CN101293012A - 一种抗病毒金银花中药复方制剂及制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗病毒金银花中药复方制剂,是由金银花提取物、甘草提取物、黄芩提取物制成,组方为纯中药制剂,具有明显的抗病毒、抗菌、解热镇痛、抗炎和祛痰的作用,用于治疗由外感风热、热毒内蕴所致的发热、咳嗽喘促、咽喉肿痛、口干等症状。也用于治疗临床上呼吸道感染,急慢性扁桃体炎、肺炎、咽喉炎见上述证候者,临床症状消失迅速,疗效显著。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗病毒的中药,进一步讲是提供了一种抗病毒金银花复方中药注射制剂,同时还公开了其制备工艺,属于中药学制药技术领域。
背景技术
目前,大多数感冒都是由病毒感染引起的,称为病毒性感冒,流行性广,一年四季经常发生,病毒性感冒如不能及时得到根治,还会引起其它疾病的发生,治疗病毒性感冒的药物虽然种类繁多,但疗效显著的药物还很少见到,因而严重地影响了人们的工作、学习和生活。
发明内容
本发明公开一种抗病毒金银花复方中药制剂,将其主要活性成分充分提取,制成制剂,具有明显的抗病毒、抗菌、解热镇痛、抗炎和祛痰的作用。
本发明还提供了上述中药制剂的制备工艺,适合于工业化生产。
本发明的中药制剂是由以下重量份数原料制成的:
金银花提取物40~55、甘草提取物18~25、黄芩提取物25~35。
具体制备工艺如下:
1、金银花提取物制备:金银花加8~14倍量水煎煮提取二次,每次0.5~1.5小时,提取液滤过,合并。水提取液减压浓缩至1g生药/ml提取液,相对密度1.150-1.170(25℃);在搅拌下,向浓缩液中加入95%乙醇3.7L,使药液含醇量至75%,静置24小时;取上清醇溶液,过滤,滤液回收乙醇至流浸膏状(无醇味),加水1.0L搅拌溶解,过滤,得到每ml相当于1g生药的滤液,相对密度1.060-1.080(25℃);滤液通过装有2L(乙醇溶胀后体积)经处理的SP-700大孔吸附树脂柱,依次用4倍量树脂柱体积的水洗脱,水洗脱液弃去;再用6倍量树脂体积的20%乙醇洗脱,减压回收20%乙醇洗脱液至浓缩液(相对密度1.080),冷冻干燥,粉碎,即得金银花提取物。
2、金银花提取物45g溶于200ml注射用水,溶解后,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌调pH值在6.50~7.00之间;
3、甘草提取物20g加入200ml注射用水中,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌,溶解后,调pH值在6.50~7.00之间;
4、黄芩提取物35g加入400ml注射用水中,边加边搅拌,充分混悬后,加10%NaOH(0.25M)溶液调pH值至完全溶解为止,溶液呈黄绿色溶液,调pH值在6.50~7.00之间;
5、将上述三种提取物的水溶液充分混合,pH值控制在6.50~7.00之间。
6、用0.45μm微孔滤膜过滤后,加注射用水至1000ml,在无菌洁净室内,采用截留相对分子质量1万的超滤膜过滤后,灌装,每瓶1ml药液。
在本发明中,以金银花为君药,发挥清热解毒,凉散风热之功;佐以黄芩为清热燥湿,泻火解毒之能;就甘草的补脾益气,清热解毒,祛痰止咳,缓急止痛之力,调和诸药共奏抗炎、解热、抗菌、抗病毒之效,治疗由外感风热引起的感冒、发热、咳嗽、咽喉肿痛等病症,还可适用于细菌或病毒引起的高热等危急重症患者的治疗。
以下实验证明本发明药物制剂在抗病毒的药效
①抗病毒作用
通过观察本发明制剂的体内、体外抗病毒作用,明确其抗病毒作用。
本发明制剂对病毒所致细胞病变作用的影响:
用细胞维持液分别将病毒唑注射液、本发明制剂稀释成不同浓度,加入已长成单层细胞管中,每一稀释度接种4支细胞管,置35℃培养,连续观察7天,考察药物对细胞毒性作用。
病毒毒力测定:用细胞维持液分别将流感病毒亚甲1型(H1N1)、腺病毒3型(ADV3)、单纯疱疹病毒II型(HSV-II)三种病毒以10倍递次稀释成5个不同稀释度,分别加入已长成单层细胞的96孔培养板中,然后置35℃、5%CO2温箱内孵育2小时,更换维持液,连续观察3小时,记录细胞病变程度。同时设正常细胞对照组。计算病毒半数感染量(TCID50)。以测定病毒毒力。
药物对三种病毒的抑制测定:分别以200ul30 TCID50的三种病毒感染HeLa细胞,37℃、5%CO2温箱内孵育1小时吸出,加入无毒界限的病毒唑和本发明制剂细胞维持液,35℃、5%CO2温箱内继续培养,观察3天,记录细胞病变程度,测定药物对三种病毒的抑制。
本发明制剂对小鼠流感病毒性肺炎的影响:
取昆明种小鼠,随机分组,取小鼠肺适应性流感病毒8个稀释度,每只小鼠经乙醚轻度麻醉后分别滴鼻感染,以死亡和生存为观察指标,24小时死亡的不予统计。每天观察,直至感染后14天为止,计算出病毒的半数致死量(LD50)。
另取小鼠随机分组,设本发明制剂三个组、病毒唑(70mg/kg)、病毒对照组、正常组共六个组。乙醚轻度麻醉后,以15LD50的流感病毒液滴鼻感染小鼠,正常组以生理盐水滴鼻。于感染前一天开始腹腔注射给药,连续5天,每日1次,病毒对照组、正常对照组给予同体积的生理盐水,感染后4天处死小鼠,取出鼠肺,冲洗两次,吸干表面水分,称出肺重,计算肺指数与抑制率,与病毒对照组,进行组间t检验。
本发明制剂对小鼠体内病毒颗粒增值的影响:
取小鼠随机分组,同样设本发明制剂三个组、病毒唑(70mg/kg)、病毒对照组、正常组共六个组。乙醚轻度麻醉后,以1000LD50的流感病毒液滴鼻感染小鼠,正常组以生理盐水滴鼻。于感染前一天开始腹腔注射给药,每日1次,病毒对照组、正常对照组给予同体积的生理盐水。在病毒增殖高峰时(感染后48小时)解剖取肺,固定,制成组织切片后,加入FM1兔免疫血清,再加标有荧光素的氧抗兔IgG-FITC,每只小鼠镜下计数30个细支气管中含有特异性荧光颗粒的支气管数,计算出各组特异性荧光颗粒细支气管比率,进行组间比较。
结论:
病毒唑浓度在250μg/ml以下,本发明制剂浓度在1000μg/ml,对HSV-II、H1N1、ADV3细胞均无毒性作用。
H1N1病毒、ADV3病毒、HSV-II病毒对Hela细胞的TCID50分别是10-3.5/200μl、10-2.5/200μl、10-3.2/200μl。
1000μg/ml的本发明制剂对流感病毒亚甲1型(H1N1)、腺病毒3型(ADV3)、单纯疱疹病毒II型(HSV-II)三种病毒致Hela细胞病变有较好的保护作用,尤其对H1N1、HSV-II病毒有较强的抗病毒作用。
对小鼠流感病毒性肺炎模型,本发明制剂75、150mg/kg两个剂量组能显著降低小鼠肺指数和升高肺指数抑制率,与病毒唑对照组比较有明显差异性。
对小鼠肺内病毒颗粒增殖的研究发现,本发明制剂37.5、75、150mg/kg三个剂量下出现的特异性荧光颗粒比率分别是58.9%、53.4%、42.1%,具有一定的量效关系;表明对小鼠肺内病毒颗粒增殖有显著的抑制作用。
②抗菌作用
体外抑菌作用:将本发明制剂用灭菌水稀释成不同浓度,分别定量地加到热溶解后的肉汤琼脂培养基中,搅匀,制成含药培养皿,在用接种器接种各种细菌的种菌液,观察各平皿的菌落生长情况,确定本发明制剂的最小抑菌浓度。
对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用:取昆明小鼠随机分5组,即本发明制剂高、中、低剂量组,双黄连组、生理盐水对照组,各组均尾静脉注射给药,每日1次,连续5天。末次给药后30Min,腹腔注射金黄色葡萄球菌培养液,观察48h内小鼠的死亡数。
结果显示本发明制剂对甲型溶血性链球菌,乙型溶血性链球菌,卡他奈瑟氏菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌有不同程度的体外抑制作用,其中对乙型溶血性链球菌有较强的抑制作用,最小抑菌浓度15.62。
感染金黄色葡萄球菌小鼠在给予本发明制剂高剂量后,其死亡率明显低于生理盐水组(p<0.01),与双黄连组相差不大。
③抗炎作用:通过对小鼠足跖肿胀模型的影响,对醋酸所致小鼠毛细血管通透性升高的影响,对二甲苯致小鼠耳壳肿胀的影响的研究,明确本发明制剂的抗炎作用。
对小鼠足跖肿胀的影响:
取小鼠随机分成5组,本发明制剂低、中、高剂量、阿司匹林,生理盐水对照组。致炎前10min尾静脉注射给药1次,以1%琼脂为致炎剂,测量致炎后0.5、1、2、4、6h足跖容积变化,以致炎前后的差值作为肿胀度,并按下式计算足肿胀百分率,进行组间比较。
对小鼠毛细血管通透性的影响:
取小鼠随机分成5组,即本发明制剂低、中、高剂量,阿司匹林组,生理盐水对照组。各组均尾静脉注射给药,每天1次,连续3天。最后1次给药后10min尾静脉注射伊文思蓝,并立即腹腔注射醋酸,30分钟后脱颈椎处死小鼠,剪开腹腔,用生理盐水洗涤,吸出洗涤液,合并后加入生理盐水至10ml,离心取上清液,在590nm处测定吸收度,进行组间比较。
对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
取小鼠随机分组,即本发明制剂低、中、高剂量,阿司匹林组,生理盐水对照组。各组均尾静脉注射给药,每天1次,连续3天。最后1次给药后10min,以二甲苯棉球接触小鼠右耳正反两面5秒,15分钟后处死,用打孔器将小鼠双耳同部位等面积切下,称重,计算右耳炎症肿胀度,进行组间比较。
结果显示:
小鼠足跖致炎后半小时开始,本发明制剂中、高剂量可显著降低足跖肿胀率,与对照组相比具有显著性差异,且具有良好的良效关系。本发明制剂低剂量有降低肿胀率的趋势。
本发明制剂中、高剂量能显著降低伊文思蓝吸光度,与对照组相比具有显著性差异。
本发明制剂中、高剂量均能使致炎后耳增重百分率下降,与对照组相比具有显著性差异,且呈量效依赖性。其中本发明制剂低剂量有降低致炎耳增重百分率的趋势。
④解热作用通过观察对伤寒、副伤寒、甲乙三联菌致家兔发热模型体温的影响,对酵母致大鼠发热模型体温的影响,明确其解热作用。
对家兔解热作用
家兔随机分组,试验前测定基础体温,耳静脉注射伤寒、副伤寒、甲乙三联菌苗,同时静脉注射给药,分别于致热后1、2、3、4小时各测肛温1次,以不同时间肛温与基础肛温之差值为体温变化指标,进行组间比较。
对大鼠解热作用
取大鼠测基础体温,每组皮下注射酵母菌悬液,注射4小时后测量大鼠的肛温,按体温增高值将大鼠随机均分成5组,致热10分钟后,分别尾静脉注射给药,给药后0、0.5、1、2、4、小时测量肛温。以每只大鼠个不同时间点的体温与基础体温的差值作为体温变化的指标,进行组间比较。
结果显示:
本发明制剂对体温升高的家兔,在给药后1、2、3、4小时有明显的抑制作用,与对照组相比具有显著差异,且本发明制剂抑制体温升高的作用呈一定的量效关系,阿司匹林亦有显著解热降温作用。
本发明制剂中、高剂量对酵母致热的大鼠均有明显的解热降温的作用,在致热后0.5小时到4小时内与对照组的差异具有性意义。同阿司匹林比较,本发明制剂降温作用比较缓和平稳,且呈一定的量效关系。
⑤对小鼠的祛痰作用
通过观察对小鼠气管段酚红排泌量的影响,明确其所具有的祛痰作用。
取小鼠随机分组,试验前除灌胃给于氯化铵外,其余各组均尾静脉注射相应药液,每天1次,连续2天,于末次给药后10min,腹腔注射苯酚红,30分钟处死动物,剥离气管周围组织,剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管,用滤液吸取表面血液,插入7号针头,以5%碳酸钠冲洗3次,冲洗液合并,以苯酚红标准管比色,在546nm处测OD值,进行比较
结果显示:
本发明制剂各剂量组及氯化铵组均能显著升高气管段排泌酚红OD值,提示酚红排出率明显增高,且各剂量组间呈明显的量效关系,本发明制剂中、高剂量组增强小鼠气管排泌苯酚红的作用优于氯化铵组,表明此制剂具有明显的祛痰作用。
⑥对小鼠的镇痛作用
通过观察对醋酸致小鼠扭体的影响,明确其所具有的镇痛作用。
取小鼠随机分组,试验前各组小鼠分别尾静脉注射相应药液,对照组给予等体积的生理盐水,每天1次,连续3天,于最后1次给药后腹腔注射醋酸,观察30分钟内各组动物由醋酸诱发的扭体数,进行组间比较。
结果显示本发明制剂高、中、低剂量能使醋酸致扭体次数明显下降,与对照组比较有显著性差异,其中尤以本发明制剂高剂量作用显著,表明具有明显的镇痛作用。
本发明的积极效果在于:组方为纯中药制剂,具有明显的抗病毒、抗菌、解热镇痛、抗炎和祛痰的作用,临床症状消失迅速,治疗由外感风热或上呼吸道感染、肺炎、扁桃体炎等引起的感冒、发热、咳嗽、咽喉肿痛等病症,还可适用于细菌或病毒引起的高热等危急重症患者的治疗。
具体实施方式
通过以下实施例进一步举例描述本发明,并不以任何方式限制本发明,在不背离本发明的技术解决方案的前提下,对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1
称取金银花药材25kg,加12倍量水煎煮提取二次,每次1.0小时,提取液滤过,合并。水提取液减压浓缩至1g生药/ml(相对密度1.150,25℃),浓缩液加95%乙醇92.5L(搅拌),使药液含醇量至75%,静置24小时。醇溶液回收乙醇至流浸膏状,加水25.0L溶解,离心甩滤(2000转),滤液(1g生药/ml,相对密度1.060,25℃)通过经处理的SP-700大孔吸附树脂(50L),用4倍量树脂柱体积的水洗脱,弃去。再用5倍量树脂体积的18%乙醇洗脱,减压回收18%乙醇洗脱液至浓缩液(相对密度1.080),冷冻干燥,粉碎,即得金银花原料药。
2.金银花提取物的生产和测试结果
按照上述条件和方法,在中试基地进行中试生产。结果见下表。
金银花提取物生产和测试结果
由上表可知,中试产品的产量和质量稳定。工艺流程简单,操作简便,仅使用水和乙醇,且乙醇可以回收再利用;在中试实验过程中,采用HPLC跟踪检识,由检识结果发现第一批中试试验中树脂用18%的乙醇洗脱,得到的化学成分与实验室用20%乙醇洗脱的有效部位中化学成分相同,因此将中试试验第2~4批改用18%乙醇洗脱,富集有效部位。采用树脂法可富集有效成分,除杂质效果好,树脂再生简便,可反复使用。完全适合于工业生产。
实施例2
1)将实施例1制备的金银花提取物45g溶于200ml注射用水,溶解后,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌调pH值在6.50~7.00之间;
2)甘草提取物20g加入200ml注射用水中,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌,溶解后,调pH值在6.50~7.00之间;
3)黄芩提取物35g加入400ml注射用水中,边加边搅拌,充分混悬后,加10%NaOH(0.25M)溶液调pH值至完全溶解为止,溶液呈黄绿色溶液,调pH值在6.50~7.00之间;
4)将上述三种提取物的水溶液充分混合,pH值控制在6.50~7.00之间;
5)用0.45μm微孔滤膜过滤后,加注射用水至1000ml,在无菌洁净室内,采用截留相对分子质量1万的超滤膜过滤后,灌装,每瓶1ml药液。
实施例3
1)将实施例1制备的金银花提取物40g溶于200ml注射用水,溶解后,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌调pH值在6.50~7.00之间;
2)甘草提取物18g加入200ml注射用水中,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌,溶解后,调pH值在6.50~7.00之间;
3)黄芩提取物25g加入400ml注射用水中,边加边搅拌,充分混悬后,加10%NaOH(0.25M)溶液调pH值至完全溶解为止,溶液呈黄绿色溶液,调pH值在6.50~7.00之间;
4)将上述三种提取物的水溶液充分混合,pH值控制在6.50~7.00之间;
5)用0.45μm微孔滤膜过滤后,加注射用水至1000ml,在无菌洁净室内,采用截留相对分子质量1万的超滤膜过滤后,灌装,每瓶1ml药液。
实施例4
1)将实施例1制备的金银花提取物55g溶于200ml注射用水,溶解后,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌调pH值在6.50~7.00之间;
2)甘草提取物25g加入200ml注射用水中,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌,溶解后,调pH值在6.50~7.00之间;
3)黄芩提取物35g加入400ml注射用水中,边加边搅拌,充分混悬后,加10%NaOH(0.25M)溶液调pH值至完全溶解为止,溶液呈黄绿色溶液,调pH值在6.50~7.00之间;
4)将上述三种提取物的水溶液充分混合,pH值控制在6.50~7.00之间;
5)用0.45μm微孔滤膜过滤后,加注射用水至1000ml,在无菌洁净室内,采用截留相对分子质量1万的超滤膜过滤后,灌装,每瓶1ml药液。
Claims (2)
1、一种抗病毒金银花中药复方制剂,是由以下原料按重量份数比制成的:
金银花提取物40~55、甘草提取物18~25、黄芩提取物25~35。
2、权利要求1所述的中药复方制剂的制备工艺,包括以下步骤:
1)金银花提取物制备:金银花加8~14倍量水煎煮提取二次,每次0.5~1.5小时,提取液滤过,合并;水提取液减压浓缩至1g生药/ml提取液,相对密度1.150-1.170(25℃);在搅拌下,向浓缩液中加入95%乙醇,使药液含醇量至75%,静置24小时;取上清醇溶液,过滤,滤液回收乙醇至流浸膏状,加水搅拌溶解,过滤,得到每ml相当于1g生药的滤液,相对密度1.060-1.080(25℃);滤液通过SP-700大孔吸附树脂柱,水洗脱,水洗脱液弃去;再用6倍量树脂体积的20%乙醇洗脱,减压回收20%乙醇洗脱液至浓缩液(相对密度1.080),冷冻干燥,粉碎,即得金银花提取物;
2)将步骤1)提取物40~55g溶于200ml注射用水,溶解后,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌调pH值在6.50~7.00之间;
3)甘草提取物18~25g加入200ml注射用水中,加入10%NaOH(0.25M)溶液,边加边搅拌,溶解后,调pH值在6.50~7.00之间;
4)黄芩提取物25~35g加入400ml注射用水中,边加边搅拌,充分混悬后,加10%NaOH(0.25M)溶液调pH值至完全溶解为止,溶液呈黄绿色溶液,调pH值在6.50~7.00之间;
5)将上述三种提取物的水溶液充分混合,pH值控制在6.50~7.00之间;
6)用0.45μm微孔滤膜过滤后,加注射用水至1000ml,在无菌洁净室内,采用截留相对分子质量1万的超滤膜过滤后,灌装,每瓶1ml药液。
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