CN101292042A - 癌性疾病调节抗体 - Google Patents

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CN101292042A CNA200680036732XA CN200680036732A CN101292042A CN 101292042 A CN101292042 A CN 101292042A CN A200680036732X A CNA200680036732X A CN A200680036732XA CN 200680036732 A CN200680036732 A CN 200680036732A CN 101292042 A CN101292042 A CN 101292042A
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Abstract

本发明涉及一种使用新型筛选模式制备患者癌性疾病调节抗体的方法。该方法利用癌细胞细胞毒性作用作为指标来分离抗癌抗体，使制备用于诊断和治疗的抗癌抗体成为可能。该抗体可用于辅助肿瘤分期和诊断，还可用于治疗原发性肿瘤和肿瘤转移。该抗癌抗体能够与毒素、酶、放射性化合物和造血细胞偶联。

Description

癌性疾病调节抗体
引用的相关申请
本申请要求2005年8月2日递交的申请号为60/705,073的临时申请的权益，将其内容通过引用并入本文。
发明领域
本发明涉及癌性疾病调节抗体(CDMAB)的分离和制备，以及这些CDMAB在诊断和治疗过程中的应用，任选地其与一种或多种化学治疗剂联合使用。本发明进一步涉及利用本发明的CDMAB的结合分析。
发明背景
用于癌症治疗的单克隆抗体：每个患有癌症的个体都是独特的，由于个体的差异，其患有的癌症也不同于其他癌症。尽管如此，目前的治疗对患有同期同类型肿瘤的所有患者采用相同的方式。至少30％的患者的一线治疗是失败的，这样就造成更多轮次的治疗，增加了治疗失败、肿瘤转移及最终死亡的可能性。一种优越的治疗方式应该是针对特定个体的个体化治疗。目前唯一采用个体化治疗的方式是外科手术。化疗和放疗不能针对患者量身定做，而在大多数情况下，手术本身并不足以治愈癌症。
随着单克隆抗体的问世，发展个体化治疗的方法的可能性变得更为现实，因为每种抗体能对应单一的抗原决定簇。而且，制备针对多个抗原决定簇的集群(constellation)的抗体组合成为可能，该抗原决定簇集群唯一确定了某一特定个体的肿瘤。
认识到癌细胞和正常细胞的显著差异在于癌细胞含有转化细胞特异的抗原，科学界长期认为可以通过与这些癌抗原特异结合设计出特异靶向转化细胞的单克隆抗体；这样就产生了这样一种观点：单克隆抗体能够作为“魔术子弹(Magic Bullets)”消除癌细胞。然而，现在已经广泛地认识到单一的单克隆抗体不能用于癌症的所有情形，单克隆抗体可以按类来开发，用来治疗目标癌症。依照本发明公开的方法分离出的单克隆抗体已经显示出能够以有利于患者的方式调节癌性疾病进程，如通过降低肿瘤负荷，并且在本文中这些单克隆抗体将被称为癌性疾病调节抗体(CDMAB)或“抗癌”抗体。
目前，癌症患者通常可选择的治疗方式很少。目前的癌症治疗方法已经改善了总体存活率和发病率。然而，对特定的个体来说，这些改善的统计数据与他们个人情况的改善并无必然关系。
因此，如果提出一种方法学，使医生能够在同组患者中，独立于其他患者治疗每例肿瘤，这就使根据个人进行量身定做的独特治疗成为可能。理论上，这样一种治疗过程可以增加治愈率，产生更好的效果，从而满足长期的需要。
从历史上来看，多克隆抗体的应用在治疗人类癌症的方面取得的成功有限。一直用人类的血浆来治疗淋巴瘤和白血病，但很少有长期的好转或反应。而且，这种治疗方法重复性差，与化疗相比，没有更多的益处。像乳癌、黑色素瘤和肾细胞癌等实体肿瘤也用人类血液、黑猩猩的血清、人类血浆和马血清来治疗过，但相应的结果是不可预测和无效的。
有很多用单克隆抗体治疗实体肿瘤的临床试验。在20世纪80年代，就有至少四项针对人类乳腺癌的临床试验，在使用了针对特定抗原或基于组织特异性的抗体的至少47个患者中，只产生了一名应答者。直到1998年，才有了成功的临床试验，该试验联合使用人源化的抗Her2/neu抗体(
Figure A20068003673200071
)与顺铂。在这项试验中，对37个患者的反应进行了评估，大约有四分之一的患者有部分反应，另外四分之一有轻微的或稳定的病情发展。在反应者中，中位进展时间(median time to progression)是8.4个月，其中中位反应持续时间(median response duration)是5.3个月。
Figure A20068003673200072
在1998年被批准作为与
Figure A20068003673200073
联合使用的一线用药。临床试验结果表明，与单独接受治疗的人群的中位疾病进展时间(3.0月)相比，抗体治疗与
Figure A20068003673200075
的联合应用增加了患者的中位疾病进展时间(6.9月)。与
Figure A20068003673200077
联合治疗组的中位存活时间也轻微增加，与
Figure A20068003673200078
单独治疗组相比是22个月：18个月。除此之外，该抗体和
Figure A20068003673200079
联合应用组与单独使用
Figure A20068003673200081
组相比，在完全应答者(8％：2％)和部分应答者(34％：15％)的数量方面都有增加。然而
Figure A20068003673200082
和
Figure A20068003673200083
联合治疗相比
Figure A20068003673200084
单独治疗，导致了较高的心血管毒性发病率(分别是13％和1％)。
Figure A20068003673200085
治疗也只对那些过表达人类表皮生长因子受体2(Her2/neu)(通过免疫组化分析来确定)的患者有效。Her2/neu是一种目前还不知其功能或生物学重要配体的受体；大约25％的转移性乳腺癌患者过表达Her2/neu。因此远远不能满足患乳腺癌的患者的治疗需求。即便那些从
Figure A20068003673200086
治疗中受益的患者仍然需要化疗，随后还必须处理这类治疗至少在一定程度上带来的副作用。
研究结肠直肠癌的临床试验涉及到同时针对糖蛋白和糖脂靶标的抗体。对腺癌有某些特异性的诸如17-1A等抗体，已经在超过60例的患者中进行了2期临床实验，其中仅有1例患者有部分反应。在其他试验中，17-1A的使用在采用额外使用环磷酰胺实验方案的52例患者中，只产生了1例完全反应，2例轻微反应。到目前为止，17-1A作为III期结肠癌辅助治疗的III期临床试验还没有显示出改善的疗效。最初被批准用于显像的人源化鼠单克隆抗体也没能使肿瘤消退。
只有到了最近，使用单克隆抗体进行的结肠直肠癌的临床试验才有一些阳性结果。2004年，
Figure A20068003673200087
被批准作为表达EGFR的转移结肠直肠癌患者的二线治疗用药，这些患者对于基于依立替康(irinotecan)的化疗是耐受的。双臂II期临床研究和单臂研究的结果表明，与依立替康联合应用分别有23％和15％的反应率，中位疾病进展时间分别是4.1和6.5月。来自同一项双臂II期临床试验和另一项单臂研究的结果表明，
Figure A20068003673200089
单独治疗的反应率分别是11％和9％，中位疾病进展时间分别是1.5和4.2个月。
因而在瑞士和美国，
Figure A200680036732000810
与依立替康的联合应用，以及在美国，
Figure A200680036732000811
的单独治疗都已经被批准作为依立替康一线治疗失败的结肠癌患者的二线治疗。因此，与
Figure A200680036732000812
一样，
Figure A200680036732000813
治疗在瑞士只被批准作为单克隆抗体和化疗联合应用。此外，在瑞士和美国，
Figure A200680036732000814
治疗只被批准作为患者的二线治疗。同样，在2004年，
Figure A200680036732000815
被批准与基于静脉注射5-氟尿嘧啶的化疗联合应用，作为转移性结肠直肠癌的一线治疗。III期临床研究结果表明，联合应用
Figure A20068003673200091
和5-氟尿嘧啶，与单独使用5-氟尿嘧啶相比，延长了患者的中位存活时间(分别是20个月和16个月)。然而，还是与
Figure A20068003673200092
和
Figure A20068003673200093
一样，只被批准作为单克隆抗体与化疗联合应用。
对于肺脏、脑、卵巢、胰腺、前列腺和胃癌的治疗，疗效仍然很差。在II期临床试验中，得到了对于非小细胞肺癌最有希望的近期结果，其治疗包括与化疗试剂
Figure A20068003673200095
联合应用的偶联细胞杀伤药物阿霉素的单克隆抗体(SGN-15；dox-BR96，抗-唾液酸化的Lex)。是唯一经FDA批准的用于肺癌二线治疗的化疗药物。初始数据表明，与单独使用
Figure A20068003673200097
相比，总体存活率提高。参与本研究的62个患者中，三分之二接受了SGN-15与的联合治疗，剩下的三分之一接受了
Figure A20068003673200099
的单独治疗。接受SGN-15与联合治疗的患者中位总体存活时间是7.3个月，相比之下，接受单独治疗的患者的中位存活时间是5.9个月。与接受
Figure A200680036732000912
单独治疗的患者的1年和18个月的总体存活率为24％和8％相比，接受SGN-15与
Figure A200680036732000913
联合治疗的患者是29％和18％。进一步的临床试验在计划中。
临床前试验中，使用单克隆抗体治疗黑色素瘤取得了有限的成功。这些抗体中，极少有达到临床试验期的，且至今还没有一种得到批准，或在III期临床试验中显示出良好效果。
由于对明确促进疾病发生的30,000种已知基因产物中的相关靶点缺乏鉴定，使治疗疾病的新药的发现受阻。在肿瘤学研究中，潜在的药物靶点只因为其在肿瘤细胞中过表达这一事实而经常被选择。随后，这样鉴定的靶点通过与大量化合物的相互作用被筛选。就潜在抗体的治疗而言，这些候选化合物通常由依据Kohler和Milstein提出的基本原理(1975，Nature，256，495-497，Kohler and Milstein)制备单克隆抗体的传统方法所产生。从抗原免疫过的小鼠(举例来说，全细胞，细胞成分，纯化的抗原)收集脾细胞，并与永生的杂交瘤细胞伴侣融合。根据与靶抗原密切结合的抗体的分泌来筛选所产生的杂交瘤。已经用这些方法制备、并已基于它们的亲和性选择出许多针对癌细胞的诊断和治疗的抗体，包括
Figure A20068003673200101
和RITUXIMAB。这项策略的缺陷是双重的。首先，由于对组织特异性的癌症过程认识的贫乏及由此产生的鉴定这些靶标的过分简单的方法(诸如通过过表达来筛选)，与用于诊断和治疗的抗体结合的合适靶标的选择是有限的。其次，与受体有最大亲和性的药物分子启动或抑制信号通路的可能性最大这一假说并不总是成立。
尽管乳癌和结肠癌的治疗取得了一些进展，但是有效的抗体治疗的鉴定与开发对所有类型癌症而言都是不够的，不管是作为单一试剂还是联合治疗。
现有专利
美国第5,750,102号专利公开了一种方法，其中用可从患者的组织或细胞中克隆的MHC基因转染来自患者肿瘤的细胞。然后用这些转染的细胞给患者接种。
美国专利4,861,581公开了一种方法，它包括的步骤有：获取单克隆抗体，该抗体对哺乳动物肿瘤细胞和正常细胞的细胞内成分是特异的，对外部成分没有特异性；标记单克隆抗体；将该标记的抗体与哺乳动物的组织接触，该哺乳动物已接受杀灭肿瘤细胞的治疗；以及通过测量该标记抗体与退化的肿瘤细胞的细胞内成分的结合来确定治疗的效果。在制备针对人类细胞内抗原的抗体时，专利权所有人认识到肿瘤细胞是这类抗原的一个方便来源。
美国专利5,171,665提供了一种新型抗体及其制备方法。具体的，该专利叙述了一种单克隆抗体的制备，该抗体有与人类肿瘤(例如肠癌和肺癌)相关的蛋白抗原牢固结合的特性，而与正常细胞的结合程度弱得多。
美国专利5,484,596提供了一种癌症治疗的方法，该方法包括：手术去除人类癌症患者的肿瘤；处理肿瘤组织以获得肿瘤细胞；照射肿瘤细胞，使其能成活但不致瘤；用这些细胞来制备抑制原发性肿瘤复发，同时抑制肿瘤转移的患者疫苗。该专利讲述了能够与肿瘤细胞表面抗原反应的单克隆抗体的开发。如在第4栏，第45行等处提到的，专利权所有人在开发单克隆抗体中应用了自体肿瘤细胞，该单克隆抗体对人类肿瘤表现出活性特异的免疫治疗。
美国专利5,693,763讲述了人类癌细胞的糖蛋白抗原特性，其不依赖于起源的上皮组织。
美国专利5,783,186涉及诱导表达Her2的细胞凋亡的抗-Her2抗体、产生该抗体的杂交瘤细胞系、用该抗体和包括所述抗体在内的药物组合物治疗癌症的方法。
美国专利5,849,876描述了产生单克隆抗体的新的杂交瘤细胞系，该抗体针对从肿瘤和非肿瘤组织来源中纯化的粘液素抗原。
美国专利5,869,268涉及一种制备产生特异针对目标抗原的抗体的人类淋巴细胞的方法，制备单克隆抗体的方法及该方法制备的单克隆抗体。该专利特别涉及用于癌症诊断和治疗的抗-HD人类单克隆抗体的制备。
美国专利5,869,045涉及与人类癌细胞反应的抗体、抗体片段、抗体偶联物和单链免疫毒素。这些抗体的作用机制是双重的，其中该分子可与人类癌细胞表面的细胞膜抗原反应，而且该抗体能够进一步内化入癌细胞内，随后结合，使它们对形成抗体-药物，抗体-毒素的偶联物尤其有用。未经修饰的抗体在特定浓度下，也表现出细胞毒特性。
美国专利5,780,033公开了用于肿瘤治疗和预防的自身抗体的使用。不过，这种抗体是来自老年哺乳动物的抗核自身抗体。这里，自身抗体是指一种存在于免疫系统的天然抗体。因为自身抗体来自“老年哺乳动物”，所以就不要求自身抗体真正来自受治患者。此外，该专利公开了来自老年哺乳动物的天然单克隆抗核自身抗体及产生单克隆抗核自身抗体的杂交瘤细胞系。
发明概述
本申请利用美国专利6,180,357讲述的制备患者特异性的抗癌抗体的方法，分离编码调节癌性疾病的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。可以针对一个肿瘤专门制备这些抗体，从而使癌症治疗的个性化成为可能。在本申请公开的内容中，有杀伤细胞(细胞毒的)或抑制细胞生长(细胞生长抑制的)特性的抗癌抗体将在下文被称为细胞毒性作用。这些抗体可用于辅助癌症的分期和诊断，可以用于治疗肿瘤转移。这些抗体也可以通过预防性治疗的方式来预防癌症。与传统的药物发现模式下制备的抗体不同，用本方法制备的抗体可靶向以前没有表明对恶性组织生长和/或存活必需的分子和途径。而且，这些抗体的结合亲和性满足启动细胞毒性作用事件的要求，该事件可不顺从于更强的亲和性相互作用。同样，本发明的范围还包括将传统的化疗调节物质，比如放射核素，与本发明中的CDMAB偶联，从而使所述的化疗作用集中。该CDMAB也可与毒素、细胞毒性部分、酶(例如生物素结合酶)或造血细胞偶联，从而形成抗体偶联物。
个体化抗癌治疗前景将会带来患者治疗方式的变化。一个可能的临床情境就是在肿瘤出现时，就获取肿瘤样本并入库。通过该样本，从预存在的癌性疾病调节抗体组中对该肿瘤进行分型。对该患者进行常规分期，而所提供的抗体可用于该患者的进一步分期。用现有的抗体可直接对该患者进行治疗，且肿瘤特异性的抗体组可通过本文中列出的方法来制备或通过噬菌体显示库与本文公开的筛选方法合用来制备。既然其他肿瘤可能携带一些与被治疗肿瘤相同的抗原决定簇，制备的所有抗体将被加入到抗癌抗体库中。按照本方法制备的抗体可以用于治疗许多患有与这些抗体结合的肿瘤的患者的癌性疾病。
除抗癌抗体之外，患者可以选择接受目前推荐治疗作为多模式治疗方案的一部分。通过本方法分离的抗体对于非癌细胞相对无毒性这一事实允许大剂量使用抗体组合，要么单独应用，要么与传统的治疗联合应用。高治疗指数也允许短期内的重复治疗，从而降低了治疗抗性细胞出现的可能性。
如果患者的初期治疗产生耐药性或发生了转移，可以重复肿瘤特异性抗体的产生过程进行再次治疗。而且，该抗癌抗体可以与从该患者体内获得的红细胞偶联，重新输注到患者体内用于治疗转移肿瘤。目前几乎没有有效的治疗转移癌的方法，而转移通常预示着导致死亡的不良结果。然而，转移癌通常血管丰富，通过红细胞来运输抗癌抗体可以使抗体富集在肿瘤部位。即便在转移之前，大多数癌细胞也要依赖于宿主的血供来存活，与红细胞偶联的抗癌抗体对原位肿瘤同样有效。或者，所述抗体可以与其他的血细胞，比如淋巴细胞、巨噬细胞、单核细胞、自然杀伤细胞等偶联。
抗体有五类，每类都有其重链所赋予的功能。通常认为通过抗体依赖性细胞的细胞毒性作用或补体依赖性细胞毒性作用来介导裸抗体(naked antibodies)的癌细胞杀伤功能。例如，鼠IgM和IgG2a抗体能够结合补体系统的C-1组分来活化人类补体，从而活化导致肿瘤裂解的补体活化的经典途径。对于人类抗体，最有效的补体激活抗体通常是IgM和IgG1。鼠IgG2a和IgG3同种型抗体可以有效地召集具有Fc受体的细胞毒细胞，其导致单核细胞、巨噬细胞、粒细胞和某些淋巴细胞的细胞杀伤作用。人的IgG1和IgG3同种型抗体介导ADCC。
抗体介导的癌杀伤功能的另一可能机制是通过使用能够催化细胞膜及其相关糖蛋白或糖脂中各种化学键水解的抗体，即所谓的催化抗体。
抗体介导的癌细胞杀伤功能还有三种机制。第一种是抗体作为疫苗诱导机体产生针对癌细胞推定抗原的免疫反应。第二种是用抗体靶向生长受体，干扰其功能或下调该受体，以使其功能有效丧失。第三种是这类受体与细胞表面部分直接连接(ligation)的作用，其可导致直接的细胞死亡，比如与诸如TRAIL R1或TRAIL R2的死亡受体，或是与诸如αVβ3等的整合素分子连接。
癌症药物的临床应用是基于该药物在可接受的风险范围下对患者的益处。在癌症治疗过程中，存活率通常是追求的最主要的益处。但是，除了延长寿命之外，还有一些其他公认的益处。在治疗对存活率没有负面影响的情况下，这些其他益处包括症状减轻、防止副作用、延长复发或无疾病存活时间以及延长病情进展时间。这些标准是被普遍接受的，且像美国食品药品管理局(F.D.A.)等管理机构批准产生这些益处的药物(Hirschfeld et al. Critical Reviews in Oncology/Hematolgy 42：137-1432002)。除了这些标准之外，人们充分认识到还有一些其他的指标可以预测这些类型的益处。在某种程度上，美国FDA准许的快速审批程序肯定了可能预测患者受益的替代品的存在。到2003年末，有16种药物在这种程序下得到批准，在这些药物中，有四种进入了完全审批，即后续的研究已经显示了直接的患者受益，正如替代指标预测的那样。确定药物对实体肿瘤疗效的一个重要的指标是通过测定对治疗的反应来评价肿瘤负荷(Therasse et al.Journal of the National Cancer Institute 92(3)：205-2162000)。这类评价的临床标准(RECIST criteria)已经由实体肿瘤反应评价标准工作组(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors Working Group)，一个国际癌症专家组公布。正如依据RECIST标准的客观反应显示的，与适当的对照组相比，对肿瘤负荷有确切作用的药物易于最终对患者产生直接的益处。在临床前设置中，肿瘤负荷通常能更直接地被评价和记录。因为临床前研究可以转化成临床设置，所以在临床前模型中延长存活率的药物有最大的预期临床效用。与临床治疗产生的积极作用相似，在临床前设置中减轻肿瘤负荷的药物也对疾病有明显的直接影响。尽管延长生存时间是癌症药物治疗中追求的最主要的临床结果，但仍有其他有临床作用的益处，显然，降低肿瘤负荷(其与疾病进展的延迟、生存时间的延长或两者都有关系)也能导致直接的益处，并具有临床作用(Eckhardt et al.Developmental Therapeutics：Successes and Failures ofClinical Trial Designs of Targeted Compounds(发展的治疗学：靶化合物的临床试验设计的成功与失败)；ASCO Educational Book，39th AnnualMeeting，2003，pages 209-219)。
本发明描述了AR58A258.8的开发和应用，其通过在细胞毒性作用分析和人类癌症的动物模型中的作用得到鉴定。本发明描述了特异性结合存在于靶分子上的一个或多个抗原决定簇的试剂，其作为裸抗体，在体外对恶性肿瘤细胞也有细胞毒性作用，对正常细胞没有毒性，其也可作为裸抗体直接介导肿瘤生长的抑制作用。更进一步的优点是应用诸如此类的抗癌抗体靶向表达同类抗原标志物的肿瘤以实现肿瘤生长的抑制及癌症治疗的其他阳性指标。
总之，本发明讲述了AR58A258.8抗原作为治疗试剂靶点的应用，当给予AR58A258.8时，可以减轻哺乳动物中表达该抗原的癌症的肿瘤负荷。本发明也讲述了CDMAB(AR58A258.8)及其衍生物、其抗原结合片段和其细胞毒性作用诱导配体，靶向它们的抗原以减轻哺乳动物中表达该抗原的癌症的肿瘤负荷的用途。而且，本发明也讲述了在癌细胞内检测AR58A258.8抗原的应用，其用于携带表达该抗原的肿瘤的哺乳动物的诊断、治疗的预测及预后。
因此，本发明的目的是采用产生癌性疾病调节抗体(CDMAB)方法，该抗体针对来自特定个体的癌细胞，或一个或多个特定癌细胞系，该CDMAB对癌细胞有细胞毒性作用，而同时对非癌细胞相对无毒，该方法是为了分离杂交瘤细胞系和该杂交瘤细胞系编码的相应的分离的单克隆抗体及其抗原结合片段。
本发明的另一个目的涉及癌性疾病调节抗体、配体及其抗原结合片段。
本发明进一步的目的是制备癌性疾病调节抗体，其细胞毒性作用由抗体依赖的细胞毒性作用介导。
本发明另一个目的是制备癌性疾病调节抗体，其细胞毒性作用由补体依赖的细胞毒性作用介导。
本发明进一步的目的是制备癌性疾病调节抗体，其细胞毒性作用是其催化细胞化学键水解的能力的作用。
本发明进一步目的是制备癌性疾病调节抗体，其用于癌症诊断、预后和监测的结合分析。
通过本发明下述的说明、举例和一些实施方式的描述，本发明其他的目的和优点将变得显而易见。
附图简要说明
图1比较了杂交瘤上清液对MDA-MB-231、OVCAR-3、SW1116、Lovo和CCD-27sk细胞系的细胞毒性作用百分比及结合水平。
图2显示AR58A258.8和抗-EGFR对照与癌细胞及正常细胞系的结合。数据制成表格，以高于同种型对照的倍增来表示平均荧光强度。
图3包括针对几种癌细胞和非癌细胞系的AR58A258.8和抗-EGFR抗体的代表性FACS直方图。
图4显示AR58A258.8在Lovo结肠癌模型中对肿瘤生长的影响。垂直线表示给予抗体的阶段。数据点代表平均值+/-标准误。
图5显示AR58A258.8在Lovo结肠癌模型中对体重的影响。数据点代表平均值+/-标准误。
发明的详细描述
下面用于概述、描述、实施例和权利要求书中的字词或短语通常都有其指定的含义。
术语“抗体”使用其最宽泛的涵义，且特别包括，例如单克隆抗体(包括激动剂、拮抗剂和中和抗体，脱免疫的、鼠的、嵌合的或人源化的抗体)、携带有多表位特异性的抗体组合物、单链抗体、抗体的免疫偶联物和抗体片段(见下文)。
本发明中使用的术语“单克隆抗体”指从基本同质的抗体群中获得的一种抗体，即构成该群抗体的单个抗体是相同的，除了可少量存在的可能自然发生的变异。单克隆抗体高度特异性的针对单一抗原位点。而且，与包含针对不同决定基(抗原决定簇)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每一种单克隆抗体针对抗原上的单一决定基。除了特异性之外，单克隆抗体的优势还在于其合成可以不受其他抗体的污染。修饰语“单克隆的”指从基本同质的抗体群中获得的抗体的特征，而不能解释为需要通过任何特定的方法来生产该抗体。例如，本发明中使用的单克隆抗体可以通过由Kohler et al.，Nature，256：495(1975)首次描述的杂交瘤(鼠或人)方法制备或由重组DNA方法制备(参见，例如，美国专利第4,816,567号)。还可以使用在例如Clackson et al.，Nature，352：624-628(1991)和Marks et al，J.MoI.Biol，222：581-597(1991)中描述过的技术，从噬菌体抗体库中分离“单克隆抗体”。
“抗体片段”包括完整抗体的一部分，优选包括其抗原结合区域或可变区。抗体片段的实例包括非全长的抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2和Fv片段；双功能抗体(diabodies)；线性抗体；单链抗体分子；单链抗体，单结构域抗体分子，融合蛋白，重组蛋白和由抗体片段形成的多特异性抗体。
“完整”抗体指包括抗原结合可变区，以及轻链恒定区(CL)和重链恒定区CH1，CH2和CH3的抗体。恒定区可以是天然序列的恒定区(例如，人天然序列恒定区)或其氨基酸序列的变体。优选地，该完整抗体有一个或多个效应器功能。
依据其重链恒定区的氨基酸序列，完整抗体可以分为不同的“种类”。有五种完整的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几种可进一步分为“亚类”(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。与不同种类抗体对应的重链恒定区分别被称为α，δ，ε，γ和μ。不同种类的免疫球蛋白的三维空间构型和亚结构是公知的。
抗体“效应器功能”指那些由抗体Fc区引起的(天然序列的Fc区或氨基酸序列变异的Fc区)的生物活性。抗体效应器功能的例子包括C1q结合；补体依赖的细胞毒性作用；Fc受体结合；抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体的下调(例如B细胞受体；BCR)等。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用”和“ADCC”指一种细胞介导的反应，在该反应中表达Fc受体(FcR)的非特异性的细胞毒细胞(例如自然杀伤(NK)细胞，噬中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，并随后导致靶细胞的裂解。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)第464页的表3总结了造血细胞的FcR表达。为了测定目标分子的ADCC活性，可以进行例如在美国专利5,500,362或5,821,337描述的体外ADCC活性测定。用于这类分析的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。选择地或附加地，可在体内评价目标分子的ADCC活性，例如在诸如Clynes et al.PNAS(USA)95：652-656(1998)中公开的动物模型中。
“效应器细胞”指表达一种或多种FcRs并执行效应器功能的白细胞。优选地，这些细胞至少表达FcγRIII，并执行ADCC效应器功能。介导ADCC的人类白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒T细胞和中性粒细胞；优选PBMC和NK细胞。效应器细胞可以从其天然来源中分离，例如从本文中描述的血液或PBMC中分离。
术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合于抗体Fe区的受体。优选的FcR是天然序列的人类FcR。而且，优选的FcR是结合于IgG抗体(γ受体)的受体，并包括FcγRI，FcγRII和FcγRIII亚类的受体，其包括这些受体的等位基因变体和选择性的剪切形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活性受体”)和FcγRIIB(“抑制性受体”)，两者的氨基酸序列相似，区别主要在于其胞浆区。激活性受体FcγRIIA在其胞浆区含有免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)。抑制性受体FcγRIIB在其胞浆区含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)。(参见Daёron，Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997)中的综述M)。在Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol9：457-92(1991)；Capel et al.，Immunomethods 4：25-34(1994)和de Haas etal.，J.Lab.Clin Med.126：330-41(1995)中对FcR进行了综述。其他FcR，包括将来要被确认的FcR，都包括在本发明中的术语“FcR”中。该术语也包括负责将母体的IgG转运到胎儿体内的新生受体，FcRn(Guyer et al.，J.Immunol.117：587(1976)和Kim et al.，Eur.J.Immunol.24：2429(1994))。
“补体依赖性细胞毒性作用”或“CDC”指分子在补体存在下，裂解靶细胞的能力。补体激活途径通过补体系统的第一组分(C1q)与交联了同类抗原的分子(比如，抗体)的结合启动。为了评价补体激活，可以进行如在Gazzano-Santoro et al.，J.Immunol.Methods 202：163(1996)中描述的CDC分析。
术语“可变的”指可变区某些部分的序列在抗体间高度不同，并用于每一种特定抗体与其特定抗原的结合及其特异性。然而，变异并不是均匀分布在抗体的可变区域内。它集中在轻链和重链可变区的三个所谓的高度可变区的片段内。可变区内更加高度保守的部分被称为骨架区(FR)。每个天然的重链和轻链可变区包括由三个高度可变区连接的主要采用β-片层构型的四个FRs，其形成环状连接，且在某些情况下形成部分＞片层结构。每条链的高度可变区通过FRs以密切靠近的方式结合在一起，并与另一条链的高度可变区一起，促进抗体的抗原结合部位的形成(参见Kabat et al，Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫学目标蛋白的序列)，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.pp 15-17；48-53(1991))。恒定区并不直接参与抗体与抗原的结合，而是呈现各种效应器功能，例如在抗体依赖性的细胞毒效应(ADCC)中抗体的参与。
本发明中使用的术语“高度可变区”指抗体中负责与抗原结合的氨基酸残基。高度可变区通常包括“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如轻链可变区的氨基酸残基24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)及重链可变区的氨基酸残基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)；Kabat et al，Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫学目标蛋白的序列)，5th Ed.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.pp 15-17；48-53(1991))和/或“高变环”区的氨基酸残基(例如轻链可变区的残基2632(L1)、50-52(L2)和91-96(L3)及重链可变区的26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)；Chothia and Lesk J.MoI.Biol.196：901-917(1987))。“骨架区”或“FR”残基指除了本发明定义的高变区残基之外的那些可变区的残基。木瓜蛋白酶水解抗体产生了两个相同的被称为“Fab”片段的抗原结合片段和一个残余的“Fc”片段，每个“Fab”片段都有单一的抗原结合部位，“Fc”片段的名称反映了其易结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F(ab′)2片段，其有两个抗原结合部位，且仍能够与抗原交联。
“Fv”是含有完整的抗原识别和抗原结合部位的最小抗体片段。该区域由以紧密、非共价结合的一条重链和一条轻链可变区的二聚体构成。以这种每个可变区的三个高变区相互作用的构型决定VH-VL二聚体表面的抗原结合部位。六个高变区域共同赋予了抗体的抗原结合特异性。然而，即便单一的可变区(或只含有三个抗原特异性高变区的Fv的一半)仍能够识别和结合抗原，尽管比完整结合位点的亲和性低。Fab片段也含有轻链恒定区和重链的第一恒定区(CH1)。Fab′片段不同于Fab片段之处在于其重链CH1区的羧基末端多了几个氨基酸残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab′-SH在本发明中指代Fab′，其中恒定区的半胱氨酸残基至少携带一个游离的硫基。最初的F(ab′)2抗体片段以Fab′片段对产生，之间有铰链的半胱氨酸。其他的抗体片段的化学偶联也是公知的。
来自任一脊椎动物的抗体的“轻链”基于其恒定区的氨基酸序列，都可以归于两种截然不同的所谓kappa(к)和lambda(λ)链中的一种。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL区，其中这些区域存在于单一的多肽链上。优选地，Fv多肽进一步包含VH和VL区之间的多肽连接子，其使scFv形成适于抗原结合的结构。关于scFv的综述参见Plückthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(单克隆抗体药理学)，vol.113，Rosenburg and Moore eds.，Springer-Verlag，New York，pp.269-315(1994)。
术语“双功能抗体(Diabodies)”指带有两个抗原结合位点的小型抗体片段，该片段在同一多肽链上(VH-VL)含有与轻链可变区(VL)结合的重链可变区(VH)。通过使用因过短而不能使同一条链上的两个区域配对的连接子，使这些区域被迫与另一条链上的互补区域配对，由此产生了两个抗原结合位点。例如在EP 404,097；WO 93/11161；和Hollinger et al.，Proc.Natl Acad.Sci.USA，90：6444-6448(1993)中对双功能抗体作了更详细的描述。
“分离”抗体是指从其天然环境的组分中鉴别、分离和/或回收的抗体。其天然环境下的污染成分是指干扰抗体诊断或治疗作用的物质，可包括酶、激素和其它的蛋白质或非蛋白质溶解物。因为缺乏抗体的天然环境中的至少一种组分，分离抗体包括重组细胞内部的原位抗体。但是，通常分离抗体会经过至少一步的纯化步骤来制备。
“结合”目的抗原的抗体是指对该抗原有充分亲和力的抗体，以致该抗体在靶定表达该抗原的细胞时，可以作为治疗或诊断试剂。如果抗体能结合抗原性部分，它通常会优先结合其抗原性部分，而不是其它受体，这不包括诸如非特异性的Fc接触的偶然结合或与其他抗原共有的翻译后修饰成分结合，该抗体不会与其他蛋白有明显的相互作用。检测与目的抗原结合的抗体的方法在本领域中是公知的，可包括但并不局限于例如FACS、细胞ELISA和Western印迹等分析。
正如本发明中使用的，“细胞”、“细胞系”、“细胞培养物”的表述可以交替使用，所有这些用法都包括其子代。也可以理解为由于人为的或非人为的突变，所有的子代在DNA组成上不可能完全相同。在原始转化细胞内筛选的有相同功能或生物学活性的突变子代包括在内。根据有意使用的不同指代的上下文，指代是清楚的。
“治疗”既指治疗性处理，也指预防性或防止性的措施，其目的就是预防或减缓(减轻)目标病理状态或病症。需要治疗的个体包括那些已经存在所述病症的个体，还包括那些将发展为该病症的或欲对其病症进行预防的个体。因此，本文中欲被治疗的哺乳动物可已经被诊断为患有该病症或可倾向于或易感于该病症。
术语“癌症”和“癌性(的)”是指或描述哺乳动物的生理状态，其典型特征是细胞生长或死亡不受调控。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴恶性肿瘤。这些癌症更多具体的例子包括鳞状细胞癌(例如鳞状上皮细胞癌)，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌在内的肺癌，腹膜癌，肝细胞癌，包括胃肠道癌在内的胃癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝脏癌症，膀胱癌，肝细胞瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺肿瘤，肾癌，前列腺癌，外阴肿瘤，甲状腺癌，肝癌，肛癌，阴茎癌，还有头颈部癌。
“化疗剂”是用于癌症治疗的化合物。化疗剂的例子包括：诸如噻替派和环磷酰胺(CYTOXANTM)的烷化剂；诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)的烷基磺酸酯类；如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)、乌瑞替派(uredopa)的氮丙啶类；包括六甲蜜胺、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三甲基奥罗蜜胺(trimethylolomelamine)在内的乙烯亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamine)；如瘤可宁(chlorambucil)、萘氮芥、环磷酰胺、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺、氮芥(mechlorethamine)、盐酸甲氧氮芥、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥(phenesterine)、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀(uracil mustard)等氮芥类药物；如卡氯芥、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司丁、雷莫司汀等硝脲类(nitrosureas)；如阿克拉霉素类、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、加里刹霉素、洋红霉素、碳霉素(carnomycin)、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托咪定、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表阿霉素、依索比星、依达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、灰霉素、potfiromycin、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星类抗生素；甲氨碟呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)类抗代谢类药；如二甲叶酸、氨甲喋呤、蝶罗呤、三甲曲沙等叶酸拟似物；如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硫米嘌呤、硫鸟嘌呤类嘌呤类似物；如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU等嘧啶类似物；如卡鲁睾酮、屈他雄酮丙酸酯、表硫雄醇、美雄烷、睾内酯酮等男性激素类药物；如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦等抗肾上腺类药物；如亚叶酸等叶酸补充物；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；地磷酰胺；秋水仙胺；地吖醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；足叶草酸；2-乙肼；丙卡巴肼；PSK
Figure A20068003673200221
；雷佐生；西佐喃；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷(″Ara-C″)；环磷酰胺；塞替派；如紫杉醇(TAXOL
Figure A20068003673200222
，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，NJ.)和多西他赛(TAXOTERE
Figure A20068003673200223
，Aventis，Rhone-Poulenc Rorer，Antony，France)等紫杉烷类；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；如顺铂和卡铂等铂类似物；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；去甲长春碱；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；柔红霉素；氨蝶呤钠；希罗达；伊班膦酸钠；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；esperamicins；卡培他滨；以及上述任一种药物在药学上可接受的盐、酸或衍生物。调节或抑制激素对肿瘤作用的抗激素类药物也包括在本定义内，像抗雌激素药物，包括例如它莫西芬、雷洛昔芬、芳香化酶抑制剂4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷诺昔芬(keoxifene)、LYl 17018、奥那司酮和托瑞米芬(法乐通)；以及抗雄激素物质，例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一种药物在药学上可接受的盐、酸或衍生物。
用于治疗目的的“哺乳动物”指任何一种可归于哺乳类的动物，包括人类、小鼠、免疫缺陷鼠(SCID)或裸鼠或品系小鼠、家畜和农场动物及动物园内的动物、体育动物或宠物，比如绵羊、狗、马、猫、母牛等。优选地，本发明中的哺乳动物指人类。
“寡核苷酸”指短长度、单链或双链多聚脱氧核苷酸，其通过已知的方法(例如磷酸三酯、亚磷酸盐、亚磷酰胺化学)，利用例如发表于1988年5月4日的EP 266,032中描述的固相技术，或利用Froehler et al，Nucl.Acids Res.，14：5399-5407，1986描述的脱氧核苷H-磷酸盐中间物化学合成。然后将其用聚丙烯酰胺凝胶纯化。
“嵌合”抗体指免疫球蛋白，其部分重链和/或轻链与来源于特定种属或属于特定抗体种类或亚类的抗体的对应序列相同或同源，同时链上的其余序列与来源于另一种属或属于另一种类或亚类的抗体的对应序列相同或同源，此外还指这些抗体的片段，只要它们能够表现出所需的生物活性(美国专利4,816,567和Morrison et al，Proc.Natl.Acad.Sci USA，81：6851-6855(1984))。
非人类(例如鼠科)抗体的“人源化”形式指特殊的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv，Fab，Fab′，F(ab)2或抗体的其他抗原结合序列)，其包含来自非人类免疫球蛋白的最少序列。在绝大多数情况下，人源化抗体是人的免疫球蛋白(受者抗体)，其中，来自受者抗体的互补决定区(CDRs)的残基被诸如具有所需的特异性、亲和力、能力的小鼠、大鼠或兔等非人类抗体(供者抗体)的CDRs的残基所替代。在一些情况下，人类免疫球蛋白的Fv骨架区(FR)残基被相应的非人类FR残基所替代。此外，人源化抗体可包含既不在受者抗体也不在供者抗体的CDR或FR序列的残基。产生的这些修饰可进一步改善和优化抗体的性能。通常，人源化抗体包含至少一个，通常是两个可变区的几乎所有的部分，其中所有或几乎所有的CDR区对应非人类免疫球蛋白的CDR区，且所有或几乎所有的FR残基是人类免疫球蛋白共有序列的FR残基。最优地，人源化抗体也包含免疫球蛋白恒定区序列的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白的序列。
“去免疫化”抗体是对特定的物种没有免疫原性或免疫原性较差的免疫球蛋白。通过改造抗体的结构可以实现去免疫化。可以使用任何本领域技术人员公知的去免疫化技术。例如，在发表于2000年6月15日的WO 00/34317中，描述了一项使抗体去免疫原性的适当的技术。
诱导“细胞凋亡”的抗体是通过任一方式诱导程序性细胞死亡的抗体，这些方式例如但不限于：结合Annexin V(膜联蛋白V)、caspase(半胱天冬酶)活性、DNA断裂、细胞皱缩、内质网扩张、细胞破碎和/或膜囊泡(所谓的凋亡小体)的形成。
在本说明书中，杂交瘤细胞系及其产生的分离的单克隆抗体可选择用内部分类号AR58A258.8或保藏号IDAC 290605-01来表示。
本发明中使用的“抗体-配体”包括至少对靶抗原的一个抗原决定簇有结合特异性的部分，其可以是完整的抗体分子、抗体片段和至少有一个抗原结合区或其部分(即抗体分子的可变部分)的任何分子，例如，Fv分子、Fab分子、Fab′.sub.2分子、双特异性抗体、融合蛋白或任一基因工程分子，其特异性识别和结合抗原的至少一个抗原决定簇，该抗原可被IDAC 290605-01杂交瘤细胞系(IDAC290605-01抗原)产生的分离的单克隆抗体结合。
本发明中使用的“癌性疾病调节抗体”(CDMAB)指能够以有益于患者的方式，例如通过减轻肿瘤负荷或延长肿瘤患者的生存期的方式，调节癌性疾病过程的单克隆抗体和其抗体-配体。
本发明中使用的“抗原结合区”指识别靶抗原的分子部分。
本发明中使用的“竞争性抑制”是指通过常规的抗体相互竞争分析(Belanger L.，Sylvestre C.和Dufour D.(1973)，Enzyme linked immunoassayfor alpha fetoprotein by competitive and sandwich procedures(竞争和夹心法的甲胎蛋白的酶联免疫测定).Clinica ChimicaActa 48，15)，能够识别和结合由IDAC 290605-01杂交瘤细胞系产生的单克隆抗体(IDAC 290605-01抗体)针对的抗原决定表位。
本发明中使用的“靶抗原”指IDAC 290605-01抗原或其部分。
本发明中使用的“免疫偶联剂”指以化学或生物学方式连接到细胞毒素、放射物质、酶、毒素、抗肿瘤药或治疗剂的诸如抗体的任一分子或CDMAB。只要能够与其靶标结合，该抗体或CDMAB可以在其分子的任一部位与细胞毒素、放射物质、抗肿瘤药或治疗剂连接。免疫偶联剂的例子包括抗体毒素化学偶联剂和抗体-毒素融合蛋白。
本发明中使用的“融合蛋白”指任一嵌合蛋白，其抗原结合区与例如毒素、酶或蛋白药物的生物活性分子连接。
为了更充分理解本文中描述的发明，进行下述说明。
本发明提供CDMABs(即IDAC 290605-01CDMAB)，其特异性识别和结合IDAC 290605-01抗原。
以保藏号290605-01保藏于IDAC的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体的CDMAB可以是任一形式，只要其具有竞争性抑制IDAC 290605-01杂交瘤产生的分离的单克隆抗体与靶抗原的免疫特异性结合的抗原结合区。这样，具有与IDAC 290605-01抗体相同的结合特异性的任何重组蛋白(例如融合蛋白，其中抗体与诸如淋巴因子或肿瘤生长抑制因子的另一种蛋白结合)都在本发明的范围内。
在本发明的一个实施方式中，所述CDMAB是IDAC 290605-01抗体。
在其他实施方式中，所述CDMAB是一个抗原结合片段，其可以是具有IDAC 290605-01抗体的抗原结合区的Fv分子(例如单链Fv分子)、Fab分子、Fab′分子、F(ab′)2分子、融合蛋白、双特异性抗体、异种抗体或任一重组分子。本发明中的CDMAB针对的抗原决定簇是IDAC290605-01单克隆抗体针对的抗原决定簇。
本发明中的CDMAB可以被修饰，即通过分子内的氨基酸修饰，产生出衍生分子。也可能是化学修饰。
衍生分子要保留多肽的功能特性，也就是说，具有这类细胞毒性作用取代的分子仍能够使该多肽与IDAC 290605-01抗原或其部分结合。
氨基酸取代包括但不限于在本领域中公知的“保守”氨基酸取代。
举例来说，被称为“保守氨基酸取代”的某些氨基酸取代能够在蛋白中频繁出现，但并不改变该蛋白的构象或功能，这是蛋白质化学中已建立的法则。
这些改变包括用异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)和亮氨酸(L)的任一种取代任何其他的疏水氨基酸；天门冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)，反之亦然；谷氨酰胺(Q)取代天冬酰胺(N)，反之亦然；以及丝氨酸(S)取代苏氨酸(T)，反之亦然。依据特定氨基酸的环境和其在蛋白质三维结构中的作用，其他的取代也可被认为是保守的。例如，甘氨酸(G)和丙氨酸(A)可经常互换，丙氨酸和缬氨酸(v)也是。相对疏水的蛋氨酸(M)可经常与亮氨酸和异亮氨酸互换，有时与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)经常互换，其发生部位氨基酸的重要特征是其带电特性，而这两种氨基酸的不同的pK并不重要。在特定环境中，仍有其他的一些变化可以被认为是“保守的”。
给定一种抗体，本领域的技术人员可以生产出竞争性抑制的CDMAB，例如竞争性抗体，其可识别相同的抗原决定簇(Belanger L et al.Clinica Chimica Acta 48：15-18(1973))。一种方法是用表达该抗体识别抗原的免疫原产生免疫。该样本可以包括但不限于组织、分离的蛋白或细胞系。用诸如ELISA、FACS或Western印迹等竞争分析来筛选产生的杂交瘤，该竞争分析能鉴别抑制所检测抗体结合的抗体。另一种方法是利用噬菌体展示抗体库，淘选识别所述抗原至少一个抗原决定簇的抗体(Rubinstein JL et al.Anal Biochem 314：294-300(2003))。在任一情况下，抗体的筛选都是基于它们与靶抗原至少一个决定簇的结合能力竞争超出原标记抗体。因此，这些抗体与原始抗体一样具有识别所述抗原的至少一个抗原决定簇的特征。
实施例1
杂交瘤制备-杂交瘤细胞系AR58A258.8
依据布达佩斯条约，杂交瘤细胞系AR58A258.8于2005年6月29日保藏于加拿大国际微生物保藏单位(IDAC)，位于加拿大马尼托巴省R3E 3R2温尼伯市阿林顿街道1015的加拿大卫生部微生物局，保藏号为290605-01。依据37CFR 1.808的规定，保藏者保证在专利授权时将不可撤销地取消对公众获取该保藏材料的所有限制。如果保藏中保藏样本不存活，应替换保藏物。
为了制备产生AR58A258.8抗癌抗体的杂交瘤，在PBS中制备冷冻的人前列腺肿瘤组织(Genomics Collaborative，Cambridge，MA)的单细胞悬浮液。将IMMUNEASYTM(Qiagen，Venlo，Netherlands)佐剂轻轻混合后备用。通过皮下注射含2百万个细胞的50微升抗原-佐剂来免疫5到7周龄的BALB/c小鼠。初次免疫后2到5周，用新鲜制备的含2百万个细胞的50微升抗原-佐剂腹腔注射加强免疫鼠。末次免疫后第3天，取出脾脏用于融合。将分离的脾细胞与NSO-1骨髓瘤细胞伴侣融合，制备杂交瘤。检测杂交瘤亚克隆融合的上清。
为了检测杂交瘤分泌的抗体是IgG，还是IgM同种型，进行ELISA分析。将4℃包被缓冲液(0.1M碳酸盐/碳酸氢盐缓冲液，pH 9.2-9.6)中的浓度为2.4μg/ml的山羊抗小鼠的IgG+IgM(H+L)，按100μl/孔加入ELISA板过夜。该ELISA板用洗涤缓冲液(PBS+0.05％Tween)洗三次。按100μl/孔加入封闭缓冲液(5％奶洗涤缓冲液)，室温1小时，随后用洗涤缓冲液洗三次。按100μl/孔加入杂交瘤上清，将该板室温孵育1小时。该板用洗涤缓冲液洗三次，按100μl/孔加入山羊抗小鼠的IgG或IgM辣根过氧化物酶偶联物的1/100,000稀释液(用含5％奶的PBS稀释)。室温孵育1小时后，该板用洗涤缓冲液洗三次。按100μl/孔加入TMB溶液，室温孵育1-3分钟。按50μl/孔加入2M H2SO4，终止颜色反应，用Perkin-ElmerHTS7000酶标仪在450nm波长处读板。如图1所示，AR58A258.8杂交瘤主要分泌IgG同种型抗体。
为了确定杂交瘤细胞分泌抗体的亚类，使用小鼠单克隆抗体同种型分析试剂盒(Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit)(GE Healthcare，Baie d′Urfé，QC)进行同种型分型(isotyping)实验。将含抗体的杂交瘤上清(在按1∶10用TBS-T稀释的稀释液中)加到带有同种型条(isotyping strip)的试管中，该同种型条携带特异性识别不同类型肽链的山羊抗体。搅动试管15分钟。然后在搅动下用TBS-T将该同种型条洗两次，每次5分钟。将过氧化物酶标记的、种属特异性的抗小鼠抗体(在按1∶500用TBS-T稀释的稀释液中)加入到试管中15分钟，以检测结合于该条上的山羊抗体的单克隆抗体。在搅动下用TBS-T将该条再洗涤两次，每次5分钟。然后用过氧化物酶底物系统检测结合于该条的过氧化物酶标记的抗体。将一片30mg的4-氯-1-萘酚溶于10ml的冷乙醇中，并将一滴过氧化氢溶液(30％的体积比)稀释于50ml的TBS中。该两种液体在使用前直接混合，取3ml加入到同种型条，搅动15分钟。然后弃除该底物溶液，在搅动下用5ml蒸馏水洗涤该条3次。从试管中取出该分型条，分析结果。抗癌抗体AR58A258.8为IgG2a，κ同种型。
经过一轮限制稀释，在细胞ELISA测定系统中，检测杂交瘤上清中与靶细胞结合的抗体。检测了一种人乳腺癌细胞系、一种人卵巢癌细胞系、一种人结肠癌细胞系和一种人正常皮肤细胞系：分别是MDA-MB-231，OVCAR-3，Lovo和CCD-27sk。所有细胞系来自美国典型培养物保存中心(ATCC；Manassas，VA)。板内的细胞在使用前先固定。室温下，该板用含MgCl2和CaCl2的PBS洗三次。每孔加PBS稀释的2％的多聚甲醛100μl，室温10分钟，然后弃掉多聚甲醛。再用含MgCl2和CaCl2的PBS在室温下洗涤该板三次。每孔加100μl 5％奶洗涤液(PBS+0.05％Tween)进行封闭，室温1小时。该板用洗涤液洗三次，按75μl/孔加入杂交瘤上清，室温孵育1小时。用洗涤缓冲液将该板洗三次，按100μl/孔加入辣根过氧化物酶偶联的山羊抗小鼠的IgG或IgM的1/25,000稀释液(用含5％奶的PBS稀释)。室温孵育1小时后，该板用洗涤缓冲液洗三次，每孔加入100μl TMB底物，室温孵育1-3分钟。每孔加入50μl2M硫酸终止反应，用Perkin-Elmer HTS7000酶标仪在450nm波长处读板。如图1列表所示，结果表示为与内部(in-house)的IgG同种型对照相比，高出背景的倍数，事先已经证明该对照不与所检测的细胞系结合。AR58A258.8杂交瘤分泌的抗体对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系Lovo表现出最强的结合。对正常的皮肤细胞系CCD-27sk和卵巢癌细胞系OVCAR-3，AR58A258.8表现出低水平的结合。没有检测其与SW1116细胞系的结合(ND)。
进行抗体结合试验的同时，在MDA-MB-231、OVCAR-3、SW1116、Lovo和CCD-27sk这些细胞系上，检测了杂交瘤上清的细胞毒性作用。钙黄绿素(calcein)AM(Eugene，OR)购自Molecular Probes(Eugene，OR)公司，并如下所述进行分析。在分析前，将细胞根据预先确定的适当密度进行铺板。两天后，将75μl来自杂交瘤微孔板的上清转移到细胞培养板中，在5％CO2孵箱中孵育5天。将阳性对照孔吸净，加入100μl叠氮钠(NaN3，.01％，Sigma，Oakville，ON)、放线菌酮(CHX，0.5μM，Sigma，Oakville，ON)或抗-EGFR抗体(c225，IgG1，κ，5μg/mL，Cedarlane，Hornby，ON)。经过5天的处理后，倒空反应板的液体并吸干。通过多通道塑料挤瓶，将含MgCl2和CaCl2的室温DPBS(Dulbecco′s磷酸盐缓冲液)分到每孔中，叩打三次，倒出液体并吸干。每孔加入50μl用含MgCl2和CaCl2的DPBS稀释的荧光染料钙黄绿素，在37℃含5％CO2的孵箱内孵育30分钟。该板置于Perkin-Elmer HTS7000荧光读板仪内读数，数据用Microsoft Excel进行分析。结果在图1的表格中列出。AR58A258.8杂交瘤上清对Lovo结肠癌细胞系产生了15％的特异性细胞毒性作用，其是阳性对照放线菌酮的细胞毒性作用的26％，是阳性对照叠氮钠的细胞毒性作用的两倍。AR58A258.8对SW1116细胞也产生了8％的特异性细胞毒性作用，其是阳性对照放线菌酮的细胞毒性作用的两倍，是观测到的针对表皮生长因子受体的c225抗体产生的细胞毒性作用的38％。图1的结果表明AR58A258.8的细胞毒效应并不与其对这些癌细胞型的结合水平直接相关。尽管AR58A258.8对Lovo和MDA-MB-231细胞有相似的结合，但其细胞毒性作用只存在于Lovo细胞。如图1所示，AR58A258.8对CCD-27sk正常细胞系没有产生细胞毒性作用。已知的非特异性的细胞毒物质放线菌酮和叠氮钠产生了预期的细胞毒性作用。抗EGFR抗体c225对SW1116细胞产生了预期的细胞毒性作用。
实施例2
体外结合
通过在CL-1000瓶(BD Biosciences，Oakville，ON)中培养所述杂交瘤来制备AR58A258.8单克隆抗体，每星期进行两次收集和再接种。然后用蛋白G琼脂糖4快流(Protein G Sepharose 4Fast Flow)(AmershamBiosciences，Baie d′Urfe，QC)进行标准的抗体纯化操作。利用人源化的、去免疫原性的、嵌合的或鼠源化的单克隆抗体均属于本发明的范围。
用流式细胞仪(FACS)评价了AR58A258.8与来自乳腺(MDA-MB-231)、结肠(DLD-1，Lovo和SW1116)、卵巢(OVCAR-3)和前列腺(PC-3)的癌细胞系，以及来自皮肤(CCD-27sk)和肺脏(Hs888.Lu)的非癌细胞系的结合。所有细胞系来自美国典型培养物保存中心(ATCC；Manassas，VA)。首先用DPBS(不含钙离子和镁离子)洗涤单层细胞，以制备用于流式细胞术(FACS)的细胞。然后在37℃条件下，用细胞解离缓冲液将细胞从细胞培养板上分离出来。离心收集细胞，在4℃下，将细胞重悬在含MgCl2、CaCl2和2％胎牛血清的DPBS(标记培养液)中，记数，调整到合适的细胞密度，离心沉淀细胞，将其重悬在4℃的标记液中，加入20μg/mL的测试抗体(AR58A258.8)或对照抗体(同种型对照，抗-EGFR)，冰上放置30分钟。在加Alexa Fluor 546偶联的二抗前，细胞用标记液洗一次。然后加入溶于标记培养液中的Alexa Fluor 546偶联的二抗，4℃置30分钟。最后洗涤一次细胞，并将其重悬在固定液(含1.5％多聚甲醛的标记培养液)中。通过在FACSarrayTM上运行样本来评估流式细胞计数的细胞获取结果，FACSarrayTM使用FACSarrayTM系统软件(BD Biosciences，Oakville，ON)。通过调整前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)探测器上的电压和振幅，设置细胞的FSC和SSC。运行未标记的细胞来调整荧光(Alexa-546)通道的探测器，使这些细胞有一个统一的约为1-5单位的中等荧光强度的波峰。对于每一个样本，约需要获取10，000个门事件(标记的固定细胞)，用于分析，结果见图2。
图2以高出同种型对照的倍增表示平均荧光强度。图3汇集了AR58A258.8抗体代表性的直方图。AR58A258.8对结肠癌细胞系DLD-1(25.7倍)，Lovo(11.6倍)和SW116(6.2倍)显示出强结合。也检测到了AR58A258.8与乳腺癌细胞系MDA-MB-231(21.4倍)，前列腺癌细胞系PC-3(15.8倍)和卵巢癌细胞系OVCAR-3(20.4倍)的结合。虽然AR58A258.8能与正常的肺和皮肤细胞系结合，但结合程度低于观测到的与大多数癌细胞系的结合(Hs888.Lu(9.6倍)和CCD-27sk(3.9倍))。这些数据表明AR58A258.8可与不同的人类癌细胞系结合，且与癌细胞系的结合远强于正常细胞系。
实施例3
在体Lovo细胞的肿瘤实验
实施例1和2表明AR58A258.8对Lovo结肠癌细胞系有抗癌特性，且可结合于这种细胞系。参见图4和5，颈背皮下注射的100μl生理盐水中的1百万个人结肠癌细胞(Lovo)植入到4-6周的雌性SCID小鼠。这些小鼠被随机分成两个治疗组，每组5只。移植癌细胞后第一天，每组小鼠腹腔给予300μl的AR58A258.8测试抗体(20mg/kg)或缓冲液对照，所述液体由含2.7mM KCl，1mM KH2PO4，137mM NaCl和20mMNa2HPO4的稀释液将储存液稀后得到。随后抗体组和对照组以相同的方式每周给药一次，一共7周。大约每7天用测径器测量肿瘤生长，一直测到第8周或个体动物达到了加拿大动物保护协会(CCAC)规定的指标。在研究过程中，一周记录一次动物的体重。研究结束时，依据CCAC的指导方针，所有的动物都采取安乐死。
在人结肠癌预防性在体模型中，AR58A258.8抑制肿瘤生长，并明显减轻肿瘤负荷。在种植后的第56天，也是最后一次给药后第6天，AR58A258.8治疗组肿瘤的平均体积比缓冲液对照治疗组肿瘤体积小44％(图4)。最后一次测的平均肿瘤体积受到治疗期结束前由于溃疡损害所致的小鼠缺失的影响。在第42天，当所有小鼠仍然存活时，相比缓冲液治疗的对照小鼠，AR58A258.8使肿瘤体积降低60％(p＝0.083)。
在整个研究中，没有出现临床毒性症状。如图5所示的体重作为动物健康和发育停止的指标。在组内，整个研究期间对照组体重有不显著的9％的降低，而AR58A258.8治疗组的体重显示出10％的降低，从平均21g到19g。在治疗期结束时，各组间没有显著的体重差异(p＝0.671，t-检验)。总之，AR58A258.8在人类结肠癌异种移植模型中耐受性良好，并降低了肿瘤的负荷。
此优势证据表明AR58A258.8通过癌细胞系上的抗原决定簇的连接(ligation)介导了抗癌作用。进一步表明，利用例如(但并不局限于)FACS、细胞ELISA或IHC等技术，AR58A258.8抗体可以用于检测表达与之特异性结合的抗原决定簇的细胞和/或组织。
本说明书中提及的所有专利和公开出版物代表了本发明所属领域的技术人员的水平。所有专利和公开出版物通过引用的方式并入本文，其引用程度如同每个出版物被特别单独地指明以引用的方式并入本文。
应该明白，尽管本发明以某种形式被说明，但这不是要将本发明限定在本文所描述和显示的特定形式或布局。对本领域的技术人员显而易见的是，在不偏离本发明的范围的前提下还可做出各种变化，且不应当认为本发明限于本说明书中显示和描述的内容。本领域的技术人员很容易看出使本发明较好地适合实现所描述的目的并获得最终结果和益处，以及其中固有的部分。本文中描述的任一寡核苷酸、肽、多肽、生物相关化合物、方法、流程和技术都是优选实施方案中有代表性的，其目的在于示例，并不是限制本发明的范围。本领域的技术人员能够想到包括在本发明精神的范畴内的变化和其它用途，并由所附权利要求书的范围所限定。尽管借助特定的优选实施方案描述了本发明，但是应理解所要求保护的本发明并不仅仅局限于这些特定的实施方案。事实上，所描述的实施本发明的方式的各种变化，对本领域的技术人员来说是显而易见的，均在所附权利要求书的范围内。

Claims (24)

1.由杂交瘤产生的分离的单克隆抗体，该杂交瘤保藏于IDAC，保藏号为290605-01。
2.由权利要求1所述的分离的单克隆抗体产生的人源化抗体。
3.由权利要求1所述的分离的单克隆抗体产生的嵌合抗体。
4.分离的杂交瘤细胞系，以保藏号290605-01保藏在IDAC。
5.引发抗体诱导的选自人类肿瘤的组织样本中癌细胞的细胞毒性作用的方法，其包括：
提供所述人类肿瘤的组织样本；
提供由保藏于IDAC、保藏号为290605-01的杂交瘤产生的分离的单克隆抗体或其CDMAB，该CDMAB的特征在于具有竞争性抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力；以及
将所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样本接触；
其中所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样本的结合诱导细胞的细胞毒性作用。
6.权利要求1所述的分离的单克隆抗体的CDMAB。
7.权利要求2所述的人源化抗体的CDMAB。
8.权利要求3所述的嵌合抗体的CDMAB。
9.权利要求1、2、3、6、7或8中的任一项所述的分离抗体或其CDMAB，其与选自细胞毒部分、酶、放射活性化合物和造血细胞的成员偶联。
10.确定选自人类肿瘤的组织样本中癌细胞存在的结合分析，所述癌细胞被AR58A258.8杂交瘤细胞系产生的分离的单克隆抗体特异性结合，该杂交瘤细胞系在IDAC的保藏号为290605-01，所述分析包括：
提供所述人类肿瘤的组织样本；
提供至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB，其识别的一种或多种抗原决定簇与AR58A258.8杂交瘤细胞系产生的分离的单克隆抗体识别的一种或多种抗原决定簇相同，该杂交瘤细胞系在IDAC的保藏号为290605-01；
将所述的至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样本接触；以及
确定所述的至少一种分离的单克隆抗体或其CDMAB与所述组织样本的结合；
由此指示出在所述组织样本中所述癌细胞的存在。
11.治疗哺乳动物中人类肿瘤的方法，其中所述人类肿瘤表达至少一种能特异性与分离的单克隆抗体或其CDMAB相结合的抗原决定簇，该分离的单克隆抗体由保藏在IDAC、保藏号为290605-01的克隆所编码，该CDMAB的特征是具有竞争性抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述方法包括给予所述哺乳动物降低所述哺乳动物的肿瘤负荷的有效量的所述单克隆抗体或其CDMAB。
12.如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体与细胞毒性部分偶联。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。
14.如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB活化补体。
15.如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖性细胞的细胞毒性作用。
16.如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是人源化的。
17.如权利要求11所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是嵌合的。
18.治疗哺乳动物中对抗体诱导的细胞的细胞毒性作用敏感的人类肿瘤的方法，其中所述的人类肿瘤表达至少一种与分离的单克隆抗体或其CDMAB特异结合的抗原决定簇，该抗体由保藏在IDAC、保藏号为290605-01的克隆所编码，该CDMAB的特征是具有竞争性抑制所述分离的单克隆抗体与其靶抗原结合的能力，所述方法包括给予所述哺乳动物降低所述哺乳动物的肿瘤负荷的有效量的所述单克隆抗体或其CDMAB。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体与细胞毒性部分偶联。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述细胞毒性部分是放射性同位素。
21.如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB活化补体。
22.如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体或其CDMAB介导抗体依赖的细胞毒性作用。
23.如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是人源化的。
24.如权利要求18所述的方法，其中所述的分离的单克隆抗体是嵌合的。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8466094B2 (en) * 2009-05-13 2013-06-18 Clearwater International, Llc Aggregating compositions, modified particulate metal-oxides, modified formation surfaces, and methods for making and using same

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4433059A (en) * 1981-09-08 1984-02-21 Ortho Diagnostic Systems Inc. Double antibody conjugate
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4828991A (en) 1984-01-31 1989-05-09 Akzo N.V. Tumor specific monoclonal antibodies
EP0266032A1 (en) 1986-08-29 1988-05-04 Beecham Group Plc Modified fibrinolytic enzyme
AU613590B2 (en) 1986-11-19 1991-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Hybridomas producing monoclonal antibodies to new mucin epitopes
US4861581A (en) 1986-12-05 1989-08-29 Cancer Biologics, Inc. Detection of necrotic malignant tissue and associated therapy
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5183756A (en) * 1988-08-19 1993-02-02 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Monoclonal antibody (D612) having selective reactivity for gastrointestinal caricinomas and method for employing the same
US5171665A (en) 1989-04-17 1992-12-15 Oncogen Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors
DE3920358A1 (de) * 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US6020145A (en) 1989-06-30 2000-02-01 Bristol-Myers Squibb Company Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96
DK0590058T3 (da) 1991-06-14 2004-03-29 Genentech Inc Humaniseret heregulin-antistof
EP0539970B1 (en) 1991-10-30 1999-05-26 Idemitsu Kosan Company Limited Methods for producing human lymphocytes and human monoclonal antibodies, and human monoclonal antibodies produced thereby
AU3178993A (en) 1991-11-25 1993-06-28 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
IL105008A0 (en) 1992-03-13 1993-07-08 Yeda Res & Dev Double transfectants of mhc genes as cellular vaccines for immunoprevention of tumor metastasis
US5545532A (en) 1993-02-05 1996-08-13 Epigen, Inc. Human carcinoma antigen (HCA), HCA antibodies, HCA immunoassays and methods of imaging
JPH10505819A (ja) 1994-06-24 1998-06-09 ヴラディミール ピー． トーチリン 腫瘍の治療及び予防のための自己抗体の使用方法
US5783186A (en) 1995-12-05 1998-07-21 Amgen Inc. Antibody-induced apoptosis
CA2342967A1 (en) 1998-12-08 2000-06-15 Biovation Limited Modifying protein immunogenicity
US7256271B2 (en) 2003-01-21 2007-08-14 Arius Research Inc. Cancerous disease modifying antibodies
US6180357B1 (en) 1999-10-08 2001-01-30 Arius Research, Inc. Individualized patient-specific anti-cancer antibodies
US6794494B1 (en) * 2003-04-14 2004-09-21 Arius Research, Inc. Cancerous disease modifying antibodies
KR100490077B1 (ko) * 1999-10-29 2005-05-17 제넨테크, 인크. 항-전립선 줄기세포 항원 (ｐｓｃａ) 항체 조성물 및 그의사용 방법
DE60038824D1 (de) 2000-11-08 2008-06-19 Arius Res Inc Verfahren zur herstellung zytotoxischen antikörper gegen krebs
US7009040B2 (en) * 2003-01-21 2006-03-07 Arius Research, Inc. Cancerous disease modifying antibodies
WO2003086456A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-23 Arius Research, Inc. Anti-ck18 monoclonal antibody and therapeutic and diagnostic uses thereof in cancer
US20040141914A1 (en) 2003-01-21 2004-07-22 Young David S.F. Cancerous disease modifying antibodies
US7399835B2 (en) * 2004-02-26 2008-07-15 Arius Research Inc. Cancerous disease modifying antibodies
US20050027106A1 (en) 2003-07-28 2005-02-03 Young David S. F. Cancerous disease modifying antibodies
US7348413B2 (en) 2004-02-26 2008-03-25 Arius Research Inc. Cancerous disease modifying antibodies

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