具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
一、本发明的中药组合物的组方和含量
本发明的中药组合物按照重量百分比由以下组分组成,黄芪30~35%,丹参15~20%,三七15~18%,土元8~10%,鹿角胶10~12%,牛膝8~10%,甘草6~8%,各组分含量的总重量为100%。
二、各组方功能及功能主治
1、各种组方在发明的中药组合物中的功能:
黄芪起补脾肺之气,益气生血的作用,作为君药。丹参活血化瘀,行气止痛,三七活血化瘀,消肿止痛,鹿角胶功能为温补肝肾,强壮筋骨,活血消肿,通调督脉,为血肉有情之品,性味咸温,入肝肾二经,三药共为臣药。土元破血逐瘀,接骨续筋,为佐药。牛漆主下焦血分,善活血通脉,引血下行为,作为使药。甘草益气和中,调和诸药,为使药。本发明从整体考虑,辨病与辨证结合,内外兼治,采用活血化瘀、补肾壮骨、通气行痹的原则进行组方,将上述各组方的诸药合用,共奏行气通络,补益肝肾,活血化瘀之功。
本发明的中药组合物由七种药物成分组成,各组方的功效各异,互相补充,单方对股骨头的治疗都从本质上有一定的理疗和保健的效果,但是在各个单方具体服用时,单方的药用不便,制作繁杂,一般人家推广使用不便。本发明的组合物经过多年大量的实验,比较众多的单方组方,精选出上述七味中药,并对他们的配伍比例进行了大量的对比实验,优选出药效最好的配方百分比例,并采用特殊的制备方法,保存了各味中药的有机成分,采用各药相配伍,相得益彰,提高了综合药效,取得了显著的预防和治疗效果。
2、功能主治:
本发明的中药组合物具有活血化瘀、补益肝肾之效,还能够降低血小板粘附和毛细血管通透性,降低血脂,抗炎镇痛及防治骨质疏松,减轻股骨头坏死发病过程中的炎症反应,改善血液流变学及全身脂肪代谢紊乱,降低自由基及升高血浆NO浓度、保护血管内皮且能够提高纤溶活性,有利于预防和清除血栓形成。从而起到预防和治疗股骨头缺血坏死,促进坏死组织修复,缓解临床症状。
3、本发明的中药组合物的制备方法按照以下步骤实施,
步骤1、按照以下比例称量各组分,黄芪30~35%,丹参15~20%,三七15~18%,土元8~10%,鹿角胶10~12%,牛漆8~10%,甘草6~8%,各组分的总重量为100%,
步骤2、将上述各组分一起置于容器内,另加5~7倍水浸泡1~2小时,然后煮沸30分钟,过滤药渣,得到一次药液,
步骤3、将步骤2的药渣再加3~5倍水浸泡0.5~1小时,再煮沸20分钟,过滤药渣,得到二次药液,
步骤4、将步骤2所得的一次药液和步骤3所得的二次药液合并滤液,于水浴上浓缩,得到生药浸膏即成。
本发明的中药组合物根据适用对象不同,还可将上述生药制作成颗粒、片剂或胶囊等。
4、用法用量:
每次服用含生药量1.2g,每日三次。每疗程10天。
三、本发明的中药组合物的各种实验及结果
(一)、药效学实验
1、本发明的中药组合物对激素性股骨头缺血性坏死(简称SANFH)家兔TNF-α的影响,TNF-α主要由单核细胞和巨噬细胞产生,其具有广泛的生物学活性,一方面参与机体的免疫防御机能,选择杀伤肿瘤细胞;另一方面则介导休克、炎症反应、组织损伤等病理生理反应。
1)、实验动物:6个月龄日本白兔32只,体质量(2.5±0.25)KG。
实验药品及试剂:本发明的中药组合物生药浸膏;仙居制药有限公司生产,批号为010308的醋酸泼尼松龙注射液;天津九鼎医学生物工程公司生产的TNF-α测定试剂盒。
实验器材:HB-2型奥林巴斯显微镜,CBQ-II型硬质材料超薄切片机及高速DL-8R低温冷冻离心机。
2)、试验方法:32只动物被随机分成2组,空白组12只,造模组20只,造模组给予肌注醋酸泼尼松龙0.32mg/kg.d,每周2次,连续注射8周,共16次,同时32只动物每周肌注2次青霉素钠以预防感染,每次每只5万单位。造模6、8周后分别将空白组和造模组各处死2只动物,以观察造模情况,8周后将造模组剩余16只动物随机分为两组:本发明的中药组合物组(A组)和模型组(B组),各为8只。原空白组剩余动物组成C组。A组用本发明的中药煎液45g/kg.d,分2次灌胃;B组与C组用生理盐水灌胃,每日2次,每次每只15ml,治疗4周。4周后测定三组动物血清中的TNF-α水平。
3)、检测项目及实验结果:
肉眼观察,造模1周后,模型组动物均不同程度出现体质量下降、食欲亢进,继而出现精神差、皮毛无光泽、皮下脂肪减少,8周后更加明显,而空白组动物正常。6周及8周股骨头形态空白组和模型组无明显差别,但8周时模型组股骨头骨质松脆,易凿取。
光镜下观察结果,空白组股骨头骨小梁及骨细胞结构、形态正常。可见关节软骨及软骨下骨小梁结构,髓腔内正常的造血细胞和脂肪细胞偶见空骨陷窝。
模型组股骨头表现:6周时骨小梁变细、稀疏,髓腔内又减少的造血细胞和增多的、肥大的脂肪细胞,骨细胞部分核深染。8周时股骨头软骨下区骨小梁萎缩,较多的细胞核固缩,核偏位,染色深,骨髓内大量脂肪细胞堆积。骨小梁内正常骨细胞数量减少,部分骨陷窝内骨细胞消失,空骨陷窝数明显增多,提示造模成功。
TNF-α水平测定结果,见表1,从表中可见,模型组TNF-α水平较空白组明显偏高(P<0.001),说明TNF-α水平升高可能是SANFH发生的因素之一;同时可以看出A组TNF-α水平较模型组明显下降(P<0.01),说明本发明的中药组合物可能通过降低TNF-α水平来治疗SANFH。
2、本发明的中药组合物对激素性股骨头缺血性坏死(简称SANFH)家兔IGF-1的影响,IGF-1作为一种自分泌调节因子而影响骨骼形成和成骨细胞的功能,它们可由骨骼细胞分泌,刺激骨骼I型胶原蛋白合成及加快骨基质的沉淀速度,降低骨胶原蛋白的分解和抑制胶原蛋白酶的合成,有效的促进骨细胞的有丝分裂和成骨细胞的功能分化,增强碱性磷酸酶的活性和钙盐沉着。同时,IGF-1对软骨细胞形态发生和有丝分裂以及功能代谢都有广泛影响。按照上述实验的方法和步骤,进行对比试验4周,后测定三组动物血清中的IGF-1的水平。
表1TNF-α水平测定结果
组别 |
动物只数 |
TNF-α(ng/ml) |
F |
P |
空白组(A组)模型组(B组)本发明服药组(C组) |
888 |
8.52±2.0916.09±2.7510.86±3.08 |
16.79 |
<0.01 |
实验结果见表2,模型组IGF-1水平较空白组轻度升高(P<0.05),可能是机体的自发修复反应促使IGF-1水平升高;同时可以看出C组IGF-1水平较模型组水平明显升高(P<0.01),说明本发明的中药组合物可能通过升高IGF-1水平来促进股骨头的修复与重建,来治疗SANFH。
表2为血清中IGF-1的测定结果
组别 |
动物只数 |
IGF-1含量(ng/ml) |
空白组(A组)模型组(B组)本发明服药组(C组) |
888 |
8.06±0.9310.17±3.0315.55±4.86 |
3、动物血液学实验
取4-6月龄的健康日本大白兔30只,随机分为A、B、C三组,A、B两组各12只,C组6只,同等条件下,单笼饲养。采用贺西京等报告的方法造模,A、B两组每周2次肌肉注射醋酸氢化考的松,每次8mg/kg,C组每周2次肌肉注射生理盐水,每次0.32mg/kg,连续8周共16次,为预防感染,30只动物每周2次肌肉注射青霉素钠,每次每只5万单位。
A组从第9周开始每日按45g/kg分两次用本发明的中药组合物生药浸膏灌胃,B、C两组分别用生理盐水灌胃,每日2次,每次每只15ml。
第10周后,对3组动物分别进行血脂检查、红细胞SOD活力检测、血浆LPO含量的测定、血液流变学检测。
如表3所示,血脂含量的检测结果,显示A组与B组相比有显著性差异,B组与C组相比有显著性差异,A组与C组相比仍有差异,本发明的中药组合物有升高高密度脂蛋白的作用,但仍未达到正常。
表3为血脂含量的检测结果表
组别 |
总胆固醇 |
甘油三酯 |
高密度脂蛋白 |
低密度脂蛋白 |
A组B组C组 |
2.29±0.082.64±0.02*2.12±0.07△ |
0.51±0.05*0.73±0.030.4±0.03△ |
0.82±0.01*0.6±0.04△1.05±0.03 |
1.24±0.04△△1.69±0.03△△△1.09±0.03 |
注:与A组相比*<0.01,△<0.05;与B组相比*<0.01,△<0.05;与C组相比*<0.01,△<0.01,△△<0.05,△△△<0.01。
表4为SOD活力检测和LPO含量的测定表
组别 |
SOD(u.ml-1) |
LPO(nmol.ml-1) |
A组B组C组 |
50.2±1.5525.1±1.2062.1±2.00 |
4.4±0.16.7±0.23.3±0.1 |
如表4所示,为SOD活力检测和LPO含量的测定表,显示A组SOD活力升高,与B组相比有显著性差异,但仍与正常对照有差异(P<0.05);A组LPO含量下降,与B组相比有显著性差异(P<0.01),但仍与正常对照有差异(P<0.05)。
表5为血液流变学检测的测定表,显示A组血浆粘度、全血低切粘度、红细胞压积、红细胞聚集指数、血浆纤维蛋白原显著下降(P<0.01),红细胞刚性指数、红细胞电泳率也有所下降(P<0.05);B组血液改变不明显。
表5为血液流变学检测的测定表
指标 |
A组 |
B组 |
C组 |
血浆粘度(PV)高切粘度(HBV)低切粘度(LBV)红细胞聚集指数(AI)红细胞面积(HCL)血沉(ESR)血浆纤维蛋白原(PFC)红细胞电泳率(EBT) |
1.55±0.224.20±0.7820.12±5.644.12±0.7821.75±5.82.58±0.670.17±0.032.44±0.31 |
2.07±0.184.17±0.8125.08±3.176.87±1.5427.25±4.822.48±0.730.26±0.072.75±0.24 |
1.72±0.344.19±0.5822.10±2.334.77±0.7921.0±3.312.50±0.650.18±0.042.55±0.35 |
因此,上述动物血液学实验说明,本发明的中药组合物对血脂、氧自由基、血液流变学的影响,可能是其治疗股骨头缺血的机制。
(二)、临床试验
1、收集患儿45例,按照随机化原则将其分为对照组和治疗组,对照组23例,男18例、女5例,年龄8~16岁,平均10.0±2.1岁,病程4~10个月,平均7.0±3.2个月,双侧9例,单侧14例,其中左侧8例,右侧6例,按照分型为,I型6例,II型14例,III型3例;治疗组22例,男16例、女6例,年龄5~15岁,平均10.0±2.4岁,病程6~12个月,平均7.0±2.7个月,双侧8例,单侧14例,其中左侧9例,右侧5例,按照分型为,I型5例,II型15例,III型2例。
2、治疗方法:对照组给予患侧髋关节滑膜切除、股骨头减压及带缝匠肌髁骨瓣移植;治疗组除进行上述术式外,尚给予本发明的中药组合物胶囊,每粒相当于生药0.35克,每次六粒,每日三次,每疗程10天,间隔5天进入下一个疗程,共服用12个疗程。
两组除术前、术后给予预防性抗生素外再未用其他药物。
3、观察项目及检测方法:
Mckay髋关节功能改善情况,按照优:髋不疼痛,无跛行,髋关节活动正常;良:髋不疼痛,稍有跛行,髋关节活动稍受限;可:髋不疼痛,跛行,髋关节活动明显受限,髋关节承重机能试验Trendelenburg征阳性;差:髋痛,严重跛行,髋关节活动明显受限,髋关节承重机能试验Trendelenburg征阳性。
疼痛改善情况,采用视觉模拟法(VAS法)评价,划一10CM的直线,每隔1CM为一小格,直线的左端为10分,以每小格10分递增,直线的右端为100分。让患儿根据自己的疼痛程度选择合适分值,比较两组的治疗前后分值。
临床症状、体征综合评分,按Mckay髋关节功能评定标准将患儿临床表现的关节疼痛、跛行、髋关节活动受限及Trendelenburg征的程度依次分为无(0分)、轻(2分)、中(4分)、重(6分)。比较两组治疗前后积分及总积分。
随访,所有患儿出院后均进行随访,时间为1年到4年1个月。其中治疗组:8例随访3到4年1个月,6例随访2到3年,5例随访1到2年,3例随访1年;对照组5例随访3到4年,9例随访2到3年,5例随访1到2年,4例随访1年。
4、结果:两组Mckay髋关节功能比较,治疗组22例,优10例,良6例,可4例,差2例,总有效率90.9%,优良率72.7%;对照组23例,优8例,良6例,可4例,差5例,总有效率78.3%,优良率60.9%。两组临床效果比较,差异无显著性。(X2=0.2899,P>0.05)
两组治疗前后VAS法评分比较,见表6。两组治疗六个月后,VAS法评分较治疗前明显下降,差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。治疗后,两组VAS法评分比较,差异亦有显著性(P<0.05)。
表6两组治疗前后VAS法评分比较表
组别 |
例数 |
时间 |
VAS评分 |
治疗 |
22 |
治疗前治疗后 |
55.91±30.5023.18±17.01(**) |
对照 |
23 |
治疗前治疗后 |
54.78±32.3236.09±25.36(*)△ |
注:与本组治疗前比较,*P<0.05,**P<0.01;与治疗组治疗后比较,△P<0.05。
两组临床症状、体征综合评分比较见表7,两组治疗六个月后临床症状、体征均有不同程度的好转,与治疗前比较,差异均有显著性(P<0.05,P<0.01);两组治疗后比较,差异亦有显著性(P<0.01)。
远期疗效,两组所有病例均进行随访,并进行疗效统计。最终随访结果(按Mckay髋关节功能评定标准):治疗组22例,其中优9例,良8例,可3例,差2例,总有效率90.9%,优良率77.3%;对照组23例,,其中优5例,良3例,可7例,差8例,总有效率65.2%,优良率34.8%。两组远期疗效比较差异有显著性(X2=8.5976,P<0.05)。
不良反应,治疗组在治疗及随访中未见明显不良反应。
表7两组治疗前后临床症状、体征综合评分比较表
组别 |
例数 |
时间 |
疼痛 |
跛行 |
治疗对照 |
2223 |
治疗前治疗后治疗前治疗后 |
3.45±1.970.91±1.19**3.30±2.142.09±1.83*△△ |
4.00±1.511.55±1.37**4.00±1.512.78±1.31**△△ |
续表7
组别 |
例数 |
时间 |
髋关节受限 |
Trendelenburg征 |
治疗组对照组 |
2223 |
治疗前治疗后治疗前治疗后 |
3.82±1.501.82±1.50**3.39±1.532.70±1.15*△ |
3.64±1.591.18±1.47**3.91±1.762.52±2.02**△△ |
注:与本组治疗前比较,*P<0.05,**P<0.01;与治疗组治疗后比较,△P<0.05,△△P<0.01。
四、本发明的中药组合物的具体实施例
实施例1
步骤1、按照以下比例称量各组分,各组分含量的总重量为100%,黄芪30%,丹参20%,三七15%,土元10%,鹿角胶10%,牛漆8%,甘草7%,
步骤2、将上述各组分置于容器内,另加5倍水浸泡1小时,煮沸30分钟,过滤药渣,得到一次药液,
步骤3、将步骤2的药渣再加3倍水浸泡0.5小时,煮沸20分钟,过滤药渣,得到二次药液,
步骤4、将步骤2所得的一次药液和步骤3所得的二次药液合并滤液,于水浴上浓缩,得到生药浸膏即成。
实施例2
步骤1、按照以下比例称量各组分,各组分含量的总重量为100%,黄芪35%,丹参15%,三七16%,土元9%,鹿角胶10%,牛漆9%,甘草6%,
步骤2、将上述各组分置于容器内,另加7倍水浸泡2小时,煮沸30分钟,过滤药渣,得到一次药液,
步骤3、将步骤2的药渣再加5倍水浸泡1小时,煮沸20分钟,过滤药渣,得到二次药液,
步骤4、将步骤2所得的一次药液和步骤3所得的二次药液合并滤液,于水浴上浓缩,得到生药浸膏即成。
实施例3
步骤1、按照以下比例称量各组分,各组分含量的总重量为100%,黄芪31%,丹参16%,三七18%,土元8%,鹿角胶12%,牛漆8%,甘草7%,
步骤2、将上述各组分置于容器内,另加6倍水浸泡1.5小时,煮沸30分钟,过滤药渣,得到一次药液,
步骤3、将步骤2的药渣再加4倍水浸泡0.6小时,煮沸20分钟,过滤药渣,得到二次药液,
步骤4、将步骤2所得的一次药液和步骤3所得的二次药液合并滤液,于水浴上浓缩,得到生药浸膏即成。
实施例4
步骤1、按照以下比例称量各组分,各组分含量的总重量为100%,黄芪32%,丹参15%,三七15%,土元9%,鹿角胶11%,牛漆10%,甘草8%,
步骤2、将上述各组分置于容器内,另加5倍水浸泡2小时,煮沸30分钟,过滤药渣,得到一次药液,
步骤3、将步骤2的药渣再加5倍水浸泡1小时,煮沸20分钟,过滤药渣,得到二次药液,
步骤4、将步骤2所得的一次药液和步骤3所得的二次药液合并滤液,于水浴上浓缩,得到生药浸膏即成。
上述各个实施例的生药浸膏,每毫升药液相当于原药材的3.5克左右。