够消除有害物和启动受损组织的修复。当此精巧平衡的相互作用被破坏时，所述炎性反应可导致对正常组织相当大的损伤并可能比启动该反应的最初损害更有害。在这些不受控制的炎性反应的情况下，需要临床干预以防止组织损伤和器官功能障碍。疾病比如类风湿性关节炎、骨关节炎、克罗恩病、哮喘、变态反应、脓毒性休克综合征、动脉粥样硬化、炎性肠病以及其它临床病症都是以慢性炎症为特征。
细胞因子，尤其是IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α在炎症过程中发挥着重要作用。
TNF-α是一种多效性细胞因子，主要由巨噬细胞产生，但其也可由其它类型的细胞产生。TNF-α显示了有益的以及病理的活性。除了自我调节以外，其具有生长刺激作用和生长抑制性质。TNF-α的有益功能包括通过调节机体昼夜节律而维持内环境稳定，启动对细菌、病毒、真菌和寄生虫感染的免疫应答，通过刺激成纤维细胞生长而替换或重塑受损组织，以及如其名字所示杀死某些肿瘤。
尽管TNF-α在先天免疫应答和获得性免疫应答中发挥着关键作用，但TNF-α的不当生成可产生导致慢性炎症和组织损伤的病理变化。已经显示，TNF-α在很多慢性炎性疾病的发病中发挥至关重要的作用，所述慢性炎性疾病例如炎性肠病、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、难治性类风湿关节炎(refractory rheumatoidarthritis)、慢性非类风湿性关节炎、骨质疏松/骨重吸收、冠心病、脉管炎、溃疡性结肠炎、银屑病、成年型呼吸窘迫综合征、糖尿病、皮肤迟发型超敏反应病症和阿尔茨海默病。
白细胞介素-1(IL-1)是先天免疫系统的重要部分，其调节适应性免疫系统的功能。在局部组织中IL-1和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)之间的平衡影响炎性疾病和所导致结构损伤的可能发展。在过量IL-1的存在下，炎性病症和自身免疫病症可发生于关节、肺、胃肠道、中枢神经系统(CNS)或血管。
在各种炎性病症中，类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫病症。RA是病因未知的慢性、全身性的关节炎性疾病。在RA中，关节的通常较薄的滑膜内衬被替换为炎性的、高度血管化的、侵入性的纤维胶原酶组织(关节翳)，其对软骨和骨都有破坏性。可能受影响的区域包括手、腕、颈、颚、肘、膝、足和踝的关节。RA中的软骨破环与受影响关节中细胞因子和生长因子的异常表达有关。
释放于滑膜中的两种临床上重要的细胞因子是IL-1β和TNF-α。TNF-α可上调其自我表达并有利于参与RA的其它基因的表达，所述其它基因包括IL-1β、IL-6、IL-8、环加氧酶-2(COX-2)，诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白。这种正调节环可放大并维持局部炎症反应。因此，TNF-α的不适当表达或过度表达导致许多基因表达的协调增加，这些基因的产物介导炎症反应和免疫反应，从而导致RA的临床表现。
在包括RA的所有慢性炎性病症的发病机制中，白细胞的募集和驻留是关键事件。此外，在动脉粥样硬化的发展中，循环白细胞尤其是单核细胞向血管内皮的粘附也是关键事件。此过程取决于在内皮细胞表面表达的粘附分子(比如ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白)与其白细胞上对应配体之间的相互作用。因此，ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白负责将炎症细胞(比如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞)从循环中募集到炎症部位。这些粘附蛋白通常在内皮细胞表面是低水平的，但很大程度上被多种促炎性细胞因子(比如TNF-α)诱导。
用于治疗炎性病症的最常见治疗方法包括使用非甾体抗炎药(NSAID)(例如萘普生、双氯芬酸、布洛芬)以缓解比如疼痛等症状。然而，尽管广泛使用NSAID，但很多个体不能耐受长期治疗该病症所必需的剂量，因为已知NSAID引起胃侵蚀。而且，NSAID仅治疗病症的症状而不是治疗病因。
当患者对NSAID没有反应时，使用其它药物比如氨甲喋呤、金盐、D-青霉胺和皮质类固醇。这些药物也具有明显的毒性作用。
单克隆抗体药物比如英利昔单抗(infliximab)、依那西普(etanercept)和阿达木单抗(adalimumab)可用作抗炎剂，但是具有缺点比如施用途径(仅胃肠外)、费用高、诱发变态反应、激活潜伏性结核、癌症和充血性心脏病的风险增加。
因此，需要开发具有更低副作用的改进的和替代的药物，用于预防和治疗由IL-1和TNF-α增加引起的炎性病症。
在全世界内已经知道并使用草药治疗多种病症。有证据表明源自植物的产品对哺乳动物具有潜在的药理作用和治疗作用，并倾向于比合成药物具有较少的有害副作用。
本发明描述了一种新的草药组合物，其包含植物绒毛戴星草(Sphaeranthus indicus)的头状花序和果序的提取物。该组合物可用于治疗多种炎性病症，同时具有最少的副作用。
绒毛戴星草是一种稻田中常见的杂草。它属于菊科，在印度传统医学(Ayurveda)文献中，其被称为mahamundi或gorakhmundi。该植物在整个印度均可获得，它是开紫花的有分枝草本植物。其用在肝病和胃病中。在传统医学中它用作多种疾病的药物，所述疾病包括痢疾、子宫和阴道痛、胸部疾病、血液的纯化和富集、尿路感染、伤口愈合和若干其它疾病。
为对抗免疫缺陷病症，已开发了含有绒毛戴星草的多草药制剂“RV-08”(Indian Journal of Pharmacology，33，454-55，(2001))。
已经报道从绒毛戴星草的花中分离到一种新的倍半萜糖苷戴星草内酯(sphaeranthanolide)。这种分离化合物戴星草内酯表现出免疫刺激活性(Phytochemistry，29(8)，2573-76，(1990))。
已经报道了绒毛戴星草头状花序的甲醇提取物的免疫调节活性(Ars Pharmaceutica 45：3；281-91，(2004))。
据报道，得自绒毛戴星草根的水提取物具有下调痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)诱导的TNF-α和IL-8产生的中度活性。绒毛戴星草引起较小的，但仍是显著的对活性氧的抑制(Phytomedicine，10(1)，34-38，(2003))。
就我们所知，没有关于用于治疗炎性病症的包含绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物的任何药物的报道。为克服与现有技术组合物相关的该系列治疗的副作用问题(比如诱发变态反应、激活潜伏性结核、骨髓抑制、癌症和充血性心脏病的风险增加)，本发明人已经制备了一种有效对抗炎症的新的草药组合物，其具有对抗TNF-α、白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)以及对抗细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白的表达的抑制活性。本发明的组合物还可与至少一种其它的抗炎剂联合使用。
发明目的
本发明的一个目的在于提供一种新的草药组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物以及药学可接受载体。
本发明的另一个目的是提供一种用于治疗炎性病症的组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)以及药学可接受载体。
本发明的又一个目的是提供一种制备所述组合物的方法。
本发明的又一个目的是提供一种用于治疗由TNF-α和白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
本发明的又一个目的是提供一种用于治疗由细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白所介导的病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
本发明的又一个目的是提供一种用于治疗炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
本发明的又一个目的是提供一种用于治疗由TNF-α介导的炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
本发明的又一个目的是提供一种用于治疗由白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
本发明的又一个目的是提供一种用于治疗由细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白所介导的炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
本发明的又一个目的是提供一种组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分并联合应用至少一种生物活性物质以获得协同作用。
本发明的又一个目的是提供所述组合物单独或与至少一种其它抗炎剂联合用于治疗包括类风湿性关节炎的炎性病症的用途。
根据以下的详细描述，本发明的其它目的和进一步的适用性范围将显而易见。
发明内容
因此，根据本发明的一个方面，提供一种新的草药组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物以及药学可接受载体。
根据本发明的另一个方面，提供一种用于治疗炎性病症的组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)以及药学可接受载体。
根据本发明的又一个方面，提供一种制备所述组合物的方法。
根据本发明的又一个方面，提供一种用于治疗由TNF-α和白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
根据本发明的又一个方面，提供一种用于治疗由细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白所介导的病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
根据本发明的又一个方面，提供一种用于治疗炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
根据本发明的又一个方面，提供一种用于治疗由TNF-α介导的炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
根据本发明的又一个方面，提供一种用于治疗由白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
根据本发明的又一个方面，提供一种用于治疗由细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白所介导的炎性病症的组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分。
根据本发明的又一个方面，提供一种组合物，其包含治疗有效量的选自绒毛戴星草提取物或化合物1的活性成分并联合应用至少一种生物活性物质以获得协同作用。
根据本发明的又一个方面，提供所述组合物单独或与至少一种其它抗炎剂联合用于治疗包括类风湿性关节炎的炎性病症的用途。
发明详述
应当理解，尽管它们表示本发明的实施方案，所述详细描述和具体实例是仅以举例说明的方式给出的，因为对于本领域技术人员而言，在本发明的精神和范围内的各种变化和改进都将是显而易见的。基于本文的描述，本领域技术人员可利用本发明达到其最充分的范围。以下具体实施方案只应理解为举例说明，而并非以任何方式限制本公开内容的其余部分。
除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有如本发明所述领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
本文中使用的术语“炎性病症”指以慢性炎症为特征的疾病或病况，包括但不限于类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、难治性类风湿关节炎、慢性非类风湿性关节炎、骨质疏松/骨重吸收，冠心病、动脉粥样硬化、脉管炎、溃疡性结肠炎、银屑病、克罗恩病、成年型呼吸窘迫综合征、皮肤迟发型超敏反应病症、脓毒性休克综合征和炎性肠病。
本文中使用的术语“药学可接受”意指必须与制剂中其它成分相容的、且对其接受者无害的载体、稀释剂、赋形剂和/或盐。
本文中使用的术语“药学可接受载体”意指无毒的惰性固体、半固体、稀释剂、包封材料或任何类型的制剂辅料。可用作药学可接受载体的一些实例材料是糖比如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉比如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物比如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；麦芽；明胶；滑石；以及其它无毒的相容的润滑剂比如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂(releasing agent)、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂；根据配方师的判断，防腐剂和抗氧化剂也可存在于所述组合物中。
本文中使用的术语“治疗有效量”意指在合理医学判断的范围内，足以明显引起待调节或治疗之病症的积极改变、但又足够低以(以合理的利益/风险比)避免任何可能的副作用的化合物或组合物(例如绒毛戴星草提取物)的量。所述化合物或组合物的治疗有效量将随所治疗的具体病症、最终使用者的年龄和身体状况、所治疗/预防的病症的严重程度、治疗的持续时间、并行治疗的性质、所用的具体的化合物或组合物、所用的具体的药学可接受载体等因素而改变。如本文中所使用的，所有的百分数均以重量计，除非另外指明。
本文中所用的术语“生物活性标志物”用于定义与药学活性的可接受程度相关的特性(或植物化学特性)。
“最大实用剂量”是成年对象可安全服用的药物的最大量。
应当指出，如在说明书和所附权利要求书中所使用的，未用量词修饰以及用泛指的“一”修饰的术语(“a”、“an”以及“the”)包括其对应的单数和复数形式，除非文中另外明确指出。
本文中提及的“绒毛戴星草提取物”或“绒毛戴星草的提取物”意指存在于植物绒毛戴星草中的化合物的混合物。这些化合物是使用本领域公知的提取方法(例如使用有机溶剂比如低级醇、烷基酯、烷基醚、烷基酮、氯仿、石油醚、己烷和/或无机溶剂比如水)从所述植物的干燥头状花序和果序中提取的。本发明的从绒毛戴星草的头状花序和果序中提取植物成分衍生物的方法可以放大以用于大规模制备。
本文中使用的术语“活性成分”指“绒毛戴星草提取物”或“化合物1”或“含有两种或更多种活性化合物之混合物的绒毛戴星草的富集提取物”。
可使用常规技术比如高效液相色谱法(HPLC)或高效薄层色谱法(HPTLC)将绒毛戴星草提取物标准化。
在一个实施方案中，本发明提供了一种草药组合物，其包含标准化的绒毛戴星草提取物与药学可接受载体。
可以通过生物活性指导的柱色谱纯化和制备性HPLC，从绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物中分离出生物活性标志化合物。可通过对波谱数据的分析来表征化合物。
本发明的草药组合物包含绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物以及任选地一种或多种其它活性剂，所述提取物包含2-9％的作为生物活性标志物的3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)。
在一个实施方案中，本发明提供了一种组合物，其包含作为活性成分的3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)以及药学可接受载体。
在一个实施方案中，本发明提供了包含3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)的所述组合物在制备用于治疗炎性病症的药物中的用途。
本发明还涉及制备可用于治疗炎性病症的组合物的方法。将绒毛戴星草的标准化提取物与药学可接受载体混合并配制成治疗剂型。根据所期望的效果来选择每日施用剂量。
在一个实施方案中，提供所述包含绒毛戴星草的标准化提取物的草药组合物用于治疗炎性病症。在本发明的另一个实施方案中，提供包含3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)以及药学可接受载体的组合物用于治疗炎性病症。
通过相关领域已知的方法从绒毛戴星草中分离出化合物1(3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮)，并通过核磁共振(NMR)和质谱法进行表征。
所述组合物包含化合物1(3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮)，该化合物也可得自其它植物来源或可通过对本领域技术人员已知的常规合成方法而制备。
因此，本发明在其范围内涵盖包含化合物1的用于治疗炎性病症的药物组合物，所述化合物1可得自其它来源。
在本发明的又一个实施方案中，提供了一种通过混合3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)与一种或多种药学可接受载体和配制成治疗剂型来制备包含化合物1的药物组合物的方法。根据所期望的效果来选择每日施用剂量。
可口服施用本发明的组合物，例如以丸、片、包衣片、胶囊、颗粒、酏剂或糖浆的形式。使用绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物以制备含有3-70％(重量)所述提取物的口服制剂，所述提取物被充分混合进常规基质中，这将在下文中详细描述。含有2-9％(w/w)的作为生物活性标志物的化合物1的所述头状花序和果序的提取物足以达到所期望的效果。
使用化合物1(3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮)制备含有3-99％(重量)的所述化合物的口服制剂，所述化合物被充分混合进常规基质中，这将在下文中详细描述。
本发明化合物可用于局部施用和透皮施用。可用于本发明的局部组合物包括适于皮肤局部应用的制剂。所述组合物可配制成各种产品形式，其包括但不限于洗剂、乳膏、凝胶、棒(stick)、喷雾剂或软膏。
使用绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物制备含有1-15％(重量)所述提取物的局部制剂，所述提取物被充分混合进常规基质中，这将在下文中详细描述。含有约2-9％(w/w)的作为生物活性标志物的化合物1的所述绒毛戴星草的头状花序和果序的提取物足以达到所期望的效果。
在一个实施方案中，提供所述组合物用于治疗由TNF-α和白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的炎性病症。
在一个实施方案中，提供所述组合物用于治疗由细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白所介导的炎性病症。
在本发明的组合物中，活性成分“绒毛戴星草提取物”或化合物1的实际剂量水平可以变化，从而获得有效达到针对具体患者、组合物和施用方式而言所期望的治疗反应的活性成分的量。
所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括所使用的具体活性成分“绒毛戴星草提取物”或“化合物1”的活性、施用途径、施用时间、所用具体组合物的排泄速率、治疗持续时间、与其它提取物的联合使用、所治疗患者的年龄、性别、重量、病症、一般健康状况和先前病史、以及在医学领域内众所周知的类似因素。
在另一个实施方案中，本发明提供了联合包含活性成分“绒毛戴星草提取物”或化合物1与表现出抗炎活性的至少一种其它草药提取物的组合物以获得协同作用。这样的其它植物可选自植物比如姜黄(Curcumalonga)和姜(Zingiber officinale)。
在又一个实施方案中，所述组合物还包含活性成分“绒毛戴星草提取物”或化合物1与至少一种生物活性物质的组合以获得协同作用。
在又一个实施方案中，包含活性成分“绒毛戴星草提取物”或化合物1的本发明组合物可任选地含有至少一种其它抗炎剂或者也可与常规抗炎剂联合使用。所述抗炎剂可选自甾类比如泼尼松龙、氢化可的松；疾病缓解型抗风湿药(DMARD)比如氨甲喋呤、柳氮磺胺吡啶；或NSAID比如萘普生、双氯酚酸、布洛芬等。
在一个实施方案中，提供了所述包含活性成分“绒毛戴星草提取物”或从绒毛戴星草提取物分离的化合物1的草药组合物用于治疗类风湿性关节炎。
本发明的另一个实施方案还涉及包含所述活性成分的所述组合物的TNF-α和白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)抑制活性。
本发明的另一个实施方案还涉及包含所述活性成分的所述组合物对粘附分子(比如细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白)的细胞表面表达的抑制作用。
本发明的组合物适用于治疗由TNF-α、白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)和ICAM-1、VCAM-1以及E-选择蛋白所介导的急性和慢性形式的炎性病症，对人来说尤其是类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、难治性类风湿关节炎、慢性非类风湿性关节炎、骨质疏松/骨重吸收，冠心病、脉管炎、溃疡性结肠炎、银屑病、成年型呼吸窘迫综合征、阿尔茨海默病。本发明的组合物还可用于治疗疾病中的炎症，所述疾病如炎性肠病、克罗恩病、脓毒性休克综合征、动脉粥样硬化和多种自身免疫疾病等临床病症。本发明还涉及治疗炎性病症的方法，其包括通过口服途径、通过局部施用、通过透皮施用而选择性地施用本发明的组合物。
以下实施例举例说明但不限制本发明的范围。本领域技术人员应当理解，此处的讨论仅为示例性的实施方案，而不意在限制本发明更宽泛的方面，其更宽泛的方面通过这些示例性内容来体现。
实施例1
绒毛戴星草甲醇提取物的制备
将绒毛戴星草的干燥头状花序和果序(200g)粉碎。通过搅拌使用甲醇(2.5L)在60℃提取粉末化材料3小时。真空下过滤提取物。再重复此提取过程两次。合并提取物并浓缩。
产率：23.29g(11.65％w/w)。
通过HPTLC估算，发现实施例1的提取物含有6％的化合物1(描述于实施例4中)。
实施例2
绒毛戴星草乙酸乙酯提取物的制备
将绒毛戴星草的干燥头状花序和果序(350g)粉碎。通过搅拌使用乙酸乙酯(3L)在60℃提取粉末化材料3小时。真空下过滤提取物。再重复此提取过程两次。合并提取物并浓缩。
产率：19g(9.5％w/w)。
实施例3
绒毛戴星草水提取物的制备
将绒毛戴星草的干燥头状花序和果序(200g)粉碎。通过搅拌使用水(1.2L)在80℃-90℃提取粉末化材料3小时。真空下过滤提取物。重复此提取过程。合并提取物并浓缩以除去水。将粗提取物通过冷冻干燥进一步干燥。
产率：21g(10.5％w/w)。
实施例4
3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)的分离
将通过实施例1所述方法制备的甲醇提取物(32g)通过柱色谱(硅胶，氯仿/甲醇)纯化。通过制备性HPLC实现最终纯化(硅胶柱，己烷∶异丙醇95∶5)以获得标题化合物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)：δ1.085(3H，CH3)，4.997(1H，s)，5.801(1H，s)，6.270(1H，s)；MS：m/e(ES)248(M+).
通过将所获得的波谱数据与文献报道(Indian Journal of Chemistry，Vol.25B，233-238，(1986)；J.Chem Soc.Perkin Trans.1：(2)，157-160，(1988)；J.Chem.Research(M)，0501-0509，1989)比较，对化合物进行表征。
药理学结果
通过本领域众所周知的并在下面描述的多种药理学试验，测定了本发明的植物提取物、通过对所述提取物纯化而分离的化合物以及制剂在抑制TNF-α和白细胞介素(IL-1、IL-6和IL-8)的活性方面的功效。
体外筛选以鉴定TNF-α抑制剂
实施例5
初步筛选-人外周血单个核细胞(hPBMC)
根据Jansky，L.等(Physiol.Res.52：593-598，(2003))描述的方法测定在hPBMC中由脂多糖(LPS)产生的TNF-α。将健康供血者的血液采集到EDTA钾真空采血管(vacutainer tube)(BD真空采血管)中。在Histopaque-1077溶液(Sigma)中使用梯度离心分离PBMC。将分离出的PBMC悬于含有10％胎牛血清(FBS)(Hyclone，Utah，USA)、100U/ml青霉素(Sigma Chemical Co.St Louis，MO)和100μg/ml链霉素(SigmaChemical Co.St Louis，MO)的RPMI 1640培养基(Gibco BRL，Pasley，UK)中。将细胞浓度调整到1×106个细胞/ml。通过台盼蓝拒染法测定的活力均≥98％。向96孔培养板的孔中加入细胞悬液(100μl)。在细胞铺板后，向细胞中加入79μl培养基和1μl八种不同浓度的溶解在DMSO(二甲基亚砜，Sigma，MO，USA)中的测试样品(最终浓度为0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100μg/ml)。将DMSO的最终浓度调整到0.5％。使用载体(0.5％DMSO)用作对照。使用咯利普兰(100、300μM)作为标准。将板在37℃于5％CO2气氛下培养30分钟。最后，加入20μl(10μg/ml)每孔的LPS(大肠杆菌(Escherchia coli)0127：B8，Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)，最终浓度为1μg/ml。将板在37℃于5％CO2气氛下培养5小时。为评价所述植物提取物的细胞毒作用，在培养5小时后使用MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺酰基)-2H-四唑鎓)试剂进行细胞活力试验。收获上清液并按照制造商的说明，通过ELISA(OptiEIA ELISA sets，BD Biosciences，Pharmingen)测定TNF-α。记录抑制百分率。评价测试样品与对照相比的细胞毒性百分数。
结果归纳于表1中。
表1：人外周血单个核细胞中的TNF-α抑制
  样品   浓度(μg/ml)   TNF的抑制％  5小时的毒性％
 实施例1的提取物   0.1110100   0.014.096.097.0   0070
 实施例2的提取物 0.1110100 0.034.097.097.0 2013228
 实施例3的提取物   0.1110100   0.00.04.096.0   01100
 咯利普兰(μM)   100300   84.090.0   221
实施例6
对LPS刺激后hPBMC释放的促炎性细胞因子的作用
植物提取物对促炎性细胞因子的作用：使用在初步筛选试验中产生的上清液测定TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)。按照制造商的说明(OptiEIA ELISA sets，BDBiosciences，Pharmingen)，通过ELISA评估这些细胞因子的水平。通过非线性回归方法，使用GraphPad软件(Prism 3.03)计算50％抑制浓度值(IC50)。
表2：实施例1的提取物对促炎性细胞因子的作用
  序号   促炎性细胞因子   实施例1的提取物，IC50μM，(hPBMC)
  01   TNF-α   5.1
  02   IL1β   4.9
  03   IL-6   26.8
  04   IL-8   31.0
结论：发现实施例1的提取物抑制由LPS刺激后hPBMC释放的促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8)。
实施例7
化合物1对由LPS刺激后hPBMC释放的促炎性细胞因子的作用
通过使用实施例4的方法得到化合物1。按照实施例6的方法进行生物活性评价。
化合物1对促炎性细胞因子的作用：使用在初步筛选试验中产生的上清液测定TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)。按照制造商的说明(OptiEIA ELISA sets，BD Biosciences，Pharmingen)，通过ELISA评估这些细胞因子的水平。通过非线性回归方法，使用GraphPad软件(Prism 3.03)计算50％抑制浓度值(IC50)。结果归纳于表3中。
表3：化合物1对促炎性细胞因子的作用
  序号   促炎性细胞因子   化合物1，IC50μM，(hPBMC)
  01   TNF-α   0.7
  02   IL1β   0.4
  03   IL-6   1.6
  04   IL-8   8.9
结论：发现化合物1抑制由LPS刺激后hPBMC释放的促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8)。
实施例8
对由得自RA患者的滑膜细胞产生的促炎性细胞因子的作用
根据由Brennan，F.M.等描述的方法(The Lancet.July 29：244-247，(1989))，测定由得自经历膝置换手术的类风湿性关节炎(RA)患者的滑膜细胞产生的细胞因子。将所述滑膜组织在含有10％FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素、4mg/ml I型胶原酶(Worthington)、1.5μg/ml I型脱氧核糖核酸酶(Sigma)以及15U/ml肝素的DMEM(Gibco)中消化并在37℃培养3小时。培养后，通过70μm膜过滤消化后组织并在完全培养基(含有10％FBS的DMEM)中清洗细胞3次。在测试样品存在/不存在下，将滑膜细胞以1×106个细胞/ml培养10小时。通过离心收获上清液，通过ELISA测定细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8)的水平。为评价所述植物提取物的细胞毒作用，使用MTS试剂进行细胞活力试验。通过非线性回归方法，使用GraphPad软件(Prism 3.03)计算50％抑制浓度值(IC50)。
结论：发现实施例1的提取物抑制由得自RA患者的滑膜细胞所产生的促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8)。
实施例9
化合物1对由得自RA患者的滑膜细胞所产生的促炎性细胞因子的作用
按照实施例8的方法所述，研究了化合物1对由得自RA患者的滑膜细胞所产生的促炎性细胞因子的作用。
结果归纳于表4中。
表4：化合物1对由滑膜细胞产生的促炎性细胞因子的作用
  序号   促炎性细胞因子   化合物1，IC50(μM)，滑膜
  01   TNF-α   0.8
  03   IL-6   1.4
  04   IL-8   10.9
结论：发现化合物1抑制由得自RA患者的滑膜细胞所产生的促炎性细胞因子(TNF-α、IL-6和IL-8)。
实施例10
用于粘附分子表达的细胞ELISA
基于参考文献Transplantation，Vol 63(5)，759-764，1997并有改动而设计本试验。
细胞培养和试剂：
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)得自Cascade Biologics并在37℃下于5％CO2培养箱中维持在添加低血清生长补充剂(LSGS)的M200(CascadeBiologics，Portland，Or)中。在添加10％FBS(Hyclone，Logan，UT)的RPMI 1640培养基中培养U937细胞(ATCC，Manassas，VA)。重组人TNF-α，ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白的抗体得自R&D Systems，LPS得自Sigma(St.Louis，MO)。
粘附分子表达的细胞ELISA
以7×105个细胞/孔将HUVEC铺于包被纤连蛋白的96孔板上。在添加测试化合物后30分钟，以TNF-α(10ng/ml)或LPS(1μg/ml)刺激细胞。刺激后，用在磷酸盐缓冲液(PBS)中的多聚甲醛固定细胞(E-选择蛋白和ICAM-1)。用在磷酸盐缓冲液(PBS)中的2％牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性结合1小时，并使所述细胞与第一抗体一起培养2小时。为检测VCAM-1，将所述细胞封闭，与第一抗体培养过夜，然后固定。用含0.1％BSA的PBS清洗细胞，并使细胞与偶联过氧化物酶的抗小鼠免疫球蛋白G(IgG)的抗体(Ab)一起培养90分钟。清洗七次后，添加3，3’5，5’-四甲基联苯胺液体底物(TMB底物)，并使用微滴定板读数仪(Spectramax，Molecular Devices，CA)在450nm测定每孔的光密度。使用BAY 11-7082[(E)-3-(4-甲基苯基磺酰基)-2-丙烯腈]作为标准，DMSO作为载体对照。评价测试样品与对照相比的抑制百分数。通过非线性回归方法测定每个样品相对于对照的50％抑制浓度(IC50)。结果归纳于表5中。
表5：实施例1的提取物和化合物1对粘附分子表达的细胞ELISA
  实施例1的提取物IC50(μg/ml)   化合物1IC50(μM)
  ICAM-1   7.6   0.52
  VCAM-1   6.4   0.4
  E-选择蛋白   3.5   0.2
结论：实施例1的提取物和化合物1剂量依赖地降低TNF-α诱导的内皮细胞粘附分子(如ICAM-1、VCAM-1和E-选择蛋白)的表面表达。
实施例11
THP-1单个核细胞向HUVEC单层的粘附
使用前单核细胞系THP-1(已在Circ.Res.，97，236-243，2005中确立作为在粘附研究中单核细胞的有用模型，有改动)进行粘附研究。以标记介质(M200加LSGS)清洗THP-1细胞两次。在室温下，使用10μg/ml的双-羧乙基-羧基荧光素乙酰氧基甲酯(荧光探针，BCECF-AM；Sigma)标记THP-1细胞(6×105个细胞/ml)30分钟。在以0.1％BSA猝灭后，将沉淀重悬于标记介质中。为评价单核细胞粘附，在各种浓度的测试样品存在或不存在下，以TNF-α(1ng/ml)处理HUVEC单层。除去培养基，清洗，并向孔中加入标记的THP-1细胞(6×104个细胞/孔)，在室温下于暗处培养10分钟。在共培养之后，清洗孔，加入裂解缓冲液(含0.1％Triton-X的1.5M Tris缓冲液)并培养30分钟。使用荧光读数器(PolarStar Optima，BMG Labtech)测定荧光，激发峰为485nm，发射峰为520nm。值为平均值+SEM，代表荧光粘附数据。BAY 11-7082[(E)-3-(4-甲基苯基磺酰基)-2-丙烯腈]用作标准，DMSO作为载体对照。结果归纳于表6中。
表6：由实施例1的提取物和化合物1引起的THP-1单个核细胞
对HUVEC单层的粘附
  序号   试验样品   浓度   荧光强度   对照的倍数
  01   实施例1的提取物   1(μg/ml)3(μg/ml)10(μg/ml)30(μg/ml)   39768353021318310236   232165
  02   化合物1   0.1(μM)0.3(μM)1(μM)3(μM)   3342134024101955728   131342
  03   BAY 11-7082   0.5(μM)1(μM)   1844214271   108
  04   未刺激的DMSO对照刺激的DMSO对照   254430791   118
结论：实施例1的提取物和化合物1分别在10μg/ml和1μM抑制TNF-α刺激后单核细胞THP-1对HUVEC的粘附。
由于这些化合物抑制粘附分子在HUVEC细胞表面的表达以及抑制单核细胞对HUVEC的粘附，因此其可阻碍白细胞迁移，这是慢性炎性疾病中的关键事件并可证实在多数炎性病症中是有益的。
体内研究
实施例12
BALB/c小鼠中脂多糖(LPS)诱导的肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放
采用由Fukuda T.等(Eur.J.Pharmacol.，391：317-320，(2000))描述的方案。将BALB/c小鼠分组，每组10只。给所述小鼠口服(p.o.)施用悬于Tween 80和0.5％羧甲基纤维素(CMC)中的测试样品。一小时后，以1mg/kg的剂量腹腔内施用溶于无菌、无热原盐水中的LPS。阴性对照组通过腹腔内注射盐水，而所有其它组接受LPS。使用咯利普兰(30mg/kg，口服)作为标准药物。一个半小时后，在尿烷麻醉(1.5g/kg，腹腔内注射)下，使用以肝素(500IU/ml)冲洗过的1ml注射器从腹动脉采血。在采血管中使用肝素(5μl)作为抗凝剂。在室温下通过在10000rpm离心而分离血浆，将试样等分并存储于-70℃直到分析。使用ELISA测定血样中的TNF-α水平，并相对于对照组计算TNF-α释放的抑制百分数。结果归纳于表7中。
表7：对于实施例1的提取物和对于化合物1而言的在BALB/c小鼠中由
脂多糖(LPS)诱导的肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放
Figure A20068004077000231
结论：实施例1的提取物和化合物1抑制BALB/c小鼠中的TNF-α释放。
实施例13
DBA/1J小鼠中胶原诱导的关节炎(CIA)
使用在弗氏完全佐剂中作为乳液的200μg II型胶原，通过在尾根部皮内注射来免疫8-10周龄的雄性DBA/1J小鼠。21天后，给小鼠施用100μgII型胶原的加强免疫。还同时维持一组未免疫小鼠。
从第23天起，使用关节指数作为参数，评价小鼠类风湿性关节炎的发作。将具有最小后爪得分为2的小鼠纳入本研究中。以400m.p.k(毫克/千克体重)的剂量通过口服途径每日两次施用实施例1的提取物12天。以50m.p.k.和100m.p.k.的剂量通过口服途径每日两次施用化合物1，施用12天。使用Enbrel(3mg/kg)作为标准品并每日一次皮下施用。每日记录爪体积和关节指数。分析表明，数据有统计学显著性。
在实验终止时，处理小鼠的足爪进行组织病理学评价。
足爪厚度的减少和关节指数的降低的数据归纳于表8中。
表8：实施例1的提取物和化合物1在CIA模型中的功效
Figure A20068004077000241
组织病理学分析：
评价了实施例1的提取物和化合物1对于关节炎(CIA)DBA/1J小鼠的疾病的有益作用。在对滑膜关节进行苏木素伊红染色和番红O染色后进行显微镜检查。组织病理学分析表明，与载体处理组相比，无论是实施例1的提取物，还是化合物1在减少软骨破坏、骨破坏和滑膜炎方面均发挥了有益作用。
结论：实施例1的提取物和化合物1均在关节炎的CIA模型中发挥有益作用。
毒性研究
实施例14
急性口服毒性
按照药品和化妆品法案(1940，印度)中的“Y方案”中发布的指导原则，测试了实施例1提取物对Sprague Dawley大鼠的急性口服毒性。
将悬于0.5％Tween 80水溶液中的实施例1的提取物以2000mg/kg体重的最大实用剂量作为单剂量通过管饲法口服施用给由5只雄性大鼠和5只雌性大鼠组成的组。在施用后14天内观察动物的死亡率和毒性症状，并记录其体重。在研究结束时对所有大鼠进行尸体检查。
结论：在本研究中，以2000mg/kg体重的最大实用剂量给SpragueDawley大鼠单剂量口服施用实施例1的提取物，未引起处理大鼠的任何死亡。
发现在以单剂量给Sprague Dawley大鼠口服施用后，无论对于雄性还是雌性，实施例1提取物的半数致死剂量(LD50)均大于2000mg/kg体重。
实施例15
亚急性口服毒性
按照药品和化妆品法案(1940，印度)中的“Y方案”中发布的指导原则，进行了实施例1提取物对Sprague Dawley大鼠的亚急性口服毒性(28天)研究。
通过管饲法给各组Sprague Dawley大鼠(每组6只雄性大鼠和6只雌性大鼠)每日分别施用0、250、500或1000mg/kg体重的剂量的实施例1提取物，持续28天，并在第29天将大鼠处死以评价其毒性。每天检查大鼠的毒性症状。在实验期间记录各个大鼠的体重和食物消耗以及所有的死亡事件和不健康症状。在研究结束时进行血液的实验室研究。
当最终处死时，对所有的动物进行完全的尸体检查并记录某些器官的重量。对来自对照组和高剂量组的所有动物的所有方案列出的组织均进行组织病理学评价。
所有接收1000mg/kg以及至多1000mg/kg剂量的实施例1提取物的动物在处理期间均存活。在任何的处理动物中，均未观察到毒性的临床症状。关于体重增加和食物摄入的数据表明，在1000mg/kg剂量以及至多该剂量，没有因测试物引起不良反应。
结论：基于本研究的发现，在口服施用28天后，在大鼠中未发现实施例1提取物的可观察到的不良反应水平(NOAEL)超过1000mg/kg体重。
制剂
实施例16
胶囊的制备
一般方法：称重规定量的成分01到05并转移至合适的混合器中。将内容物充分混合并加入成分09、10和11，继续混合。向此混合物中加入成分06、07和08并将物料混合30-45分钟。将混合物通过40目筛，并用于填充胶囊。
表9：绒毛戴星草的胶囊制剂
每粒胶囊含有
  序号   成分   量％W/W
  01   实施例1的提取物   69.72
  02   对羟基苯甲酸甲酯钠   0.39
  03   对羟基苯甲酸丙酯钠   0.13
  04   Bromerol   0.18
  05   苯甲酸钠   0.39
  06   滑石   2.61
  07   硬脂酸镁   1.74
  08   Aerosil   0.87
  09   乙醇酸淀粉钠   2.18
  10   乳糖   8.72
  11   磷酸氢钙   13.07
实施例17
片剂的制备
一般方法：称重规定量的成分01到05并转移至合适的混合器中。加入成分13并将湿物料充分混合。向其中加入成分09、10、11和12，并继续混合直到得到均匀的物料。将此湿物料通过16目筛并在70℃±5℃干燥湿颗粒。向上述颗粒中加入成分06、07和08并将物料混合30-45分钟。然后将混合物通过40目筛并使用合适的冲头压片。
表10：绒毛戴星草的片剂制剂
每片含有
  序号   成分   量％W/W
  01   实施例1的提取物   66.53
  02   对羟基苯甲酸甲酯钠   0.37
  03   对羟基苯甲酸丙酯钠   0.12
  04   Bromerol   0.17
  05   苯甲酸钠   0.37
  06   滑石   2.50
  07   硬脂酸镁   1.66
  08   Aerosil   0.83
  09   乙醇酸淀粉钠   2.50
  10   乳糖   8.32
  11   磷酸氢钙   12.47
  12   淀粉   4.16
  13   异丙醇     ＊
＊仅用于制粒
实施例18
糖浆的制备
一般方法
称重成分01并在连续搅拌下向其中加入成分15。向其中加入称重量的成分03、04、05、06、08、09、10、11、12和14，并连续搅拌以溶解。称重成分02和13并将其溶于成分07中。向其中加入纯化水并调整体积到10ml。通过压滤机/尼龙布过滤所得的溶液。
表11：绒毛戴星草的糖浆制剂
每10ml糖浆含有
  序号   成分   量％W/W
  01   实施例1的提取物   4
  02   胡椒薄荷粉   0.025
  03   蜂蜜   0.25
  04   糖   50
  05   山梨醇溶液70％   5
  06   液体葡萄糖   10
  07   丙二醇   5
  08   一水柠檬酸   0.5
  09   对羟基苯甲酸甲酯钠   0.2
  10   对羟基苯甲酸丙酯钠   0.02
  11   苯甲酸钠   0.2
  12   溴硝丙二醇   0.02
  13   清凉薄荷′S′味   0.25
  14   焦糖色素   0.75
  15   纯化水   补足至10ml
实施例19
乳膏制剂的制备
一般方法
称重成分01并将其悬于成分17中。熔融成分02至07。称重成分08、09、10、11、13和14并与成分18的一部分混合。称重成分12并加入到成分18的余下部分中，与成分15和16一起混合。所有步骤的成分在55℃混合并均化，使其冷却并包装于合适的管中。
表12：绒毛戴星草的乳膏制剂
每100g乳膏含有
  序号   成分   量％W/W
  01   实施例1的提取物   05.00
  02   鲸蜡硬脂醇-12.0g   12.00
  03   Cetomacragol-1000   03.00
  04   单油酸失水山梨醇酯   02.00
  05   S.E.单硬脂酸甘油酯   03.00
  06   内豆蔻酸异丙酯   02.50
  07   硬脂酸   02.50
  08   对羟基苯甲酸甲酯钠   00.40
  09   对羟基苯甲酸丙酯钠   00.08
  10   苯氧乙醇   00.52
  11   EDTA二钠   00.02
  12   卡波姆-940   00.75
  13   月桂基硫酸钠   00.75
  14   聚二甲硅氧烷   01.00
  15   三乙醇胺   01.00
  16   丙二醇   05.00
  17   异丙醇   10.00
  18   水   50.48
实施例20
凝胶制剂的制备
一般方法
称重成分01并悬于成分06中。将成分04溶于成分07中。混合成分05和08。混合成分02和03。将混合物充分混合并包装于合适的管中。
表13：绒毛戴星草的凝胶制剂
每100g凝胶含有
  序号   成分   量％W/W
  01   实施例1的提取物   05.00
  02   二丁基羟基甲苯   00.025
  03   丁基羟基茴香醚   00.025
  04   卡波姆-940   02.95
  05   聚乙二醇-400   30.00
  06   异丙醇   05.00
  07   丙二醇   55.00
  08   单油酸失水山梨醇酯   02.00
实施例21
软膏制剂的制备
一般方法
称重成分02至06并在合适的容器中熔融。向其中加入成分01。向此混合物中加入成分07和08。将成分充分混合并包装于合适的管中。
表14：绒毛戴星草的软膏制剂
每100g软膏含有
  序号   成分   量％W/W
  01  实施例1的提取物   5.00
  02  白蜂蜡   15.00
  03  固体石蜡   25.00
  04  微晶蜡   15.00
  05  白软石蜡   30.00
  06  轻质液体石蜡   09.95
  07  二丁基羟基甲苯   0.025
  08  丁基羟基茴香醚   0.025
实施例22
片剂的制备
一般方法
分别称重成分01和02，通过20目筛并混合。称重成分03至07并通过40目筛。混合成分03、04、05和07并向此混合物中加入成分01和02。向此混合物中加入成分06并混合。使用合适的机器工具压制所得的润滑的混合物。
表15：化合物1的片剂制剂
每片含有
  序号   成分   量％W/W
  01   化合物1   58.33
  02   微晶纤维素   35.97
  03   滑石   2.50
  04   乙醇酸淀粉钠   1.60
  05   胶体二氧化硅   0.80
  06   硬脂酸镁   0.50
  07   喹啉黄色素   0.30
实施例23
片剂的制备
一般方法
分别称重成分01和02并通过20目筛。在搅拌下将成分04溶于成分08中。使用粘合溶液将上述混合物制粒。使湿物料通过合适的筛。在室温(25℃)下干燥此过筛的物料，然后在约40℃下干燥。使干物料通过合适的筛筛分。使成分03、05和07分别通过40目筛并混合。将其加入该干物料中并混合。向此混合物中加入成分06并使用合适的机器工具压制此润滑的混合物。
表16：化合物1的片剂制剂
每片含有
  序号   成分   量％W/W
  01   化合物1   61.40
  02   一水乳糖   35.15
  03   交联羧甲基纤维素钠   1.40
  04   聚乙烯吡咯烷酮   0.85
  05   胶体二氧化硅   0.35
  06   硬脂酸镁   0.50
  07   喹啉黄色素   0.35
  08   异丙醇   足量
实施例24
胶囊的制备
一般方法
分别称重成分01和02，通过20目筛并混合。称重成分03并通过40目筛筛分。混合所有的成分并使用成分04润滑。使用合适的机器工具将此混合物填充进空的硬明胶胶囊中。
表17：化合物1的胶囊制剂
每粒胶囊含有
  序号   成分   量％W/W
  01   化合物1   98.59
  02   微晶纤维素   0.75
  03   胶体二氧化硅   0.47
  04   硬脂酸镁   0.19

Claims (24)

1.一种组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的植物绒毛戴星草(Sphaeranthus indicus)的头状花序和果序的提取物以及药学可接受载体。
2.权利要求1的组合物，其中所述绒毛戴星草的提取物包含生物活性标志物。
3.权利要求2的组合物，其中包含于所述绒毛戴星草提取物中的所述生物活性标志物是3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)。
4.权利要求3的化合物，其中所述绒毛戴星草的提取物包含2-9％的所述化合物1。
5.一种组合物，其包含作为活性成分的治疗有效量的3a-羟基-5a，9-二甲基-3-亚甲基-3a，4，5，5a，6，7，8，9b-八氢-3H-萘并[1，2-b]呋喃-2-酮(化合物1)以及药学可接受载体。
6.权利要求1至5中任一项的组合物，其中提供所述组合物用于治疗由肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的病症。
7.权利要求1至5中任一项的组合物，其中所述组合物适于治疗炎性病症。
8.权利要求7的组合物，其中所述炎性病症是由TNF-α所介导的炎性病症。
9.权利要求7的组合物，其中所述炎性病症是由白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-8)所介导的炎性病症。
10.权利要求7的组合物，其中所述炎性病症是由细胞间粘附分子1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)和E-选择蛋白所介导的炎性病症。
11.权利要求1至5中任一项的组合物，其中将所述组合物口服、局部或透皮施用给需要治疗炎性病症的对象。
12.权利要求11的组合物，其中所述组合物配制成片剂、胶囊或糖浆的形式供口服施用。
13.权利要求11的组合物，其中所述组合物配制成乳膏、凝胶或软膏的形式供局部施用。
14.权利要求7至13中任一项的组合物，其中所述炎性病症选自炎性肠病、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、难治性类风湿关节炎、慢性非类风湿性关节炎、骨质疏松/骨重吸收、冠心病、动脉粥样硬化、脉管炎、溃疡性结肠炎、银屑病、成年型呼吸窘迫综合征、糖尿病、皮肤迟发型超敏反应病症和阿尔茨海默病。
15.治疗炎性病症的方法，其包括给有此需要的对象施用治疗有效量的根据权利要求1至5中任一项的组合物。
16.权利要求15的方法，其中所述组合物配制成供口服施用。
17.权利要求15的方法，其中所述组合物配制成供局部施用。
18.权利要求15的方法，其中所述组合物配制成供透皮施用。
19.权利要求15的方法，其中所述炎性病症选自炎性肠病、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、难治性类风湿关节炎、慢性非类风湿性关节炎、骨质疏松/骨重吸收、冠心病、动脉粥样硬化、脉管炎、溃疡性结肠炎、银屑病、成年型呼吸窘迫综合征、糖尿病、皮肤迟发型超敏反应病症和阿尔茨海默病。
20.权利要求19的方法，其中所述炎性病症是类风湿性关节炎。
21.权利要求1至5中任一项的组合物，还包含至少一种抗炎剂。
22.权利要求21的组合物，其中所述抗炎剂选自泼尼松龙、氢化可的松、氨甲喋呤、柳氮磺胺吡啶、萘普生、双氯酚酸、布洛芬。
23.根据权利要求1至5中任一项的组合物在制备用于治疗炎性病症的药物中的用途。
24.权利要求23的组合物的用途，其中所述炎性病症选自炎性肠病、类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、难治性类风湿关节炎、慢性非类风湿性关节炎、骨质疏松/骨重吸收、冠心病、动脉粥样硬化、脉管炎、溃疡性结肠炎、银屑病、成年型呼吸窘迫综合征、糖尿病、皮肤迟发型超敏反应病症和阿尔茨海默病。
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